Dolayı (passiv) hemaqlütinasiya reaksiyası (IRHA) ona əsaslanır ki, qırmızı qan hüceyrələri, əgər həll olunan antigen onların səthində adsorbsiya olunarsa, adsorbsiya edilmiş antigenə qarşı anticisimlərlə qarşılıqlı əlaqədə olduqda aglütinasiya qabiliyyəti əldə edirlər. RNGA diaqramı Şəkildə göstərilmişdir. 34. RNGA bir sıra infeksiyaların diaqnostikasında geniş istifadə olunur.
düyü. 34. Passiv hemaqlütinasiya reaksiyasının (RPHA) sxemi. A - eritrosit diaqnostikumunun əldə edilməsi: B - RPGA: 1 - eritrosit: 2 - tədqiq olunan antigen; 3 - eritrosit diaqnostikası; 4 - tədqiq olunan antigenə qarşı antikor: 5 - aglütinat
Reaksiya qurmaq. Test zərdabı 30 dəqiqə 56 ° C-də qızdırılır, ardıcıl olaraq 1:10 - 1:1280 nisbətində seyreltilir və 0,25 ml-də sınaq borularına və ya quyulara tökülür, burada 2 damcı eritrosit diaqnostikası (onlarda adsorbsiya edilmiş antigen olan eritrositlər) ) sonra əlavə olunur.
Nəzarət vasitələri: məlum immun serumu olan eritrosit diaqnostikumunun süspansiyonu; normal serum ilə diaqnostikumun dayandırılması; test serumu ilə normal qırmızı qan hüceyrələrinin dayandırılması. Birinci nəzarətdə aglütinasiya baş verməli, ikinci və üçüncüdə baş verməməlidir.
RIGA istifadə edərək, məlum antikorlar qırmızı qan hüceyrələrinə adsorbsiya olunarsa, naməlum antigeni aşkar edə bilərsiniz.
Hemaqlütinasiya reaksiyası Takachi mikrotitratorundan istifadə etməklə 0,025 ml həcmdə (mikrometod) aparıla bilər.
1. Rentgen analizinin müsbət nəticəsi qırmızı qan hüceyrələri ilə virusun olması üçün yoxlanılan material arasında nəyi göstərir?
2. Qırmızı qan hüceyrələrinə virus və ona uyğun zərdab əlavə edilərsə, onların aglütinasiyası baş verəcəkmi? Bu hadisəni aşkar edən reaksiyanın adı nədir?
Məşq edin
Nəticəni nəzərə alın və RIGA-da qeyd edin.
Yağış reaksiyası
Çöküntü reaksiyasında həll olunan antigendən (lizat, ekstrakt, hapten) və elektrolitlərin iştirakı ilə spesifik antikordan ibarət olan spesifik immun kompleks çökdürülür.
Bu reaksiya nəticəsində əmələ gələn buludlu halqa və ya çöküntü çöküntü adlanır. Bu reaksiya əsasən antigen hissəciklərinin ölçüsünə görə aqlütinasiya reaksiyasından fərqlənir.
Yağış reaksiyası adətən bir sıra infeksiyaların diaqnostikasında antigeni təyin etmək üçün istifadə olunur ( qarayara, meningit və s.); məhkəmə tibbində - qan, sperma və s. növlərini müəyyən etmək; sanitar-gigiyenik tədqiqatlarda - məhsulların saxtalaşdırılması aşkar edildikdə; onun köməyi ilə heyvan və bitkilərin filogenetik əlaqəsi müəyyən edilir. Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Anticisimlər (presipitinlər) - antikorların yüksək titrinə malik immun zərdab (1:100.000-dən aşağı olmayan). Çöküntü zərdabının titri onun reaksiya verdiyi antigenin ən yüksək seyreltilməsi ilə müəyyən edilir. Serum adətən seyreltilmədən və ya 1:5 - 1:10 seyreltmə şəklində istifadə olunur.
2. Antigen - zülal və ya lipoid polisaxarid təbiətli həll olunmuş maddələr (tam antigenlər və haptenlər).
3. İzotonik məhlul.
Çöküntü reaksiyasının aparılmasının əsas üsulları bunlardır: halqalı çökmə reaksiyası və agarda (gel) çökmə reaksiyası.
Diqqət! Yağış reaksiyasında iştirak edən bütün komponentlər tamamilə şəffaf olmalıdır.
Halqanın çökmə reaksiyası. Pasteur pipetindən istifadə edərək, 0,2-0,3 ml (5-6 damcı) zərdab yağıntı borusuna əlavə edin (serum borunun divarlarına düşməməlidir). Eyni həcmdə olan antigen diqqətlə zərdabın üzərinə qatlanır, onu nazik Pasteur pipeti ilə sınaq borusunun divarı boyunca tökür. Sınaq borusu maili vəziyyətdə saxlanılır. Düzgün qatlandıqda, serum və antigen arasında aydın bir sərhəd olmalıdır. Diqqətlə, mayeni qarışdırmamaq üçün sınaq borusunu stenddə yerləşdirin. Reaksiya müsbət olarsa, antigen və antikorun interfeysində buludlu bir "halqa" meydana gəlir - bir çöküntü (bax. Şəkil 48).
Reaksiya bir sıra nəzarət vasitələri ilə müşayiət olunur (Cədvəl 18). Test borusuna reaksiya inqrediyentlərinin əlavə edilməsi ardıcıllığı çox vacibdir. Serumu antigenə qatlaya bilməzsiniz (nəzarətdə - izotonik məhlulda), zərdabın nisbi sıxlığı daha böyük olduğundan, o, sınaq borusunun dibinə çökəcək və mayelər arasındakı sərhəd açılmayacaq.
Cədvəl 18. Halqanın çökmə reaksiyasının qurulması sxemi
Qeyd. + "üzük" olması; - "üzük" olmaması.
Nəticələr həmişə nəzarətdən başlayaraq 5-30 dəqiqədən sonra, bəzi hallarda bir saatdan sonra qeydə alınır. 2-ci sınaq borusundakı "halqa" immun serumun daxil olmaq qabiliyyətini göstərir spesifik reaksiya müvafiq antigenlə. 3-5 sınaq borusunda "üzüklər" olmamalıdır - bir-birinə uyğun gələn antikorlar və antigenlər yoxdur. 1-ci borudakı "halqa" - müsbət reaksiya nəticəsi - test antigeninin qəbul edilmiş immun zərdabına uyğun olduğunu, "halqanın" olmaması (yalnız 2-ci boruda "halqa") onların uyğunsuzluğunu göstərir - mənfi reaksiya nəticəsi.
Agarda (gel) çökmə reaksiyası. Reaksiyanın özəlliyi ondadır ki, antigen və antikorun qarşılıqlı təsiri sıx bir mühitdə, yəni geldə baş verir. Nəticədə yaranan çöküntü mühitin qalınlığında bulanıq bir zolaq verir. Bir bandın olmaması reaksiya komponentləri arasında uyğunsuzluğu göstərir. Bu reaksiya biotibbi tədqiqatlarda, xüsusən də difteriya törədicisində toksin əmələ gəlməsinin öyrənilməsində geniş istifadə olunur.
Təhlükəsizlik sualları
1. Aqqlütinasiya və çökmə reaksiyalarının əsas fərqi nədir?
2. Nə üçün buludlu inqrediyentlərdən yağıntı reaksiyasında istifadə etmək olmaz?
Məşq edin
1. Halqanın çökmə reaksiyasını qurun və nəticənin eskizini çəkin.
2. Aqarda çökmə reaksiyasında antigenin antikorla qarşılıqlı təsirinin xarakterini öyrənin, nəticənin eskizini çəkin (müəlliminizdən bir fincan alın).
Lizis reaksiyası (immun sitolizi)
İmmun lizis zaman antikorların təsiri altında hüceyrələrin əriməsidir məcburi iştirak tamamlayır. Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Antigen - mikroblar, qırmızı qan hüceyrələri və ya digər hüceyrələr.
2. Antikor (lizin) - immun serum, daha az tez-tez xəstə serumu. Bakteriolitik serumda bakteriyaların parçalanmasında iştirak edən antikorlar var; hemolitik - qırmızı qan hüceyrələrinin parçalanmasını təşviq edən hemolizinlər; spiroketlərin parçalanması üçün spiroxetolizinlər, hüceyrələr - itolizinlər və s.
3. Tamamlayıcı. Ən çox serumda tamamlayır qvineya donuzları. Bu serum (bir neçə heyvanın qarışığı) adətən tamamlayıcı kimi istifadə olunur. Təzə (doğma) tamamlayıcı qeyri-sabitdir və qızdırmaq, silkələmək və ya saxlama zamanı asanlıqla məhv edilir, buna görə də alındıqdan sonra iki gündən çox olmayaraq istifadə edilə bilər. Komplementi qorumaq üçün ona 2% əlavə edilir borik turşusu və 3% natrium sulfat. Bu əlavə 4°C-də iki həftəyə qədər saxlanıla bilər. Quru tamamlayıcı ən çox istifadə olunur. İstifadədən əvvəl izotonik məhlulda orijinal həcmə qədər həll edilir (etiketdə göstərilmişdir).
4. İzotonik məhlul.
Hemoliz reaksiyası(Cədvəl 19). Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Antigen - 0,3 ml eritrosit çöküntüsü və 9,7 ml izotonik məhlul nisbətində yuyulmuş qoyun eritrositlərinin 3% suspenziyası.
2. Antikor - qoyun eritrositlərinə qarşı hemolitik serum (hemolizin); adətən istehsalda hazırlanır, liyofilləşir və etiketdə göstərilən titrə malikdir.
Hemolizin titri, komplementin iştirakı ilə qırmızı qan hüceyrələrinin 3% suspenziyasının tam hemolizinin baş verdiyi ən yüksək serum qatılmasıdır. Hemoliz reaksiyası üçün hemolizin üçqat titrdə alınır, yəni titrdən əvvəlkindən 3 dəfə az seyreltilir. Məsələn, 1:1200 serum titri ilə serum 1:400 nisbətində seyreltilir (0,1 ml serum * və 39,9 ml izotonik məhlul). Həddindən artıq hemolizin lazımdır, çünki onun bir hissəsi digər reaksiya komponentləri tərəfindən adsorbsiya edilə bilər.
* (0,1 ml-dən az serum qəbul etməməlisiniz - ölçmənin dəqiqliyi əziyyət çəkəcəkdir.)
3. Komplement 1:10 nisbətində seyreltilir (0,2 ml komplement və 1,8 ml izotonik məhlul).
4. İzotonik məhlul.
Cədvəl 19. Hemoliz reaksiyasının sxemi
Nəticələrin uçotu. Əgər reaksiya düzgün aparılarsa, 1-ci sınaq borusunda hemoliz baş verəcək - onun tərkibi şəffaf olacaq. Nəzarətdə maye buludlu qalır: 2-ci boruda hemolizin baş verməsi üçün kifayət qədər komplement yoxdur, 3-cü boruda hemolizin yoxdur, 4-cü boruda nə hemolizin, nə də komplement, 5-ci boruda antigen var. antikorla uyğun gəlmir,
Lazım gələrsə, hemolitik serum uyğun olaraq titrlənir aşağıdakı diaqram(Cədvəl 20).
Titrləmədən əvvəl 1:100 (0,1 ml zərdab və 9,9 ml izotonik məhlul) ilkin zərdab seyreltməsi hazırlayın. zəruri seyreltmələr, Məsələn:
Bu seyreltmələrdən Cədvəldə göstərildiyi kimi titrləmə sınaq borularına 0,5 ml zərdab əlavə edin. 20.
Cədvəl 20. Hemolitik serum (hemolizin) üçün titrasiya sxemi
Cədvəldə verilmiş nümunədə. 20, hemolitik serumun titri 1:1200-dür.
Təzə hemolitik zərdab istifadə edərkən, tərkibində olan tamamlayıcını məhv etmək üçün onu təsirsiz hala gətirmək lazımdır. Bunun üçün su banyosunda və ya termostatlı inaktivatorda 56°C-də 30 dəqiqə qızdırılır. Sonuncu üsul daha yaxşıdır: zərdabın həddindən artıq istiləşməsi, yəni onun denatürasiyası ehtimalını aradan qaldırır. Denatürləşdirilmiş sera test üçün yararsızdır.
Bakterioliz reaksiyası. Bu reaksiyada komplement uyğun (homoloji) zərdabın iştirakı ilə bakteriyaları parçalayır. Reaksiya sxemi mahiyyətcə hemoliz reaksiyasının sxeminə bənzəyir. Fərq ondadır ki, iki saatlıq inkubasiyadan sonra bütün sınaq boruları lizinq olub-olmadığını öyrənmək üçün təcrübəyə götürülmüş mikroorqanizm üçün əlverişli mühitlə Petri qablarına səpilir. Təcrübə düzgün aparılarsa, 2-5 sınaq borusundan (nəzarətdən) alınan kulturalar bol artım göstərməlidir. 1-ci sınaq borusundan (təcrübədən) inokulyasiyada böyümənin olmaması və ya zəif böyüməsi mikrobların ölümünü, yəni onların antikorla homolog olduğunu göstərir.
Diqqət! Bakterioliz reaksiyası aseptik şəraitdə aparılmalıdır.
Təhlükəsizlik sualları
1. İzotonik natrium xlorid məhlulu əvəzinə distillə edilmiş su istifadə edilərsə, qırmızı qan hüceyrələrinə nə olacaq? Bu fenomenin əsası nədir?
2. Komplement olmadıqda eritrositlər homoloji immun zərdab ilə qarşılıqlı əlaqədə olduqda hansı reaksiya baş verəcək?
Məşq edin
Hemoliz reaksiyasını qurun. Nəticəni qeyd edin və eskiz edin.
Əlaqədar məlumat.
Qırmızı qan hüceyrələri və ya neytral istifadə edir sintetik materiallar(məsələn, lateks hissəcikləri), onların səthində antigenlər (bakterial, viral, toxuma) və ya antikorlar sorulur. Onların aglütinasiyası müvafiq sera və ya antigenlər əlavə edildikdə baş verir. Antigenlərlə həssaslaşdırılan qırmızı qan hüceyrələri antigenik eritrosit diaqnostikum adlanır və antikorları aşkar etmək və titr etmək üçün istifadə olunur. Eritrositlər antikorlarla həssaslaşır. immunoqlobulin eritrosit diaqnostikləri adlanır və antigenləri aşkar etmək üçün istifadə olunur.
Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası bakteriyaların (tif və paratif qızdırması, dizenteriya, brusellyoz, taun, vəba və s.), protozoa (malyariya) və virusların (qrip, adenovirus infeksiyaları, viral hepatit B, qızılca, gənə ensefaliti, Krım hemorragik qızdırması və s.), həmçinin müəyyən hormonların təyini, müəyyən edilməsi üçün həddindən artıq həssaslıq səbr etmək dərmanlar və penisilin və insulin kimi hormonlar.
Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (RPHA). Passiv hemaqlütinasiya testi həssas bir üsuldur seroloji diaqnostika həm erkən, həm də retrospektiv diaqnostika, həmçinin peyvənd olunmuş insanların immunopoqik vəziyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Tulyaremiyalı xəstələrdə antikorlar adətən xəstəliyin 1-ci və ya 2-ci həftəsinin sonunda 1-1,5 aydan sonra RPHA titrlərinə çatır; maksimum performans(1:100000-1:20000, nadir hallarda yüksək), bundan sonra onlar azalır və uzun müddət 1:100-1:200 səviyyəsində qalır.
Peyvənd edilmiş insanlarda antikorlar da daim aşkar edilir, lakin daha aşağı titrlərdə, peyvənddən 1-1,5 ay sonra 1:2000-1:5000-dən çox deyil və 1:20-1:80 aşağı səviyyədə bir neçə il qalır.
RPHA-nın təyini üçün antigen tularemiya eritrosit diaqnostikasıdır (antigenik). Dərman maye və quru formada mövcud olan tulyaremiya antigeni ilə sensibilizasiya edilmiş formalinləşdirilmiş qoyun qırmızı qan hüceyrələridir. Maye preparatı - 10% konsentrasiyalı formaldehid həllində qırmızı qan hüceyrələrinin 10% suspenziyası. Quru liyofilləşdirilmiş preparat - konservant olmadan vakuumda qurudulmuş qırmızı qan hüceyrələrinin 10% suspenziyası. İstifadədən əvvəl etiketdəki göstərişlərə uyğun olaraq seyreltilir. Polistirol plitələrində reaksiya qurmaq üçün hər iki dərman 2,5% konsentrasiyada, mikrohəcmlərdə reaksiya qurarkən - 0,5% konsentrasiyada istifadə olunur.
RPGA qurmaq üçün texnika. Test zərdabları 1:5 (1:10) nisbətində fizioloji məhlul ilə seyreltilir və 30 dəqiqə ərzində 56 dərəcə C-də qızdırılır. Bundan sonra qoyun eritrositlərinə qarşı heterojen anticisimləri çıxarmaq üçün zərdablar formalinləşdirilmiş qoyun eritrositlərinin 50% suspenziyası ilə müalicə olunur. Bunun üçün 1 ml seruma 2 damcı (0,05 ml) nisbətində qırmızı qan hüceyrələri əlavə edin və çalxalayaraq yaxşıca qarışdırın. Serum eritrositlər tam çökənə qədər saxlanılır və ya otaq temperaturunda bir saat sonra sentrifuqa edilir, bundan sonra müayinə üçün hazır olur.
Seyreltmə mayesi 0,5 ml həcmdə polistirol plitə üzərində bir sıra quyulara tökülür. Serumların ilkin tədqiqi zamanı onların reaksiyasını lövhənin qısa cərgəsində (6 quyu) qurmaqla sınaqdan keçirmək məqsədəuyğundur. Qısa seriyada antikorlar aşkar edilərsə, serumlar uzun sıra seyreltmələrdə (12 quyu) yenidən yoxlanılır. Seyreltmə mayesini tökdükdən sonra hər cərgənin birinci quyusuna (qısa və ya uzun) 1:5 nisbətində seyreltilmiş 0,5 ml test serumu əlavə edin. Sonra eyni həcmdə serum ikiqat seyreltmə ilə titrlənir. Beləliklə, serum seyreltmələri qısa seriyalarda 1:10-dan 1:320-ə qədər, uzun seriyalarda isə 1:10-dan 1:20480-ə qədər əldə edilir. Serum titrə edildikdən sonra hər bir quyuya bir damcı (0,05 ml) həssaslaşdırılmış eritrositlərin 2,5%-li işləyən suspenziyası əlavə edilir. Plitələrin məzmunu homojen bir süspansiyon alınana qədər hərtərəfli sarsılır. Plitələr stasionar masa səthində otaq temperaturunda qalır. Reaksiyanın ilkin qeydi 2-3 saatdan sonra aparılır, titrin son təyini quyularda qırmızı qan hüceyrələrinin tam çökməsindən sonra aparılır. Reaksiya üçün aşağıdakı nəzarət vasitələri nəzərdə tutulmuşdur: 1) 0,5 ml həcmdə 1:10 nisbətində seyreltilmiş sınaq serumu + həssaslaşdırılmamış eritrositlərin 2,5% suspenziyasından 1 damcı; 2) 0,5 ml həcmdə seyreltmə mayesi + həssaslaşdırılmamış eritrositlərin 2,5% suspenziyasının 1 damcısı; 3) 0,5 ml həcmdə seyreltmə mayesi + sensibilizasiya edilmiş eritrositlərin 2,5% suspenziyasının 1 damcısı. Bütün nəzarətlər açıq şəkildə mənfi reaksiya verməlidir.
RPGA-nın uçotu və qiymətləndirilməsi. Reaksiya aşağıdakı sxemə görə qiymətləndirilir:
1) kəskin müsbət reaksiya(++++) - qırmızı qan hüceyrələri çuxurun dibinə tez-tez qırıq kənarları olan "çətir" şəklində bərabər bir təbəqədə düşür;
2) müsbət reaksiya (+++) - qırmızı qan hüceyrələri quyunun dibinin ən azı 2/3 hissəsini əhatə edir;
3) zəif müsbət reaksiya (++) - aglütinat kiçikdir və quyunun tam mərkəzində yerləşir;
4) şübhəli reaksiya (+) - quyunun tam mərkəzində eritrositlərin çöküntüsünün ətrafında aglutinatın fərdi dənələri var;
5) mənfi (-) - çuxurun dibində qırmızı qan hüceyrələri "düymə" və ya hamar, kəskin şəkildə müəyyən edilmiş kənarları olan kiçik bir üzük şəklində yerləşirlər.
Serum titri, çox aydın reaksiya verən (ən azı üç müsbət) serumun son seyreltilməsinə görə nəzərə alınır. 1:100 və ya daha yüksək seyreltmə diaqnostik titr hesab olunur, lakin RA vəziyyətində olduğu kimi, onun artmasına nəzarət etmək lazımdır;
Tulyaremiya üçün RPGA olduqca spesifikdir və bəzilərini aşkar edir çarpaz reaksiyalar yalnız brusellyoz serumları ilə. Diferensial diaqnoz RPGA-da homoloji antigenlə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olan titrlərin hündürlüyü ilə mümkündür.
Mikrohəcmlərdə RPHA-nın qurulması texnikası. RPGA 25 μl və 50 μl həcmdə materialın titrlənməsinə imkan verən Takachi tipli mikrotitratordan (və ya mikropipetləri olan yuvarlaq dibli mikroplitələrdən) istifadə edərək mikrohəcmlərdə həyata keçirilə bilər. Reaksiya texnikası və bütün əməliyyatların ardıcıllığı polistirol plitələrində təhsil alarkən olduğu kimidir. Bununla belə, nəzərə almaq lazımdır ki, mikrometodun həssaslığı adətən makrometoddan bir qatılma (yəni 2 dəfə) aşağıdır.
Reaksiyanı mikrotitratorda qurmaq üçün damcı pipetkasından istifadə edərək hər bir quyuya 50 μl həcmdə seyreltmə mayesi əlavə edilir. Sonra 50 μl başlıqlı titratorlardan istifadə edərək, başı ora batıraraq sınaq serumu toplanır. Mayenin titrator başlığını doldurduğundan əmin olun. Serumlu titrator birinci quyuya köçürülür və onu içəridə saxlayır şaquli mövqe, bir neçə edin fırlanma hərəkətləri hər iki istiqamətdə. Sonra titrator növbəti quyuya köçürülür və manipulyasiya təkrarlanır. Titrləmə eyni vaxtda bir neçə cərgədə aparıla bilər. Bütün seriya titrləndikdən sonra titrator fırlanan hərəkətlərlə distillə edilmiş su ilə yuyulur (2 porsiya dəyişdirilir), su tampon istifadə edərək başdan çıxarılır və ocaq alovunda yandırılır.
Titrləmədən sonra quyulara 25 μl eritrosit diaqnostik maye əlavə edin. Mikrohəcmlərdə RPHA üçün diaqnostik konsentrasiyası 0,5% olmalıdır (yəni, qırmızı qan hüceyrələrinin 2,5% suspenziyası əlavə olaraq 5 dəfə seyreltilir). Qırmızı qan hüceyrələrini əlavə etdikdən sonra, homojen bir süspansiyon əldə olunana qədər plitələr bir qədər sarsılmalıdır. Nəticələr 1-1,5 saat ərzində qeydə alına bilər ki, bu da mikrotitrdə RPGA-nın əhəmiyyətli üstünlüyüdür. Bundan əlavə, bu texnika az miqdarda bütün reaksiya inqrediyentlərini və sınaq serumlarını tələb edir.
Reaksiya aşağıdakı sxemə uyğun olaraq nəzərə alınır:
1) "+" - qırmızı qan hüceyrələrinin quyunun ən azı 2/3 hissəsini tutan "çətir" şəklində bərabər bir təbəqədə quyunun dibinə düşdüyü tam hemaqlütinasiya;
2) "+-" - qırmızı qan hüceyrələrinin kiçik ölçülü boş bir halqa şəklində dibinə düşdüyü qismən hemaqlütinasiya;
3) “-“ – qırmızı qan hüceyrələrinin hamar kənarı olan kiçik düymə və ya üzük şəklində dibinə düşməsi zamanı hemaqlütinasiyanın olmaması.
Spesifiklik müsbət nəticə, RPHA-da əldə edilən, üç komponentli reaksiya - passiv hemaqlütinasiyanın (RPHA) inhibə reaksiyasından istifadə edərək sınaqdan keçirilə bilər.
RTPGA qurmaq üçün texnika. Bu reaksiya şübhə doğuran və ya xüsusi epidemioloji maraq doğuran müsbət RPGA nəticəsinin spesifikliyini təsdiqləmək üçün istifadə olunur. Reaksiya mexanizmi, test zərdabına öldürülmüş tulyaremiya bakteriyalarının suspenziyası əlavə edildikdə, hemaqlütinasiyanın spesifik inhibəsidir. Üç komponent reaksiya qarşılıqlı: test serum, xüsusi tularemia antigen və antigenic eritrosit diaqnostikum RTPHA adətən 7-8 quyu bir sıra yerləşdirilir. RTPGA ilə paralel olaraq təkrar RPGA quraşdırmaq məsləhətdir. İki sıra quyuya 0,25 ml seyreltmə mayesi tökülür, sonra hər iki cərgənin birinci quyularına 0,25 ml həcmdə sınaq zərdabı əlavə edilir və iki eyni sıra zərdab seyreltmələri alınır. İkinci cərgənin bütün quyularına 0,25 ml durulaşdırıcı maye, birinci sıranın quyularına isə 0,25 ml tulyaremiya bakteriyasının suspenziyası əlavə edilir. Tularemia diagnosticum istifadə olunur (1 ml-də 25 milyard tulyaremiya bakteriyası ehtiva edir), əvvəllər 50 dəfə seyreltilir. Bu suspenziya 1 ml-də 500 milyon və ya 0,25 ml həcmdə 125 milyon bakteriya ehtiva edir. Antigen əlavə edildikdən sonra boşqab otaq temperaturunda 1 saat saxlanılır, bundan sonra hər iki cərgənin bütün quyularına bir damcı (0,05 ml) eritrosit diaqnostikum əlavə edilir, boşqab silkələnir və düz stolun səthində qalır. Mühasibat uçotu 2-3 saatdan sonra aparılır.
RTPGA-nın uçotu və qiymətləndirilməsi. Əgər test zərdabında spesifik tulyaremiyaya qarşı anticisimlər varsa, onlar əlavə edilmiş antigenlə zərərsizləşdirilir və quyuların birinci cərgəsində hemaqlütinasiya baş verməyəcək, yaxud yüksək titr serum, hemaqlütinasiya RPGA ilə seriyaya nisbətən daha az (2-4) quyuda müşahidə olunacaq. Bu halda, nəticələrin spesifikliyi təsdiqləndi. Hər iki cərgədə hemaqlütinasiya qeyd edilərsə, yəni. RTPGA və RPGA nəticələri üst-üstə düşürsə, bu, test zərdabında tulyaremiyaya qarşı anticisimlərin olmadığını göstərir. Bu halda RPGA-nın ilkin nəticəsi qeyri-spesifik hesab olunur.
Mikrohəcmlərdə RTHG-nin səhnələşdirilməsi texnikası. RTPGA, RPGA kimi, Takachi tipli mikrotitrdən istifadə edərək mikrohəcmlərdə həyata keçirilə bilər. Bunun üçün hər biri 7-8 quyudan ibarət iki cərgədə mikroplitələrin quyularına 0,25 μl seyreltici maye əlavə edin. Sonra titratordan istifadə edərək 0,25 μl test serum əlavə edilir və hər iki cərgədə titrlənir. Bundan sonra birinci cərgədə hər quyuya 25 μl tulyaremiya antigeni (konsentrasiyası 1 ml-də 500 milyon tulyaremiya bakteriyasıdır), ikinci cərgəyə isə 25 μl seyreltmə mayesi əlavə edilir. Plitələr otaq temperaturunda 1 saat saxlanılır, bundan sonra hər iki cərgənin bütün quyularına 25 μl antigenik zritrositik diaqnostikum (0,5% konsentrasiya) əlavə edilir. Nəticələrin uçotu və qiymətləndirilməsi makrohəcmlərdəki reaksiyalara bənzər şəkildə aparılır.
Mövzunun məzmunu "İmmunomodulyatorlar. Yoluxucu xəstəliklərin immunodiaqnozu.":Passiv aglütinasiya reaksiyaları. Dolayı aglütinasiya reaksiyaları. Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (IRHA, RPHA). Əks RNGA. Passiv hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası (PHA).
Bunlar reaksiyalar adlanırlar dolayı (passiv), çünki onlar müxtəlif korpuskulyar hissəciklərin səthində süni şəkildə sorulan Ag (və ya AT) istifadə edirlər.
Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (RNGA, RPGA) ən həssas seroloji reaksiyalardan biridir. Bu, AT-nin müxtəlif qırmızı qan hüceyrələrində sabitlənmiş Ag ilə qarşılıqlı əlaqə qurma qabiliyyətinə əsaslanır və sonra aglütinasiya olunur. Diaqnostiklərin daha çox sabitliyi üçün qırmızı qan hüceyrələri formallaşdırılır.
Əks RNGA qan serumunda Ag-ni aşkar etmək üçün istifadə olunur; Bunun üçün eritrositlərə Ag deyil, AT fiksasiya olunur. Bu tip reaksiyalar yoluxucu xəstəliklərin diaqnozu, hamiləliyin təyin edilməsi, dərmanlara qarşı həssaslığın aşkarlanması və s. üçün geniş istifadə olunur.
Passiv hemaqlütinasiya inhibe reaksiyası (RTPGA) - gələcək inkişaf RNGA; müəyyən mənada onun spesifikliyinə nəzarət edir. Fərqli RNGA, üç komponentdən ibarətdir; Ag, AT və Ag (AT) eritrositlərə adsorbsiya olunur. Əvvəlcə Ag AT (standart antiserum) ilə reaksiya verir, sonra eyni Ag (və ya AT) ilə sensibilizasiya edilmiş eritrositlər qarışığa əlavə edilir. Əgər Ag-nin AT ilə qarşılıqlı təsiri zamanı sistemdə sərbəst AT (və ya Ag) qalmırsa, eritrosit diaqnostikumunun aglütinasiyası müşahidə olunmur.
11621 0
Seroloji reaksiyalar müxtəlif xüsusiyyətlərə malik komponentlərin qarşılıqlı təsiri zamanı antigen-antikor kompleksinin formalaşması ilə müşayiət olunan hadisələrə uyğun olaraq təyin edilir. Aqqlütinasiya, çökmə və lizis reaksiyaları var.
Aqqlütinasiya reaksiyası (RA)
Aqqlütinasiya reaksiyası (RA) spesifik anticisimlərlə qarşılıqlı əlaqədə olan korpuskulyar antigenin (bakteriyaların, sensibilizasiya olunmuş eritrositlərin, lateks hissəciklərinin və s. suspenziyası) istifadəsinə əsaslanır, nəticədə yaranan antigen-antikor kompleksi çökür. Bu reaksiya laboratoriya praktikasında seroloji diaqnostika üçün geniş istifadə olunur. bakterial infeksiyalar və təcrid olunmuş mikroorqanizmlərin identifikasiyası üçün.
RA bir çox yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur: brusellyoz (Rayt, Heddleson reaksiyası), tulyaremiya, leptospiroz (RAL - Leptospira aglutinasiyası və lizis reaksiyası), listerioz, tif (RAR - Rickettsia aqlütinasiya reaksiyası), şigeloz, yersinioz, psevdotuziya və s.
Dolayı və ya passiv aglütinasiya reaksiyası (RIGA və ya RPGA).
Bu reaksiyanı həyata keçirmək üçün antikor və ya antigenlə həssaslaşdırılmış heyvanların (qoyun, meymun, qvineya donuzları, bəzi quşlar) qırmızı qan hüceyrələrindən istifadə olunur ki, bu da qırmızı qan hüceyrələrinin süspansiyonunu və antigen və ya immun serumun məhlulunu inkubasiya etməklə əldə edilir.
Antigenlərlə həssaslaşan eritrositlər əsasında alınan diaqnostikumlar deyilir antigen eritrosit diaqnostikası. Onlar qan serumlarının ardıcıl seyreltmələrində, məsələn, eritrosit şigella diaqnostikumlarında, eritrosit salmonella O-diaqnostikumlarında antikorların təyini üçün nəzərdə tutulub.
Müvafiq olaraq, spesifik immunoqlobulinlərlə həssaslaşdırılmış eritrositlərə əsaslanan diaqnostika deyilir antikorlar(immunoqlobulin) diaqnostiklər və onlar müxtəlif materiallarda antigenləri müəyyən etməyə xidmət edir, məsələn, burun və orofarenksdən material vurulduqda maye qidalı mühitdə korinbakteriyaların difteriya ekzotoksinini aşkar etmək üçün istifadə olunan RIGA üçün eritrosit immunoqlobulin difteriya diaqnostikası.
Hemaqlütinasiya reaksiyası həm bakterial (tif, paratif, dizenteriya, brusellyoz, taun, vəba və s.), həm də viral (qrip, adenoviral infeksiyalar, qızılca və s.) infeksiyaların diaqnostikasında istifadə olunur. Həssaslıq və spesifiklik baxımından RIGA RA-dan üstündür.
Hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası (HAI)
Hemaqlütinasiyanın qarşısının alınması reaksiyası (HAI) qan zərdabında antiviral anticisimləri titr etmək, həmçinin təcrid olunmuş viral kulturaların növünü təyin etmək üçün istifadə olunur. RTGA onları diaqnoz etmək üçün istifadə edilə bilər viral infeksiyalar, patogenləri hemaglutinating xüsusiyyətlərə malikdir.
Metodun prinsipi ondan ibarətdir ki, müəyyən bir virus növünə qarşı antikorları olan zərdab onun hemaglütinasiya fəaliyyətini boğur və qırmızı qan hüceyrələri qeyri-aqqlütinasiya olunur.
Passiv hemaqlütinasiya inhibisyonu (gecikmə) reaksiyası (RPHA).
RTPGA-da üç komponent iştirak edir: immun serum, antigen (test materialı) və həssaslaşdırılmış eritrositlər.
Test materialında immun antikorlarla xüsusi reaksiya verən bir antigen varsa standart serum, sonra onları bağlayır və zərdabın homoloqu olan antigenlə sensibilizasiya olunmuş eritrositlərin sonradan əlavə edilməsi ilə hemaqlütinasiya baş vermir.
RTPHA mikrob antigenlərini aşkar etmək, onların kəmiyyətcə müəyyən edilməsi, həmçinin RTPGA spesifikliyinə nəzarət etmək üçün istifadə olunur.
Lateks aglütinasiya reaksiyası (RLA)
Lateks hissəcikləri antikorların (immunoqlobulinlərin) daşıyıcısı kimi istifadə olunur. RLA tələb olunan vaxtı (10 dəqiqəyə qədər) və kiçik həcmli test materialında antigeni aşkar etmək qabiliyyətini nəzərə alaraq yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikası üçün ekspress metoddur.
RLA onurğa beyni mayesində Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tip b, Neisseria meningitidis antigenlərini göstərmək, boğaz yaxmalarında A qrupu streptokokları aşkar etmək, salmonellyoz, yersinioz və digər xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur. Metodun həssaslığı 1-10 ng/ml və ya 1 µl-də 10³ -10⁶ bakteriya hüceyrəsidir.
Koaqlütinasiya reaksiyası (CoA)
Koaglütinasiya reaksiyası (CoA) stafilokokların zülal A-nın spesifik immunoqlobulinləri bağlamaq qabiliyyətinə əsaslanır. RCA - ekspress diaqnostika üsulu - insan sekresiyasında və dövran edən immun komplekslərinin (CIC) tərkibində həll olunan termostabil antigenləri müəyyən etməyə xidmət edir. MEK-in tərkibində spesifik antigenlərin aşkarlanması onların qan zərdabından ilkin çökdürülməsini tələb edir.
Yağış reaksiyası
Çöküntü reaksiyasında (RP) anticisimlərin yüksək dispersli həll olunan antigenlərlə (zülallar, polisaxaridlər) qarşılıqlı təsiri nəticəsində komplement - çöküntülərin iştirakı ilə komplekslər əmələ gəlir. Bu, müxtəlif antigenləri və antikorları aşkar etmək və xarakterizə etmək üçün istifadə olunan həssas bir testdir. Yüksək keyfiyyətli RP-nin ən sadə nümunəsi, immun zərdabda antigen təbəqəsinin sərhəddində bir sınaq borusunda qeyri-şəffaf çökmə zolağının formalaşmasıdır - halqalı çökmə reaksiyası. Yarımmaye agar və ya agaroz gellərində RP-nin müxtəlif növləri geniş istifadə olunur (ikiqat immunodiffuziya üsulu, radial immunodiffuziya üsulu, immunoelektroforez).
Komplement fiksasiya reaksiyası (CFR)
Komplementin fiksasiya reaksiyası (CFR) komplementin iştirakı ilə hemoliz fenomeninə əsaslanır, yəni. yalnız tamamlayıcı fiksasiya edən antikorları aşkar edə bilir.
RSC bir çox bakterial və viral infeksiyaların, rikketsial infeksiyaların, xlamidiyaların diaqnostikasında geniş istifadə olunur. yoluxucu mononükleoz, protozoal infeksiyalar, helmintozlar. RSK mürəkkəbdir seroloji reaksiya, iki sistemin iştirak etdiyi: antigen-antikor və komplement sistemi ilə təmsil olunan test sistemi (qan serumu) və hemolitik sistem (qoyun qırmızı qan hüceyrələri + hemolitik serum). Hemolitik zərdab qoyun eritrositləri ilə immunizasiya edilmiş istiliklə təsirsizləşdirilmiş dovşan qanı zərdabıdır. Tərkibində qoyunların qırmızı qan hüceyrələrinə qarşı antikorlar var.
Müsbət RSC nəticəsi - hemolizin olmaması - əgər test zərdabında antigenə homoloji olan antikorlar varsa, müşahidə olunur. Bu zaman yaranan antigen-antikor kompleksi komplemanı birləşdirir və sərbəst komplement olmadıqda hemolitik sistemin əlavə edilməsi hemolizlə müşayiət olunmur. Serumda antigenə uyğun gələn antikorlar yoxdursa, antigen-antikor kompleksinin formalaşması baş vermir, komplement sərbəst qalır və zərdab qırmızı qan hüceyrələrinin hemolizinə səbəb olur, yəni. hemolizin olması reaksiyanın mənfi nəticəsidir.
Yuşçuk N.D., Vengerov Yu.Ya.
Aqqlütinasiya reaksiyası - RA(latdan. aglütinasiya- yapışma) antikorların korpuskulyar antigenləri (bakteriyalar, eritrositlər və ya digər hüceyrələr, onlarda adsorbsiya edilmiş antigenləri olan həll olunmayan hissəciklər, həmçinin makromolekulyar aqreqatlar) bağladığı sadə reaksiyadır. Elektrolitlərin iştirakı ilə, məsələn, izotonik natrium xlorid məhlulu əlavə edildikdə baş verir.
Müraciət edin müxtəlif variantlar aglütinasiya reaksiyaları: geniş, indikativ, dolayı və s. Aqqlütinasiya reaksiyası lopa və ya çöküntü əmələ gəlməsi ilə özünü göstərir.
RA aşağıdakılar üçün istifadə olunur:
xəstələrin qan serumunda antikorların təyini, məsələn, brusellyoz (Wright, Heddelson reaksiyaları), tifo qızdırması və paratif qızdırma (Vidal reaksiya) və s yoluxucu xəstəliklər;
xəstədən təcrid olunmuş patogenin təyini;
eritrosit alloantigenlərinə qarşı monoklonal anticisimlərdən istifadə edərək qan qruplarının təyini.
Bir xəstədə antikorları təyin etmək qoymaqgenişlənmişdir aglütinasiya reaksiyası: xəstənin qan serumunun seyreltmələrinə əlavə edin diaqnostik(öldürülmüş mikrobların dayandırılması) və 37 °C-də bir neçə saatlıq inkubasiyadan sonra aglütinasiyanın baş verdiyi, yəni çöküntünün meydana gəldiyi ən yüksək serum seyreltməsi (serum titri) qeyd olunur.
Aqqlütinasiyanın təbiəti və sürəti antigen və antikorların növündən asılıdır. Məsələn, diaqnostiklərin (O- və R-antigenləri) spesifik antikorlarla qarşılıqlı təsirinin xüsusiyyətləri. ilə aglütinasiya reaksiyası O-diaqnostik(istilikdən ölən, termostabil olan bakteriyalar O-antigen) xırda dənəli aglütinasiya şəklində baş verir. H-diagnosticum ilə aglütinasiya reaksiyası (formaldehid tərəfindən öldürülən, termolabil flagellar H-antigenini saxlayan bakteriyalar) kobuddur və daha sürətli gedir.
Xəstədən təcrid olunmuş patogeni müəyyən etmək lazımdırsa, qoyun indikativ aglütinasiya reaksiyası, diaqnostik antikorlardan (aglütinasiya edən serum) istifadə edərək, yəni patogenin serotiplənməsi aparılır. Göstərici reaksiya bir şüşə slaydda aparılır. Xəstədən təcrid olunmuş patogenin təmiz kulturası 1:10 və ya 1:20 seyreltilmiş diaqnostik aglütinasiya zərdabının damcısına əlavə edilir. Yaxınlıqda bir nəzarət yerləşdirilir: serum əvəzinə bir damla natrium xlorid məhlulu tətbiq olunur. Tərkibində zərdab və mikroblar olan damcıda flokulyant çöküntü göründükdə, a geniş aglütinasiya reaksiyası aglütinasiya edən zərdabın artan seyreltmələri olan sınaq borularında, 2-3 damcı patogen süspansiyon əlavə edilir. Aqqlütinasiya çöküntünün miqdarı və mayenin şəffaflıq dərəcəsi ilə nəzərə alınır. Diaqnostik zərdabın titrinə yaxın seyreltmədə aglütinasiya müşahidə olunarsa, reaksiya müsbət hesab olunur. Eyni zamanda, nəzarət nəzərə alınır: izotonik natrium xlorid məhlulu ilə seyreltilmiş zərdab şəffaf olmalıdır, eyni məhluldakı mikrobların suspenziyası çöküntü olmadan bərabər buludlu olmalıdır.
Fərqli əlaqəli bakteriyalar eyni diaqnostik aglütinasiya zərdabında aglütinasiya oluna bilər ki, bu da onların identifikasiyasını çətinləşdirir. Buna görə də istifadə edirlər adsorbsiya edilmiş aglütinasiya edən sera, onlardan çarpaz reaksiya verən antikorlar əlaqəli bakteriyalara adsorbsiya yolu ilə çıxarılır. Belə serumlar yalnız bu bakteriyaya xas olan antikorları saxlayır. Bu üsulla monoreseptor diaqnostik aglutinating sera istehsal A. Castellani (1902) tərəfindən təklif edilmişdir.
Dolayı (passiv) hemaqlütinasiya reaksiyası(RNGA, RPGA) antigenləri və ya səthində adsorbsiya edilmiş antikorları olan qırmızı qan hüceyrələrinin istifadəsinə əsaslanır, onların müvafiq antikorları və ya qan serumunun antigenləri ilə qarşılıqlı təsiri qırmızı qan hüceyrələrinin dibinə yapışmasına və çökməsinə səbəb olur. sınaq borusu və ya hüceyrə Vçəmənli çöküntü şəklində (şək. 13.2). At mənfi reaksiya qırmızı qan hüceyrələri “düymə” şəklində ■ yerləşirlər. Tipik olaraq, antikorlar RNGA-da adsorbsiya edilmiş eritrositlər olan antigen eritrosit diaqnostikumundan istifadə edərək aşkar edilir. haqqında onları antigenlərlə. Bəzən antikorların adsorbsiya olunduğu anti-A eritrosit diaqnostikasından istifadə olunur. Məsələn, botulinum toksinini ona eritrosit anticisim botulinum toksini əlavə etməklə aşkar etmək olar (bu reaksiya deyilir əks dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası- RONG). RNGA yoluxucu xəstəliklərin diaqnostikası və gonadotropik hormonun təyini üçün istifadə olunur V hamiləlik qurarkən sidik, dərmanlara, hormonlara və bəzi digər hallarda həssaslığı müəyyən etmək.
COMBES REAKSİYASI
(Coombs testi) - qan zərdabında qlobulinlərin çökməsinə səbəb olan qırmızı qan hüceyrələrinin səthində Rh antikorlarını təyin etmək üçün bir üsul. Bu test diaqnoz üçün istifadə olunur hemolitik anemiya qırmızı qan hüceyrələrinin məhvinə məruz qalan Rh uyğunsuzluğu olan körpələrdə.
Koaglütinasiya reaksiyası. Patogen hüceyrələr immun diaqnostik serum ilə əvvəlcədən müalicə edilmiş stafilokoklardan istifadə etməklə müəyyən edilir. Zülal ehtiva edən stafilokoklar A, immunoqlobulinlərin Fc fraqmentinə yaxınlığa malik olmaqla, antimikrob anticisimləri qeyri-spesifik adsorbsiya edir, sonra isə xəstələrdən təcrid olunmuş müvafiq mikroblarla aktiv mərkəzlərlə qarşılıqlı əlaqədə olur. Koaglütinasiya nəticəsində stafilokoklardan, diaqnostik serum anticisimlərindən və aşkar edilmiş mikrobdan ibarət lopa əmələ gəlir.
Hemaqlütinasiya inhibe reaksiyası(RTGA) viruslar qırmızı qan hüceyrələri (Şəkil. 13.3) aglutinate öz qabiliyyətini itirmək nəticəsində immun serum antikor tərəfindən virus antigenləri blokada, yatırılması əsaslanır. RTGA bir çox viral xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur, onların törədicisi (qrip virusları, qızılca, məxmərək, gənə ensefaliti və s.) müxtəlif heyvanların qırmızı qan hüceyrələrini aglutinasiya edə bilir.
- ÜST-dən bir qrup həkim poliomielitli xəstələri müəyyən etmək və poliomielit xəstəliyinə qarşı universal peyvəndin aparılmasına kömək etmək üçün Hindistana gəlib. Araşdırma aparılan kəndlərdən birində 5 gün əvvəl xəstələnən çoxuşaqlı ailədən 6 yaşlı uşaq həkimlərə gətirilib. Temperatur qəfil yüksəldi, şiddətli baş ağrısı, təkrar qusma, qollarda və ayaqlarda ağrılar oldu. Yoxlama zamanı: yüksək temperatur, şiddətli zəiflik, meningeal simptomlar, üzərində sağ ayaq azaldılmış əzələ tonu, tendon refleksləri kəskin şəkildə zəifləyir, ayaq asılır. Onurğa kanalının ponksiyonu zamanı serebrospinal maye altından axdı yüksək qan təzyiqi, limfositlərin sayı artır, bakteriyalar təcrid olunmur. Çatdırıldı ilkin diaqnoz"Poliomielitin paralitik forması". Oğlan necə yoluxa bilər? Poliomielitin xüsusi aktiv profilaktikası necə aparılır? Bu ailənin digər uşaqlarına yoluxma təhlükəsi varmı, nə etmək lazımdır?
Cavab: Oğlan nəcis-oral yolla qida, su və həmçinin hava damcıları vasitəsilə yoluxa bilərdi. Poliomielit xəstəliyinin qarşısının alınması üçün əsas tədbir Rusiyada Sabin ştammının 3 serotipindən canlı mədəniyyət peyvəndi ilə immunizasiyadır poliomielit peyvəndi adına Poliomielit və Viral Ensefalit İnstitutu tərəfindən istehsal olunan ağızdan tətbiq üçün. M.P. Çumakova. Peyvənd Afrika yaşıl meymun böyrək hüceyrələrinin ilkin kulturasından əldə edilmiş 1, 2, 3 tip poliomielit virusunun zəiflədilmiş Sabin ştammlarının üçvalentli preparatıdır. . 3 aydan 6 yaşa qədər uşaqlar poliomielit əleyhinə müntəzəm peyvəndlərə məruz qalırlar. Ağızdan poliomielit peyvəndi ilə peyvəndlər 3, 4, 5 və 6 ayda 2 və ya 4 damcı peyvəndlə şifahi olaraq üç dəfə 18, 20 ay və 14 yaşda üç gücləndirici doza ilə aparılır. Xəstə oğlan xəstəxanaya yerləşdirilməlidir və bu ailənin bütün digər uşaqları diri poliomielit peyvəndi ilə peyvənd edilməlidir.
- Üçvalentli polimer-alt vahidli maye qrip peyvəndinin (qrip) tərkibi və istifadəsi
Bu molekulyar peyvənddir. Tərkibi: üç yarımtipli qrip virusunun səthi Ag (A/H1N1, A/H3N2, B). Tətbiq: qripin qarşısının alınması üçün
23 nömrəli imtahan vərəqəsi
