У дома Премахване Подробна реакция на аглутинация (RA). Приблизителна реакция на аглутинация (RA)

Премахване

Подробна реакция на аглутинация (RA). Приблизителна реакция на аглутинация (RA)

Реакцията на непряка (пасивна) хемаглутинация (IRHA) се основава на факта, че червените кръвни клетки, ако разтворим антиген е адсорбиран на тяхната повърхност, придобиват способността да аглутинират при взаимодействие с антитела към адсорбирания антиген. Диаграмата на RNGA е показана на фиг. 34. RNGA се използва широко в диагностиката на редица инфекции.

Ориз. 34. Схема на реакцията на пасивна хемаглутинация (RPHA). A - получаване на еритроцитна диагностика: B - RPGA: 1 - еритроцит: 2 - изследван антиген; 3 - еритроцитен диагностикум; 4 - антитяло към изследвания антиген: 5 - аглутинат

Настройка на реакция. Тестовият серум се нагрява 30 минути при 56°С, разрежда се последователно в съотношение 1:10 - 1:1280 и се налива в 0,25 ml в епруветки или ямки, където се капват 2 капки еритроцитен диагностикум (еритроцити с адсорбиран върху тях антиген). ) след това се добавят.

Контроли: суспензия от еритроцитен диагностикум с известен имунен серум; суспензия на диагностикум с нормален серум; суспензия от нормални червени кръвни клетки с тест серум. При първата контрола трябва да настъпи аглутинация, а при втората и третата да не настъпи.

Използвайки RIGA, можете да откриете неизвестен антиген, ако познатите антитела са адсорбирани върху червените кръвни клетки.

Реакцията на хемаглутинация може да се извърши в обем от 0,025 ml (микрометод), като се използва микротитратор Takachi.

Контролни въпроси

1. Какво показва положителен резултат от рентгеново изследване между червените кръвни клетки и материала, който се изследва за наличие на вирус?

2. Ще настъпи ли аглутинация на червени кръвни клетки, ако към тях се добави вирус и съответният му серум? Как се нарича реакцията, която разкрива това явление?

Упражнение

Вземете предвид и регистрирайте резултата РИГА.

Реакция на утаяване

При реакцията на утаяване се утаява специфичен имунен комплекс, състоящ се от разтворим антиген (лизат, екстракт, хаптен) и специфично антитяло в присъствието на електролити.

Мътният пръстен или утайката, образувана в резултат на тази реакция, се нарича утайка. Тази реакция се различава главно от реакцията на аглутинация по размера на антигенните частици.

Реакцията на утаяване обикновено се използва за определяне на антиген при диагностицирането на редица инфекции ( антракс, менингит и др.); в съдебната медицина - за определяне вида на кръвта, спермата и др.; при санитарно-хигиенни изследвания - при установяване на фалшифициране на продукти; с негова помощ се определя филогенетичната връзка на животните и растенията. За реакцията ви трябва:

1. Антитела (преципитини) - имунен серум с висок титър на антитела (не по-нисък от 1:100 000). Титърът на преципитиращия серум се определя от най-високото разреждане на антигена, с който той реагира. Серумът обикновено се използва неразреден или в разреждане 1:5 - 1:10.

2. Антиген - разтворени вещества от протеинова или липоидна полизахаридна природа (пълни антигени и хаптени).

3. Изотоничен разтвор.

Основните методи за провеждане на реакцията на утаяване са: реакция на пръстеновидно утаяване и реакция на утаяване в агар (гел).

внимание! Всички компоненти, участващи в реакцията на утаяване, трябва да бъдат напълно прозрачни.

Реакция на пръстеновидно утаяване. С помощта на пипета на Пастьор добавете 0,2-0,3 ml (5-6 капки) серум в епруветката за утаяване (серумът не трябва да попада върху стените на епруветката). Антигенът в същия обем се наслоява внимателно върху серума, като се излива с тънка пастьорска пипета по стената на епруветката. Епруветката се държи в наклонено положение. При правилно наслояване трябва да има ясна граница между серума и антигена. Внимателно, за да не се смеси течността, поставете епруветката в стойка. Ако реакцията е положителна, на границата на антигена и антитялото се образува мътен "пръстен" - утайка (виж фиг. 48).

Реакцията е придружена от редица контроли (Таблица 18). Последователността на добавяне на реакционните съставки в епруветката е много важна. Не можете да наслоите серум върху антигена (в контролата - върху изотоничен разтвор), тъй като относителната плътност на серума е по-голяма, той ще потъне на дъното на епруветката и границата между течностите няма да се разкрие.

Таблица 18. Схема за настройка на реакцията на пръстеновидно утаяване

Забележка. + наличие на "пръстен"; - липса на "пръстен".

Резултатите се записват след 5-30 минути, в някои случаи след час, като винаги се започва с контролите. „Пръстенът“ във 2-ра епруветка показва способността на имунния серум да влезе специфична реакциясъс съответния антиген. В 3-5 епруветки не трябва да има „пръстени“ - няма антитела и антигени, съответстващи един на друг. „Пръстен“ в 1-ва епруветка - положителен резултат от реакцията - показва, че тестваният антиген съответства на взетия имунен серум, липсата на „пръстен“ („пръстен“ само във 2-ра епруветка) показва тяхното несъответствие - отрицателен резултат от реакцията.

Реакция на утаяване в агар (гел). Особеността на реакцията е, че взаимодействието на антиген и антитяло се извършва в плътна среда, т.е. в гел. Получената утайка дава мътна ивица в дебелината на средата. Липсата на лента показва несъответствие между компонентите на реакцията. Тази реакция се използва широко в биомедицинските изследвания, по-специално при изследването на образуването на токсини в причинителя на дифтерия.

Контролни въпроси

1. Каква е основната разлика между реакциите на аглутинация и реакциите на утаяване?

2. Защо мътните съставки не могат да се използват в реакцията на утаяване?

Упражнение

1. Настройте реакцията на пръстеновидно утаяване и скицирайте резултата.

2. Проучете естеството на взаимодействието на антигена с антитялото в реакцията на утаяване в агар, скицирайте резултата (вземете чаша от вашия учител).

Реакция на лизис (имунна цитолиза)

Имунният лизис е разтваряне на клетки под въздействието на антитела, когато задължително участиедопълнение. За реакцията ви трябва:

1. Антиген - микроби, червени кръвни клетки или други клетки.

2. Антитяло (лизин) - имунен серум, по-рядко пациентски серум. Бактериолитичният серум съдържа антитела, участващи в лизиране на бактерии; хемолитични - хемолизини, които насърчават разграждането на червените кръвни клетки; за лизис на спирохети са необходими спирохетолизини, клетки - итолизини и др.

3. Допълване. Повечето добавки в серума морски свинчета. Този серум (смес от няколко животни) обикновено се използва като допълнение. Пресният (местен) комплемент е нестабилен и лесно се унищожава при нагряване, разклащане или съхранение, така че може да се използва не повече от два дни след получаване. За запазване на комплемента към него се добавят 2%. борна киселинаи 3% натриев сулфат. Тази добавка може да се съхранява при 4°C до две седмици. Най-често се използва суха добавка. Преди употреба се разтваря в изотоничен разтвор до първоначалния обем (посочен на етикета).

4. Изотоничен разтвор.

Реакция на хемолиза(Таблица 19). За реакцията ви трябва:

1. Антиген - 3% суспензия от промити овчи еритроцити в размер на 0,3 ml еритроцитна утайка и 9,7 ml изотоничен разтвор.

2. Антитяло - хемолитичен серум (хемолизин) срещу овчи еритроцити; обикновено се приготвя в производството, лиофилизиран и титърът е посочен на етикета.

Титърът на хемолизина е най-високото разреждане на серума, при което настъпва пълна хемолиза на 3% суспензия от червени кръвни клетки в присъствието на комплемент. За реакцията на хемолиза хемолизинът се взема в троен титър, т.е. разреден 3 пъти по-малко, отколкото преди титъра. Например, при серумен титър 1:1200, серумът се разрежда 1:400 (0,1 ml серум * и 39,9 ml изотоничен разтвор). Излишъкът от хемолизин е необходим, тъй като част от него може да бъде адсорбирана от други компоненти на реакцията.

* (Не трябва да приемате по-малко от 0,1 ml серум - точността на измерването ще пострада.)

3. Комплементът се разрежда 1:10 (0,2 ml комплемент и 1,8 ml изотоничен разтвор).

4. Изотоничен разтвор.

Таблица 19. Схема на реакция на хемолиза

Отчитане на резултатите. Ако реакцията се проведе правилно, в първата епруветка ще настъпи хемолиза - съдържанието й ще стане прозрачно. В контролите течността остава мътна: във 2-ра епруветка няма достатъчно комплемент за настъпване на хемолиза, в 3-та епруветка няма хемолизин, в 4-та епруветка няма нито хемолизин, нито комплемент, в 5-та епруветка антигенът прави не съответства на антитялото,

Ако е необходимо, хемолитичният серум се титрира според следната диаграма(Таблица 20).

Преди титруване пригответе първоначално серумно разреждане 1:100 (0,1 ml серум и 9,9 ml изотоничен разтвор), от което необходимите разреждания, Например:

От тези разреждания добавете 0,5 ml серум в епруветки за титруване, както е показано в таблица. 20.

Таблица 20. Схема на титруване на хемолитичен серум (хемолизин)

В примера, даден в табл. 20, титърът на хемолитичния серум е 1:1200.

Когато се използва пресен хемолитичен серум, той трябва да бъде инактивиран, за да се унищожи присъстващият в него комплемент. За да направите това, той се нагрява в продължение на 30 минути при 56 ° C на водна баня или в инактиватор с термостат. Последният метод е по-добър: той елиминира възможността за прегряване на суроватката, т.е. нейната денатурация. Денатурираните серуми са неподходящи за тестване.

Реакция на бактериолиза. При тази реакция комплементът лизира бактериите в присъствието на подходящ (хомоложен) серум. Схемата на реакцията е фундаментално подобна на схемата на реакцията на хемолиза. Разликата е, че след двучасова инкубация всички епруветки се посяват върху петриеви панички със среда, благоприятна за микроорганизма, включен в експеримента, за да се установи дали е лизиран. Ако експериментът е проведен правилно, културите от 2-5 епруветки (контроли) трябва да покажат обилен растеж. Липса на растеж или слаб растеж в инокулацията от 1-ва епруветка (експеримент) показва смъртта на микробите, т.е. че те са хомоложни на антитялото.

внимание! Реакцията на бактериолиза трябва да се проведе при асептични условия.

Контролни въпроси

1. Какво ще се случи с червените кръвни клетки, ако се използва дестилирана вода вместо изотоничен разтвор на натриев хлорид? Каква е основата на това явление?

2. Каква реакция ще настъпи, когато еритроцитите взаимодействат с хомоложен имунен серум при липса на комплемент?

Упражнение

Настройте реакцията на хемолиза. Запишете и скицирайте резултата.

Свързана информация.

Той използва червени кръвни клетки или неутрални синтетични материали(например латексни частици), на чиято повърхност са сорбирани антигени (бактериални, вирусни, тъканни) или антитела. Тяхната аглутинация възниква, когато се добавят подходящи серуми или антигени. Червените кръвни клетки, сенсибилизирани с антигени, се наричат антигенен еритроцитен диагностикум и се използват за откриване и титриране на антитела. Еритроцити, сенсибилизирани с антитела. се наричат имуноглобулинови еритроцитни диагностикуми и се използват за откриване на антигени.

Реакцията на пасивна хемаглутинация се използва за диагностициране на заболявания, причинени от бактерии (коремен тиф и паратиф, дизентерия, бруцелоза, чума, холера и др.), протозои (малария) и вируси (грип, аденовирусни инфекции, вирусен хепатит B, морбили, енцефалит, пренасян от кърлежи, кримска хеморагична треска и др.), както и за определяне на определени хормони, идентифициране свръхчувствителностпациент да лекарстваи хормони като пеницилин и инсулин.

Реакция на пасивна хемаглутинация (RPHA). Тестът за пасивна хемаглутинация е чувствителен метод серологична диагностикаи се използва както за ранна, така и за ретроспективна диагностика, както и за определяне на имунологичното състояние на ваксинирани хора. При пациенти с туларемия антителата обикновено се откриват в края на 1-вата или 2-рата седмица на заболяването, след 1-1,5 месеца достигат титри на RPHA максимална производителност(1: 100 000-1: 20 000, рядко по-високи), след което намаляват и остават на ниво 1: 100-1: 200 за дълго време.

При ваксинирани хора антителата също се откриват постоянно, но в по-ниски титри, не надвишаващи 1: 2000-1: 5000 1-1,5 месеца след ваксинацията, и остават в продължение на няколко години на ниско ниво от 1: 20-1: 80.

Антигенът за стадиране на RPHA е tularemia erythrocyte diagnosticum (антигенен). Лекарството е формалинизирани овчи червени кръвни клетки, сенсибилизирани с туларемичен антиген, налични в течна и суха форма. Течен препарат - 10% суспензия на червени кръвни клетки в разтвор на формалдехид с концентрация 10%. Сухият лиофилизиран препарат представлява вакуумно изсушена 10% суспензия от червени кръвни клетки без консервант. Преди употреба се разрежда според указанията на етикета. За провеждане на реакцията в полистиренови плаки и двете лекарства се използват в концентрация 2,5%, а при провеждане на реакцията в микрообеми - в концентрация 0,5%.

Техника за настройка на RPGA. Тестовите серуми се разреждат с физиологичен разтвор 1:5 (1:10) и се нагряват при 56 градуса С в продължение на 30 минути. След това, за да се отстранят хетерогенните антитела към овчи еритроцити, серумите се третират с 50% суспензия от формалинизирани овчи еритроцити. За да направите това, добавете червени кръвни клетки в размер на 2 капки (0,05 ml) на 1 ml серум и разбъркайте добре чрез разклащане. Серумът се оставя до пълното утаяване на еритроцитите или се центрофугира след един час при стайна температура, след което е готов за изследване.

Течността за разреждане се излива в обем от 0,5 ml в редица ямки върху полистиролова плака. По време на предварителното изследване на серумите е препоръчително да ги тествате, като поставите реакцията в къс ред на плаката (6 ямки). Ако се открият антитела в кратка серия, серумите се тестват повторно в дълга серия от разреждания (12 ямки). След като разлеете течността за разреждане, добавете 0,5 ml тестови серуми в разреждане 1:5 към първата ямка на всеки ред (къса или дълга). След това същите обеми серум се титруват с двукратни разреждания. Така се получават серумни разреждания в късите серии от 1:10 до 1:320, а в дългите серии от 1:10 до 1:20480. След титруване на серума във всяка ямка се добавя една капка (0,05 ml) от работна 2,5% суспензия от сенсибилизирани еритроцити. Съдържанието на плочите се разклаща старателно до получаване на хомогенна суспензия. Плочите се оставят на стайна температура върху неподвижна повърхност на масата. Предварителният запис на реакцията се извършва след 2-3 часа, окончателното определяне на титъра се извършва след пълно утаяване на червените кръвни клетки в ямките. За реакцията са предвидени следните контроли: 1) тест серум, разреден 1:10 в обем 0,5 ml + 1 капка 2,5% суспензия от несесибилизирани еритроцити; 2) течност за разреждане в обем от 0,5 ml + 1 капка 2,5% суспензия от несесибилизирани еритроцити; 3) течност за разреждане в обем от 0,5 ml + 1 капка 2,5% суспензия от сенсибилизирани еритроцити. Всички контроли трябва да дават ясно отрицателна реакция.

Отчитане и оценка на РПГА. Реакцията се оценява по следната схема:

1) рязко положителна реакция(++++) - червените кръвни клетки падат на дъното на дупката в равномерен слой под формата на "чадър", който често има назъбено топене на краищата;

2) положителна реакция (+++) - червените кръвни клетки покриват поне 2/3 от дъното на ямката;

3) слабо положителна реакция (++) - аглутинатът е малък и се намира в самия център на ямката;

4) съмнителна реакция (+) - около утайката на еритроцитите в самия център на ямката има отделни зърна аглутинат;

5) отрицателен (-) - на дъното на дупката червените кръвни клетки се установяват под формата на „копче“ или малък пръстен с гладки, рязко дефинирани ръбове.

Серумният титър се взема предвид въз основа на последното разреждане на серума, което дава много ясна реакция (поне три плюса). Разреждане от 1:100 или по-високо се счита за диагностичен титър, но, както и при ревматоидния артрит, е необходимо да се следи неговото повишаване.

RPGA за туларемия е доста специфичен и открива някои кръстосани реакциисамо със серуми за бруцелоза. Диференциална диагнозавъзможно чрез височината на титрите в RPGA, които са значително по-високи с хомоложния антиген.

Техника за настройка на RPHA в микрообеми. RPGA може да се извърши в микрообеми с помощта на микротитратор тип Takachi (или микроплаки с кръгло дъно с микропипети), което позволява титруване на материал в обеми от 25 μl и 50 μl. Техниката на реакцията и последователността на всички операции са същите като при изследване в полистиренови плочи. Трябва обаче да се има предвид, че чувствителността на микрометода обикновено е едно разреждане (т.е. 2 пъти) по-ниска от тази на макрометода.

За да се постави реакцията в микротитратор, към всяка ямка се добавя течност за разреждане в обем от 50 μl с помощта на пипета-капкомер. След това, като се използват титратори с глава от 50 μl, тестовият серум се събира чрез потапяне на главата в него. Уверете се, че течността е напълнила главата на титратора. Титраторът със серума се прехвърля в първата ямка и се задържа вертикално положение, направете няколко ротационни движенияотиване и връщане. След това титраторът се прехвърля в следващата ямка и манипулацията се повтаря. Титруването може да се извърши едновременно в няколко реда. След титруване на цялата серия, титраторът се измива с дестилирана вода (смяна на 2 порции) чрез въртеливи движения, водата се отстранява от главата с помощта на тампон и се изгаря на пламък на горелка.

След титруване добавете 25 μl диагностична течност за еритроцити към ямките. Концентрацията на диагностикума за RPHA в микрообеми трябва да бъде 0,5% (т.е. 2,5% суспензия от червени кръвни клетки се разрежда допълнително 5 пъти). След добавяне на червени кръвни клетки, плаките трябва да се разклатят леко, докато се получи хомогенна суспензия. Резултатите могат да бъдат записани в рамките на 1-1,5 часа, което е значително предимство на RPGA в микротитър. В допълнение, тази техника изисква малки количества от всички реакционни съставки и тест серуми.

Реакцията се взема предвид по следната схема:

1) "+" - пълна хемаглутинация, при която червените кръвни клетки падат на дъното на ямката в равномерен слой под формата на "чадър", заемащ най-малко 2/3 от дъното;

2) "+-" - частична хемаглутинация, при която червените кръвни клетки падат на дъното под формата на хлабав пръстен с малък размер;

3) "-" - липса на хемаглутинация, когато червените кръвни клетки падат на дъното под формата на малък бутон или пръстен с гладък ръб.

Специфичност положителен резултат, получени в RPHA, могат да бъдат тествани с помощта на трикомпонентна реакция - реакцията на инхибиране на пасивната хемаглутинация (RPHA).

Техника за настройка на RTPGA. Тази реакция се използва за потвърждаване на специфичността на положителен резултат от RPGA, когато е под съмнение или е от особен епидемиологичен интерес. Механизмът на реакцията се състои в специфично инхибиране на хемаглутинацията, когато към тестовия серум се добави суспензия от убити туларемични бактерии. Три компонента взаимодействат в реакцията: тестов серум, специфичен туларемичен антиген и антигенен еритроцитен диагностикум RTPHA обикновено се поставя в редица от 7-8 ямки. Препоръчително е да инсталирате повторен RPGA успоредно с RTPGA. 0,25 ml течност за разреждане се излива в два реда ямки, след което тест-серумът в обем от 0,25 ml се добавя към първите ямки на двата реда и се извършва титруване на два еднакви реда от серумни разреждания. Добавете 0,25 ml течност за разреждане към всички ямки от втория ред и 0,25 ml суспензия от туларемични бактерии към ямките от първия ред. Използва се Tularemia diagnosticum (съдържащ 25 милиарда туларемични бактерии в 1 ml), предварително разреден 50 пъти. Тази суспензия съдържа 500 милиона бактерии в 1 ml или 125 милиона в обем от 0,25 ml. След добавяне на антигена, плаката се оставя за 1 час при стайна температура, след което се добавя една капка (0,05 ml) еритроцитен диагностикум към всички ямки на двата реда, плаката се разклаща и се оставя на плоска повърхност на масата. Счетоводството се извършва след 2-3 часа.

Отчитане и оценка на РТПГА. Ако тестовият серум съдържа специфични антитела срещу туларемия, те се неутрализират от добавения антиген и няма да настъпи хемаглутинация в първия ред ямки, или, ако висок титърсерум, хемаглутинация ще се наблюдава в по-малък (2-4) брой ямки, отколкото в реда с RPGA. В този случай специфичността на резултатите беше потвърдена. Ако се забележи хемаглутинация и в двата реда, т.е. Ако резултатите от RTPGA и RPGA съвпадат, това показва липсата на антитела срещу туларемия в тестовия серум. В този случай първичният резултат от RPGA се счита за неспецифичен.

Техника за стадиране на РТХГ в микрообеми. RTPGA, подобно на RPGA, може да се извърши в микрообеми, като се използва микротитър тип Takachi. За да направите това, добавете 0,25 μl течност за разреждане в ямките на микроплаките в два реда от по 7-8 ямки всяка. След това с помощта на титратор се добавят 0,25 μl от тестовия серум и се титруват в двата реда. След това към всяка ямка на първия ред се добавят 25 μl туларемичен антиген (концентрацията на който е 500 милиона туларемични бактерии в 1 ml) и 25 μl разреждаща течност се добавят към втория ред. Плаките се оставят за 1 час при стайна температура, след което към всички ямки от двата реда се добавят 25 μl антигенен зритроцитен диагностикум (0,5% концентрация). Отчитането и оценката на резултатите се извършват подобно на реакциите в макрообемите.

Съдържание на темата "Имуномодулатори. Имунодиагностика на инфекциозни заболявания.":

Реакции на пасивна аглутинация. Реакции на индиректна аглутинация. Реакция на индиректна или пасивна хемаглутинация (IRHA, RPHA). Обратно RNGA. Реакция на инхибиране на пасивната хемаглутинация (PHA).

Тези реакцииса наречени непряк (пасивен), тъй като те използват Ag (или AT), изкуствено сорбиран върху повърхността на различни корпускулярни частици.

Индиректна или пасивна реакция на хемаглутинация (RNGA, RPGA) е една от най-чувствителните серологични реакции. Основава се на способността на AT да взаимодейства с Ag, фиксиран върху различни червени кръвни клетки, които след това аглутинират. За по-голяма стабилност на диагностикумите червените кръвни клетки се формалинизират.

Обратно RNGAизползва се за откриване на Ag в кръвен серум; За целта върху еритроцитите се фиксират не Ag, а AT. Реакциите от този тип се използват широко за диагностициране на инфекциозни заболявания, установяване на бременност, откриване на свръхчувствителност към лекарства и др.

Реакция на инхибиране на пасивна хемаглутинация (RTPGA) - по-нататъчно развитие RNGA; в известен смисъл контролира неговата специфика. За разлика от RNGA, включва три компонента; Ag, AT и Ag (AT), адсорбирани върху еритроцитите. Първоначално Ag реагира с AT (стандартен антисерум), след което към сместа се добавят еритроцити, сенсибилизирани със същия Ag (или AT). Ако по време на взаимодействието на Ag с AT в системата не остане свободен AT (или Ag), тогава не се наблюдава аглутинация на еритроцитния диагностикум.

11621 0

Серологичните реакции се обозначават в съответствие с явленията, съпътстващи образуването на комплекса антиген-антитяло по време на взаимодействието на компоненти с различни свойства. Има реакции на аглутинация, утаяване и лизис.

Реакция на аглутинация (RA)

Реакцията на аглутинация (РА) се основава на използването на корпускуларен антиген (суспензия от бактерии, сенсибилизирани еритроцити, латексни частици и др.), Взаимодействащ със специфични антитела, в резултат на което полученият комплекс антиген-антитяло се утаява. Тази реакция се използва широко в лабораторната практика за серологична диагностика. бактериални инфекциии за идентифициране на изолирани микроорганизми.

РА се използва за диагностициране на много инфекциозни заболявания: бруцелоза (реакция на Райт, Хедълсън), туларемия, лептоспироза (RAL - реакция на аглутинация и лизис на Leptospira), листериоза, тиф (RAR - реакция на аглутинация на рикетсии), шигелоза, йерсиниоза, псевдотуберкулоза и др.

Непряка или пасивна реакция на аглутинация (RIGA или RPGA).

За провеждане на тази реакция се използват червени кръвни клетки на животни (овце, маймуни, морски свинчета, някои птици), сенсибилизирани с антитела или антиген, което се постига чрез инкубиране на суспензия от червени кръвни клетки и разтвор на антиген или имунен серум.

Наричат се диагностикуми, получени на базата на сенсибилизирани с антигени еритроцити антигенни еритроцитни диагностикуми. Те са предназначени за определяне на антитела в серийни разреждания на кръвни серуми, например еритроцитни шигелни диагностикуми, еритроцитни салмонелни О-диагностикуми.

Съответно се нарича диагностика, базирана на еритроцити, сенсибилизирани със специфични имуноглобулини антитела(имуноглобулин) диагностикумии те служат за идентифициране на антигени в различни материали, например еритроцитен имуноглобулин дифтериен диагностикум за RIGA, използван за откриване на дифтериен екзотоксин на коринебактерии в течна хранителна среда, когато в нея се инокулира материал от носа и орофаринкса.

Реакцията на хемаглутинация се използва за диагностициране както на бактериални (коремен тиф, паратиф, дизентерия, бруцелоза, чума, холера и др.), така и на вирусни (грип, аденовирусни инфекции, морбили и др.) инфекции. По отношение на чувствителността и специфичността RIGA превъзхожда RA.

Реакция на инхибиране на хемаглутинацията (HAI)

Реакцията на инхибиране на хемаглутинацията (HAI) се използва за титриране на антивирусни антитела в кръвния серум, както и за установяване на вида на изолираните вирусни култури. RTGA може да се използва за диагностициране на тези вирусни инфекции, чиито патогени имат хемаглутиниращи свойства.

Принципът на метода е, че серумът, съдържащ антитела към определен тип вирус, потиска неговата хемаглутинираща активност и червените кръвни клетки остават неаглутинирани.

Реакция на инхибиране (забавяне) на пасивна хемаглутинация (RPHA).

Три компонента участват в RTPGA: имунен серум, антиген (тестов материал) и сенсибилизирани еритроцити.

Ако тестовият материал съдържа антиген, който специфично реагира с имунни антитела стандартен серум, след това ги свързва и с последващо добавяне на еритроцити, сенсибилизирани с антиген, хомоложен на серума, не настъпва хемаглутинация.

RTPHA се използва за откриване на микробни антигени, за тяхното количествено определяне, както и за контрол на специфичността на RTPGA.

Реакция на латексна аглутинация (RLA)

Латексните частици се използват като носител на антитела (имуноглобулини). RLA е експресен метод за диагностициране на инфекциозни заболявания, като се отчита необходимото време (до 10 минути) и възможността за откриване на антиген в малък обем тестов материал.

RLA се използва за индикиране на антигени на Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae тип b, Neisseria meningitidis в цереброспиналната течност, за откриване на стрептококи от група А в секрети от гърлото, за диагностициране на салмонелоза, йерсиниоза и други заболявания. Чувствителността на метода е 1-10 ng/ml, или 10³ -10⁶ бактериални клетки в 1 µl.

Реакция на коаглутинация (CoA)

Реакцията на коаглутинация (CoA) се основава на способността на протеин А на стафилококите да прикрепят специфични имуноглобулини. RCA - метод за експресна диагностика - служи за идентифициране на разтворими термостабилни антигени в човешки секрети и в състава на циркулиращите имунни комплекси (CIC). Откриването на специфични антигени в състава на CEC изисква тяхното предварително утаяване от кръвен серум.

Реакция на утаяване

При реакцията на утаяване (RP) в резултат на взаимодействието на антитела с високо диспергирани разтворими антигени (протеини, полизахариди) се образуват комплекси с участието на комплемента - преципитати. Това е чувствителен тест, използван за откриване и характеризиране на различни антигени и антитела. Най-простият пример за висококачествена RP е образуването на непрозрачна преципитационна ивица в епруветка на границата на антигенното наслояване върху имунния серум - реакцията на пръстеновидна преципитация. Широко използвани са различни видове RP в полутечен агар или агарозен гел (метод на двойна имунодифузия, метод на радиална имунодифузия, имуноелектрофореза).

Реакция на свързване на комплемента (CFR)

Реакцията на свързване на комплемента (CFR) се основава на явлението хемолиза с участието на комплемента, т.е. способни да откриват само комплемент-фиксиращи антитела.

RSC се използва широко за диагностика на много бактериални и вирусни инфекции, рикетсиални инфекции, хламидия, инфекциозна мононуклеоза, протозойни инфекции, хелминтози. RSK е сложен серологична реакция, в която участват две системи: тестовата система (кръвен серум), представена от системата антиген-антитяло и комплемент, и хемолитичната система (овчи червени кръвни клетки + хемолитичен серум). Хемолитичният серум е топлинно инактивиран заешки кръвен серум, имунизиран с овчи еритроцити. Съдържа антитела срещу овчи червени кръвни клетки.

Положителен резултат от RSC - липса на хемолиза - се наблюдава, ако тестовият серум съдържа антитела, хомоложни на антигена. В този случай полученият комплекс антиген-антитяло свързва комплемента и при липса на свободен комплемент добавянето на хемолитична система не е придружено от хемолиза. Ако в серума няма антитела, съответстващи на антигена, не се образува комплекс антиген-антитяло, комплементът остава свободен и серумът причинява хемолиза на червените кръвни клетки, т.е. наличието на хемолиза е отрицателен резултат от реакцията.

Юшчук Н.Д., Венгеров Ю.Я.

Реакция на аглутинация - РА(от лат. aggluti-natio- адхезия) е проста реакция, при която антителата се свързват с корпускулни антигени (бактерии, еритроцити или други клетки, неразтворими частици с адсорбирани върху тях антигени, както и макромолекулни агрегати). Това се случва в присъствието на електролити, например, когато се добави изотоничен разтвор на натриев хлорид.

Приложи различни опцииреакции на аглутинация: екстензивни, показателни, индиректни и др. Реакцията на аглутинация се проявява чрез образуване на люспи или утайка

RA се използва за:

определяне на антитела в кръвния серум на пациенти, например с бруцелоза (реакции на Райт, Хеделсън), Коремен тифи паратиф (реакция на Видал) и други инфекциозни заболявания;

определяне на патогена, изолиран от пациента;

определяне на кръвни групи с помощта на моноклонални антитела срещу еритроцитни алоантигени.

За определяне на антитела при пациент слагамразширени реакция на аглутинация: добавете към разрежданията на кръвния серум на пациента диагностикум(суспензия от убити микроби) и след няколко часа инкубация при 37 °C се отбелязва най-високото серумно разреждане (серумен титър), при което настъпва аглутинация, т.е. образува се утайка.

Характерът и скоростта на аглутинацията зависят от вида на антигена и антителата. Пример за това са особеностите на взаимодействие на диагностикуми (О- и R-антигени) със специфични антитела. Реакция на аглутинация с О-диагностикум(бактерии, убити от топлина, запазващи устойчивост на топлина О-антиген)протича под формата на финозърнеста аглутинация. Реакцията на аглутинация с H-diagnosticum (бактерии, убити от формалдехид, запазващи термолабилния флагеларен H-антиген) е груба и протича по-бързо.

Ако е необходимо да се определи патогенът, изолиран от пациента, поставете показателна реакция на аглутинация,с помощта на диагностични антитела (аглутиниращ серум), т.е. извършва се серотипиране на патогена. Провежда се индикативна реакция върху предметно стъкло. Към капка диагностичен аглутиниращ серум се добавя чиста култура на патогена, изолиран от пациента, в разреждане 1:10 или 1:20. В близост се поставя контрола: вместо серум се прилага капка разтвор на натриев хлорид. Когато се появи флокулентна утайка в капка, съдържаща серум и микроби, a обширна реакция на аглутинацияв епруветки с нарастващи разреждания на аглутиниращ серум, към който се добавят 2-3 капки суспензия на патогена. Аглутинацията се взема предвид от количеството на утайката и степента на прозрачност на течността. Реакцията се счита за положителна, ако се наблюдава аглутинация в разреждане, близко до титъра на диагностичния серум. В същото време се вземат предвид контролите: серумът, разреден с изотоничен разтвор на натриев хлорид, трябва да бъде прозрачен, суспензията от микроби в същия разтвор трябва да бъде равномерно мътна, без утайка.

Различни родствени бактерии могат да бъдат аглутинирани от един и същ диагностичен аглутиниращ серум, което затруднява идентифицирането им. Затова използват адсорбирани аглутиниращи серуми,от които кръстосано реагиращите антитела са били отстранени чрез адсорбция към сродни бактерии. Такива серуми задържат антитела, които са специфични само за дадена бактерия. Производството на специални монорецепторни диагностични аглутиниращи серуми е предложено от A. Castellani (1902).

Индиректна (пасивна) реакция на хемаглутинация(RNGA, RPGA) се основава на използването на червени кръвни клетки с антигени или антитела, адсорбирани на тяхната повърхност, взаимодействието на които със съответните антитела или антигени на кръвния серум причинява залепване и утаяване на червените кръвни клетки на дъното на епруветка или клетка Vпод формата на назъбена утайка (фиг. 13.2). При отрицателна реакциячервените кръвни клетки се настаняват ■ под формата на „копче“. Обикновено антителата се откриват в RNGA с помощта на антигенен еритроцитен диагностикум, който представлява еритроцити с адсорбирана Наги с антигени. Понякога се използва анти-А еритроцитна диагностика, върху която се адсорбират антитела. Например, ботулиновият токсин може да бъде открит чрез добавяне на еритроцитно антитяло ботулинов токсин към него (тази реакция се нарича реакция на обратна индиректна хемаглутинация- RONG). RNGA се използва за диагностициране на инфекциозни заболявания и определяне на гонадотропния хормон Vурина при установяване на бременност, за идентифициране на свръхчувствителност към лекарства, хормони и в някои други случаи.

РЕАКЦИЯ НА КОМБЕС

(тест на Coombs) - метод за определяне на Rh антитела на повърхността на червените кръвни клетки, които причиняват утаяване на глобулини в кръвния серум. Този тест се използва за диагностика хемолитична анемияпри бебета с Rh несъвместимост, които изпитват разрушаване на червени кръвни клетки.

Реакция на коаглутинация. Патогенните клетки се определят с помощта на стафилококи, предварително третирани с имунен диагностичен серум. Стафилококи, съдържащи протеин а,имащи афинитет към Fc фрагмента на имуноглобулините, неспецифично адсорбират антимикробни антитела, които след това взаимодействат с активни центрове със съответните микроби, изолирани от пациенти. В резултат на коаглутинацията се образуват люспи, състоящи се от стафилококи, диагностични серумни антитела и открит микроб.

Реакция на инхибиране на хемаглутинацията(RTGA) се основава на блокада, потискане на вирусни антигени от имунни серумни антитела, в резултат на което вирусите губят способността си да аглутинират червените кръвни клетки (фиг. 13.3). RTGA се използва за диагностициране на много вирусни заболявания, чиито причинители (грипни вируси, морбили, рубеола, кърлежов енцефалит и др.) Могат да аглутинират червените кръвни клетки на различни животни.

Група лекари от СЗО пристигнаха в Индия, за да идентифицират пациенти с полиомиелит и да помогнат за провеждането на универсална ваксинация срещу полиомиелит. В едно от изследваните села при лекарите е заведено 6-годишно момче от многодетно семейство, което се е разболяло преди 5 дни. Внезапно се повиши температурата, имаше силно главоболие, многократно повръщане, болки в ръцете и краката. При проверка: топлина, тежка слабост, менингеални симптоми, върху десен кракнамалена мускулен тонус, сухожилните рефлекси са рязко отслабени, стъпалото виси. При пункция на гръбначномозъчния канал изтича цереброспинална течност високо кръвно налягане, броят на лимфоцитите е увеличен, бактерии не се изолират. Доставено предварителна диагноза"паралитична форма на полиомиелит". Как може момчето да се зарази? Как се провежда специфичната активна профилактика на полиомиелита? Има ли опасност от заразяване на други деца в това семейство, какво трябва да се направи?

Отговор:Момчето е могло да се зарази по фекално-орален път чрез храна, вода, а също и по въздушно-капков път. Основната мярка за профилактика на полиомиелита е имунизацията с жива културна ваксина от 3 серотипа щамове Sabin. В Русия се използва ваксинация срещу детски параличза перорално приложение, произведено от Института по полиомиелит и вирусен енцефалит на името на. М.П. Чумакова. Ваксината е тривалентен препарат от атенюирани щамове Sabin на полиомиелит тип 1, 2, 3, получени от първична култура от бъбречни клетки на африканска зелена маймуна. . Деца на възраст от 3 месеца до 6 години подлежат на рутинни ваксинации срещу полиомиелит. Ваксинациите с перорална полиомиелитна ваксина се извършват с 2 или 4 капки ваксина перорално три пъти на 3, 4, 5 и 6 месеца с три реваксинации на 18, 20 месеца и 14 години. Болното момче трябва да бъде хоспитализирано, а всички останали деца от това семейство трябва да бъдат ваксинирани с жива полиомиелитна ваксина.