– antiglobulinski test za identifikaciju u Rh-negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih antitijela na Rh faktor – specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: direktan – otkrivanje antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca, indirektni – otkrivanje antitijela u krvnom serumu. Direktno testiranje se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitičke anemije, hemolitička bolest novorođenčadi i dr. Indirektni test se radi radi procene kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca tokom transfuzije, kao i utvrđivanja prisustva i rizika od Rh konflikta prilikom planiranja i vođenja trudnoće. Materijal za Coombsov test je venska krv, a studija se provodi metodama baziranim na reakciji aglutinacije. Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se završava u roku od jednog dana.
Coombsov test – kliničkim ispitivanjima Rh negativna krv, usmjerena na otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za identifikaciju rizika od razvoja Rh konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi, površina crvenih krvnih stanica sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - spojeva različite prirode, čije se prisustvo ili odsutnost koristi za određivanje krvne grupe i Rh faktora. Postoji mnogo vrsta antigena, uključujući medicinska praksa Najveći praktični značaj imaju aglutinogeni A i B, koji određuju krvnu grupu, i aglutinogen D, Rh faktor. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, ali s negativnim faktorom nisu.
Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela na sistem Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh negativnoj krvi kada u nju uđu crvena krvna zrnca sa aglutinogenom D. To se može dogoditi kada se pomiješa krv fetusa i trudnice, prilikom transfuzije krvi koja se radi bez prethodne krvi. kucanje. Coombsov test postoji u dvije verzije - direktnoj i indirektnoj. Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, otkrivaju se antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi između davaoca i primaoca ili majke i fetusa, te pomaže u sprječavanju razvoja Rh konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih zrnaca.
Krv za obje verzije Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se vrši aglutinacijom upotrebom antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji za identifikaciju uzroka hemolitičkih reakcija, u hirurgiji i reanimaciji pri provođenju transfuzije krvi, u akušerstvu i ginekologiji pri praćenju trudnoće kod žena s Rh negativnom krvlju.
Indikacije
Direktni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca, propisan je za hemolitičke reakcije (razaranje crvenih krvnih stanica) različitog porijekla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčeta, hemolizu eritrocita uzrokovanu autoimunim, tumorskim ili zarazne bolesti, kao i recepcija lijekovi, na primjer, kinidin, metildopa, prokainamid. Indirektni Coombsov test, koji određuje antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja Rh konflikta. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice sa negativnim Rh faktorom, pod uslovom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.
Da bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne propisuje pacijentima s Rh pozitivnom krvlju. U tim slučajevima već postoje antigeni na površini crvenih krvnih zrnaca; stvaranje antitijela ne može se izazvati transfuzijom krvi ili ulaskom krvi fetusa u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor – nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh negativnu krv, imunološki sukob s majkom je nemoguć. Kod hemolitičkih patologija, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, jer rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja crvenih krvnih stanica.
Ograničenje Coombsovog testa je mukotrpnost istraživačkog postupka - da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uvjeta, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednosti Coombsovog testa uključuju njegovu visoka osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako se normalizuju nivoi hemoglobina, bilirubina i retikulocita.
Priprema za analizu i prikupljanje materijala
Materijal koji se koristi za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme uzimanja uzorka krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se da napravite pauzu nakon jela od najmanje 4 sata i prestanete pušiti u posljednjih 30 minuta. fizička aktivnost, izbjegavajte emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se vadi štrcaljkom iz kubitalne vene, ili rjeđe iz vene na stražnjoj strani šake. U roku od nekoliko sati materijal se dostavlja u laboratoriju.
Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, serumu krvi pacijenta dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisustvo aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim zrncima. Ako je rezultat pozitivan, određuje se titar aglutinacije. Indirektni Coombsov test se sastoji od više koraka. Prvo, antitela prisutna u serumu se fiksiraju na ubrizganim crvenim krvnim zrncima tokom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisustvo i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.
Normalni rezultati
Obično je rezultat direktnog Coombsovog testa negativan (-). To znači da u krvi ne postoje antitijela povezana s crvenim krvnim zrncima i ne mogu izazvati hemolizu. Normalan rezultat indirektni test Coombs je također negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Kod pripreme za transfuziju krvi za primaoca to znači kompatibilnost sa krvlju davaoca, a kod praćenja trudnoće to znači odsustvo Rh senzibilizacije majke, mali rizik od razvoja imunološkog konflikta. Fiziološki faktori, kao što su prehrambene navike ili fizička aktivnost, ne može uticati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konsultacija s liječnikom.
Dijagnostička vrijednost analize
Pozitivan rezultat Coombs testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije antitijela na crvenim krvnim zrncima i u krvnom serumu vrši se u oba tipa uzoraka. Ako je direktni Coombsov test pozitivan, na vanjskoj membrani crvenih krvnih zrnaca otkrivaju se antitijela koja dovode do uništenja ovih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog upotrebe lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija crvenih krvnih zrnaca može biti uzrokovana sistemskim eritematoznim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenstromovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, hroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazma pneumoplazmama.
Pozitivan rezultat indirektnog Coombs testa ukazuje na prisustvo antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, te postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije donorske krvi tokom trudnoće. Da bi se spriječile komplikacije trudnoće, žene s pozitivnim rezultatom Coombs testa stavljaju se u poseban registar.
Liječenje abnormalnosti
Coombsov test se odnosi na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućavaju identifikaciju hemolitičke reakcije, kao i određivanje kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj Rh konflikta. Ako je rezultat testa pozitivan, potrebno je potražiti savjet svog liječnika - akušera-ginekologa, hematologa, kirurga.
Coombsov test je metoda laboratorijska istraživanja, napravljen utjecanjem na hemaglutinaciju. Zasniva se na osjetljivosti antitijela na imunoglobuline i enzimske elemente, kao i na njihovoj sposobnosti da aglutiniraju eritrocite obložene C3 ili Lg.
Direktna Coombsova dijagnoza
Koristi se za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa instaliranih na vanjskoj strani stanica. Direktni Coombsov test se izvodi na sljedeći način.
Upotreba takvog uzorka
Direktna Coombsova dijagnoza se koristi u određenim slučajevima, kao što su:
- efekti transfuzije;
- autoimuna hemoliza;
- hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.
Indirektni Coombsov test
Ova dijagnoza omogućava otkrivanje antitijela na stanice u serumu, koji se u pravilu inkubira s donorskim crvenim krvnim zrncima tipa 0, a zatim se provodi direktan test. Prijavite se indirektna dijagnozaČetalj u sljedećim slučajevima:
Kako se pripremiti za analizu
Postoje neka pravila za pripremu ispita.
- Ako je pacijent novorođenče, roditelji moraju biti svjesni da će test pomoći u dijagnosticiranju hemolitičke bolesti novorođenčeta.
- Ukoliko pacijent sumnja na hemolitičku anemiju, treba mu objasniti da će mu analiza omogućiti da se utvrdi da li je uzrokovana zaštitnim poremećajima, lijekovima ili drugim faktorima.
- Coombsov test, direktan i indirektan, ne postavlja nikakva ograničenja u ishrani ili prehrani.
- Potrebno je obavijestiti pacijenta da će pregled zahtijevati vađenje krvi iz vene, te mu reći kada će se tačno izvršiti venepunkcija.
- Također biste trebali biti upozoreni na mogućnost nelagodnost tokom perioda stavljanja zavoja na ruku i samog zahvata.
- Lijekove koji mogu utjecati na rezultate uzorka treba prekinuti.
Ovi lijekovi uključuju:
- "Streptomicin";
- "Metildopa";
- "Prokainamid";
- sulfonamidi;
- "Melphalan";
- "Kinidin";
- "Rifampin";
- "Izoniazid";
- cefalosporini;
- "Hydralazine";
- "Klorpromazin";
- "Levodopa";
- "Tetraciklin";
- "Difenilhidantoin";
- "Etosuksimid";
- "Penicilin";
- mefenaminska kiselina.
Uzimanje krvi se radi ujutro na prazan želudac.
Kako se događaj održava
Coombsov test se provodi sljedećim redoslijedom:
- Prilikom dijagnostike kod odraslog pacijenta, nakon punkcije vene, krv se uzima u epruvete sa EDTA (etilendiamintetraacetat).
- Krv novorođenčeta se vadi iz pupčane vrpce u čašu koja sadrži EDTA.
- Područje uboda se pritisne pamučnim štapićem dok krvarenje ne prestane.
- Ako se na mjestu uboda vene pojavi modrica, propisuju se topli oblozi.
- Nakon uzimanja krvi, pacijentu je dozvoljeno da se vrati uzimanju lijekova.
- Potrebno je obavijestiti roditelje novorođenčeta da može biti potrebna sekundarna analiza za praćenje dinamike anemije.
Prednosti Coombsovog testa
Takvo istraživanje ima neke prednosti, a to su:
Nedostaci analize
Pozitivan Coombsov test je prilično radno intenzivna metoda ispitivanja koja zahtijeva karakterističnu točnost izvođenja. Prilikom njegove upotrebe možete naići na određene poteškoće, posebno u vezi sa tumačenjem slabo pozitivnih efekata.
Utvrđeno je da je pogrešan negativan ili slab pozitivne reakcije tokom proizvodnje Coombsovih uzoraka mogu biti posljedice nezadovoljavajuće aktivnog ispiranja ćelija, slabljenja antiglobulinskog reagensa serumskim ostacima, kao i veze sa nemasnom vanjštinom, na koju se antiglobulin može vezati, čime se gubi na djelotvornosti.
Coombsov test ima još jedan nedostatak - nisku stabilnost antiglobulinskog reagensa, čije stjecanje i skladištenje individualne karakteristike, što na sličan način otežava numeričku procjenu učinka antiglobulinskog seruma na hemaglutinaciju.
Bolesti koje se mogu otkriti tokom istraživanja
Coombsova dijagnostika omogućava otkrivanje određenih vrsta bolesti, kao što su:
- hemolitička slabost novorođenčeta;
- razne transfuzijske reakcije;
- autoimuna hemoliza;
- hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.
Danas se Coombsov test smatra prilično popularnim sistemom za testiranje krvi i za odrasle i za novorođenčad. Omogućava prepoznavanje mnogih različitih bolesti.
Nanesite 1 veliku kap seruma O(I), A(II), B(III) na tanjir ili staklo pomoću pipeta (različitih!). Nakon što zabilježite vrijeme, koristite čistu staklenu šipku ili čisti ugao staklenog stakala da sjedinite kapi seruma s kapima krvi. Određivanje traje 5 minuta, protresite ploču, zatim dodajte 1 kap fiziološkog rastvora u svaku mešavinu kapi i procenite rezultate. Bolje je da serum dolazi u 2 različite serije. Rezultati krvne grupe moraju se podudarati u obje serije seruma.
Procjena rezultata izohemaglutinacije:
ako su sva 3 seruma dala negativnu reakciju, odnosno smjesa je jednolično obojena ružičastom - to je O(I) krvna grupa;
Ako negativnu reakciju samo serum grupe A(II) je dao, a serumi O(I) i B(III) su dali pozitivnu reakciju, odnosno pojavila su se zrna - to je A(II) krvna grupa;
serum grupe B(II) je dao negativnu reakciju, a serumi grupe O(I) i A(II) su dali pozitivnu reakciju - to je B(III) krvna grupa.
izohemaglutinacija. Ako je reakcija pozitivna, u smjesi se pojavljuju sitna crvena zrnca ljepljivih crvenih krvnih zrnaca. Zrna se spajaju u veća zrna, a ova u ljuspice. Serum je skoro bezbojan;
ako je reakcija negativna, smjesa ostaje jednolično obojena 5 minuta roze boje i nema zrna;
Pri radu sa 3 seruma grupa O(I), A(II), B(III) moguće su 4 kombinacije reakcija:
sva 3 seruma su dala pozitivne reakcije - testirana krv je bila AB(IV) grupa. U ovom slučaju, studija se provodi sa serumom AB(IV) grupe.
Bilješka! Kapljice krvi koja se testira treba da budu 5-10 puta manje od kapi seruma.
Greške izohemaglutinacije.
Neizvođenje aglutinacije tamo gdje bi trebalo biti i prisustvo aglutinacije tamo gdje ne bi trebalo biti. Ovo može biti zbog slabog titra seruma plus slabe aglutinacije crvenih krvnih zrnaca.
Prisustvo aglutinacije tamo gdje je ne bi trebalo biti- Ovo je pseudoaglutinacija, kada gomile crvenih krvnih zrnaca formiraju „stupove novčića“. Protresanje ploče ili dodavanje fiziološke otopine ih uništava.
Panaglutinacija, kada serum spaja sva crvena krvna zrnca, uključujući i one svoje krvne grupe. Do 5. minute nestaju znaci aglutinacije.
Postoji i takozvana hladna panaglutinacija, kada se crvena krvna zrnca spajaju zbog niske temperature vazduha (ispod 15°C) u prostoriji.
U svim ovim slučajevima se provodi ili ponovljena reakcija, ili korištenje standardnih crvenih krvnih zrnaca.
Određivanje Rh krvi
Za određivanje Rh statusa, odnosno za otkrivanje prisustva ili odsustva antigena Rh sistema u krvi ljudi, koriste se standardni anti-Rh serumi (reagensi), različiti po specifičnosti, odnosno koji sadrže antitela na različite antigene ovog sistema. Za određivanje Rh 0 (D) antigena najčešće se koristi antirezus serum uz dodatak 10% rastvora želatine ili se koristi standardni antirezus reagens pripremljen unapred sa 33% rastvorom poliglucina. Za dobivanje preciznijih rezultata istraživanja, kao i za identifikaciju antigena drugih seroloških sistema, koristi se Coombsov test (također je vrlo osjetljiv u određivanju kompatibilnosti transfuzirane krvi). Za istraživanje se koristi izvorna krv ili krv pripremljena s nekim konzervansom. U tom slučaju krv treba isprati od konzervansa desetostrukom zapreminom izotonične otopine natrijum hlorida. Prilikom određivanja Rh statusa- Rh 0 (D) treba koristiti dva uzorka seruma ili anti-Rhesus reagensa dvije različite serije i istovremeno standardna crvena krvna zrnca dobijena iz krvi Rh-pozitivnih (Rh+) i Rh-negativnih (Rh -) pojedince treba koristiti za kontrolu. Prilikom određivanja drugih izoantigena, potrebno je koristiti kontrolna crvena krvna zrnca koja sadrže ili nemaju antigen protiv kojih su usmjerena antitijela u standardnom serumu.
Parcijalni toplotni aglutinini su najčešći tip antitijela koja mogu uzrokovati razvoj autoimune hemolitičke anemije. Ova antitela pripadaju IgG, ređe IgM, IgA.
COOMBS TEST
Coombsov test: uvod. Coombsov test je laboratorijska dijagnostička metoda zasnovana na reakciji hemaglutinacije.
Glavna metoda za dijagnosticiranje autoimune hemolitičke anemije je Coombsov test. Zasniva se na sposobnosti antitijela specifičnih za imunoglobuline (posebno IgG) ili komponente komplementa (posebno S3) da aglutiniraju eritrocite obložene IgG ili S3.
Vezivanje IgG i C3b za eritrocite uočeno je kod autoimune hemolitičke anemije i imunohemolitičke anemije izazvane lijekovima. Direktni Coombsov test. Direktni Coombsov test se koristi za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa fiksiranih na površini crvenih krvnih stanica. Izvodi se na sljedeći način:
Da bi se dobila antitijela na humane imunoglobuline (antiglobulinski serum) ili komplementar (antikomplementarni serum), životinja se imunizira ljudskim serumom, imunoglobulinima ili ljudskim komplementom. Serum dobiven od životinje se pročišćava od antitijela na druge proteine.
Pacijentova crvena krvna zrnca se ispiru fiziološkom otopinom kako bi se potpuno uklonio serum, koji neutralizira antitijela na imunoglobuline i komplement i može uzrokovati lažno negativan rezultat.
Ako su antitijela ili komponente komplementa fiksirane na površini crvenih krvnih stanica, dodavanje antiglobulina ili antikomplementnog seruma uzrokuje aglutinaciju crvenih krvnih stanica.
Direktni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:
Autoimuna hemoliza.
Hemolitička bolest novorođenčadi.
Imunološka hemolitička anemija izazvana lijekovima.
Hemolitičke transfuzijske reakcije. Indirektni Coombsov test. Indirektni Coombsov test otkriva antitijela na crvena krvna zrnca u serumu. Da bi se to postiglo, pacijentov serum se inkubira sa crvenim krvnim zrncima donora grupe 0, a zatim se izvodi direktan Coombsov test.
Indirektni Coombsov test se koristi u sljedećim slučajevima:
Određivanje individualne kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca.
Detekcija aloantitijela, uključujući antitijela koja uzrokuju hemolitičke transfuzijske reakcije.
Određivanje površinskih eritrocitnih antigena u medicinskoj genetici i sudskoj medicini.
Potvrda identičnih blizanaca tokom transplantacije koštane srži.
Za provođenje biološkog testa krv se počinje transfuzirati što je brže moguće (po mogućnosti u mlazu). Nakon transfuzije 25 ml krvi, sistemska cijev se steže stezaljkom. Zatim sledi pauza od 3 minuta, tokom koje se prati stanje primaoca. Za izvođenje biološkog testa ubrizgava se tri puta po 25 ml krvi. Na kraju testa (nakon transfuzije prvih 75 ml krvi u frakcionim dozama od 25 ml u intervalima od 3 minute), sistem se podešava na potrebnu brzinu transfuzije. Prilikom transfuzije više od jedne boce krvi pacijentu, potrebno je izvaditi iglu iz vene. U tom slučaju, igla se izvadi iz epruvete bočice u kojoj je krv istekla i umetne se u sljedeću bočicu. Sistemska cijev (gumena ili plastična) je u ovom trenutku stegnuta stezaljkom. Ako tokom transfuzije krvi postane neophodno da se primaocu da intravenozno bilo koji drugi lijek, to se radi probijanjem gumene cijevi sistema. Probijanje plastične cijevi je neprihvatljivo, jer ne otpada. Nakon svake transfuzije krvi, pacijent se mora pratiti kako bi se identificirao i brzo eliminirao moguće komplikacije, uključujući alergijske reakcije. 2 sata nakon završetka transfuzije krvi potrebno je izmjeriti tjelesnu temperaturu. Ako se povećava, mjerenje se mora ponavljati svakih sat vremena u naredna 4 sata. Jednako je važno praćenje mokrenja i sastava urina, što omogućava utvrđivanje prisutnosti toksične posttransfuzijske reakcije. Pojava oligurije i anurije nakon transfuzije krvi, prisustvo krvnih zrnaca i proteina u urinu direktan su pokazatelj razvoja posttransfuzijske hemolize.
COMBES REACTION(R. R. A. Coombs, engleski imunolog, rođen 1921; sinonim: Coombsov test, antiglobulinski test) - imunološka reakcija za otkrivanje nepotpunih antitijela na auto- i izoantigene eritrocita.
Reakciju je 1908. razvio S. Moreschi, ali je primljena široka primena tek od 1945. nakon što je Coombs pokazao svoju ulogu u određivanju kompatibilnosti tokom transfuzije krvi, Rh konflikta, dijagnosticiranja autoalergijskih i autoimunih stanja, itd.
Coombsova reakcija temelji se na upotrebi posebno pripremljenog lijeka - antiglobulinskog seruma. U prisustvu antiglobulinskog seruma, crvena krvna zrnca napunjena nepotpunim antitijelima aglutiniraju. Crvena krvna zrnca koja na svojoj površini ne sadrže antitijela ostaju neaglutinirana.
K.r. široko se koristi za: a) utvrđivanje stanja izosenzibilizacije, tj. otkrivanje izoantitijela koja se javljaju tijekom ponovljenih transfuzija krvi (vidi Transfuzija krvi) ili trudnoća (pogledajte Trudnoća); b) provođenje testa kompatibilnosti tokom transfuzije krvi; c) određivanje vrste Rh faktora u eritrocitima (vidi); d) otkrivanje autoimunih antitela na crvenim krvnim zrncima pacijenata sa stečenom hemolitičkom anemijom (videti) i drugim autoalergijskim oboljenjima (videti), kao i kod nekih infekcija koje se javljaju sa alergijskom komponentom; e) otkrivanje izoimunih antitijela fiksiranih na crvenim krvnim zrncima djece oboljele od hemolitičke bolesti novorođenčadi (vidi). K.r. također se koristi u forenzičkim i antropološkim istraživanjima.
Glavni materijal za uprizorenje K. r. su serum ili citratna plazma i crvena krvna zrnca pacijenta. Postoje dvije varijante K. r.: indirektna i direktna. Sa indirektnim K. r. Ispituje se pacijentov serum i određuju slobodno cirkulirajuća antitijela. Sa direktnim K. r. ispitati crvena krvna zrnca na prisustvo antitijela fiksiranih na njima oblikovani elementi krv.
Antiglobulinski serum za K. r. dobijene u laboratoriji za imunizaciju. životinje (zečevi, koze, ovce, itd.) sa globulinima izolovanim iz ljudskog seruma frakcionisanjem sa etanolom, amonijum sulfatom ili gel filtracijom na Sephadexu. Prilikom dobijanja antiglobulinskog seruma potrebno je ukloniti heteroaglutinirajuća antitijela nastala imunizacijom životinja ljudskim globulinima. To se postiže adsorpcijom imunološkog seruma sa mješavinom eritrocita osoba s druga grupa krvi ili razrjeđivanjem izotonične otopine natrijum hlorida. U potonjem slučaju, titar hetero-aglutinina treba da bude nizak (1:16 - 1:32), tako da antiglobulinski serum nakon razblaženja zadrži dobru aktivnost u K. r.
Indirektna Coombsova reakcija
Indirektna Coombsova reakcija se izvodi u dvije faze. Prva faza se izvodi u malim epruvetama posebno dizajniranim za ovu namjenu, dimenzija 4 X 0,5 cm.U svaku epruvetu dodajte jednu kap u tri kapi seruma (cijelog, 1:2 itd.), u kojima je prisutna antitijela se sumnja na sediment eritrocita poznatog antigenskog sastava. Sadržaj epruvete se pomeša i stavi u termostat na t° 37° na 1 sat. Zatim se crvena krvna zrnca isperu tri puta izotoničnom otopinom natrijum hlorida. Druga faza se sastoji od pripreme 5% suspenzije ispranih eritrocita i kombinovanja jedne kapi eritrocita sa jednom kapom antiglobulinskog seruma na bijeloj (porculanskoj) ploči sa navlaženom površinom. Rezultati se uzimaju u obzir do 10 minuta. Izuzetak lažno pozitivni rezultati proizvedeno izvođenjem kontrolnih studija. Upotreba izotonične otopine natrijum hlorida umjesto antiglobulinskog seruma ne bi trebala biti praćena aglutinacijom crvenih krvnih zrnaca. Izvođenje indirektnog K. r. protiv eritrocita poznatog fenotipa izoantigena omogućava utvrđivanje specifičnosti antitijela. Na primjer, studija pacijentovog seruma s crvenim krvnim zrncima 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fya; 0(I), sDe, Kk, Fya; 0(I), cDE, Kk, Fya; 0(I), cde, kk, Fya je pokazala pozitivan rezultat sa uzorkom krvi u slučajevima 1 i 4; drugi uzorci krvi (slučajevi 2, 3, 5) pokazali su negativan rezultat. Serum sadrži anti-E antitela. Uz pomoć indirektnog K. r. mogu se detektovati nepotpuna antitela protiv antigena: C, D, E, c, e; K, k; Fya, Fyb; Lea, Leb; Jka, Jkb, itd. (vidi Krvne grupe).
Direktna Coombsova reakcija
Direktna Coombsova reakcija u svojoj tehnici odgovara drugoj fazi indirektnog K.R.: pacijentova crvena krvna zrnca (5% suspenzija), tri puta isprana izotoničnom otopinom natrijevog klorida, kombiniraju se s antiglobulinskim serumom. Direct K.r. izvodi se kada postoji razlog za vjerovanje da su crvena krvna zrnca pacijenta koji se proučava već senzibilizirana antitijelima in vivo. Pozitivna prava K. r. služi kao dijagnostički znak za hemolitičku bolest novorođenčadi, uzrokovanu senzibilizacijom ženskog organizma na fetalne antigene i prodiranjem antitijela kroz placentu u tijelo djeteta, kao i stečene hemolitičke anemije.
Iza poslednjih godina K.r. značajno poboljšana. Uz njegovu pomoć moguće je ne samo utvrditi prisustvo antitijela na crvenim krvnim zrncima, već i utvrditi klasu imunoglobulina (vidi). Da biste to učinili, koristite serum protiv određenih klasa imunoglobulina: IgG, IgM, IgA. Izoimuna antitela protiv Rhesus, Kell antigena, Duffy antigena i drugih antigena, kao i topla autoimuna antitela, obično se klasifikuju kao IgG. Autoimuna antitela na hladnoću, kao i izoimuna antitela protiv Le i nekih drugih antigena, po pravilu spadaju u IgM. Samo rijetka autoimuna antitijela su IgA prirode (vidjeti Autoantitijela).
Bibliografija: Dygin V.P. Autoimune bolesti u klinici unutrašnjih bolesti, L., 1970, bibliogr. ; Kassirsky I. A. i Alekseev G. A. Klinička hematologija, M., 1970; Kosyakov P. N. Ljudski izoantigeni i izoantitela u zdravlju i bolesti, M., 1974, bibliogr.; Boivin P. e. a. Les anemies hemolytiques, str. 93, str., 1971, bibliogr.; Klinički aspekti imunologije, ur. od P. G. H. Geli a. o., Oksford, 1975; Coombs R. R. A., Mourant A. E. a. Rasa R. R. In-vivo izosenzibilizacija crvenih krvnih zrnaca kod beba s hemolitičkom bolešću, Lancet, v. 1, str. 264, 1946.
Coombsov test je klinička analiza test krvi, koji se radi kako bi se otkrilo da li krv sadrži određena antitijela koja mogu biti nesigurna. Ova antitijela se lijepe za crvena krvna zrnca i mogu napasti imunološki sistem, kao i uzrokovati štetu na druge načine. U medicinskoj terminologiji, ova studija se naziva i antiglobulinski test (AGT).
Vrste Coombsovih uzoraka
Postoje dvije vrste Coombsovih testova - direktni i indirektni.
Direktni Coombsov test, također poznat kao direktni (DAT), otkriva auto-antitijela koja se vezuju za površinu crvenih krvnih zrnaca. Ova antitijela se ponekad stvaraju u tijelu zbog određenih bolesti ili prilikom uzimanja određenih lijekova, kao što su prokainamid, metildopa ili kinidin.
Ova antitijela su opasna jer ponekad uzrokuju anemiju uništavanjem crvenih krvnih stanica.
Ovaj test se ponekad naređuje kako bi se dijagnosticirao uzrok žutice ili anemije.
Normalno, Coombsova reakcija je negativna.
Pozitivno za:
- hemolitička bolest novorođenčadi;
- autoimuna hemoliza;
- hemolitičke transfuzijske reakcije;
- imunohemolitička anemija izazvana lijekovima.
Indirektni Coombsov test, također poznat kao , koristi se za otkrivanje antitijela na crvena krvna zrnca koja se nalaze u krvnom serumu (serum je bistra žuta tekućina krvi koja ostaje nakon što su crvena krvna zrnca i koagulant eliminirani).
Indirektni Coombsov test se koristi tokom transfuzije krvi kako bi se utvrdilo da li krv davaoca odgovara krvi primaoca. Ovo se zove test kompatibilnosti i pomaže u sprečavanju bilo kakve štetne reakcije na krv davaoca. Ova analiza preporučuje se i trudnicama. Neke žene imaju IgG antitijela, koja mogu proći kroz placentu u fetalnu krv i oštetiti novorođenče, uzrokujući hemolitičku bolest poznatu kao hemolitička anemija.
Procedura
Krv se uzima pomoću šprica iz vene, obično sa stražnja strana dlanu ili na pregibu lakta. Prije toga, mjesto uboda se temeljito dezinficira, a nakon uzimanja krvi stavlja se čista gaza ili vata.
Dobivena krv se pročišćava u laboratoriju i crvena krvna zrnca se odvajaju. Uzorak se zatim testira uzastopno upotrebom različitih seruma i Coombsovih reagensa, koji se kontrastiraju. Ako nema aglutinacije (skupljanja crvenih krvnih zrnaca), to znači pozitivan rezultat.
Međutim, ako je test negativan, to znači da u krvi postoje antitijela koja djeluju protiv crvenih krvnih stanica. Ovo može ukazivati razne bolesti, kao što je anemija (i prirodna i uzrokovana uzimanjem lijekova), sifilis ili infekcija mikoplazmama. Nakon dobijanja rezultata, ljekar će propisati odgovarajući tretman.
Video
