Reacciones de aglutinación pasiva. Reacciones de aglutinación indirecta. Reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva (IRHA, RPHA). RNGA inverso. Reacción de inhibición pasiva de la hemaglutinación (PHA).
Estos reacciones son llamados indirecto (pasivo), ya que utilizan Ag (o AT) absorbidos artificialmente en la superficie de diversas partículas corpusculares.
Reacción de hemaglutinación indirecta o pasiva. (RNGA, RPGA) es una de las reacciones serológicas más sensibles. Se basa en la capacidad de la AT para interactuar con Ag fijado en varios glóbulos rojos, que luego se aglutinan. Para una mayor estabilidad de los diagnósticos, los glóbulos rojos se formalinizan.
RNGA inverso utilizado para detectar Ag en suero sanguíneo; Para ello, no se fijan Ag, sino AT en los eritrocitos. Las reacciones de este tipo se utilizan ampliamente para diagnosticar enfermedades infecciosas, establecer el embarazo, detectar hipersensibilidad a medicamentos, etc.
Respuesta de frenado hemaglutinación pasiva (RTPGA) - mayor desarrollo RNGA; en cierto sentido controla su especificidad. A diferencia de RNGA, incluye tres componentes; Ag, AT y Ag (AT) adsorbidos en los eritrocitos. Inicialmente, Ag reacciona con AT (antisuero estándar), luego se agregan a la mezcla eritrocitos sensibilizados con el mismo Ag (o AT). Si, durante la interacción de Ag con AT, no queda AT (o Ag) libre en el sistema, entonces no se observa aglutinación del diagnóstico de eritrocitos.
Utiliza glóbulos rojos o neutros. materiales sintéticos(por ejemplo, partículas de látex), en cuya superficie se absorben antígenos (bacterianos, virales, tisulares) o anticuerpos. Su aglutinación se produce cuando se añaden sueros o antígenos adecuados. Los glóbulos rojos sensibilizados con antígenos se denominan eritrocitos diagnósticos antigénicos y se utilizan para detectar y valorar anticuerpos. Eritrocitos sensibilizados con anticuerpos. se denominan inmunoglobulinas diagnósticas de eritrocitos y se utilizan para identificar antígenos.
La reacción de hemaglutinación pasiva se utiliza para diagnosticar enfermedades causadas por bacterias ( fiebre tifoidea y paratifoidea, disentería, brucelosis, peste, cólera, etc.), protozoos (malaria) y virus (influenza, infecciones adenovirales, hepatitis viral B, sarampión, encefalitis transmitida por garrapatas, Fiebre hemorrágica de Crimea, etc.), además de determinar ciertas hormonas, identificar la mayor sensibilidad del paciente a medicamentos y hormonas como la penicilina y la insulina.
Reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). La prueba de hemaglutinación pasiva es un método sensible diagnóstico serológico y se utiliza tanto para el diagnóstico temprano como retrospectivo, así como para determinar el estado inmunológico de las personas vacunadas. En pacientes con tularemia, los anticuerpos generalmente se detectan al final de la primera o segunda semana de la enfermedad, después de 1 a 1,5 meses, los títulos de RPHA alcanzan; rendimiento máximo(1:100000-1:20000, rara vez más), después de lo cual disminuyen y permanecen durante mucho tiempo en el nivel 1:100-1:200.
En las personas vacunadas, los anticuerpos también se detectan constantemente, aunque en títulos más bajos, que no superan 1:2000-1:5000 entre 1 y 1,5 meses después de la vacunación, y permanecen durante varios años en un nivel bajo de 1:20-1:80.
El antígeno para la estadificación de la RPHA es el diagnóstico de eritrocitos de tularemia (antigénico). El fármaco son glóbulos rojos de oveja formalinizados, sensibilizados con antígeno de tularemia, disponibles en forma líquida y seca. Preparación líquida: una suspensión al 10% de glóbulos rojos en una solución de formaldehído al 10% de concentración. La preparación liofilizada seca es una suspensión al 10% de glóbulos rojos secada al vacío sin conservante. Antes de su uso, se diluye según las instrucciones de la etiqueta. Para preparar la reacción en placas de poliestireno, ambos fármacos se utilizan en una concentración del 2,5% y, cuando se prepara la reacción en microvolúmenes, en una concentración del 0,5%.
Técnica de instalación de RPGA. Los sueros problema se diluyen con solución fisiológica 1:5 (1:10) y se calientan a 56 grados C durante 30 minutos. Después de esto, para eliminar los anticuerpos heterogéneos contra los eritrocitos de oveja, los sueros se tratan con una suspensión al 50% de eritrocitos de oveja formalinizados. Para ello, agregue glóbulos rojos a razón de 2 gotas (0,05 ml) por 1 ml de suero y mezcle bien agitando. El suero se deja hasta que los eritrocitos se hayan asentado por completo o se centrifuga después de una hora a temperatura ambiente, después de lo cual está listo para el examen.
El líquido de dilución se vierte en un volumen de 0,5 ml en una fila de pocillos sobre una placa de poliestireno. Durante el estudio preliminar de los sueros, es aconsejable probarlos estableciendo la reacción en una fila corta de la placa (6 pocillos). Si se detectan anticuerpos en una serie corta, los sueros se vuelven a analizar en una serie larga de diluciones (12 pocillos). Después de derramar el líquido de dilución, agregue 0,5 ml de suero problema en una dilución 1:5 al primer pocillo de cada fila (corta o larga). Luego se titulan los mismos volúmenes de suero con diluciones dobles. Así, se obtienen diluciones de suero en la serie corta de 1:10 a 1:320, y en la serie larga de 1:10 a 1:20480. Después de la titulación de los sueros, se añade a cada pocillo una gota (0,05 ml) de una suspensión de trabajo al 2,5% de eritrocitos sensibilizados. El contenido de las placas se agita vigorosamente hasta obtener una suspensión homogénea. Los platos se dejan a temperatura ambiente sobre una superficie de mesa estacionaria. El registro preliminar de la reacción se lleva a cabo después de 2-3 horas, la determinación final del título se realiza después de la sedimentación completa de los glóbulos rojos en los pocillos. Se proporcionan los siguientes controles para la reacción: 1) suero problema diluido 1:10 en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión al 2,5% de eritrocitos no sensibilizados; 2) líquido de dilución en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión al 2,5% de eritrocitos no sensibilizados; 3) líquido de dilución en un volumen de 0,5 ml + 1 gota de una suspensión de eritrocitos sensibilizados al 2,5%. Todos los controles deberían dar una reacción claramente negativa.
Contabilidad y valoración de RPGA. La reacción se evalúa mediante siguiente diagrama:
1) bruscamente reacción positiva(++++) - los glóbulos rojos caen al fondo del agujero en una capa uniforme en forma de "paraguas", que a menudo tiene bordes festoneados;
2) reacción positiva (+++): los glóbulos rojos cubren al menos 2/3 del fondo del pocillo;
3) reacción débilmente positiva (++): el aglutinado es pequeño y está ubicado en el centro del pozo;
4) reacción cuestionable (+): alrededor del sedimento de eritrocitos en el centro del pozo hay granos individuales de aglutinado;
5) negativo (-): en el fondo del orificio, los glóbulos rojos se depositan en forma de un "botón" o un pequeño anillo con bordes lisos y bien definidos.
El título del suero se tiene en cuenta en función de la última dilución del suero, que dio una reacción muy clara (al menos tres ventajas). Una dilución de 1:100 o superior se considera un título diagnóstico, sin embargo, al igual que en el caso de la AR, es necesario controlar su aumento;
La RPGA para la tularemia es bastante específica y detecta algunos reacciones cruzadas sólo con sueros de brucelosis. Diagnóstico diferencial posible por la altura de los títulos en RPGA, que son significativamente más altos con el antígeno homólogo.
Técnica de configuración de RPHA en microvolúmenes. La RPGA se puede realizar en microvolúmenes utilizando un microtitulador tipo Takachi (o microplacas de fondo redondo con micropipetas), que permite la titulación del material en volúmenes de 25 μl y 50 μl. La técnica de reacción y la secuencia de todas las operaciones son las mismas que cuando se estudia en placas de poliestireno. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que la sensibilidad del micrométodo suele ser una dilución (es decir, 2 veces) menor que la del macrométodo.
Para preparar la reacción en un microtitrador, se añade a cada pocillo un líquido de dilución en un volumen de 50 µl utilizando una pipeta cuentagotas. Luego, utilizando valoradores con un cabezal de 50 µl, se recoge el suero problema sumergiendo el cabezal en él. Asegúrese de que el líquido haya llenado el cabezal del titulador. El titulador con suero se transfiere al primer pocillo y, manteniéndolo en posición vertical, haz varios movimientos rotacionales ida y vuelta. Luego se transfiere el valorador al siguiente pocillo y se repite la manipulación. La titulación se puede realizar simultáneamente en varias filas. Después de titular toda la serie, el valorador se lava con agua destilada (cambiando 2 porciones) mediante movimientos giratorios, se retira el agua del cabezal con un hisopo y se quema sobre la llama de un mechero.
Después de la titulación, agregue 25 µl de líquido de diagnóstico de eritrocitos a los pocillos. La concentración de diagnóstico para RPHA en microvolúmenes debe ser del 0,5% (es decir, una suspensión de glóbulos rojos al 2,5% se diluye adicionalmente 5 veces). Después de añadir los glóbulos rojos, las placas se deben agitar ligeramente hasta obtener una suspensión homogénea. Los resultados se pueden registrar en 1 a 1,5 horas, lo cual es una ventaja significativa de RPGA en una microtitulación. Además, esta técnica requiere pequeñas cantidades de todos los ingredientes de la reacción y sueros de prueba.
La reacción se tiene en cuenta según el siguiente esquema:
1) “+” – hemaglutinación completa, en la que los glóbulos rojos caen al fondo del pocillo en una capa uniforme en forma de “paraguas”, ocupando al menos 2/3 del fondo;
2) “+-“ - hemaglutinación parcial, en la que los glóbulos rojos caen al fondo en forma de un anillo suelto de tamaño pequeño;
3) “-“ – ausencia de hemaglutinación, cuando los glóbulos rojos caen al fondo en forma de un pequeño botón o anillo con un borde liso.
La especificidad de un resultado positivo obtenido en RPHA se puede comprobar mediante una reacción de tres componentes: la reacción de inhibición pasiva de la hemaglutinación (PHA).
Técnica para configurar RTPGA. Esta reacción se utiliza para confirmar la especificidad de un resultado positivo de RPGA cuando está en duda o es de particular interés epidemiológico. El mecanismo de reacción consiste en la inhibición específica de la hemaglutinación cuando se añade al suero problema una suspensión de bacterias de tularemia muertas. En la reacción interactúan tres componentes: el suero problema, el antígeno de tularemia específico y el diagnóstico antigénico de eritrocitos. RTPHA generalmente se coloca en una fila de 7-8 pocillos. Es recomendable instalar un RPGA repetido en paralelo con el RTPGA. Se vierten 0,25 ml de líquido de dilución en dos filas de pocillos, luego se agrega el suero problema en un volumen de 0,25 ml a los primeros pocillos de ambas filas y se realizan dos filas idénticas de diluciones de suero. Agregue 0,25 ml de líquido de dilución a todos los pocillos de la segunda fila y 0,25 ml de una suspensión de bacterias de tularemia a los pocillos de la primera fila. Se utiliza Tularemia diagnosticum (que contiene 25 mil millones de bacterias de tularemia en 1 ml), previamente diluida 50 veces. Esta suspensión contiene 500 millones de bacterias en 1 ml o 125 millones en un volumen de 0,25 ml. Después de agregar el antígeno, la placa se deja durante 1 hora a temperatura ambiente, después de lo cual se agrega una gota (0,05 ml) de eritrocitos diagnosticum a todos los pocillos de ambas filas, la placa se agita y se deja sobre una superficie plana de la mesa. La contabilidad se realiza después de 2-3 horas.
Contabilidad y valoración de RTPGA. Si el suero de prueba contiene anticuerpos específicos de tularemia, estos son neutralizados por el antígeno agregado y no se producirá hemaglutinación en la primera fila de pocillos o, con un título sérico alto, se observará hemaglutinación en un número menor (2-4) de pocillos. pozos que en la fila con RPHA. En este caso, se confirmó la especificidad de los resultados. Si se observa hemaglutinación en ambas filas, es decir Si los resultados de RTPGA y RPGA coinciden, esto indica la ausencia de anticuerpos de tularemia en el suero problema. En este caso, el resultado primario de RPGA se considera inespecífico.
Técnica de estadificación de RTHG en microvolúmenes. RTPGA, al igual que RPGA, se puede realizar en microvolúmenes utilizando una microtitulación tipo Takachi. Para ello, añadir 0,25 μl de líquido diluyente en los pocillos de las microplacas en dos filas de 7-8 pocillos cada una. Luego, utilizando un titulador, se añaden 0,25 µl del suero problema y se titula en ambas filas. Después de esto, se añaden 25 µl de antígeno de tularemia (cuya concentración es de 500 millones de bacterias de tularemia en 1 ml) a cada pocillo de la primera fila y 25 µl de líquido de dilución a la segunda fila. Las placas se dejan durante 1 hora a temperatura ambiente, después de lo cual se añaden 25 µl de diagnóstico zritrocítico antigénico (concentración del 0,5%) a todos los pocillos de ambas filas. La contabilidad y evaluación de los resultados se llevan a cabo de manera similar a las reacciones en macrovolúmenes.
Reacción de hemaglutinación pasiva) un método de detección e identificación de antígenos o anticuerpos, basado en el fenómeno de aglutinación de los glóbulos rojos que se produce en su presencia, en cuya superficie se han adsorbido previamente los correspondientes antígenos o específicos.
1. Pequeña enciclopedia médica. - M.: Enciclopedia médica. 1991-96 2. primero cuidado de la salud. - M.: Gran Enciclopedia Rusa. 1994 3. Diccionario enciclopédico términos médicos. - M.: enciclopedia soviética. - 1982-1984.
Vea qué es "Reacción de hemaglutinación indirecta" en otros diccionarios:
reacción de hemaglutinación indirecta- RNGA Prueba de laboratorio utilizando diagnóstico de eritrocitos. [Glosario inglés-ruso de términos básicos en vacunología e inmunización. Organización Mundial de la Salud, 2009] Temas vacunología, inmunización Sinónimos RNGA EN... ... Guía del traductor técnico
- (RNHA; sinónimo de reacción de hemaglutinación pasiva) un método para la detección e identificación de antígenos o anticuerpos, basado en el fenómeno de aglutinación de los eritrocitos que se produce en su presencia, en cuya superficie fueron previamente adsorbidos..... . Gran diccionario médico
- (RPHA) ver Reacción de hemaglutinación indirecta... Gran diccionario médico
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Ver Reacción de hemaglutinación indirecta... Gran diccionario médico
La reacción está dada:
1) para la detección de polisacáridos, proteínas, extractos bacterianos y otras sustancias altamente dispersas, rickettsias y virus, cuyos complejos con aglutininas no se pueden detectar en los AR convencionales,
2) detectar anticuerpos en el suero de pacientes contra estas sustancias altamente dispersas y pequeños microorganismos.
Se entiende por aglutinación indirecta o pasiva una reacción en la que los anticuerpos interactúan con antígenos preadsorbidos en partículas inertes (látex, celulosa, poliestireno, óxido de bario, etc. o eritrocitos de oveja, I (0) - grupo sanguíneo humano)
En la reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA), las células rojas de la sangre. Los glóbulos rojos cargados de antígeno se unen en presencia de anticuerpos específicos contra este antígeno y precipitan. Los eritrocitos sensibilizados a antígenos se utilizan en RPGA como diagnóstico de eritrocitos para la detección de anticuerpos (serodiagnóstico). Si los glóbulos rojos están cargados de anticuerpos (diagnóstico de anticuerpos eritrocitarios), se pueden utilizar para detectar antígenos.
Arroz. 3. Esquema RPGA: los glóbulos rojos (1), cargados de antígeno (3), están unidos por anticuerpos específicos (4).
Puesta en escena. Se preparan una serie de diluciones seriadas de suero en los pocillos de placas de poliestireno. Añadir 0,5 ml de suero obviamente positivo al penúltimo pocillo y 0,5 ml de solución fisiológica (controles) al último pocillo. Luego se añaden 0,1 ml de eritrocitos diagnosticum diluidos a todos los pocillos, se agitan y se colocan en un termostato durante 2 horas.
Contabilidad. EN caso positivo Los eritrocitos se depositan en el fondo del agujero en forma de una capa uniforme de células con un borde doblado o dentado (paraguas invertido), en negativo, se depositan en forma de botón o anillo.
Fig.4. Contabilidad de RNGA (RPGA).
Contabilización de los resultados de una prueba de rayos X realizada para detectar la toxina botulínica.
El agente causante del botulismo, Clostridium botulinum, produce toxinas de siete serovares (A, B, C, D, E, F, G), pero los serovares A, B, E son los más comunes. Todas las toxinas difieren en sus propiedades antigénicas y pueden diferenciarse. en reacciones que utilizan sueros de tipo específico. Para ello, se puede realizar una reacción de hemaglutinación pasiva (indirecta) con el suero del paciente, en la que se supone la presencia de toxina, y glóbulos rojos cargados con anticuerpos de sueros antitóxicos antibotulínicos de tipos A, B, E. Normal el suero sirve como control.
Arroz. 3. Declaración y resultado de RNGA.
Contabilidad. En el caso positivo, los glóbulos rojos se depositan en el fondo del orificio en forma de una capa uniforme de células con un borde doblado o dentado (paraguas invertido; en el caso negativo, se depositan en forma de botón o anillo); .
Conclusión: Se detectó toxina botulínica tipo E en el suero del paciente.
Reacción de inhibición de la hemaglutinación (TRH).
Arroz. 8. Reacción de inhibición de la hemaglutinación (HAI) (esquema).
El principio de la reacción se basa en la capacidad de AT para unirse a varios virus y neutralizarlos, imposibilitando la aglutinación de los glóbulos rojos. Visualmente, este efecto se manifiesta en la "inhibición" de la hemaglutinación. RTGA se utiliza en el diagnóstico de infecciones virales para identificar antihemaglutininas específicas e identificar varios virus por sus hemaglutininas, que exhiben las propiedades de Ag.
La tipificación del virus se lleva a cabo en una reacción RTGA con un conjunto de sueros de tipo específico. Los resultados de la reacción se tienen en cuenta por la ausencia de hemaglutinación. Los subtipos de virus tipo A con antígenos H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 y otros se pueden diferenciar en RTGA con un conjunto de sueros homólogos de tipo específico.
Arroz. 9. Resultados RTGA para la tipificación del virus de la influenza
Leyenda: - inhibición de la hemaglutinación (botón); - hemaglutinación (paraguas).
Conclusiones: El material en estudio contiene virus de influenza tipo A con el antígeno H3N2.
La reacción de hemaglutinación indirecta (pasiva) (IRHA) se basa en el hecho de que los glóbulos rojos, si se adsorbe un antígeno soluble en su superficie, adquieren la capacidad de aglutinarse al interactuar con anticuerpos contra el antígeno adsorbido. El diagrama RNGA se muestra en la Fig. 34. La RNGA se utiliza ampliamente en el diagnóstico de diversas infecciones.
Arroz. 34. Esquema de la reacción de hemaglutinación pasiva (RPHA). A - obtención de un diagnóstico de eritrocitos: B - RPGA: 1 - eritrocitos: 2 - antígeno en estudio; 3 - diagnóstico de eritrocitos; 4 - anticuerpo contra el antígeno en estudio: 5 - aglutinar
Preparando una reacción. El suero problema se calienta durante 30 minutos a 56° C, se diluye secuencialmente en una proporción de 1:10 - 1:1280 y se vierte en 0,25 ml en tubos de ensayo o pocillos, donde se colocan 2 gotas de eritrocitos diagnosticum (eritrocitos con antígeno adsorbido en ellos). ) luego se agregan.
Controles: una suspensión de eritrocitos diagnosticum con suero inmune conocido; suspensión del diagnóstico con suero normal; una suspensión de glóbulos rojos normales con suero problema. En el primer control debería producirse aglutinación, en el segundo y tercero no debería producirse.
Con RIGA, puede detectar un antígeno desconocido si los anticuerpos conocidos se adsorben en los glóbulos rojos.
La reacción de hemaglutinación se puede realizar en un volumen de 0,025 ml (micrométodo) utilizando un microvalorador Takachi.
1. ¿Qué indica? resultado positivo¿RGA entre los glóbulos rojos y el material que se está analizando para detectar la presencia del virus?
2. ¿Se producirá aglutinación de los glóbulos rojos si se les añade un virus y su correspondiente suero? ¿Cómo se llama la reacción que revela este fenómeno?
Ejercicio
Tener en cuenta y registrar el resultado RIGA.
Reacción de precipitación
En la reacción de precipitación se precipita un complejo inmune específico, formado por un antígeno soluble (lisado, extracto, hapteno) y un anticuerpo específico en presencia de electrolitos.
El anillo turbio o precipitado formado como resultado de esta reacción se llama precipitado. Esta reacción se diferencia principalmente de la reacción de aglutinación en el tamaño de las partículas de antígeno.
La reacción de precipitación se suele utilizar para determinar el antígeno en el diagnóstico de varias infecciones ( ántrax, meningitis, etc.); en medicina forense: para determinar el tipo de sangre, esperma, etc.; en estudios sanitarios e higiénicos, al establecer falsificación de productos; con su ayuda se determina la relación filogenética de animales y plantas. Para la reacción necesitas:
1. Anticuerpos (precipitinas): suero inmunológico con título alto anticuerpos (no inferior a 1:100000). El título del suero precipitante está determinado por la dilución más alta del antígeno con el que reacciona. El suero se suele utilizar sin diluir o en una dilución de 1:5 - 1:10.
2. Antígeno: sustancias disueltas de naturaleza proteica o polisacárida lipoide (antígenos completos y haptenos).
3. Solución isotónica.
Los principales métodos para llevar a cabo la reacción de precipitación son: reacción de precipitación en anillo y reacción de precipitación en agar (gel).
¡Atención! Todos los componentes involucrados en la reacción de precipitación deben ser completamente transparentes.
Reacción de precipitación en anillo. Con una pipeta Pasteur, agregue 0,2-0,3 ml (5-6 gotas) de suero al tubo de precipitación (el suero no debe tocar las paredes del tubo). El antígeno en el mismo volumen se coloca cuidadosamente sobre el suero, vertiéndolo con una pipeta Pasteur delgada a lo largo de la pared del tubo de ensayo. El tubo de ensayo se mantiene en posición inclinada. Cuando se colocan en capas correctamente, debe haber un límite claro entre el suero y el antígeno. Con cuidado, para no mezclar el líquido, coloque el tubo de ensayo en un soporte. Si la reacción es positiva, se forma un "anillo" turbio en la interfaz del antígeno y el anticuerpo: un precipitado (ver Fig. 48).
La reacción va acompañada de varios controles (Tabla 18). La secuencia de adición de los ingredientes de la reacción al tubo de ensayo es muy importante. No se pueden colocar capas de suero sobre el antígeno (en el control, sobre una solución isotónica), ya que la densidad relativa del suero es mayor, se hundirá hasta el fondo del tubo de ensayo y no se revelará el límite entre los líquidos.
Tabla 18. Esquema para configurar la reacción de precipitación del anillo.
Nota. + presencia de un “anillo”; - ausencia de un “anillo”.
Los resultados se registran al cabo de 5-30 minutos, en algunos casos al cabo de una hora, como siempre empezando por los controles. El "anillo" en el segundo tubo de ensayo indica la capacidad del suero inmune para entrar en reacción específica con el antígeno correspondiente. En los 3-5 tubos de ensayo no debe haber "anillos"; no hay anticuerpos ni antígenos que se correspondan entre sí. Un "anillo" en el primer tubo (un resultado de reacción positivo) indica que el antígeno de prueba corresponde al suero inmune tomado, la ausencia de un "anillo" (un "anillo" solo en el segundo tubo) indica su inconsistencia: un resultado negativo resultado de la reacción.
Reacción de precipitación en agar (gel). La peculiaridad de la reacción es que la interacción del antígeno y el anticuerpo se produce en un medio denso, es decir, en un gel. El precipitado resultante da una veta turbia en el espesor del medio. La ausencia de una banda indica una discrepancia entre los componentes de la reacción. Esta reacción se utiliza ampliamente en la investigación biomédica, en particular en el estudio de la formación de toxinas en el agente causante de la difteria.
Preguntas de control
1. ¿Cuál es la principal diferencia entre reacciones de aglutinación y precipitación?
2. ¿Por qué no se pueden utilizar ingredientes turbios en la reacción de precipitación?
Ejercicio
1. Configure la reacción de precipitación del anillo y dibuje el resultado.
2. Estudie la naturaleza de la interacción del antígeno con el anticuerpo en la reacción de precipitación en agar, dibuje el resultado (pida una taza a su profesor).
Reacción de lisis (citólisis inmune)
La lisis inmune es la disolución de células bajo la influencia de anticuerpos cuando participación obligatoria complementar. Para la reacción necesitas:
1. Antígeno: microbios, glóbulos rojos u otras células.
2. Anticuerpo (lisina): suero inmunológico, con menos frecuencia suero del paciente. El suero bacteriolítico contiene anticuerpos implicados en la lisis de bacterias; hemolítico: hemolisinas que promueven la lisis de los glóbulos rojos; para la lisis de espiroquetas, se necesitan espiroquetalisinas, células, itolisinas, etc.
3. Complemento. La mayor parte del complemento en suero. conejillos de indias. Este suero (una mezcla de varios animales) se suele utilizar como complemento. El complemento fresco (nativo) es inestable y se destruye fácilmente al calentarlo, agitarlo o almacenarlo, por lo que no puede usarse más de dos días después de recibirlo. Para conservar el complemento se le añade un 2%. ácido bórico y 3% de sulfato de sodio. Este complemento se puede conservar a 4°C hasta por dos semanas. El complemento seco se utiliza con mayor frecuencia. Antes de su uso, se disuelve en una solución isotónica hasta el volumen original (indicado en la etiqueta).
4. Solución isotónica.
Reacción de hemólisis(Tabla 19). Para la reacción necesitas:
1. Antígeno: suspensión al 3% de eritrocitos de oveja lavados a razón de 0,3 ml de sedimento de eritrocitos y 9,7 ml de solución isotónica.
2. Anticuerpo: suero hemolítico (hemolisina) contra eritrocitos de oveja; generalmente preparado en producción, liofilizado y con el título indicado en la etiqueta.
El título de hemolisina es la dilución más alta de suero en la que se produce la hemólisis completa de una suspensión de glóbulos rojos al 3% en presencia de complemento. Para la reacción de hemólisis, la hemolisina se toma en título triple, es decir, se diluye 3 veces menos que antes del título. Por ejemplo, con un título de suero de 1:1200, el suero se diluye 1:400 (0,1 ml de suero* y 39,9 ml de solución isotónica). Es necesario un exceso de hemolisina, ya que una parte puede ser absorbida por otros componentes de la reacción.
* (No debe tomar menos de 0,1 ml de suero; la precisión de la medición se verá afectada.)
3. El complemento se diluye 1:10 (0,2 ml de complemento y 1,8 ml de solución isotónica).
4. Solución isotónica.
Tabla 19. Esquema de reacción de hemólisis
Contabilidad de resultados. Si la reacción se lleva a cabo correctamente, se producirá hemólisis en el primer tubo de ensayo y su contenido se volverá transparente. En los controles el líquido permanece turbio: en el 2º tubo no hay suficiente complemento para que se produzca la hemólisis, en el 3º tubo no hay hemolisina, en el 4º tubo no hay hemolisina ni complemento, en el 5º tubo el antígeno sí no coincide con el anticuerpo,
Si es necesario, el suero hemolítico se titula según el siguiente esquema (Tabla 20).
Antes de la titulación, preparar una dilución de suero inicial de 1:100 (0,1 ml de suero y 9,9 ml de solución isotónica), a partir de la cual diluciones necesarias, Por ejemplo:
De estas diluciones, agregue 0,5 ml de suero a los tubos de ensayo de titulación, como se muestra en la tabla. 20.
Tabla 20. Esquema de titulación de suero hemolítico (hemolisina)
En el ejemplo dado en la tabla. 20, el título de suero hemolítico es 1:1200.
Cuando se utiliza suero hemolítico fresco, se debe inactivar para destruir el complemento presente en él. Para ello se calienta durante 30 minutos a 56 ° C al baño maría o en un inactivador con termostato. El último método es mejor: elimina la posibilidad de sobrecalentar el suero, es decir, su desnaturalización. Los sueros desnaturalizados no son aptos para realizar pruebas.
Reacción de bacteriólisis. En esta reacción, el complemento lisa las bacterias en presencia de suero apropiado (homólogo). El esquema de reacción es fundamentalmente similar al esquema de reacción de hemólisis. La diferencia es que después de una incubación de dos horas, todos los tubos de ensayo se siembran en placas de Petri con un medio favorable para el microorganismo introducido en el experimento para saber si está lisado. Si el experimento se realiza correctamente, los cultivos de 2 a 5 tubos de ensayo (controles) deberían mostrar un crecimiento abundante. La falta de crecimiento o el crecimiento débil en la inoculación del primer tubo de ensayo (experimento) indica la muerte de los microbios, es decir, que son homólogos al anticuerpo.
¡Atención! La reacción de bacteriólisis debe realizarse en condiciones asépticas.
Preguntas de control
1. ¿Qué pasará con los glóbulos rojos si se usa agua destilada en lugar de una solución isotónica de cloruro de sodio? ¿Cuál es la base de este fenómeno?
2. ¿Qué reacción ocurrirá cuando los eritrocitos interactúen con el suero inmune homólogo en ausencia de complemento?
Ejercicio
Configure la reacción de hemólisis. Registre y dibuje el resultado.
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