नैदानिक ​​एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया. व्याख्यान: एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (अक्षांश से. agglutinatio- ग्लूइंग) - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी द्वारा कणिकाओं (बैक्टीरिया, लाल रक्त कोशिकाओं, आदि) का ग्लूइंग।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियास्वयं को कणों या तलछट के रूप में प्रकट करता है जिसमें कणिकाएं (उदाहरण के लिए, बैक्टीरिया) एंटीबॉडी द्वारा "एक साथ चिपकी हुई" होती हैं (चित्र 7.37)। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग निम्न के लिए किया जाता है: रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण करना; रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण; रक्त समूह का निर्धारण.

चावल। 7.37 ए, बी. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के साथआईजीएम-एंटीबॉडीज (ए) औरआईजीजी-एंटीबॉडीज (बी)

1. रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण अनुमानित प्रतिक्रियाकांच पर एग्लूटिनेशन (चित्र 7.38)। रोगी से पृथक बैक्टीरिया का एक निलंबन एग्लूटीनेटिंग सीरम (1:20 कमजोर पड़ने) की एक बूंद में जोड़ा जाता है। एक फ़्लोकुलेंट अवक्षेप बनता है।

चावल। 7.38.

एक रोगी से पृथक रोगज़नक़ के साथ एक व्यापक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (चित्र 7.39)। रोगी से पृथक बैक्टीरिया का एक निलंबन एग्लूटीनेटिंग सीरम के तनुकरण में जोड़ा जाता है।

चावल। 52

2. रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण
रोगी के रक्त सीरम के साथ विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (चित्र 7.39)। डायग्नोस्टिकम को रोगी के सीरम के तनुकरण में मिलाया जाता है।
- ओ-डायग्नोस्टिकम (गर्मी से मारे गए बैक्टीरिया, ओ-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन महीन दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होता है।
- एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन बड़ा होता है और तेजी से होता है।
3. रक्त समूहों के निर्धारण के लिए एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियारक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त समूह एंटीजन ए (आई), बी (III) के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का उपयोग करके एबीओ सिस्टम (तालिका बी) स्थापित करने के लिए किया जाता है। नियंत्रण है: सीरम जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, यानी। सीरम एबी (IV) रक्त समूह; समूह ए (II), बी (III) की लाल रक्त कोशिकाओं में निहित एंटीजन। नकारात्मक नियंत्रण में एंटीजन नहीं होते हैं, अर्थात, समूह O (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है।

तालिका 7.6. ABO रक्त समूह का निर्धारण

प्रतिक्रिया परिणाम		समूह
		संबंधित नहीं
		शोध खून
लाल रक्त कोशिकाओं के साथ	सीरम (प्लाज्मा)
मानक	मानक के साथ
सीरम

विषय की सामग्री की तालिका "इम्युनोमोड्यूलेटर। संक्रामक रोगों का इम्यूनोडायग्नोसिस।":

विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए). रोगी के रक्त सीरम में एटी निर्धारित करने के लिए, a व्यापक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए). ऐसा करने के लिए, रक्त सीरम के तनुकरण की एक श्रृंखला में एक डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है - मारे गए सूक्ष्मजीवों या सोर्बड एजी के कणों का एक निलंबन। अधिकतम तनुकरण दे रहा है भागों का जुड़ना Ag को सीरम टिटर कहा जाता है।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के प्रकार (आरए) एटी का पता लगाने के लिए - टुलारेमिया के लिए एक रक्त-बूंद परीक्षण (रक्त की एक बूंद पर लगाए गए डायग्नोस्टिकम और दृश्यमान सफेद एग्लूटीनेट्स की उपस्थिति के साथ) और ब्रुसेलोसिस के लिए हडलसन परीक्षण (रक्त की एक बूंद पर लगाए गए जेंटियन वायलेट के दाग वाले डायग्नोस्टिकम के साथ) सीरम)।

अनुमानित एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)

पृथक सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के लिए, कांच की स्लाइडों पर एक अनुमानित आरए रखा जाता है। ऐसा करने के लिए, एक रोगज़नक़ संस्कृति को मानक डायग्नोस्टिक एंटीसेरम (पतला 1:10, 1:20) की एक बूंद में जोड़ा जाता है। पर सकारात्मक परिणामएंटीसीरम के बढ़ते तनुकरण के साथ एक विस्तृत प्रतिक्रिया करें।

प्रतिक्रियायदि डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब तनुकरण में एग्लूटिनेशन देखा जाता है तो इसे सकारात्मक माना जाता है।

ओएएस. दैहिक O-एजीगर्मी स्थिर हैं और 2 घंटे तक उबलने का सामना कर सकते हैं। एटी के साथ बातचीत करते समय, वे बारीक दाने वाले समुच्चय बनाते हैं।

एन-एजी. एन-एजी (फ्लैगलेट्स)थर्मोलैबाइल होते हैं और 100 डिग्री सेल्सियस पर, साथ ही इथेनॉल के प्रभाव में जल्दी से नष्ट हो जाते हैं। एच-एंटीसेरम के साथ प्रतिक्रियाओं में, ऊष्मायन के 2 घंटे बाद, ढीले बड़े गुच्छे बनते हैं (फ्लैगेला के साथ बैक्टीरिया के चिपकने से बनते हैं)।

वी-आरटाइफाइड बैक्टीरिया अपेक्षाकृत गर्मी प्रतिरोधी है (2 घंटे के लिए 60-62 डिग्री सेल्सियस के तापमान का सामना करता है); जब वीआई एंटीसीरम के साथ ऊष्मायन किया जाता है, तो एक महीन दाने वाला एग्लूटीनेट बनता है।

प्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रियाएं

इनमें से सबसे सरल प्रतिक्रिया - भागों का जुड़नालाल रक्त कोशिकाएं, या हेमग्लूटीनेशन, का उपयोग एबीओ प्रणाली में रक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। निर्धारण हेतु भागों का जुड़ना(या इसकी कमी) एंटी-ए और एंटी-बी एग्लूटीनिन के साथ मानक एंटीसेरा का उपयोग करें। प्रतिक्रिया को प्रत्यक्ष कहा जाता है, क्योंकि अध्ययन किए जा रहे एजी लाल रक्त कोशिकाओं के प्राकृतिक घटक हैं।

के साथ समान प्रत्यक्ष रक्तगुल्मवायरल हेमग्लूटिनेशन में तंत्र होते हैं। कई वायरस पक्षियों और स्तनधारियों के एरिथ्रोसाइट्स को स्वचालित रूप से एकत्रित करने में सक्षम होते हैं; एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन में उनके शामिल होने से उनमें समुच्चय का निर्माण होता है।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

(आरए)-पहचानने की एक विधि और मात्रा का ठहरावएजी और एट, नग्न आंखों को दिखाई देने वाले समूह बनाने की उनकी क्षमता के आधार पर। संक्रामक रोग विभाग में. बीमारियों या अन्य उद्देश्यों के लिए अज्ञात रोगाणुओं और कोशिकाओं की पहचान करने, रक्त और अन्य तरल पदार्थों में एब की उपस्थिति और मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। निर्धारण सिद्धांत एजी और एब के बीच बातचीत की विशिष्टता पर आधारित है और इसमें अज्ञात से ज्ञात का पता लगाना शामिल है। आरए के लिए कई विकल्प हैं: मात्रात्मक और गुणात्मक, टेस्ट ट्यूब और ग्लास, वॉल्यूमेट्रिक और ड्रॉपलेट, पारंपरिक, त्वरित और एक्सप्रेस विधियां। आरए के चरण के लिए आपको चाहिए: 1) एस-का खून.बैक्टीरिया के प्रकार (var) को निर्धारित करने के संस्करण में, खरगोशों के टीकाकरण द्वारा उत्पादित औद्योगिक एग्लूटीनेटिंग परीक्षणों का उपयोग किया जाता है। एबी के प्रकार के निर्धारण वाले संस्करण में, परीक्षण से रक्त का नमूना लिया जाता है। लोग या जानवर. समाधान निष्फल और निलंबित कणों से मुक्त होना चाहिए। खारे घोल में मूल तनुकरण तैयार करें। यह इस रोग के निदान अनुमापांक से 2-4 गुना कम होना चाहिए; 2) एजी.एब प्रकार के निर्धारण के साथ प्रतिक्रिया के संस्करण में, औद्योगिक निदान किट का उपयोग किया जाता है; एजी के निर्धारण के साथ संस्करण में, डायग्नोस्टिकम को 18-20 घंटे के अगर (कम अक्सर शोरबा) परीक्षण के खारा समाधान में 1-3 बिलियन निलंबन के रूप में स्वयं तैयार किया जाता है। 1 घंटे के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में गर्म करने या फॉर्मल्डिहाइड (अंतिम एकाग्रता 0.2%) के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे ऊष्मायन द्वारा निष्क्रिय किया गया सूक्ष्मजीव; 3) खारे घोल के रूप में इलेक्ट्रोलाइट।मंचन तकनीक वॉल्यूमेट्रिक सीरियल ट्यूबएस-की में एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए: एस-की के मुख्य तनुकरण से कार्यशील तनुकरण की कई पंक्तियाँ तैयार की जाती हैं। पंक्तियों की संख्या प्रयोग में लिए गए डायग्नोस्टिकम की संख्या पर निर्भर करती है; संख्या और कमजोर पड़ने वाले कारक संदिग्ध बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर द्वारा निर्धारित किए जाते हैं। श्रृंखला में कम से कम डायग्नोस्टिक एब टिटर के अनुरूप एक तनुकरण, नीचे दो तनुकरण और इसके ऊपर दो तनुकरण शामिल होने चाहिए। उदाहरण के लिए, यदि डायग्नोस्टिक टिटर 1:100 है, तो आरए स्टेजिंग की वॉल्यूमेट्रिक विधि के साथ निम्नलिखित तनुकरण तैयार किया जाना चाहिए: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ड्रिप के साथ विधि, पहले तनुकरण (1:25) की आवश्यकता नहीं है, लेकिन एक और उच्च तनुकरण की आवश्यकता है - 1:800। वैज्ञानिक अनुसंधानएस-कू को शीर्षक दिया गया है नकारात्मक प्रतिक्रिया. इसे इस प्रकार पतला किया जाता है: पहले टेस्ट ट्यूब को छोड़कर, सभी टेस्ट ट्यूबों में 0.25 मिलीलीटर खारा घोल डाला जाता है, जब प्रतिक्रिया 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में की जाती है, और 0.5 मिलीलीटर जब प्रतिक्रिया 1 की मात्रा में की जाती है। एमएल. मुख्य तनुकरण का 0.25 (0.5) मिलीलीटर पहली और दूसरी परखनली में, दूसरी परखनली से, कटे हुए आयतन में डालें और प्रजनन एस-केऔर 2 गुना बढ़ाकर, 0.25 (0.5) मिली को तीसरे में स्थानांतरित किया जाता है, तीसरे से चौथे में, आदि। आखिरी तक, मात्रा को संतुलित करने के लिए कट से 0.25 (0.5) मिली हर चीज में डाला जाता है। प्रत्येक तनुकरण एक अलग पिपेट का उपयोग करके किया जाता है। यदि कई डायग्नोस्टिकम को प्रयोग में लिया जाता है, तो उनमें से प्रत्येक के लिए तनुकरण की अपनी श्रृंखला उसी तरह तैयार की जाती है। डायग्नोस्टिकम को टेस्ट ट्यूब के प्रत्येक तनुकरण में परखनली के आयतन के बराबर मात्रा में मिलाया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्येक परखनली में तनुकरण दोगुना हो जाता है। प्रयोग एस-की नियंत्रण (एस-की के मुख्य तनुकरण का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) और एजी नियंत्रण (डायग्नोस्टिकम का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) से मेल खाता है। यदि प्रयोग में कई डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है, तो प्रत्येक का अपना एंटीजन नियंत्रण होता है। टेस्ट ट्यूब वाले रैक को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है, और फिर अगले दिन तक कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद पीए को तलछट की मात्रा और सफाई की डिग्री के आधार पर दर्ज किया जाता है। तरल. इन संकेतकों का निर्धारण, एग्लूटीनेट्स की प्रकृति के आधार पर, एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर, एग्लूटीनोस्कोप में या माइक्रोस्कोप दर्पण की अवतल सतह पर नग्न आंखों से किया जाता है। लेखांकन नियंत्रण से शुरू होता है: नियंत्रण सी पारदर्शी होना चाहिए, एजी समान रूप से बादलदार होना चाहिए (ट्यूब को हिलाने के बाद)। यदि नियंत्रण अच्छे हैं, तो सभी परीक्षण ट्यूबों में एग्लूटीनेशन की उपस्थिति और डिग्री स्थापित करें, जो प्लस द्वारा निर्दिष्ट हैं: बड़ी तलछट और तरल की पूर्ण सफाई - 4 प्लस; बड़ी तलछट और तरल की अधूरी सफाई - 3 प्लस; ध्यान देने योग्य तलछट और तरल पदार्थ का ध्यान देने योग्य समाशोधन 2 फायदे हैं। इसके बाद, अनुमापांक निर्धारित किया जाता है: कम से कम 2 प्लस की एग्लूटीनेशन तीव्रता के साथ उच्चतम तनुकरण। अनुमापांक अनुसंधान एस-की की तुलना इस बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर से की जाती है। यदि टिटर की जांच की जाती है। एस-की नैदानिक ​​​​मूल्य से 2 गुना कम है, प्रतिक्रिया को संदिग्ध माना जाता है; यदि अनुमापांक बराबर है निदान - कैसेकमजोर रूप से सकारात्मक; यदि यह 2-4 गुना अधिक है, तो इसे सकारात्मक माना जाता है; यदि यह 8 या अधिक गुना अधिक है, तो इसे तीव्र सकारात्मक माना जाता है। एब के व्यापक वितरण के साथ स्वस्थ लोगआरए का आकलन करने के लिए, एब टिटर में वृद्धि का उपयोग किया जाता है। सीरियल आरए में एआर के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, पंक्तियों की संख्या पहचान के लिए ली गई संख्या के अनुरूप होनी चाहिए नैदानिक ​​परीक्षण. डायग्नोस्टिक परीक्षण के मुख्य तनुकरण से, एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए की तरह ही क्रमिक दो गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। तनुकरण कारक एग्लूटीनेटिंग परीक्षण के अनुमापांक पर निर्भर करते हैं। प्रयोग में, परीक्षण के अनुमापांक के बराबर तनुकरण की उपस्थिति आवश्यक है, साथ ही उससे 2, 4, 6, 8 गुना कम भी। उदाहरण के लिए, यदि नैदानिक ​​परीक्षण का अनुमापांक 1 3200 है, तो आपको तनुकरण 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 का उपयोग करना चाहिए। परीक्षण के तनुकरण में परीक्षण किए गए एजी की समान मात्रा जोड़ी जाती है, जिसके परिणामस्वरूप, तनुकरण होता है। परीक्षण 2 गुना बढ़ जाता है। परीक्षण और Ag के 2 नियंत्रण प्रयोग में जोड़े जाते हैं। यदि प्रयोग में कई s-k शामिल हैं, तो उनमें से प्रत्येक को अपने नियंत्रण की आवश्यकता होती है। प्रतिक्रिया के पूरा होने पर, स्टैंड को जोर से हिलाया जाता है और रखा जाता है 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में। परिणामों को ऊपर वर्णित अनुसार ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया के मूल्यांकन में विशेषताएं हैं। अध्ययन के अनुपालन के बारे में निष्कर्ष निकालने के लिए। Ag को प्रयोग में लिया गया, प्रतिक्रिया का अनुमापांक मानक नैदानिक ​​परीक्षण के कम से कम आधे अनुमापांक के अनुरूप होना चाहिए। 1 4 और उससे नीचे के अनुमापांक को एक समूह प्रतिक्रिया माना जाता है ड्रिप एम.डीआरए का स्टेजिंग वॉल्यूमेट्रिक से भिन्न होता है जिसमें एस-कू को 1 मिलीलीटर की मात्रा में पतला किया जाता है, एजी का उपयोग उच्च सांद्रता (10 अरब/एमएल) में किया जाता है और इसे 1 जोड़ा जाता है - 2 एजी जोड़ने के बाद दवा को टेस्ट ट्यूब में डालना अपरिवर्तित माना जाता है। अन्यथा, सेटिंग, रिकॉर्डिंग और मूल्यांकन की विधि वॉल्यूमेट्रिक विधि के समान है

(स्रोत: माइक्रोबायोलॉजी शर्तों का शब्दकोश)

इम्यूनोमाइक्रोबायोलॉजिकल अध्ययन

कई समस्याओं को हल करने के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीकों का उपयोग किया जाता है:

1. स्थिति का आकलन प्रतिरक्षा तंत्रव्यक्ति ( प्रतिरक्षा स्थिति) मात्रात्मक और की परिभाषा के अनुसार कार्यात्मक विशेषताएँप्रतिरक्षा प्रणाली की कोशिकाएं और उनके उत्पाद।

2. मानव ऊतकों की संरचना और विशेषताओं का निर्धारण: रक्त समूह, आरएच कारक, प्रत्यारोपण एंटीजन।

3. एंटीबॉडी टाइटर्स (सेरोडायग्नोसिस) का पता लगाने और स्थापित करने, शरीर में रोगज़नक़ एंटीजन की पहचान करने और इन एंटीजन के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं का निर्धारण करके संक्रामक रोगों और उनके प्रतिरोध का निदान।

4. मनुष्यों और जानवरों के शरीर से पृथक बैक्टीरिया और वायरस की संस्कृतियों की सेरॉइड पहचान।

5. मानव शरीर और अंदर का पता लगाना बाहरी वातावरणएंटीजेनिक या हैप्टेन गुणों वाला कोई भी पदार्थ (हार्मोन, एंजाइम, जहर, दवाएं, दवाएं, आदि)।

6. इम्युनोपैथोलॉजिकल स्थितियों, एलर्जी, प्रत्यारोपण और एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं की पहचान।

एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच परस्पर क्रिया की प्रक्रिया सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएंदो चरणों में होता है:

1) विशिष्ट- इंटरेक्शन चरण जिसमें एंटीबॉडी (पैराटोप्स) और एंटीजन एपिटोप्स के सक्रिय केंद्रों का एक पूरक संयोजन होता है। आमतौर पर यह चरण कुछ सेकंड या मिनट तक चलता है;

2) अविशिष्ट- अभिव्यक्ति चरण, विशेषता बाहरी संकेतप्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण. यह चरण कई मिनटों से लेकर कई घंटों तक विकसित हो सकता है।

एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की इष्टतम विशिष्ट बातचीत एक आइसोटोनिक समाधान में होती है जिसका पीएच तटस्थ के करीब होता है। इन विट्रो प्रणाली में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया कई घटनाओं की घटना के साथ हो सकती है

· समूहन,

· वर्षण,

· लसीका.

बाहरी अभिव्यक्तियाँप्रतिक्रियाएँ एंटीजन के भौतिक रासायनिक गुणों (कण आकार, भौतिक राज्य), एंटीबॉडी का वर्ग और प्रकार (पूर्ण और अपूर्ण), साथ ही प्रयोगात्मक स्थितियां (मध्यम स्थिरता, नमक एकाग्रता, पीएच, तापमान)।

एंटीजन और एंटीबॉडी की बहुसंयोजकता नग्न आंखों को दिखाई देने वाले समुच्चय के गठन को सुनिश्चित करती है। यह नेटवर्क निर्माण के सिद्धांत के अनुसार होता है, जिसके अनुसार अन्य एंटीबॉडी और एंटीजन अणु क्रमिक रूप से परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से जुड़े होते हैं। परिणामस्वरूप, नेटवर्क संरचनाएं बनती हैं, जो अवक्षेपित समुच्चय में बदल जाती हैं। प्रतिक्रिया की प्रकृति और गंभीरता एंटीजन और एंटीबॉडी के मात्रात्मक अनुपात पर निर्भर करती है। सबसे तीव्र प्रतिक्रियाएँ तब होती हैं जब अभिकर्मक समान अनुपात में होते हैं।

शर्तजाली गठन (नेटवर्क) - प्रत्येक एंटीजन अणु के लिए तीन से अधिक एंटीजेनिक निर्धारक और प्रत्येक एंटीबॉडी अणु के लिए दो सक्रिय केंद्रों की उपस्थिति। एंटीजन अणु जाली नोड हैं, और एंटीबॉडी अणु कनेक्टिंग लिंक हैं। एंटीजन और एंटीबॉडी सांद्रता के इष्टतम अनुपात (समतुल्यता क्षेत्र) का क्षेत्र, जब तलछट गठन के बाद सतह पर तैरनेवाला में न तो मुक्त एंटीजन और न ही मुक्त एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है।

अवक्षेपित होने वाले समुच्चय तब बनते हैं जब एंटीजन पूर्ण एंटीबॉडी के साथ संयोजित होते हैं। अपूर्ण एंटीबॉडी(मोनोवैलेंट) नेटवर्क संरचनाओं और बड़े समुच्चय के निर्माण का कारण नहीं बनता है। ऐसी एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उपयोग करें विशेष विधियाँएंटीग्लोबुलिन (कूम्ब्स प्रतिक्रिया) के उपयोग पर आधारित।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं, उनकी उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता के कारण, एंटीजन और एंटीबॉडी का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग की जाती हैं। प्रतिक्रियाओं में इम्युनोरिएजेंट की मात्रा टिटर द्वारा व्यक्त की जाती है - सीरम या एंटीजन का अधिकतम तनुकरण जिस पर प्रतिक्रिया अभी भी देखी जाती है।

सूक्ष्मजीवविज्ञानी और प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रयोगशालाओं में सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का उपयोग दो उद्देश्यों के लिए किया जाता है:

1) एक ज्ञात एंटीबॉडी (प्रतिरक्षा निदान सीरम) का उपयोग करके सामान्य रूप से सूक्ष्मजीवों, विषाक्त पदार्थों, एंटीजन की सीरोपहचान के लिए,

2) सेरोडायग्नोसिस के लिए - एक ज्ञात एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) का उपयोग करके बैक्टीरिया, वायरल और कम अक्सर अन्य संक्रामक रोगों के लिए रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी की प्रकृति का निर्धारण करना।

एंटीजन के सामान्य, प्रजाति और प्रकार को निर्धारित करने के लिए, ज्ञात प्रतिरक्षा परीक्षणों की आवश्यकता होती है। डायग्नोस्टिक सीरा. वे मारे गए या जीवित सूक्ष्मजीवों, उनके क्षय उत्पादों, बेअसर या देशी विषाक्त पदार्थों की बढ़ती खुराक में जानवरों (आमतौर पर खरगोशों) को बार-बार प्रशासन द्वारा प्राप्त किए जाते हैं। पशुओं के टीकाकरण के एक निश्चित चक्र के बाद, पशु का बड़े पैमाने पर रक्तपात या पूर्ण रक्तस्राव किया जाता है। एक बाँझ कंटेनर में एकत्र किए गए रक्त को पहले थक्का जमने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 4 - 6 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, फिर एक दिन के लिए आइसबॉक्स में रखा जाता है। परिणामी पारदर्शी सीरम को एक बाँझ कंटेनर में चूसा जाता है, संरक्षक जोड़े जाते हैं, एंटीबॉडी टिटर निर्धारित किया जाता है, बाँझपन के लिए जाँच की जाती है और ampoules में डाला जाता है।

उपयोग किया जाता है गैर adsorbedऔर अधिशोषितडायग्नोस्टिक सीरा. अनअवशोषित सीरम में होता है उच्च अनुमापांकएंटीबॉडी, लेकिन समूह (क्रॉस) प्रतिक्रिया देने में सक्षम हैं।

अधिशोषित सीरा को क्रिया की सख्त विशिष्टता की विशेषता होती है (वे केवल एक समजात प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं)। केवल एक विशिष्ट एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी युक्त सीरा कहलाते हैं मोनोरिसेप्टर.

वे फ़्लोरोक्रोम, एंजाइम और रेडियोआइसोटोप लेबल वाले सीरम का भी उत्पादन करते हैं, जो उच्च स्तर की सटीकता के साथ एंटीजन के निशान का भी पता लगाना संभव बनाता है।

जीवित या मारे गए जीवाणुओं के निलंबन, उनके टूटने वाले उत्पादों, विषाक्त पदार्थों और वायरस का उपयोग सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) के रूप में किया जाता है। कुछ मामलों में, सूक्ष्मजीवों और जानवरों के ऊतकों से अर्क या रासायनिक रूप से पृथक एंटीजन का उपयोग किया जाता है।

सभी इम्यूनोमाइक्रोबायोलॉजिकल तरीकों को 3 समूहों में विभाजित किया जा सकता है:

1) पर आधारित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन का सीधा संपर्क(एग्लूटिनेशन, अवक्षेपण, रक्तगुल्म, स्थिरीकरण, आदि की घटना);

2) पर आधारित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की मध्यस्थ अंतःक्रिया(प्रतिक्रियाएँ अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, जमाव, लेटेक्स एग्लूटिनेशन, कार्बन एग्लोमरेशन, बेंटोनाइट एग्लूटिनेशन, पूरक निर्धारण, आदि);

3) उपयोग करना लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन(फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि, एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट और रेडियोइम्यूनोएसेज़ और अन्य तरीके)।

समूहन प्रतिक्रियाएं

इन प्रतिक्रियाओं में कणों के रूप में एंटीजन (माइक्रोबियल कोशिकाएं, लाल रक्त कोशिकाएं और अन्य कणिका एंटीजन) शामिल होते हैं, जो एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपक जाते हैं और अवक्षेपित हो जाते हैं।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया करने के लिए(आरए) तीन घटकों की आवश्यकता है: 1) एंटीजन (एग्लूटीनोजेन);

2) एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन)

3) इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान)।

अनुमानित एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)

एक संकेतक, या प्लेट, आरए को कमरे के तापमान पर एक ग्लास स्लाइड पर रखा जाता है। ऐसा करने के लिए, ग्लास पर 1:10 से 1:20 के तनुकरण पर सीरम की एक बूंद और अलग से आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक नियंत्रण बूंद लगाने के लिए पाश्चर पिपेट का उपयोग करें। कालोनियों या बैक्टीरिया की दैनिक संस्कृति (डायग्नोस्टिकम की एक बूंद) को दोनों बैक्टीरियोलॉजिकल लूप में पेश किया जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। प्रतिक्रियाओं को कुछ मिनटों के बाद दृष्टिगत रूप से ध्यान में रखा जाता है, कभी-कभी एक आवर्धक लेंस (x5) का उपयोग करके। सकारात्मक आरए के साथ, सीरम ड्रॉप में बड़े और छोटे गुच्छे की उपस्थिति नोट की जाती है; नकारात्मक आरए के साथ, सीरम समान रूप से बादल छाए रहता है।

विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाकिसी रोगी में विशिष्ट एंटीबॉडी के अनुमापांक की पहचान करने के लिए।

सेरोडायग्नोसिस के लिए पूर्ण विकसित आरए रोगियों के सीरम में बनाया जाता है। इसे 1:50 - 1:100 से 1:800 या 1:1600 तक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में भी पतला किया जाता है। चूंकि कम सीरम टाइटर्स में स्वस्थ लोगों या किसी अन्य निदान (डायग्नोस्टिक टिटर) वाले रोगियों में पाए जाने वाले सामान्य एग्लूटीनिन हो सकते हैं। इस प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में, डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है - ज्ञात निलंबन, आमतौर पर मारे गए बैक्टीरिया के।

आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल का 1 मिलीलीटर पहले एग्लूटिनेशन ट्यूबों में डाला जाता है। उनमें से पहले में 1:100 पतला सीरम का 1 मिलीलीटर जोड़ा जाता है, और इसे मिलाने के बाद, 1 मिलीलीटर दूसरे में, दूसरे से तीसरे में स्थानांतरित किया जाता है, आदि। 1 मिलीलीटर में 3 बिलियन माइक्रोबियल निकायों वाले जीवाणु निलंबन की 1-2 बूंदों को सेरा के परिणामी दो गुना तनुकरण (1:100 से 1:1600 या अधिक) में जोड़ा जाता है। ट्यूबों को हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37°C पर 2 घंटे के लिए रखा जाता है, फिर 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखा जाता है।

विस्तृत एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया को प्रत्येक टेस्ट ट्यूब का क्रमिक रूप से मूल्यांकन करके, नियंत्रण वाले से शुरू करके, हल्के झटकों के साथ ध्यान में रखा जाता है। नियंत्रण ट्यूबों में कोई एग्लूटीनेशन नहीं होना चाहिए। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की तीव्रता को निम्नलिखित संकेतों से चिह्नित किया गया है: ++++ - पूर्ण एग्लूटिनेशन (एक पूर्ण पारदर्शी तरल में एग्लूटिनेट फ्लेक्स); +++ - अधूरा एग्लूटीनेशन (थोड़ा ओपलेसेंट तरल में गुच्छे); ++ - आंशिक एग्लूटिनेशन (गुच्छे स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं, तरल थोड़ा बादलदार है); + - कमजोर, संदिग्ध एग्लूटिनेशन - तरल बहुत बादलदार है, इसमें मौजूद गुच्छे को अलग करना मुश्किल है; - - एग्लूटीनेशन की अनुपस्थिति (तरल समान रूप से बादलदार है)।

सीरम टिटर को इसका अंतिम तनुकरण माना जाता है, जिसमें एग्लूटिनेशन की तीव्रता का आकलन दो प्लस (++) से कम नहीं होता है।

व्याख्यान संख्या 16

शब्दकोष

प्रत्यक्ष -बिना कुछ भी, बिना किसी बाद के लिंक के सीधे अगला।

परोक्ष रूप से- अन्य कोशिकाओं के माध्यम से, सीधे नहीं।

कमी ≠ वृद्धि (कोशिका गतिविधि)।

अस्वीकार करना -स्वीकार नहीं, अस्वीकार. शरीर प्रत्यारोपित अंग को अस्वीकार कर देता है।

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं.

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी या एक एंटीजन और एक संवेदनशील टी-लिम्फोसाइट की विशिष्ट बातचीत (बाध्यकारी) की प्रतिक्रियाएं हैं।

ये प्रतिक्रियाएं इन विट्रो (एक टेस्ट ट्यूब में) और विवो (एक जीवित जीव में) में होती हैं।

इन प्रतिक्रियाओं में सीरम (सीरम) शामिल होता है, इसीलिए इन्हें कहा जाता है सीरम विज्ञानी.

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है संक्रामक रोगों का निदान.इस मामले में, अज्ञात घटक ज्ञात घटक द्वारा निर्धारित किया जाता है, जो एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की बातचीत की विशिष्टता पर आधारित होता है। अगर ज्ञात एंटीबॉडी, तब आप कर सकते हो किसी अज्ञात एंटीजन को पहचानें (खोजें)।. अगर ज्ञात प्रतिजन, तो आप इसका उपयोग कर सकते हैं अज्ञात एंटीबॉडी का पता लगाएं.

इस प्रकार, प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है:

1) के लिए सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स(सेरोडायग्नोसिस) रोगों का -एक संक्रामक रोग (ज्ञात एंटीजन) के एक विशिष्ट प्रेरक एजेंट के प्रति एंटीबॉडी के बीमार लोगों के रक्त सीरम में पता लगाना; यदि किसी बीमार व्यक्ति के रक्त सीरम में किसी रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी मौजूद हैं, तो यह वही रोगज़नक़ है जिसके कारण ऐसा हुआ है संक्रमण;

2) के लिए रोगाणुओं की सीरोलॉजिकल पहचान (सीरोआइडेंटिफिकेशन) -प्रतिरक्षा निदान सीरा (ज्ञात एंटीबॉडी) का उपयोग करके रोगज़नक़ के प्रकार का निर्धारण करना; यदि एंटीबॉडीज़ किसी बीमार व्यक्ति से अलग किए गए रोगज़नक़ को बांधती हैं, तो यह सूक्ष्म जीव उसी के समान है जिसके साथ जानवर को प्रतिरक्षित किया गया था प्राप्तप्रतिरक्षा निदान सीरम .

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएँ 2 चरणों में होती हैं:

1) विशिष्ट चरण- एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों के गठन के साथ एंटीजन के निर्धारक समूह के साथ एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र का कनेक्शन; यह चरण तेजी से आगे बढ़ता है, लेकिन कोई प्रभाव दिखाई नहीं देता है;

2) निरर्थक चरण- उपस्थिति दिखाई देने वाला प्रभावएंटीजन और एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया - हानि मसौदा(एग्लूटीनेशन) या बादल(वर्षा), जो अनुमति देता है देखनाशिक्षा एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्सऔर इसके बारे में निष्कर्ष निकालें अनुपालनएंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे के प्रति।

प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में शामिल हैं एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (आरए), अवक्षेपण प्रतिक्रिया (आरपी), पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर)।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया- यह इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी के प्रभाव में माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं (एरिथ्रोसाइट्स) का चिपकना और अवक्षेपण है। प्रतिक्रिया का दृश्य प्रभाव (एग्लूटिनेशन घटना) नामक अवक्षेप का निर्माण होता है एकत्रित होना

इस प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है सेरोडायग्नोसिसऔर सीरोपहचान. आरए का उपयोग सेरोडायग्नोसिस (रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाना) के लिए किया जाता है। टाइफाइड ज्वरऔर पैराटाइफाइड(विडाल प्रतिक्रिया), ब्रूसिलोसिस(राइट की प्रतिक्रिया), तुलारेमिया और लेप्टोस्पायरोसिस. आरए का उपयोग सीरोआइडेंटिफिकेशन (रोगी से पृथक रोगज़नक़ के प्रकार का निर्धारण) के लिए किया जाता है आंतों में संक्रमण, काली खांसी, हैजाऔर आदि।

अवयवप्रतिक्रियाएँ:

1. ए एन्टिजेन (एग्लूटीनोजेन) –ये संपूर्ण (नष्ट नहीं) माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाएं हैं ( आणविका, अघुलनशील प्रतिजन). एग्लूटीनोजेन्स- यह एक निलंबन है जीवितया मारे गएमाइक्रोबियल कोशिकाएँ या कोई अन्य कोशिकाएँ। एंटीजन या तो अज्ञात या ज्ञात हो सकते हैं। एक अज्ञात एग्लूटीनोजेन रोगी के शरीर से अलग किया गया एक माइक्रोबियल कल्चर है जिसे निर्धारित करने की आवश्यकता है। ज्ञात प्रतिजन - डायग्नोस्टिकम– निदान औषधि – मृतकों का निलंबनरोगाणुओं ज्ञात प्रजातियाँखारे घोल में. यह निलंबन बादल छाए रहेंगे (अपारदर्शी), क्योंकि माइक्रोबियल कोशिकाएं घुलती नहीं हैं, बल्कि बरकरार रहती हैं। रोगियों के रक्त सीरम में अज्ञात एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक ज्ञात एग्लूटीनोजेन का उपयोग किया जाएगा।

2. एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन)- रक्त सीरम में पाया जाता है। एंटीबॉडीज़ अज्ञात या ज्ञात भी हो सकती हैं। निर्धारित किए जाने वाले अज्ञात एंटीबॉडी रक्त सीरम में हैं बीमार आदमी. ज्ञात एंटीबॉडीज पाए जाते हैं प्रतिरक्षा निदान सीराजिन्हें कहा जाता है एकत्रित सीरा. इनका उपयोग सीरो-पहचान के लिए किया जाता है, अर्थात। एक अज्ञात एंटीजन का निर्धारण करने के लिए - एक प्रकार का माइक्रोबियल कल्चर।

3. इलेक्ट्रोलाइट- 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल।

एक नैदानिक ​​परीक्षण प्राप्त करना.

तिरछी अगर (उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार का प्रेरक एजेंट) पर उगाए गए ज्ञात प्रजाति के रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति को 3-4 मिलीलीटर आइसोटोनिक समाधान से धोया जाता है, एक बाँझ ट्यूब में रखा जाता है, कुछ में रोगाणु मर जाते हैं तरीका (उदाहरण के लिए, उबालकर और घनत्व निर्धारित किया जाता है (1 मिलीलीटर में 3 बिलियन माइक्रोबियल कोशिकाएं होनी चाहिए)। यदि माइक्रोबियल कोशिकाएं मर जाती हैं उच्च तापमान, तो उन्हें ओ-डायग्नोस्टिकम (ओ-एंटीजन) मिलता है, लेकिन अगर इसका उपचार फॉर्मेल्डिहाइड से किया जाता है, तो उन्हें एच-डायग्नोस्टिकम (एच-एंटीजन) मिलता है।

निदान के उदाहरण: साल्मोनेला डायग्नोस्टिकम, ब्रुसेलोसिस डायग्नोस्टिकम, टुलारेमिया डायग्नोस्टिकम।

एग्लूटिनेटिंग सीरा की तैयारी.

जानवरों (आमतौर पर खरगोशों) को अंतराल पर 5-7 बार बढ़ती खुराक में माइक्रोबियल डायग्नोस्टिकम के इंजेक्शन लगाए जाते हैं ( हाइपरइम्यूनाइजेशन करें), और फिर उनका रक्त सीरम लिया जाता है, जिसमें उन रोगाणुओं के प्रति एंटीबॉडी होते हैं जिनसे डायग्नोस्टिकम तैयार किया जाता है। यदि ओ-डायग्नोस्टिकम के साथ टीकाकरण किया जाता है, तो ओ-एग्लूटिनेटिंग सीरा (ओ-एंटीबॉडी युक्त) प्राप्त होता है, यदि एच-डायग्नोस्टिकम के साथ, एच-एग्लूटिनेटिंग सीरा प्राप्त होता है।

एग्लूटीनेटिंग सीरा हो सकता है अवशोषितया देशी और अधिशोषित.

अशोषित सीरमइनमें रोगाणुओं की कई निकट संबंधी प्रजातियों के समूह एंटीबॉडी होते हैं।

अधिशोषित सीरमएक प्रकार के सूक्ष्म जीव के एक या अधिक एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं। यदि सीरा में केवल एक एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, तो उन्हें कहा जाता है मोनोरिसेप्टरया मोनोवैलेंट,यदि कई एंटीजन के लिए - समूहअधिशोषित सीरम .

एग्लूटीनेटिंग सीरा के उदाहरण:साल्मोनेला मोनोरिसेप्टर एच-एग्लूटीनेटिंग सीरम, साल्मोनेला समूह अधिशोषित ओ-एग्लूटीनेटिंग सीरम, एंटीकोलेरा ओ-एग्लूटीनेटिंग सीरम, आदि।.

अनुमापांकएग्लूटिनेटिंग सीरम - सीरम का उच्चतम तनुकरण जिस पर एंटीजन के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का अभी भी पता लगाया जाता है (अनुमापांक रक्त में एंटीबॉडी की मात्रा पर निर्भर करता है: जितना अधिक एंटीबॉडी, उतना अधिक सीरम अनुमापांक)।

आरए के मंचन के लिए तरीके.

1. अनुमानित (लैमेलर) आरए- कांच पर किया गया। एक ग्लास स्लाइड पर सीरम की 2 बूंदें और आइसोटोनिक घोल की 1 बूंद लगाएं। एक माइक्रोबियल कल्चर को लूप में सीरम की एक बूंद में और आइसोटोनिक घोल की एक बूंद में मिलाया जाता है। आइसोटोनिक घोल की एक बूंद कीटाणुओं के साथ – प्रतिजन नियंत्रण, एक बूंद रोगाणु मुक्त सीरम – एंटीबॉडी नियंत्रण, एक बूंद रोगाणुओं के साथ सीरम – अनुभव।यदि सीरम में माइक्रोबियल एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी होते हैं जो इसके साथ मिश्रित होते हैं, तो एंटीबॉडी और एंटीजन विशेष रूप से एक-दूसरे से बंध जाएंगे और 1-3 मिनट के बाद एग्लूटीनेट फ्लेक्स परीक्षण ड्रॉप में दिखाई देंगे। एंटीजन नियंत्रण धुंधला होना चाहिए और एंटीबॉडी नियंत्रण स्पष्ट होना चाहिए। प्रतिक्रिया के परिणाम एग्लूटीनेट फ्लेक्स की उपस्थिति के आधार पर दर्ज किए जाते हैं . यदि गुच्छे बाहर गिरते हैं, तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है, अर्थात। एक एंटीजन एक एंटीबॉडी से मेल खाता है और एंटीजन का उपयोग एंटीबॉडी या इसके विपरीत निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है। यदि बादल छाए रहें तो प्रतिक्रिया नकारात्मक होती है।

2. विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया -परीक्षण ट्यूबों में किया गया। सबसे पहले, 1:50 से 1:1600 तक बीमार व्यक्ति के रक्त सीरम का 2 गुना पतलाकरण तैयार करें। 1 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल को 6 टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है। 1:50 के तनुकरण पर रोगी के रक्त सीरम का 1 मिलीलीटर पहली टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है, मिश्रित किया जाता है और 1:100 का तनुकरण प्राप्त किया जाता है, फिर 1:100 के तनुकरण का 1 मिलीलीटर दूसरे परखनली में स्थानांतरित किया जाता है। और 1:200 का तनुकरण प्राप्त होता है, आदि। एंटीजन और सीरम नियंत्रण के लिए दो ट्यूब रखी गई हैं। सीरम नियंत्रण में 1:50 के तनुकरण पर केवल सीरम जोड़ें, एंटीजन नियंत्रण में - केवल एंटीजन। अन्य सभी टेस्ट ट्यूबों में 0.1 मिली एंटीजन - डायग्नोस्टिकम (O- या H-) मिलाएं और सभी टेस्ट ट्यूबों को 18-20 घंटों के लिए 37°C पर थर्मोस्टेट में रखें। प्रतिक्रिया के परिणाम प्रकृति, बनने वाले अवक्षेप (एग्लूटीनेट) की मात्रा और मैलापन की डिग्री के अनुसार दर्ज किए जाते हैं। लेखांकन केवल नियंत्रण में निम्नलिखित परिणामों के साथ किया जाता है: सीरम नियंत्रण - पारदर्शी, एंटीजन नियंत्रण - बादल। O-एंटीबॉडीज़ एक बारीक कण वाला अवक्षेप देते हैं। एच-एंटीबॉडीज़ - मोटे दाने वाले। अंतिम टेस्ट ट्यूब के आधार पर जिसमें एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया अभी भी दिखाई दे रही है, यह स्थापित किया गया है डायग्नोस्टिक टिटर.

सेरोडायग्नोसिस के दौरानरोगों में, न केवल किसी विशेष रोगज़नक़ के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाना महत्वपूर्ण है, बल्कि उनकी मात्रा की पहचान करना भी महत्वपूर्ण है, अर्थात। ऐसा एंटीबॉडी अनुमापांक स्थापित करेंहम इस रोगज़नक़ के कारण होने वाली बीमारी की उपस्थिति के बारे में कब बात कर सकते हैं? . इस अनुमापांक को डायग्नोस्टिक अनुमापांक कहा जाता है।उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार का निदान करने के लिए, आपको 1:400 के एंटीबॉडी टिटर की पहचान करने की आवश्यकता है, लेकिन इससे कम नहीं। और भी सटीक परिणाम देता है युग्मित सीरा में एंटीबॉडी में वृद्धि का पता लगाना।रोग की शुरुआत में और 3 से 5 या अधिक दिनों के बाद रोगी का सीरम एकत्र किया जाता है। यदि एंटीबॉडी टिटर कम से कम 4 गुना बढ़ जाता है, तो हम इसके बारे में बात कर सकते हैं वर्तमान बीमारी.

यदि सीरोआइडेंटिफिकेशन के लिए एक विस्तृत एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है, तो एग्लूटिनेटिंग डायग्नोस्टिक सीरा का उपयोग किया जाता है, जिसे टिटर तक या उनके टिटर के आधे तक पतला किया जाता है। यदि डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर एग्लूटिनेशन का पता लगाया जाता है तो आरए को सकारात्मक माना जाता है।