कॉम्ब्स परीक्षण सकारात्मक होता है जब: ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया

एंटी-रीसस एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया ( अप्रत्यक्ष प्रतिक्रियाकूम्ब्स)आवेदन करनाइंट्रावस्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में। इनमें से कुछ रोगियों में, एंटी-रीसस एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, जो अपूर्ण और मोनोवैलेंट होते हैं। वे विशेष रूप से आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटिनेशन का कारण नहीं बनते हैं। ऐसे अपूर्ण एंटीबॉडी की उपस्थिति अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण द्वारा निर्धारित की जाती है। ऐसा करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एंटीबॉडी) को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है। कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करते हुए, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ी रोग संबंधी स्थितियों का निदान किया जाता है, उदाहरण के लिए, नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग: आरएच-पॉजिटिव भ्रूण के एरिथ्रोसाइट्स रक्त में घूमने वाले आरएच कारक के लिए अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ जुड़ते हैं, जो कि आरएच-नेगेटिव मां से नाल के माध्यम से पारित हुआ।

तंत्र. अपूर्ण (मोनोवैलेंट) एंटीबॉडी की पहचान करने में कठिनाई इस तथ्य के कारण होती है कि ये एंटीबॉडी, जब एक विशिष्ट एंटीजन के एपिटोप्स से जुड़ते हैं, तो एक जाली संरचना नहीं बनाते हैं और एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच प्रतिक्रिया का एग्लूटिनेशन, अवक्षेपण, द्वारा पता नहीं लगाया जाता है। या अन्य परीक्षण. गठित एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों की पहचान करने के लिए, अतिरिक्त परीक्षण प्रणालियों का उपयोग करना आवश्यक है। अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, उदाहरण के लिए एक गर्भवती महिला के रक्त सीरम में एरिथ्रोसाइट्स के आरएच एंटीजन के लिए, प्रतिक्रिया दो चरणों में की जाती है: 1) आरएच एंटीजन युक्त एरिथ्रोसाइट्स को परीक्षण सीरम के दो गुना तनुकरण में जोड़ा जाता है और रखा जाता है एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर; 2) खरगोश विरोधी मानव विरोधी ग्लोब्युलिन सीरम (पूर्व-अनुमापित कार्यशील तनुकरण में) पहले चरण के बाद अच्छी तरह से धोए गए लाल रक्त कोशिकाओं में जोड़ा जाता है। 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट तक ऊष्मायन के बाद, परिणामों का मूल्यांकन हेमग्लूटीनेशन (सकारात्मक प्रतिक्रिया) की उपस्थिति से किया जाता है। प्रतिक्रिया के अवयवों को नियंत्रित करना आवश्यक है: 1) एंटीग्लोबुलिन सीरम + लाल रक्त कोशिकाएं जिन्हें विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील माना जाता है; 2) सामान्य सीरम + एंटीग्लोबुलिन सीरम से उपचारित एरिथ्रोसाइट्स; 3) आरएच-नकारात्मक एरिथ्रोसाइट्स का परीक्षण सीरम + एंटीग्लोबुलिन सीरम के साथ इलाज किया जाता है।

50. निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया. तंत्र। अवयव। आवेदन पत्र।

अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म प्रतिक्रिया(आरएनजीए, आरपीजीए)यह उनकी सतह पर अवशोषित एंटीजन या एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स (या लेटेक्स) के उपयोग पर आधारित है, जिसकी रोगियों के रक्त सीरम के संबंधित एंटीबॉडी या एंटीजन के साथ बातचीत से एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं और नीचे की ओर गिर जाते हैं। स्कैलप्ड तलछट के रूप में टेस्ट ट्यूब या सेल।

अवयव।आरएनजीए करने के लिए, भेड़, घोड़ों, खरगोशों, मुर्गियों, चूहों, मनुष्यों और अन्य से एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जा सकता है, जिन्हें फॉर्मेल्डिहाइड या ग्लूटाराल्डिहाइड के साथ इलाज करके भविष्य में उपयोग के लिए संग्रहीत किया जाता है। एरिथ्रोसाइट्स की सोखने की क्षमता तब बढ़ जाती है जब उन्हें टैनिन या क्रोमियम क्लोराइड के घोल से उपचारित किया जाता है।

आरएनजीए में एंटीजन सूक्ष्मजीवों के पॉलीसेकेराइड एंटीजन, जीवाणु टीकों के अर्क, वायरस और रिकेट्सिया के एंटीजन, साथ ही अन्य पदार्थों के रूप में काम कर सकते हैं।

उच्च रक्तचाप से संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं को एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम कहा जाता है। एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम तैयार करने के लिए, भेड़ एरिथ्रोसाइट्स, जिनमें उच्च सोखने की गतिविधि होती है, का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है।

आवेदन. आरएनजीए का उपयोग संक्रामक रोगों का निदान करने, गर्भावस्था की स्थापना करते समय मूत्र में गोनैडोट्रोपिक हार्मोन का निर्धारण करने, दवाओं, हार्मोन और कुछ अन्य मामलों में अतिसंवेदनशीलता की पहचान करने के लिए किया जाता है।

तंत्र. अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म परीक्षण (आईआरएचए) में एग्लूटिनेशन परीक्षण की तुलना में काफी अधिक संवेदनशीलता और विशिष्टता होती है। इसका उपयोग रोगज़नक़ को उसकी एंटीजेनिक संरचना द्वारा पहचानने या अध्ययन किए जा रहे रोग संबंधी सामग्री में जीवाणु उत्पादों - विषाक्त पदार्थों को इंगित करने और पहचानने के लिए किया जाता है। तदनुसार, मानक (वाणिज्यिक) एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी डायग्नोस्टिक्स का उपयोग किया जाता है, जो टैनाइज्ड (टैनिन-उपचारित) एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर विशिष्ट एंटीबॉडी के सोखने से प्राप्त होता है। परीक्षण सामग्री का क्रमबद्ध तनुकरण प्लास्टिक प्लेटों के कुओं में तैयार किया जाता है। फिर प्रत्येक कुएं में एंटीबॉडी-लोडेड लाल रक्त कोशिकाओं के 3% निलंबन की समान मात्रा डाली जाती है। यदि आवश्यक हो, तो प्रतिक्रिया विभिन्न समूह विशिष्टताओं के एंटीबॉडी से भरे एरिथ्रोसाइट्स के साथ कुओं की कई पंक्तियों में समानांतर में की जाती है।

37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के ऊष्मायन के बाद, मूल्यांकन करते हुए, परिणामों को ध्यान में रखा जाता है उपस्थितिएरिथ्रोसाइट्स का तलछट (बिना हिलाए): एक नकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, कुएं के तल पर एक कॉम्पैक्ट डिस्क या रिंग के रूप में एक तलछट दिखाई देती है, एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ - एरिथ्रोसाइट्स का एक विशिष्ट लेसी तलछट, असमान किनारों वाली एक पतली फिल्म .

कॉम्ब्स परीक्षण है नैदानिक ​​विश्लेषणरक्त परीक्षण, जो यह पता लगाने के लिए किया जाता है कि क्या रक्त में कुछ ऐसे एंटीबॉडी हैं जो असुरक्षित हो सकते हैं। ये एंटीबॉडीज़ लाल रक्त कोशिकाओं से चिपक जाती हैं और आक्रमण कर सकती हैं प्रतिरक्षा तंत्र, साथ ही अन्य तरीकों से नुकसान पहुंचाते हैं। मेडिकल शब्दावली में इस अध्ययन को एंटीग्लोबुलिन टेस्ट (एजीटी) भी कहा जाता है।

कॉम्ब्स नमूनों के प्रकार

कॉम्ब्स परीक्षण दो प्रकार के होते हैं - प्रत्यक्ष और अप्रत्यक्ष।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण, जिसे डायरेक्ट (डीएटी) के रूप में भी जाना जाता है, लाल रक्त कोशिकाओं की सतह से जुड़ने वाले ऑटो-एंटीबॉडी का पता लगाता है। ये एंटीबॉडी कभी-कभी शरीर में कुछ बीमारियों के कारण या कुछ दवाएं लेने पर उत्पन्न होती हैं, जैसे कि प्रोकेनामाइड, मेथिल्डोपा, या क्विनिडाइन।

ये एंटीबॉडीज़ खतरनाक हैं क्योंकि ये कभी-कभी लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट करके एनीमिया का कारण बनते हैं।

कभी-कभी पीलिया या एनीमिया के कारण का निदान करने के लिए इस परीक्षण का आदेश दिया जाता है।

आम तौर पर, कॉम्ब्स प्रतिक्रिया नकारात्मक होती है।

इसके लिए सकारात्मक:

• हेमोलिटिक रोगनवजात शिशु;
• ऑटोइम्यून हेमोलिसिस;
• हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रियाएं;
• दवा-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया।

अप्रत्यक्ष नमूनाकूम्ब्सके रूप में भी जाना जाता है, इसका उपयोग रक्त सीरम में पाए जाने वाले लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है (सीरम रक्त का स्पष्ट पीला तरल है जो लाल रक्त कोशिकाओं और कौयगुलांट के समाप्त होने के बाद रहता है)।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग रक्त आधान के दौरान यह निर्धारित करने के लिए किया जाता है कि दाता का रक्त प्राप्तकर्ता के रक्त से मेल खाता है या नहीं। इसे अनुकूलता परीक्षण कहा जाता है और यह दाता के रक्त पर किसी भी प्रतिकूल प्रतिक्रिया को रोकने में मदद करता है। यह विश्लेषणगर्भवती महिलाओं के लिए भी अनुशंसित। कुछ महिलाओं में आईजीजी एंटीबॉडीज होते हैं, जो भ्रूण के रक्त में प्लेसेंटा को पार कर सकते हैं और नवजात शिशु को नुकसान पहुंचा सकते हैं, जिससे हेमोलिटिक एनीमिया नामक हेमोलिटिक बीमारी हो सकती है।

प्रक्रिया

आमतौर पर नस से सिरिंज का उपयोग करके रक्त लिया जाता है पीछे की ओरहथेली पर या कोहनी के मोड़ पर। इससे पहले, पंचर साइट को पूरी तरह से कीटाणुरहित किया जाता है, और रक्त परीक्षण लेने के बाद, साफ धुंध या रूई लगाई जाती है।

परिणामी रक्त को प्रयोगशाला में शुद्ध किया जाता है और लाल रक्त कोशिकाओं को अलग कर दिया जाता है। फिर नमूने का विभिन्न सीरम और कॉम्ब्स अभिकर्मकों का उपयोग करके क्रमिक रूप से परीक्षण किया जाता है, जिनकी तुलना की जाती है। यदि कोई एग्लूटिनेशन (लाल रक्त कोशिकाओं का जमना) नहीं है, तो इसका मतलब सकारात्मक परिणाम है।

हालाँकि, यदि परीक्षण नकारात्मक है, तो इसका मतलब है कि रक्त में एंटीबॉडी हैं जो लाल रक्त कोशिकाओं के खिलाफ कार्य करती हैं। इससे संकेत मिल सकता है विभिन्न रोग, जैसे एनीमिया (प्राकृतिक और दवाएँ लेने के कारण होने वाला दोनों), सिफलिस, या माइकोप्लाज्मा संक्रमण। परिणाम प्राप्त करने के बाद, उपस्थित चिकित्सक उचित उपचार लिखेंगे।

वीडियो

एंटीग्लोबुलिन सिद्धांत. एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर स्थित अपूर्ण प्रकार और पूरक अणुओं (सी) के एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है - एक प्रत्यक्ष परीक्षण - मानव एंटीग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) के एंटीबॉडी वाले पशु सीरम के संपर्क में उनके एग्लूटिनेशन द्वारा। सीरम में मुफ़्त अपूर्ण एंटीबॉडीपता लगाया जाता है - एक अप्रत्यक्ष परीक्षण - उन्हें समूह 0 के सामान्य एरिथ्रोसाइट्स के मिश्रण से जोड़कर, जिनमें से सभी एंटीजन ज्ञात आरएच प्रणाली से संबंधित होते हैं, और फिर एंटीग्लोबुलिन सीरम के प्रभाव में एग्लूटीनेटेड होते हैं।

कॉम्ब्स एंटीग्लोबुलिन परीक्षण के लिए सामग्री, अभिकर्मक: टेस्ट ट्यूब 10/100 मिली; स्नातक पिपेट 1, 2 मिली; पाश्चर पिपेट; तिपाई; भूमिगत ग्लास स्लाइड; 8.5‰ NaCl समाधान; लाल रक्त कोशिकाओं। रोगी की लाल रक्त कोशिकाएं, साथ ही समूह 0 से संबंधित, एक एंटी-क्लॉटिंग एजेंट (ईडीटीए समाधान) का उपयोग करके ताजा निकाले गए रक्त से प्राप्त की जाएंगी।

समूह 0 की लाल रक्त कोशिकाओं का चयन इस प्रकार किया जाना चाहिए कि वे सामान्य व्यक्तियों से आती हों और उनमें सभी शामिल हों आरएच प्रणाली एंटीजन. इन्हें ऑटोलॉगस प्लाज्मा में +4°C पर 7 दिनों तक संग्रहीत किया जा सकता है। समूह 0 लाल रक्त कोशिकाओं की अनुपस्थिति में, एक ज्ञात एंटीजेनिक मोज़ेक, समूह 0 लाल रक्त कोशिकाओं, आरएच-पॉजिटिव और आरएच-नकारात्मक लाल रक्त कोशिकाओं के मिश्रण का उपयोग किया जा सकता है।

सीरमरोगी को नये सिरे से चुना जाना चाहिए।

एंटीग्लोबुलिन सीरमसंस्थान द्वारा निर्मित. डॉ. आई. कैंटाकुज़िनो, 1 मिलीलीटर ampoules में लियोफिलाइज्ड रूप में उपलब्ध है। घुलने के बाद सीरम को -20°C पर स्टोर करें।

कॉम्ब्स एंटीग्लोबुलिन परीक्षण तकनीक:
ए) प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण: रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं को 8.5‰ NaCl घोल से 3 बार धोएं।
कई ग्लास स्लाइडों पर एंटीग्लोबुलिन सीरम के तनुकरण की एक बड़ी बूंद डालें, और उसके बगल में, रोगी के एरिथ्रोसाइट तलछट की एक छोटी बूंद डालें; बूंदों को गिलास के कोने से मिलाएं। तैयार सामग्री को 5 मिनट के लिए मेज पर छोड़ दें, फिर एग्लूटीनेट्स की उपस्थिति की जांच करें। कब सकारात्मक परिणामअधिकतम एग्लूटिनेटिंग टिटर निर्धारित करें।

बी) अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण: समूह 0, आरएच-पॉजिटिव और आरएच-नेगेटिव के एरिथ्रोसाइट्स, 8.5‰ NaCl समाधान के साथ 3 बार कुल्ला करें और एरिथ्रोसाइट्स की 2 बूंदों की दर से सीरम की 8-10 बूंदों की दर से रोगी के सीरम में रखें, फिर 60 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। 37° से का तापमान। इसके बाद, लाल रक्त कोशिकाओं को फिर से तीन बार धोएं और डायरेक्ट कॉम्ब्स परीक्षण के निर्देशों के अनुसार, उन्हें एंटीग्लोबुलिन सीरम से उपचारित करें।

जब यह आता है शीत सक्रिय एंटीबॉडी के बारे मेंसमूह 0 की लाल रक्त कोशिकाओं को 60 मिनट तक संवेदनशील बनाएं। + 4°C के तापमान पर।

टिप्पणी 1) +4 डिग्री सेल्सियस या कमरे के तापमान पर एक या कई दिनों तक संग्रहीत लाल रक्त कोशिकाओं पर सीधे कॉम्ब्स परीक्षण न करें, क्योंकि सामान्य सीरम में मौजूद अपूर्ण शीत-सक्रिय एंटीबॉडी के निर्धारण के कारण परिणाम गलत सकारात्मक हो सकते हैं। 2) गंभीर हाइपरप्रोटीनीमिया के मामलों में, लाल रक्त कोशिकाओं को 4-5 बार धोएं और सल्फोसैलिसिलिक एसिड का उपयोग करके अंतिम धोने वाले तरल में सीरम प्रोटीन की अनुपस्थिति की जांच करें।

एरिथ्रोसाइट तलछट में 2 μg IgG/ml का संभावित अवशेष हो सकता है एंटीग्लोबुलिन सीरम को निष्क्रिय करें. लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थित कोशिकाओं के प्रकार को स्पष्ट करने के लिए मोनोस्पेसिफिक एंटी-आईजीजी, -आईजीएम, -आईजीए -सी3 और -सी4 सीरा का उपयोग करके कॉम्ब्स परीक्षण भी किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, ऑटोइम्यून हेमोलिटिक से पीड़ित रोगियों में रक्ताल्पता.

पिपेट (अलग-अलग!) का उपयोग करके एक प्लेट या ग्लास स्लाइड पर सीरम O(I), A(II), B(III) की 1 बड़ी बूंद लगाएं। समय नोट करने के बाद, सीरम की बूंदों को रक्त की बूंदों के साथ मिलाने के लिए एक साफ कांच की छड़ या कांच की स्लाइड के एक साफ कोने का उपयोग करें। निर्धारण 5 मिनट तक चलता है, प्लेट को हिलाते हुए, फिर बूंदों के प्रत्येक मिश्रण में खारा घोल की 1 बूंद डालें और परिणामों का मूल्यांकन करें। सीरम 2 अलग-अलग सीरीज में आए तो बेहतर है। रक्त समूह के परिणाम दोनों सीरम लॉट में मेल खाने चाहिए।

आइसोहेमाग्लगुटिनेशन परिणामों का मूल्यांकन:

isohemagglutination. यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो मिश्रण में चिपकने वाली लाल रक्त कोशिकाओं के छोटे लाल दाने दिखाई देते हैं। दाने बड़े दानों में और बाद वाले गुच्छों में विलीन हो जाते हैं। सीरम लगभग फीका पड़ गया है;

यदि प्रतिक्रिया नकारात्मक है, तो मिश्रण 5 मिनट तक एक समान रंग का रहता है गुलाबी रंगऔर अनाज नहीं मिलता;

समूहों O(I), A(II), B(III) के 3 सीरा के साथ काम करते समय, प्रतिक्रियाओं के 4 संयोजन संभव हैं:

1. यदि सभी 3 सीरा ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी है, यानी, मिश्रण समान रूप से गुलाबी रंग का है - यह O(I) रक्त प्रकार है;

   अगर नकारात्मक प्रतिक्रियाकेवल समूह A(II) सीरम ने दिया, और O(I) और B(III) सीरा ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी, यानी दाने दिखाई दिए - यह A(II) रक्त समूह है;

   समूह B(II) के सीरम ने नकारात्मक प्रतिक्रिया दी, और समूह O(I) और A(II) के सीरम ने सकारात्मक प्रतिक्रिया दी - यह B(III) रक्त समूह है।

सभी 3 सीरम दिए सकारात्मक प्रतिक्रियाएँ- रक्त AB(IV) समूह का परीक्षण करें। इस मामले में, AB(IV) समूह सीरम के साथ एक अध्ययन किया जाता है।

टिप्पणी!परीक्षण किए जा रहे रक्त की बूंदें सीरम की बूंदों से 5-10 गुना छोटी होनी चाहिए।

आइसोहेमाग्लगुटिनेशन त्रुटियाँ।

जहां एग्लूटिनेशन होना चाहिए, वहां पर एग्लूटिनेशन करने में विफलता और जहां नहीं होना चाहिए, वहां एग्लूटिनेशन की उपस्थिति। यह कमजोर सीरम टिटर और खराब लाल रक्त कोशिका एग्लूटिनेशन के कारण हो सकता है।

एग्लूटिनेशन की उपस्थिति जहां नहीं होनी चाहिए- यह स्यूडोएग्लूटीनेशन है, जब लाल रक्त कोशिकाओं के ढेर "सिक्का स्तंभ" बनाते हैं। प्लेट को हिलाने या सेलाइन डालने से ये नष्ट हो जाते हैं।

पैनाग्लूटीनेशन, जब सीरम अपने स्वयं के रक्त प्रकार सहित सभी लाल रक्त कोशिकाओं को एक साथ चिपका देता है। 5वें मिनट तक एग्लूटिनेशन के लक्षण गायब हो जाते हैं।

तथाकथित कोल्ड पैनाग्लूटीनेशन भी होता है, जब कमरे में कम हवा के तापमान (15 डिग्री सेल्सियस से नीचे) के कारण लाल रक्त कोशिकाएं एक साथ चिपक जाती हैं।

इन सभी मामलों में, या तो बार-बार प्रतिक्रिया की जाती है, या मानक लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है।

Rh रक्त का निर्धारण

आरएच स्थिति निर्धारित करने के लिए, यानी, लोगों के रक्त में आरएच प्रणाली एंटीजन की उपस्थिति या अनुपस्थिति का पता लगाने के लिए, मानक एंटी-आरएच सीरा (अभिकर्मकों) का उपयोग किया जाता है, जो विशिष्टता में भिन्न होते हैं, यानी, इस प्रणाली के विभिन्न एंटीजन के लिए एंटीबॉडी युक्त होते हैं। आरएच 0 (डी) एंटीजन को निर्धारित करने के लिए, एंटी-रीसस सीरम का उपयोग अक्सर 10% जिलेटिन समाधान के साथ किया जाता है, या 33% पॉलीग्लुसीन समाधान के साथ पहले से तैयार मानक एंटी-रीसस अभिकर्मक का उपयोग किया जाता है। अधिक सटीक शोध परिणाम प्राप्त करने के लिए, साथ ही अन्य सीरोलॉजिकल प्रणालियों के एंटीजन का पता लगाने के लिए, कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग किया जाता है (यह ट्रांसफ्यूज्ड रक्त की अनुकूलता निर्धारित करने में भी बहुत संवेदनशील है)। शोध के लिए देशी रक्त या किसी परिरक्षक से तैयार रक्त का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, परिरक्षक से रक्त को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की दस गुना मात्रा से धोया जाना चाहिए। Rh स्थिति का निर्धारण करते समय- Rh 0 (D) दो अलग-अलग श्रृंखलाओं के सीरम या एंटी-रीसस अभिकर्मक के दो नमूनों का उपयोग किया जाना चाहिए और साथ ही Rh-पॉजिटिव (Rh +) और Rh-नेगेटिव (Rh-) रक्त से प्राप्त मानक लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाना चाहिए। नियंत्रण के लिए व्यक्तियों का उपयोग किया जाना चाहिए। अन्य आइसोएंटीजन का निर्धारण करते समय, लाल रक्त कोशिकाओं को नियंत्रित करें जिनमें एंटीजन होता है या कमी होती है जिसके खिलाफ मानक सीरम में एंटीबॉडी को निर्देशित किया जाता है, उसी के अनुसार उपयोग किया जाना चाहिए।

आंशिक ताप एग्लूटीनिन सबसे आम प्रकार के एंटीबॉडी हैं जो ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के विकास का कारण बन सकते हैं। ये एंटीबॉडी आईजीजी से संबंधित हैं, शायद ही कभी आईजीएम, आईजीए से।

कूम्ब्स परीक्षण

कॉम्ब्स परीक्षण: परिचय।कॉम्ब्स परीक्षण हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया पर आधारित एक प्रयोगशाला निदान पद्धति है।

ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया के निदान की मुख्य विधि कॉम्ब्स परीक्षण है। यह आईजीजी या एस3 से लेपित एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने के लिए इम्युनोग्लोबुलिन (विशेष रूप से आईजीजी) या पूरक घटकों (विशेष रूप से एस3) के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की क्षमता पर आधारित है।

आईजीजी और सी3बी का एरिथ्रोसाइट्स से बंधन ऑटोइम्यून हेमोलिटिक एनीमिया और दवा-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया में देखा जाता है। प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण.प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर एंटीबॉडी या पूरक घटकों का पता लगाने के लिए किया जाता है। इसे इस प्रकार किया जाता है:

मानव इम्युनोग्लोबुलिन (एंटीग्लोबुलिन सीरम) या पूरक (एंटीकॉम्प्लिमेंटरी सीरम) के प्रति एंटीबॉडी प्राप्त करने के लिए, पशु को मानव सीरम, इम्युनोग्लोबुलिन या मानव पूरक से प्रतिरक्षित किया जाता है। पशु से प्राप्त सीरम को एंटीबॉडी से लेकर अन्य प्रोटीन तक शुद्ध किया जाता है।

सीरम को पूरी तरह से हटाने के लिए रोगी की लाल रक्त कोशिकाओं को खारे पानी से धोया जाता है, जो इम्युनोग्लोबुलिन और पूरक एंटीबॉडी को निष्क्रिय कर देता है और गलत नकारात्मक परिणाम पैदा कर सकता है।

यदि एंटीबॉडी या पूरक घटक लाल रक्त कोशिकाओं की सतह पर स्थिर होते हैं, तो एंटीग्लोबुलिन या एंटी-पूरक सीरम के जुड़ने से लाल रक्त कोशिकाओं का एकत्रीकरण होता है।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

ऑटोइम्यून हेमोलिसिस।

नवजात शिशुओं का हेमोलिटिक रोग।

दवा-प्रेरित प्रतिरक्षा हेमोलिटिक एनीमिया।

हेमोलिटिक आधान प्रतिक्रियाएं। अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण.अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण सीरम में लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाता है। ऐसा करने के लिए, रोगी के सीरम को समूह 0 दाता लाल रक्त कोशिकाओं के साथ जोड़ा जाता है, और फिर एक सीधा कॉम्ब्स परीक्षण किया जाता है।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग निम्नलिखित मामलों में किया जाता है:

दाता और प्राप्तकर्ता रक्त की व्यक्तिगत अनुकूलता का निर्धारण।

एलोएंटीबॉडी का पता लगाना, जिसमें एंटीबॉडी भी शामिल हैं जो हेमोलिटिक ट्रांसफ्यूजन प्रतिक्रियाओं का कारण बनते हैं।

चिकित्सा आनुवंशिकी और फोरेंसिक चिकित्सा में सतह एरिथ्रोसाइट एंटीजन का निर्धारण।

अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण के दौरान एक जैसे जुड़वाँ बच्चों की पुष्टि।

जैविक परीक्षण करने के लिए, जितनी जल्दी हो सके रक्त चढ़ाया जाना शुरू हो जाता है (अधिमानतः एक धारा में)। 25 मिलीलीटर रक्त चढ़ाने के बाद सिस्टम ट्यूब को एक क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। फिर 3 मिनट के लिए विराम होता है, जिसके दौरान प्राप्तकर्ता की स्थिति की निगरानी की जाती है। जैविक परीक्षण करने के लिए 25 मिलीलीटर रक्त तीन बार इंजेक्ट किया जाता है।परीक्षण के अंत में (3 मिनट के अंतराल पर 25 मिलीलीटर की आंशिक खुराक में पहले 75 मिलीलीटर रक्त के आधान के बाद), सिस्टम को आवश्यक आधान दर पर समायोजित किया जाता है। किसी मरीज को एक से अधिक बोतल खून चढ़ाने पर सुई को नस से निकालना जरूरी होता है। इस मामले में, जिस शीशी में खून खत्म हो गया है, उसकी टेस्ट ट्यूब से सुई निकालकर अगली शीशी में डाल दी जाती है। सिस्टम ट्यूब (रबर या प्लास्टिक) को इस समय एक क्लैंप से जकड़ दिया जाता है। यदि रक्त आधान के दौरान प्राप्तकर्ता को अंतःशिरा के माध्यम से कोई अन्य दवा देना आवश्यक हो जाता है, तो यह सिस्टम की रबर ट्यूब में छेद करके किया जाता है। प्लास्टिक ट्यूब में छेद करना अस्वीकार्य है, क्योंकि वे गिरते नहीं हैं। प्रत्येक रक्त आधान के बाद, रोगी की पहचान करने और तुरंत समाप्त करने के लिए उसकी निगरानी की जानी चाहिए संभावित जटिलताएँ, शामिल एलर्जी. रक्त आधान की समाप्ति के 2 घंटे बाद शरीर का तापमान मापा जाना चाहिए। यदि यह बढ़ता है, तो माप अगले 4 घंटों तक हर घंटे दोहराया जाना चाहिए। पेशाब और मूत्र संरचना की निगरानी करना भी उतना ही महत्वपूर्ण है, जिससे ट्रांसफ्यूजन के बाद विषाक्त प्रतिक्रिया की उपस्थिति स्थापित करना संभव हो जाता है। रक्त आधान के बाद ओलिगुरिया और औरिया की शुरुआत, मूत्र में रक्त कोशिकाओं और प्रोटीन की उपस्थिति, रक्त आधान के बाद हेमोलिसिस के विकास का प्रत्यक्ष संकेत है।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण. इस परीक्षण का उपयोग बच्चे की लाल रक्त कोशिकाओं में स्थिर अवरोधक एंटीबॉडी की उपस्थिति को साबित करने के लिए किया जाता है। एक सकारात्मक प्रत्यक्ष परीक्षण संवेदीकरण को इंगित करता है और अन्य की उपस्थिति से पहले ही नवजात शिशु के हेमोलिटिक रोग का एक ठोस संकेत के रूप में कार्य करता है। चिकत्सीय संकेत. एक अपवाद के रूप में और केवल बहुत गंभीर मामलों में, संवेदी लाल रक्त कोशिकाओं के पहले से ही होने वाले, लगभग पूर्ण हेमोलिसिस के कारण प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण नकारात्मक हो सकता है।

प्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षण इस प्रकार किया जाता है: बच्चे की एड़ी से ली गई रक्त की 5 बूंदों को एक टेस्ट ट्यूब में रखा जाता है और 5 मिलीलीटर सेलाइन मिलाया जाता है। अच्छी तरह से हिलाएं और 10 मिनट तक सेंट्रीफ्यूज करें। लाल रक्त कोशिका तलछट के ऊपर का स्पष्ट तरल अलग हो जाता है। फिर दोबारा 5 मिलीलीटर सेलाइन डालें, मिलाएं और सेंट्रीफ्यूज करें। तीन बार सेलाइन में मिलाने के बाद लाल रक्त कोशिकाएं अच्छी तरह से धुल जाती हैं। सतह पर तैरनेवाला के अंतिम पृथक्करण के बाद, 0.1 मिलीलीटर की मात्रा में एरिथ्रोसाइट तलछट को 0.9 मिलीलीटर शारीरिक समाधान के साथ मिलाया जाता है। इस मिश्रण की 2-3 बूंदें कांच की स्लाइड पर लगाएं और एक बूंद कॉम्ब्स सीरम की मिलाएं। एग्लूटिनेशन की उपस्थिति इंगित करती है कि प्रतिक्रिया सकारात्मक है (पॉजिटिव डायरेक्ट कॉम्ब्स टेस्ट)। ठंडे एग्लूटीनिन के प्रभाव से बचने के लिए अध्ययन 16° से ऊपर के कमरे के तापमान पर किया जाना चाहिए।

अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स परीक्षणयह मातृ सीरम में मुक्त एंटीबॉडी की उपस्थिति के प्रमाण के रूप में कार्य करता है और मातृ सीरम के साथ किया जाता है।

Rh असंगति वाले नवजात शिशु में हेमोलिटिक रोग आमतौर पर दूसरी गर्भावस्था के बाद ही प्रकट होता है। पहला बच्चा स्वस्थ पैदा होता है, दूसरा हल्के एनीमिया के लक्षण के साथ पैदा होता है, और तीसरी गर्भावस्था के बाद ही बच्चे पैदा होते हैं स्पष्ट संकेतहेमोलिटिक रोग. केवल पूर्व-संवेदनशील महिलाएं ही अपनी पहली गर्भावस्था के दौरान हेमोलिटिक रोग के लक्षणों वाले बच्चे को जन्म दे सकती हैं। कुछ मामलों में, टीकाकरण गर्भपात और जन्म का कारण बनता है मृत बच्चे. रोग की शुरुआत और गंभीरता के लिए, नाल की स्थिति और भ्रूण पर मातृ एग्लूटीनिन के संपर्क की अवधि महत्वपूर्ण है। जब एग्लूटीनिन जन्म से 10-14 सप्ताह पहले प्रकट होता है, तो बच्चा आमतौर पर उपनैदानिक ​​​​रूपों का अनुभव करता है। जन्म से 15-26 सप्ताह पहले एग्लूटीनिन की प्रारंभिक उपस्थिति का कारण बनता है गंभीर रूपरोग। रोग के सभी रूपों में, मुख्य प्रक्रिया हेमोलिसिस है। एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया का परिणाम हेमोलिसिस, यकृत और मस्तिष्क केशिकाओं को नुकसान होता है। इस पर निर्भर करते हुए कि कौन सा घाव प्रबल है, वहाँ भी हैं विभिन्न आकाररोग। कुछ एनाफिलेक्टिक घटनाएं भी खतरनाक हैं। वे हिस्टामाइन जैसे पदार्थों के निर्माण की ओर ले जाते हैं, जिससे यकृत कोशिकाओं और विशेष रूप से बेसल गैन्ग्लिया, अम्मोन हॉर्न की गैंग्लियन कोशिकाओं को गंभीर नुकसान होता है। मेडुला ऑब्लांगेटाऔर यहां तक ​​कि सेरेब्रल कॉर्टेक्स भी। जब यकृत कोशिकाएं क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, तो यकृत पीलिया को एक्स्ट्राहेपेटिक पीलिया में जोड़ा जाता है। कर्निकटरस के गंभीर लक्षणों के कारण बच्चों की मृत्यु हो जाती है। यदि वे जीवित रहते हैं, तो घावों के लक्षण बने रहते हैं तंत्रिका तंत्र(कोरियोएथेटोटिक गतिविधियों के साथ एक्स्ट्रामाइराइडल प्रणाली के विकार, एक अजीब नृत्य चाल, जबरन सिर हिलाना, कभी-कभी समन्वय विकार स्वैच्छिक गतिविधियाँबार-बार गिरने के साथ, बढ़ा हुआ स्वरमांसपेशियों, मानसिक मंदता, यानी तथाकथित के संकेतों के साथ। एन्सेफैलोपैथिया पोस्टिक्टेरिया इन्फेंटम)।