Zāļu pretmikrobu aktivitātes kritēriji ir minimālā inhibējošā koncentrācija(MIC) un minimālā baktericīda koncentrācija(MBK). MIC ir zemākā antibiotiku koncentrācija, kas pilnībā inhibē in vitro redzams baktēriju augšana. To izsaka mg/l vai μg/ml. MBC ir zemākā antibiotikas koncentrācija, kas izraisa baktericīdu iedarbību. Lai to noteiktu, ir nepieciešams inokulēt mēģenes, kurās vizuāli nav augšanas uz blīvu barības vielu agaru, kas nesatur antibiotiku. Šim rādītājam ir liels klīniskā nozīme. Pamatojoties uz sērijveida atšķaidīšanas metodi, ir izveidotas mikrometodes, kas ietver mazāka tilpuma uzturvielu barotnes izmantošanu. Pašlaik, lai veiktu šāda veida pētījumus, tiek ražoti daudzi komerciāli komplekti, kas sastāv no žāvētiem stabilizētiem antibiotiku atšķaidījumiem uzturvielu vidē, kas tiek atšķaidīti ar testa mikroba suspensiju. Šos komplektus var uzglabāt normāli apstākļi, tādējādi novēršot nepieciešamību sagatavot barotnes un antibiotiku atšķaidījumus laboratorijā. Mikroatšķaidīšanas testiem ir arī priekšrocība, ka tie ir iekļauti automatizētā sistēmā.
Pamatojoties uz iegūtajiem datiem (augšanas inhibīcijas zonas diametrs jeb MIC vērtība), mikroorganismus iedala jutīgos, vidēji izturīgos un rezistentos. Lai atšķirtu šīs kategorijas, tiek izmantotas tā sauktās antibiotiku robežkoncentrācijas, kas nav nemainīgas vērtības. Tie tiek pārskatīti, mainoties mikrobu populācijas jutīgumam. Interpretācijas kritēriju izstrādi un pārskatīšanu veic vadošie speciālisti (ķīmijterapeiti, mikrobiologi), kas ir speciālo komiteju locekļi. Viena no tām ir Nacionālā klīnisko laboratoriju standartu komiteja ( N valsts C ommitteefor C klīnisks L aboratorija S tandards – NCCLS), organizēts ASV. Pašlaik NCCLS standarti tiek izmantoti kā starptautiskie standarti, lai novērtētu baktēriju jutības noteikšanas rezultātus daudzcentru mikrobioloģiskās un klīniskie pētījumi.
Baktēriju jutības noteikšana pret antibiotikām. Mikroorganismu jutības pret antibiotikām kritērijs ir antibiotikas minimālā inhibējošā koncentrācija (MIC), kas aizkavē patogēna augšanu standarta eksperimenta apstākļos.
Lai noteiktu zāļu rezistenci, tās inokulēšanai izmanto katru dienu no pacienta ķermeņa izolētu patogēna tīrkultūru un standarta barotni (AGV vai Muellera-Hintona agaru).
Mikroorganismu jutības noteikšana pret antibiotikām tiek veikta, izmantojot diska difūzijas metodi vai antibiotiku sērijveida atšķaidījumu metodi šķidrā vai cietā vidē.
Diska difūzijas metode. Jutības noteikšana pret antibiotikām, izmantojot papīra diska metodi, balstās uz antibiotikas difūziju barības vielu vidē. Antibiotiku koncentrācija diskos tiek izvēlēta tā, lai standarta testa mikroorganismu augšanas kavēšanas zonu diametri atbilstu. starptautiskajiem standartiem. Šī koncentrācija atbilst vidējai terapeitiskajai devai standarta mikroorganismu celmiem.
Sagatavoto mikroorganismu suspensiju inokulē uz īpašas barotnes (AGV vai Muellera-Hintona agara) virsmas Petri trauciņos. Pēc tam, izmantojot sterilas pincetes, uz inokulētās virsmas vienādā attālumā viens no otra, no krūzes malām un centra (var izmantot arī speciālas ierīces un dozatorus) uzliek standarta papīra diskus, kas samērcēti dažādu antibiotiku šķīdumos. Inokulētie trauki tiek turēti termostatā temperatūrā, kas ir optimāla pētāmo baktēriju augšanai. Ja baktērijas ir jutīgas pret šo antibiotiku, ap disku veidosies augšanas kavēšanas zona. Augšanas inhibīcijas zonas diametrs atbilst pētāmā mikroorganisma jutības pakāpei pret konkrēto antibiotiku. Gala rezultāts tiek novērtēts, izmantojot īpašas tabulas, kurās norādīti standarta kultūraugu augšanas kavēšanas zonu diametri, jutīgi, izturīgi un vidēji izturīgi.
Diska metode nesniedz ticamus datus, nosakot mikroorganismu jutību pret polipeptīdu antibiotikām, kas slikti izkliedējas agarā (piemēram, polimiksīns, ristomicīns). Tāpat šī metode neļauj noteikt minimālo antibiotikas inhibējošo koncentrāciju.
Sērijas atšķaidīšanas metode.Šī metode nosaka minimālā koncentrācija antibiotika, kas kavē pētāmās baktēriju kultūras (MIC, MIC) augšanu. Lai to izdarītu, vispirms sagatavojiet izejas šķīdumu, kas satur noteiktu antibiotikas koncentrāciju (µg/ml vai vienības/ml) īpašā šķīdinātājā vai buferšķīdumā. Pēc tam no galvenā šķīduma sagatavo visus nākamos buljona atšķaidījumus (1 ml tilpumā), pēc tam katram atšķaidījumam pievieno 0,1 ml testa baktēriju suspensijas, kas satur 10 6–10 7 baktēriju šūnas 1 ml. Pēdējā mēģenē pievieno 1 ml buljona (bez antibiotikām) un 0,1 ml baktēriju suspensijas (kultūras kontrole). Kultūrus inkubē 37 0 C temperatūrā līdz nākamajai dienai, pēc tam eksperimenta rezultātus atzīmē ar barības barotnes duļķainību, salīdzinot ar kontroli. Pēdējā mēģene ar caurspīdīgu barotni norāda uz pētāmās baktēriju kultūras augšanas aizkavēšanos tajā esošās antibiotikas minimālās inhibējošās (inhibējošās) koncentrācijas (MIC, MIC) ietekmē. Lai novērtētu minimālo baktericīdo koncentrāciju (MBC), sēšana tiek veikta uz cietas barotnes bez antibiotikas no mēģenēm bez augšanas. Tiek uzskatīts, ka MBC ir minimālā antibiotikas koncentrācija, kas izraisa mikroorganisma nāvi, ko raksturo augšanas trūkums Petri trauciņos ar uzturvielu barotni.
Antibiotikas sērijveida atšķaidīšanas metode agara vidē.Šajā gadījumā vienā eksperimentā ir iespējams pārbaudīt vairāku mikroorganismu kultūru jutību pret dažādām konkrētās antibiotikas koncentrācijām. Sterilā agara barotnē sagatavo dažādus antibiotikas atšķaidījumus. Lai to izdarītu, pievienojiet nepieciešamo sākotnējo antibiotiku šķīduma daudzumu, rūpīgi samaisiet un ielejiet sterilos Petri trauciņos. Pēc agara sacietēšanas krūzes dibenu no ārpuses sadala sektoros ar marķieri. Katra pētāmā kultūra tiek uzvilkta, izmantojot bakterioloģisku cilpu, uz noteikta sektora traukos ar atšķirīgu antibiotikas koncentrāciju. Izpētīto kultūru sēšanu uz traukiem ar dažādu antibiotiku koncentrāciju var veikt, izmantojot aplikatoru, kas ļauj vienā traukā vienlaicīgi inokulēt 12-15 kultūras. Pēc tam traukus ievieto termostatā temperatūrā, kas ir optimāla pētāmo baktēriju augšanai un attīstībai. Rezultātus ņem vērā, ņemot vērā baktēriju augšanas esamību vai neesamību, salīdzinot ar augšanu uz barotnes kontroles plāksnē. Baktērijas tiek uzskatītas par jutīgām pret antibiotiku tādā koncentrācijā, kurā to augšana tiek pilnībā kavēta.
E-testa metode.Šī metode apvieno sērijas atšķaidīšanas metodes un diska metodes priekšrocības. Disku vietā tiek izmantotas ar antibiotiku piesūcinātas filtrpapīra sloksnes (“lineāli”), un sloksnes pamatnē antibiotikas koncentrācija būs minimāla, bet “augšā” – maksimālā. Sloksnes novieto uz barības vielu agara virsmas, kas iesēta ar pētāmo kultūru. Ja baktērijas ir jutīgas pret šo zāļu iedarbību, ap sloksnes zonām, kurās ir tās inhibējošās koncentrācijas, parādās elipsoidāla augšanas kavēšanas zona. Skaitliskā vērtība antibiotikas koncentrācija šīs zonas pamatnē norāda šīs antibiotikas MIC konkrētai kultūrai.
UZ jūtīgs Tie ietver mikroorganismu celmus, kuru augšana tiek kavēta zāļu koncentrācijās, kas atrodamas pacienta asins serumā, lietojot parastās antibiotiku devas.
UZ vidēji stabils Tie ietver celmus, kuru augšanas inhibīcijai nepieciešama koncentrācija, kas rodas asins serumā, ievadot maksimālās zāļu devas.
Ilgtspējīgs ir mikroorganismi, kuru augšanu zāles nenomāc koncentrācijās, kas rodas organismā, lietojot maksimālās pieļaujamās devas.
Kontroles jautājumi.
Definējiet terminu "antibiotikas". Galvenās antibiotiku grupas atkarībā no pagatavošanas metodes: dabīgas, daļēji sintētiskas, sintētiskas. Nosauciet zinātnieku, kurš izstrādāja ķīmijterapijas teoriju. Kādas īpašības ir izšķirošas, izvēloties ķīmijterapijas zāles? Kāds ir ķīmijterapijas indekss, uzrakstiet tā formulu, kādam tam jābūt? Norādiet pirmās antispirohetālās zāles; vispirms antibakteriālas zāles un zinātnieka vārds, kurš to saņēma. Kā sauc tos krievu zinātniekus, kuri pirmo reizi atklāja zaļās pelējuma antibakteriālās īpašības? Nosauciet zinātnieku, kurš pētīja Penicillium pelējuma antibakteriālās īpašības un mēģināja izolēt penicilīnu. Zinātnieki, kuri pirmo reizi saņēma penicilīna preparātus. Antibiotiku ražotāji - sniedziet piemērus. Antibiotiku klasifikācija pēc izcelsmes, ķīmiskais sastāvs, atbilstoši darbības spektram. Antibiotiku darbības mehānisms: mērķi (antibiotiku lietošanas punkti dažādas grupas). Darbības veidi - baktericīds un bakteriostatisks; kā tos noteikt in vitro eksperimentā? Pretvīrusu antibiotikas, to darbības mehānismi. Kādās vienībās mēra antibiotiku aktivitāti? Antibiotiku uzglabāšanas nosacījumi.
Nosauciet un aprakstiet iespējamu blakus efekti ar antibiotiku terapiju. Definējiet jēdzienu "mikrobu rezistence pret zālēm". Zāļu rezistences veidi. Dabiskais un iegūtais (primārā un sekundārā). Zāļu rezistences ģenētiskie mehānismi: hromosomu un plazmīdu. Zāļu rezistences fenotipiskie mehānismi - nosauc un raksturo. Racionāla antibiotiku lietošana - nosauc metodes. Nosauciet zāles, kas ir enzīmu inhibitori, kas iznīcina antibiotikas. Aprakstiet metodes mikrobu jutības noteikšanai pret antibiotikām.
Analīze par baktēriju spēju vairoties un augt barotnēs, kurās koncentrācija samazinās ārstnieciska viela, ļauj noteikt antibiotikas minimālo inhibējošo koncentrāciju (MIK), baktēriju inhibējošo lomu in vitro (3. tabula (vet7)). Šīs devas lielums nosaka tādu zāļu izvēli, kuras var sasniegt līdzīgu koncentrāciju in vivo, un tas ir pamats ķermeņa relatīvās jutības salīdzināšanai ar citām zālēm. Tiek uzskatīts, ka, lai nodrošinātu efektivitāti, zāļu vielas koncentrācijai infekcijas vietā jābūt vismaz vienāds ar vērtību minimālā inhibējošā antibiotikas koncentrācija. No otras puses, zāļu koncentrācijai plazmā parasti jābūt augstākai, lai nodrošinātu adekvātu koncentrāciju audos. Taču nepamatota pretmikrobu zāļu devu palielināšana, lai sasniegtu minimālo antibiotikas devu, kas in vitro kavē noteikta veida baktēriju augšanu, var izraisīt zāļu uzkrāšanos recipienta organismā toksiskās devās.
“Kritiskā MIC” konkrētai zāļu vielai ir augstākā pamatoti drošā zāļu koncentrācija, ko var sasniegt, izmantojot klīniski pieņemamu zāļu devu un ievadīšanas veidu (3. tabula (vet7)). MIC ir atkarīgs no konkrētā baktēriju kultūras veida un konkrētā zāļu vielas veida. Tajā pašā laikā kritiskā MIC ir raksturīga konkrētam saņēmējam un konkrētai zāļu vielai. Tādējādi jebkuram organismam kritiskā MIC būs vienāda (3. tabula (vet7)). Kritiskās koncentrācijas vērtība konkrētam organismam var atšķirties atkarībā no dzīvnieku sugas (jutīguma vai izplatības modeļu atšķirību dēļ). medicīna) un īpašu laboratoriju. Lai iegūtu pētījumos izmantotās kritiskās vērtības, jāsazinās ar laboratoriju, kas sniedz datus par kultivēšanas metodēm un jutību pret antibiotikām.
Pamatojoties uz in vitro atšķaidīšanas datiem, baktērijas tiek klasificētas kā jutīgas (S) pret konkrētu medikamentu, ja MIC ir ievērojami zem šī indikatora kritiskās vērtības. Patogēno mikroorganismu ar vidēju (MS) vai vidēju (IS) jutības vērtību augšana tiek kavēta, kad zāļu koncentrācija tuvojas kritiskajai MIC vērtībai. Šādas baktērijas var izraisīt negatīvas reakcijas pacienta ķermenī vai arī to neietekmēt. MIC rezistentajām (R) baktērijām pārsniedz kritiskā vērtība minimālā deva. Šādas zāles, kas ietekmē konkrētu mikroorganismu, efektīva koncentrācija pacienta organismā, visticamāk, netiks sasniegta. Šādos gadījumos zāļu uzkrāšanās risks toksiskās devās var arī pārsniegt potenciālie ieguvumi no terapijas izmantošanas. Jaunās paaudzes antibakteriālo antibiotiku kritisko minimālo devu dažos gadījumos ir grūtāk noteikt, jo notiek pāreja uz profesionālu elastīgu devu diapazonu marķēšanu.
Medikamenti jāizvēlas tā, lai, tos ievadot saskaņā ar shēmu, kas novērš zāļu uzkrāšanos toksiskās devās, ir iespējams sasniegt maksimālo zāļu koncentrāciju plazmā, kas ievērojami pārsniedz MIC. Daudzas baktērijas būs jutīgas pret konkrētu zāļu iedarbību, ja koncentrācija ir krietni zem kritiskās minimālās devas. Atšķirība starp kritisko vērtību un īpašvērtība MIC var izmantot, lai salīdzinātu dažādu pretmikrobu līdzekļu relatīvo efektivitāti. Piemēram, amikacīnam kritiskā vērtība ir 32 μg/ml, tāpēc E. coli ar MIC 2 μg/ml ir relatīvi jutīgāka pret amikacīnu nekā E. coli ar MIC 16 μg/ml. Abas sugas jāuzskata par jutīgām (lai gan otrās sugas var uzskatīt par vidēji jutīgām), taču pirmās sugas baktēriju augšana, šķiet, tiek kavēta lielākā mērā. Ja tās pašas sugas E. coli ar MIC vērtību 2 μg/ml attiecībā pret amoksicilīnu MIC vērtība ir 16 μg/ml (ar kritisko vērtību 32 μg/ml), tad šī mikroorganisma augšana, domājams, būtu vieglāk novērst, lietojot amikacīnu, nevis amoksicilīnu, jo amikacīna MIC vērtība ir tālāk no tā kritiskās MIC vērtības nekā amoksicilīna MIC vērtība.
Lai gan atšķirības starp MIC vērtībām konkrētai baktēriju sugai un konkrētam medikamentam (16 vai 32) var šķist diezgan lielas (jo īpaši saistībā ar zāļu plazmas koncentrācijas robežvērtību), šāda atšķirība atbilst tikai vienam šķīdumam mēģene. Šis ir jutīguma datu pārvērtēšanas briesmu piemērs. Ja konkrēta organisma MIC vērtība ir pietiekami tuvu kritiskajai vērtībai, tad iespējamo interpretācijas atšķirību dēļ šim mikroorganismam vienā laboratorijā var piešķirt jutības pakāpi “S” vai “MS”, bet “R” citu iespējamo interpretācijas atšķirību dēļ. Šādas iespējamās neatbilstības novērtējumā ir viens no iemesliem, kāpēc jāizvairās no tādu zāļu lietošanas, pret kurām konkrētam organismam ir jutība pret MS (vai ja MIC vērtība ir tuvu kritiskajai), ja vien zāļu koncentrācija infekcijas vietā nevar būt daudz lielāka. augstāka par MIC vērtību, kas noteikta in vitro testā. Ilustratīvs piemērs varētu būt ar nierēm izvadītu zāļu lietošana infekciju ārstēšanai. urīnceļu vai ar žulti izvadītu medikamentu lietošana infekcijas ārstēšanai žults ceļu. Dažu zāļu (fluorhinolonu, makrolīdu) uzkrāšanās leikocītu ietekmē var izraisīt arī zāļu koncentrāciju audos, kas ievērojami pārsniedz MIC (vai kritisko MIC vērtību), neskatoties uz zemāku koncentrāciju plazmā.
Baktēriju MIC var mainīties turpmāko infekciju laikā, ko izraisa vienas un tās pašas sugas baktērijas, un var mainīties arī infekcijas slimības gaitā. MIC palielināšanās var vienkārši atspoguļot atšķirīgu pieeju testa novērtēšanai (īpaši, ja atšķirības tiek konstatētas tikai ar in vitro atšķaidīšanu), bet tas var būt arī saistīts ar rezistences attīstību pret konkrētu medikamentu. Šādos gadījumos pretmikrobu terapijas kursu var mainīt, lietojot papildus medikamentu vai pārejot uz jaunu, efektīvāku. efektīvas zāles. Polimikrobu infekciju gadījumā konkrētas zāles MIC vērtība katrai inficētajai baktērijai, visticamāk, būs atšķirīga. Tiek uzskatīts, ka ir vieglāk novērst baktēriju augšanu ar zema vērtība MIC attiecībā pret konkrētu zāļu vielu nekā tāda mikroorganisma augšana ar augstāku MIC vērtību attiecībā pret to pašu zāļu vielu.
(MIC) - minimālā inhibējošā (supresīvā) koncentrācija - zemākā antibiotikas koncentrācija, kas kavē pētāmā mikroorganisma redzamo augšanu in vitro(buljonā vai agara barotnē) standarta eksperimenta apstākļos, un to izsaka µg/ml (mg/l) vai vienībās/ml.
Minimālā baktericīda koncentrācija (MBC) - zemākā antibiotikas koncentrācija, kas pētījumā in vitro izraisa 99,9% mikroorganismu nāvi no bāzes līnija noteiktā laika periodā.
Jūtīgs mikroorganisms - mikroorganisma celms, kam nav rezistences mehānismu pret konkrēto medikamentu. To pārtrauc uz barotnes, kad antibiotika tiek lietota terapeitiskā devā.
Vidēji izturīgs mikroorganisms - mikroorganisma celms, kura augšana uz uzturvielu barotnes apstājas tikai tad, kad antibiotika tiek lietota lielākajā devā. Vidēji rezistentu mikroorganismu izraisītu infekciju ārstēšana tiek veikta, ja nav alternatīvu zāļu, izmantojot lielāko (maksimālo terapeitisko) antibiotikas devu.
Izturīgs mikroorganisms - mikroorganisma celms, kam ir rezistences mehānismi pret noteiktām zālēm. Tā augšana uz barotnes apstājas tikai tad, ja tiek lietotas ļoti augstas zāļu koncentrācijas, kuras nevar izveidot organismā to augstās toksicitātes dēļ. Ārstējot šī mikroorganisma izraisītas infekcijas, terapijai nav klīniska efekta, pat lietojot lielāko antibiotiku devu. Šajā gadījumā var novērot blakus efekti antibiotika.
Indikācijas mikroorganismu jutības noteikšanai pret antibiotikām:
1) jutības noteikšana pret jaunu lietošanai ieteicamo antibiotiku;
2) periodiska antibiotiku rezistences uzraudzība indivīdā medicīnas centri un dažādos ģeogrāfiskos reģionos, lai uzraudzītu antibiotiku rezistences izplatību;
3) adekvātas antibiotiku terapijas pamatojums atsevišķiem pacientiem šādos gadījumos:
a) mikroorganismu izolēšana no primāri steriliem šķidrumiem, orgāniem un cilvēka audiem;
b) izolējot mikroorganismus no galvenokārt nesteriliem biotopiem, pirms jutīguma novērtējuma jānovērtē izolētā mikroorganisma klīniskā nozīme;
c) pret zālēm rezistentas infekcijas empīriskā terapija;
d) unikālas infekcijas un pieredzes trūkums to ārstēšanā;
e) infekcijas, kurām nepieciešama ilgstoša terapija (rezistence pret antibiotikām tiek konstatēta katru terapijas nedēļu, jo iespējamas patogēnu izmaiņas).
Mikroorganismu jutības noteikšana pret antibiotikām nav piemērota:
1) pārstāvjiem normāla mikroflora cilvēki, ja tie ir izolēti no dabiskajiem biotopiem;
2) mikroorganismu veidiem, kuriem nav aprakstītas rezistentas formas pret noteiktām antibiotikām. Piemēram, Streptococcus pyogenes ir jutīgs pret penicilīnu, tāpēc jutīguma pārbaude pret šīm zālēm nav praktiska ikdienas praksē.
Tēmas “Jūtības noteikšanas metodes pret antimikrobiālajiem līdzekļiem” satura rādītājs. Blakus efekti antibiotiku terapija.":Metodes jutības noteikšanai pret pretmikrobu līdzekļiem. Minimālā inhibējošā koncentrācija (MIC). Metode sērijveida atšķaidīšanai šķidrā vidē.
Konkrētas zāles darbības kritēriji ir minimālā inhibējošā koncentrācija (MIC) - zemākā zāļu koncentrācija, kas kavē testa kultūras augšanu un minimālā baktericīda koncentrācija (MBK) - zemākā zāļu koncentrācija, kas izraisa baktericīdu iedarbību.
Metode sērijveida atšķaidīšanai šķidrā vidē
Metode sērijveida atšķaidīšanai šķidrā vidēļauj instalēt minimālā inhibējošā koncentrācija (MIC) Un minimālā baktericīda koncentrācija (MBK) zāles izolētajam patogēnam. Pētījumus var veikt dažāda tilpuma uzturvielu barotnē (1-10 ml). Izmantojiet šķidru uzturvielu barotni, kas atbilst patogēna uztura vajadzībām. Mēģenēs (parasti astoņās) barības vielu barotnē sagatavo zāļu dubulto atšķaidījumu sēriju. Koncentrāciju attiecīgi samazina no 128 līdz 0,06 μg/ml (bāzes koncentrācija var mainīties atkarībā no zāļu aktivitātes). Barotnes galīgais tilpums katrā mēģenē ir 1 ml. Mēģene, kurā ir tīra barotne, kalpo kā kontrole. Katrai mēģenei pievieno 0,05 ml fizioloģiskā šķīduma, kas satur 106/ml mikrobu šūnas. Mēģenes inkubē 10–18 stundas 37 °C temperatūrā (vai līdz brīdim, kad kontroles mēģenē parādās baktēriju augšana). Pēc noteiktā perioda rezultātus ņem vērā vides optiskā blīvuma izmaiņas vizuāli vai nefelometriski. Var izmantot arī modificētu metodi, izmantojot barotni, kas papildināta ar glikozi un indikatoru. Mikroorganismu augšanu pavada barotnes pH izmaiņas un attiecīgi indikatora krāsa.
