Aglutinācijas reakcija, lai noteiktu anti-rēzus antivielas ( netieša reakcija Kumbsa)pieteikties pacientiem ar intravaskulāru hemolīzi. Dažiem no šiem pacientiem tiek konstatētas anti-Rēzus antivielas, kas ir nepilnīgas un monovalentas. Tie īpaši mijiedarbojas ar Rh pozitīviem eritrocītiem, bet neizraisa to aglutināciju. Šādu nepilnīgu antivielu klātbūtni nosaka ar netiešo Kumbsa testu. Lai to izdarītu, anti-Rh antivielu + Rh pozitīvo eritrocītu sistēmai tiek pievienots antiglobulīna serums (antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem), kas izraisa eritrocītu aglutināciju. Izmantojot Kumbsa reakciju, tiek diagnosticēti patoloģiski stāvokļi, kas saistīti ar imūnās izcelsmes eritrocītu intravaskulāru līzi, piemēram, jaundzimušā hemolītiskā slimība: Rh pozitīva augļa eritrocīti apvienojas ar asinīs cirkulējošām nepilnīgām antivielām pret Rh faktoru, kas ir caur placentu no Rh-negatīvas mātes.
Mehānisms. Nepilnīgu (monovalento) antivielu identificēšanas grūtības ir saistītas ar to, ka šīs antivielas, saistoties ar specifiska antigēna epitopiem, neveido režģa struktūru un reakcija starp antigēniem un antivielām netiek atklāta arī ar aglutināciju, nogulsnēšanos, vai citi testi. Lai identificētu izveidotos antigēnu-antivielu kompleksus, nepieciešams izmantot papildu pārbaudes sistēmas. Lai noteiktu nepilnīgas antivielas, piemēram, pret eritrocītu Rh antigēnu grūtnieces asins serumā, reakciju veic divos posmos: 1) eritrocītus, kas satur Rh antigēnu, pievieno divkāršiem testa seruma atšķaidījumiem un patur. 37 ° C temperatūrā stundu; 2) pēc pirmā posma rūpīgi nomazgātiem eritrocītiem pievieno trušu anti-cilvēka antiglobulīna serumu (iepriekš titrētā darba atšķaidījumā). Pēc 30 minūšu inkubācijas 37 °C temperatūrā rezultātus novērtē pēc hemaglutinācijas (pozitīva reakcija). Ir nepieciešams kontrolēt reakcijas sastāvdaļas: 1) antiglobulīna serums + sarkanās asins šūnas, par kurām zināms, ka tās ir sensibilizētas ar specifiskām antivielām; 2) eritrocīti, kas apstrādāti ar normālu serumu + antiglobulīna serums; 3) Rh negatīvi eritrocīti, kas apstrādāti ar testa serumu + antiglobulīna serumu.
50. Pasīvā hemaglutinācijas reakcija. Mehānisms. Sastāvdaļas. Pieteikums.
Netiešā (pasīvā) hemaglutinācijas reakcija(RNGA, RPGA) balstās uz eritrocītu (vai lateksa) izmantošanu ar uz to virsmas adsorbētiem antigēniem vai antivielām, kuru mijiedarbība ar atbilstošajām pacienta asins seruma antivielām vai antigēniem izraisa eritrocītu salipšanu un izkrišanu uz apakšējo daļu. mēģenē vai šūnā ķemmētu nogulumu veidā.
Sastāvdaļas. RNGA veikšanai var izmantot eritrocītus no aitām, zirgiem, trušiem, vistām, pelēm, cilvēkiem un citiem, kas tiek uzglabāti turpmākai lietošanai, apstrādājot tos ar formaldehīdu vai glutaraldehīdu. Eritrocītu adsorbcijas spēja palielinās, tos apstrādājot ar tanīna vai hroma hlorīda šķīdumiem.
RNGA antigēni var būt mikroorganismu polisaharīdu antigēni, baktēriju vakcīnu ekstrakti, vīrusu un riketsiju antigēni, kā arī citas vielas.
Sarkanās asins šūnas, ko sensibilizē hipertensija, sauc par eritrocītu diagnostiku. Eritrocītu diagnostikas sagatavošanai visbiežāk izmanto aitu eritrocītus, kuriem ir augsta adsorbējošā aktivitāte.
Pieteikums. RNGA izmanto infekcijas slimību diagnosticēšanai, gonadotropā hormona noteikšanai urīnā, iestājoties grūtniecībai, paaugstinātas jutības noteikšanai pret zālēm, hormoniem un dažos citos gadījumos.
Mehānisms. Netiešajam hemaglutinācijas testam (IRHA) ir ievērojami augstāka jutība un specifiskums nekā aglutinācijas testam. To izmanto, lai identificētu patogēnu pēc tā antigēnās struktūras vai norādītu un identificētu baktēriju produktus - toksīnus pētāmajā patoloģiskajā materiālā. Attiecīgi tiek izmantota standarta (komerciālā) eritrocītu antivielu diagnostika, kas iegūta, adsorbējot specifiskas antivielas uz miecētu (ar tanīnu apstrādātu) eritrocītu virsmas. Pārbaudāmā materiāla sērijveida atšķaidījumus sagatavo plastmasas plākšņu iedobēs. Pēc tam katrā iedobē pievieno vienādu tilpumu 3% sarkano asins šūnu suspensijas ar antivielām. Ja nepieciešams, reakciju veic paralēli vairākās iedobju rindās ar eritrocītiem, kas piekrauti ar dažādu grupu specifiskuma antivielām.
Pēc 2 stundu inkubācijas 37 °C temperatūrā rezultātus ņem vērā, novērtējot izskats eritrocītu nogulsnes (bez kratīšanas): ar negatīvu reakciju urbuma apakšā parādās nogulsnes kompakta diska vai gredzena veidā, ar pozitīvu reakciju - raksturīgi mežģīņu eritrocītu nogulumi, plāna plēve ar nelīdzenām malām .
Kumbsa tests ir klīniskā analīze asins analīzes, ko veic, lai noteiktu, vai asinīs nav noteiktas antivielas, kas var būt nedrošas. Šīs antivielas pielīp sarkanajām asins šūnām un var iebrukt imūnsistēma, kā arī nodarīt kaitējumu citos veidos. Medicīnas terminoloģijā šo pētījumu sauc arī par antiglobulīna testu (AGT).
Kumbsa paraugu veidi
Ir divu veidu Kumbsa testi – tiešie un netiešie.
Tiešais Kumbsa tests, kas pazīstams arī kā tiešais (DAT), nosaka autoantivielas, kas pievienojas sarkano asins šūnu virsmai. Šīs antivielas dažkārt tiek ražotas organismā noteiktu slimību dēļ vai lietojot noteiktas zāles, piemēram, prokainamīdu, metildopu vai hinidīnu.
Šīs antivielas ir bīstamas, jo dažkārt izraisa anēmiju, iznīcinot sarkanās asins šūnas.
Šo testu dažreiz pasūta, lai diagnosticētu dzeltes vai anēmijas cēloni.
Parasti Kumbsa reakcija ir negatīva.
Pozitīvs priekš:
- hemolītiskā slimība jaundzimušie;
- autoimūna hemolīze;
- hemolītiskās transfūzijas reakcijas;
- zāļu izraisīta imūnā hemolītiskā anēmija.
Netiešais paraugs Kumbsa, kas pazīstams arī kā , izmanto, lai noteiktu antivielas pret sarkanajām asins šūnām, kas atrodamas asins serumā (serums ir dzidrs dzeltens asiņu šķidrums, kas paliek pēc sarkano asins šūnu un koagulantu izvadīšanas).
Netiešo Kumbsa testu izmanto asins pārliešanas laikā, lai noteiktu, vai donora asinis sakrīt ar saņēmēja asinīm. To sauc par saderības testu, un tas palīdz novērst jebkādas nevēlamas reakcijas uz donora asinīm. Šī analīze ieteicams arī grūtniecēm. Dažām sievietēm ir IgG antivielas, kas var šķērsot placentu augļa asinīs un kaitēt jaundzimušajam, izraisot hemolītisko slimību, kas pazīstama kā hemolītiskā anēmija.
Procedūra
Asinis tiek ņemtas, izmantojot šļirci no vēnas, parasti ar aizmugurējā puse plaukstā vai uz elkoņa līkuma. Pirms tam punkcijas vieta tiek rūpīgi dezinficēta, un pēc asins analīzes tiek uzklāta tīra marle vai vate.
Iegūtās asinis attīra laboratorijā un atdala sarkanās asins šūnas. Pēc tam paraugu testē secīgi, izmantojot dažādus seruma un Kumbsa reaģentus, kas tiek kontrastēti. Ja nav aglutinācijas (sarkano asins šūnu salipšanas), tas nozīmē pozitīvu rezultātu.
Tomēr, ja tests ir negatīvs, tas nozīmē, ka asinīs ir antivielas, kas iedarbojas pret sarkanajām asins šūnām. Tas var norādīt dažādas slimības, piemēram, anēmija (gan dabiska, gan zāļu lietošanas izraisīta), sifiliss vai mikoplazmas infekcija. Pēc rezultātu saņemšanas ārstējošais ārsts noteiks atbilstošu ārstēšanu.
Video
Antiglobulīna princips. Nepilnīga tipa un komplementa molekulu (C) antieritrocītu antivielas, kas atrodas uz eritrocītu virsmas, tiek noteiktas - tiešs tests - pēc to aglutinācijas saskarē ar dzīvnieku serumu, kas satur antivielas pret cilvēka antiglobulīnu (antiglobulīna serumu). Bezmaksas serumā nepilnīgas antivielas tiek atklāti - netiešs tests - pievienojot tos 0 grupas normālu eritrocītu maisījumam, kuru visi antigēni pieder zināmajai Rh sistēmai, un pēc tam tiek aglutinēti antiglobulīna seruma ietekmē.
Materiāli, reaģenti Kumbsa antiglobulīna testa veikšanai: mēģenes 10/100 ml; graduētas pipetes 1, 2 ml; Pastera pipetes; statīvi; neslīpēta stikla priekšmetstikliņi; 8,5‰ NaCl šķīdums; sarkanās asins šūnas. Pacienta sarkanās asins šūnas, kā arī tās, kas pieder pie 0. grupas, tiks iegūtas no tikko paņemtām asinīm, izmantojot pretreces līdzekli (EDTA šķīdumu).
0. grupas sarkanās asins šūnas ir jāizvēlas tā, lai tās nāktu no normāliem indivīdiem un saturētu visus Rh antigēni. Tos var uzglabāt līdz 7 dienām autologā plazmā + 4°C temperatūrā. Ja nav 0 grupas sarkano asins šūnu, var izmantot zināmu antigēnu mozaīku, 0 grupas sarkano asins šūnu, Rh pozitīvo un Rh negatīvo sarkano asins šūnu maisījumu.
Serums pacientam jābūt svaigi atlasītam.
Antiglobulīna serums ražo institūts. Dr. I. Cantacuzino, ir pieejams liofilizētā veidā 1 ml ampulās. Pēc izšķīdināšanas uzglabājiet serumu -20°C.
Kumbsa antiglobulīna testa tehnika:
A) Tiešais Kumbsa tests: 3 reizes izskalojiet pacienta sarkanās asins šūnas ar 8,5‰ NaCl šķīdumu.
Uzklājiet uz vairākiem priekšmetstikliņiem lielu pilienu antiglobulīna seruma atšķaidījumu un blakus tam nelielu pilienu pacienta eritrocītu nogulumu; sajauciet pilienus ar glāzes stūri. Atstājiet sagatavoto materiālu uz galda 5 minūtes, pēc tam pārbaudiet, vai nav aglutinātu. Kad pozitīvs rezultāts noteikt maksimālo aglutinācijas titru.
b) Netiešais Kumbsa tests: 0. grupas eritrocīti, Rh pozitīvi un Rh negatīvi, 3 reizes skalot ar 8,5‰ NaCl šķīdumu un pakļaut pacienta serumam ar ātrumu 2 pilieni eritrocītu uz 8-10 pilieniem seruma, pēc tam inkubēt 60 minūtes plkst. temperatūra 37° AR. Pēc tam vēlreiz trīs reizes nomazgājiet sarkanās asins šūnas un apstrādājiet tās ar antiglobulīna serumu saskaņā ar tiešā Kumbsa testa norādījumiem.
Kad tas nāk par aukstuma aktīvajām antivielām sensibilizēt 0. grupas sarkanās asins šūnas 60 minūtes. +4°C temperatūrā.
Piezīme 1) Neveiciet tiešu Kumbsa testu sarkanajām asins šūnām, kas vienu vai vairākas dienas uzglabātas + 4°C vai istabas temperatūrā, jo rezultāti var būt kļūdaini pozitīvi, jo normālā serumā ir fiksētas nepilnīgas auksti aktīvās antivielas. 2) Smagas hiperproteinēmijas gadījumā 4-5 reizes nomazgājiet sarkanās asins šūnas un pārbaudiet, vai pēdējā mazgāšanas šķidrumā nav seruma proteīnu, izmantojot sulfosalicilskābi.
Iespējamais atlikums 2 μg IgG/ml eritrocītu nogulumos var neitralizē antiglobulīna serumu. Kumbsa testu var veikt arī, izmantojot monospecifiskus anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 un -C4 serumus, lai noskaidrotu, kāda veida šūnas atrodas uz sarkano asinsķermenīšu virsmas, piemēram, pacientiem ar autoimūnu hemolītisko slimību. anēmija.
Uzklājiet 1 lielu seruma O(I), A(II), B(III) pilienu uz plāksnes vai stikla priekšmetstikliņa, izmantojot pipetes (dažādi!). Pēc laika atzīmēšanas izmantojiet tīru stikla stienīti vai tīru priekšmetstikliņa stūri, lai apvienotu seruma pilienus ar asins pilieniem. Noteikšana ilgst 5 minūtes, kratot plāksni, tad katram pilienu maisījumam pievieno 1 pilienu sāls šķīduma un novērtē rezultātus. Labāk, ja serums ir 2 dažādās sērijās. Asins grupu rezultātiem ir jāsakrīt abās seruma partijās.
Izohemaglutinācijas rezultātu novērtējums:
ja visi 3 serumi sniedza negatīvu reakciju, tas ir, maisījums ir vienmērīgi rozā krāsā - tā ir O(I) asinsgrupa;
Ja negatīva reakcija deva tikai A(II) grupas serums, un serumi O(I) un B(III) deva pozitīvu reakciju, tas ir, parādījās graudi - tā ir A(II) asins grupa;
B(II) grupas serums sniedza negatīvu reakciju, bet O(I) un A(II) grupas serums deva pozitīvu reakciju - tā ir B(III) asins grupa.
izohemaglutinācija. Ja reakcija ir pozitīva, maisījumā parādās sīki sarkani lipīgu sarkano asins šūnu graudi. Graudi saplūst lielākos graudos, bet pēdējie pārslās. Serums ir gandrīz mainījis krāsu;
ja reakcija ir negatīva, maisījums paliek vienmērīgi krāsots 5 minūtes rozā krāsa un nav atrasti graudi;
Strādājot ar 3 O(I), A(II), B(III) grupu serumiem, iespējamas 4 reakciju kombinācijas:
visi 3 serumi deva pozitīvas reakcijas- pārbaudīt asinis AB(IV) grupā. Šajā gadījumā tiek veikts pētījums ar AB(IV) grupas serumu.
Piezīme! Pārbaudāmajiem asins pilieniem jābūt 5-10 reizes mazākiem par seruma pilieniem.
Izohemaglutinācijas kļūdas.
Nespēja veikt aglutināciju tur, kur tai vajadzētu būt, un aglutinācijas klātbūtne tur, kur tai nevajadzētu būt. Tas var būt saistīts ar vāju seruma titru un sliktu sarkano asins šūnu aglutināciju.
Aglutinācijas klātbūtne vietās, kur tai nevajadzētu būt- Tā ir pseidoaglutinācija, kad sarkano asins šūnu kaudzes veido “monētu kolonnas”. Plāksnes sakratīšana vai sāls šķīduma pievienošana tos iznīcina.
Panaglutinācija, kad serums salīmē kopā visas sarkanās asins šūnas, ieskaitot tās asinsgrupas. Līdz 5. minūtei aglutinācijas pazīmes pazūd.
Pastāv arī tā sauktā aukstā panaglutinācija, kad sarkanās asins šūnas salīp kopā zemās gaisa temperatūras (zem 15 ° C) dēļ telpā.
Visos šajos gadījumos tiek veikta vai nu atkārtota reakcija, vai izmantojot standarta sarkanās asins šūnas.
Rh asins noteikšana
Lai noteiktu Rh statusu, t.i., lai noteiktu Rh sistēmas antigēnu esamību vai neesamību cilvēku asinīs, tiek izmantoti standarta anti-Rh serumi (reaģenti), kuriem ir atšķirīga specifika, t.i., kas satur antivielas pret dažādiem šīs sistēmas antigēniem. Lai noteiktu Rh 0 (D) antigēnu, visbiežāk izmanto anti-Rēzus serumu, pievienojot 10% želatīna šķīdumu, vai arī standarta anti-Rēzus reaģentu, kas iepriekš sagatavots ar 33% poliglucīna šķīdumu. Lai iegūtu precīzākus pētījumu rezultātus, kā arī identificētu citu seroloģisko sistēmu antigēnus, tiek izmantots Kumbsa tests (tas ir arī ļoti jutīgs pārlieto asiņu saderības noteikšanā). Pētījumiem tiek izmantotas vietējās asinis vai asinis, kas sagatavotas ar kādu konservantu. Šajā gadījumā asinis no konservanta jānomazgā ar desmitkārtīgu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma tilpumu. Nosakot Rh statusu- Rh 0 (D) jāizmanto divi seruma vai anti-Rēzus reaģenta paraugi no divām dažādām sērijām un tajā pašā laikā standarta sarkanās asins šūnas, kas iegūtas no Rh pozitīvām (Rh +) un Rh negatīvajām (Rh -) asinīm. kontrolei jāizmanto indivīdi. Nosakot citus izoantigēnus, attiecīgi jāizmanto kontroles sarkanās asins šūnas, kurās ir vai trūkst antigēna, pret kuru ir vērstas standarta serumā esošās antivielas.
Daļēji siltuma aglutinīni ir visizplatītākais antivielu veids, kas var izraisīt autoimūnas hemolītiskās anēmijas attīstību. Šīs antivielas pieder IgG, reti IgM, IgA.
KUMBS TESTS
Kumbsa tests: ievads. Kumbsa tests ir laboratorijas diagnostikas metode, kuras pamatā ir hemaglutinācijas reakcija.
Galvenā autoimūnās hemolītiskās anēmijas diagnostikas metode ir Kumbsa tests. Tas ir balstīts uz imūnglobulīniem (īpaši IgG) vai komplementa komponentiem (īpaši S3) raksturīgo antivielu spēju aglutinēt eritrocītus, kas pārklāti ar IgG vai S3.
IgG un C3b saistīšanās ar eritrocītiem tiek novērota autoimūnās hemolītiskās anēmijas un zāļu izraisītas imūnās hemolītiskās anēmijas gadījumā. Tiešais Kumbsa tests. Tiešo Kumbsa testu izmanto, lai noteiktu antivielas vai komplementa komponentus, kas fiksēti uz sarkano asins šūnu virsmas. To veic šādi:
Lai iegūtu antivielas pret cilvēka imūnglobulīniem (antiglobulīna serumu) vai komplementu (antikomplementāru serumu), dzīvnieku imunizē ar cilvēka serumu, imūnglobulīniem vai cilvēka komplementu. No dzīvnieka iegūtais serums tiek attīrīts no antivielām pret citiem proteīniem.
Pacienta sarkanās asins šūnas tiek mazgātas ar fizioloģisko šķīdumu, lai pilnībā noņemtu serumu, kas neitralizē antivielas pret imūnglobulīniem un komplementu un var izraisīt kļūdaini negatīvu rezultātu.
Ja uz sarkano asins šūnu virsmas ir fiksētas antivielas vai komplementa komponenti, antiglobulīna vai antikomplementa seruma pievienošana izraisa sarkano asins šūnu aglutināciju.
Tiešo Kumbsa testu izmanto šādos gadījumos:
Autoimūna hemolīze.
Jaundzimušo hemolītiskā slimība.
Zāļu izraisīta imūnā hemolītiskā anēmija.
Hemolītiskās transfūzijas reakcijas. Netiešais Kumbsa tests. Netiešais Kumbsa tests nosaka antivielas pret sarkanajām asins šūnām serumā. Lai to izdarītu, pacienta serums tiek inkubēts ar 0. grupas donora sarkanajām asins šūnām, un pēc tam tiek veikts tiešs Kumbsa tests.
Netiešo Kumbsa testu izmanto šādos gadījumos:
Donora un recipienta asiņu individuālās saderības noteikšana.
Alloantivielu noteikšana, ieskaitot antivielas, kas izraisa hemolītiskās transfūzijas reakcijas.
Virsmas eritrocītu antigēnu noteikšana medicīnas ģenētikā un tiesu medicīnā.
Identisku dvīņu apstiprināšana kaulu smadzeņu transplantācijas laikā.
Lai veiktu bioloģisko testu, asinis sāk pārliet pēc iespējas ātrāk (vēlams straumē). Pēc 25 ml asiņu pārliešanas sistēmas cauruli saspiež ar skavu. Pēc tam seko 3 minūšu pauze, kuras laikā tiek uzraudzīts saņēmēja stāvoklis. Lai veiktu bioloģisko testu, trīs reizes ievada 25 ml asiņu. Pārbaudes beigās (pēc pirmo 75 ml asiņu pārliešanas frakcionētās 25 ml devās ar 3 minūšu intervālu) sistēma tiek pielāgota vajadzīgajam pārliešanas ātrumam. Pārlejot pacientam vairāk nekā vienu pudeli asiņu, ir nepieciešams izņemt adatu no vēnas. Šajā gadījumā adatu izņem no tā flakona mēģenes, kurā ir izsīkušas asinis, un ievieto nākamajā flakonā. Sistēmas caurule (gumijas vai plastmasas) šajā brīdī ir nostiprināta ar skavu. Ja asins pārliešanas laikā rodas nepieciešamība recipientam intravenozi ievadīt kādas citas zāles, to veic, caurdurot sistēmas gumijas cauruli. Plastmasas caurules caurduršana ir nepieņemama, jo tā nenokrīt. Pēc katras asins pārliešanas pacients ir jāuzrauga, lai identificētu un nekavējoties likvidētu iespējamās komplikācijas, ieskaitot alerģiskas reakcijas. 2 stundas pēc asins pārliešanas beigām jāmēra ķermeņa temperatūra. Ja tas palielinās, mērījums jāatkārto ik pēc stundas nākamās 4 stundas. Tikpat svarīgi ir uzraudzīt urinēšanu un urīna sastāvu, kas ļauj noteikt toksiskas pēctransfūzijas reakcijas klātbūtni. Oligūrijas un anūrijas parādīšanās pēc asins pārliešanas, asins šūnu un olbaltumvielu klātbūtne urīnā ir tieša norāde uz pēctransfūzijas hemolīzes attīstību.
Tiešais Kumbsa tests. Šo testu izmanto, lai pierādītu bloķējošu antivielu klātbūtni, kas fiksētas bērna sarkanajās asins šūnās. Pozitīvs tiešais tests norāda uz sensibilizāciju un kalpo kā pārliecinoša jaundzimušā hemolītiskās slimības pazīme pat pirms citu slimību parādīšanās. klīniskās pazīmes. Izņēmuma kārtā un tikai ļoti smagos gadījumos tiešais Kumbsa tests var būt negatīvs jau notiekošās, gandrīz pilnīgas sensibilizēto sarkano asins šūnu hemolīzes dēļ.
Tiešo Kumbsa testu veic šādi: mēģenē ievieto 5 pilienus asiņu, kas ņemti no bērna papēža, un pievieno 5 ml fizioloģiskā šķīduma. Labi samaisiet un centrifugējiet 10 minūtes. Skaidrs šķidrums virs sarkano asins šūnu nogulsnēm tiek atdalīts. Pēc tam atkal pievieno 5 ml fizioloģiskā šķīduma, samaisa un centrifugē. Pēc trīs reizes samaisīšanas ar fizioloģisko šķīdumu sarkanās asins šūnas ir labi nomazgātas. Pēc pēdējās supernatanta atdalīšanas eritrocītu nogulsnes 0,1 ml apjomā sajauc ar 0,9 ml fizioloģiskā šķīduma. Uzklājiet 2-3 pilienus šī maisījuma uz stikla priekšmetstikliņa un pievienojiet vienu pilienu Kumbsa seruma. Aglutinācijas klātbūtne norāda, ka reakcija ir pozitīva (pozitīvs tiešais Kumbsa tests). Pētījums jāveic istabas temperatūrā virs 16°, lai izvairītos no aukstā aglutinīna iedarbības.
Netiešais Kumbsa tests kalpo par pierādījumu brīvo antivielu klātbūtnei mātes serumā un tiek veikta ar mātes serumu.
Hemolītiskā slimība jaundzimušajam ar Rh nesaderību parasti izpaužas pēc otrās grūtniecības. Pirmais bērniņš piedzimst vesels, otrais ar vieglas anēmijas pazīmēm, un tikai pēc trešās grūtniecības piedzimst bērni ar skaidras pazīmes hemolītiskā slimība. Tikai sievietes ar iepriekšēju sensibilitāti var dzemdēt bērnu ar hemolītiskās slimības simptomiem pirmās grūtniecības laikā. Dažos gadījumos imunizācija izraisa abortus un dzemdības miruši bērni. Slimības sākumam un smagumam ir svarīgs placentas stāvoklis un mātes aglutinīnu iedarbības ilgums auglim. Kad aglutinīni parādās 10-14 nedēļas pirms dzimšanas, bērns parasti piedzīvo subklīniskas formas. Aglutinīnu agrīna parādīšanās, 15-26 nedēļas pirms dzimšanas, izraisa smagas formas slimības. Visās slimības formās galvenais process ir hemolīze. Antigēna-antivielu reakcijas sekas ir hemolīze, aknu un smadzeņu kapilāru bojājumi. Atkarībā no tā, kurš bojājums dominē, ir arī dažādas formas slimības. Bīstamas ir arī dažas anafilaktiskas parādības. Tie izraisa histamīnam līdzīgu vielu veidošanos, izraisot nopietnus aknu šūnu un īpaši bazālo gangliju gangliju šūnu bojājumus, cornu ammon, iegarenās smadzenes un pat smadzeņu garozā. Ja aknu šūnas ir bojātas, aknu dzelte tiek pievienota ekstrahepatiskajai dzeltei. Bērni mirst smagu kernicterus simptomu dēļ. Ja viņi izdzīvo, bojājumu simptomi saglabājas nervu sistēma(ekstrapiramidālās sistēmas traucējumi ar horeoatetiskām kustībām, savdabīga dejojoša gaita, piespiedu galvas kustības, dažreiz koordinācijas traucējumi brīvprātīgas kustības ar biežiem kritieniem, paaugstināts tonis muskuļi, garīga atpalicība, t.i., ar pazīmēm t.s. encephalopathia posticteria infantum).
