Pasīvās aglutinācijas reakcijas. Netiešas aglutinācijas reakcijas. Netieša vai pasīva hemaglutinācijas reakcija (IRHA, RPHA). Apgrieztā RNGA. Pasīvā hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (PHA).
Šie reakcijas tiek saukti netiešs (pasīvs), jo tie izmanto Ag (vai AT), kas mākslīgi sorbēts uz dažādu korpuskulāro daļiņu virsmas.
Netieša vai pasīva hemaglutinācijas reakcija (RNGA, RPGA) ir viena no jutīgākajām seroloģiskajām reakcijām. Tas ir balstīts uz AT spēju mijiedarboties ar Ag, kas fiksēts uz dažādām sarkanajām asins šūnām, kuras pēc tam aglutinējas. Lai nodrošinātu lielāku diagnostikas stabilitāti, sarkanās asins šūnas tiek formalizētas.
Apgrieztā RNGA izmanto, lai noteiktu Ag asins serumā; Šim nolūkam uz eritrocītiem tiek fiksēts nevis Ag, bet AT. Šāda veida reakcijas tiek plaši izmantotas infekcijas slimību diagnosticēšanai, grūtniecības noteikšanai, noteikšanai paaugstināta jutība uz medikamentiem utt.
Bremzēšanas reakcija pasīvā hemaglutinācija (RTPGA) - tālākai attīstībai RNGA; savā ziņā kontrolē savu specifiku. Atšķirībā no RNGA, ietver trīs sastāvdaļas; Ag, AT un Ag (AT), kas adsorbēti uz eritrocītiem. Sākotnēji Ag reaģē ar AT (standarta antiserumu), pēc tam maisījumam pievieno eritrocītus, kas sensibilizēti ar to pašu Ag (vai AT). Ja Ag mijiedarbības laikā ar AT sistēmā nepaliek brīvs AT (vai Ag), tad eritrocītu diagnostiskā aglutinācija netiek novērota.
Tas izmanto sarkanās asins šūnas vai neitrālu sintētiskie materiāli(piemēram, lateksa daļiņas), uz kuras virsmas tiek sorbēti antigēni (baktēriju, vīrusu, audu) vai antivielas. To aglutinācija notiek, kad tiek pievienoti atbilstoši serumi vai antigēni. Sarkanās asins šūnas, kas sensibilizētas ar antigēniem, tiek sauktas par antigēnu eritrocītu diagnostiku un tiek izmantotas antivielu noteikšanai un titrēšanai. Ar antivielām sensibilizēti eritrocīti. sauc par imūnglobulīna eritrocītu diagnostiku un izmanto antigēnu noteikšanai.
Pasīvā hemaglutinācijas reakcija tiek izmantota, lai diagnosticētu slimības, ko izraisa baktērijas ( vēdertīfs un paratīfs, dizentērija, bruceloze, mēris, holēra utt.), vienšūņi (malārija) un vīrusi (gripa, adenovīrusu infekcijas, vīrusu hepatīts B, masalas, ērču encefalīts, Krimas hemorāģiskais drudzis u.c.), kā arī noteiktu noteiktu hormonu noteikšanai, identificēt pacienta paaugstināto jutību pret zāles un hormoni, piemēram, penicilīns un insulīns.
Pasīvā hemaglutinācijas reakcija (RPHA). Pasīvās hemaglutinācijas tests ir jutīga metode seroloģiskā diagnostika un tiek izmantota gan agrīnai, gan retrospektīvai diagnostikai, kā arī vakcinēto cilvēku imunopoģiskā stāvokļa noteikšanai. Pacientiem ar tularēmiju antivielas parasti tiek konstatētas slimības 1. vai 2. nedēļas beigās, pēc 1-1,5 mēnešiem RPHA titri sasniedz maksimālā veiktspēja(1:100000-1:20000, retāk augstāk), pēc tam tie samazinās un ilgstoši saglabājas 1:100-1:200 līmenī.
Vakcinētiem cilvēkiem antivielas tiek konstatētas arī pastāvīgi, tomēr zemākos titros, nepārsniedzot 1:2000-1:5000 1-1,5 mēnešus pēc vakcinācijas, un vairākus gadus saglabājas zemā līmenī 1:20-1:80.
Antigēns RPHA noteikšanai ir tularēmijas eritrocītu diagnostika (antigēns). Zāles ir formalinizētas aitas sarkanās asins šūnas, sensibilizētas ar tularēmijas antigēnu, pieejamas šķidrā un sausā veidā. Šķidrais preparāts - 10% sarkano asins šūnu suspensija 10% koncentrācijas formaldehīda šķīdumā. Sausais liofilizēts preparāts ir vakuumā kaltēta 10% sarkano asins šūnu suspensija bez konservanta. Pirms lietošanas to atšķaida saskaņā ar norādījumiem uz etiķetes. Lai izveidotu reakciju polistirola plāksnēs, abas zāles izmanto 2,5% koncentrācijā, un, veidojot reakciju mikrotilpumos - 0,5% koncentrācijā.
RPGA iestatīšanas tehnika. Testa serumus atšķaida ar fizioloģisko šķīdumu attiecībā 1:5 (1:10) un karsē 56 °C temperatūrā 30 minūtes. Pēc tam, lai atdalītu neviendabīgās antivielas pret aitu eritrocītiem, serumus apstrādā ar formalinizētu aitu eritrocītu 50% suspensiju. Lai to izdarītu, pievienojiet sarkanās asins šūnas ar ātrumu 2 pilieni (0,05 ml) uz 1 ml seruma un rūpīgi samaisiet, kratot. Serumu atstāj, līdz eritrocīti ir pilnībā nosēdušies, vai pēc stundas centrifugē istabas temperatūrā, pēc tam tas ir gatavs izmeklēšanai.
Atšķaidīšanas šķidrumu 0,5 ml tilpumā ielej polistirola plāksnes iedobju rindā. Sākotnējās seruma izpētes laikā ir ieteicams tos pārbaudīt, iestatot reakciju īsā plāksnes rindā (6 iedobes). Ja antivielas tiek konstatētas īsā sērijā, serumus atkārtoti pārbauda ilgā atšķaidījumu sērijā (12 iedobes). Pēc atšķaidīšanas šķidruma izliešanas katras rindas pirmajai iedobei (īsai vai garai) pievienojiet 0,5 ml testa seruma atšķaidījumā 1:5. Pēc tam tos pašus seruma tilpumus titrē ar divkāršiem atšķaidījumiem. Tādējādi seruma atšķaidījumus iegūst īsajās sērijās no 1:10 līdz 1:320 un garajās sērijās no 1:10 līdz 1:20480. Pēc seruma titrēšanas katrā iedobē pievieno vienu pilienu (0,05 ml) sensibilizēto eritrocītu darba 2,5% suspensijas. Plākšņu saturu rūpīgi sakrata, līdz iegūst viendabīgu suspensiju. Plāksnes atstāj istabas temperatūrā uz stacionāras galda virsmas. Reakcijas iepriekšēju reģistrēšanu veic pēc 2-3 stundām, galīgo titra noteikšanu veic pēc pilnīgas sarkano asins šūnu sedimentācijas iedobēs. Reakcijai ir paredzētas šādas kontroles: 1) testa serums, kas atšķaidīts 1:10 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% nesensibilizētu eritrocītu suspensijas; 2) atšķaidīšanas šķidrums 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% nesensibilizētu eritrocītu suspensijas; 3) atšķaidīšanas šķidrums 0,5 ml tilpumā + 1 piliens 2,5% sensibilizētu eritrocītu suspensijas. Visām kontrolēm jāsniedz nepārprotami negatīva reakcija.
RPGA uzskaite un novērtēšana. Reakciju novērtē pēc sekojošā diagramma:
1) asi pozitīva reakcija(++++) - sarkanās asins šūnas vienmērīgā slānī nokrīt cauruma apakšā “lietussarga” veidā, kam bieži ir šķautne malu kušana;
2) pozitīva reakcija (+++) - sarkanās asins šūnas nosedz vismaz 2/3 no akas dibena;
3) vāji pozitīva reakcija (++) - aglutināts ir mazs un atrodas pašā akas centrā;
4) apšaubāma reakcija (+) - ap eritrocītu nogulsnēm pašā akas centrā ir atsevišķi aglutināta graudi;
5) negatīvs (-) - cauruma apakšā sarkanās asins šūnas nogulsnējas “pogas” vai neliela gredzena veidā ar gludām, asi izteiktām malām.
Seruma titru ņem vērā, pamatojoties uz pēdējo seruma atšķaidījumu, kas deva ļoti skaidru reakciju (vismaz trīs plusi). Atšķaidījums 1:100 vai lielāks tiek uzskatīts par diagnostisko titru, taču, tāpat kā RA gadījumā, ir jāuzrauga tā palielināšanās.
RPGA tularēmijai ir diezgan specifiska un atklāj dažus krusteniskās reakcijas tikai ar brucelozes serumiem. Diferenciāldiagnoze iespējams pēc titru augstuma RPGA, kas ir ievērojami augstāki ar homologo antigēnu.
Tehnika RPHA iestatīšanai mikroapjomos. RPGA var veikt mikroapjomos, izmantojot Takachi tipa mikrotitratoru (vai apaļas dibena mikroplates ar mikropipetēm), kas ļauj titrēt materiālu 25 μl un 50 μl tilpumos. Reakcijas tehnika un visu darbību secība ir tāda pati kā pētot polistirola plāksnēs. Tomēr jāpatur prātā, ka mikrometodes jutība parasti ir par vienu atšķaidījumu (t.i., 2 reizes) mazāka nekā makrometodes jutība.
Lai izveidotu reakciju mikrotitratorā, katrā iedobē, izmantojot pipeti ar pilinātāju, pievieno atšķaidīšanas šķidrumu 50 μl tilpumā. Pēc tam, izmantojot titrētājus ar 50 μl galviņu, testa serumu savāc, iegremdējot tajā galvu. Pārliecinieties, vai šķidrums ir piepildījis titratora galviņu. Titrators ar serumu tiek pārnests uz pirmo iedobi un, turot to iekšā vertikālā pozīcija, veiciet vairākas rotācijas kustības turp un atpakaļ. Pēc tam titratoru pārnes uz nākamo iedobi un manipulāciju atkārto. Titrēšanu var veikt vienlaikus vairākās rindās. Pēc visas sērijas titrēšanas titrētāju mazgā ar destilētu ūdeni (mainot 2 porcijas) ar rotējošām kustībām, ūdeni no galvas noņem ar tamponu un sadedzina uz degļa liesmas.
Pēc titrēšanas iedobēm pievieno 25 μl eritrocītu diagnostikas šķidruma. Diagnostikas koncentrācijai RPHA mikroapjomos jābūt 0,5% (t.i., 2,5% sarkano asins šūnu suspensiju papildus atšķaida 5 reizes). Pēc sarkano asins šūnu pievienošanas plāksnes nedaudz jāsakrata, līdz tiek iegūta viendabīga suspensija. Rezultātus var reģistrēt 1-1,5 stundu laikā, kas ir būtiska RPGA priekšrocība mikrotitrā. Turklāt šim paņēmienam ir nepieciešams neliels daudzums visu reakcijas sastāvdaļu un testa serumu.
Reakciju ņem vērā saskaņā ar šādu shēmu:
1) “+” – pilnīga hemaglutinācija, kurā sarkanās asins šūnas nokrīt akas dibenā vienmērīgā slānī “lietussarga” veidā, aizņemot vismaz 2/3 no dibena;
2) "+-" - daļēja hemaglutinācija, kurā sarkanās asins šūnas nokrīt apakšā maza izmēra vaļīga gredzena veidā;
3) "-" – hemaglutinācijas trūkums, kad sarkanās asins šūnas nokrīt apakšā nelielas pogas vai gredzena veidā ar gludu malu.
RPHA iegūtā pozitīvā rezultāta specifiku var pārbaudīt, izmantojot trīskomponentu reakciju - pasīvo hemaglutinācijas inhibīcijas reakciju (PHA).
RTPGA iestatīšanas tehnika. Šo reakciju izmanto, lai apstiprinātu pozitīva RPGA rezultāta specifiku, ja tas rada šaubas vai ir īpaši epidemioloģiski interesants. Reakcijas mehānisms ir specifiska hemaglutinācijas inhibīcija, kad testa serumam pievieno nogalinātu tularēmijas baktēriju suspensiju. Reakcijā mijiedarbojas trīs komponenti: testa serums, specifiskais tularēmijas antigēns un antigēnais eritrocītu diagnostiskais RTPHA parasti tiek ievietots 7-8 iedobju rindā. Ir ieteicams uzstādīt atkārtotu RPGA paralēli RTPGA. Divās iedobju rindās ielej 0,25 ml atšķaidīšanas šķidruma, pēc tam abu rindu pirmajās iedobēs pievieno testa serumu 0,25 ml tilpumā un veic titrēšanu.Iegūst divas identiskas seruma atšķaidījumu rindas. Pievienojiet 0,25 ml atšķaidīšanas šķidruma visās otrās rindas iedobēs un 0,25 ml tularēmijas baktēriju suspensijas pirmās rindas iedobēs. Tiek izmantots tularemia diagnosticum (satur 25 miljardus tularēmijas baktēriju 1 ml), iepriekš atšķaidīts 50 reizes. Šī suspensija satur 500 miljonus baktēriju 1 ml vai 125 miljonus 0,25 ml tilpumā. Pēc antigēna pievienošanas plāksni atstāj uz 1 stundu istabas temperatūrā, pēc tam uz visām abu rindu iedobēm pievieno vienu pilienu (0,05 ml) eritrocītu diagnostikas, plāksni sakrata un atstāj uz līdzenas galda virsmas. Grāmatvedība tiek veikta pēc 2-3 stundām.
RTPGA uzskaite un novērtēšana. Ja testa serums satur specifiskas tularēmijas antivielas, tās neitralizē pievienotais antigēns un pirmajā iedobju rindā nenotiks hemaglutinācija vai arī ar augstu seruma titru hemaglutinācija tiks novērota mazākā (2-4) skaitā. akas nekā rindā ar RPHA. Šajā gadījumā tika apstiprināta rezultātu specifika. Ja abās rindās ir atzīmēta hemaglutinācija, t.i. Ja RTPGA un RPGA rezultāti sakrīt, tas norāda, ka testa serumā nav tularēmijas antivielu. Šajā gadījumā primārais RPGA rezultāts tiek uzskatīts par nespecifisku.
RTHG inscenēšanas tehnika mikroapjomos. RTPGA, tāpat kā RPGA, var veikt mikroapjomos, izmantojot Takachi tipa mikrotitru. Lai to izdarītu, mikroplašu iedobēs pievienojiet 0,25 μl atšķaidīšanas šķidruma divās rindās pa 7-8 iedobēm katrā. Pēc tam, izmantojot titrētāju, pievieno 0,25 μl testa seruma un titrē abās rindās. Pēc tam katrai pirmās rindas iedobei pievieno 25 μl tularēmijas antigēna (kura koncentrācija ir 500 miljoni tularēmijas baktēriju 1 ml), bet otrajā rindā pievieno 25 μl atšķaidīšanas šķidruma. Plāksnes atstāj uz 1 stundu istabas temperatūrā, pēc tam visām abu rindu iedobēm pievieno 25 μl antigēna zritrocytic diagnosticum (0,5% koncentrācija). Rezultātu uzskaite un novērtēšana tiek veikta līdzīgi kā reakcijas makroapjomos.
Pasīvā hemaglutinācijas reakcija) metode antigēnu vai antivielu noteikšanai un identificēšanai, pamatojoties uz to klātbūtnē notiekošo sarkano asins šūnu aglutinācijas fenomenu, uz kuru virsmas iepriekš adsorbēts attiecīgais specifiskais vai antigēni.
1. Mazā medicīnas enciklopēdija. - M.: Medicīnas enciklopēdija. 1991-96 2. Pirmkārt veselības aprūpe. - M.: Lielā krievu enciklopēdija. 1994 3. Enciklopēdiskā vārdnīca medicīniskie termini. - M.: Padomju enciklopēdija. - 1982-1984.
Skatiet, kas ir “Netiešā hemaglutinācijas reakcija” citās vārdnīcās:
netieša hemaglutinācijas reakcija- RNGA Laboratorijas tests izmantojot eritrocītu diagnostiku. [Vakcinoloģijas un imunizācijas pamatterminu angļu-krievu vārdnīca. Pasaules Veselības organizācija, 2009] Tēmas vakcinācija, imunizācija Sinonīmi RNGA EN... ... Tehniskā tulkotāja rokasgrāmata
- (RNHA; pasīvās hemaglutinācijas reakcijas sinonīms) metode antigēnu vai antivielu noteikšanai un identificēšanai, kuras pamatā ir eritrocītu aglutinācijas parādība, kas notiek to klātbūtnē, uz kuru virsmas tie iepriekš tika adsorbēti... .. . Liela medicīniskā vārdnīca
- (RPHA) skatiet Netiešā hemaglutinācijas reakcija... Liela medicīniskā vārdnīca
Šī lapa ir glosārijs. # A... Vikipēdija
Veterinārajā enciklopēdiskajā vārdnīcā pieņemtie pamata saīsinājumi- a., aa, artena, arteriae aa ana (vienlīdzīgi) PSRS Medicīnas zinātņu akadēmija PSRS Medicīnas zinātņu akadēmija PSRS Zinātņu akadēmija PSRS Zinātņu akadēmija Bac. Bacillus Bact. Baktērija BSSR Baltkrievijas PSR c., gs. gadsimts, gadsimtu v., v. vena, venae VASKHNIL Vissavienības Ļeņina ordenis un... ...
Šim terminam ir citas nozīmes, skatiet Mēris. Gaļēdāju mēris (Kares slimība) akūta vai subakūta lipīga vīrusu slimība, kas izpaužas kā drudzis, katarāls gļotādu iekaisums, ādas bojājumi, centrālās ... ... Wikipedia
- (renes) sapārots ekskrēcijas un endokrīnais orgāns, kas regulē ķermeņa ķīmisko homeostāzi, izmantojot urīna veidošanās funkciju. ANATOMISKĀ FIZIOLOĢISKĀ SKICE Nieres atrodas retroperitoneālajā telpā (retroperitoneālajā telpā) uz... ... Medicīnas enciklopēdija
I (trihineloze; sinonīms: trihineloze, “piepūsts”) helmintoze no nematožu grupas, ko raksturo drudzis, mialģija, sejas pietūkums, ādas izsitumi, asins eozinofilija un smagos gadījumos bojājumi iekšējie orgāni un centrālais...... Medicīnas enciklopēdija
- (nematodozes) helmintoze, ko izraisa apaļtārpu nematodes klase Nematoda. Citu helmintiāžu vidū N. ir augstākā vērtība cilvēka patoloģijā lielākā daļa ir ģeohelmintoze (sk. Helminthiasis); to olu vai kāpuru attīstība...... Medicīnas enciklopēdija
infekciozais epididimīts- Rīsi. 1. Kreisās sēklinieku palielināšanās aitai ar infekciozu epididimītu. Rīsi. 1. Kreisās sēklinieku palielināšanās aitai ar infekciozu epididimītu. aitu infekciozais epididimīts (Epididymitis infectiosa arietum), hronisks infekciozs... Veterinārā enciklopēdiskā vārdnīca
Skatīt Netiešā hemaglutinācijas reakcija... Liela medicīniskā vārdnīca
Reakcija tiek dota:
1) polisaharīdu, olbaltumvielu, baktēriju ekstraktu un citu augsti dispersu vielu, riketsiju un vīrusu noteikšanai, kuru kompleksi ar aglutinīniem nav redzami tradicionālajos RA,
2) noteikt antivielas pacientu serumos pret šīm augsti izkliedētajām vielām un mazajiem mikroorganismiem.
Netiešā jeb pasīvā aglutinācija tiek saprasta kā reakcija, kurā antivielas mijiedarbojas ar antigēniem, kas iepriekš adsorbēti uz inertām daļiņām (latekss, celuloze, polistirols, bārija oksīds utt. vai aitas sarkanās asins šūnas, I(0)-cilvēka asins grupa)
Pasīvās hemaglutinācijas reakcijā (RPHA), sarkanās asins šūnas. Ar antigēnu ielādētās sarkanās asins šūnas salīp kopā specifisku antivielu klātbūtnē pret šo antigēnu un izgulsnējas. Antigēnu sensibilizētie eritrocīti tiek izmantoti RPGA kā eritrocītu diagnostikas līdzeklis antivielu noteikšanai (serodiagnostika). Ja sarkanās asins šūnas ir noslogotas ar antivielām (eritrocītu antivielu diagnostika), to var izmantot antigēnu noteikšanai.
Rīsi. 3. RPGA shēma: sarkanās asins šūnas (1), kas ir ielādētas ar antigēnu (3), ir saistītas ar specifiskām antivielām (4).
Iestudējums. Polistirola plākšņu iedobēs tiek sagatavota sērijveida seruma atšķaidījumu sērija. Pievienojiet 0,5 ml acīmredzami pozitīva seruma priekšpēdējā iedobē un 0,5 ml fizioloģiskā šķīduma (kontroles) pēdējai iedobei. Tad visām iedobēm pievieno 0,1 ml atšķaidīta eritrocītu diagnostikas, sakrata un ievieto termostatā uz 2 stundām.
Grāmatvedība. IN pozitīvs gadījums eritrocīti nosēžas cauruma apakšā vienmērīga šūnu slāņa veidā ar salocītu vai robainu malu (apgriezts lietussargs), negatīvi - tie nosēžas pogas vai gredzena veidā.
4. att. RNGA (RPGA) uzskaite.
Botulīna toksīna noteikšanai veiktā rentgena testa rezultātu uzskaite.
Botulisma izraisītājs Clostridium botulinum ražo septiņu serovāru toksīnus (A, B, C, D, E, F, G), bet biežāk sastopami serovari A, B un E. Visi toksīni atšķiras pēc antigēnām īpašībām un var jādiferencē reakcijās, izmantojot tipam raksturīgus serumus. Šim nolūkam var veikt pasīvu (netiešo) hemaglutinācijas reakciju ar pacienta serumu, kurā tiek pieņemts toksīna klātbūtne, un sarkanajām asins šūnām, kas ielādētas ar antitoksiskām A, B, E tipa antibotulīna serumiem. Normāls serums kalpo kā kontrole.
Rīsi. 3. RNGA paziņojums un rezultāts.
Grāmatvedība. Pozitīvā gadījumā sarkanās asins šūnas nosēžas cauruma apakšā vienmērīga šūnu slāņa veidā ar salocītu vai robainu malu (apgriezts lietussargs), negatīvā gadījumā tās nosēžas pogas vai gredzena veidā. .
Secinājums: pacienta serumā tika konstatēts E tipa botulīna toksīns.
Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAT).
Rīsi. 8. Hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (HAI) (shēma).
Reakcijas princips ir balstīts uz AT spēju saistīt dažādus vīrusus un neitralizēt tos, padarot neiespējamu sarkano asins šūnu aglutināciju. Vizuāli šis efekts izpaužas kā hemaglutinācijas “inhibīcija”. RTGA izmanto vīrusu infekciju diagnostikā, lai identificētu specifiskus antihemaglutinīnus un identificētu dažādus vīrusus pēc to hemaglutinīniem, kuriem piemīt Ag īpašības.
Vīrusa tipizēšana tiek veikta RTGA reakcijā ar tipam raksturīgu serumu komplektu. Reakcijas rezultāti tiek ņemti vērā, ja nav hemaglutinācijas. A tipa vīrusa apakštipus ar antigēniem H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 un citiem RTGA var diferencēt ar homologu tipam specifisku serumu komplektu.
Rīsi. 9. RTGA rezultāti gripas vīrusa tipizēšanai
Leģenda: - hemaglutinācijas kavēšana (poga); - hemaglutinācija (lietussargs).
Secinājumi: pētāmais materiāls satur A tipa gripas vīrusu ar H3N2 antigēnu
Netiešās (pasīvās) hemaglutinācijas reakcijas (IRHA) pamatā ir fakts, ka sarkanās asins šūnas, ja uz to virsmas tiek adsorbēts šķīstošs antigēns, mijiedarbojoties ar antivielām pret adsorbēto antigēnu, iegūst aglutinācijas spēju. RNGA diagramma ir parādīta attēlā. 34. RNGA plaši izmanto vairāku infekciju diagnostikā.
Rīsi. 34. Pasīvās hemaglutinācijas reakcijas (RPHA) shēma. A - eritrocītu diagnostikas iegūšana: B - RPGA: 1 - eritrocīts: 2 - tiek pētīts antigēns; 3 - eritrocītu diagnostika; 4 - antiviela pret pētāmo antigēnu: 5 - aglutināts
Reakcijas iestatīšana. Testējamo serumu karsē 30 minūtes 56°C temperatūrā, secīgi atšķaida proporcijā 1:10 - 1:1280 un lej 0,25 ml mēģenēs vai iedobēs, kur iepilina 2 pilienus eritrocītu diagnostikas (eritrocīti ar uz tiem adsorbētu antigēnu). ) pēc tam tiek pievienoti.
Kontroles: eritrocītu diagnostikas suspensija ar zināmu imūnserumu; diagnostikas apturēšana ar normālu serumu; normālu sarkano asins šūnu suspensija ar testa serumu. Pirmajā kontrolē jānotiek aglutinācijai, otrajā un trešajā tā nedrīkst notikt.
Izmantojot RIGA, jūs varat noteikt nezināmu antigēnu, ja zināmas antivielas ir adsorbētas uz sarkanajām asins šūnām.
Hemaglutinācijas reakciju var veikt 0,025 ml tilpumā (mikrometode), izmantojot Takachi mikrotitratoru.
1. Ko tas norāda? pozitīvs rezultāts RHA starp sarkanajām asins šūnām un materiālu, kas tiek pārbaudīts attiecībā uz vīrusa klātbūtni?
2. Vai notiks sarkano asinsķermenīšu aglutinācija, ja tām pievieno vīrusu un tam atbilstošu serumu? Kā sauc reakciju, kas atklāj šo parādību?
Vingrinājums
Ņem vērā un reģistrē rezultātu RĪGA.
Nokrišņu reakcija
Izgulsnēšanas reakcijā tiek izgulsnēts specifisks imūnkomplekss, kas sastāv no šķīstoša antigēna (lizāta, ekstrakta, haptēna) un specifiskas antivielas elektrolītu klātbūtnē.
Duļķaino gredzenu vai nogulsnes, kas veidojas šīs reakcijas rezultātā, sauc par nogulsnēm. Šī reakcija no aglutinācijas reakcijas galvenokārt atšķiras ar antigēna daļiņu lielumu.
Nokrišņu reakciju parasti izmanto, lai noteiktu antigēnu vairāku infekciju diagnostikā ( Sibīrijas mēris, meningīts utt.); tiesu medicīnā - noteikt asiņu, spermas uc sugas; sanitārajos un higiēniskajos pētījumos - konstatējot produktu viltojumu; ar tās palīdzību tiek noteiktas dzīvnieku un augu filoģenētiskās attiecības. Reakcijai jums ir nepieciešams:
1. Antivielas (precipitīni) - imūnserums ar augsts titrs antivielas (ne mazāk kā 1:100000). Izgulsnējošā seruma titru nosaka pēc antigēna augstākā atšķaidījuma, ar kuru tas reaģē. Serumu parasti lieto neatšķaidītu vai atšķaidījumā 1:5 – 1:10.
2. Antigēns - izšķīdušas proteīna vai lipoīdu polisaharīdu dabas vielas (pilni antigēni un haptēni).
3. Izotoniskais šķīdums.
Galvenās izgulsnēšanas reakcijas veikšanas metodes ir: gredzenveida izgulsnēšanas reakcija un izgulsnēšanas reakcija agarā (gelā).
Uzmanību! Visām nokrišņu reakcijā iesaistītajām sastāvdaļām jābūt pilnīgi caurspīdīgām.
Gredzena nokrišņu reakcija. Izmantojot Pasteur pipeti, nogulsnēšanas mēģenē pievienojiet 0,2-0,3 ml (5-6 pilienus) seruma (serums nedrīkst nokļūt uz mēģenes sieniņām). Antigēns tādā pašā tilpumā tiek rūpīgi uzklāts uz seruma, izlejot to ar plānu Pastēra pipeti gar mēģenes sieniņu. Mēģene tiek turēta slīpā stāvoklī. Ja tas ir pareizi uzklāts, starp serumu un antigēnu jābūt skaidrai robežai. Uzmanīgi, lai šķidrums nesajauktos, mēģeni ievieto statīvā. Ja reakcija ir pozitīva, antigēna un antivielas saskarnes vietā veidojas duļķains “gredzens” - nogulsnes (sk. 48. att.).
Reakcijai ir pievienotas vairākas kontroles (18. tabula). Ļoti svarīga ir reakcijas sastāvdaļu pievienošanas secība mēģenē. Jūs nevarat uzklāt serumu uz antigēna (kontrolē - uz izotoniskā šķīduma), jo seruma relatīvais blīvums ir lielāks, tas nogrims mēģenes apakšā, un robeža starp šķidrumiem netiks atklāta.
18. tabula. Gredzena izgulsnēšanas reakcijas iestatīšanas shēma
Piezīme. + “gredzena” klātbūtne; - “gredzena” trūkums.
Rezultāti tiek reģistrēti pēc 5-30 minūtēm, dažos gadījumos pēc stundas, kā vienmēr, sākot ar vadīklām. “Gredzens” 2. mēģenē norāda imūnseruma spēju iekļūt specifiska reakcija ar atbilstošo antigēnu. 3-5 mēģenēs nedrīkst būt “gredzenu” - nav viens otram atbilstošu antivielu un antigēnu. "Gredzens" 1. mēģenē - pozitīvs reakcijas rezultāts - norāda, ka testa antigēns atbilst ņemtajam imūnserumam, "gredzena" neesamība ("gredzens" tikai 2. mēģenē) norāda uz to neatbilstību - negatīvu. reakcijas rezultāts.
Izgulsnēšanās reakcija agarā (gelā). Reakcijas īpatnība ir tāda, ka antigēna un antivielu mijiedarbība notiek blīvā vidē, t.i., gēlā. Iegūtās nogulsnes barotnes biezumā rada duļķainu svītru. Joslas trūkums norāda uz neatbilstību starp reakcijas komponentiem. Šo reakciju plaši izmanto biomedicīnas pētījumos, jo īpaši pētot toksīnu veidošanos difterijas izraisītājā.
Kontroles jautājumi
1. Kāda ir galvenā atšķirība starp aglutinācijas un nokrišņu reakcijām?
2. Kāpēc nokrišņu reakcijā nevar izmantot duļķainas sastāvdaļas?
Vingrinājums
1. Uzstādiet gredzena izgulsnēšanas reakciju un uzzīmējiet rezultātu.
2. Izpētiet antigēna un antivielu mijiedarbības raksturu izgulsnēšanās reakcijā agarā, ieskicējiet rezultātu (paņemiet krūzīti no skolotāja).
Līzes reakcija (imūnā citolīze)
Imūnlīze ir šūnu izšķīšana antivielu ietekmē, kad obligāta dalība papildināt. Reakcijai jums ir nepieciešams:
1. Antigēns – mikrobi, sarkanās asins šūnas vai citas šūnas.
2. Antiviela (lizīns) - imūnserums, retāk pacienta serums. Bakteriolītiskais serums satur antivielas, kas iesaistītas baktēriju lizē; hemolītiski - hemolizīni, kas veicina sarkano asinsķermenīšu līzi; spirohetu līzei nepieciešami spirohetolizīni, šūnas - itolizīni utt.
3. Papildināt. Visvairāk papildina serumu jūrascūciņas. Šo serumu (vairāku dzīvnieku maisījumu) parasti izmanto kā papildinājumu. Svaigs (vietējais) papildinājums ir nestabils un viegli iznīcina, karsējot, kratot vai uzglabājot, tāpēc to var lietot ne ilgāk kā divas dienas pēc saņemšanas. Lai saglabātu komplementu, tam pievieno 2%. borskābe un 3% nātrija sulfāts. Šo papildinājumu var uzglabāt 4°C temperatūrā līdz divām nedēļām. Visbiežāk izmanto sauso komplementu. Pirms lietošanas to izšķīdina izotoniskā šķīdumā līdz sākotnējam tilpumam (norādīts uz etiķetes).
4. Izotoniskais šķīdums.
Hemolīzes reakcija(19. tabula). Reakcijai jums ir nepieciešams:
1. Antigēns - 3% mazgātu aitu eritrocītu suspensija ar ātrumu 0,3 ml eritrocītu nogulsnes un 9,7 ml izotoniskā šķīduma.
2. Antiviela - hemolītiskais serums (hemolizīns) pret aitu eritrocītiem; parasti sagatavo ražošanā, liofilizē un titru norāda uz etiķetes.
Hemolizīna titrs ir augstākais seruma atšķaidījums, kurā komplementa klātbūtnē notiek pilnīga 3% sarkano asins šūnu suspensijas hemolīze. Hemolīzes reakcijai hemolizīnu ņem trīskāršā titrā, t.i., atšķaida 3 reizes mazāk nekā pirms titra. Piemēram, ar seruma titru 1:1200, serumu atšķaida 1:400 (0,1 ml seruma * un 39,9 ml izotoniskā šķīduma). Ir nepieciešams pārmērīgs hemolizīns, jo daļu no tā var adsorbēt citi reakcijas komponenti.
* (Jums nevajadzētu uzņemt mazāk par 0,1 ml seruma - mērījumu precizitāte cietīs.)
3. Komplementu atšķaida attiecībā 1:10 (0,2 ml komplementa un 1,8 ml izotoniskā šķīduma).
4. Izotoniskais šķīdums.
19. tabula. Hemolīzes reakcijas shēma
Rezultātu uzskaite. Ja reakcija tiek veikta pareizi, 1. mēģenē notiks hemolīze - tās saturs kļūs caurspīdīgs. Kontrolē šķidrums paliek duļķains: 2. mēģenē nav pietiekami daudz komplementa, lai notiktu hemolīze, 3. mēģenē nav hemolizīna, 4. mēģenē nav ne hemolizīna, ne komplementa, 5. mēģenē antigēns to dara. neatbilst antivielām,
Ja nepieciešams, hemolītisko serumu titrē saskaņā ar šādu shēmu (20. tabula).
Pirms titrēšanas sagatavo sākotnējo seruma atšķaidījumu 1:100 (0,1 ml seruma un 9,9 ml izotoniskā šķīduma), no kura nepieciešamie atšķaidījumi, Piemēram:
No šiem atšķaidījumiem titrēšanas mēģenēs pievienojiet 0,5 ml seruma, kā parādīts tabulā. 20.
20. tabula. Titrēšanas shēma hemolītiskajam serumam (hemolizīns)
Tabulā sniegtajā piemērā. 20, hemolītiskā seruma titrs ir 1:1200.
Lietojot svaigu hemolītisko serumu, tas ir jāinaktivē, lai iznīcinātu tajā esošo komplementu. Lai to izdarītu, to 30 minūtes karsē 56 ° C temperatūrā ūdens vannā vai inaktivatorā ar termostatu. Pēdējā metode ir labāka: tā novērš sūkalu pārkaršanas iespēju, t.i., to denaturāciju. Denaturēti serumi nav piemēroti testēšanai.
Bakteriolīzes reakcija. Šajā reakcijā komplements lizē baktērijas atbilstoša (homologa) seruma klātbūtnē. Reakcijas shēma būtībā ir līdzīga hemolīzes reakcijas shēmai. Atšķirība ir tāda, ka pēc divu stundu inkubācijas visas mēģenes tiek iesētas Petri trauciņos ar eksperimentā ņemtajam mikroorganismam labvēlīgu barotni, lai noskaidrotu, vai tas ir lizēts. Ja eksperiments tiek veikts pareizi, kultūrām no 2-5 mēģenēm (kontroles) vajadzētu uzrādīt bagātīgu augšanu. Augšanas trūkums vai vāja augšana inokulācijā no 1. mēģenes (eksperiments) norāda uz mikrobu nāvi, t.i., ka tie ir homologi pret antivielu.
Uzmanību! Bakteriolīzes reakcija jāveic aseptiskos apstākļos.
Kontroles jautājumi
1. Kas notiks ar sarkanajām asins šūnām, ja izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma vietā izmantos destilētu ūdeni? Kas ir šīs parādības pamatā?
2. Kāda reakcija notiks, kad eritrocīti mijiedarbosies ar homologu imūnserumu, ja nav komplementa?
Vingrinājums
Iestatiet hemolīzes reakciju. Ierakstiet un ieskicējiet rezultātu.
Saistītā informācija.
