Aglütinasyon reaksiyonu (lat. aglütinasyon- yapıştırma) - elektrolitlerin varlığında korpüsküllerin (bakteri, kırmızı kan hücreleri vb.) antikorlar tarafından yapıştırılması.
Aglütinasyon reaksiyonu Antikorlar tarafından "birbirine yapıştırılmış" parçacıklardan (örneğin bakterilerden) oluşan pullar veya tortular şeklinde kendini gösterir (Şekil 7.37). Aglütinasyon reaksiyonu şu amaçlarla kullanılır: hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi; hastanın kan serumundaki antikorların belirlenmesi; kan gruplarının belirlenmesi.
Pirinç. 7.37a,b. ile aglütinasyon reaksiyonuIgM-antikorlar (a) veIgG-antikorlar (b)
1. Hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi Yaklaşık reaksiyon cam üzerinde aglütinasyon (Şekil 7.38). Hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu, bir damla aglütinasyon serumuna (1:20 seyreltme) eklenir. Topaklı bir çökelti oluşur.
Pirinç. 7.38.
Bir hastadan izole edilen bir patojenle kapsamlı bir aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu aglütinasyon serumunun seyreltilerine eklenir.
Pirinç. 52
2. Hastanın kan serumunda antikorların belirlenmesi
Hastanın kan serumu ile ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Hasta serumunun seyreltilerine Diagnosticum eklenir.
- O-diagnosticum ile aglütinasyon (ısı ile öldürülen, O-antijeni tutan bakteri) ince taneli aglütinasyon şeklinde meydana gelir.
- H-diagnosticum ile aglütinasyon (kamçılı H-antijenini koruyan, formaldehit tarafından öldürülen bakteri) büyüktür ve daha hızlı gerçekleşir.
3. Kan gruplarının belirlenmesi için aglütinasyon reaksiyonu Kan gruplarını belirlemek için aglütinasyon reaksiyonu, eritrositlerin kan grubu antijenleri A (I), B (III)'e karşı immün serum antikorları ile aglütinasyonunu kullanarak ABO sistemini oluşturmak için kullanılır (Tablo b). Kontrol: antikor içermeyen serum, yani. serum AB (IV) kan grubu; A (II), B (III) gruplarının kırmızı kan hücrelerinde bulunan antijenler. Negatif kontrol antijen içermez, yani grup O(I) eritrositler kullanılır.
Tablo 7.6. ABO kan gruplarının belirlenmesi
| Reaksiyon sonuçları |
Grup |
|
|
ait |
||
|
araştırıldı |
||
|
kırmızı kan hücreleri |
serum (plazma) |
|
|
standart |
standart ile |
|
|
serumlar | ||
Ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu (RA). Hastanın kan serumunda AT'yi belirlemek için Kapsamlı aglütinasyon reaksiyonu (RA). Bunu yapmak için, bir dizi kan serumu seyreltisine bir teşhis eklenir - öldürülmüş mikroorganizmaların veya emilmiş Ag içeren parçacıkların bir süspansiyonu. Maksimum seyreltme veren aglütinasyon Ag'ye serum titresi denir.
Aglütinasyon reaksiyonu türleri (RA) AT'yi tespit etmek için - tularemi için bir kan damlası testi (bir damla kana uygulanan bir teşhis ve görünür beyazımsı aglütinatların görünümü ile) ve bruselloz için Huddleson testi (bir damla kana uygulanan yılan otu menekşesi ile lekelenmiş bir teşhis ile) serum).
Yaklaşık aglütinasyon reaksiyonu (RA)
İzole edilen mikroorganizmaları tanımlamak için cam slaytlara yaklaşık bir RA yerleştirilir. Bunu yapmak için, bir damla standart teşhis antiserumuna (1:10, 1:20 oranında seyreltilmiş) bir patojen kültürü eklenir. Şu tarihte: olumlu sonuç antiserumun artan seyreltmeleri ile ayrıntılı bir reaksiyon gerçekleştirin.
Reaksiyon Diagnostik serum titresine yakın dilüsyonlarda aglütinasyon gözlenirse pozitif kabul edilir.
OAS. Somatik O-Ag'lerısıya dayanıklıdır ve 2 saat kaynamaya dayanabilir.AT ile etkileşime girdiğinde ince taneli agregatlar oluştururlar.
Dırdır etmek. N-Ag (kamçılı) Termolabildirler ve 100 °C'de ve ayrıca etanolün etkisi altında hızla bozunurlar. H-antiserum ile reaksiyonlarda, 2 saatlik inkübasyondan sonra gevşek büyük pullar oluşur (bakterilerin flagella ile birbirine yapışmasıyla oluşur).
Vi-Ar tifo bakterileri nispeten ısıya dayanıklıdır (2 saat boyunca 60-62 °C sıcaklıklara dayanır); Vi antiserumuyla inkübe edildiğinde ince taneli bir aglütinat oluşur.
Doğrudan hemaglutinasyon reaksiyonları
Bunlardan en basiti reaksiyonlar - aglütinasyon ABO sistemindeki kan gruplarını belirlemek için kullanılan kırmızı kan hücreleri veya hemaglutinasyon. Belirlemek için aglütinasyon(veya bunların yokluğunda) anti-A ve anti-B aglütininli standart antiserumlar kullanın. İncelenen Ag'ler kırmızı kan hücrelerinin doğal bileşenleri olduğundan reaksiyona doğrudan denir.
Ortaklaşa doğrudan hemaglutinasyon Viral hemaglutinasyonun mekanizmaları vardır. Birçok virüs, kuşların ve memelilerin eritrositlerini kendiliğinden aglütine etme yeteneğine sahiptir; bunların eritrosit süspansiyonuna eklenmesi, onlardan agregat oluşumuna neden olur.
Aglütinasyon reaksiyonu Aglütinasyon reaksiyonu
(RA) - tanımlama ve tanımlama yöntemi nicelik belirleme Ag ve At, çıplak gözle görülebilen topaklanmalar oluşturma yeteneklerine dayanmaktadır. Bulaşıcı hastalıklar bölümünde. hastalıklarda veya başka amaçlarla bilinmeyen mikropları ve hücreleri tanımlamak, kanda ve diğer sıvılarda Ab varlığını ve miktarını belirlemek için kullanılır. Belirleme ilkesi Ag ve Ab arasındaki etkileşimin özgüllüğüne dayanır ve bilinmeyenden bilineni bulmayı içerir. RA için birçok seçenek vardır: niceliksel ve niteliksel, test tüpü ve cam, hacimsel ve damlacık, geleneksel, hızlandırılmış ve ekspres yöntemler. RA'yı evrelemek için ihtiyacınız olan: 1) s-ka kan. Bakteri tipinin (var) belirlenmesine yönelik varyantta, tavşanların immünizasyonuyla üretilen endüstriyel aglütinasyon testleri kullanılır. Ab tipinin belirlendiği varyantta testten kan örneği alınır. insanlar veya hayvanlar. Çözelti steril olmalı ve asılı parçacıklardan arındırılmış olmalıdır. Temel seyreltmeyi salin solüsyonunda hazırlayın. Bu hastalığın tanısal titresinden 2-4 kat daha düşük olmalıdır; 2) Ag. Ab tipinin belirlendiği reaksiyonun versiyonunda endüstriyel teşhis kitleri kullanılır; Ag'nin belirlendiği varyantta, teşhisler, 18-20 saatlik agar (daha az sıklıkla et suyu) testinin tuzlu çözeltisinde 1-3 milyar süspansiyon şeklinde kendileri hazırlanır. mikrop, 70°C'de bir su banyosunda 1 saat ısıtılarak veya formaldehitle 37°C'de 24 saat inkübasyonla etkisiz hale getirilir (nihai konsantrasyon %0,2); 3) tuzlu su çözeltisi formunda elektrolit. Evreleme tekniği hacimsel seri tüp S-ki'de Ab titresini belirlemek için RA: s-ki'nin ana seyreltisinden birkaç sıra çalışma seyreltisi hazırlanır. Satır sayısı, deneye alınan teşhislerin sayısına bağlıdır; sayı ve seyreltme faktörleri, şüphelenilen hastalığın teşhis titresine göre belirlenir. Seri en azından tanısal Ab titresine karşılık gelen bir dilüsyon, bunun altında iki dilüsyon ve üstünde iki dilüsyon içermelidir. örneğin, teşhis titresi 1:100 ise, RA evrelemesinin hacimsel yöntemiyle aşağıdaki dilüsyonlar hazırlanmalıdır: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; damlama ile Yöntemde, ilk seyreltmeye (1:25) gerek yoktur, ancak daha yüksek bir seyreltmeye (1:800) ihtiyaç vardır. bilimsel araştırma s-ku titre edilir olumsuz tepki. Aşağıdaki şekilde seyreltilir: Reaksiyon 0,5 ml'lik bir hacimde gerçekleştirildiğinde 1'inci hariç tüm test tüplerine 0,25 ml tuzlu su çözeltisi, reaksiyon 1'lik bir hacimde gerçekleştirilirken 0,5 ml dökülür. ml. 1. ve 2. test tüplerine, 2. test tüpünden 0,25 (0,5) ml ana seyreltiyi kesilen hacme dökün ve üreme s-k ve 2 kat arttırılarak 0,25 (0,5) ml 3'e, 3'ten 4'e vb. aktarılır. sonuncuya kadar hacimleri dengelemek için kesimden itibaren her şeye 0,25 (0,5) ml dökülür. Her seyreltme ayrı bir pipet kullanılarak gerçekleştirilir. Deneye birden fazla diagnostik alınırsa, her biri için aynı şekilde kendi seyreltme serileri hazırlanır. Test tüpünün her seyreltilmesine, test tüpünün hacmine eşit bir hacimde Diagnosticum eklenir, bunun sonucunda her test tüpündeki seyreltme iki katına çıkar. Deney, s-ki kontrolüne (0,25 - 0,5 ml s-ki ana seyreltisinin ve aynı miktarda salin solüsyonu) ve Ag kontrolüne (0,25 - 0,5 ml diagnostikum ve aynı miktarda salin solüsyonunun) karşılık gelir. Deneyde birden fazla teşhis kullanılıyorsa, her birinin kendi antijen kontrolü vardır. Test tüplerinin bulunduğu raf iyice çalkalanır ve 37°C'deki bir termostata 4 saat süreyle yerleştirilir ve ardından ertesi güne kadar oda sıcaklığında bırakılır, ardından çökelti miktarı ve temizlenme derecesine göre PA kaydedilir. sıvı. Bu göstergelerin belirlenmesi, aglütinatların doğasına bağlı olarak, çıplak gözle, karanlık bir arka plan üzerinde, aglütinoskopta veya mikroskop aynasının içbükey yüzeyi üzerinde gerçekleştirilir. Muhasebe kontrollerle başlar: Kontrol C şeffaf olmalı, Ag tekdüze bulanık olmalıdır (tüpü çalkaladıktan sonra). Kontroller iyiyse, tüm test tüplerinde artılarla belirtilen aglütinasyonun varlığını ve derecesini belirleyin: büyük tortu ve sıvının tamamen temizlenmesi - 4 artı; büyük tortu ve sıvının eksik temizlenmesi - 3 artı; gözle görülür tortu ve sıvının gözle görülür şekilde temizlenmesi 2 artıdır. Bundan sonra titre belirlenir: en az 2 artı aglütinasyon yoğunluğuna sahip en yüksek seyreltme. Titre araştırması s-ki bu hastalığın tanısal titresi ile karşılaştırılır. Titre incelenirse. s-ki tanısal değerden 2 kat daha düşükse reaksiyon şüpheli olarak değerlendirilir; titre eşitse teşhis - nasıl zayıf pozitif; 2-4 kat daha yüksekse pozitif, 8 veya daha fazla ise keskin pozitif kabul edilir. Ab'nin yaygın dağılımı ile sağlıklı insanlar RA'yı değerlendirmek için Ab titresindeki bir artış kullanılır. Seri RA'daki Ar tipini belirlemek için satır sayısı, tanımlama için alınan sayıya karşılık gelmelidir teşhis testleri. Diagnostik testin ana dilüsyonundan, Ab titresini belirlemek için RA'da olduğu gibi bir dizi ardışık iki kat dilüsyon hazırlanır. Seyreltme faktörleri aglütinasyon testinin titresine bağlıdır.Deneyde, testin titresine eşit bir seyreltmenin yanı sıra bundan 2, 4, 6, 8 kat daha düşük bir seyreltmenin varlığı gereklidir. tanısal testin titresi 1 3200 ise, 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 dilüsyonlarını kullanmalısınız. Test dilüsyonlarına aynı hacimde test edilen Ag eklenir, bunun sonucunda test 2 kat artar. Deneye 2 kontrol test ve Ag eklenir. Deneyde birden fazla S-k yer alıyorsa her birinin kendi kontrolüne ihtiyacı vardır. Reaksiyonun tamamlanmasının ardından stand kuvvetlice çalkalanır ve yerine yerleştirilir. 37 °C'de bir termostatta.Sonuçlar yukarıda açıklandığı gibi dikkate alınır.Reaksiyonun değerlendirilmesi özellikleri vardır.Çalışmanın uygunluğu hakkında bir sonuç çıkarmak için. Deneye alınan Ag'nin reaksiyonunun titresi, standart teşhis testinin titresinin en az yarısına karşılık gelmelidir.1 4 ve altındaki titreler grup reaksiyonu olarak kabul edilir. Damla md RA'nın evrelemesi, s-ku'nun 1 ml'lik bir hacimde seyreltilmesi, Ag'nin daha yüksek bir konsantrasyonda (10 milyar/ml) kullanılması ve 1 eklenmesiyle hacimselden farklıdır. - 2 bir test tüpüne düşer Ag eklendikten sonra ilacın seyreltilmesi değişmemiş olarak kabul edilir, aksi takdirde ayarlama, kaydetme ve değerlendirme yöntemi hacimsel yönteme benzer
(Kaynak: Mikrobiyoloji Terimleri Sözlüğü)
İMMÜNOMİKROBİYOLOJİK ÇALIŞMALAR
İmmünolojik yöntemler birçok sorunu çözmek için kullanılır:
1. Durum değerlendirmesi bağışıklık sistemi kişi ( bağışıklık durumu) niceliksel tanımı gereği ve fonksiyonel özellikler Bağışıklık sisteminin hücreleri ve ürünleri.
2. İnsan dokularının bileşiminin ve özelliklerinin belirlenmesi: kan grupları, Rh faktörü, transplantasyon antijenleri.
3. Antikor titrelerini (serodiagnosis) tespit edip oluşturarak, vücuttaki patojen antijenlerini tanımlayarak ve bu antijenlere karşı hücresel reaksiyonları belirleyerek bulaşıcı hastalıkların ve bunlara karşı direncin teşhisi.
4. İnsan ve hayvan vücudundan izole edilen bakteri ve virüs kültürlerinin seroid tanımlanması.
5. İnsan vücudunda ve içinde tespit dış ortam Antijenik veya hapten özelliği olan her türlü madde (hormonlar, enzimler, zehirler, ilaçlar, ilaçlar vb.).
6. İmmünopatolojik durumların, alerjilerin, transplantasyonun ve antitümör reaksiyonlarının tanımlanması.
Antijen ve antikor arasındaki etkileşim süreci serolojik reaksiyonlar iki aşamada gerçekleşir:
1) özel- Antikorların (paratoplar) ve antijen epitoplarının aktif merkezlerinin tamamlayıcı bir kombinasyonunun meydana geldiği etkileşim aşaması. Tipik olarak bu aşama birkaç saniye veya dakika sürer;
2) spesifik olmayan- tezahür aşaması, karakterize edilir dış işaretler bağışıklık komplekslerinin oluşumu. Bu aşama birkaç dakikadan birkaç saate kadar gelişebilir.
Antikorların antijenle optimal spesifik etkileşimi, pH'ı nötre yakın olan izotonik bir çözeltide meydana gelir. Bir in vitro sistemdeki antijen-antikor reaksiyonuna çeşitli olayların ortaya çıkması eşlik edebilir
· aglütinasyon,
· yağış,
· lizis.
Dış belirtiler reaksiyonlar antijenin fizikokimyasal özelliklerine (partikül boyutu, fiziksel durum), antikorların sınıfı ve türü (tam ve eksik) ve ayrıca deneysel koşullar (orta yoğunluk, tuz konsantrasyonu, pH, sıcaklık).
Antijenlerin ve antikorların çok değerliliği, çıplak gözle görülebilen agregatların oluşumunu sağlar. Bu, diğer antikor ve antijen moleküllerinin, elde edilen antijen-antikor kompleksine sırayla bağlandığını ileri süren ağ oluşumu teorisine uygun olarak gerçekleşir. Sonuç olarak, çöken agregalara dönüşen ağ yapıları oluşur. Reaksiyonun doğası ve ciddiyeti, antijenlerin ve antikorların kantitatif oranına bağlıdır. En yoğun reaksiyonlar, reaktifler eşdeğer oranlarda olduğunda meydana gelir.
Önkoşul kafes oluşumu (ağlar) - her antijen molekülü için üçten fazla antijenik belirleyicinin ve her antikor molekülü için iki aktif merkezin varlığı. Antijen molekülleri kafes düğümleridir ve antikor molekülleri bağlantı bağlantılarıdır. Tortu oluşumundan sonra süpernatanda ne serbest antijenler ne de serbest antikorlar tespit edilmediğinde, antijen ve antikor konsantrasyonlarının optimal oranlarının (eşdeğerlik bölgesi) bölgesi.
Antijenler tam antikorlarla birleştiğinde çökelebilen agregatlar oluşur. Eksik antikorlar(tek değerlikli) ağ yapılarının ve büyük agregatların oluşumuna neden olmaz. Bu tür antikorları tespit etmek için şunu kullanın: özel yöntemler antiglobulinlerin kullanımına dayanmaktadır (Coombs reaksiyonu).
Yüksek özgüllükleri ve duyarlılıkları nedeniyle serolojik reaksiyonlar, antijenlerin ve antikorların tespiti ve miktarının belirlenmesi için kullanılır. Reaksiyonlardaki immün reaktiflerin miktarı titre ile ifade edilir - reaksiyonun hala gözlemlendiği serum veya antijenin maksimum seyreltilmesi.
Mikrobiyolojik ve immünolojik laboratuvarlardaki serolojik reaksiyonlar iki amaç için kullanılır:
1) bilinen bir antikor (bağışıklık teşhis serumu) kullanılarak genel olarak mikroorganizmaların, toksinlerin ve antijenlerin seroidentifikasyonu için,
2) serodiyagnoz için - bilinen bir antijen (diagnosticum) kullanılarak bakteriyel, viral ve daha az sıklıkla diğer bulaşıcı hastalıklar için hastanın kan serumundaki antikorun yapısının belirlenmesi.
Antijenin jenerik, tür ve tipini belirlemek için bilinen bağışıklık testlerine ihtiyaç vardır. teşhis serumu. Öldürülmüş veya canlı mikroorganizmaların, bunların çürüme ürünlerinin, nötralize edilmiş veya doğal toksinlerin artan dozlarda hayvanlara (genellikle tavşanlara) tekrar tekrar uygulanmasıyla elde edilirler. Hayvanların belirli bir aşılama döngüsünden sonra, hayvanın büyük miktarda kan alması veya tamamen kanaması gerçekleştirilir. Steril bir kapta toplanan kan, pıhtılaşmayı hızlandırmak için önce 37°C sıcaklıktaki termostatta 4-6 saat bekletilir, ardından bir gün buz kutusunda bekletilir. Ortaya çıkan şeffaf serum steril bir kaba emilir, koruyucular eklenir, antikor titresi belirlenir, sterilliği kontrol edilir ve ampullere dökülür.
Kullanılmış adsorbe edilmemiş Ve adsorbe edilmiş teşhis serumu. Emilmeyen serumlar yüksek titreler antikorlar, ancak grup (çapraz) reaksiyonlar verme yeteneğine sahiptirler.
Adsorbe edilmiş serumlar, kesin etki spesifikliği ile karakterize edilir (yalnızca homolog bir antijenle reaksiyona girerler). Yalnızca belirli bir antijene karşı antikor içeren serumlara denir. monoreseptör.
Ayrıca florokromlar, enzimler ve radyoizotoplarla etiketlenmiş serumlar da üretirler, bu da antijenin izlerini bile yüksek derecede doğrulukla tespit etmeyi mümkün kılar.
Canlı veya öldürülmüş bakterilerin süspansiyonları, bunların parçalanma ürünleri, toksinler ve virüsler serolojik reaksiyonlarda antijen (diagnostikum) olarak kullanılır. Bazı durumlarda mikroorganizmalardan ve hayvan dokularından ekstraktlar veya kimyasal olarak izole edilmiş antijenler kullanılır.
Tüm immünomikrobiyolojik yöntemler 3 gruba ayrılabilir:
1) dayalı antijenin antikorla doğrudan etkileşimi(aglütinasyon, çökelme, hemaglutinasyon, immobilizasyon vb. fenomenleri);
2) dayalı Antijenin antikorla aracılı etkileşimi(tepkiler dolaylı hemaglutinasyon, pıhtılaşma, lateks aglütinasyonu, karbon aglomerasyonu, bentonit aglütinasyonu, kompleman fiksasyonu, vb.);
3) kullanma etiketli antikorlar veya antijenler(floresan antikor yöntemi, enzime bağlı immünosorbent ve radyoimmünoanalizler ve diğer yöntemler).
AGLUTİNASYON REAKSİYONLARI
Bu reaksiyonlar, antikorlar tarafından birbirine yapıştırılan ve çöken parçacıklar (mikrobiyal hücreler, kırmızı kan hücreleri ve diğer korpüsküler antijenler) formundaki antijenleri içerir.
Aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirmek için(RA) üç bileşene ihtiyaç vardır: 1) antijen (aglütinojen);
2) antikor (aglutinin)
3) elektrolit (izotonik sodyum klorür çözeltisi).
Yaklaşık aglütinasyon reaksiyonu (RA)
Bir gösterge veya plaka RA, oda sıcaklığında bir cam slayt üzerine yerleştirilir. Bunu yapmak için, 1:10 ila 1:20 seyreltmede bir damla serum ve bir kontrol damlası izotonik sodyum klorür çözeltisini camın üzerine ayrı ayrı uygulamak için bir Pasteur pipeti kullanın. Her iki bakteriyolojik döngüye koloniler veya günlük bakteri kültürü (bir damla diagnostikum) eklenir ve iyice karıştırılır. Tepkiler birkaç dakika sonra, bazen bir büyüteç (x5) kullanılarak görsel olarak dikkate alınır. Pozitif RA ile serum damlasında büyük ve küçük pulların görünümü not edilir; negatif RA ile serum eşit şekilde bulanık kalır.
Ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu Bir hastadaki spesifik antikorların titresini belirlemek için.
Serodiyagnoz için tam gelişmiş RA hastaların serumunda yapılır. Ayrıca 1:50 - 1:100 ila 1:800 veya 1:1600 izotonik sodyum klorür çözeltisi içinde seyreltilir.Daha düşük serum titreleri, sağlıklı kişilerde veya başka bir tanıya sahip hastalarda (tanısal titre) bulunan normal aglütininleri içerebilir. Bu reaksiyonda bir antijen olarak, genellikle öldürülmüş bakterilerin bilinen süspansiyonları olan diagnostikler kullanılır.
İlk önce aglütinasyon tüplerine 1 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi dökülür. Bunlardan birincisine 1:100 oranında seyreltilmiş 1 ml serum eklenir ve karıştırıldıktan sonra ikinciye, ikinciden üçüncüye vb. 1 ml aktarılır. Elde edilen iki kat serum seyreltmelerine (1:100 ila 1:1600 veya daha fazla) 1 ml'de 3 milyar mikrobiyal cisim içeren 1-2 damla bakteri süspansiyonu eklenir. Tüpler çalkalanıp 37°C'deki termostata 2 saat yerleştirildikten sonra 24 saat oda sıcaklığında bekletildi.
Ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu, her test tüpünün kontrol tüplerinden başlayarak hafifçe çalkalanarak sırayla değerlendirilmesiyle dikkate alınır. Kontrol tüplerinde aglütinasyon olmamalıdır. Aglütinasyon reaksiyonunun yoğunluğu aşağıdaki işaretlerle işaretlenmiştir: ++++ - tam aglütinasyon (mutlak şeffaf bir sıvı içinde aglütine pullar); +++ - eksik aglütinasyon (hafif yanardöner bir sıvıda pullar); ++ - kısmi aglütinasyon (pullar açıkça görülebilir, sıvı hafif bulanıktır); + - zayıf, şüpheli aglütinasyon - sıvı çok bulanıktır, içindeki pulları ayırt etmek zordur; - - aglütinasyonun olmaması (sıvı eşit şekilde bulanık).
Serum titresi, aglütinasyonun yoğunluğunun en az iki artı (++) olarak değerlendirildiği son seyreltme olarak alınır.
Ders No. 16
Sözlük
DOĞRUDAN – hiçbir şey olmadan, sonraki bağlantılar olmadan doğrudan sonraki.
DOLAYLI OLARAK– doğrudan değil, diğer hücreler aracılığıyla.
AZALMA ≠ ARTIŞ (hücre aktivitesi).
REDDETMEK - kabul etmemek, reddetmek. Vücut nakledilen organı reddediyor.
Bağışıklık reaksiyonları.
İmmün reaksiyonlar, bir antijen ile bir antikorun veya bir antijen ile duyarlılaştırılmış bir T-lenfositin spesifik etkileşiminin (bağlanmasının) reaksiyonlarıdır.
Bu reaksiyonlar in vitro (bir test tüpünde) ve in vivo (canlı bir organizmada) meydana gelir.
Bu reaksiyonlar serumu (serum) içerir, bu yüzden bunlara denir. serolojik.
Bağışıklık tepkileri kullanılır bulaşıcı hastalıkların tanısı. Bu durumda bilinmeyen bileşen, antijenin antikorla etkileşiminin özgüllüğüne dayanan bilinen bileşen tarafından belirlenir. Eğer bilinen antikor, o zaman yapabilirsin Bilinmeyen bir antijeni tanımlamak (keşfetmek). Eğer bilinen antijen, o zaman onu kullanabilirsin bilinmeyen antikorları tespit etmek.
Böylece bağışıklık tepkileri kullanılır:
1) için serolojik teşhis hastalıkların (serodiagnozu) - bulaşıcı bir hastalığın spesifik bir etken maddesine (bilinen antijen) karşı antikorların hasta kişilerin kan serumunda tespiti; Hasta bir kişinin kan serumunda herhangi bir patojene karşı antikorlar mevcutsa, buna neden olan bu patojendir. enfeksiyon;
2) için mikropların serolojik tanımlanması (sero-tanımlanması) - immün teşhis serumları (bilinen antikorlar) kullanılarak patojen tipinin belirlenmesi; antikorlar hasta bir kişiden izole edilen bir patojene bağlanırsa, bu mikrop, hayvanın aşılandığı mikropla aynıdır alma bağışıklık teşhis serumu .
İmmün reaksiyonlar 2 aşamada meydana gelir:
1) spesifik aşama Antikorun aktif merkezinin antijenin belirleyici grubu ile antijen-antikor komplekslerinin oluşumu ile bağlantısı; bu aşama hızla ilerliyor ancak gözle görülür bir etkisi yok;
2) spesifik olmayan aşama- dış görünüş görünür etki antijen ve antikorun etkileşimi - kayıp taslak(aglutinasyon) veya bulanıklık(yağış), bu da izin verir Görmek eğitim antijen-antikor kompleksleri ve hakkında bir sonuç çıkarmak uyma antijen ve antikor birbirine bağlanır.
Bağışıklık reaksiyonları şunları içerir: aglütinasyon reaksiyonu (RA), çökelme reaksiyonu (RP), kompleman fiksasyon reaksiyonu (CFR).
Aglütinasyon reaksiyonu- bu, bir elektrolit varlığında antikorların etkisi altında mikrobiyal veya diğer hücrelerin (eritrositler) yapıştırılması ve çökeltilmesidir. Reaksiyonun görünür etkisi (aglutinasyon fenomeni), adı verilen bir çökeltinin oluşmasıdır. aglütinasyon.
Bu reaksiyon için kullanılır serolojik tanı Ve serolojik tanımlama. RA serodiyagnoz için kullanılır (hastaların kan serumundaki antikorların tespiti) Tifo ve paratifo(Vidal reaksiyonu), bruselloz(Wright'ın tepkisi) Tularemi ve leptospiroz. RA, sero-tanımlama (bir hastadan izole edilen patojen tipinin belirlenmesi) için kullanılır. bağırsak enfeksiyonları, boğmaca, kolera ve benzeri.
Bileşenlerreaksiyonlar:
1 A antijen (aglütinojen) – bunlar bütün (yok edilmemiş) mikrobiyal veya diğer hücrelerdir ( tanecikli, çözünmeyen antijen). Aglütinojenler- bu bir askıya alma işlemidir canlı veya öldürüldü mikrobiyal hücreler veya diğer hücreler. Antijenler bilinmiyor veya biliniyor olabilir. Bilinmeyen bir aglütinojen, hastanın vücudundan izole edilen ve belirlenmesi gereken bir mikrobiyal kültürdür. Bilinen antijen – teşhis– teşhis ilacı – ölülerin askıya alınması mikroplar bilinen türler tuzlu su çözeltisinde. Bu askıya alma bulutlu (opak), Çünkü mikrobiyal hücreler çözünmez, ancak bozulmadan kalır. Hastaların kan serumundaki bilinmeyen antikorları tespit etmek için bilinen bir aglütinojen kullanılacaktır.
2. Antikor (aglutinin)- kan serumunda bulunur. Antikorlar ayrıca bilinmiyor veya biliniyor olabilir. Tespit edilmesi gereken bilinmeyen antikorlar kan serumunda Hasta kişi. Bilinen antikorlar bulunur bağışıklık tanı serumu bunlara denir aglütinasyon serumları. Sero-tanımlama için kullanılırlar; bilinmeyen bir antijeni belirlemek için - bir tür mikrobiyal kültür.
3. Elektrolit– %0,9 sodyum klorür çözeltisi.
Bir teşhis testinin alınması.
Eğimli agarda yetişen bilinen bir türün patojeninin saf kültürü (örneğin, tifo ateşinin etken maddesi), steril bir tüpe yerleştirilen 3-4 ml izotonik çözelti ile yıkanır, bazılarında mikroplar öldürülür. yöntemle (örneğin kaynatılarak yoğunluk belirlenir (1 ml'de 3 milyar mikrobiyal hücre olmalıdır). Eğer mikrobiyal hücreler öldürülürse Yüksek sıcaklık, o zaman O-diagnosticum (O-antijen) alırlar, ancak formaldehit ile muamele edilirse H-diagnosticum (H-antijen) alırlar.
Teşhis örnekleri: salmonella diagnostiği, bruselloz diagnostiği, tularemi diagnostiği.
Aglütinasyon serumlarının hazırlanması.
Hayvanlara (genellikle tavşanlara) aralıklarla 5-7 kat artan dozlarda mikrobiyal diagnostik maddeler parenteral olarak enjekte edilir. hiperimmünizasyon gerçekleştirin) ve ardından diagnostiğin hazırlandığı mikroplara karşı antikorlar içeren kan serumu alınır. Bağışıklama O-diagnosticum ile yapılırsa, O-aglutinasyon serumları (O-antikorlar içerir) elde edilir, eğer H-diagnosticum ile H-aglütinasyon serumları elde edilir.
Aglütinasyon serumları olabilir adsorbe edilmemiş veya yerli ve adsorbe edilmiş.
Emilmemiş serumlar birbiriyle yakından ilişkili birkaç mikrop türüne karşı grup antikorları içerir.
Adsorbe edilmiş serumlar Bir tür mikropun bir veya daha fazla antijenine karşı antikorlar içerir. Serum yalnızca bir antijene karşı antikor içeriyorsa bunlara denir. monoreseptör veya tek değerlikli, birden fazla antijene karşı – grup adsorbe edilmiş serumlar .
Aglütinasyon serumlarına örnekler:Salmonella monoreseptör H-aglutinasyon serumu, Salmonella grubu adsorbe O-aglütinasyon serumu, antikolera O-aglütinasyon serumu, vb..
Titre aglütinasyon serumu - bir antijenle aglütinasyon reaksiyonunun hala tespit edildiği en yüksek serum seyreltmesi (titre, kandaki antikor miktarına bağlıdır: antikor ne kadar fazla olursa, serum titresi o kadar yüksek olur).
RA'nın evrelenmesine yönelik yöntemler.
1. Yaklaşık (lamelli) RA– cam üzerinde gerçekleştirildi. Bir cam slayta 2 damla serum ve 1 damla izotonik solüsyon uygulayın. Bir mikrobiyal kültür, serum damlalarından birine ve bir damla izotonik çözeltiye bir döngü halinde eklenir ve karıştırılır. Bir damla izotonik çözelti mikroplarla – antijen kontrolü, Bir damla mikropsuz serumlar – antikor kontrolü, Bir damla mikrop içeren serumlar – deneyim. Serum, kendisiyle karışan mikrobiyal antijenlere karşılık gelen antikorlar içeriyorsa, o zaman antikorlar ve antijenler spesifik olarak birbirlerine bağlanacak ve 1-3 dakika sonra test damlasında aglütinat pullar görünecektir. Antijen kontrolü bulanık, antikor kontrolü ise berrak olmalıdır. Reaksiyonun sonuçları aglütinat pulların görünümüne göre kaydedilir. . Pullar düşerse reaksiyon olumludur, yani. Bir antijen, bir antikora karşılık gelir ve antijen, antikoru belirlemek için kullanılabilir veya bunun tersi de geçerlidir. Bulutluluk devam ederse reaksiyon negatiftir.
2. Ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu - test tüplerinde gerçekleştirildi. İlk önce hasta bir kişinin kan serumunun 1:50'den 1:1600'e kadar 2 kat seyreltisini hazırlayın. 1 ml izotonik sodyum klorür çözeltisi 6 test tüpüne dökülür. Birinci test tüpüne 1:50 seyreltilmiş hasta kan serumundan 1 ml eklenir, karıştırılır ve 1:100 seyrelti elde edilir, ardından 1:100 seyreltilmiş 1 ml ikinci test tüpüne aktarılır. ve 1:200'lük bir seyreltme elde edilir, vb. Antijen ve serum kontrolü için iki tüp tutulur. Serum kontrolüne yalnızca 1:50 seyreltilmiş serumu, antijen kontrolüne ise yalnızca antijeni ekleyin. Diğer tüm test tüplerine 0,1 ml antijen - diagnostikum (O- veya H-) ekleyin ve tüm test tüplerini 18-20 saat boyunca 37°C'deki bir termostata yerleştirin. Reaksiyon sonuçları, oluşan çökeltinin (aglutinat) niteliğine, miktarına ve bulanıklık derecesine göre kaydedilir. Muhasebe, kontrollerde yalnızca aşağıdaki sonuçlarla gerçekleştirilir: serum kontrolü - şeffaf, antijen kontrolü - bulanık. O-antikorlar ince taneli bir çökelti verir. H-antikorları – iri taneli. Aglütinasyon reaksiyonunun hala görülebildiği son test tüpüne dayanarak, teşhis titresi.
Serodiyagnoz sırasında hastalıklarda, yalnızca belirli bir patojene karşı spesifik antikorları tespit etmek değil, aynı zamanda bunların miktarını da belirlemek önemlidir; böyle bir antikor titresi oluşturmak Bu patojenin neden olduğu bir hastalığın varlığından ne zaman bahsedebiliriz? . Bu titreye tanısal titre adı verilir.Örneğin, tifo ateşini teşhis etmek için 1:400'lük bir antikor titresi belirlemeniz gerekir, ancak daha az olmamalıdır. Daha da doğru sonuçlar verir eşleştirilmiş serumlarda antikorlarda bir artışın tespiti. Hastanın serumu hastalığın başlangıcında ve 3 ila 5 veya daha fazla gün sonra toplanır. Antikor titresi en az 4 kat artarsa bundan bahsedebiliriz. mevcut hastalık.
Sero-tanımlama için ayrıntılı bir aglütinasyon reaksiyonu gerçekleştirilirse, titreye veya titrelerinin yarısına kadar seyreltilmiş aglütinasyon tanısal serumlar kullanılır. Diagnostik serum titresine yakın bir dilüsyonda aglütinasyon tespit edilirse RA pozitif kabul edilir.
