Agglyutinatsiya reaktsiyasi (RA) - elektrolitlar ishtirokida antikorlar ta'sirida mikroblar yoki boshqa hujayralarning yopishishi va cho'kishi. Hosil bo'lgan cho'kma aglutinat deb ataladi.
RA ishlatiladi:
1. Bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash (serodiagnoz).
2. Bemordan ajratilgan patogen mikroorganizmlarning sof kulturasining turi va serovarini aniqlash (serotiplash).
Agglyutinatsiya reaktsiyasi bemorlarning qon zardobida antikorlarni aniqlash uchun ishlatiladi, masalan, tif isitmasi va paratif isitmasi (Vidal reaktsiyasi), brutsellyoz (Rayt, Heddleson reaktsiyasi), tulyaremiya, leptospiroz va boshqalar. yuqumli kasalliklar, shuningdek, bemordan ajratilgan patogenni aniqlash uchun (ichak infektsiyalari, ko'k yo'tal va boshqalar). RA qon guruhlarini, Rh faktorini va boshqalarni aniqlash uchun ishlatiladi.
Reaktsiya quyidagi komponentlarni talab qiladi:
1. Antigen (aglyutinogen) korpuskulyar bo'lishi kerak, ya'ni tirik yoki o'ldirilgan mikroorganizmlar (tashxis m), eritrotsitlar yoki boshqa hujayralar suspenziyasi. Odatda, agar nishablarida o'stirilgan mikroorganizmlarning kundalik madaniyati qo'llaniladi. Kultura 3 - 4 ml izotonik eritma bilan yuviladi, steril naychaga o'tkaziladi va zichligi aniqlanadi. Suspenziya bir hil bo'lishi kerak va 1 ml ga 3 milliardgacha mikrob hujayralari bo'lishi kerak. O'ldirilgan mikroblarning suspenziyasi - diagnostiklardan foydalanish (ishlab chiqarishda tayyorlanadi) ishni osonlashtiradi.
2. Antikorlar (aglyutininlar) bemorning qon zardobida (serodiagnoz paytida) yoki aglutinatsiya qiluvchi zardobda (serotiplash vaqtida) topiladi. Agglyutinatsiya qiluvchi zardoblar quyonlarni o'ldirilgan bakteriyalar bilan immunizatsiya qilish orqali olinadi.
Agglyutinatsiya qiluvchi titr sarum ma'lum eksperimental sharoitlarda mos keladigan antigen bilan reaksiyaga kirishadigan eng yuqori suyultirish deb ataladi.
Agglyutinatsiya qiluvchi sarumlar nativ (adsorbsiyalanmagan) va adsorbsiyalangan bo'lishi mumkin. Kichik suyultirilgan zardoblar nafaqat hayvon zardobini olish uchun immunizatsiya qilingan mikroorganizmlar turi bilan, balki tegishli turdagi mikroorganizmlar bilan ham o'zaro ta'sir qiladi, chunki ularda guruh antikorlari (umumiy antijenlarga ega bo'lgan mikroorganizmlarga antikorlar) mavjud. Native sarumlar batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi uchun (serodiagnoz uchun) qo'llaniladi, bu nafaqat reaktsiya mavjudligini, balki antikor titrining o'sishi dinamikasini ham hisobga oladi.
Agar guruh antijenlari bo'lgan tegishli bakteriyalar bilan o'zaro ta'sir qilish orqali mahalliy zardobdan guruh antikorlari ajratilsa (adsorbsiyalangan), adsorbsiyalangan sarumlar olinadi. Adsorbsiyalangan zardoblar monoretseptor (yoki turga xos) bo'lishi mumkin, bunda faqat bitta antigen retseptoriga antikorlar mavjud. Shisha aglutinatsiya reaksiyasi uchun adsorbsiyalangan sarumlardan foydalaniladi.
Hayvonlarni H-antigeni bilan harakatlanuvchi bakteriyalar bilan immunizatsiya qilganda, H-antikorlari bo'lgan H-aglyutinatsiya qiluvchi zardoblar olinadi (masalan, Salmonella monoreseptorlari H-aglutinatsiya qiluvchi zardob). O-antigen bilan immunizatsiya qilish orqali tarkibida O-antikorlari bo'lgan O-aglutinatsiya qiluvchi zardoblar olinadi (masalan, salmonellalar guruhi adsorbsiyalangan O-aglyutinatsiya zardobi, antixoler O-aglyutinatsiya qiluvchi zardob). H- va O-antigenlari bilan immunizatsiya qilish natijasida H- va O-antikorlari bo'lgan sarumlar olinadi.
Bundan tashqari, O-aglyutininlar nozik taneli aglyutinat hosil qiladi, H-aglyutininlar esa yirik donali cho'kindi hosil qiladi.
3. Elektrolit - izotonik NaCl eritmasi (ditillangan suvda tayyorlangan 0,9% natriy xlorid eritmasi).
Agglyutinatsiya reaktsiyasini amalga oshirishning ikkita asosiy usuli mavjud: shisha ustidagi reaktsiya (ba'zan indikativ yoki plastinka reaktsiyasi deb ataladi) va batafsil reaktsiya (probirkalarda)
Shishada aglutinatsiya reaktsiyasini o'rnatish. Yog'siz shisha slaydga ikki tomchi sarum va bir tomchi natriy xloridning izotonik eritmasi qo'llaniladi. Diagnostik aglutinatsiya qiluvchi zardob bitta suyultirishda olinadi, u titriga qarab 1:10, 1:25, 1:50 yoki 1:100 ni tashkil qiladi. O'rganilayotgan mikroorganizm kulturasi bir tomchi sarum va bir tomchi izotonik eritmaga ilmoq yordamida qo'shiladi va yaxshilab aralashtiriladi. Mikroorganizmlar bilan bir tomchi natriy xlorid antigen nazorati, mikroorganizmsiz zardob tomchisi zardob nazorati hisoblanadi. Siz madaniyatni sarumli tomchidan NaCl bilan tomchiga o'tkaza olmaysiz. Reaksiya xona haroratida 1-3 minut davom etadi. Agar zardob nazorati tiniq qolsa, antigen nazoratida bir xil loyqalik kuzatilsa, kultura zardob bilan aralashgan tomchida aglyutinat parchalari paydo bo'lsa, natija ijobiy hisoblanadi. Agar sarum va antigen bilan tomchida bir xil loyqalik bo'lsa, bu salbiy natijadir. Reaktsiya qorong'i fonda aniqroq ko'rinadi.
Sarum
1. antigen nazorati
2. sarum nazorati
13.1. Antigen-antikor reaktsiyalari va ularning qo'llanilishi
Antigen kiritilganda organizmda antikorlar hosil bo'ladi. Antikorlar ularning sinteziga sabab bo'lgan antijenni to'ldiruvchi va u bilan bog'lanishga qodir. Antijenlarning antitellar bilan bog'lanishi ikki fazadan iborat. Birinchi faza o'ziga xos bo'lib, bunda antijenik determinantning antikorlarning Fab fragmentining faol markaziga tez bog'lanishi sodir bo'ladi. Shuni ta'kidlash kerakki, bog'lanish van der Vaals kuchlari, vodorod va hidrofobik o'zaro ta'sirlar tufayli yuzaga keladi. Bog'lanishning mustahkamligi antikorning faol joyi va antigen epitopi o'rtasidagi fazoviy muvofiqlik darajasi bilan belgilanadi. Muayyan fazadan so'ng sekinroq faza boshlanadi - nospetsifik, bu ko'rinadigan jismoniy hodisa bilan namoyon bo'ladi (masalan, aglutinatsiya paytida yoriqlar hosil bo'lishi va boshqalar).
Immun reaktsiyalari - bu antikorlar va antijenlarning o'zaro ta'siri va bu reaktsiyalar o'ziga xosdir va yuqori sezuvchanlik. Ularda keng qo'llaniladi tibbiy amaliyot. Immunitet reaktsiyalari yordamida quyidagi muammolarni hal qilish mumkin:
Noma'lum antikorlarni ma'lum antijenler bilan aniqlash (antigen diagnosticum). Bu vazifa bemorning qon zardobida patogenga antikorlarni aniqlash zarur bo'lganda yuzaga keladi (serodiagnoz). Antikorlarni topish tashxisni tasdiqlash imkonini beradi;
Ma'lum antikorlar (diagnostik sarum) yordamida noma'lum antijenlarni aniqlash. Ushbu tadqiqot bemorning materialidan ajratilgan patogen madaniyatni aniqlashda (serotiplash), shuningdek, aniqlanganda amalga oshiriladi.
mikroblarning antigenlari va ularning toksinlari qon va boshqalar biologik suyuqliklar. Immunitet reaktsiyalarining ko'plab turlari mavjud bo'lib, ular bosqichma-bosqich va qayd etilgan effektda farqlanadi. Bular aglutinatsiya reaktsiyalari (RA), cho'kma reaktsiyalari (RP), komplement ishtirokidagi reaktsiyalar (RSC), etiketli komponentlar (RIF, ELISA, RIA) yordamida reaktsiyalar.
13.2. Agglyutinatsiya reaktsiyasi
Agglyutinatsiya reaktsiyasi (RA) hisoblanadi immun reaktsiyasi elektrolitlar ishtirokida antigenning antikorlar bilan o'zaro ta'siri va antigen korpuskulyar holatda bo'ladi (eritrositlar, bakteriyalar, adsorbsiyalangan antijenli lateks zarralari). Agglyutinatsiya jarayonida korpuskulyar antijenler antitellar yordamida bir-biriga yopishadi, bu flokulyant cho'kma hosil bo'lishi bilan namoyon bo'ladi. Yoriqlarning paydo bo'lishi antikorlarning ikkita faol markazga ega bo'lishi va antijenler polivalent bo'lishi tufayli yuzaga keladi, ya'ni. bir qancha antijenik determinantlarga ega. RA bemorning materialidan ajratilgan patogenni aniqlash, shuningdek, bemorning qon zardobida patogenga antikorlarni aniqlash uchun ishlatiladi (masalan, brutsellyoz uchun Rayt va Heddleson reaktsiyalari, tif isitmasi va paratif isitmasi uchun Widal reaktsiyasi).
RA tashxisini qo'yishning eng oddiy usuli - bu shisha ustidagi reaktsiya, bu bemordan ajratilgan patogenni aniqlash uchun ishlatiladigan taxminiy RA. Reaktsiya aniqlanganda, diagnostik aglutinatsiya qiluvchi sarum shisha slaydga qo'llaniladi (1:10 yoki 1:20 suyultirilganda), keyin bemordan madaniyat qo'shiladi. Agar tomchida flokulyant cho'kma paydo bo'lsa, reaktsiya ijobiy bo'ladi. Yaqin atrofda nazorat o'rnatiladi: sarum o'rniga bir tomchi natriy xlorid eritmasi qo'llaniladi. Agar diagnostik agglyutinatsiya qiluvchi sarum 1 adsorbsiyalanmagan bo'lsa, u holda suyultiriladi (titrga - aglutinatsiya sodir bo'lishi kerak bo'lgan suyultirish), ya'ni. kengaytirilgan RA ni probirkalarga ortib borishi bilan soling
1 Adsorbsiyalanmagan aglutinatsiya qiluvchi zardob umumiy (oʻzaro reaksiyaga kirishuvchi) antijenlarga ega boʻlgan tegishli bakteriyalarni aglutinatsiya qilishi mumkin. Shuning uchun ular foydalanadilaradsorbsiyalangan aglutinatsiya qiluvchi sarumlar, undan o'zaro reaksiyaga kirishuvchi antikorlar tegishli bakteriyalarga adsorbsiya yo'li bilan chiqariladi. Bunday sarumlar faqat ma'lum bir bakteriyaga xos bo'lgan antikorlarni saqlaydi.
bemordan ajratilgan patogenning suspenziyasidan 2-3 tomchi qo'shiladigan aglyutinatsiya qiluvchi sarumning suyultirishlari. Agglyutinatsiya cho'kindi miqdori va probirkalardagi suyuqlikning tozalanish darajasi bilan hisobga olinadi. Diagnostik sarum titriga yaqin suyultirishda aglyutinatsiya kuzatilsa, reaksiya ijobiy hisoblanadi. Reaktsiya nazorat vositalari bilan birga bo'ladi: natriy xloridning izotonik eritmasi bilan suyultirilgan sarum shaffof bo'lishi kerak, mikroblarning bir xil eritmadagi suspenziyasi bir xil loyqa, cho'kindisiz bo'lishi kerak.
Bemorning qon zardobida patogenga antikorlarni aniqlash uchun to'liq miqyosli RA qo'llaniladi. Uni o'rnatishda bemorning qon zardobi probirkalarda suyultiriladi va probirkalarga teng miqdorda diagnostik suspenziya (o'ldirilgan mikroblarning suspenziyasi) qo'shiladi. Kuluçkadan so'ng, aglutinatsiya sodir bo'lgan sarumning eng yuqori suyultirilishi aniqlanadi, ya'ni. cho‘kma (zardob titri) hosil bo‘lgan. Bunda O-diagnostikum (issiqlik taʼsirida nobud boʻlgan, termostabil O-antigenini saqlab qolgan bakteriyalar) bilan aglyutinatsiya reaksiyasi mayda donador aglyutinatsiya shaklida sodir boʻladi. H-diagnosticum bilan aglutinatsiya reaktsiyasi (formaldegid tomonidan o'ldirilgan, termolabil flagellar H-antigenini saqlab qolgan bakteriyalar) qo'pol va tezroq davom etadi.
Bilvosita (passiv) gemagglyutinatsiya reaktsiyasi(RNGA yoki RPGA) RA ning bir turi. Bu usul juda sezgir. RNGA yordamida ikkita muammoni hal qilish mumkin: bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash, unga antigen eritrotsit diagnostikum qo'shiladi, ya'ni ma'lum antijenler adsorbsiyalangan eritrotsitlar; tekshirilayotgan materialda antijenlarning mavjudligini aniqlash. Bunday holda, reaktsiya ba'zan teskari bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RONHA) deb ataladi. Jarayon davomida sinov materialiga antikor eritrotsit diagnostikum (ularning yuzasida adsorbsiyalangan antikorlari bo'lgan eritrotsitlar) qo'shiladi. Ushbu reaktsiyada qizil qon hujayralari tashuvchi sifatida harakat qiladi va immun agregatlarini shakllantirishda passiv ishtirok etadi. Ijobiy reaktsiya bilan passiv yopishtirilgan qizil qon tanachalari teshikning pastki qismini tekis qatlamda qirg'ichli qirralar bilan qoplaydi ("soyabon"); aglutinatsiya bo'lmasa, qizil qon hujayralari teshikning markaziy chuqurchasida to'planib, keskin aniqlangan qirralar bilan ixcham "tugma" hosil qiladi.
Koagglyutinatsiya reaktsiyasi adsorbsiyalangan antikorlar yordamida patogen hujayralarni (antijenlarni) aniqlash uchun ishlatiladi Staphylococcus aureus, tarkibida protein A. Protein A immunoglobulinlarning Fc fragmentiga yaqinlikka ega. Buning yordamida antikorlar Fc fragmenti orqali bilvosita stafilokokk bilan bog'lanadi va Fab fragmentlari tashqariga yo'naltiriladi va bemorlardan ajratilgan tegishli mikroblar bilan o'zaro ta'sir o'tkazishga qodir. Bunday holda, yoriqlar hosil bo'ladi.
Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (HAI) diagnostikada foydalaniladi virusli infektsiyalar, va faqat gemagglyutinatsiya qiluvchi viruslar keltirib chiqaradigan infektsiyalar. Ushbu viruslar yuzasida oqsil - gemagglyutinin mavjud bo'lib, u viruslarga qizil qon hujayralari qo'shilganda gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (HRA) uchun javob beradi. RTGA virusli antijenlarni antikorlar bilan blokirovka qilishni o'z ichiga oladi, buning natijasida viruslar qizil qon hujayralarini aglutinatsiya qilish qobiliyatini yo'qotadi.
Kumbs reaktsiyasi - To'liq bo'lmagan antikorlarni aniqlash uchun RA. Ba'zi yuqumli kasalliklarda, masalan, brutsellyozda, bemorning qon zardobida patogenga to'liq bo'lmagan antikorlar aylanadi. To'liq bo'lmagan antikorlar bloklovchi antikorlar deb ataladi, chunki ular to'laqonli antikorlar kabi ikkita emas, balki bitta antigen bilan bog'lanish joyiga ega. Shuning uchun, antigen diagnostikum qo'shilganda, to'liq bo'lmagan antikorlar antijenler bilan bog'lanadi, lekin ularni bir-biriga yopishtirmaydi. Reaksiyani namoyon qilish uchun antiglobulin zardobi (inson immunoglobulinlariga antikorlar) qo'shiladi, bu reaktsiyaning birinchi bosqichida hosil bo'lgan immun komplekslarning (antigen diagnostikum + to'liq bo'lmagan antikorlar) aglutinatsiyasiga olib keladi.
Intravaskulyar gemolizli bemorlarda bilvosita Kumbs reaktsiyasi qo'llaniladi. Bunday bemorlarning ba'zilarida to'liq bo'lmagan monovalent anti-rezus antikorlari aniqlanadi. Ular Rh-musbat eritrotsitlar bilan maxsus o'zaro ta'sir qiladi, lekin ularning aglutinatsiyasiga olib kelmaydi. Shuning uchun antiglobulin zardobi anti-Rh antikorlari + Rh-musbat eritrotsitlar tizimiga qo'shiladi, bu eritrotsitlarning aglutinatsiyasini keltirib chiqaradi. Tashxis qo'yish uchun Coombs testi qo'llaniladi patologik sharoitlar, immun kelib chiqishi eritrotsitlarining intravaskulyar lizisi bilan bog'liq, masalan, Rh-mojarosidan kelib chiqqan yangi tug'ilgan chaqaloqlarning gemolitik kasalligi.
Qon guruhlarini aniqlash uchun RA A(II), B(III) qon guruhi antigenlariga immun zardob antikorlari bilan eritrotsitlarning aglyutinatsiyasiga asoslanadi. Nazorat - bu antikorlarni o'z ichiga olmaydigan sarum, ya'ni. sarum AB (IV) qon guruhi va A (P) va B (III) guruhlari eritrotsitlar antijenleri. 0 (I) guruh qizil qon hujayralari salbiy nazorat sifatida ishlatiladi, chunki ularda antijenler yo'q.
Rh omilini aniqlash uchun anti-Rh sarumlari qo'llaniladi (kamida ikkita turli seriya). Agar o'rganilayotgan eritrotsitlar membranasida Rh antijeni mavjud bo'lsa, bu hujayralarning aglutinatsiyasi sodir bo'ladi.
13.3. Yog'ingarchilik reaktsiyasi
RP - elektrolitlar ishtirokida antikorlarning antijenler bilan o'zaro ta'sirining immun reaktsiyasi va antigen eruvchan holatda. Yog'ingarchilik paytida eriydigan antijenler antikorlar tomonidan cho'ktiriladi, bu yog'ingarchilik chiziqlari ko'rinishidagi loyqalik bilan namoyon bo'ladi. Ko'rinadigan cho'kma hosil bo'lishi ikkala reagentni ekvivalent nisbatda aralashtirilganda kuzatiladi. Ulardan birining ortiqcha bo'lishi cho'kma immun komplekslar sonini kamaytiradi. Yog'ingarchilik reaktsiyasini amalga oshirishning turli usullari mavjud.
Halqali yog'ingarchilik reaktsiyasi kichik diametrli yog'ingarchilik quvurlariga joylashtiriladi. Probirkaga immun zardobi qo'shiladi va eruvchan antijen ehtiyotkorlik bilan qatlamlanadi. Natija ijobiy bo'lsa, ikkita eritmaning interfeysida sutli halqa hosil bo'ladi. A’zo va to‘qimalarda antijen borligini aniqlash uchun qo‘llaniladigan, ekstraktlari qaynatiladi va filtrlanadi halqali cho‘kish reaksiyasi termopresipitatsiya reaksiyasi (Askoli reaksiyasi termostabil kuydirgi antigenini aniqlash) deb ataladi.
Ouchterlony qo'sh immunodiffuziya reaktsiyasi. Bu reaksiya agar jelida amalga oshiriladi. Bir xil qalinlikdagi jel qatlamida quduqlar bir-biridan ma'lum masofada kesiladi va mos ravishda antigen va immun zardobi bilan to'ldiriladi. Shundan so'ng, antigenlar va antikorlar jelga tarqaladi, bir-biri bilan uchrashadi va immun komplekslarini hosil qiladi, ular jelda cho'kadi va aniq chiziqlar sifatida ko'rinadi.
oziqlanish. Bu reaksiyadan noma’lum antijen yoki antikorlarni aniqlash, shuningdek, turli antijenler o‘rtasidagi o‘xshashlikni tekshirish uchun foydalanish mumkin: agar antigenlar bir xil bo‘lsa, cho‘kma chiziqlari birlashadi, agar antigenlar bir xil bo‘lmasa, cho‘kma chiziqlari kesishadi, agar antigenlar qisman bo‘lsa. bir xil, shpur hosil bo'ladi.
Radial immunodiffuziya reaktsiyasi. Eritilgan agar jeliga antikorlar qo'shiladi va jel stakanga tekis qatlamda qo'llaniladi. Jelda quduqlar kesiladi va ularga turli konsentratsiyali antigen eritmalarining standart hajmi qo'shiladi. Kuluçka paytida antijenler quduqdan radial ravishda tarqaladi va antikorlar bilan uchrashib, cho'kma halqasini hosil qiladi. Quduqda ortiqcha antigen qolar ekan, yog'ingarchilik halqasining diametri asta-sekin o'sib boradi. Bu usul tekshiriluvchi eritmadagi antigen yoki antitellarni aniqlash uchun (masalan, qon zardobida turli sinfdagi immunoglobulinlar kontsentratsiyasini aniqlash uchun) ishlatiladi.
Immunoelektroforez. Antigen aralashmasi avval elektroforetik tarzda ajratiladi, so'ngra oqsil harakati yo'nalishi bo'ylab o'tadigan yivga cho'kma antiserum qo'shiladi. Antigenlar va antikorlar jelga bir-biriga qarab tarqaladi; oʻzaro taʼsirlashib, yoysimon yogʻingarchilik chiziqlarini hosil qiladi.
Flokulyatsiya reaktsiyasi(Ramonga ko'ra) - antitoksik zardob yoki toksoid faolligini aniqlash uchun ishlatiladigan yog'ingarchilik reaktsiyasining bir turi. Reaksiya probirkalarda olib boriladi. Toksoid va antitoksin ekvivalent nisbatda bo'lgan probirkada loyqalik kuzatiladi.
13.4. Komplement fiksatsiya reaktsiyasi
Tegishli antigen bilan o'zaro ta'sir qiluvchi antikorlar qo'shilgan komplementni bog'laydi (1-tizim). Komplement fiksatsiyasining ko'rsatkichi gemolitik sarum bilan sezgir bo'lgan eritrotsitlardir, ya'ni. qizil qon hujayralariga antikorlar (2-tizim). Agar to'ldiruvchi 1-tizimda belgilanmagan bo'lsa, ya'ni. Agar antigen-antikor reaktsiyasi sodir bo'lmasa, sensibilizatsiyalangan qizil qon tanachalari to'liq parchalanadi (salbiy reaktsiya). Komplementga sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar qo'shilgandan so'ng 1-sistemaning immun komplekslari tomonidan fiksatsiya qilinganda, undan gemoliz sodir bo'ladi.
yo'q (ijobiy reaktsiya). Komplement fiksatsiyasi reaktsiyasi yuqumli kasalliklarni (gonoreya, sifiliz, gripp va boshqalar) tashxislash uchun ishlatiladi.
13.5. Neytrallanish reaktsiyasi
Mikroblar va ularning toksinlari inson tanasining a'zolari va to'qimalariga zararli ta'sir ko'rsatadi. Antikorlar bu zarar etkazuvchi vositalar bilan bog'lanib, ularni blokirovka qilishga qodir, ya'ni. neytrallash. Diagnostik neytrallanish reaktsiyasi antikorlarning bu xususiyatiga asoslanadi. Bu hayvonlarga yoki sezgir sinov ob'ektlariga (hujayra madaniyati, embrionlar) antigen-antikor aralashmasini kiritish orqali amalga oshiriladi. Masalan, bemorning materialida toksinlarni aniqlash uchun 1-guruh hayvonlariga bemorning materiali yuboriladi. 2-guruh hayvonlari shunga o'xshash material bilan AOK qilinadi, tegishli antiserum bilan oldindan davolanadi. Agar materialda toksin bo'lsa, 1-guruh hayvonlari nobud bo'ladi. Hayvonlarning ikkinchi guruhi omon qoladi, toksinning zararli ta'siri o'zini namoyon qilmaydi, chunki u zararsizlantiriladi.
13.6. Belgilangan antikorlar yoki antijenler yordamida reaktsiyalar
13.6.1. Immunofluoresans reaktsiyasi (RIF, Koons usuli)
Ushbu usul ekspress diagnostika uchun ishlatiladi. U mikrob antijenlarini ham, antikorlarni ham aniqlash uchun ishlatilishi mumkin.
To'g'ridan-to'g'ri RIF usuli- antikorlarning antijenler bilan o'zaro ta'sirining immun reaktsiyasi va antikorlar ftoroxrom bilan belgilanadi - ma'lum bir to'lqin uzunligi nuriga ta'sir qilganda ma'lum bir to'lqin uzunligidagi yorug'lik kvantlarini chiqarishga qodir bo'lgan modda. Ushbu usulning o'ziga xos xususiyati o'ziga xos bo'lmagan luminesansni aniqlashni istisno qilish uchun reaksiyaga kirishmagan komponentlarni olib tashlash zarurati. Buning uchun reaksiyaga kirishmagan antikorlarni yuving. Natijalar floresan mikroskop yordamida baholanadi. Bunday lyuminestsent zardob bilan ishlov berilgan smeardagi bakteriyalar hujayraning periferiyasi bo'ylab qorong'i fonda porlaydi.
Bilvosita RIF usuli oldingisiga qaraganda tez-tez ishlatiladi. Bu reaksiya ikki bosqichda amalga oshiriladi. Birinchi bosqichda antijenler o'zaro ta'sir qiladi
mos keladigan antikorlar bilan o'zaro ta'sir qiladi, immun komplekslarini hosil qiladi. Reaksiyaga uchramagan barcha komponentlar (ya'ni, immun komplekslarning bir qismi bo'lmagan) yuvish yo'li bilan olib tashlanishi kerak. Ikkinchi bosqichda hosil bo'lgan antigen-antikor kompleksi ftoroxromlangan antiglobulin sarum yordamida aniqlanadi. Natijada mikrob + antimikrobiyal quyon antikorlari + quyon immunoglobulinlariga antitelalar kompleksi hosil bo'ladi, ular floroxrom bilan belgilanadi. Natijalar floresan mikroskop yordamida baholanadi.
13.6.2. Ferment immunoassay usuli yoki tahlili
ELISA - eng keng tarqalgan zamonaviy usul Virusli, bakterial, protozoal infektsiyalarni, xususan, OIV infektsiyasini tashxislash uchun ishlatiladi; virusli gepatit va boshq.
Elishay ko'plab modifikatsiyalari mavjud. Qattiq fazali raqobatdosh bo'lmagan Elishay keng qo'llaniladi. U 96 quduqli polistirol plitalarida (qattiq faza) amalga oshiriladi. Reaksiyani amalga oshirishda har bir bosqichda reaksiyaga kirmagan komponentlarni yuvish kerak. Antikorlarni aniqlashda test qon zardobi antijenler so'rilgan quduqlarga qo'shiladi, so'ngra ferment bilan etiketlangan antiglobulin zardobi qo'shiladi. Reaktsiya ferment uchun substrat qo'shish orqali amalga oshiriladi. Ferment ishtirokida substrat o'zgaradi va reaksiyada hosil bo'lgan mahsulot rangli bo'lishi uchun ferment-substrat kompleksi tanlanadi. Shunday qilib, ijobiy reaktsiya bilan eritma rangining o'zgarishi kuzatiladi. Antigenlarni aniqlash uchun qattiq fazali tashuvchi antikorlar bilan sensibilizatsiya qilinadi, so'ngra sinov materiali (antijenler) va antijenlere ferment bilan belgilangan sarum ketma-ket qo'shiladi. Reaksiya sodir bo'lishi uchun ferment uchun substrat qo'shiladi. Eritma rangining o'zgarishi ijobiy reaktsiya bilan sodir bo'ladi.
13.6.3. Immunoblotting
Ushbu usul elektroforez va Elishayning kombinatsiyasiga asoslangan. Immunoblotni amalga oshirishda (ingliz tilidan blotting. dog'- spot) antigenlarning murakkab aralashmasi birinchi navbatda poliakrilamid gelda elektroforezga uchraydi. Natijada fraksiyalangan anti-
gen peptidlari nitrotsellyuloza membranasiga o'tkaziladi. Shundan so'ng blotlar o'ziga xos antigenga ferment bilan belgilangan antikorlar bilan ishlov beriladi, ya'ni. Elishay blotini bajaring. Immunoblotting OIV kabi infektsiyalarni tashxislashda qo'llaniladi.
13.6.4. Immun elektron mikroskopi
Usul mikroskopdan iborat elektron mikroskop viruslar (kamroq tez-tez boshqa mikroblar), elektron-optik zich preparatlar bilan belgilangan tegishli immun zardobi bilan oldindan davolash qilingan, masalan, temir o'z ichiga olgan protein ferritin.
13.7. Oqim sitometriyasi
Qon hujayralari lazerli sitofluorometriya asosida farqlanadi. Buning uchun kerakli hujayralar CD antijenlerine floresan monoklonal antikorlar bilan bo'yalgan. Qon namunasi, etiketli antikorlar bilan ishlov berilgandan so'ng, yupqa naychadan o'tkaziladi va u orqali lazer nuri o'tkaziladi, bu esa ftorxromni porlashini qo'zg'atadi. Floresan intensivligi hujayra yuzasidagi antijenlarning zichligi bilan bog'liq va fotoko'paytiruvchi naycha yordamida miqdoriy o'lchanishi mumkin. Olingan natijalar gistogrammaga aylantiriladi.
Aniqlash uchun oqim sitometriyasi qo'llaniladi immunitet holati(limfotsitlarning asosiy populyatsiyalarining tarkibi, hujayra ichidagi va hujayradan tashqari sitokinlarning tarkibi, NK hujayralarining funktsional faolligi, fagotsitoz faolligi va boshqalar).
IMMUNOMIKROBIOLOGIK TADQIQOTLAR
Ko'pgina muammolarni hal qilish uchun immunologik usullar qo'llaniladi:
1. Vaziyatni baholash immunitet tizimi shaxsni (immun holatini) miqdoriy va aniqlash orqali funktsional xususiyatlar immun tizimining hujayralari va ularning mahsulotlari.
2. Inson to'qimalarining tarkibi va xususiyatlarini aniqlash: qon guruhlari, Rh omil, transplantatsiya antijenleri.
3. Yuqumli kasalliklar diagnostikasi va antitelo titrlarini aniqlash va o'rnatish (serodiagnoz), organizmdagi qo'zg'atuvchining antigenlarini aniqlash va bu antigenlarga hujayra reaktsiyalarini aniqlash.
4. Odam va hayvonlar organizmidan ajratilgan bakteriya va viruslar madaniyatini seroid identifikatsiyalash.
5. Inson tanasida va ichida aniqlash tashqi muhit antijenik yoki hapten xususiyatlarga ega bo'lgan har qanday moddalar (gormonlar, fermentlar, zaharlar, dorilar, dorilar va boshqalar).
6. Immunopatologik holatlar, allergiya, transplantatsiya va antitumor reaktsiyalarini aniqlash.
Antigen va antikor o'rtasidagi o'zaro ta'sir jarayoni serologik reaktsiyalar ikki bosqichda sodir bo'ladi:
1) xos- antikorlarning faol markazlari (paratoplar) va antigen epitoplarining bir-birini to'ldiruvchi kombinatsiyasi yuzaga keladigan o'zaro ta'sir bosqichi. Bu bosqich odatda bir necha soniya yoki daqiqa davom etadi;
2) nonspesifik- namoyon bo'lish bosqichi, xarakterlanadi tashqi belgilar immun komplekslarni shakllantirish. Bu bosqich bir necha daqiqadan bir necha soatgacha rivojlanishi mumkin.
Antikorlarning antigen bilan optimal o'ziga xos o'zaro ta'siri neytralga yaqin pH bilan izotonik eritmada sodir bo'ladi. In vitro tizimidagi antigen-antikor reaktsiyasi bir nechta hodisalarning paydo bo'lishi bilan birga bo'lishi mumkin.
· aglutinatsiya,
· yog'ingarchilik,
· liziz.
Tashqi ko'rinishlar reaktsiyalar antigenning fizik-kimyoviy xususiyatlariga bog'liq (zarrachalar hajmi, jismoniy holat), antikorlarning sinfi va turi (to'liq va to'liq bo'lmagan), shuningdek eksperimental shartlar (o'rtacha mustahkamlik, tuz konsentratsiyasi, pH, harorat).
Antigenlar va antikorlarning polivalentligi yalang'och ko'zga ko'rinadigan agregatlarning shakllanishini ta'minlaydi. Bu tarmoq hosil bo'lish nazariyasiga muvofiq sodir bo'ladi, unga ko'ra boshqa antikor va antigen molekulalari hosil bo'lgan antigen-antikor kompleksiga ketma-ket biriktiriladi. Natijada, cho'kma hosil qiluvchi agregatlarga aylanadigan tarmoq tuzilmalari hosil bo'ladi. Reaksiyaning tabiati va zo'ravonligi antijenler va antikorlarning miqdoriy nisbatiga bog'liq. Eng qizg'in reaktsiyalar reagentlar ekvivalent nisbatda bo'lganda sodir bo'ladi.
Old shart panjara hosil bo'lishi (tarmoqlar) - har bir antigen molekulasi uchun uchtadan ortiq antijenik determinantlarning va har bir antikor molekulasi uchun ikkita faol markazning mavjudligi. Antigen molekulalari panjara tugunlari, antikor molekulalari esa bog'lovchi bo'g'inlardir. Cho'kma hosil bo'lgandan keyin supernatantda na erkin antigenlar, na erkin antikorlar aniqlanmasa, antigen va antikorlar kontsentratsiyasining optimal nisbati (ekvivalent zonasi).
Antigenlar to'liq antikorlar bilan birlashganda cho'kishi mumkin bo'lgan agregatlar hosil bo'ladi. To'liq bo'lmagan antikorlar (monovalent) tarmoq tuzilmalari va katta agregatlarning shakllanishiga olib kelmaydi. Bunday antikorlarni aniqlash uchun foydalaning maxsus usullar antiglobulinlardan foydalanishga asoslangan (Coombs reaktsiyasi).
Serologik testlar, ularning yuqori o'ziga xosligi va sezgirligi tufayli aniqlash va aniqlash uchun qo'llaniladi miqdoriy aniqlash antijenler va antikorlar. Reaksiyalardagi immunoreagentlar miqdori titr bilan ifodalanadi - bunda reaksiya hali ham kuzatilayotgan sarum yoki antigenning maksimal suyultirilishi.
Mikrobiologik va immunologik laboratoriyalarda serologik reaktsiyalar ikki maqsadda qo'llaniladi:
1) ma'lum antikor (immun diagnostik sarum) yordamida mikroorganizmlarni, toksinlarni, umuman antijenlarni seroidifikatsiya qilish uchun;
2) serodiagnoz uchun - ma'lum antijen (diagnostik) yordamida bakterial, virusli va kamroq tez-tez boshqa yuqumli kasalliklar uchun bemorning qon zardobidagi antikorlarning tabiatini aniqlash.
Antigenning umumiy turini, turini va turini aniqlash uchun ma'lum immun diagnostik sarumlar talab qilinadi. Ular hayvonlarga (odatda quyonlarga) o'ldirilgan yoki tirik mikroorganizmlar, ularning parchalanish mahsulotlari, neytrallangan yoki mahalliy toksinlar dozasini oshirib yuborish orqali olinadi. Hayvonlarni immunizatsiya qilishning ma'lum bir tsiklidan so'ng, hayvonning ommaviy qon ketishi yoki to'liq qon ketishi amalga oshiriladi. Steril idishga yig‘ilgan qon ivish jarayonini tezlashtirish uchun dastlab 37°C haroratdagi termostatga 4-6 soat, so‘ngra bir sutka davomida muz qutisiga joylashtiriladi. Olingan shaffof sarum steril idishga so'riladi, konservantlar qo'shiladi, antikor titri aniqlanadi, sterilligi tekshiriladi va ampulalarga quyiladi.
Ishlatiladi adsorbsiyalanmagan Va adsorbsiyalangan diagnostik sarum. Adsorbsiyalanmagan sarumlar mavjud yuqori titrlar antikorlar, lekin guruh (o'zaro) reaktsiyalar berishga qodir.
Adsorbsiyalangan sarumlar ta'sirning qat'iy o'ziga xosligi bilan tavsiflanadi (ular faqat gomologik antigen bilan reaksiyaga kirishadi). Faqat bitta o'ziga xos antijenga antikorlarni o'z ichiga olgan sarumlar deyiladi monoretseptor.
Ular, shuningdek, ftorxromlar, fermentlar va radioizotoplar bilan etiketlangan sarumlarni ishlab chiqaradilar, bu esa hatto antigen izlarini ham yuqori aniqlik bilan aniqlash imkonini beradi.
Serologik reaksiyalarda antigen (diagnostik) sifatida tirik yoki o‘ldirilgan bakteriyalar suspenziyalari, ularning parchalanish mahsulotlari, toksinlar va viruslar qo‘llaniladi. Ba'zi hollarda mikroorganizmlar va hayvonlar to'qimalaridan olingan ekstraktlar yoki kimyoviy jihatdan ajratilgan antijenler ishlatiladi.
Barcha immunomikrobiologik usullarni 3 guruhga bo'lish mumkin:
1) asoslangan antigenning antikor bilan bevosita o'zaro ta'siri(aglyutinatsiya, cho'kma, gemagglyutinatsiya, immobilizatsiya va boshqalar hodisalari);
2) asoslangan antigenning antikor bilan vositachilik bilan o'zaro ta'siri(reaksiyalar bilvosita gemagglyutinatsiya, koagglyutinatsiya, lateks agglyutinatsiyasi, uglerod aglomeratsiyasi, bentonit aglyutinatsiyasi, komplement fiksatsiyasi va boshqalar);
3) foydalanish etiketli antikorlar yoki antijenler(lyuminestsent antikor usuli, fermentga bog'liq immunosorbent va radioimmunoassay va boshqa usullar).
AGLUTINATSIYA REAKSIYALARI
Bu reaksiyalar zarrachalar (mikrobial hujayralar, qizil qon tanachalari va boshqa korpuskulyar antijenler) ko'rinishidagi antijenlarni o'z ichiga oladi, ular antikorlar va cho'kmalar bilan bir-biriga yopishadi.
Agglyutinatsiya reaktsiyasini amalga oshirish uchun(RA) uchta komponent kerak: 1) antigen (aglutinogen);
2) antikor (aglutinin)
3) elektrolit (natriy xloridning izotonik eritmasi).
Taxminiy aglutinatsiya reaktsiyasi (RA)
Indikativ yoki plastinka, RA xona haroratida shisha slaydga joylashtiriladi. Buning uchun Pasteur pipetkasi yordamida 1:10 dan 1:20 gacha suyultirilgan zardob tomchisini va izotonik natriy xlorid eritmasining nazorat tomchisini alohida stakanga surting. Koloniyalar yoki bakteriyalarning kundalik madaniyati (bir tomchi diagnosticum) ikkala bakteriologik halqaga kiritiladi va yaxshilab aralashtiriladi. Reaksiyalar vizual ravishda bir necha daqiqadan so'ng hisobga olinadi, ba'zida kattalashtiruvchi oyna (x5) ishlatiladi. Ijobiy RA bilan sarum tomchisida katta va kichik yoriqlar paydo bo'lishi salbiy RA bilan qayd etiladi, sarum bir xil bulutli bo'lib qoladi;
Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi bemorda o'ziga xos antikorlarning titrini aniqlash uchun.
Bemorlarning qon zardobida serodiagnoz uchun to'liq RA o'tkaziladi. Bundan tashqari, 1:50 - 1:100 dan 1:800 yoki 1: 1600 gacha bo'lgan izotonik natriy xlorid eritmasida suyultiriladi. Pastroq sarum titrlarida normal aglyutininlar bo'lishi mumkinligi sababli sog'lom odamlar yoki boshqa tashxisi bo'lgan bemorlar (diagnostik titr). Ushbu reaktsiyada antijen sifatida diagnostiklar qo'llaniladi - ma'lum suspenziyalar, odatda o'ldirilgan bakteriyalar.
1 ml natriy xloridning izotonik eritmasi avval aglyutinatsiya naychalariga quyiladi. Ulardan birinchisiga 1:100 nisbatda suyultirilgan 1 ml zardob qo'shiladi va aralashtirgandan so'ng ikkinchisiga 1 ml, ikkinchisidan uchinchisiga va hokazo. Olingan zardobning ikki marta suyultirilishiga (1:100 dan 1:1600 gacha yoki undan ko'p) 1 ml tarkibida 3 milliard mikrob tanasi bo'lgan bakterial suspenziyadan 1-2 tomchi qo'shiladi. Naychalar chayqatiladi va 2 soat davomida 37 ° C haroratda termostatga joylashtiriladi, so'ngra xona haroratida 24 soat davomida saqlanadi.
Batafsil aglyutinatsiya reaksiyasi har bir probirkani navbatma-navbat, nazorat probirkalaridan boshlab, yumshoq silkitib baholash orqali hisobga olinadi. Nazorat naychalarida aglutinatsiya bo'lmasligi kerak. Agglyutinatsiya reaktsiyasining intensivligi quyidagi belgilar bilan belgilanadi: ++++ - to'liq agglyutinatsiya (mutlaq shaffof suyuqlikdagi aglyutinatsiyali yoriqlar); +++ - to'liq bo'lmagan aglyutinatsiya (bir oz opalescent suyuqlikdagi yoriqlar); ++ - qisman aglyutinatsiya (yoriqlar aniq ko'rinadi, suyuqlik biroz bulutli); + - zaif, shubhali aglutinatsiya - suyuqlik juda loyqa, undagi yoriqlar kam farqlanadi; - - aglutinatsiyaning yo'qligi (suyuqlik bir xil bulutli).
Sarum titri uning oxirgi suyultirilishi sifatida qabul qilinadi, bunda aglutinatsiya intensivligi kamida ikki plyus (++) sifatida baholanadi.
Agglyutinatsiya reaktsiyasi Agglyutinatsiya reaktsiyasi
(RA) yalang'och ko'zga ko'rinadigan aglomeratlar hosil qilish qobiliyatiga asoslangan Ag va Ab ni aniqlash va miqdorini aniqlash usulidir. Yuqumli kasalliklar bo'limida. kasalliklar yoki boshqa maqsadlarda noma'lum mikroblar va hujayralarni aniqlash, qon va boshqa suyuqliklarda antikorlarning mavjudligi va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi. Aniqlash printsipi Ag va Ab o'rtasidagi o'zaro ta'sirning o'ziga xosligiga asoslanadi va noma'lumdan ma'lumni topishdan iborat. RA uchun ko'plab variantlar mavjud: miqdoriy va sifat, probirka va shisha, volumetrik va tomchi, an'anaviy, tezlashtirilgan va ekspress usullar. RA bosqichiga o'tish uchun sizga kerak: 1) s-ka qon. Bakteriyalarning turini (var) aniqlash variantida quyonlarni immunizatsiya qilish orqali ishlab chiqarilgan sanoat agglyutinatsiya testlari qo'llaniladi. Ab turini aniqlaydigan variantda testdan qon namunasi olinadi. odamlar yoki hayvonlar. Eritma steril bo'lishi va to'xtatilgan zarralardan xoli bo'lishi kerak. Tuzli eritmada asosiy suyultirishni tayyorlang. Ushbu kasallik uchun diagnostik titrdan 2-4 barobar past bo'lishi kerak; 2) Ag. Ab tipini aniqlash bilan reaktsiyaning versiyasida sanoat diagnostika to'plamlari qo'llaniladi; Ag ni aniqlaydigan variantda diagnostiklar o'zlari 18-20 soatlik agar (kamroq bulyon) testining sho'r eritmasida 1-3 milliard suspenziya shaklida tayyorlanadi. suv hammomida 70 ° C haroratda 1 soat isitish yoki formaldegid bilan 37 ° C da 24 soat inkubatsiya qilish (yakuniy konsentratsiya 0,2%) mikrobni faolsizlantirish; 3) sho'r eritma shaklida elektrolitlar. Sahnalashtirish texnikasi volumetrik seriyali quvur s-kidagi Ab titrini aniqlash uchun RA: s-ki asosiy suyultirishdan bir necha qator ishchi suyultirishlar tayyorlanadi. Qatorlar soni eksperimentga kiritilgan diagnostika soniga bog'liq va suyultirish omillari shubhali kasallikning diagnostik titri bilan belgilanadi. Seriya kamida diagnostik Ab titriga mos keladigan suyultirishni, quyida ikkita suyultirishni va undan yuqori bo'lgan ikkita suyultirishni o'z ichiga olishi kerak. Masalan, agar diagnostik titr 1:100 bo'lsa, u holda RAni bosqichma-bosqich aniqlashning volumetrik usuli bilan quyidagi suyultirishlarni tayyorlash kerak: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; tomchilatib yuborish bilan usuli bo'lsa, birinchi suyultirish (1:25) shart emas, lekin yana bir yuqori suyultirish kerak - 1:800 B. ilmiy tadqiqot s-ku ga titrlanadi salbiy reaktsiya. U quyidagicha suyultiriladi: reaksiya 0,5 ml hajmda olib borilganda 1-chi probirkadan tashqari barcha probirkalarga 0,25 ml, reaksiya 1 hajmda olib borilganda 0,5 ml quyiladi. ml. 1-va 2-probirkalarga 0,25 (0,5) ml asosiy suyultirish, 2-probirkadan kesilgan hajmga va naslchilik s-k va 2 marta ko'paydi, 0,25 (0,5) ml 3-ga, 3-dan 4-ga va boshqalarga o'tkaziladi. oxirigacha, kesilganidan 0,25 (0,5) ml hajmlarni muvozanatlash uchun hamma narsaga quyiladi. Har bir suyultirish alohida pipetka yordamida amalga oshiriladi. Agar bir nechta diagnostika tajribaga olinsa, ularning har biri uchun xuddi shu tarzda o'ziga xos suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Probirkaning har bir suyultirilishiga probirka hajmiga teng hajmda diagnosticum qo‘shiladi, buning natijasida har bir probirkadagi suyultirish ikki barobar ortadi. Tajriba s-ki nazoratiga (0,25 - 0,5 ml s-ki asosiy suyultirilishi va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) va Ag nazoratiga (0,25 - 0,5 ml diagnostik va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) mos keladi. Agar eksperimentda bir nechta diagnostika qo'llanilsa, unda har birining o'z antigen nazorati mavjud. Probirkalar solingan stend yaxshilab chayqatiladi va 37°C da 4 soat davomida termostatga joylashtiriladi, so‘ngra xona haroratida keyingi kungacha qoldiriladi, shundan so‘ng cho‘kma miqdori va tozalanish darajasiga qarab PA qayd etiladi. suyuqlik. Bu ko'rsatkichlarni aniqlash, aglutinatlarning tabiatiga qarab, qorong'u fonda, aglyutinoskopda yoki mikroskop oynasining botiq yuzasida yalang'och ko'z bilan amalga oshiriladi. Buxgalteriya hisobi nazoratdan boshlanadi: nazorat C shaffof bo'lishi kerak, Ag bir xil bulutli bo'lishi kerak (naychani silkitgandan keyin). Agar nazorat yaxshi bo'lsa, barcha probirkalarda aglutinatsiya mavjudligi va darajasini belgilang, ular plyuslar bilan belgilanadi: katta cho'kindi va suyuqlikni to'liq tozalash - 4 ta plyus; katta cho'kindi va suyuqlikning to'liq tozalanmaganligi - 3 ta ortiqcha; sezilarli cho'kindi va suyuqlikning sezilarli tozalanishi 2 ta ortiqcha. Shundan so'ng, titr aniqlanadi: aglutinatsiya intensivligi kamida 2 plyus bo'lgan eng yuqori suyultirish. Titr tadqiqoti s-ki ushbu kasallikning diagnostik titri bilan taqqoslanadi. Agar titr tekshirilsa. s-ki diagnostik qiymatdan 2 barobar past, reaktsiya shubhali deb baholanadi; titri teng bo'lsa diagnostika - qanday qilib zaif ijobiy; 2-4 baravar yuqori bo'lsa, 8 va undan ko'p bo'lsa, u keskin ijobiy hisoblanadi; Ab sog'lom odamlarda keng tarqalgan bo'lsa, RA ni baholash uchun Ab titrining oshishi qo'llaniladi. Seriyali RAda Ar turini aniqlash uchun qatorlar soni identifikatsiya uchun olingan raqamga mos kelishi kerak. diagnostik testlar. Diagnostik testning asosiy suyultirilishidan Ab titrini aniqlash uchun RA dagi kabi ketma-ket ikki marta suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Suyultirish omillari agglyutinatsiya testining titriga bog'liq bo'lib, tajribada test titriga teng, shuningdek, undan 2, 4, 6, 8 marta past bo'lishi kerak diagnostik testning titri 1 3200 bo'lsa, unda siz 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 suyultirishlardan foydalanishingiz kerak. Sinovning suyultirilishiga bir xil hajmdagi sinovdan o'tgan Ag qo'shiladi, natijada suyultiriladi. test 2 marta ko'payadi va tajribaga Ag qo'shiladi, agar tajribada bir nechta s-k ishtirok etsa, unda ularning har biri o'z nazoratiga muhtoj bo'lib, reaksiya tugagach, stend kuchli silkitiladi 37 ° C da termostatda. Natijalar yuqorida tavsiflanganidek hisobga olinadi. Eksperimentda olingan Ag, reaksiya titri standart diagnostik testning kamida yarmiga to'g'ri kelishi kerak 1 4 va undan past titrlar guruh reaktsiyasi sifatida qabul qilinadi Drip md RA ning bosqichlari volumetrikdan farq qiladi, chunki s-ku 1 ml hajmda suyultiriladi, Ag yuqori konsentratsiyada (10 mlrd/ml) ishlatiladi va u bir vaqtning o'zida 1 qo'shiladi. - 2 probirkaga tushadi Ag qo'shilgandan so'ng preparatni suyultirish o'zgarmagan deb hisoblanadi Aks holda, shakllantirish, ro'yxatga olish va baholash usuli volumetrik usulga o'xshaydi
(Manba: Mikrobiologiya atamalari lug'ati)
Agglyutinatsiya reaktsiyasi.
Agglyutinatsiya reaksiyasi - bu elektrolit ishtirokida antikorlar ta'sirida mikrob yoki boshqa hujayralar (eritrotsitlar)ning yopishtirilishi va cho'kishi. Reaksiyaning ko'rinadigan ta'siri (aglyutinatsiya hodisasi) aglutinat deb ataladigan cho'kma hosil bo'ladi.
Bu reaktsiya uchun ishlatiladi serodiagnoz Va seroidizatsiya. RA serodiagnoz (bemorlarning qon zardobida antikorlarni aniqlash) uchun ishlatiladi. tif isitmasi va paratif(Vidal reaktsiya), brutsellyoz(Raytning reaktsiyasi), tulyaremiya va leptospiroz. RA qachon seroididentifikatsiya (bemordan ajratilgan patogen turini aniqlash) uchun ishlatiladi ichak infektsiyalari, ko'k yo'tal, vabo va boshq.
Komponentlarreaktsiyalar:
1. A ntigen (aglyutinogen) - bu butun (yo'q qilinmagan) mikrob yoki boshqa hujayralar ( korpuskulyar, erimaydigan antigen). Agglyutinogenlar- bu to'xtatib turish tirik yoki o'ldirilgan mikrob hujayralari yoki boshqa hujayralar. Antijenler noma'lum yoki ma'lum bo'lishi mumkin. Noma'lum aglutinogen - bu aniqlanishi kerak bo'lgan bemorning tanasidan ajratilgan mikrobial madaniyat. Ma'lum antigen - diagnostika- diagnostik dori; o'liklarni to'xtatib turish mikroblar ma'lum turlar tuz eritmasida. Bu suspenziya bulutli (shaffof), chunki mikrob hujayralari erimaydi, lekin buzilmagan holda qoladi. Bemorlarning qon zardobida noma'lum antikorlarni aniqlash uchun ma'lum aglutinogen ishlatiladi.
2. Antikor (aglutinin)- qon zardobida topilgan. Antikorlar noma'lum yoki ma'lum bo'lishi mumkin. Aniqlanishi kerak bo'lgan noma'lum antikorlar qon zardobida kasal odam. Ma'lum antikorlar mavjud immunitetga ega diagnostik sarum deb ataladi aglutinatsiya qiluvchi sarum. Ular sero-identifikatsiya qilish uchun ishlatiladi, ya'ni. noma'lum antigenni aniqlash - mikrobial madaniyatning bir turi.
3. Elektrolit- 0,9% natriy xlorid eritmasi.
RA ni aniqlash usullari.
1. Taxminiy (lamellar) RA- shisha ustida amalga oshiriladi. Shisha slaydga 2 tomchi sarum va 1 tomchi izotonik eritma qo'llang. Mikrob kulturasi zardob tomchilaridan biriga va izotonik eritmaning bir tomchisiga halqa shaklida kiritiladi va aralashtiriladi. Bir tomchi izotonik eritma mikroblar bilan – antigen nazorati, tomchi mikrobsiz sarumlar – antikor nazorati, tomchi mikroblar bilan sarumlar – tajriba. Agar zardobda u bilan aralashadigan mikrob antijenlariga mos keladigan antikorlar mavjud bo'lsa, u holda antikorlar va antijenler bir-biri bilan maxsus bog'lanadi va 1-3 daqiqadan so'ng sinov tomchisida aglutinat parchalari paydo bo'ladi. Antigen nazorati loyqa bo'lishi kerak va antikor nazorati aniq bo'lishi kerak. Reaksiya natijalari aglyutinat parchalari paydo bo'lishiga qarab qayd etiladi . Agar yoriqlar tushib qolsa, reaktsiya ijobiy bo'ladi, ya'ni. Antigen antikorga mos keladi va antijen antikorni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin yoki aksincha. Agar bulutlilik saqlanib qolsa, reaktsiya salbiy bo'ladi.
2. Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi - probirkalarda amalga oshiriladi. Birinchidan, bemorning qon zardobini 1:50 dan 1:1600 gacha bo'lgan 2 marta suyultirish tayyorlang. 6 ta probirkaga 1 ml natriy xloridning izotonik eritmasi quyiladi. Birinchi probirkaga bemor qon zardobidan 1:50 nisbatda suyultirilgan 1 ml qo‘shiladi, aralashtiriladi va 1:100 nisbatda suyultiriladi, so‘ngra ikkinchi probirkaga 1 ml 1:100 nisbatda suyultirilgan eritma quyiladi. va 1:200 nisbatda suyultirish olinadi va hokazo. Antigen va sarum nazorati uchun ikkita naycha saqlanadi. Sarum nazoratiga faqat 1:50 suyultirilgan sarum, antigen nazoratiga - faqat antigen qo'shiladi. Boshqa barcha probirkalarga 0,1 ml antigen - diagnosticum (O- yoki H-) qo'shing va barcha probirkalarni 18-20 soat davomida 37°C da termostatga soling. Reaksiya natijalari tabiati, hosil bo'lgan cho'kma (aglyutinat) miqdori va loyqalik darajasiga qarab qayd etiladi. Buxgalteriya hisobi faqat nazoratlarda quyidagi natijalar bilan amalga oshiriladi: sarum nazorati - shaffof, antigen nazorati - bulutli. O-antikorlari mayda donador cho‘kma hosil qiladi. H-antikorlari - qo'pol taneli. Agglyutinatsiya reaktsiyasi hali ham ko'rinadigan oxirgi probirkaga asoslanib, u o'rnatiladi diagnostik titr.
Kasalliklarni serodiagnoz qilishda nafaqat ma'lum bir patogenga o'ziga xos antikorlarni aniqlash, balki ularning miqdorini aniqlash ham muhimdir, ya'ni. antikor titrini o'rnating, shunda biz ushbu patogen keltirib chiqaradigan kasallikning mavjudligi haqida gapirishimiz mumkin. Bu titr diagnostik titr deb ataladi. Misol uchun, tif isitmasi tashxisini qo'yish uchun siz 1:400 antikor titrini aniqlashingiz kerak, lekin kam emas. Bundan ham aniqroq natijalar juftlashgan sarumlarda antikorlarning ko'payishini aniqlash orqali olinadi, bemorning zardobi kasallikning boshlanishida va 3-5 yoki undan ortiq kundan keyin olinadi. Agar antikor titri kamida 4 marta oshsa, shuning uchun biz hozirgi kasallik haqida gapirishimiz mumkin.
