ડાયગ્નોસ્ટિક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા. એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા

એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા સમગ્ર માઇક્રોબાયલ અથવા અન્ય કોષો સાથે એન્ટિબોડીઝ (એગ્ગ્લુટીનિન્સ) ની ચોક્કસ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પર આધારિત છે. આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના પરિણામે, એગ્લોમેરેટ કણો રચાય છે જે અવક્ષેપ (એગ્લુટિનેટ) કરે છે. બેક્ટેરિયા, પ્રોટોઝોઆ, ફૂગ, યીસ્ટ, રિકેટ્સિયા, એરિથ્રોસાઇટ્સ અને અન્ય કોષો, જીવિત અને માર્યા ગયેલા બંને, એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં ભાગ લઈ શકે છે. પ્રતિક્રિયા બે તબક્કામાં થાય છે: પ્રથમ એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીનું ચોક્કસ સંયોજન છે, બીજું બિન-વિશિષ્ટ છે, એટલે કે દૃશ્યમાન એગ્લુટિનેટની રચના. સોડિયમ ક્લોરાઇડ જેવા ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં એગ્લુટિનેટનો વરસાદ થાય છે. એગ્લુટિનેટમાં રહેલા સુક્ષ્મસજીવો જીવંત રહે છે, પરંતુ તેમની ગતિશીલતા ગુમાવે છે.

ચેપી રોગોના સેરોલોજીકલ નિદાન અને અલગ સૂક્ષ્મજીવાણુઓની એન્ટિજેનિક રચનાના નિર્ધારણ માટે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો વ્યાપકપણે ઉપયોગ થાય છે. દર્દી અથવા વાહકના શરીરમાંથી અલગ પેથોજેનનું એન્ટિજેનિક માળખું નક્કી કરવા માટે, ચોક્કસ રોગપ્રતિકારક સીરમનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, જે ચોક્કસ સુક્ષ્મસજીવો સાથે પ્રાણીઓ (સસલું, ગધેડો, ઘેટાં) ને રોગપ્રતિકારક બનાવીને મેળવવામાં આવે છે. સૂક્ષ્મજીવાણુની ઓળખ કાચ પર શોષિત અથવા મોનોરેસેપ્ટર સેરા સાથે અથવા ચોક્કસ એગ્લુટિનેટિંગ સેરા સાથે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં કરવામાં આવે છે. શોષિત સેરામાં માત્ર આપેલ સૂક્ષ્મ જીવાણુના વિશિષ્ટ એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝ હોય છે, અને મોનોરેસેપ્ટર સેરામાં રોગકારકના માત્ર એક ચોક્કસ એન્ટિજેન માટે એન્ટિબોડીઝ હોય છે.

પ્રજાતિના સેરામાં ચોક્કસ સૂક્ષ્મ જીવાણુના તમામ એન્ટિજેન્સ માટે એન્ટિબોડીઝ હોય છે.

શું અલગ સુક્ષ્મસજીવો સંસ્કૃતિનું છે આ પ્રજાતિસીરમ એમ્પૂલના લેબલ પર દર્શાવેલ એન્ટિબોડી ટાઇટર માટે જાણીતા સીરમ સાથે એગ્લુટિનેશન દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે. સીરમના એન્ટિબોડી ટાઇટરને તેનું છેલ્લું મંદન માનવામાં આવે છે, જેમાં પ્રાણીને રોગપ્રતિકારક બનાવવા માટે ઉપયોગમાં લેવાતા સૂક્ષ્મજીવાણુઓની સંસ્કૃતિનું એકત્રીકરણ હજુ પણ જોવા મળે છે. શોષિત અને મોનોરેસેપ્ટર સેરા સામાન્ય રીતે ગ્લાસ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં અનડિલુટેડ વપરાય છે.

દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝની હાજરી નક્કી કરતી વખતે, તેને 1: 50 થી 1: 800 અથવા વધુના મંદનથી શરૂ કરીને સોડિયમ ક્લોરાઇડના આઇસોટોનિક સોલ્યુશનથી પાતળું કરવામાં આવે છે. જીવંત અથવા માર્યા ગયેલા સૂક્ષ્મજીવાણુઓનું સસ્પેન્શન દરેક મંદનમાં ઉમેરવામાં આવે છે. સૂક્ષ્મજીવાણુઓ ધરાવતી તૈયારીઓને ગરમી અથવા ફોર્માલ્ડિહાઇડ દ્વારા મારવામાં આવે છે તેને ડાયગ્નોસ્ટિકમ કહેવામાં આવે છે. સુક્ષ્મસજીવોની સંસ્કૃતિને ગરમ કરીને મેળવેલ ડાયગ્નોસ્ટિકમમાં માત્ર સોમેટિક એન્ટિજેન્સ હોય છે. માત્ર ફોર્માલ્ડીહાઈડનો ઉપયોગ કરતી વખતે, સૂક્ષ્મજીવાણુઓ તેમના ફ્લેગેલર એન્ટિજેન્સને જાળવી રાખે છે.

દર્દીના લોહીમાં એન્ટિબોડીઝની હાજરીમાં, પ્રતિક્રિયામાં લેવાયેલ ડાયગ્નોસ્ટિક ટેસ્ટ એકસાથે વળગી રહે છે અને બે ટેસ્ટ ટ્યુબ પર એક અવક્ષેપ (એગ્લુટિનેટ) રચાય છે. આ કિસ્સામાં, એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના પરિણામો હકારાત્મક તરીકે ગણવામાં આવે છે. કંટ્રોલ ટ્યુબમાં, જેમાં આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન અને ડાયગ્નોસ્ટિકમ ઉમેરવામાં આવે છે, સૂક્ષ્મજીવાણુઓનું સસ્પેન્શન એકરૂપ હોવું જોઈએ (નકારાત્મક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા).

લેપ્ટોસ્પાયરોસિસ જેવા કેટલાક રોગોમાં એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના પરિણામોને માત્ર માઇક્રોસ્કોપ (માઇક્રોએગ્ગ્લુટિનેશન)ના અંધારા ક્ષેત્રમાં જ માઇક્રોસ્કોપિક રીતે ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. રોગનું સેરોલોજીકલ નિદાન કરવા માટે, ધ્યાનમાં લો ડાયગ્નોસ્ટિક રોગ. તે સામાન્ય રીતે 1:100 અથવા 1:200 ના સીરમ મંદનને અનુરૂપ હોય છે.

દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝને ટાઇફોઇડ તાવ અને પેરાટાઇફોઇડ તાવ (વિડાલ પ્રતિક્રિયા), બ્રુસેલોસિસ (રાઈટ પ્રતિક્રિયા), તુલેરેમિયા વગેરેના કિસ્સામાં એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ કરીને શોધી શકાય છે.
કેસ્ટેલાનીની પ્રતિક્રિયા. કેટલાક માટે ચેપી રોગોઅથવા જૂથ એન્ટિજેન્સ ધરાવતા સુક્ષ્મસજીવો સાથે રોગપ્રતિરક્ષા, રક્ત સીરમમાં, આપેલ પ્રકારના ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ ઉપરાંત, જૂથ એન્ટિબોડીઝ પણ દેખાય છે. આ કિસ્સામાં, સંબંધિત બેક્ટેરિયલ પ્રજાતિઓ પરિણામી સેરા દ્વારા એકત્ર કરવામાં આવશે.

કેસ્ટેલાનીએ રોગપ્રતિકારક સેરામાંથી જૂથ એન્ટિબોડીઝના શોષણ માટેની એક પદ્ધતિનો પ્રસ્તાવ મૂક્યો, જે સંબંધિત જાતિઓના સૂક્ષ્મજીવોની મદદથી તેમના નિરાકરણ પર આધારિત છે જેમાં જૂથ એન્ટિજેન્સ હોય છે પરંતુ ચોક્કસ એન્ટિજેન્સનો અભાવ હોય છે. સીરમમાં ઉમેરાયેલા આવા સુક્ષ્મસજીવોની સંસ્કૃતિ બિન-વિશિષ્ટ જૂથ એન્ટિબોડીઝને શોષી લે છે, અને એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલને સેન્ટ્રીફ્યુગેશન દ્વારા દૂર કર્યા પછી, માત્ર ચોક્કસ ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન સીરમમાં રહે છે. કેસ્ટેલાની પદ્ધતિ અનુસાર પ્રક્રિયા કરેલ સેરાનો ઉપયોગ એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં અત્યંત વિશિષ્ટ તરીકે થઈ શકે છે.

એગ્ગ્લુટિનેશન એ બેક્ટેરિયા સાથે ચોક્કસ ATs ની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના પરિણામે એકસાથે વળગી રહેવું છે. આરએ હાથ ધરવા માટે, ત્રણ ઘટકો જરૂરી છે: 1) એજી (એગ્ગ્લુટિનોજેન); 2) એટી (એગ્ગ્લુટીનિન); 3) ઇલેક્ટ્રોલાઇટ સોલ્યુશન (આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન). માત્ર કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સ (બેક્ટેરિયા, લાલ રક્ત કોશિકાઓ, એન્ટિજેન-લોડ લેટેક્સ કણો) એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં ભાગ લે છે.

કાચ પર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા. પીપેટનો ઉપયોગ કરીને ગ્રીસ-ફ્રી ગ્લાસ સ્લાઇડ પર ડ્રોપ મૂકો. ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ(સીરમ મંદન 1:10 - 1:20). બેક્ટેરિયોલોજિકલ લૂપનો ઉપયોગ કરીને, અભ્યાસ હેઠળ સૂક્ષ્મજીવોની શુદ્ધ સંસ્કૃતિને ત્રાંસી અગરની સપાટી પરથી લેવામાં આવે છે, સીરમના એક ટીપામાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે અને મિશ્રિત થાય છે. પ્રતિક્રિયાના પરિણામને 3-5 મિનિટ પછી નગ્ન આંખ સાથે ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. જો પ્રતિક્રિયા સકારાત્મક હોય, તો ફ્લેક્સ (મોટા અથવા નાના) નો દેખાવ સીરમના ટીપામાં નોંધવામાં આવે છે, જ્યારે સ્લાઇડ હલાવવામાં આવે ત્યારે ઘેરી પૃષ્ઠભૂમિ સામે સ્પષ્ટપણે દેખાય છે. નકારાત્મક પ્રતિક્રિયાના કિસ્સામાં, પ્રવાહી સમાનરૂપે વાદળછાયું રહે છે.

ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા. ટેસ્ટ ટ્યુબની હરોળમાં 1 મિલી શારીરિક દ્રાવણ ઉમેરવામાં આવે છે. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં લોહીના સીરમની સમાન માત્રાની ચકાસણી કરવામાં આવે છે. સીરમના સીરીયલ બે-ગણા ડિલ્યુશન તૈયાર કરવામાં આવે છે (સીરમ ટાઇટ્રેશન), ત્યારબાદ દરેક ટેસ્ટ ટ્યુબમાં નિષ્ક્રિય બેક્ટેરિયા (ડાયગ્નોસ્ટિકમ) ના સસ્પેન્શનના 2 ટીપાં ઉમેરવામાં આવે છે. ટ્યુબને થર્મોસ્ટેટમાં 2 કલાક માટે 37 °C પર મૂકવામાં આવે છે. પ્રતિક્રિયા નાના ટુકડાઓની રચના સાથે આગળ વધે છે, જે નરી આંખે અદ્રશ્ય હોય છે, તેથી પરિણામો એક વિશિષ્ટ ઉપકરણ - એગ્ગ્લુટિનોસ્કોપમાં સહેજ વિસ્તૃતીકરણ હેઠળ રેકોર્ડ કરવામાં આવે છે. એગ્ગ્લુટિનેશનની તીવ્રતાને "ચાર વત્તા" સિસ્ટમ અનુસાર ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે: સંપૂર્ણ એગ્ગ્લુટિનેશન - 4+, આંશિક એગ્ગ્લુટિનેશન - 3+ અથવા 2+, શંકાસ્પદ પરિણામ - +. છેલ્લું મંદન જેમાં 2+ એગ્લુટિનેશન જોવા મળે છે તે ટેસ્ટ સીરમમાં એન્ટિબોડી ટાઇટર તરીકે લેવામાં આવે છે.

ટાઇફોઇડ અને પેરાટાઇફોઇડ તાવ (વિડલ પ્રતિક્રિયા), બ્રુસેલોસિસ (રાઈટ પ્રતિક્રિયા), અને ટાયફસ (વેઇગલ પ્રતિક્રિયા) ના કારક એજન્ટો માટે એન્ટિબોડીઝનું ટાઇટર નક્કી કરવા ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એક એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (એક વ્યાપક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા) હાથ ધરવામાં આવે છે.

એગ્ગ્લુટિનેશન (લેટિન એગ્ગ્લુટિનાટીયોમાંથી - ગ્લુઇંગ) - ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝના પરમાણુઓ સાથે એન્ટિજેન-બેરિંગ કોર્પસ્ક્યુલર કણો (સંપૂર્ણ કોષો, લેટેક્સ કણો, વગેરે) નું ગ્લુઇંગ (કનેક્શન), જે ફ્લેક્સ અથવા કાંપની રચનામાં સમાપ્ત થાય છે ( એગ્લુટિનેટ) નરી આંખે દેખાય છે. કાંપની પ્રકૃતિ એન્ટિજેનની પ્રકૃતિ પર આધારિત છે: ફ્લેગેલેટેડ બેક્ટેરિયા એક બરછટ ફ્લોક્યુલન્ટ કાંપ ઉત્પન્ન કરે છે, ફ્લેગલેટ અને નોનકેપ્સ્યુલર બેક્ટેરિયા ઝીણા દાણાવાળા કાંપનું ઉત્પાદન કરે છે, અને કેપ્સ્યુલર બેક્ટેરિયા તંતુમય કાંપ ઉત્પન્ન કરે છે. ડાયરેક્ટ એગ્ગ્લુટિનેશન વચ્ચે તફાવત કરવામાં આવે છે, જેમાં બેક્ટેરિયલ અથવા અન્ય કોઈપણ કોષના પોતાના એન્ટિજેન્સ, જેમ કે એરિથ્રોસાઇટ્સ, ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ સાથેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયામાં સીધા ભાગ લે છે; અને પરોક્ષ, અથવા નિષ્ક્રિય, જેમાં બેક્ટેરિયલ કોશિકાઓ અથવા એરિથ્રોસાઇટ્સ, અથવા લેટેક્સ કણો તેમના પોતાના નથી, પરંતુ તેમના માટે વિશિષ્ટ એન્ટિબોડીઝ (અથવા એન્ટિજેન્સ) ઓળખવા માટે તેમના પર સોર્બ કરેલા વિદેશી એન્ટિજેન્સ (અથવા એન્ટિબોડીઝ) ના વાહક છે. એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં મુખ્યત્વે IgG અને IgM વર્ગો સાથે જોડાયેલા એન્ટિબોડીઝનો સમાવેશ થાય છે. તે બે તબક્કામાં થાય છે: પ્રથમ, એન્ટિજેનના નિર્ધારક સાથે એન્ટિબોડીઝના સક્રિય કેન્દ્રની ચોક્કસ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા થાય છે, આ તબક્કો ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની ગેરહાજરીમાં થઈ શકે છે અને તેની સાથે નથી દૃશ્યમાન ફેરફારોપ્રતિક્રિયા સિસ્ટમ. બીજા તબક્કા માટે - એગ્ગ્લુટિનેટની રચના - ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરી જરૂરી છે, જે ઘટાડે છે ઇલેક્ટ્રિક ચાર્જએન્ટિજેન + એન્ટિબોડી સંકુલ અને તેમના ગ્લુઇંગની પ્રક્રિયાને વેગ આપે છે. આ તબક્કો એગ્લુટિનેટની રચના સાથે સમાપ્ત થાય છે.

એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ કાં તો કાચ અથવા સરળ કાર્ડબોર્ડ પ્લેટ પર અથવા જંતુરહિત એગ્ગ્લુટિનેશન ટ્યુબમાં કરવામાં આવે છે. કાચ પર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ (સીધી અને નિષ્ક્રિય) સામાન્ય રીતે ઉપયોગમાં લેવાય છે પ્રવેગક પદ્ધતિદર્દીના સીરમમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝની શોધ (ઉદાહરણ તરીકે, બ્રુસેલોસિસ સાથે) અથવા પેથોજેનની સેરોલોજીકલ ઓળખ માટે. પછીના કિસ્સામાં, સામાન્ય રીતે સારી રીતે શુદ્ધ થયેલ (શોષિત) ડાયગ્નોસ્ટિક સેરાનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, જેમાં માત્ર મોનોરેસેપ્ટર એન્ટિબોડીઝ અથવા વિવિધ એન્ટિજેન્સનો સમૂહ હોય છે. કાચ પર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો અસંદિગ્ધ ફાયદો એ છે કે તેના અમલીકરણની સરળતા અને હકીકત એ છે કે તે ઘણી મિનિટો અથવા તો સેકંડ લે છે, કારણ કે બંને ઘટકો કેન્દ્રિત સ્વરૂપમાં ઉપયોગમાં લેવાય છે. જો કે, તેનું માત્ર ગુણાત્મક મૂલ્ય છે અને તે ટેસ્ટ ટ્યુબ કરતાં ઓછું સંવેદનશીલ છે. ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એક વ્યાપક એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા વધુ સચોટ પરિણામો આપે છે, કારણ કે તે તમને સીરમમાં એન્ટિબોડીઝની જથ્થાત્મક સામગ્રી નક્કી કરવાની મંજૂરી આપે છે (તેનું ટાઇટર સ્થાપિત કરો) અને, જો જરૂરી હોય તો, એન્ટિબોડી ટાઇટરમાં વધારાની હકીકતની નોંધણી કરો, જેનું નિદાન મૂલ્ય છે. . પ્રતિક્રિયા સુયોજિત કરવા માટે, 0.85% NaCl સોલ્યુશન સાથે ચોક્કસ રીતે પાતળું સીરમ અને પ્રમાણભૂત ડાયગ્નોસ્ટિકમ (અથવા ટેસ્ટ કલ્ચર) ના સસ્પેન્શનના સમાન વોલ્યુમ (સામાન્ય રીતે 0.5 મિલી) 1 મિલીમાં 1 બિલિયન બેક્ટેરિયા ઉમેરવામાં આવે છે. એગ્લુટિનેશન ટ્યુબ. એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના પરિણામો પ્રથમ 37 °C તાપમાને ટ્યુબના ઉકાળવાના 2 કલાક પછી અને અંતે 20-24 કલાક પછી બે માપદંડો અનુસાર રેકોર્ડ કરવામાં આવે છે: અવક્ષેપની હાજરી અને કદ અને સુપરનેટન્ટ પ્રવાહીની પારદર્શિતાની ડિગ્રી. આકારણી ફોર-ક્રોસ સિસ્ટમ અનુસાર હાથ ધરવામાં આવે છે. પ્રતિક્રિયા સીરમ અને એન્ટિજેન નિયંત્રણ સાથે જરૂરી છે. પેથોજેનની સેરોલોજીકલ ઓળખ માટે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા કરવામાં આવે છે તેવા કિસ્સામાં, જો ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ ઓછામાં ઓછા અડધા તેના ટાઇટર સુધી પાતળું કરવામાં આવે ત્યારે પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક તરીકે મૂલ્યાંકન કરવામાં આવે તો તેનું નિદાન મૂલ્ય છે.

તે ધ્યાનમાં લેવું આવશ્યક છે કે જ્યારે હોમોલોગસ એન્ટિજેન્સ અને એન્ટિબોડીઝના ઉકેલોને મિશ્રિત કરવામાં આવે છે, ત્યારે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના દૃશ્યમાન અભિવ્યક્તિઓ હંમેશા અવલોકન કરવામાં આવતી નથી. એક અવક્ષેપ માત્ર બંને પ્રતિક્રિયા ઘટકોના ચોક્કસ શ્રેષ્ઠ ગુણોત્તર પર રચાય છે. આ મર્યાદાઓની બહાર, એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડીઝના નોંધપાત્ર વધારા સાથે, કોઈ પ્રતિક્રિયા જોવા મળતી નથી. આ ઘટનાને "પ્રોઝોન ઘટના" કહેવામાં આવે છે. તે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા અને વરસાદની પ્રતિક્રિયા બંનેમાં જોવા મળે છે. રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓમાં પ્રોઝોનનો દેખાવ એ હકીકત દ્વારા સમજાવવામાં આવે છે કે તેમાં સામેલ એન્ટિજેન્સ, એક નિયમ તરીકે, બહુનિર્ધારક છે, અને પરમાણુઓ IgG એન્ટિબોડીઝબે સક્રિય કેન્દ્રો છે. એન્ટિબોડીઝની અતિશયતા સાથે, દરેક એન્ટિજેન કણની સપાટી એન્ટિબોડી પરમાણુઓથી આવરી લેવામાં આવે છે જેથી કરીને ત્યાં કોઈ મુક્ત નિર્ણાયક જૂથો બાકી ન રહે, તેથી એન્ટિબોડીઝનું બીજું, અનબાઉન્ડ સક્રિય કેન્દ્ર અન્ય એન્ટિજેન કણ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરી શકતું નથી અને તેમને એકબીજા સાથે બાંધી શકતું નથી. જ્યારે એન્ટિજેન વધુ હોય ત્યારે દૃશ્યમાન એગ્લુટિનેટ અથવા અવક્ષેપની રચનાને દબાવવામાં આવે છે, જ્યારે એન્ટિબોડીઝનું એક પણ મુક્ત સક્રિય કેન્દ્ર રહેતું નથી, અને તેથી એન્ટિજેન + એન્ટિબોડી + એન્ટિજેન સંકુલ હવે વિસ્તૃત થઈ શકતા નથી.

એક્સિલરેટેડ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ માટે વિકલ્પો. પ્રતિક્રિયા નિષ્ક્રિય હિમેગ્ગ્લુટિનેશનઅને તેના પ્રકારો

ક્લાસિક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયામાં કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સનો ઉપયોગ શામેલ છે. જો કે, દ્રાવ્ય એન્ટિજેન્સ પણ સામેલ હોઈ શકે છે. આ શક્ય બનાવવા માટે, આવા એન્ટિજેન્સ રોગપ્રતિકારક રીતે નિષ્ક્રિય કણો પર શોષાય છે. લેટેક્સ અથવા બેન્ટોનાઇટના કણોનો વાહક તરીકે ઉપયોગ કરી શકાય છે, પરંતુ હાલમાં પ્રાણી અથવા માનવ એરિથ્રોસાઇટ્સનો મોટાભાગે ઉપયોગ થાય છે, ટેનીન, ફોર્મલિન અથવા બેન્ઝિડિનના ઉકેલો સાથે સારવાર કરીને તેમના શોષક ગુણધર્મોને સુધારે છે. લાલ રક્ત કોશિકાઓ કે જેણે પોતાના પર એન્ટિજેન શોષી લીધું હોય તેને આ એન્ટિજેન દ્વારા સંવેદનશીલ કહેવામાં આવે છે, અને રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાજેમાં તેઓ ભાગ લે છે તે પરોક્ષ અથવા નિષ્ક્રિય હિમેગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (IRHA, અથવા RPHA), કારણ કે લાલ રક્ત કોશિકાઓ તેમાં નિષ્ક્રિય રીતે ભાગ લે છે.

આરપીજીએ ખાસ પોલિસ્ટરીન પ્લેટોમાં મૂકવામાં આવે છે જેમાં છિદ્રો હેમિસ્ફેરિકલ તળિયે હોય છે. માટે ઉપયોગ કરતી વખતે સેરોલોજીકલ ડાયગ્નોસ્ટિક્સઆ કુવાઓમાં, શારીરિક દ્રાવણમાં ટેસ્ટ સીરમના બે ગણા મંદન તૈયાર કરવામાં આવે છે, અને પછી તેમાં ડાયગ્નોસ્ટિક એજન્ટ તરીકે સંવેદનશીલ એરિથ્રોસાઇટ્સનું સસ્પેન્શન ઉમેરવામાં આવે છે. ચાર-ક્રોસ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને 37 °C તાપમાને 2 કલાકના સેવન પછી પરિણામો નોંધવામાં આવે છે. સકારાત્મક પ્રતિક્રિયા સાથે, સંકલિત લાલ રક્ત કોશિકાઓ છિદ્રના તળિયે સ્થાયી થાય છે અને તેને ઊંધી છત્રીના રૂપમાં સમાનરૂપે આવરી લે છે. મુ નકારાત્મક પ્રતિક્રિયાલાલ રક્તકણો પણ સ્થાયી થાય છે, પ્રવાહી પારદર્શક બને છે, કાંપ છિદ્રની મધ્યમાં એક નાની "ડિસ્ક" જેવો દેખાય છે. RPHA માં સીરમ ટાઇટરને તેનું છેલ્લું મંદન માનવામાં આવે છે, જે હજી પણ "ડિસ્ક" ની હાજરીના નોંધપાત્ર ચિહ્નો વિના ઉચ્ચારણ હેમેગ્ગ્લુટિનેશન આપે છે.

RPGA નો ઉપયોગ બેક્ટેરિયોલોજિકલ ડાયગ્નોસ્ટિક્સની પ્રવેગક પદ્ધતિ તરીકે પણ કરી શકાય છે જેથી પરીક્ષણ સામગ્રીમાં અજાણ્યા બેક્ટેરિયા, વાયરસ, ઝેર, ઉદાહરણ તરીકે, પ્લેગ પેથોજેન્સ, સ્ટેફાયલોકોકલ એન્ટરટોક્સિન વગેરે. વિશિષ્ટતાનો ઉપયોગ પ્રતિક્રિયા એન્ટિબોડીઝના જાણીતા ઘટક તરીકે થાય છે - એન્ટિબોડી એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ. જો પરીક્ષણ સામગ્રીમાં જાણીતા એન્ટિજેનની પૂરતી માત્રા હોય, તો RPGA હકારાત્મક હશે.

RPHA નો ઉપયોગ કરવા માટેના વિકલ્પો છે: એન્ટિજેન ન્યુટ્રલાઇઝેશન રિએક્શન (RNAg), એન્ટિબોડી ન્યુટ્રલાઇઝેશન રિએક્શન (RNAb), પેસિવ હેમેગ્ગ્લુટિનેશન ઇન્હિબિશન રિએક્શન (PHA). આ પ્રતિક્રિયાઓ માટે, એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડી એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિક્સનો ઉપયોગ થાય છે. બે પરસ્પર નિયંત્રિત યુનિડાયરેક્શનલ પ્રતિક્રિયાઓ એકસાથે વાપરી શકાય છે, ઉદાહરણ તરીકે, એન્ટિજેન ડાયગ્નોસ્ટિકમ સાથે RPHA અને એન્ટિબોડી એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ સાથે RNAg.

એન્ટિબોડી ન્યુટ્રલાઇઝેશન રિએક્શન (RNAb) માં યોગ્ય માત્રામાં જાણીતા એન્ટિબોડીઝ ધરાવતા ચોક્કસ રોગપ્રતિકારક સીરમ સાથે ઇચ્છિત એન્ટિજેન ધરાવતા સસ્પેન્શનને મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને બે કલાક માટે 37 °C પર ઉકાળવામાં આવે છે. આ પછી, એન્ટિજેનિક એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ ઉમેરવામાં આવે છે. મિશ્રણને હલાવીને ઓરડાના તાપમાને છોડી દેવામાં આવે છે. પરિણામો 3-4 કલાક પછી અને અંતે 18-24 કલાક પછી ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે, જો પરીક્ષણ સામગ્રીમાં એન્ટિજેન હોય, તો તે એન્ટિબોડીઝને બાંધી દેશે (તેમને તટસ્થ કરો), અને તેથી હેમેગ્ગ્લુટિનેશન થશે નહીં.

એન્ટિજેન ન્યુટ્રલાઇઝેશન રિએક્શન (RNAg) સમાન સિદ્ધાંતનો ઉપયોગ કરીને કરવામાં આવે છે. માત્ર આ કિસ્સામાં પરીક્ષણ સામગ્રીમાં એન્ટિબોડીઝ મળી આવે છે. આવી પરીક્ષણ સામગ્રીમાં ઉમેરવામાં આવેલ ચોક્કસ એન્ટિજેન તેમાં રહેલા એન્ટિબોડીઝ સાથે જોડાય છે, એટલે કે, એન્ટિબોડીઝ દ્વારા એન્ટિજેનનું તટસ્થીકરણ થશે, અને તેથી એન્ટિબોડી એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ ઉમેરતી વખતે હિમેગ્ગ્લુટિનેશન થશે નહીં.

કોગગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા. તે નિષ્ક્રિય, એટલે કે, એન્ટિબોડી-વહન કોષો દ્વારા મધ્યસ્થી કાચ પર ત્વરિત એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા માટેના વિકલ્પોમાંનો એક છે. આ પ્રતિક્રિયા અનન્ય મિલકત પર આધારિત છે સ્ટેફાયલોકોકસ ઓરિયસ, જે તેની સેલ દિવાલમાં પ્રોટીન A ધરાવે છે, IgG અને IgM ના Fc ટુકડાઓ સાથે જોડાય છે. આ કિસ્સામાં, એન્ટિબોડીઝના સક્રિય કેન્દ્રો મુક્ત રહે છે અને એન્ટિજેન્સના ચોક્કસ નિર્ણાયકો સાથે સંપર્ક કરી શકે છે. સ્ટેફાયલોકોસીના 2% સસ્પેન્શનનો એક ડ્રોપ, યોગ્ય એન્ટિબોડીઝ સાથે સંવેદનશીલ, કાચની સ્લાઇડ પર લાગુ કરવામાં આવે છે, અને અભ્યાસ કરવામાં આવતા બેક્ટેરિયાના સસ્પેન્શનનો એક ડ્રોપ ઉમેરવામાં આવે છે. જો એન્ટિજેન એન્ટિબોડીઝ સાથે મેળ ખાય છે, તો 30-60 સે.ની અંદર એન્ટિબોડીઝથી ભરેલા સ્ટેફાયલોકોસીનું સ્પષ્ટ એકત્રીકરણ થાય છે.

લેટેક્સ એગ્લુટિનેશન રિએક્શન (LAR). આ ડાયગ્નોસ્ટિક સિસ્ટમમાં એન્ટિબોડીઝના વાહક નાના પ્રમાણભૂત લેટેક્ષ કણો છે. કાચ પરના કુવાઓમાં માઇક્રોમેથડનો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયા કરવામાં આવે છે. PAH ના સફળ સ્ટેજીંગ માટેની મુખ્ય શરત એ સિસ્ટમ ઘટકોના જથ્થાત્મક ગુણોત્તરનું કડક પાલન છે: એન્ટિબોડીઝ સાથે સંવેદનશીલ લેટેક્ષ તૈયારીના 10 μl પરીક્ષણ સામગ્રીના 50 μl માં ઉમેરવામાં આવે છે. વ્યાપારી પરીક્ષણ પ્રણાલીઓમાં સમાવિષ્ટ ત્રણ નિયંત્રણ પરીક્ષણોનો ઉપયોગ કરીને PAH ની વિશિષ્ટતાને નિયંત્રિત કરવામાં આવે છે: જાણીતા હકારાત્મક પ્રતિક્રિયા, દેખીતી રીતે નકારાત્મક પ્રતિક્રિયા અને પરીક્ષણ સામગ્રી સાથે PAH-અસંવેદનશીલ (એન્ટિબોડી વહન ન કરતા) લેટેક્સ માટે લેટેક્સ સસ્પેન્શનનું ગુણવત્તા નિયંત્રણ. આપણા દેશમાં, વિવિધ કણોના વ્યાસ (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 μm) સાથે પોલિસ્ટરીન મોનોડિસ્પર્સ લેટેક્સનો ઉપયોગ ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝના વાહક તરીકે થાય છે. LAG નો ઉપયોગ પરીક્ષણ સામગ્રીમાં સૂક્ષ્મજીવો અથવા તેમના એન્ટિજેન્સની ઝડપી તપાસ માટે થાય છે.

એન્ટિજેન્સની ઇમ્યુનોમેગ્નેટિક શોધ. કાચ પર એક્સિલરેટેડ એગ્લુટિનેશન રિએક્શન માટેનો એક વિકલ્પ ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ સાથે કોટેડ સુપરમેગ્નેટિક પોલિમર કણોના ઉપયોગ સાથે સંકળાયેલ છે. આવા એક કણ સૂક્ષ્મજીવોના 107-108 કોષો સુધી બાંધે છે, જેના કારણે સંવેદનશીલતા આ પદ્ધતિ 5 CFU/ml સુધી પહોંચે છે. સીપીઆર સાથે સંયોજનમાં સુક્ષ્મસજીવોની ઇમ્યુનોમેગ્નેટિક તપાસનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.

એકંદર હેમાગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (AHA). તમને દર્દીઓના લોહીમાં મુક્તપણે ફરતા એન્ટિજેન્સ (એન્ટિજેનેમિયા) અને એન્ટિબોડીઝ સાથે સંકળાયેલ એન્ટિજેન્સ - ફરતા રોગપ્રતિકારક સંકુલ (CIC) બંનેને ઝડપથી શોધવાની મંજૂરી આપે છે. RAHA માટે, યોગ્ય એન્ટિબોડીઝ સાથે સંવેદનશીલ લાલ રક્ત કોશિકાઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે. દર્દીના લોહીના સીરમનો ઉમેરો, જેમાં એન્ટિજેન્સ હોય છે, સંવેદનશીલ એરિથ્રોસાઇટ્સ કે જેના પર એન્ટિબોડીઝ નિશ્ચિત હોય છે, તે એરિથ્રોસાઇટ્સ અને રોગપ્રતિકારક સંકુલના ગ્લુઇંગ (એગ્લુટિનેશન) તરફ દોરી જાય છે.

એન્ટિગ્લોબ્યુલિન કોમ્બ્સ ટેસ્ટ (આર. કોમ્બ્સ પ્રતિક્રિયા). સંપૂર્ણ (દ્વિભાષી) એન્ટિબોડીઝ સીધી અને નિષ્ક્રિય એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓનો ઉપયોગ કરીને નક્કી કરવામાં આવે છે. અપૂર્ણ (મોનોવેલેન્ટ, અવરોધિત) એન્ટિબોડીઝ આ પદ્ધતિઓ દ્વારા શોધી શકાતા નથી, કારણ કે, જ્યારે તેઓ એન્ટિજેન સાથે જોડાય છે, ત્યારે તેઓ તેને અવરોધિત કરે છે, પરંતુ એન્ટિજેનને મોટા સમૂહમાં એકત્ર કરી શકતા નથી. અપૂર્ણ (અવરોધિત) એન્ટિબોડીઝ તે છે જેમાં માત્ર એક જ સક્રિય કેન્દ્ર કાર્ય કરે છે; બીજું સક્રિય કેન્દ્ર અજાણ્યા કારણોસર કામ કરતું નથી. અપૂર્ણ એન્ટિબોડીઝને શોધવા માટે, ખાસ કોમ્બ્સ પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ થાય છે (ફિગ. 72). પ્રતિક્રિયામાં શામેલ છે: દર્દીનું સીરમ, જેમાં અપૂર્ણ એન્ટિબોડીઝ નક્કી કરવામાં આવે છે, કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન-ડાયગ્નોસ્ટિકમ, એન્ટિગ્લોબ્યુલિન સીરમ જેમાં માનવ ગ્લોબ્યુલિનના એન્ટિબોડીઝ હોય છે. પ્રતિક્રિયા બે તબક્કામાં થાય છે:

અપૂર્ણ એન્ટિબોડીઝ સાથે એન્ટિજેનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા. ત્યાં કોઈ દૃશ્યમાન અભિવ્યક્તિઓ નથી. પ્રથમ તબક્કો દર્દીના બાકીના સીરમમાંથી એન્ટિજેન ધોવાથી પૂર્ણ થાય છે.

એન્ટિજેન પર શોષાયેલી અપૂર્ણ એન્ટિબોડીઝ સાથે માનવ ગ્લોબ્યુલિન સાથે પ્રાણીની રસીકરણના પરિણામે પ્રાપ્ત એન્ટિગ્લોબ્યુલિન સીરમની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા. એ હકીકતને કારણે કે એન્ટિગ્લોબ્યુલિન એન્ટિબોડીઝ દ્વિભાષી છે, તેઓ અલગ એજી + સંકુલના બે મોનોવેલેન્ટ એન્ટિબોડીઝને બાંધે છે. અપૂર્ણ એન્ટિબોડી, જે તેમના ગ્લુઇંગ અને દૃશ્યમાન કાંપના દેખાવ તરફ દોરી જાય છે.

એગ્ગ્લુટિનેશન એ ઇલેક્ટ્રોલાઇટ (આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન) ની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝના પ્રભાવ હેઠળ સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અથવા અન્ય કોષોનું ગ્લુઇંગ અને અવક્ષેપ છે.ગુંદર ધરાવતા બેક્ટેરિયા (કોષો) ના જૂથોને એગ્લુટિનેટ કહેવામાં આવે છે. એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા માટે નીચેના ઘટકો જરૂરી છે:

1. એન્ટિબોડીઝ (એગ્ગ્લુટીનિન્સ) જે બીમાર અથવા રોગપ્રતિકારક પ્રાણીના સીરમમાં જોવા મળે છે.

2. એન્ટિજેન - જીવંત અથવા માર્યા ગયેલા સૂક્ષ્મજીવાણુઓ, લાલ રક્ત કોશિકાઓ અથવા અન્ય કોષોનું સસ્પેન્શન.

3. આઇસોટોનિક (0.9%) સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન.

સેરોડાયગ્નોસિસ માટે એગ્લુટિનેશન ટેસ્ટનો ઉપયોગ થાય છે ટાઇફોઈડ નો તાવઅને પેરાટાઇફોઇડ તાવ (વિડલ પ્રતિક્રિયા), બ્રુસેલોસિસ (રાઈટ અને હેડલસન પ્રતિક્રિયા), તુલેરેમિયા, વગેરે. એન્ટિબોડી દર્દીનું સીરમ છે, અને એન્ટિજેન જાણીતું સૂક્ષ્મજીવાણુ છે. સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અથવા અન્ય કોષોને ઓળખતી વખતે, તેમના સસ્પેન્શનનો ઉપયોગ એન્ટિજેન તરીકે થાય છે, અને જાણીતા રોગપ્રતિકારક સીરમનો ઉપયોગ એન્ટિબોડી તરીકે થાય છે. આ પ્રતિક્રિયા વ્યાપકપણે ડાયગ્નોસ્ટિક્સ માટે વપરાય છે આંતરડાના ચેપ, હૂપિંગ ઉધરસ, વગેરે.

સ્ટેજીંગ આરએ માટેની પદ્ધતિઓ

કાચ પર અંદાજિત આરએ

તૈનાત આર.એ

(વોલ્યુમ પદ્ધતિ)

કોગગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા

કાચ પર અનફોલ્ડ કરેલ આરએ (સેરોઓઇડેન્ટિફિકેશન)

કાચ પર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા.વિશિષ્ટ (શોષિત) સીરમના બે ટીપાં અને આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનનું એક ટીપું ચરબી રહિત કાચની સ્લાઇડ પર નાખવામાં આવે છે. બિન-શોષિત સીરમ 1:5 - 1:100 ના ગુણોત્તરમાં પૂર્વ-પાતળું કરવામાં આવે છે. ટીપાં કાચ પર લાગુ કરવા જોઈએ જેથી તેમની વચ્ચે અંતર રહે. કલ્ચરને લૂપ અથવા પીપેટ વડે કાચ પર સારી રીતે ગ્રાઉન્ડ કરવામાં આવે છે, અને પછી તેને આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનના એક ટીપામાં અને સીરમના એક ટીપામાં ઉમેરવામાં આવે છે, જ્યાં સુધી એક સમાન સસ્પેન્શન ન બને ત્યાં સુધી દરેકમાં હલાવતા રહો. સંસ્કૃતિ વિના સીરમનું ટીપું એ સીરમ નિયંત્રણ છે.

ધ્યાન આપો!તમે સીરમમાંથી કલ્ચરને આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનના એક ટીપામાં સ્થાનાંતરિત કરી શકતા નથી, જે એન્ટિજેન નિયંત્રણ તરીકે કામ કરે છે. પ્રતિક્રિયા ઓરડાના તાપમાને 1-3 મિનિટ માટે થાય છે. જો સીરમ કંટ્રોલ પારદર્શક રહે છે, તો એન્ટિજેન કંટ્રોલમાં એકસમાન ટર્બિડિટી જોવા મળે છે, અને એગ્લુટિનેટ ફ્લેક્સ ડ્રોપમાં દેખાય છે જ્યાં સ્પષ્ટ પ્રવાહીની પૃષ્ઠભૂમિ સામે સીરમ સાથે સંસ્કૃતિ મિશ્રિત થાય છે, પ્રતિક્રિયા પરિણામ હકારાત્મક માનવામાં આવે છે.

ડાયગ્નોસ્ટિક ફિઝિયોલોજિકલ

સીરમ + સંસ્કૃતિ ઉકેલ + સંસ્કૃતિ

વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (વોલ્યુમ પદ્ધતિ).સીરીયલ, મોટેભાગે બે ગણું, સીરમના મંદન તૈયાર કરવામાં આવે છે. પદ્ધતિને વોલ્યુમેટ્રિક કહેવામાં આવે છે. રક્ત સીરમમાં એન્ટિબોડી ટાઇટર નક્કી કરવા માટે, 6 ટ્યુબ લો. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં મૂળ સીરમ ડિલ્યુશન 1:50 નું 1 મિલી રેડો અને ગ્રેજ્યુએટેડ પીપેટનો ઉપયોગ કરીને તમામ 6 ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 1 મિલી ખારા દ્રાવણ ઉમેરો. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબ 2 ml ના વોલ્યુમ સાથે 1:100 નું સીરમ ડિલ્યુશન આપશે. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી બીજી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં 1 મિલી ટ્રાન્સફર કરો, જ્યાં મંદન 1:200 થાય છે. તેથી પ્રથમ 5 ટેસ્ટ ટ્યુબ (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) માં સીરમના સીરીયલ ડિલ્યુશનની શ્રેણી બનાવો. પાંચમી ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી, જંતુનાશક દ્રાવણમાં 1 મિલી રેડવું. તમામ 6 ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ડાયગ્નોસ્ટિકમના 2 ટીપાં ઉમેરો. છઠ્ઠી ટ્યુબ સંસ્કૃતિ નિયંત્રણ છે, કારણ કે તેમાં માત્ર ખારા ઉકેલ અને ડાયગ્નોસ્ટિકમ છે.

સંસ્કૃતિના સ્વયંસ્ફુરિત એકત્રીકરણને બાકાત રાખવા માટે આવા નિયંત્રણ જરૂરી છે. ટ્યુબને હલાવવામાં આવે છે અને થર્મોસ્ટેટમાં 37 ° સે તાપમાને 2 કલાક માટે મૂકવામાં આવે છે, અને પછી ઓરડાના તાપમાને એક દિવસ માટે છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના પરિણામો નોંધવામાં આવે છે. જીવનના પ્રથમ મહિનામાં બાળકોના સેરા સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા કરતી વખતે, એન્ટિબોડી રચનાની કાર્યાત્મક લઘુત્તમતાને લીધે, નીચલા એન્ટિબોડી ટાઇટર્સ ઓળખવા જરૂરી છે, જે સીરમને પાતળું કરતી વખતે ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. પ્રારંભિક સીરમ મંદન 1:25 છે. પ્રથમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં, 1:50 નું મંદન મેળવવામાં આવે છે, પછી 1:100, વગેરે.

મુ હકારાત્મક પરિણામટેસ્ટ ટ્યુબમાં પ્રતિક્રિયાઓ, અનાજ અથવા ફ્લેક્સના સ્વરૂપમાં સ્ટીકી કોશિકાઓ સ્પષ્ટ પ્રવાહીની પૃષ્ઠભૂમિ સામે દેખાય છે.એગ્લુટિનેટ ધીમે ધીમે "છત્રી" ના રૂપમાં તળિયે સ્થિર થાય છે, અને કાંપની ઉપરનું પ્રવાહી સ્પષ્ટ બને છે. એન્ટિજેન નિયંત્રણ સમાનરૂપે વાદળછાયું છે.

કાંપની પ્રકૃતિના આધારે, ઝીણા- અને બરછટ-દાણાવાળા (ફ્લેકી) એગ્લુટિનેશનને અલગ પાડવામાં આવે છે. ઓ-સેરા સાથે કામ કરતી વખતે ફાઇન-ગ્રેઇન્ડ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રાપ્ત થાય છે. બરછટ-દાણાવાળા - જ્યારે ગતિશીલ સૂક્ષ્મજીવાણુઓ ફ્લેગેલર એચ-સેરા સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. તે ઝીણા દાણાવાળા કરતાં વધુ ઝડપથી થાય છે, અને પરિણામી કાંપ ખૂબ જ છૂટક અને સરળતાથી તૂટી જાય છે.

પ્રતિક્રિયાની તીવ્રતા નીચે પ્રમાણે વ્યક્ત કરવામાં આવે છે:

બધા કોષો સ્થાયી થયા છે, ટેસ્ટ ટ્યુબમાં પ્રવાહી સંપૂર્ણપણે પારદર્શક છે. પ્રતિક્રિયાનું પરિણામ તીવ્ર હકારાત્મક છે;

ત્યાં ઓછો કાંપ છે, પ્રવાહી સંપૂર્ણપણે સાફ થતું નથી. પ્રતિક્રિયાનું પરિણામ હકારાત્મક છે;

ત્યાં કાંપ પણ ઓછો છે, પ્રવાહી વાદળછાયું છે. પ્રતિક્રિયાનું પરિણામ શંકાસ્પદ છે;

ટેસ્ટ ટ્યુબના તળિયે થોડો કાંપ છે, પ્રવાહી વાદળછાયું છે. પ્રશ્નાર્થ પ્રતિક્રિયા પરિણામ;

ત્યાં કોઈ કાંપ નથી, પ્રવાહી સમાનરૂપે વાદળછાયું છે, જેમ કે એન્ટિજેન નિયંત્રણમાં છે. નકારાત્મક પ્રતિક્રિયા પરિણામ

એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા

(આરએ) - ઓળખવાની પદ્ધતિ અને પ્રમાણીકરણ Ag અને At, નરી આંખે જોઈ શકાય તેવા એગ્લોમેરેટ્સ બનાવવાની તેમની ક્ષમતાના આધારે. ચેપી રોગો વિભાગમાં. રોગો અથવા અન્ય હેતુઓ માટે અજ્ઞાત સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અને કોષોને ઓળખવા, રક્ત અને અન્ય પ્રવાહીમાં Abની હાજરી અને માત્રા નક્કી કરવા માટે વપરાય છે. નિર્ધારણ સિદ્ધાંત Ag અને Ab વચ્ચેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા પર આધારિત છે અને તે અજાણ્યામાંથી જાણીતાને શોધવાનો સમાવેશ કરે છે. આરએ માટે ઘણા વિકલ્પો છે: માત્રાત્મક અને ગુણાત્મક, ટેસ્ટ ટ્યુબ અને કાચ, વોલ્યુમેટ્રિક અને ટીપું, પરંપરાગત, પ્રવેગિત અને એક્સપ્રેસ પદ્ધતિઓ. સ્ટેજ RA માટે તમારે આની જરૂર છે: 1) s-ka લોહી.બેક્ટેરિયાના પ્રકાર (var) ને નિર્ધારિત કરવાના પ્રકારમાં, ઔદ્યોગિક એગ્લુટિનેટિંગ પરીક્ષણોનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, જે સસલાને રોગપ્રતિરક્ષા દ્વારા બનાવવામાં આવે છે. એબના પ્રકારના નિર્ધારણ સાથેના પ્રકારમાં, પરીક્ષણમાંથી લોહીનો નમૂનો લેવામાં આવે છે. લોકો અથવા પ્રાણીઓ. સોલ્યુશન જંતુરહિત અને સસ્પેન્ડેડ કણોથી મુક્ત હોવું જોઈએ. ખારા ઉકેલમાં મૂળભૂત મંદન તૈયાર કરો. તે આ રોગ માટે ડાયગ્નોસ્ટિક ટાઇટર કરતાં 2-4 ગણું ઓછું હોવું જોઈએ; 2) એજી.એબ પ્રકારના નિર્ધારણ સાથેની પ્રતિક્રિયાના સંસ્કરણમાં, ઔદ્યોગિક ડાયગ્નોસ્ટિક કિટ્સનો ઉપયોગ થાય છે; એજીના નિર્ધારણ સાથેના પ્રકારમાં, ડાયગ્નોસ્ટિકમ 18-20-કલાકના અગર (ઓછી વાર સૂપ) પરીક્ષણના ખારા દ્રાવણમાં 1-3 બિલિયન સસ્પેન્શનના સ્વરૂપમાં તૈયાર કરવામાં આવે છે. પાણીના સ્નાનમાં 1 કલાક માટે 70 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર ગરમ કરીને અથવા ફોર્માલ્ડિહાઇડ (અંતિમ સાંદ્રતા 0.2%) સાથે 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 24-કલાકના સેવનથી સૂક્ષ્મજીવાણુ નિષ્ક્રિય થાય છે; 3) ખારા ઉકેલના સ્વરૂપમાં ઇલેક્ટ્રોલાઇટ.સ્ટેજીંગ તકનીક વોલ્યુમેટ્રિક સીરીયલ ટ્યુબએસ-કીમાં એબ ટાઇટર નક્કી કરવા માટે આરએ: એસ-કીના મુખ્ય મંદનમાંથી વર્કિંગ ડિલ્યુશનની ઘણી પંક્તિઓ તૈયાર કરવામાં આવે છે. પંક્તિઓની સંખ્યા પ્રયોગમાં લેવામાં આવેલા ડાયગ્નોસ્ટિકમ્સની સંખ્યા પર આધારિત છે અને શંકાસ્પદ રોગના ડાયગ્નોસ્ટિક ટાઇટર દ્વારા નિર્ધારિત કરવામાં આવે છે. શ્રેણીમાં ઓછામાં ઓછું ડાયગ્નોસ્ટિક એબ ટાઇટરને અનુરૂપ મંદન હોવું જોઈએ, નીચે બે મંદન અને તેની ઉપર બે મંદન. ઉદાહરણ તરીકે, જો ડાયગ્નોસ્ટિક ટાઇટર 1:100 છે, તો પછી સ્ટેજીંગ આરએની વોલ્યુમેટ્રિક પદ્ધતિ સાથે નીચેના ડિલ્યુશન તૈયાર કરવા જોઈએ: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ટપક સાથે પદ્ધતિ, પ્રથમ મંદન (1:25) જરૂરી નથી, પરંતુ અન્ય ઉચ્ચ મંદન જરૂરી છે - 1:800 B. વૈજ્ઞાનિક સંશોધન s-ku ને નકારાત્મક પ્રતિક્રિયા માટે ટાઇટેડ કરવામાં આવે છે. તે નીચે પ્રમાણે પાતળું કરવામાં આવે છે: 0.25 મિલી ક્ષારયુક્ત દ્રાવણ તમામ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં રેડવામાં આવે છે, પ્રથમ એક સિવાય, જ્યારે પ્રતિક્રિયા 0.5 મિલીના જથ્થામાં કરવામાં આવે છે, અને જ્યારે પ્રતિક્રિયા 1 ની માત્રામાં કરવામાં આવે છે ત્યારે 0.5 મિલી. મિલી 0.25 (0.5) મિલી મુખ્ય મંદન 1લી અને 2જી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં, 2જી ટેસ્ટ ટ્યુબમાંથી, કટ વોલ્યુમમાં રેડો અને સંવર્ધન s-kઅને 2 ગણો વધારો થયો છે, 0.25 (0.5) મિલી 3જી, 3જીથી 4જી, વગેરેમાં ટ્રાન્સફર કરવામાં આવે છે. છેલ્લે સુધી, કટમાંથી 0.25 (0.5) મિલી બધું જ વોલ્યુમને સંતુલિત કરવા માટે રેડવામાં આવે છે. દરેક મંદન એક અલગ પાઇપેટનો ઉપયોગ કરીને હાથ ધરવામાં આવે છે. જો ઘણા ડાયગ્નોસ્ટિકમ્સને પ્રયોગમાં લેવામાં આવે છે, તો તે દરેક માટે તે જ રીતે તેની પોતાની પાતળી શ્રેણી તૈયાર કરવામાં આવે છે. ડાયગ્નોસ્ટિકમ ટેસ્ટ ટ્યુબના દરેક મંદન માટે ટેસ્ટ ટ્યુબના જથ્થાના સમાન વોલ્યુમમાં ઉમેરવામાં આવે છે, જેના પરિણામે દરેક ટેસ્ટ ટ્યુબમાં મંદન બમણું થાય છે. પ્રયોગ s-ki નિયંત્રણ (s-ki ના મુખ્ય મંદનનું 0.25 - 0.5 મિલી અને ખારા દ્રાવણની સમાન માત્રા) અને Ag નિયંત્રણ (0.25 - 0.5 મિલી ડાયગ્નોસ્ટિકમ અને સમાન પ્રમાણમાં ખારા દ્રાવણ) ને અનુરૂપ છે. જો પ્રયોગમાં અનેક ડાયગ્નોસ્ટિકમનો ઉપયોગ કરવામાં આવે, તો દરેકનું પોતાનું એન્ટિજેન નિયંત્રણ હોય છે. ટેસ્ટ ટ્યુબ સાથેના રેકને સારી રીતે હલાવવામાં આવે છે અને થર્મોસ્ટેટમાં 4 કલાક માટે 37 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર મૂકવામાં આવે છે, અને પછી બીજા દિવસ સુધી ઓરડાના તાપમાને છોડી દેવામાં આવે છે, ત્યારબાદ કાંપની માત્રા અને ક્લિયરિંગની ડિગ્રીના આધારે PA રેકોર્ડ કરવામાં આવે છે. પ્રવાહી આ સૂચકાંકોનું નિર્ધારણ, એગ્લુટિનેટ્સની પ્રકૃતિના આધારે, નરી આંખે કાળી પૃષ્ઠભૂમિ સામે, એગ્ગ્લુટિનોસ્કોપમાં અથવા માઇક્રોસ્કોપ મિરરની અંતર્મુખ સપાટી પર હાથ ધરવામાં આવે છે. એકાઉન્ટિંગ નિયંત્રણોથી શરૂ થાય છે: નિયંત્રણ C પારદર્શક હોવું જોઈએ, Ag એકસરખું વાદળછાયું હોવું જોઈએ (ટ્યુબને હલાવી લીધા પછી). જો નિયંત્રણો સારા હોય, તો તમામ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં એગ્ગ્લુટિનેશનની હાજરી અને ડિગ્રી સ્થાપિત કરો, જે પ્લીસસ દ્વારા નિયુક્ત કરવામાં આવે છે: મોટા કાંપ અને પ્રવાહીનું સંપૂર્ણ ક્લિયરિંગ - 4 પ્લીસસ; મોટા કાંપ અને પ્રવાહીની અપૂર્ણ ક્લિયરિંગ - 3 પ્લીસસ; નોંધનીય કાંપ અને પ્રવાહીનું ધ્યાનપાત્ર ક્લિયરિંગ એ 2 પ્લીસસ છે. આ પછી, ટાઇટર નક્કી કરવામાં આવે છે: ઓછામાં ઓછા 2 પ્લીસસની એગ્ગ્લુટિનેશન તીવ્રતા સાથે સૌથી વધુ મંદન. ટાઇટ્રે સંશોધન s-ki ની સરખામણી આ રોગ માટે ડાયગ્નોસ્ટિક ટાઇટર સાથે કરવામાં આવે છે. જો ટાઇટરની તપાસ કરવામાં આવે તો. s-ki ડાયગ્નોસ્ટિક મૂલ્ય કરતાં 2 ગણું ઓછું છે, પ્રતિક્રિયાને શંકાસ્પદ તરીકે મૂલ્યાંકન કરવામાં આવે છે; જો ટાઇટર સમાન હોય ડાયગ્નોસ્ટિક - કેવી રીતેનબળા હકારાત્મક; જો તે 2-4 ગણું વધારે હોય, તો તે 8 કે તેથી વધુ ગણું વધારે હોય તો તેને સકારાત્મક માનવામાં આવે છે; અબના વ્યાપક વિતરણ સાથે સ્વસ્થ લોકો RA નું મૂલ્યાંકન કરવા માટે, Ab titer માં વધારાનો ઉપયોગ થાય છે. સીરીયલ RA માં Ar નો પ્રકાર નક્કી કરવા માટે, પંક્તિઓની સંખ્યા ઓળખ માટે લેવામાં આવેલી સંખ્યાને અનુરૂપ હોવી જોઈએ ડાયગ્નોસ્ટિક પરીક્ષણો. ડાયગ્નોસ્ટિક ટેસ્ટના મુખ્ય મંદનમાંથી, એબ ટાઇટર નક્કી કરવા માટે RA ની જેમ જ ક્રમિક બે-ગણા ડિલ્યુશનની શ્રેણી તૈયાર કરવામાં આવે છે. ડિલ્યુશન ફેક્ટર એગ્ગ્લુટિનેટિંગ ટેસ્ટના ટાઇટર પર આધાર રાખે છે, તેમજ તેના કરતાં 2, 4, 6, 8 ગણું ઓછું હોવું જરૂરી છે ડાયગ્નોસ્ટિક ટેસ્ટનું ટાઇટર 1 3200 છે, તો તમારે 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 મંદનનો ઉપયોગ કરવો જોઈએ, પરીક્ષણના મંદન માટે પરીક્ષણ કરેલ એજીનું સમાન વોલ્યુમ ઉમેરવામાં આવે છે, પરિણામે, મંદન પરીક્ષણમાં 2 ગણો વધારો થાય છે અને જો પ્રયોગમાં ઘણા s-k સામેલ હોય, તો તેમાંથી દરેકને તેના પોતાના નિયંત્રણની જરૂર હોય છે અને તેને જોરશોરથી હલાવવામાં આવે છે 37 ° સે પર થર્મોસ્ટેટમાં. અભ્યાસના અનુપાલન વિશે નિષ્કર્ષ કાઢવા માટે પ્રતિક્રિયાના મૂલ્યાંકનને ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. પ્રયોગમાં લેવામાં આવેલ એજી, 1 4 અને નીચેના ટાઇટરને જૂથ પ્રતિક્રિયા તરીકે ગણવામાં આવે છે ટપક એમ.ડી RA નું સ્ટેજીંગ વોલ્યુમેટ્રિકથી અલગ છે જેમાં s-ku 1 ml ના જથ્થામાં ભળે છે, Ag નો ઉપયોગ વધુ સાંદ્રતા (10 billion/ml)માં થાય છે અને તેને 1 ઉમેરવામાં આવે છે. - 2 ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ડ્રોપ્સ એજી ઉમેર્યા પછી દવાના મંદનને અપરિવર્તિત ગણવામાં આવે છે અન્યથા, ફોર્મ્યુલેશન, રેકોર્ડિંગ અને મૂલ્યાંકનની પદ્ધતિ વોલ્યુમેટ્રિક પદ્ધતિ જેવી જ છે

(સ્રોત: માઇક્રોબાયોલોજી ટર્મ્સનો શબ્દકોશ)

એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (lat માંથી. સંચય- ગ્લુઇંગ) - ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝ દ્વારા કોર્પસ્કલ્સ (બેક્ટેરિયા, લાલ રક્ત કોશિકાઓ, વગેરે) નું ગ્લુઇંગ.

એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાએન્ટિબોડીઝ (ફિગ. 7.37) દ્વારા "એકસાથે ગુંદર ધરાવતા" કોર્પસકલ્સ (ઉદાહરણ તરીકે, બેક્ટેરિયા) નો સમાવેશ કરીને ફ્લેક્સ અથવા કાંપના સ્વરૂપમાં પોતાને પ્રગટ કરે છે. એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ આ માટે થાય છે: દર્દીથી અલગ પેથોજેન નક્કી કરવા; દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝનું નિર્ધારણ; રક્ત જૂથોનું નિર્ધારણ.

ચોખા. 7.37 એ, બી. સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઆઇજીએમ- એન્ટિબોડીઝ (a) અનેઆઇજીજી- એન્ટિબોડીઝ (બી)

1. દર્દીથી અલગ પેથોજેનનું નિર્ધારણ અંદાજિત પ્રતિક્રિયાકાચ પર એગ્ગ્લુટિનેશન (ફિગ. 7.38). દર્દીથી અલગ કરાયેલા બેક્ટેરિયાનું સસ્પેન્શન એગ્લુટિનેટિંગ સીરમ (1:20 ડિલ્યુશન)ના ડ્રોપમાં ઉમેરવામાં આવે છે. એક flocculent અવક્ષેપ સ્વરૂપો.

ચોખા. 7.38.

દર્દીથી અલગ પડેલા પેથોજેન સાથે વ્યાપક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ફિગ. 7.39). દર્દીથી અલગ કરાયેલા બેક્ટેરિયાનું સસ્પેન્શન એગ્લુટિનેટિંગ સીરમના મંદનમાં ઉમેરવામાં આવે છે.

ચોખા. 52

2. દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝનું નિર્ધારણ
દર્દીના લોહીના સીરમ સાથે વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ફિગ. 7.39). ડાયગ્નોસ્ટિકમ દર્દીના સીરમના ઘટાડામાં ઉમેરવામાં આવે છે.
- ઓ-ડાયગ્નોસ્ટિકમ (બેક્ટેરિયા ગરમીથી માર્યા જાય છે, ઓ-એન્ટિજન જાળવી રાખે છે) સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન ફાઇન-ગ્રેઇન્ડ એગ્ગ્લુટિનેશનના સ્વરૂપમાં થાય છે.
- એચ-ડાયગ્નોસ્ટિકમ સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન (ફોર્માલ્ડિહાઇડ દ્વારા માર્યા ગયેલા બેક્ટેરિયા, ફ્લેગેલર એચ-એન્ટિજેન જાળવી રાખે છે) મોટું છે અને ઝડપથી થાય છે.
3. રક્ત જૂથો નક્કી કરવા માટે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયારક્ત જૂથો નક્કી કરવા માટે એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ એબીઓ સિસ્ટમ (કોષ્ટક b) સ્થાપિત કરવા માટે થાય છે જે રક્ત જૂથ એન્ટિજેન્સ A (I), B (III) સામે રોગપ્રતિકારક સીરમ એન્ટિબોડીઝ સાથે એરિથ્રોસાઇટ્સના એકત્રીકરણનો ઉપયોગ કરે છે. નિયંત્રણ છે: સીરમ જેમાં એન્ટિબોડીઝ નથી, એટલે કે. સીરમ એબી (IV) રક્ત જૂથ; A (II), B (III) જૂથોના લાલ રક્ત કોશિકાઓમાં સમાયેલ એન્ટિજેન્સ. નકારાત્મક નિયંત્રણમાં એન્ટિજેન્સ નથી, એટલે કે, જૂથ O (I) એરિથ્રોસાઇટ્સનો ઉપયોગ થાય છે.

કોષ્ટક 7.6. ABO રક્ત જૂથોનું નિર્ધારણ

પ્રતિક્રિયા પરિણામો		સમૂહ
		સંબંધિત
		સંશોધન કર્યું લોહી
સાથે લાલ રક્ત કોશિકાઓ	સીરમ (પ્લાઝમા)
ધોરણ	ધોરણ સાથે
સીરમ