એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (lat માંથી. સંચય- ગ્લુઇંગ) - ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝ દ્વારા કોર્પસ્કલ્સ (બેક્ટેરિયા, લાલ રક્ત કોશિકાઓ, વગેરે) નું ગ્લુઇંગ.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાએન્ટિબોડીઝ (ફિગ. 7.37) દ્વારા "એકસાથે ગુંદર ધરાવતા" કોર્પસકલ્સ (ઉદાહરણ તરીકે, બેક્ટેરિયા) નો સમાવેશ કરીને ફ્લેક્સ અથવા કાંપના સ્વરૂપમાં પોતાને પ્રગટ કરે છે. એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ આ માટે થાય છે: દર્દીથી અલગ પેથોજેન નક્કી કરવા; દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝનું નિર્ધારણ; રક્ત જૂથોનું નિર્ધારણ.
ચોખા. 7.37 એ, બી. સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઆઇજીએમ- એન્ટિબોડીઝ (a) અનેઆઇજીજી- એન્ટિબોડીઝ (બી)
1. દર્દીથી અલગ પડેલા પેથોજેનનું નિર્ધારણ. કાચ પર અંદાજિત એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ફિગ. 7.38). દર્દીથી અલગ કરાયેલા બેક્ટેરિયાનું સસ્પેન્શન એગ્લુટિનેટિંગ સીરમ (1:20 ડિલ્યુશન)ના ડ્રોપમાં ઉમેરવામાં આવે છે. એક flocculent અવક્ષેપ સ્વરૂપો.
ચોખા. 7.38.
દર્દીથી અલગ પડેલા પેથોજેન સાથે વ્યાપક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ફિગ. 7.39). દર્દીથી અલગ કરાયેલા બેક્ટેરિયાનું સસ્પેન્શન એગ્લુટિનેટિંગ સીરમના મંદનમાં ઉમેરવામાં આવે છે.
ચોખા. 52
2. દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝનું નિર્ધારણ
દર્દીના લોહીના સીરમ સાથે વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ફિગ. 7.39). ડાયગ્નોસ્ટિકમ દર્દીના સીરમના ઘટાડામાં ઉમેરવામાં આવે છે.
- ઓ-ડાયગ્નોસ્ટિકમ (બેક્ટેરિયા ગરમીથી માર્યા જાય છે, ઓ-એન્ટિજન જાળવી રાખે છે) સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન ફાઇન-ગ્રેઇન્ડ એગ્ગ્લુટિનેશનના સ્વરૂપમાં થાય છે.
- એચ-ડાયગ્નોસ્ટિકમ સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન (ફોર્માલ્ડિહાઇડ દ્વારા માર્યા ગયેલા બેક્ટેરિયા, ફ્લેગેલર એચ-એન્ટિજેન જાળવી રાખે છે) મોટું છે અને ઝડપથી થાય છે.
3. રક્ત જૂથો નક્કી કરવા માટે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયારક્ત જૂથો નક્કી કરવા માટે એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ એબીઓ સિસ્ટમ (કોષ્ટક b) સ્થાપિત કરવા માટે થાય છે જે રક્ત જૂથ એન્ટિજેન્સ A (I), B (III) સામે રોગપ્રતિકારક સીરમ એન્ટિબોડીઝ સાથે એરિથ્રોસાઇટ્સના એકત્રીકરણનો ઉપયોગ કરે છે. નિયંત્રણ છે: સીરમ જેમાં એન્ટિબોડીઝ નથી, એટલે કે. સીરમ એબી (IV) રક્ત જૂથ; A (II), B (III) જૂથોના લાલ રક્ત કોશિકાઓમાં સમાયેલ એન્ટિજેન્સ. નકારાત્મક નિયંત્રણમાં એન્ટિજેન્સ નથી, એટલે કે, જૂથ O (I) એરિથ્રોસાઇટ્સનો ઉપયોગ થાય છે.
કોષ્ટક 7.6. ABO રક્ત જૂથોનું નિર્ધારણ
| પ્રતિક્રિયા પરિણામો |
સમૂહ |
|
|
સંબંધિત |
||
|
સંશોધન કર્યું |
||
|
સાથે લાલ રક્ત કોશિકાઓ |
સીરમ (પ્લાઝમા) |
|
|
ધોરણ |
ધોરણ સાથે |
|
|
સીરમ | ||
એગ્લુટિનેશન રિએક્શન (RA) એ ઇલેક્ટ્રોલાઇટની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝના પ્રભાવ હેઠળ સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અથવા અન્ય કોષોનું સંલગ્નતા અને અવક્ષેપ છે. પરિણામી અવક્ષેપને એગ્લુટિનેટ કહેવામાં આવે છે.
આરએનો ઉપયોગ થાય છે:
1. દર્દીના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝ શોધવા માટે (સેરોડાયગ્નોસિસ).
2. દર્દી (સેરોટાઇપિંગ) થી અલગ પેથોજેનિક સુક્ષ્મસજીવોની શુદ્ધ સંસ્કૃતિનો પ્રકાર અને સેરોવર નક્કી કરવા.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ દર્દીઓના લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝ નક્કી કરવા માટે થાય છે, ઉદાહરણ તરીકે, ટાઇફોઇડ તાવ અને પેરાટાઇફોઇડ તાવ (વિડાલ પ્રતિક્રિયા), બ્રુસેલોસિસ (રાઇટ, હેડલસન પ્રતિક્રિયા), તુલેરેમિયા, લેપ્ટોસ્પાઇરોસિસ અને અન્ય ચેપી રોગો, તેમજ દર્દીથી અલગ પેથોજેન નક્કી કરવા માટે ( આંતરડાના ચેપ, હૂપિંગ ઉધરસ, વગેરે). RA નો ઉપયોગ રક્ત જૂથો, આરએચ પરિબળ, વગેરે નક્કી કરવા માટે થાય છે.
પ્રતિક્રિયા માટે નીચેના ઘટકોની જરૂર છે:
1. એન્ટિજેન (એગ્ગ્લુટિનોજેન) કોર્પસ્ક્યુલર હોવું આવશ્યક છે, એટલે કે, તે જીવંત અથવા માર્યા ગયેલા સુક્ષ્મસજીવો (ડાયગ્નોસ્ટિક્સ એમ), એરિથ્રોસાઇટ્સ અથવા અન્ય કોષોનું સસ્પેન્શન છે. સામાન્ય રીતે, અગર સ્લેંટ પર ઉગાડવામાં આવતા સુક્ષ્મસજીવોની દૈનિક સંસ્કૃતિનો ઉપયોગ થાય છે. સંસ્કૃતિને 3 - 4 મિલી આઇસોટોનિક સોલ્યુશનથી ધોવાઇ જાય છે, તેને જંતુરહિત ટ્યુબમાં સ્થાનાંતરિત કરવામાં આવે છે, અને ઘનતા નક્કી કરવામાં આવે છે. સસ્પેન્શન સજાતીય હોવું જોઈએ અને તેમાં 1 મિલી દીઠ 3 બિલિયન માઇક્રોબાયલ કોષો હોવા જોઈએ. માર્યા ગયેલા સૂક્ષ્મજીવાણુઓના સસ્પેન્શનનો ઉપયોગ - ડાયગ્નોસ્ટિકમ્સ - કાર્યને સરળ બનાવે છે (ઉત્પાદનમાં તૈયાર).
2. એન્ટિબોડીઝ (એગ્ગ્લુટીનિન્સ) દર્દીના સીરમમાં (સેરોડાયગ્નોસિસ દરમિયાન) અથવા એગ્લુટિનેટિંગ સીરમમાં (સેરોટાઇપિંગ દરમિયાન) જોવા મળે છે. એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સેરા સસલાને માર્યા ગયેલા બેક્ટેરિયા સાથે રોગપ્રતિકારક કરીને મેળવવામાં આવે છે.
Agglutinating titerસીરમને તેનું ઉચ્ચતમ મંદન કહેવામાં આવે છે, જેમાં તે ચોક્કસ પ્રાયોગિક પરિસ્થિતિઓમાં અનુરૂપ એન્ટિજેન સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે.
એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સેરા મૂળ (શોષાય નહીં) અને શોષિત હોઈ શકે છે. નાના ડિલ્યુશનમાં નેટિવ સેરા માત્ર એવા સૂક્ષ્મજીવોના પ્રકાર સાથે જ નહીં કે જેની સાથે પ્રાણીને સીરમ મેળવવા માટે રોગપ્રતિરક્ષા આપવામાં આવી હતી, પણ સંબંધિત પ્રકારના સૂક્ષ્મજીવો સાથે પણ સંપર્ક કરે છે, કારણ કે તેમાં જૂથ એન્ટિબોડીઝ (સામાન્ય એન્ટિજેન્સ ધરાવતા સુક્ષ્મસજીવોના એન્ટિબોડીઝ) હોય છે. મૂળ સેરાનો ઉપયોગ વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (સેરોડાયગ્નોસિસ માટે) માટે થાય છે, જે માત્ર પ્રતિક્રિયાની હાજરીને જ નહીં, પરંતુ એન્ટિબોડી ટાઇટરમાં વધારો કરવાની ગતિશીલતાને પણ ધ્યાનમાં લે છે.
જો જૂથ એન્ટિજેન્સ ધરાવતા સંબંધિત બેક્ટેરિયા સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દ્વારા મૂળ સીરમમાંથી જૂથ એન્ટિબોડીઝ કાઢવામાં આવે છે (શોષવામાં આવે છે), તો શોષિત સેરા મેળવવામાં આવે છે. શોષિત સેરા મોનોરેસેપ્ટર (અથવા પ્રકાર-વિશિષ્ટ) હોઈ શકે છે, જેમાં માત્ર એક એન્ટિજેન રીસેપ્ટર માટે એન્ટિબોડીઝ હોય છે. પોલીવેલેન્ટ સેરા અનેક શોષિત અથવા બિન-શોષિત સેરાનું મિશ્રણ ધરાવે છે. શોષિત સેરાનો ઉપયોગ ગ્લાસ એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા માટે થાય છે.
જ્યારે પ્રાણીઓને એચ-એન્ટિજન સાથે ગતિશીલ બેક્ટેરિયાથી રોગપ્રતિરક્ષા આપવામાં આવે છે, ત્યારે એચ-એન્ટિબોડીઝ ધરાવતી એચ-એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સેરા મેળવવામાં આવે છે (ઉદાહરણ તરીકે, સાલ્મોનેલા મોનોરેસેપ્ટર એચ-એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સીરમ). ઓ-એન્ટિજેન સાથે ઇમ્યુનાઇઝેશન દ્વારા, ઓ-એન્ટિબોડીઝ ધરાવતી ઓ-એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સેરા મેળવવામાં આવે છે (ઉદાહરણ તરીકે, સાલ્મોનેલા જૂથ શોષિત ઓ-એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સીરમ, એન્ટિકોલેરા ઓ-એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સીરમ). H- અને O- એન્ટિજેન્સ સાથે રોગપ્રતિરક્ષા દ્વારા, H- અને O- એન્ટિબોડીઝ સાથે સેરા મેળવવામાં આવે છે.
તદુપરાંત, ઓ-એગ્ગ્લુટીનિન્સ ઝીણા દાણાવાળા એગ્ગ્લુટિનેટનું ઉત્પાદન કરે છે, અને એચ-એગ્ગ્લુટિનિન્સ બરછટ-દાણાવાળા કાંપનું ઉત્પાદન કરે છે.
3. ઇલેક્ટ્રોલાઇટ - આઇસોટોનિક NaCl સોલ્યુશન (0.9% સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન નિસ્યંદિત પાણીમાં તૈયાર કરવામાં આવે છે).
એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા કરવા માટે બે મુખ્ય પદ્ધતિઓ છે: કાચ પરની પ્રતિક્રિયા (કેટલીકવાર તેને સૂચક અથવા પ્લેટ પ્રતિક્રિયા કહેવાય છે) અને વિગતવાર પ્રતિક્રિયા (ટેસ્ટ ટ્યુબમાં)
કાચ પર એગ્લુટિનેશન રિએક્શન સેટ કરવું. ચરબી રહિત ગ્લાસ સ્લાઇડ પર સીરમના બે ટીપાં અને આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશનનું એક ટીપું નાખવામાં આવે છે. ડાયગ્નોસ્ટિક એગ્લુટિનેટિંગ સીરમ એક મંદનમાં લેવામાં આવે છે, જે તેના ટાઇટરના આધારે 1:10, 1:25, 1:50 અથવા 1:100 છે. અભ્યાસ હેઠળ સૂક્ષ્મજીવોની સંસ્કૃતિને સીરમના એક ટીપામાં અને લૂપનો ઉપયોગ કરીને આઇસોટોનિક સોલ્યુશનના એક ટીપામાં ઉમેરવામાં આવે છે અને સારી રીતે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે. સુક્ષ્મસજીવો સાથે સોડિયમ ક્લોરાઇડનું એક ટીપું એન્ટિજેન નિયંત્રણ છે, સૂક્ષ્મજીવો વિના સીરમનું ટીપું સીરમ નિયંત્રણ છે. તમે સીરમ સાથેના ડ્રોપમાંથી NaCl સાથેના ડ્રોપમાં સંસ્કૃતિને સ્થાનાંતરિત કરી શકતા નથી. પ્રતિક્રિયા ઓરડાના તાપમાને 1-3 મિનિટ માટે થાય છે. જો સીરમ કંટ્રોલ સ્પષ્ટ રહે છે, તો એન્ટિજેન કંટ્રોલમાં એકસમાન ટર્બિડિટી જોવા મળે છે, અને જ્યાં કલ્ચર સીરમ સાથે મિશ્રિત થાય છે ત્યાં ડ્રોપમાં એગ્લુટિનેટ ફ્લેક્સ દેખાય છે, તો પરિણામ હકારાત્મક માનવામાં આવે છે. જો સીરમ અને એન્ટિજેન સાથેના ડ્રોપમાં સમાન ટર્બિડિટી હોય, તો આ નકારાત્મક પરિણામ છે. શ્યામ પૃષ્ઠભૂમિ સામે પ્રતિક્રિયા વધુ સ્પષ્ટ રીતે દેખાય છે.
સીરમ
1. એન્ટિજેન નિયંત્રણ
2. સીરમ નિયંત્રણ
રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓ. ડાયગ્નોસ્ટિક્સમાં રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓનો ઉપયોગ ચેપી રોગો.
યોજના:
રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓના પ્રકાર.
સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ કરવા માટેની શરતો.
સીરમ જરૂરિયાતો.
સકારાત્મક અને નકારાત્મક પરિણામોનો ખ્યાલ.
મુખ્ય સામગ્રી:
રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓના પ્રકાર.
રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા – આ એન્ટિબોડી સાથે એન્ટિજેનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા છે, જે એન્ટિજેન્સના એપિટોપ્સ સાથે એન્ટિબોડી (પેરાટોપ) ના સક્રિય કેન્દ્રોની વિશિષ્ટ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે.
રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓનું સામાન્ય વર્ગીકરણ:
સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ - એન્ટિજેન્સ (Ag) અને એન્ટિબોડીઝ (Ig) વચ્ચેની પ્રતિક્રિયાઓ
ઇન વિટ્રો ;
સેલ્યુલર પ્રતિક્રિયાઓ રોગપ્રતિકારક કોશિકાઓની ભાગીદારી સાથે;
એલર્જી પરીક્ષણો - અતિસંવેદનશીલતાની તપાસ.
સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ: 1) વ્યાખ્યા, 2) તબક્કાઓ, 3) લક્ષ્યો, 4) સામાન્ય વર્ગીકરણ.
1) વ્યાખ્યા
સેરોલોજીકલ પદ્ધતિઓએન્ટિજેન-એન્ટિબોડી પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ કરીને સંશોધન (લેટિન સીરમ - સીરમ અને લોગો - શિક્ષણ)
2) તબક્કાઓ
ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના 2 તબક્કાઓ:
આઈ. ચોક્કસ (દ્રશ્યમાન) - ઝડપથી થાય છે, એન્ટિબોડીઝ તેમના અનુરૂપ એન્ટિજેન્સ સાથે જોડાય છે. આ તબક્કા દરમિયાન, એન્ટિજેન્સના નિર્ણાયક જૂથો (AG) અને એન્ટિબોડીઝના સક્રિય કેન્દ્રો (AT) ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે.
એજી + એટી સંકુલની રચનામાં સામેલ દળો છે:
પેન્ડન્ટ
વાન ડેર વાલ્સ
હાઇડ્રોજન બોન્ડ્સ.
કોઈ નહિ દૃશ્યમાન ફેરફારોઆ તબક્કામાં નથી. ઇલેક્ટ્રોન માઈક્રોસ્કોપી જાળીના સ્વરૂપમાં AG+AT સંકુલ દર્શાવે છે.
II. બિન-વિશિષ્ટ - ધીમે ધીમે થાય છે, પરિણામી એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી કોમ્પ્લેક્સ વધારાના બિન-વિશિષ્ટ પર્યાવરણીય પરિબળ સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે જેમાં પ્રતિક્રિયા થાય છે, અને આ આંખને દેખાય છે – ગ્લુઇંગ, વિસર્જન, અવક્ષેપ, વગેરે. ઇલેક્ટ્રોલાઇટની હાજરીમાં, ચાર્જ ઘટે છે. , દ્રાવ્યતા ઘટે છે, દૃશ્યમાન સમૂહ રચાય છે, અવક્ષેપ (એગ્લુટિનેટ).
3) લક્ષ્યો નક્કી કરો :
a) એન્ટિજેન ઓળખવા માટે (એન્ટિબોડી જાણીતા ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ):
સેરોલોજીકલ ઓળખ (પ્રજાતિની ઓળખ);
સેરોટાઇપિંગ (સેરોવરનું નિર્ધારણ) - તાણનું નિર્ધારણ;
પેથોલોજીકલ સામગ્રીમાં (ઝડપી ડાયગ્નોસ્ટિક્સ);
શુદ્ધ સંસ્કૃતિમાં:
b) એન્ટિબોડીઝ (Ig) શોધવા માટે (એન્ટિજેન જાણીતું છે-ડાયગ્નોસ્ટિકમ):
હાજરી (ગુણાત્મક પ્રતિક્રિયાઓ);
જથ્થાઓ (ટાઇટરમાં વધારો - "જોડી સીરમ" પદ્ધતિ).
4) સામાન્ય વર્ગીકરણ સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ :
a) સરળ (2-ઘટક: Ag+Ig):
આરએ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ (કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન સાથે);
PR વરસાદની પ્રતિક્રિયાઓ (દ્રાવ્ય એન્ટિજેન સાથે);
b) જટિલ (3-ઘટક: Ag+Ig+C);
c) ટેગનો ઉપયોગ કરીને.
એગ્લુટિનેશન અને વરસાદની પ્રતિક્રિયાઓના પ્રકારો
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા :
એગ્ગ્લુટિનેશન રિએક્શન (આરએ) એ શારીરિક દ્રાવણમાં એન્ટિજેન્સ સાથે એન્ટિજેન્સ (એરિથ્રોસાઇટ્સ, બેક્ટેરિયા) ના સસ્પેન્શનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા છે.
એકત્રીકરણ દરમિયાન, AT કણો એકસાથે ચોંટી જાય છે જેથી ફ્લોક્યુલન્ટ કાંપ બને છે.
પ્રતિક્રિયા નિષ્ક્રિય હિમેગ્ગ્લુટિનેશન(RPGA) એ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાનો એક પ્રકાર છે જેમાં એન્ટિબોડી અથવા એન્ટિજેન એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ (એટી અથવા એજી સાથે એરિથ્રોસાઇટ્સ તેમની સપાટી પર શોષાય છે) નો ઉપયોગ થાય છે.
લાલ રક્ત કોશિકાઓ આ પ્રતિક્રિયામાં નિષ્ક્રિય વાહક તરીકે કાર્ય કરે છે.
RPGA ના પરિણામોનું મૂલ્યાંકન નીચે મુજબ કરવામાં આવે છે:
- ખાતે હકારાત્મક પ્રતિક્રિયા નિષ્ક્રિય રીતે વળગી રહેલ લાલ રક્તકણો U- અથવા V- આકારના છિદ્રના તળિયાને સ્કૉલપેડ કિનારીઓ ("છત્રી") સાથે સમાન સ્તરમાં આવરી લે છે;
- ખાતે નકારાત્મક પ્રતિક્રિયા (એગ્ગ્લુટિનેશનની ગેરહાજરીમાં), લાલ રક્ત કોશિકાઓ છિદ્રના કેન્દ્રિય વિરામમાં એકઠા થાય છે, જે તીવ્ર રીતે વ્યાખ્યાયિત ધાર સાથે કોમ્પેક્ટ "બટન" બનાવે છે.
હેમેગ્ગ્લુટિનેશન ઇન્હિબિશન ટેસ્ટ (HAI) નો ઉપયોગ વાયરલ ચેપના નિદાનમાં થાય છે. કેટલાક વાયરસ તેમની સપાટી પર હેમાગ્ગ્લુટીનિન નામનું પ્રોટીન ધરાવે છે, જે લાલ રક્ત કોશિકાઓને એકસાથે ગુંદર કરે છે. ચોક્કસ એન્ટિવાયરલ એન્ટિબોડીઝનો ઉમેરો વાયરલ હેમાગ્ગ્લુટીનિનને અવરોધે છે - ત્યાં કોઈ હેમાગ્ગ્લુટિનેશન નથી.
પરોક્ષ હેમાગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (IRHA), અથવા કોમ્બ્સ પ્રતિક્રિયા, અપૂર્ણ એન્ટિબોડીઝ નક્કી કરવા માટે વપરાય છે. એન્ટિગ્લોબ્યુલિન સીરમ (એટી વિરૂદ્ધ માનવ Ig) નો ઉમેરો પ્રતિક્રિયાના પરિણામોને વધારે છે. આરએનજીએનો ઉપયોગ આરએચ પરિબળ નક્કી કરવા માટે થાય છે.
એગ્લુટિનેશન રિએક્શન (RA) કરવા માટે, ત્રણ ઘટકો જરૂરી છે:
1) એન્ટિજેન (એગ્ગ્લુટિનોજેન) એજી;
2) એન્ટિબોડી(એગ્ગ્લુટીનિન) એટી;
3)
ઇલેક્ટ્રોલાઇટ
(આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન).
Ag + AT + ઇલેક્ટ્રોલાઇટ = એગ્લુટિનેટ
એગ્ગ્લુટિનેશન (લેટિન એગ્ગ્લુટિનેટિયોમાંથી - ગ્લુઇંગ) - ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં એન્ટિબોડીઝ સાથે કોર્પસકલ્સ (બેક્ટેરિયા, લાલ રક્તકણો, વગેરે) નું ગ્લુઇંગ - સોડિયમ ક્લોરાઇડ.
RA એ એન્ટિબોડીઝ દ્વારા "એકસાથે ગુંદર ધરાવતા" કોર્પસકલ્સ (ઉદાહરણ તરીકે, બેક્ટેરિયા, લાલ રક્ત કોશિકાઓ) નો સમાવેશ કરીને ફ્લેક્સ અથવા કાંપના સ્વરૂપમાં પોતાને પ્રગટ કરે છે.
RA નો ઉપયોગ આ માટે થાય છે:
ડાયરેક્ટ માઇક્રોબાયલ એગ્લુટિનેશન રિએક્શન (RA).
આ પ્રતિક્રિયામાં, એન્ટિબોડીઝ (એગ્ગ્લુટીનિન્સ) કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સ (એગ્લુટીનોજેન્સ) ને સીધા જ એગ્લુટિનેટ કરે છે.
તેઓ સામાન્ય રીતે નિષ્ક્રિય સૂક્ષ્મજીવોના સસ્પેન્શન (માઇક્રોબાયલ એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા) દ્વારા રજૂ થાય છે.
સુક્ષ્મસજીવોનો પ્રકાર નક્કી કરવા માટે, ઉપયોગ કરોપ્રમાણભૂત ડાયગ્નોસ્ટિક એગ્લુટિનેટિંગ સીરમ (પ્રખ્યાત એ.ટી ).
સૌથી સામાન્ય લેમેલર (અંદાજે) અને વિસ્તૃત આરએ છે.
પ્લેટ RA કાચ પર મૂકવામાં આવે છે. તરીકે ઉપયોગ કરો પ્રવેગક પદ્ધતિએન્ટિબોડીઝની શોધ અથવા સુક્ષ્મસજીવોની ઓળખ.
ઘટકો:
1. પ્રમાણભૂત ડાયગ્નોસ્ટિક એગ્લુટિનેટિંગ સેરા (એટી);
2. દર્દી પાસેથી અભ્યાસ હેઠળ શુદ્ધ સંસ્કૃતિ;
3. ખારા ઉકેલ.
અભ્યાસ હેઠળની શુદ્ધ સંસ્કૃતિમાં, એન્ટિજેન્સ (AG) કણો (માઇક્રોબાયલ કોશિકાઓ, એરિથ્રોસાઇટ્સ અને અન્ય કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સ) ના સ્વરૂપમાં હોય છે, જે એન્ટિબોડીઝ અને અવક્ષેપ દ્વારા એકસાથે ગુંદર ધરાવતા હોય છે.
ઉદાહરણ:
સ્ટેજીંગ સૂચક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ (આરએ ) કાચ પર કોલિફોર્મ બેક્ટેરિયાને ઓળખવાના હેતુ માટે.
કાચની સ્લાઇડ પર ટીપાં લગાવો:
1
મરડો
;
2
-થું ડ્રોપ: - પેથોજેન્સ સામે એગ્લુટિનેટિંગ સીરમટાઇફોઈડ નો તાવ
;
(1-2 ડાયગ્નોસ્ટિક સેરા)
3
-th ડ્રોપ: - ખારા ઉકેલ (નિયંત્રણ).
દરેક ટીપામાં પરીક્ષણ કરેલ શુદ્ધ બેક્ટેરિયલ કલ્ચર ઉમેરો. જગાડવો.
પરિણામ
:
હકારાત્મક
- એગ્લુટિનેટ ફ્લેક્સની હાજરી,
નકારાત્મક
- એગ્લુટિનેટ ફ્લેક્સની ગેરહાજરી
નિષ્કર્ષ:અભ્યાસ કરેલ બેક્ટેરિયા ટાઇફોઇડ તાવના કારક એજન્ટ છે (એન્ટિજેન્સ નક્કી કરવામાં આવ્યા હતા).
દર્દીના સીરમ (સેરોલોજિકલ નિદાન) માં એટી નક્કી કરવા માટે, પ્રમાણભૂત માઇક્રોબાયલનિદાન , સસ્પેન્શન સમાવતીપ્રખ્યાત સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અથવા તેમના એન્ટિજેન્સએજી .
ABO રક્ત જૂથોનું નિર્ધારણ (હેમેગ્ગ્લુટિનેશન રિએક્શન (HRA)) – એગ્ગ્લુટિનેટ લાલ રક્ત કોશિકાઓ.
પ્રતિક્રિયા ઘટકો:
1. એજી (લાલ રક્તકણો) લોહીનું પરીક્ષણ કરે છે
2. એટી (એરિથ્રોટેસ્ટ્સ - ઝોલિકોન્સ)
ઝોલિકોનનો સમૂહ:
કોલિકોન એન્ટી-એ રીએજન્ટ (ગુલાબી)
કોલિકોન એન્ટિ-બી રીએજન્ટ (વાદળી)
રીએજન્ટ ત્સોલીક્લોન એન્ટિ-એવી (રંગહીન)
3. ઇલેક્ટ્રોલાઇટ (ખારા દ્રાવણ)
નિર્ધારણ તકનીક:
1
.
એન્ટિ-એ, એન્ટિ-બી અને એન્ટિ-એબી ઝોલિકોનનું એક ટીપું (0.1 મિલી) ટેબ્લેટના કૂવાઓ પર (નિયંત્રણ માટે) લાગુ પડે છે.
2.
રીએજન્ટના દરેક ટીપાની બાજુમાં, પરીક્ષણ કરવામાં આવતા લોહીનું એક નાનું (0.05-0.01 મિલી) ટીપું લાગુ કરવામાં આવે છે.
પછી વ્યક્તિગત સ્વચ્છ કાચની સળિયાનો ઉપયોગ કરીને ઝોલિકોનનું એક ટીપું લોહીના એક ટીપા સાથે મિશ્ર કરવામાં આવે છે.
3.
પ્રથમ 3-5 સેકન્ડ દરમિયાન જ્યારે પ્લેટ હળવેથી ખડકાય છે ત્યારે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા વિકસે છે.
ટીપાંને મિશ્રિત કર્યાના 2.5 - 3 મિનિટ પછી પ્રતિક્રિયાના પરિણામો ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે. કુવાઓમાં ડાબેથી જમણે એન્ટિ-એ, એન્ટિ-બી, એન્ટિ-એબી છે.
સકારાત્મક પરિણામ એ દાણાદાર કાંપ (એગ્ગ્લુટિનેટ) નો દેખાવ છે.
હકારાત્મક આરએ (+)
નકારાત્મક - કોઈ કાંપ નથી.
નકારાત્મક RA(-)
4.
પરિણામોનું વિશ્લેષણ.
ઓ(આઈ) α β - કોઈ એગ્લુટિનેશન નથી
એ(II) β – એન્ટિ-એ સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન
બી(III) α – એન્ટિ-બી સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન
એબી(IV)O – એન્ટિ-એ સાથે એગ્ગ્લુટિનેશન, એન્ટિ-બી સાથે
એગ્લુટિનેશનની યોજનાકીય રજૂઆત.
એજી એન્ટિજેન્સ ઓન એરિથ્રોસાઇટ્સ (શોધી શકાય તેવું) + એન્ટિબોડીએટી(ઝોલિકોન) ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ
ગોળીઓમાં એકત્રીકરણ માટે એકાઉન્ટિંગ
વરસાદની પ્રતિક્રિયા:
અવક્ષેપની પ્રતિક્રિયા એ શારીરિક દ્રાવણમાં એન્ટિજેન સાથે દ્રાવ્ય સ્થિતિમાં એન્ટિજેનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા છે.
વરસાદ દરમિયાન, મેક્રોમોલેક્યુલર રોગપ્રતિકારક સંકુલ રચાય છે, જે પારદર્શક કોલોઇડલ દ્રાવણના અપારદર્શક સસ્પેન્શન અથવા અવક્ષેપમાં સંક્રમણ દ્વારા પ્રગટ થાય છે.
બંને રીએજન્ટ્સની માત્રા સખત રીતે વ્યાખ્યાયિત પ્રમાણમાં હોવી જોઈએ, કારણ કે તેમાંથી એકની વધુ માત્રા પરિણામ ઘટાડે છે.
અસ્તિત્વમાં છે વિવિધ રીતેવરસાદની પ્રતિક્રિયાનું સ્ટેજીંગ.
1. રીંગ વરસાદની પ્રતિક્રિયા નાના વ્યાસ સાથે વરસાદની નળીઓમાં કરવામાં આવે છે. રોગપ્રતિકારક સીરમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે અને દ્રાવ્ય એન્ટિજેન કાળજીપૂર્વક સ્તરવાળી હોય છે. AG અને AT પરમાણુઓની થર્મલ હિલચાલને કારણે ભળી જાય છે અને તેઓ ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. મુ હકારાત્મક પરિણામબે ઉકેલોની સીમા પર અપારદર્શક અવક્ષેપ સ્વરૂપોની રિંગ.
2. ઓચટરલોની ડબલ ઇમ્યુનોડિફ્યુઝન પ્રતિક્રિયા એગર જેલમાં કરવામાં આવે છે, જે કુવાઓમાં યોજના અનુસાર એજી સોલ્યુશન અથવા એટી સોલ્યુશન ઉમેરવામાં આવે છે. AG અને AT એકબીજા તરફ જેલમાં ફેલાય છે અને, જો પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક હોય, તો રોગપ્રતિકારક સંકુલ બનાવે છે જે વરસાદની રેખાઓ તરીકે દેખાય છે.
વરસાદની પ્રતિક્રિયા -આ રચના છેઅને દ્રાવ્ય પરમાણુ એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલનું અવક્ષેપ તરીકે ઓળખાતા વાદળ તરીકે અવક્ષેપ. તે એન્ટિજેન્સ અને એન્ટિબોડીઝને સમકક્ષ જથ્થામાં મિશ્રણ કરીને રચાય છે.
આરએ ઘટકો:
પ્રીસીપીટીટીંગ સીરમ (જાણીતું એટી-પ્રેસીપીટીન);
ટેસ્ટ સીરમ (અજાણ્યા precipitinogen એન્ટિજેન);
ભૌતિક ઉકેલ.
વરસાદની પ્રતિક્રિયા કાં તો ખાસ સાંકડી ટેસ્ટ ટ્યુબ (રિંગ રેસિપિટેશન રિએક્શન) અથવા જેલ, પોષક માધ્યમ વગેરેમાં પેટ્રી ડીશમાં કરવામાં આવે છે.
રિંગ-પ્રિસિપિટેશન પ્રતિક્રિયા
પ્રતિક્રિયા પરિણામોનું નિવેદન અને રેકોર્ડિંગરિંગ વરસાદપેથોજેન શોધ માટે એન્થ્રેક્સ(એસ્કોલી પ્રતિક્રિયા).
સ્ટેજીંગ .
1. અભ્યાસ હેઠળની સામગ્રી (ચામડું, ઊન, ફીટ, બરછટ, કાપડ, માંસ, માટી, પ્રાણીઓની મળ વગેરે) 5-45 મિનિટ માટે ખારા દ્રાવણમાં ઉકાળવામાં આવે છે. આઇસોટોનિક અર્ક (અર્ક) મેળવવા માટે. ફિલ્ટર કરેલ.
2. પ્રીસિપિટેટિંગ એન્ટિ-એન્થ્રેક્સ સીરમ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં રેડવામાં આવે છે.
3. કાળજીપૂર્વક તેના પર પરીક્ષણ સામગ્રી (અર્ક) મૂકો.
નામું .
આગામી 10 મિનિટમાં. સકારાત્મક કેસોમાં, સીરમ અને અર્ક (રિંગ વરસાદ) વચ્ચેના ઇન્ટરફેસ પર ટર્બિડિટીની રિંગ દેખાય છે. Ascoli પ્રતિક્રિયા ખૂબ જ સંવેદનશીલ અને ચોક્કસ છે
તેની મદદથી, એન્થ્રેક્સથી સંક્રમિત સામગ્રીને ઝડપથી ઓળખવી શક્ય છે.
અગરમાં વરસાદની પ્રતિક્રિયા
નિવેદન અને પરિણામોનું રેકોર્ડિંગઅગરમાં વરસાદની પ્રતિક્રિયાઓકોરીનેબેક્ટેરિયા (ડિપ્થેરિયાના કારક એજન્ટો) ની ઝેરી અસર નક્કી કરવા માટે
સ્ટેજીંગ
પેટ્રી ડીશમાં ફોસ્ફેટ પેપ્ટોન અગર પર મૂકવામાં આવે છે.
1. કપની મધ્યમાં જંતુરહિત ફિલ્ટર પેપરની એક પટ્ટી મૂકો.એન્ટિટોક્સિક સીરમ.
2. સૂકાયા પછી, સ્ટ્રીપની ધારથી 1 સે.મી.ના અંતરે, 10 મીમીના વ્યાસવાળી તકતીઓ સીડ કરવામાં આવે છે.પસંદ કરેલ પાક.
એક કપમાં તમે 3 થી 10 પાક વાવી શકો છો, જેમાંથી એકનિયંત્રણ, જાણવું જ જોઈએઝેરી.
પાકને થર્મોસ્ટેટમાં મૂકવામાં આવે છે.
નામું
વિશ્લેષણ 24-48-72 કલાક પછી હાથ ધરવામાં આવે છે.
હકારાત્મક પરિણામ - (સંસ્કૃતિઝેરી) - કાગળની પટ્ટીથી અમુક અંતરે દેખાય છેઅવક્ષેપ રેખાઓ, « ટેન્ડ્રીલ તીરો", જે પ્રસારિત પ્રકાશમાં સ્પષ્ટપણે દેખાય છે.
ડિપ્થેરિયા બેસિલીની ઝેરી અસર નક્કી કરવા માટે આકૃતિ અગરમાં વરસાદની પ્રતિક્રિયા દર્શાવે છે. મધ્યમ સંસ્કૃતિઓ "એરો-ટેન્ડ્રીલ્સ" બનાવતી નથી; આ ટોક્સિકોજેનિક પેથોજેન્સ નથી.
ડિપ્થેરિયાના કારક એજન્ટની જાતો ઝેરી (એક્સોટોક્સિન ઉત્પન્ન કરતી) અને બિન-ટોક્સિજેનિક હોઈ શકે છે. એક્ઝોટોક્સિનની રચના એક્ઝોટોક્સિનની રચનાને એન્કોડ કરતા ઝેર જનીન વહન કરતા પ્રોફેજના બેક્ટેરિયામાં હાજરી પર આધારિત છે.
માંદગીના કિસ્સામાં, તમામ ડિપ્થેરિયા પેથોજેન્સની ઝેરી અસર માટે પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે - અગરમાં વરસાદની પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ કરીને ડિપ્થેરિયા એક્સોટોક્સિનનું ઉત્પાદન
જટિલ સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ ( 3-ઘટક: Ag+Ig+C):
પૂરક ફિક્સેશન પ્રતિક્રિયા (CFR).
પ્રતિક્રિયા બે તબક્કામાં હાથ ધરવામાં આવે છે.
પ્રથમ તબક્કે, એટી એન્ટિજેન અને પૂરક સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે; બીજા તબક્કે, એક સૂચક ઉમેરવામાં આવે છે - હેમોલિટીક સિસ્ટમ (એરિથ્રોસાઇટ્સ અને એન્ટિ-એરિથ્રોસાઇટ સીરમનું મિશ્રણ).
જો પરિણામ હકારાત્મક હોય, તો પ્રથમ તબક્કે, એન્ટિબોડીઝ એન્ટિજેન્સ સાથે રોગપ્રતિકારક સંકુલ બનાવે છે, જે પ્રતિક્રિયા મિશ્રણના પૂરકને જોડે છે.
આ કિસ્સામાં, બીજા તબક્કે ઉમેરવામાં આવેલા હેમોલિટીક સિસ્ટમના લાલ રક્ત કોશિકાઓનો નાશ થતો નથી.
નહિંતર, અનબાઉન્ડ પૂરક સૂચક લાલ રક્ત કોશિકાઓના લિસિસનું કારણ બને છે.
તેને હાથ ધરવા માટે, પાંચ ઘટકોની જરૂર છે: એજી, એટી અને પૂરક (પ્રથમ સિસ્ટમ), ઘેટાં એરિથ્રોસાઇટ્સ અને હેમોલિટીક સીરમ (બીજી સિસ્ટમ) (ફિગ. 1).
પ્રતિક્રિયા બે તબક્કામાં થાય છે (ફિગ. 3).
પ્રથમ તબક્કો - દરમિયાન એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા ફરજિયાત ભાગીદારીપૂરક
બીજું - સૂચક હેમોલિટીક સિસ્ટમ (ઘેટાંના લાલ રક્ત કોશિકાઓ અને હેમોલિટીક સીરમ) નો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયા પરિણામોની ઓળખ. હેમોલિટીક સીરમ દ્વારા લાલ રક્ત કોશિકાઓનો વિનાશ ત્યારે જ થાય છે જો હેમોલિટીક સિસ્ટમમાં પૂરક ઉમેરવામાં આવે. જો પૂરક અગાઉ એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલ પર શોષાય છે, તો પછી એરિથ્રોસાઇટ્સનું હેમોલિસિસ થતું નથી (ફિગ.).
અનુભવ પરિણામ
આકારણી (ફિગ. 2), તમામ ટ્યુબમાં હેમોલિસિસની હાજરી અથવા ગેરહાજરીની નોંધ લે છે. જ્યારે હેમોલિસિસ સંપૂર્ણપણે વિલંબિત થાય છે ત્યારે પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક માનવામાં આવે છે, જ્યારે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં પ્રવાહી રંગહીન હોય છે અને લાલ રક્ત કોશિકાઓ તળિયે સ્થિર થાય છે, નકારાત્મક - જ્યારે લાલ રક્ત કોશિકાઓ સંપૂર્ણપણે લીસ થઈ જાય છે, જ્યારે પ્રવાહી તીવ્ર રંગીન હોય છે ("વાર્નિશ" રક્ત ).
હેમોલિસિસ વિલંબની ડિગ્રીનું મૂલ્યાંકન પ્રવાહીના રંગની તીવ્રતા અને તળિયે (++++, +++, ++, +) લાલ રક્તકણોના કદના આધારે કરવામાં આવે છે.
ચોખા. 4. RSC નું નિવેદન અને પરિણામ.
નિષ્કર્ષ:ટેસ્ટ સીરમમાં એન્ટિબોડીઝ મળી આવી હતી.
RSK તમને વાયરસના સમાન સેરોટાઇપના કોઈપણ તાણ માટે એન્ટિબોડીઝ શોધવાની મંજૂરી આપે છે.
ડાયગ્નોસ્ટિક મૂલ્યતે છે:
જોડી કરેલ સેરામાં એન્ટિબોડી ટાઇટરમાં ચાર ગણો વધારો (ઈન્ફલ્યુએન્ઝા રોગચાળા દરમિયાન);
લાક્ષણિક ક્લિનિકલ ચિત્ર ધરાવતા દર્દીઓના લોહીના સીરમમાં બે ગણો વધારો.
ટેગનો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયાઓ :
આ પદ્ધતિઓ અત્યંત સંવેદનશીલ છે. રંગો, કિરણોત્સર્ગી આઇસોટોપ્સ, ઉત્સેચકો વગેરેનો ઉપયોગ એન્ટિજેન્સ અથવા એન્ટિબોડીઝ માટે લેબલ તરીકે થાય છે.
RIF - ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ પ્રતિક્રિયા
ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ પ્રતિક્રિયા એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલના પ્રકાશ સંકેત પર આધારિત છે
લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે.
આધુનિક પ્રયોગશાળા પરીક્ષણ કે જે રક્તમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ અથવા ચોક્કસ રોગોના એન્ટિજેન્સની શોધ કરે છે જેથી માત્ર ઇટીઓલોજી જ નહીં, પણ રોગના તબક્કાને પણ ઓળખી શકાય.
ELISA પરિણામો ગુણાત્મક અને માત્રાત્મક રીતે આપી શકાય છે.
હાલમાં, ELISA નો ઉપયોગ નીચેની પરિસ્થિતિઓમાં થાય છે:
1) કોઈપણ ચેપી રોગ માટે ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝની શોધ કરો;
2) કોઈપણ રોગોના એન્ટિજેન્સની શોધ (ચેપી, વેનેરોલોજીકલ);
3) સંશોધન હોર્મોનલ સ્થિતિદર્દી
4) ગાંઠ માર્કર્સ માટે પરીક્ષા;
5) સ્વયંપ્રતિરક્ષા રોગોની હાજરી માટે પરીક્ષા.
આકૃતિમાં, ઘન-તબક્કા ELISA - જાણીતા એન્ટિજેન્સ (ડાબી બાજુએ) પ્લેટના કૂવા પર શોષાય છે, (જમણી બાજુએ) પ્લેટના કુવાઓ પર જાણીતા એન્ટિજેન્સ
ELISA પદ્ધતિના ફાયદા:
1) ELISA પદ્ધતિની ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા અને સંવેદનશીલતા (90% થી વધુ).
2) રોગને નિર્ધારિત કરવાની અને પ્રક્રિયાની ગતિશીલતાને ટ્રૅક કરવાની ક્ષમતા, એટલે કે, વિવિધ સમયગાળામાં એન્ટિબોડીઝની સંખ્યાની તુલના કરવી.
3) કોઈપણ તબીબી સંસ્થામાં ELISA ડાયગ્નોસ્ટિક્સની ઉપલબ્ધતા.
સંબંધિત ગેરલાભ: રોગપ્રતિકારક પ્રતિભાવ (એન્ટિબોડીઝ) ની શોધ, પરંતુ પેથોજેન પોતે જ નહીં, ટેગ એન્ઝાઇમ સાથે જોડાયેલું છે.
ELISA ટેસ્ટ (સામાન્ય મિકેનિઝમ):
એન્ઝાઇમ ઇમ્યુનોસેનો આધાર રોગપ્રતિકારક સંકુલની રચના સાથે એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીની રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયા છે: એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી, જે એન્ટિબોડીઝની સપાટી પર ચોક્કસ ગુણની એન્ઝાઇમેટિક પ્રવૃત્તિમાં ફેરફારમાં પરિણમે છે.
પ્રતિક્રિયા ઘટકો:
1. AG(AT) જાણીતા - ટેબ્લેટના કૂવા પર.
2. AT (AG) નો અભ્યાસ કરવામાં આવી રહ્યો છે.
3. એન્ઝાઇમ સાથે AT, AT(AG)-AG(AT) સંકુલ માટે વિશિષ્ટ
4. ક્રોમોજેનિક સબસ્ટ્રેટ જે એન્ઝાઇમ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે
5. સ્ટોપ સોલ્યુશન
ELISA ના મુખ્ય તબક્કાઓ
1. પ્લેટના કુવાઓની સપાટી પર ચોક્કસ પેથોજેનનું શુદ્ધ એન્ટિજેન છે. તેઓ ઉમેરે છે જૈવિક સામગ્રીદર્દી, આ એન્ટિજેન અને ઇચ્છિત એન્ટિબોડી (ઇમ્યુનોગ્લોબ્યુલિન) વચ્ચે ચોક્કસ પ્રતિક્રિયા થાય છે. એક સંકુલ રચાય છે.
2. એક સંયોજક ઉમેરવામાં આવે છે - એન્ઝાઇમ સાથે AT. સંયોજક પ્રથમ તબક્કાના AT-AG સંકુલ માટે વિશિષ્ટ છે. એન્ઝાઇમ સક્રિય થાય છે.
3. સબસ્ટ્રેટ ઉમેરવામાં આવે છે અને સક્રિય એન્ઝાઇમ તેની સાથે પ્રતિક્રિયા આપે છે, ઉકેલના રંગહીન રંગને બદલીને.
4. એન્ઝાઇમ-સબસ્ટ્રેટ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાને રોકવા માટે સ્ટોપ સોલ્યુશન ઉમેરવામાં આવે છે.
નામું.
હકારાત્મક પરિણામ - ફેરફારરંગો, ચિત્રમાં - પીળો.
ઇમ્યુનોક્રોમેટોગ્રાફિક વિશ્લેષણ
ઇમ્યુનોક્રોમેટોગ્રાફિક વિશ્લેષણ પદ્ધતિ (ICA, ઝડપી પરીક્ષણો) એ ઉચ્ચ-ગુણવત્તાવાળી પ્રારંભિક સ્ક્રીનીંગ પદ્ધતિ છે જે તમને ઝડપથી, થોડીવારમાં, કોઈપણ પરિસ્થિતિમાં વિશ્લેષણ કરવા દે છે, જેમાં સમાવેશ થાય છે. "ક્ષેત્ર".
ICA ના ફાયદાઓમાં શામેલ છે:
ઝડપ અને ઉપયોગમાં સરળતા;
નાના નમૂનાની માત્રા, નમૂનાની તૈયારીનો અભાવ;
ઉત્પાદક અને ઉપભોક્તા માટે સસ્તીતા;
મોટા જથ્થામાં પરીક્ષણો ઉત્પન્ન કરવાની શક્યતા;
પરિણામના વાંચન અને અર્થઘટનની સરળતા;
ઉચ્ચ સંવેદનશીલતા અને પ્રજનનક્ષમતા;
માત્રાત્મક નિર્ધારણની શક્યતા;
કમ્પ્યુટર સાથે સુસંગત પોર્ટેબલ રીડર્સનો ઉપયોગ કરવાની શક્યતા;
બહુ-વિશ્લેષણની શક્યતા.
ઘટકો (ટેસ્ટ સ્ટ્રીપ પર લાગુ):
1. કોલોઇડલ ગોલ્ડ લેબલ સાથેનું જોડાણ શોધાયેલ એન્ટિજેન માટે વિશિષ્ટ છે.
2. AT ટેસ્ટ લાઇન - AT-AG કોમ્પ્લેક્સ માટે વિશિષ્ટ
3. કંટ્રોલ લાઇનના એબ્સ કન્જુગેટ માટે વિશિષ્ટ છે.
ICA સેટિંગ:
1. સ્ટ્રીપના નિયુક્ત પ્રારંભિક વિસ્તારમાં નમૂના લાગુ કરો.
2. પરીક્ષણ અને નિયંત્રણ રેખાઓના સ્થાને રંગીન પટ્ટાઓના દેખાવના સ્વરૂપમાં પરિણામ મેળવવું.
નામું
સકારાત્મક - જ્યારે ટેસ્ટ લાઇન સ્ટેઇન્ડ હોય.
નકારાત્મક - જો ટેસ્ટ લાઇન પર કોઈ સ્ટેનિંગ નથી.
અમાન્ય - જો કંટ્રોલ લાઇન સ્ટેઇન્ડ ન હોય.
ICA ની સામાન્ય પદ્ધતિ:
1. નમૂનાને પ્રારંભિક ક્ષેત્ર (સેમ્પલ પેડ) પર રજૂ કરવામાં આવે છે અને તે સંયોજક (રંગીન લેબલ સાથેનું ચોક્કસ શરીર) સાથે સંકળાયેલું છે, જે સંયોજક પેડ પર સ્થિત છે. પરિણામે, એક રંગીન સંકુલ રચાય છે.
2. પરિણામી રંગીન રોગપ્રતિકારક સંકુલ નાઈટ્રોસેલ્યુલોઝ મેમ્બ્રેન સાથે રુધિરકેશિકા દળોની ક્રિયા હેઠળ આગળ વધે છે.અને ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છેએટી ટેસ્ટ લાઇન સાથે.પરિણામ એ એક રંગીન ગુલાબી-લાલ પટ્ટી છે.
3. AT (સંયુક્ત) પરીક્ષણ કરેલ બેન્ડ પર બંધાયેલ નથીઆગળ વધે છે અને નિયંત્રણ રેખા સુધી પહોંચે છે, નિયંત્રણ રેખાના AT સાથે વાતચીત કરે છે.પરિણામે, બીજી રંગીન પટ્ટી દેખાય છે.જો વિશ્લેષણ યોગ્ય રીતે હાથ ધરવામાં આવે તો, જૈવિક પ્રવાહીના નમૂનામાં પરીક્ષણ એન્ટિજેન (એન્ટિબોડી) ની હાજરીને ધ્યાનમાં લીધા વિના, નિયંત્રણ રેખા હંમેશા દેખાવી જોઈએ.
2. સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓ કરવા માટેની શરતો.
1. હોમોલોગસની હાજરી - એકબીજાના એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીને અનુરૂપ.
2. સ્વચ્છ, સૂકી વાનગીઓ.
3. દવાઓનો ચોક્કસ ગુણોત્તર (મોટા ભાગે સમાન).
4. ઇલેક્ટ્રોલાઇટની ફરજિયાત હાજરી (આઇસોટોનિક NaCl સોલ્યુશન).
5. pH તટસ્થ અથવા સહેજ આલ્કલાઇનની નજીક.
6. તાપમાન +37°C અથવા ઓરડાનું તાપમાન (જરૂરી હકારાત્મક).
7. એન્ટિજેન નિયંત્રણ અને સીરમ (એન્ટિબોડી) નિયંત્રણ હાથ ધરવામાં આવે છે.
3 સીરમ જરૂરિયાતો
સીરમ કોષોના કોઈપણ મિશ્રણ વિના સંપૂર્ણપણે પારદર્શક હોવું જોઈએ.
તેઓ સામાન્ય રીતે બીમારીના 2જા અઠવાડિયામાં પ્રાપ્ત કરે છે, જ્યારે એન્ટિબોડીઝ પહેલેથી જ ઉપલબ્ધ હોય છે.
ખાલી પેટ પર અથવા જમ્યાના 6 કલાક પછી લોહી 3-5 મિલીલીટરની માત્રામાં લેવામાં આવે છે.
સીરમ મેળવવા માટે, લોહીને ઓરડાના તાપમાને 1 કલાક માટે છોડી દેવામાં આવે છે અથવા સેન્ટ્રીફ્યુજ કરવામાં આવે છે. સીરમ ખૂબ જ કાળજીપૂર્વક ચૂસવામાં આવે છે જેથી રચાયેલા તત્વોને પકડવામાં ન આવે.
રોગપ્રતિકારક સીરમ લોકો અથવા પ્રાણીઓ (સામાન્ય રીતે સસલા અને ઘોડા) ના લોહીમાંથી મેળવવામાં આવે છે, જે સંબંધિત એન્ટિજેન (રસી) સાથે ચોક્કસ યોજના અનુસાર રસીકરણ કરવામાં આવે છે. સીરમ સામાન્ય રીતે ઉત્પાદનમાં તૈયાર કરવામાં આવે છે.
4. હકારાત્મક અને નકારાત્મક પરિણામોનો ખ્યાલ.
આરએ.
સકારાત્મક પ્રતિક્રિયા સાથે, નિષ્ક્રિય રીતે ગુંદર ધરાવતા લાલ રક્ત કોશિકાઓ છિદ્રના તળિયે સ્કેલોપ ધાર ("છત્રી") સાથે સમાન સ્તરમાં આવરી લે છે; એગ્ગ્લુટિનેશનની ગેરહાજરીમાં, લાલ રક્ત કોશિકાઓ છિદ્રના મધ્ય ભાગમાં એકઠા થાય છે, જે તીવ્ર રીતે વ્યાખ્યાયિત ધાર સાથે કોમ્પેક્ટ "બટન" બનાવે છે (ઉપરના ચિત્રો જુઓ).
આર.પી.
જો પરિણામ હકારાત્મક છે, તો બે ઉકેલોના ઇન્ટરફેસ પર દૂધિયું રિંગ રચાય છે (ઉપરના ચિત્રો જુઓ).
એલિસા.
સોલ્યુશનના રંગમાં ફેરફાર હકારાત્મક પ્રતિક્રિયા સાથે થાય છે.
આરએસકે.
વિલંબિત હેમોલિસિસ - પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક છે; જો પૂરક મુક્ત હોય, તો હેમોલિસિસ જોવા મળે છે - પ્રતિક્રિયા નકારાત્મક છે(ઉપર ચિત્રો જુઓ).
વાસરમેન પ્રતિક્રિયાના પરિણામો:
એ - હેમોલિસિસનો સંપૂર્ણ વિલંબ (+ + ++);
b - હેમોલિસિસમાં ઉચ્ચારણ વિલંબ (+ ++);
c - હેમોલિસિસના આંશિક વિલંબ (++);
ડી - હેમોલિસિસમાં થોડો વિલંબ (+);
ડી - સંપૂર્ણ હેમોલિસિસ (-).
હેમોલિસિસના આંશિક, ઉચ્ચારણ અને સંપૂર્ણ વિલંબ સાથે પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક છે, જે ટ્યુબની સામગ્રીને આછા ગુલાબીથી તેજસ્વી લાલ સુધીના સ્ટેનિંગની ડિગ્રી દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે; બિન-હેમોલાઇઝ્ડ એરિથ્રોસાઇટ્સ પછીથી લાલ અવક્ષેપ બનાવે છે.
1. સામગ્રીનો અભ્યાસ કરો
વિડિઓ પર 3 નોંધો બનાવો
માઇક્રોબાયોલોજીમાં
"એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા અને તેના પ્રકારો (RA)"
યોજના:
1. પરિચય………………………………………………………………………………..3
2. કાચ પર આરએ……………………………………………………………………………….4
3. ટેસ્ટ ટ્યુબ આરએ……………………………………………………………………………….5
4. વપરાયેલ સાહિત્ય…………………………………………………………………..7
1. પરિચય.
માઇક્રોબાયલ એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પ્રકૃતિમાં સખત રીતે વિશિષ્ટ છે અને પ્રાણીના શરીરમાં પેથોજેન અને તેના ઝેરને તટસ્થ કરવાનો હેતુ છે. વિટ્રોમાં એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા, ચોક્કસ પરિસ્થિતિઓમાં, દૃશ્યમાન ઘટનાઓ (એગ્લુટિનેશન, અવક્ષેપ, રોગપ્રતિકારક લિસિસ) સાથે હોય છે, જે વ્યવહારિક હેતુઓ માટે, સેરોલોજીકલ (લેટિન સીરમમાંથી) તરીકે ઓળખાતી એજી-એટી પ્રતિક્રિયાઓનો ઉપયોગ કરવાની મંજૂરી આપે છે. બાયોફેક્ટરીઝ જાણીતા ચોક્કસ પ્રકૃતિના એન્ટિજેન્સ અને રોગપ્રતિકારક સેરા (એન્ટીબોડીઝ) ઉત્પન્ન કરે છે (ડાયગ્નોસ્ટિક). આવા સેરાની મદદથી, સીરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓમાં અજાણ્યા સુક્ષ્મસજીવોને ઓળખી શકાય છે અથવા, જાણીતા એન્ટિજેનનો ઉપયોગ કરીને, પેથોજેનની રજૂઆતના પ્રતિભાવમાં શરીરમાં સંશ્લેષિત એન્ટિબોડીઝ શોધી શકાય છે, અને આ રીતે નિદાન કરી શકાય છે (સેરોલોજિકલ નિદાન ). વધુમાં, રસીકરણ અથવા ચેપી રોગ પછી રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાની તીવ્રતાનું મૂલ્યાંકન કરવા માટે સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓનો ઉપયોગ કરી શકાય છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાઓ, જેમ કે પરોક્ષ એગ્લુટિનેશન અને કોમ્બ્સ, એન્ટિબોડીઝ સાથે કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સની ઇન વિટ્રો ક્રિયાપ્રતિક્રિયા અને પરિણામી સંકુલની અવક્ષેપ કરવાની ક્ષમતા પર આધારિત છે. બેક્ટેરિયલ કોશિકાઓ અથવા દ્રાવ્ય એન્ટિજેન્સ સુક્ષ્મસજીવોમાંથી કાઢવામાં આવે છે અને વાહક કોર્પસ્કલ્સ પર શોષાય છે: લાલ રક્ત કોશિકાઓ, લેટેક્ષ કણો, વગેરેનો ઉપયોગ કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સ તરીકે થાય છે.
કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સના એન્ટિજેનિક નિર્ધારકો ખાસ કરીને હોમોલોગસ એન્ટિબોડીઝ (વિશિષ્ટ, પ્રતિક્રિયાનો અદ્રશ્ય તબક્કો) સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે અને પછી એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલ નરી આંખે દેખાતા મોટા સમૂહ બનાવે છે, જે અવક્ષેપ કરે છે - એક એગ્લુટિનેટ (બિન-વિશિષ્ટ, પ્રતિક્રિયાનો દૃશ્યમાન તબક્કો). ). સૂક્ષ્મજીવાણુઓના ફ્લેગલેટ-મુક્ત સ્વરૂપો (બ્રુસેલે) દાણાદાર એગ્લુટીનન્ટ્સ ઉત્પન્ન કરે છે, જ્યારે ફ્લેગલેટેડ સ્વરૂપો (એસ્ચેરીચિયા, સાલ્મોનેલા) મોટા-કપાસના એગ્લુટિનેંટ ઉત્પન્ન કરે છે, જે ઊંધી છત્રીના રૂપમાં ટેસ્ટ ટ્યુબના તળિયે સ્થિર થાય છે અને જ્યારે હલાવવામાં આવે ત્યારે સરળતાથી તૂટી જાય છે. એન્ટિજેન્સ અને એન્ટિબોડીઝ માત્ર ઇલેક્ટ્રોલાઇટ (0.8% સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન) ની હાજરીમાં ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. પ્રતિક્રિયાનો કોર્સ ઇલેક્ટ્રોલાઇટમાં મીઠાની સાંદ્રતા, સસ્પેન્શનમાં માઇક્રોબાયલ કોષોની સંખ્યા, સીરમ સાંદ્રતા, પીએચ, તાપમાન અને અન્ય પરિબળો દ્વારા પ્રભાવિત થાય છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (ra).
ચોક્કસ એગ્લુટિનેશન છે, જે એન્ટિજેનની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા પર આધારિત છે સાથેહોમોલોગસ એન્ટિબોડી , પ્રાણીના શરીરમાં સમાયેલ છે જેમાં આ એન્ટિજેન દાખલ કરવામાં આવ્યું હતું (ઇમ્યુનોએગ્ગ્લુટિનેશન); બિન-વિશિષ્ટ (રાસાયણિક), પર્યાવરણના pH માં ફેરફાર, ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની સાંદ્રતાથી ઉદ્ભવતા; સ્વયંસ્ફુરિત, જે જોવા મળે છે જ્યારે બેક્ટેરિયા (આર-સ્વરૂપમાં) શારીરિક દ્રાવણમાં સસ્પેન્ડ કરવામાં આવે છે અને જ્યારે ગરમ થાય છે, જે બેક્ટેરિયલ કોષની કોલોઇડલ સ્થિતિમાં ફેરફાર સાથે સંકળાયેલ છે. એન્ટિજેન , આરએમાં સામેલ એગ્ગ્લુટિનોજેન કહેવાય છે, એન્ટિબોડીને એગ્ગ્લુટીનિન કહેવામાં આવે છે, અને પરિણામી અવક્ષેપને એગ્લુટિનેટ કહેવામાં આવે છે. જ્યારે એગ્લુટિનેટ રચાય છે, ત્યારે એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝનો જથ્થાત્મક ગુણોત્તર મહત્વપૂર્ણ છે (શ્રેષ્ઠ ઘટના). એન્ટિબોડીઝની વધારે અથવા ઉણપ સાથે, વિલંબ થાય છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન રિએક્શન (RA) એ માઇક્રોબાયોલોજીકલ પ્રેક્ટિસમાં વપરાતી પ્રથમ રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઓમાંની એક છે. પ્રથમ વખત (1895), એફ. વિડાલે ટાઇફોઇડ તાવનું નિદાન કરવા માટે આરએનો ઉપયોગ કર્યો. પાછળથી (1897), એ. રાઈટે મનુષ્યોમાં બ્રુસેલોસિસના નિદાન માટે સમાન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ કર્યો. આરએને મરઘીઓમાં પુલોરોસિસ, લેપ્ટોસ્પાયરોસિસ, ઘોડીના ચેપી ગર્ભપાત, તેમજ જાણીતા એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સીરમનો ઉપયોગ કરીને અજાણ્યા માઇક્રોબાયલ કલ્ચર ટાઈપ કરવા માટે પણ એપ્લિકેશન મળી છે. આરએ અત્યંત સંવેદનશીલ છે; તેનો ઉપયોગ 1 મિલીમાં 0.01 μg એન્ટિબોડી પ્રોટીન નાઇટ્રોજન શોધવા માટે થઈ શકે છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના કેટલાક પ્રકારો વિકસાવવામાં આવ્યા છે, જે પદ્ધતિસરના અમલીકરણ અને અભ્યાસના હેતુમાં અલગ છે.
2. કાચ પર રા.
RA ના આ પ્રકારમાં, પરીક્ષણ વિષયો કાં તો સીરમ અથવા એન્ટિજેન હોઈ શકે છે, પરંતુ મોટાભાગે આ વિકલ્પનો ઉપયોગ સુક્ષ્મસજીવોને ઓળખવા માટે થાય છે.
1. સુક્ષ્મસજીવો (m/o) ને ઓળખવા માટે, જાણીતા એગ્ગ્લુટિનેટિંગ સીરમનું એક ટીપું, ઉદાહરણ તરીકે સાલ્મોનેલા સીરમ, અને શારીરિક દ્રાવણનું એક ટીપું (નિયંત્રણ) ચરબી રહિત કાચની સ્લાઈડ પર અલગથી લાગુ કરવામાં આવે છે. પછી, બેક્ટેરિયોલોજિકલ લૂપનો ઉપયોગ કરીને, અભ્યાસ કરેલ સંસ્કૃતિના બેક્ટેરિયલ સમૂહને પેટ્રી ડીશની વસાહતમાંથી અથવા ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ત્રાંસી MPA ની સપાટી પરથી લેવામાં આવે છે અને એક સમાન સસ્પેન્શન પ્રાપ્ત ન થાય ત્યાં સુધી રોગપ્રતિકારક સીરમ અને શારીરિક દ્રાવણમાં અલગથી સસ્પેન્ડ કરવામાં આવે છે. . પરિણામ 2...4 મિનિટ પછી ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે.
પરિણામો માટે એકાઉન્ટિંગ: નિયંત્રણ નમૂનામાં કોઈ ફેરફાર થવો જોઈએ નહીં. જો બેક્ટેરિયલ સંસ્કૃતિ ખાસ કરીને રોગપ્રતિકારક સીરમ સાથે મેળ ખાતી હોય, તો એગ્લુટિનેટ ફ્લેક્સ દેખાય છે (સકારાત્મક પરિણામ); જો કોઈ એગ્ગ્લુટિનેશન ઘટના ન હોય, તો તે તારણ પર આવે છે કે અભ્યાસ હેઠળ બેક્ટેરિયલ સંસ્કૃતિ રોગપ્રતિકારક સીરમને અનુરૂપ નથી.
2. ચાલો આપણે બ્રુસેલોસિસના સેરોડાયગ્નોસિસમાં વપરાતા રોઝ બેંગલ ટેસ્ટના ઉદાહરણનો ઉપયોગ કરીને ટેસ્ટ બ્લડ સીરમમાં એનિટેલ્સની શોધને ધ્યાનમાં લઈએ. 0.3 મિલી ટેસ્ટ એનિમલ બ્લડ સીરમ અને 0.03 મિલી બ્રુસેલોસિસ એન્ટિજેન (રોઝ-બેંગાલ-સ્ટેઇન્ડ બ્રુસેલા કોષો) કાચની સ્લાઈડ પર લાગુ કરવામાં આવે છે. કાચને હલાવીને ઘટકોને સારી રીતે મિશ્રિત કરવામાં આવે છે અને પરિણામ 4 મિનિટ પછી ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે.
પરિણામોનું રેકોર્ડિંગ: જો પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક હોય, તો એગ્લુટિનેટના ગુલાબી ટુકડાઓ દેખાય છે. આ પ્રકારની સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાને ગુણાત્મક તરીકે વર્ગીકૃત કરવામાં આવે છે, કારણ કે તેનો ઉપયોગ પ્રાણીના લોહીના સીરમમાં પેથોજેન માટે એન્ટિબોડીઝ શોધવા માટે થઈ શકે છે, પરંતુ તેમની માત્રાત્મક સામગ્રીનું મૂલ્યાંકન કરવું અશક્ય છે.
1.1. એગ્લુટીનેશન રિએક્શન (RA)
એગ્લુટીનેશન રિએક્શન (RA)
તેની વિશિષ્ટતા, કામગીરીની સરળતા અને નિદર્શનક્ષમતાને લીધે, ઘણા ચેપી રોગોના નિદાન માટે માઇક્રોબાયોલોજીકલ પ્રેક્ટિસમાં એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા વ્યાપક બની છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા સમગ્ર માઇક્રોબાયલ અથવા અન્ય કોષો (એગ્ગ્લુટીનોજેન્સ) સાથે એન્ટિબોડીઝ (એગ્ગ્લુટીનિન્સ) ની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાની વિશિષ્ટતા પર આધારિત છે. આ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાના પરિણામે, કણો અને એગ્લોમેરેટ્સ રચાય છે, જે ફ્લેક્સના સ્વરૂપમાં અવક્ષેપ (એગ્લુટિનેટ) કરે છે.
એકત્રીકરણ પ્રતિક્રિયામાં જીવંત અને મૃત્યુ પામેલા બેક્ટેરિયા, સ્પિરોચેટ્સ, ફૂગ, પ્રોટોઝોઆ, રિકેટ્સિયા, તેમજ લાલ રક્ત કોશિકાઓ અને અન્ય કોષો શામેલ હોઈ શકે છે. પ્રતિક્રિયા બે તબક્કામાં થાય છે: પ્રથમ (અદ્રશ્ય) વિશિષ્ટ, એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝનું સંયોજન, બીજું (દૃશ્યમાન) બિન-વિશિષ્ટ, એન્ટિજેન્સનું ગ્લુઇંગ, એટલે કે. એગ્લુટિનેટ રચના.
એગ્લુટિનેટ રચાય છે જ્યારે દ્વિભાષી એન્ટિબોડીનું એક સક્રિય કેન્દ્ર એન્ટિજેનના નિર્ણાયક જૂથ સાથે જોડાય છે. એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા, કોઈપણ સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાની જેમ, ઇલેક્ટ્રોલાઇટ્સની હાજરીમાં થાય છે.
બાહ્ય રીતે, સકારાત્મક એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના અભિવ્યક્તિમાં બે ગણું પાત્ર હોય છે. ફ્લેગેલેટેડ સુક્ષ્મજીવાણુઓમાં કે જેમાં માત્ર સોમેટિક O2 એન્ટિજેન હોય છે, માઇક્રોબાયલ કોષો પોતે જ સીધા એકસાથે વળગી રહે છે. આ એકત્રીકરણને ફાઇન-ગ્રેઇન્ડ કહેવામાં આવે છે. તે 18 22 કલાકની અંદર થાય છે. વિ
ફ્લેગલેટ સુક્ષ્મજીવાણુઓ બે એન્ટિજેન્સ ધરાવે છે: સોમેટિક O2 એન્ટિજેન અને ફ્લેગેલર H2 એન્ટિજેન. જો કોશિકાઓ ફ્લેગેલ્લા દ્વારા એકસાથે ગુંદર ધરાવતા હોય, તો મોટા, છૂટક ટુકડાઓ રચાય છે અને આ એકત્રીકરણ પ્રતિક્રિયાને બરછટ-દાણાવાળું કહેવામાં આવે છે. તે 2 4 કલાકની અંદર થાય છે.
દર્દીના લોહીના સીરમમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝના ગુણાત્મક અને જથ્થાત્મક નિર્ધારણના હેતુ માટે અને અલગ પેથોજેનની પ્રજાતિઓ નક્કી કરવાના હેતુ માટે એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા બંને કરી શકાય છે. વિ
એગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા વિસ્તૃત સંસ્કરણમાં બંને કરી શકાય છે, જે તમને ડાયગ્નોસ્ટિક ટાઇટરમાં ભળી ગયેલા સીરમ સાથે અને વેરિઅન્ટમાં કામ કરવાની મંજૂરી આપે છે. સૂચક પ્રતિક્રિયા, જે સૈદ્ધાંતિક રીતે, ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝને શોધવા અથવા રોગકારકની પ્રજાતિઓને નિર્ધારિત કરવાની મંજૂરી આપે છે.
વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા કરતી વખતે, વિષયના રક્ત સીરમમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ શોધવા માટે, ટેસ્ટ સીરમ 1:50 અથવા 1:100 ના મંદન પર લેવામાં આવે છે. આ એ હકીકતને કારણે છે કે સામાન્ય એન્ટિબોડીઝ સંપૂર્ણ અથવા સહેજ પાતળું સીરમમાં ખૂબ ઊંચી સાંદ્રતામાં હાજર હોઈ શકે છે, અને પછી પ્રતિક્રિયા પરિણામો અચોક્કસ હોઈ શકે છે. પ્રતિક્રિયાના આ સંસ્કરણમાં જે સામગ્રીનું પરીક્ષણ કરવામાં આવે છે તે દર્દીનું લોહી છે.
લોહી ખાલી પેટ પર લેવામાં આવે છે અથવા જમ્યાના 6 કલાક કરતાં પહેલાં નહીં (અન્યથા લોહીના સીરમમાં ચરબીના ટીપાં હોઈ શકે છે, જે તેને વાદળછાયું અને સંશોધન માટે અયોગ્ય બનાવે છે). દર્દીનું રક્ત સીરમ સામાન્ય રીતે રોગના બીજા અઠવાડિયામાં મેળવવામાં આવે છે, ક્યુબિટલ નસમાંથી જંતુરહિત 3 × 4 મિલી રક્ત એકત્ર કરે છે (આ સમય સુધીમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝની મહત્તમ માત્રા કેન્દ્રિત હોય છે). ચોક્કસ એન્ટિજેનિક માળખું ધરાવતી ચોક્કસ પ્રજાતિના મૃત્યુ પામેલા પરંતુ નાશ ન પામેલા માઇક્રોબાયલ કોષોમાંથી તૈયાર કરાયેલ ડાયગ્નોસ્ટિકમનો ઉપયોગ જાણીતા એન્ટિજેન તરીકે થાય છે.
પેથોજેનની પ્રજાતિ અને પ્રકાર નક્કી કરવા માટે વિગતવાર એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા કરતી વખતે, એન્ટિજેન એ એક જીવંત પેથોજેન છે જે અભ્યાસ કરવામાં આવી રહી છે તેમાંથી અલગ કરવામાં આવે છે. રોગપ્રતિકારક ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમમાં સમાયેલ એન્ટિબોડીઝ જાણીતા છે. વિ
રોગપ્રતિકારક ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમરસીકરણ કરાયેલ સસલાના લોહીમાંથી મેળવેલ. ટાઇટર (મહત્તમ મંદન કે જેના પર એન્ટિબોડીઝ મળી આવે છે) નક્કી કર્યા પછી, ડાયગ્નોસ્ટિક સીરમ પ્રિઝર્વેટિવના ઉમેરા સાથે એમ્પ્યુલ્સમાં રેડવામાં આવે છે. આ સીરમનો ઉપયોગ અલગ પેથોજેનની એન્ટિજેનિક રચના દ્વારા ઓળખ માટે થાય છે.
એગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયાના વિકલ્પો
આ પ્રતિક્રિયાઓમાં કણો (માઇક્રોબાયલ કોશિકાઓ, લાલ રક્ત કોશિકાઓ અને અન્ય કોર્પસ્ક્યુલર એન્ટિજેન્સ) ના સ્વરૂપમાં એન્ટિજેન્સનો સમાવેશ થાય છે, જે એન્ટિબોડીઝ અને અવક્ષેપ દ્વારા એકસાથે ગુંદર ધરાવતા હોય છે.
એગ્ગ્લુટિનેશન રિએક્શન (આરએ) કરવા માટે, ત્રણ ઘટકોની જરૂર છે: 1) એન્ટિજેન (એગ્ગ્લુટિનોજેન); 2) એન્ટિબોડી (એગ્ગ્લુટીનિન) અને 3) ઇલેક્ટ્રોલાઇટ (આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડ સોલ્યુશન).
ઓરિએન્ટેટિવ (પ્લેટ) એગ્લુટીનેશન રિએક્શન (આરએ)
એક સૂચક અથવા પ્લેટ, RA ઓરડાના તાપમાને કાચની સ્લાઇડ પર મૂકવામાં આવે છે. આ કરવા માટે, 1:10 1:20 ના મંદન પર સીરમનું એક ટીપું અને કાચ પર આઇસોટોનિક સોડિયમ ક્લોરાઇડના દ્રાવણના નિયંત્રણ ડ્રોપને અલગથી લાગુ કરવા માટે પાશ્ચર પીપેટનો ઉપયોગ કરો. વસાહતો અથવા બેક્ટેરિયાની દૈનિક સંસ્કૃતિ (ડાયગ્નોસ્ટિકમનું એક ટીપું) બંને બેક્ટેરિયોલોજિકલ લૂપ્સમાં દાખલ કરવામાં આવે છે અને સંપૂર્ણ રીતે મિશ્રિત થાય છે. પ્રતિક્રિયાઓ થોડી મિનિટો પછી દૃષ્ટિની રીતે ધ્યાનમાં લેવામાં આવે છે, કેટલીકવાર બૃહદદર્શક કાચ (x5) નો ઉપયોગ કરીને. સકારાત્મક આરએ સાથે, સીરમના ટીપાંમાં મોટા અને નાના ટુકડાઓનો દેખાવ નોંધવામાં આવે છે; નકારાત્મક સાથે, સીરમ સમાનરૂપે વાદળછાયું રહે છે.
પરોક્ષ (નિષ્ક્રિય) હેમાગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (RNGA, RPGA)
પ્રતિક્રિયા કરવામાં આવે છે: 1) પોલિસેકરાઇડ્સ, પ્રોટીન, બેક્ટેરિયાના અર્ક અને અન્ય અત્યંત વિખરાયેલા પદાર્થો, રિકેટ્સિયા અને વાયરસ, જેમાંથી એગ્લુટીનિન સાથેના સંકુલને પરંપરાગત આરએમાં જોઈ શકાતા નથી, અથવા 2) દર્દીઓના સેરામાં એન્ટિબોડીઝ શોધવા માટે. આ અત્યંત વિખરાયેલા પદાર્થો અને સૌથી નાના સુક્ષ્મસજીવો.
પરોક્ષ, અથવા નિષ્ક્રિય, એગ્ગ્લુટિનેશનને પ્રતિક્રિયા તરીકે સમજવામાં આવે છે જેમાં એન્ટિબોડીઝ નિષ્ક્રિય કણો (લેટેક્સ, સેલ્યુલોઝ, પોલિસ્ટરીન, બેરિયમ ઓક્સાઇડ, વગેરે અથવા ઘેટાંના લાલ રક્ત કોશિકાઓ, માનવ રક્ત જૂથ I(0)) પર પૂર્વ-શોષિત એન્ટિજેન્સ સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે.
નિષ્ક્રિય હેમાગ્ગ્લુટિનેશન પ્રતિક્રિયા (RPHA) માં, લાલ રક્ત કોશિકાઓનો ઉપયોગ વાહક તરીકે થાય છે. એન્ટિજેન-લોડ લાલ રક્ત કોશિકાઓ આ એન્ટિજેન માટે ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝની હાજરીમાં એકસાથે વળગી રહે છે અને અવક્ષેપ કરે છે. એન્ટિજેન-સંવેદનશીલ એરિથ્રોસાઇટ્સનો ઉપયોગ RPGA માં એન્ટિબોડીઝની શોધ (સેરોડાયગ્નોસિસ) માટે એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ તરીકે થાય છે. જો લાલ રક્ત કોશિકાઓ એન્ટિબોડીઝ (એરિથ્રોસાઇટ એન્ટિબોડી ડાયગ્નોસ્ટિકમ) થી ભરેલા હોય, તો તેનો ઉપયોગ એન્ટિજેન્સ શોધવા માટે થઈ શકે છે.
સ્ટેજીંગ. પોલિસ્ટરીન પ્લેટોના કુવાઓમાં સીરમના સીરીયલ ડિલ્યુશનની શ્રેણી તૈયાર કરવામાં આવે છે. ઉપાંતીય કૂવામાં 0.5 મિલી સ્પષ્ટ હકારાત્મક સીરમ અને છેલ્લા કૂવામાં 0.5 મિલી શારીરિક દ્રાવણ (નિયંત્રણો) ઉમેરો. પછી બધા કુવાઓમાં 0.1 મિલી પાતળું એરિથ્રોસાઇટ ડાયગ્નોસ્ટિકમ ઉમેરો, હલાવો અને થર્મોસ્ટેટમાં 2 કલાક માટે મૂકો.
નામું. IN હકારાત્મક કેસએરિથ્રોસાઇટ્સ ફોલ્ડ અથવા જેગ્ડ ધાર (ઊંધી છત્ર) સાથે કોષોના સમાન સ્તરના સ્વરૂપમાં છિદ્રના તળિયે સ્થાયી થાય છે; નકારાત્મકમાં તેઓ બટન અથવા રિંગના રૂપમાં સ્થાયી થાય છે.
1.2. તટસ્થતા પ્રતિક્રિયા. LYSIS,
ઓપ્સોનોફેગોસાયટીક પ્રતિક્રિયા, અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયા
એન્ટિટોક્સિન (RN) સાથે એક્ઝોટોક્સિનના તટસ્થીકરણની પ્રતિક્રિયા
પ્રતિક્રિયા એક્ઝોટોક્સિનની અસરને નિષ્ક્રિય કરવા માટે એન્ટિટોક્સિક સીરમની ક્ષમતા પર આધારિત છે. તેનો ઉપયોગ એન્ટિટોક્સિક સીરમના ટાઇટ્રેશન અને એક્ઝોટોક્સિનના નિર્ધારણ માટે થાય છે.
સીરમને ટાઇટ્રેટ કરતી વખતે, અનુરૂપ ઝેરની ચોક્કસ માત્રા એન્ટિટોક્સિક સીરમના વિવિધ મંદનમાં ઉમેરવામાં આવે છે. જ્યારે એન્ટિજેન સંપૂર્ણપણે તટસ્થ થઈ જાય છે અને ત્યાં કોઈ બિનખર્ચિત એન્ટિબોડીઝ નથી, ત્યારે પ્રારંભિક ફ્લોક્યુલેશન થાય છે. ફ્લોક્યુલેશન પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ માત્ર સીરમ (ઉદાહરણ તરીકે, ડિપ્થેરિયા) ના ટાઇટ્રેશન માટે જ નહીં, પણ ઝેર અને ટોક્સોઇડના ટાઇટ્રેશન માટે પણ થઈ શકે છે. એન્ટિટોક્સિક ઉપચારાત્મક સીરમની પ્રવૃત્તિ નક્કી કરવા માટેની પદ્ધતિ તરીકે એન્ટિટોક્સિન સાથે ઝેરના તટસ્થીકરણની પ્રતિક્રિયા ખૂબ જ વ્યવહારુ મહત્વ ધરાવે છે. આ પ્રતિક્રિયામાં એન્ટિજેન એ સાચું એક્ઝોટોક્સિન છે.
એન્ટિટોક્સિક સીરમની મજબૂતાઈ AE ના પરંપરાગત એકમો દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે.
બોટ્યુલિનમ સીરમનો 1 AE તેની માત્રા બોટ્યુલિનમ ટોક્સિનના 1000 DLM ને બેઅસર કરે છે. એક્ઝોટોક્સિનની પ્રજાતિ અથવા પ્રકાર (ટેટાનસ, બોટ્યુલિઝમ, ડિપ્થેરિયા, વગેરેના નિદાન માટે) નિર્ધારિત કરવા માટે તટસ્થતા પ્રતિક્રિયા વિટ્રોમાં (રેમન મુજબ) કરી શકાય છે, અને જ્યારે માઇક્રોબાયલ કોશિકાઓની ટોક્સિજેનિસિટી નક્કી કરવામાં આવે છે - જેલમાં ( Ouchterlony અનુસાર).
લિસિસ પ્રતિક્રિયા (RL)
રોગપ્રતિકારક સીરમના રક્ષણાત્મક ગુણધર્મોમાંની એક એ છે કે શરીરમાં પ્રવેશતા સૂક્ષ્મજીવાણુઓ અથવા સેલ્યુલર તત્વોને વિસર્જન કરવાની ક્ષમતા.
વિશિષ્ટ એન્ટિબોડીઝ કે જે કોષ વિસર્જન (લિસિસ) નું કારણ બને છે તેને લિસિન કહેવામાં આવે છે. એન્ટિજેનની પ્રકૃતિના આધારે, તે બેક્ટેરિઓલિસિન, સાયટોલિસિન, સ્પિરોચેટોલિસિન, હેમોલિસિન વગેરે હોઈ શકે છે.
વધારાના પૂરક પરિબળની હાજરીમાં જ લાયસિન તેમની અસર દર્શાવે છે. બિન-વિશિષ્ટ પરિબળ તરીકે પૂરક રમૂજી પ્રતિરક્ષાસેરેબ્રોસ્પાઇનલ પ્રવાહી અને અગ્રવર્તી ચેમ્બર પ્રવાહી સિવાય લગભગ તમામ શરીરના પ્રવાહીમાં જોવા મળે છે. માનવ રક્ત સીરમમાં પૂરકની એકદમ ઊંચી અને સતત સામગ્રી નોંધવામાં આવી હતી અને લોહીના સીરમમાં તે ઘણું છે. ગિનિ પિગ. અન્ય સસ્તન પ્રાણીઓમાં, લોહીના સીરમમાં પૂરકની સામગ્રી અલગ હોય છે.
પૂરક છે એક જટિલ સિસ્ટમછાશ પ્રોટીન. તે અસ્થિર છે અને 30 મિનિટ માટે 55 ડિગ્રી પર તૂટી પડે છે. ઓરડાના તાપમાને, પૂરક બે કલાકની અંદર નાશ પામે છે. લાંબા સમય સુધી ધ્રુજારી, એસિડ અને અલ્ટ્રાવાયોલેટ કિરણો માટે ખૂબ જ સંવેદનશીલ. જો કે, પૂરક લાંબા સમય સુધી (છ મહિના સુધી) નીચા તાપમાને સૂકા સ્થિતિમાં સંગ્રહિત થાય છે. પૂરક માઇક્રોબાયલ કોશિકાઓ અને લાલ રક્ત કોશિકાઓના લિસિસને પ્રોત્સાહન આપે છે.
બેક્ટેરિઓલિસિસ અને હેમોલિસિસની પ્રતિક્રિયાઓ વચ્ચે તફાવત કરવામાં આવે છે.
બેક્ટેરિઓલિસિસ પ્રતિક્રિયાનો સાર એ છે કે જ્યારે ચોક્કસ રોગપ્રતિકારક સીરમ તેના અનુરૂપ હોમોલોગસ જીવંત માઇક્રોબાયલ કોષો સાથે પૂરકની હાજરીમાં જોડાય છે, ત્યારે માઇક્રોબાયલ લિસિસ થાય છે.
હેમોલિસિસ પ્રતિક્રિયા એ છે કે જ્યારે એરિથ્રોસાઇટ્સ ચોક્કસ સીરમના સંપર્કમાં આવે છે જે પૂરકની હાજરીમાં તેમના માટે પ્રતિરક્ષા છે (હેમોલિટીક), એરિથ્રોસાઇટ્સનું વિસર્જન અવલોકન કરવામાં આવે છે, એટલે કે. હેમોલિસિસ.
લેબોરેટરી પ્રેક્ટિસમાં હેમોલિસિસ પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ પૂરક શ્રેણી નક્કી કરવા તેમજ પરિણામો રેકોર્ડ કરવા માટે થાય છે. ડાયગ્નોસ્ટિક પ્રતિક્રિયાઓપૂરક ફિક્સેશન. કોમ્પ્લિમેન્ટ ટાઇટર એ તેની સૌથી નાની માત્રા છે, જે 2.5 મિલીલીટરના જથ્થામાં હેમોલિટીક સિસ્ટમમાં 30 મિનિટની અંદર લાલ રક્ત કોશિકાઓના લિસિસનું કારણ બને છે. લિસિસ પ્રતિક્રિયા, તમામ સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયાઓની જેમ, ઇલેક્ટ્રોલાઇટની હાજરીમાં થાય છે.
અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓ (એલર્જીક)
એન્ટિજેનના ચોક્કસ સ્વરૂપો, શરીર સાથે વારંવાર સંપર્ક કરવા પર, પ્રતિક્રિયા પેદા કરી શકે છે જે તેના આધારે ચોક્કસ હોય છે, પરંતુ તીવ્ર બળતરા પ્રતિભાવના બિન-વિશિષ્ટ સેલ્યુલર અને મોલેક્યુલર પરિબળોનો સમાવેશ થાય છે. અતિસંવેદનશીલતાના બે જાણીતા સ્વરૂપો છે: તાત્કાલિક-પ્રકારની અતિસંવેદનશીલતા (IHT) અને વિલંબિત-પ્રકારની અતિસંવેદનશીલતા (DTH). પ્રથમ પ્રકારની પ્રતિક્રિયા એન્ટિબોડીઝની ભાગીદારી સાથે થાય છે, અને એલર્જન સાથે વારંવાર સંપર્ક કર્યાના 2 કલાક પછી પ્રતિક્રિયા વિકસે છે. બીજો પ્રકાર બળતરા ટી કોશિકાઓ (Tgc) ની મદદથી પ્રતિક્રિયાના મુખ્ય પ્રભાવકો તરીકે અનુભવાય છે, બળતરાના વિસ્તારમાં મેક્રોફેજના સંચયને સુનિશ્ચિત કરે છે; પ્રતિક્રિયા 6-8 કલાક પછી અને પછીથી પોતાને પ્રગટ કરે છે.
અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાનો વિકાસ એન્ટિજેન સાથેના એન્કાઉન્ટર અને સંવેદનશીલતાની ઘટના દ્વારા થાય છે, એટલે કે. એન્ટિબોડીઝનો દેખાવ, સક્રિય રીતે સંવેદનશીલ લિમ્ફોસાઇટ્સ અને અન્ય લ્યુકોસાઇટ્સ (મેક્રોફેજ, ગ્રાન્યુલોસાઇટ્સ) ના નિષ્ક્રિય રીતે સંવેદનશીલ સાયટોફિલિક એન્ટિબોડીઝ.
અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓમાં વિકાસના ત્રણ તબક્કાઓ છે: રોગપ્રતિકારક; પેથોકેમિકલ; પેથોફિઝીયોલોજીકલ.
પ્રથમ, ચોક્કસ તબક્કામાં, એલર્જન એન્ટિબોડીઝ અને (અથવા) સંવેદનશીલ કોષો સાથે ક્રિયાપ્રતિક્રિયા કરે છે. બીજા તબક્કામાં, જૈવિક પ્રકાશન થાય છે સક્રિય પદાર્થોસક્રિય કોષોમાંથી. પ્રકાશિત મધ્યસ્થીઓ (હિસ્ટામાઇન, સેરોટોનિન, લ્યુકોટ્રિએન્સ, બ્રેડીકીનિન, વગેરે) વિવિધ પેરિફેરલ અસરોનું કારણ બને છે જે અનુરૂપ પ્રકારની પ્રતિક્રિયાના ત્રીજા તબક્કાની લાક્ષણિકતા ધરાવે છે.
પ્રતિક્રિયાઓ અતિસંવેદનશીલતાચોથો પ્રકાર
આ પ્રકારની પ્રતિક્રિયાઓ સંવેદનશીલ ટી-હેલ્પર કોશિકાઓ, સાયટોટોક્સિક ટી-લિમ્ફોસાયટ્સ (ટી-કિલર કોશિકાઓ) અને મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ સિસ્ટમના સક્રિય કોશિકાઓના રોગકારક આંતરસેલ્યુલર ક્રિયાપ્રતિક્રિયાઓ દ્વારા થાય છે, જે બેક્ટેરિયલ એન્ટિજેન્સ દ્વારા રોગપ્રતિકારક તંત્રના લાંબા સમય સુધી ઉત્તેજનને કારણે થાય છે. દૂર કરવા માટે શરીરની રોગપ્રતિકારક શક્તિની સંબંધિત અપૂર્ણતા આંતરિક વાતાવરણચેપી રોગોના બેક્ટેરિયલ પેથોજેન્સ. આ અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓ ટ્યુબરક્યુલોસિસવાળા દર્દીઓમાં ફેફસાના પોલાણ, તેમના કેસિયસ નેક્રોસિસ અને સામાન્ય નશોનું કારણ બને છે. ટ્યુબરક્યુલોસિસમાં ક્યુટેનીયસ ગ્રાન્યુલોમેટોસિસ અને મોર્ફોપેથોજેનેટિક દ્રષ્ટિએ રક્તપિત્ત મોટે ભાગે ચોથા પ્રકારની અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓથી બનેલું છે.
સૌથી વધુ પ્રખ્યાત ઉદાહરણચોથા પ્રકારની અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓ આ એક મેન્ટોક્સ પ્રતિક્રિયા છે જે દર્દીને ટ્યુબરક્યુલિનના ઇન્ટ્રાડર્મલ ઇન્જેક્શનના સ્થળે વિકસે છે જેનું શરીર અને સિસ્ટમ માયકોબેક્ટેરિયલ એન્ટિજેન્સ પ્રત્યે સંવેદનશીલ હોય છે. પ્રતિક્રિયાના પરિણામે, મધ્યમાં નેક્રોસિસ સાથે ગાઢ હાયપરેમિક પેપ્યુલ રચાય છે, જે ટ્યુબરક્યુલિનના ઇન્ટ્રાડર્મલ ઇન્જેક્શન પછી થોડા કલાકો (ધીમે ધીમે) દેખાય છે. પેપ્યુલની રચના વેસ્ક્યુલર બેડમાંથી ઇન્ટરસેલ્યુલર જગ્યાઓમાં ફરતા રક્તના મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ્સના પ્રકાશન સાથે શરૂ થાય છે. તે જ સમયે, વેસ્ક્યુલર બેડમાંથી પોલિમોર્ફોન્યુક્લિયર કોશિકાઓનું સ્થળાંતર શરૂ થાય છે. પછી ન્યુટ્રોફિલ્સ દ્વારા ઘૂસણખોરી ઓછી થાય છે, અને ઘૂસણખોરીમાં મુખ્યત્વે લિમ્ફોસાઇટ્સ અને મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ્સનો સમાવેશ થવા લાગે છે. આ આર્થસ પ્રતિક્રિયામાંથી મેન્ટોક્સ પ્રતિક્રિયાથી અલગ છે, જેમાં મુખ્યત્વે પોલીમોર્ફોન્યુક્લિયર લ્યુકોસાઈટ્સ જખમના સ્થળે એકઠા થાય છે.
પ્રકાર 4 અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાઓમાં, એન્ટિજેન્સ સાથે સંવેદનશીલ લિમ્ફોસાઇટ્સની લાંબા ગાળાની ઉત્તેજના તરફ દોરી જાય છે. પેથોલોજીકલ ફેરફારોટી હેલ્પર કોશિકાઓ દ્વારા પેથોલોજીકલ રીતે તીવ્ર અને લાંબા સમય સુધી સાયટોકાઈન્સના પ્રકાશન માટે પેશીઓ. પેશીના નુકસાનના સ્થાને સાયટોકાઇન્સના તીવ્ર પ્રકાશનથી ત્યાં સ્થિત મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ સિસ્ટમના કોષોનું અતિસક્રિયકરણ થાય છે, જેમાંથી ઘણા, અતિસક્રિય સ્થિતિમાં, એપિથેલિયોઇડ કોષોની સેર બનાવે છે, અને કેટલાક વિશાળ કોષો બનાવવા માટે એકબીજા સાથે ભળી જાય છે. મેક્રોફેજેસ, જેની સપાટી પર બેક્ટેરિયલ અને વાયરલ એન્ટિજેન્સ ખુલ્લા હોય છે, તે ટીકિલર્સ (કુદરતી હત્યારા) ની કામગીરી દ્વારા નાશ કરી શકાય છે.
અતિસંવેદનશીલતા પ્રતિક્રિયાનો ચોથો પ્રકાર ટી હેલ્પર કોષો દ્વારા વિદેશી બેક્ટેરિયલ એન્ટિજેનની ઓળખ દ્વારા પ્રેરિત થાય છે. એંડોસાઇટોસિસ અને મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ્સ દ્વારા વિદેશી ઇમ્યુનોજેન્સની પ્રક્રિયા પછી એન્ટિજેન-પ્રસ્તુત કોશિકાઓની સપાટી પર ખુલ્લા એન્ટિજેન્સ સાથે પ્રેરકની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા એ માન્યતા માટે જરૂરી સ્થિતિ છે. અન્ય જરૂરી સ્થિતિમુખ્ય હિસ્ટોકોમ્પેટિબિલિટી કોમ્પ્લેક્સમાંથી વર્ગ Iના અણુઓ સાથે સંયોજનમાં એન્ટિજેન્સનું એક્સપોઝર. એન્ટિજેન ઓળખ પછી, સંવેદનશીલ સહાયક કોષો સાયટોકાઇન્સ અને ખાસ કરીને, ઇન્ટરલ્યુકિન2 મુક્ત કરે છે, જે કુદરતી કિલર કોષો અને મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ્સને સક્રિય કરે છે. સક્રિય મોનોન્યુક્લિયર ફેગોસાઇટ્સ પ્રોટીઓલિટીક ઉત્સેચકો અને મુક્ત ઓક્સિજન રેડિકલ મુક્ત કરે છે, જે પેશીઓને નુકસાન પહોંચાડે છે.
એલર્જન પ્રત્યે શરીરની સંવેદનશીલતા સ્થાપિત કરવા, તેના ચેપનું સ્તર નક્કી કરવા, ઉદાહરણ તરીકે, ટ્યુબરક્યુલોસિસ, બ્રુસેલોસિસ, ટોળાની પ્રતિરક્ષા, ઉદાહરણ તરીકે, તુલારેમિયા માટે. એલર્જન વહીવટની સાઇટના આધારે, ત્યાં છે: 1) ત્વચા પરીક્ષણો; 2) સ્કારિફિકેશન; 3) ઇન્ટ્રાડર્મલ; 4) સબક્યુટેનીયસ. ત્વચાની એલર્જી પરીક્ષણ દરમિયાન એલર્જન પ્રત્યેની ક્લિનિકલ પ્રતિક્રિયા સ્થાનિક, સામાન્ય અને ફોકલ તેમજ તાત્કાલિક અને વિલંબિતમાં વહેંચાયેલી છે.
મધ્યસ્થી પ્રકાર GNT ની સ્થાનિક પ્રતિક્રિયાઓ 520 મિનિટ પછી થાય છે, તે એરિથેમા અને ફોલ્લાના સ્વરૂપમાં વ્યક્ત થાય છે, થોડા કલાકો પછી અદૃશ્ય થઈ જાય છે, અને પ્લસ પદ્ધતિ દ્વારા એરિથેમાના કદ દ્વારા મૂલ્યાંકન કરવામાં આવે છે, જે mm માં માપવામાં આવે છે. સ્થાનિક એચઆરટી પ્રતિક્રિયાઓ 24-48 કલાકની અંદર થાય છે, લાંબા સમય સુધી ચાલે છે, ઘૂસણખોરીના સ્વરૂપમાં દેખાય છે, કેટલીકવાર કેન્દ્રમાં નેક્રોસિસ સાથે, અને પ્લસ સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરીને, એમએમમાં ઘૂસણખોરીના કદ દ્વારા મૂલ્યાંકન કરવામાં આવે છે. HNT ના સાયટોટોક્સિક અને ઇમ્યુનોકોમ્પ્લેક્સ પ્રકારો સાથે, હાઇપ્રેમિયા અને ઘૂસણખોરી 3-4 કલાક પછી જોવા મળે છે, મહત્તમ 6-8 કલાકે પહોંચે છે અને લગભગ એક દિવસ પછી શમી જાય છે. કેટલીકવાર સંયુક્ત પ્રતિક્રિયાઓ જોવા મળે છે.
1.3. કોમ્પ્લીમેન્ટ ફિક્સેશન રિએક્શન (FFR)
વિવિધ ચેપ માટે લોહીના સીરમમાં એન્ટિબોડીઝ શોધવા માટે, તેમજ તેના એન્ટિજેનિક બંધારણ દ્વારા રોગકારકને ઓળખવા માટે પ્રયોગશાળા અભ્યાસોમાં આ પ્રતિક્રિયાનો ઉપયોગ થાય છે.
પૂરક ફિક્સેશન પ્રતિક્રિયા એ એક જટિલ સેરોલોજીકલ પ્રતિક્રિયા છે અને તે અત્યંત સંવેદનશીલ અને વિશિષ્ટ છે.
આ પ્રતિક્રિયાની વિશેષતા એ છે કે ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ સાથેની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા દરમિયાન એન્ટિજેનમાં ફેરફાર ફક્ત પૂરકની હાજરીમાં જ થાય છે. પૂરક માત્ર "એન્ટિબોડી એન્ટિજેન" સંકુલ પર શોષાય છે. સીરમમાં એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડી વચ્ચે સંબંધ હોય તો જ “એન્ટિબોડી એન્ટિજેન” સંકુલ રચાય છે.
"એન્ટિજેન એન્ટિબોડી" કોમ્પ્લેક્સ પર પૂરકનું શોષણ તેની લાક્ષણિકતાઓના આધારે એન્ટિજેનના ભાવિ પર વિવિધ અસરો કરી શકે છે.
કેટલાક એન્ટિજેન્સ આ પરિસ્થિતિઓ હેઠળ તીવ્ર મોર્ફોલોજિકલ ફેરફારોમાંથી પસાર થાય છે, જેમાં વિસર્જન (હેમોલિસિસ, ઇસેવ-ફીફર ઘટના, સાયટોલિટીક ક્રિયા) નો સમાવેશ થાય છે. અન્ય ચળવળની ગતિમાં ફેરફાર કરે છે (ટ્રેપોનેમા સ્થિરતા). હજુ પણ અન્ય લોકો અચાનક વિનાશક ફેરફારો (બેક્ટેરિયાનાશક અથવા સાયટોટોક્સિક અસર) વિના મૃત્યુ પામે છે. છેલ્લે, પૂરક શોષણ એન્ટિજેન ફેરફારો સાથે ન હોઈ શકે જે સરળતાથી અવલોકન કરી શકાય છે.
આરએસસી મિકેનિઝમ અનુસાર, તે બે તબક્કામાં થાય છે:
- પ્રથમ તબક્કો એ "એન્ટિજેન એન્ટિબોડી" સંકુલની રચના અને આ પૂરક સંકુલ પર શોષણ છે. તબક્કાનું પરિણામ દૃષ્ટિની રીતે દેખાતું નથી (પૂરકની ફરજિયાત ભાગીદારી સાથે એન્ટિજેન અને એન્ટિબોડીઝની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા).
- બીજા તબક્કામાં પૂરકની હાજરીમાં ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝના પ્રભાવ હેઠળ એન્ટિજેનમાં ફેરફાર છે. તબક્કાનું પરિણામ દૃષ્ટિની રીતે દૃશ્યમાન હોઈ શકે છે અથવા દૃશ્યમાન નથી (સૂચક હેમોલિટીક સિસ્ટમ (ઘેટાંના લાલ રક્ત કોશિકાઓ અને હેમોલિટીક સીરમ) નો ઉપયોગ કરીને પ્રતિક્રિયા પરિણામોની શોધ.
હેમોલિટીક સીરમ દ્વારા લાલ રક્ત કોશિકાઓનો વિનાશ ત્યારે જ થાય છે જો હેમોલિટીક સિસ્ટમમાં પૂરક ઉમેરવામાં આવે. જો પૂરક અગાઉ એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલ પર શોષાય છે, તો પછી એરિથ્રોસાઇટ્સનું હેમોલિસિસ થતું નથી.
પ્રયોગના પરિણામનું મૂલ્યાંકન તમામ ટેસ્ટ ટ્યુબમાં હેમોલિસિસની હાજરી અથવા ગેરહાજરીને નોંધીને કરવામાં આવે છે. જ્યારે હેમોલિસિસ સંપૂર્ણપણે વિલંબિત થાય છે ત્યારે પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક માનવામાં આવે છે, જ્યારે ટેસ્ટ ટ્યુબમાં પ્રવાહી રંગહીન હોય છે અને લાલ રક્ત કોશિકાઓ તળિયે સ્થિર થાય છે, નકારાત્મક જ્યારે લાલ રક્ત કોશિકાઓ સંપૂર્ણપણે લીસ થઈ જાય છે, જ્યારે પ્રવાહી તીવ્ર રંગીન હોય છે ("વાર્નિશ" લોહી). હેમોલિસિસ વિલંબની ડિગ્રીનું મૂલ્યાંકન પ્રવાહીના રંગની તીવ્રતા અને તળિયે (++++, +++, ++, +) લાલ રક્તકણોના કદના આધારે કરવામાં આવે છે.
એવા કિસ્સામાં જ્યારે એન્ટિજેનમાં ફેરફારો દ્રશ્ય નિરીક્ષણ માટે અગમ્ય રહે છે, ત્યારે બીજી સિસ્ટમનો ઉપયોગ કરવો જરૂરી છે, જે સૂચક તરીકે કાર્ય કરે છે, જે વ્યક્તિને પૂરક સ્થિતિનું મૂલ્યાંકન કરવાની અને પ્રતિક્રિયાના પરિણામ વિશે નિષ્કર્ષ કાઢવાની મંજૂરી આપે છે.
આ સૂચક સિસ્ટમ હેમોલિસિસ પ્રતિક્રિયાના ઘટકો દ્વારા રજૂ થાય છે, જેમાં ઘેટાં એરિથ્રોસાઇટ્સ અને હેમોલિટીક સીરમનો સમાવેશ થાય છે, જેમાં એરિથ્રોસાઇટ્સ (હેમોલિસિન) માટે ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ હોય છે, પરંતુ તેમાં પૂરક નથી. આ સૂચક સિસ્ટમ મુખ્ય RSC મૂક્યાના એક કલાક પછી ટેસ્ટ ટ્યુબમાં ઉમેરવામાં આવે છે. જો પૂરક ફિક્સેશન પ્રતિક્રિયા હકારાત્મક હોય, તો એન્ટિબોડી એન્ટિજેન સંકુલ રચાય છે, જે પૂરકને પોતાના પર શોષી લે છે. પૂરકનો ઉપયોગ માત્ર એક જ પ્રતિક્રિયા માટે જરૂરી માત્રામાં થાય છે, અને એરિથ્રોસાઇટ્સનું લિસિસ ફક્ત પૂરકની હાજરીમાં જ થઈ શકે છે, પછી જ્યારે તે "એન્ટિજેન એન્ટિબોડી" સંકુલ પર શોષાય છે, ત્યારે હેમોલિટીક (સૂચક) સિસ્ટમમાં એરિથ્રોસાઇટ્સનું લિસિસ ઘટશે. થતું નથી. જો પૂરક ફિક્સેશન પ્રતિક્રિયા નકારાત્મક હોય, તો "એન્ટિજેન એન્ટિબોડી" સંકુલ રચાય નહીં, પૂરક મુક્ત રહે છે, અને જ્યારે હેમોલિટીક સિસ્ટમ ઉમેરવામાં આવે છે, ત્યારે એરિથ્રોસાઇટ લિસિસ થાય છે.
1.4. ડીએનએ પ્રોબ્સ. પોલિમરેઝ ચેઇન રિએક્શન (PCR),
ઇમ્યુનો એન્ઝાઇમ પદ્ધતિ (એલિસા), ફ્લોરેસીંગ એન્ટિબોડી પદ્ધતિ (એફએફએ)
જીન ચકાસણીની પદ્ધતિઓ
મોલેક્યુલર બાયોલોજીના સઘન વિકાસ અને આનુવંશિક સંશોધન માટે સંપૂર્ણ પદ્ધતિસરના આધારની રચનાએ આનુવંશિક ઇજનેરીનો આધાર બનાવ્યો. ડાયગ્નોસ્ટિક્સના ક્ષેત્રમાં, ડીએનએ અને આરએનએના ચોક્કસ ન્યુક્લિયોટાઇડ સિક્વન્સ, કહેવાતા જીન પ્રોબિંગને નિર્ધારિત કરવા માટે એક દિશા ઉભરી આવી છે અને ઝડપથી વિકસી રહી છે. આવી તકનીકો પૂરક ન્યુક્લિયોટાઇડ્સ (AT, GC) ની ક્રિયાપ્રતિક્રિયાને કારણે સંકર અને ડબલ-સ્ટ્રેન્ડ સ્ટ્રક્ચર્સ બનાવવા માટે ન્યુક્લિક એસિડની ક્ષમતા પર આધારિત છે.
ઇચ્છિત ડીએનએ (અથવા આરએનએ) ક્રમ નક્કી કરવા માટે, ચોક્કસ આધાર ક્રમ સાથે કહેવાતા પોલિન્યુક્લિયોટાઇડ પ્રોબ ખાસ બનાવવામાં આવે છે. તેની રચનામાં એક વિશેષ લેબલ રજૂ કરવામાં આવ્યું છે, જે સંકુલની રચનાને ઓળખવાનું શક્ય બનાવે છે.
જોકે જીન પ્રોબિંગને ઇમ્યુનોકેમિકલ વિશ્લેષણની પદ્ધતિ તરીકે વર્ગીકૃત કરી શકાતી નથી, તેના મૂળભૂત સિદ્ધાંત (પૂરક રચનાઓની ક્રિયાપ્રતિક્રિયા) ઇમ્યુનોડાયગ્નોસ્ટિક્સની સૂચક પદ્ધતિઓની જેમ પદ્ધતિસર રીતે અમલમાં મૂકવામાં આવે છે. વધુમાં, જનીન ચકાસણી પદ્ધતિઓ ચેપી એજન્ટ વિશેની માહિતીને તેના ફેનોટાઇપિક અભિવ્યક્તિની ગેરહાજરીમાં ફરીથી ભરવાનું શક્ય બનાવે છે (જીનોમમાં એમ્બેડેડ વાયરસ, "શાંત" જનીનો).
ડીએનએ પૃથ્થકરણ હાથ ધરવા માટે, ડીએનએ અથવા આરએનએ પ્રોબ પરમાણુઓ પ્રતિક્રિયા આપે છે તે સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડ સ્ટ્રક્ચર્સ મેળવવા માટે નમૂનાને વિકૃત કરવામાં આવે છે. પ્રોબ્સ તૈયાર કરવા માટે, ક્યાં તો ડીએનએ (અથવા આરએનએ) ના વિવિધ વિભાગો કુદરતી સ્ત્રોતમાંથી અલગ પાડવામાં આવે છે (ઉદાહરણ તરીકે, ચોક્કસ સુક્ષ્મસજીવો), સામાન્ય રીતે વેક્ટર પ્લાઝમિડ્સમાં આનુવંશિક ક્રમના સ્વરૂપમાં રજૂ કરવામાં આવે છે, અથવા રાસાયણિક રીતે સંશ્લેષિત ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ્સનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે. કેટલાક કિસ્સાઓમાં, જીનોમિક ડીએનએ તૈયારીઓ જે ટુકડાઓમાં હાઇડ્રોલાઇઝ્ડ થાય છે તેનો ઉપયોગ ચકાસણી તરીકે થાય છે, કેટલીકવાર આરએનએ તૈયારીઓ અને ખાસ કરીને ઘણીવાર રિબોસોમલ આરએનએ. સમાન સૂચકાંકોનો ઉપયોગ વિવિધ પ્રકારના ઇમ્યુનોકેમિકલ વિશ્લેષણમાં લેબલ તરીકે થાય છે: કિરણોત્સર્ગી આઇસોટોપ્સ, ફ્લોરેસીન્સ, બાયોટોપ (એવિડિન-એન્ઝાઇમ સંકુલ દ્વારા વધુ વિકાસ સાથે), વગેરે.
વિશ્લેષણનો ક્રમ ઉપલબ્ધ પ્રોબના ગુણધર્મો દ્વારા નક્કી કરવામાં આવે છે
હાલમાં, તમામ જરૂરી ઘટકો ધરાવતી કોમર્શિયલ કીટનો ઉપયોગ વધુને વધુ થઈ રહ્યો છે.
મોટાભાગના કિસ્સાઓમાં, વિશ્લેષણ પ્રક્રિયાને નીચેના તબક્કામાં વિભાજિત કરી શકાય છે: નમૂનાની તૈયારી (ડીએનએ નિષ્કર્ષણ અને વિકૃતિકરણ સહિત), વાહક પર નમૂનાનું ફિક્સેશન (મોટાભાગે પોલિમર મેમ્બ્રેન ફિલ્ટર), પ્રી-હાઇબ્રિડાઇઝેશન, હાઇબ્રિડાઇઝેશન, અનબાઉન્ડ ઉત્પાદનોની ધોવા, શોધ . પ્રમાણભૂત ડીએનએ અથવા આરએનએપ્રોબ તૈયારીની ગેરહાજરીમાં, તે પ્રથમ મેળવવામાં આવે છે અને લેબલ કરવામાં આવે છે.
નમૂના તૈયાર કરવા માટે, બેક્ટેરિયાની વ્યક્તિગત વસાહતોને ઓળખવા અથવા કોષ સંસ્કૃતિમાં વાયરસની સાંદ્રતા વધારવા માટે પરીક્ષણ સામગ્રીને પ્રારંભિક "વૃદ્ધિ" કરવાની જરૂર પડી શકે છે. પણ હાથ ધરવામાં આવે છે સીધું વિશ્લેષણલોહીના સીરમ, પેશાબના નમૂનાઓ, આકારના તત્વોચેપી એજન્ટની હાજરી માટે લોહી અથવા આખું લોહી. સેલ્યુલર સ્ટ્રક્ચર્સમાંથી ન્યુક્લિક એસિડને મુક્ત કરવા માટે, સેલ લિસિસ હાથ ધરવામાં આવે છે, અને કેટલાક કિસ્સાઓમાં ડીએનએ તૈયારી ફિનોલનો ઉપયોગ કરીને શુદ્ધ કરવામાં આવે છે.
ડીએનએનું વિકૃતિકરણ, એટલે કે તેનું સિંગલ-સ્ટ્રેન્ડ સ્વરૂપમાં સંક્રમણ, જ્યારે આલ્કલી સાથે સારવાર કરવામાં આવે ત્યારે થાય છે. પછી ન્યુક્લીક એસિડના નમૂનાને ટેકો, નાઈટ્રોસેલ્યુલોઝ અથવા નાયલોન પટલમાં નિશ્ચિત કરવામાં આવે છે, સામાન્ય રીતે શૂન્યાવકાશમાં 80 ડિગ્રી સેલ્સિયસ પર 10 મિનિટથી 4 કલાક સુધી સેવન દ્વારા. આગળ, પ્રી-હાઇબ્રિડાઇઝેશનની પ્રક્રિયામાં, મેમ્બ્રેન સાથે પ્રોબની બિન-વિશિષ્ટ ક્રિયાપ્રતિક્રિયાને ઘટાડવા માટે મુક્ત બંધનકર્તા સાઇટ્સનું નિષ્ક્રિયકરણ પ્રાપ્ત થાય છે. નમૂનામાં ડીએનએની સાંદ્રતા, વપરાયેલી ચકાસણીની સાંદ્રતા અને તેના કદના આધારે વર્ણસંકરીકરણ પ્રક્રિયામાં 2 થી 20 કલાકનો સમય લાગે છે.
હાઇબ્રિડાઇઝેશન પૂર્ણ થયા પછી અને અનબાઉન્ડ ઉત્પાદનો ધોવાઇ ગયા પછી, રચાયેલ સંકુલ શોધી કાઢવામાં આવે છે. જો ચકાસણીમાં કિરણોત્સર્ગી લેબલ હોય, તો પ્રતિક્રિયા દર્શાવવા માટે, પટલ ફોટોગ્રાફિક ફિલ્મ (ઓટોરાડિયોગ્રાફી) ના સંપર્કમાં આવે છે. અન્ય લેબલ્સ માટે, અનુરૂપ પ્રક્રિયાઓનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે.
સૌથી આશાસ્પદ બિન-કિરણોત્સર્ગી (કહેવાતા ઠંડા) ચકાસણીઓ મેળવવાનું છે. તે જ આધારે, એક વર્ણસંકર તકનીક વિકસાવવામાં આવી રહી છે, જે વિભાગની તૈયારીઓ અને પેશી પંચરમાં પેથોજેનની હાજરીને સ્થાપિત કરવાનું શક્ય બનાવે છે, જે ખાસ કરીને પેથોમોર્ફોલોજિકલ વિશ્લેષણ (સિટુ વર્ણસંકરીકરણમાં) માં મહત્વપૂર્ણ છે.
પોલિમરેઝ એમ્પ્લીફિકેશન રિએક્શન (PCR) નો ઉપયોગ જનીન ચકાસણી પદ્ધતિઓના વિકાસમાં એક મહત્વપૂર્ણ પગલું હતું. આ અભિગમ વિટ્રોમાં બહુવિધ નકલોનું સંશ્લેષણ કરીને નમૂનામાં ચોક્કસ (પૂર્વ જાણીતા) DNA ક્રમની સાંદ્રતા વધારવાનું શક્ય બનાવે છે. પ્રતિક્રિયા કરવા માટે, ડીએનએ પોલિમરેઝ એન્ઝાઇમની તૈયારી, સંશ્લેષણ માટે ડીઓક્સિન્યુક્લિયોટાઇડ્સનો વધુ પડતો અને કહેવાતા પ્રાઇમર્સ અભ્યાસ હેઠળના ડીએનએ નમૂનામાં ઉમેરવામાં આવે છે - બે પ્રકારના ઓલિગોન્યુક્લિયોટાઇડ્સ, જેનું કદ 2025 પાયાના ટર્મિનલ વિભાગોને અનુરૂપ છે. રસનો DNA ક્રમ. પ્રાઇમર્સમાંથી એક વાંચન દિશામાં 53 કોડિંગ ડીએનએ સ્ટ્રાન્ડના વાંચન ક્ષેત્રની શરૂઆતની નકલ હોવી જોઈએ, અને બીજું બિન-કોડિંગ સ્ટ્રાન્ડના વિરુદ્ધ છેડાની નકલ હોવી જોઈએ. પછી, પોલિમરેઝ પ્રતિક્રિયાના દરેક ચક્ર સાથે, DNA નકલોની સંખ્યા બમણી થાય છે.
પ્રાઈમર બાઈન્ડિંગ હાંસલ કરવા માટે, ડીએનએ ડિનેચરેશન (ગલન) 94°C પર જરૂરી છે, ત્યારબાદ મિશ્રણને 40-55°C પર લાવો.
પ્રતિક્રિયા કરવા માટે, પ્રોગ્રામેબલ માઇક્રોસેમ્પલ ઇન્ક્યુબેટર્સ પ્રતિક્રિયાના દરેક તબક્કા માટે શ્રેષ્ઠ તાપમાનમાં સરળતાથી વૈકલ્પિક ફેરફારો કરવા માટે ડિઝાઇન કરવામાં આવ્યા છે.
એમ્પ્લીફિકેશન પ્રતિક્રિયા જનીન ચકાસણી દરમિયાન વિશ્લેષણની સંવેદનશીલતામાં નોંધપાત્ર વધારો કરી શકે છે, જે ખાસ કરીને ચેપી એજન્ટની ઓછી સાંદ્રતા પર મહત્વપૂર્ણ છે.
એમ્પ્લીફિકેશન સાથે જીન પ્રોબિંગનો એક મહત્વનો ફાયદો એ છે કે પેથોલોજીકલ સામગ્રીની સબમાઈક્રોસ્કોપિક માત્રાનો અભ્યાસ કરવાની ક્ષમતા.
પદ્ધતિની અન્ય વિશેષતા, ચેપી સામગ્રીના વિશ્લેષણ માટે વધુ મહત્વપૂર્ણ, છુપાયેલા (શાંત) જનીનોને ઓળખવાની ક્ષમતા છે. જનીન ચકાસણીના ઉપયોગ સાથે સંકળાયેલી પદ્ધતિઓ ચેપી રોગોના નિદાનની પ્રથામાં ચોક્કસપણે વધુ વ્યાપકપણે દાખલ કરવામાં આવશે કારણ કે તે સરળ અને સસ્તી બનશે.
ELISA અને RIF પદ્ધતિઓ મોટે ભાગે ગુણાત્મક અથવા અર્ધ-માત્રાત્મક પ્રકૃતિની છે. ઘટકોની ખૂબ જ ઓછી સાંદ્રતા પર, એન્ટિજેન એન્ટિબોડી કોમ્પ્લેક્સની રચના ક્યાં તો દૃષ્ટિની રીતે અથવા સરળ વાદ્ય માધ્યમથી શોધી શકાતી નથી. આવા કિસ્સાઓમાં એન્ટિજેન એન્ટિબોડી કોમ્પ્લેક્સના સંકેતો હાથ ધરવામાં આવી શકે છે જો પ્રારંભિક ઘટકોમાંના એક એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડીમાં લેબલ દાખલ કરવામાં આવે, જે વિશ્લેષકની નિર્ધારિત સાંદ્રતા સાથે તુલનાત્મક સાંદ્રતામાં સરળતાથી શોધી શકાય છે.
રેડિયોએક્ટિવ આઇસોટોપ્સ (ઉદાહરણ તરીકે, 125I), ફ્લોરોસન્ટ પદાર્થો અને ઉત્સેચકોનો લેબલ તરીકે ઉપયોગ કરી શકાય છે.
ઉપયોગમાં લેવાતા લેબલના આધારે, રેડિયોઈમ્યુન (RIA), ફ્લોરોસન્ટ ઈમ્યુન (FIA), એન્ઝાઇમ-લિંક્ડ ઇમ્યુનોસોર્બન્ટ એસે (ELISA) વિશ્લેષણની પદ્ધતિઓ વગેરે છે. છેલ્લા વર્ષો ELISA ને વ્યાપક વ્યવહારુ ઉપયોગ પ્રાપ્ત થયો છે, જે શક્યતાને કારણે છે માત્રાત્મક નિર્ધારણ, ઉચ્ચ સંવેદનશીલતાએકાઉન્ટિંગની વિશિષ્ટતા અને ઓટોમેશન.
એન્ઝાઇમ ઇમ્યુનોસે પદ્ધતિઓ એ પદ્ધતિઓનું એક જૂથ છે જે સબસ્ટ્રેટનો ઉપયોગ કરીને એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલને શોધવાની મંજૂરી આપે છે જે એન્ઝાઇમ દ્વારા ક્લીવ કરવામાં આવે છે અને રંગ ઉત્પન્ન કરે છે.
પદ્ધતિનો સાર એ એન્ટિજેન એન્ટિબોડી પ્રતિક્રિયાના ઘટકોને માપેલા એન્ઝાઇમ લેબલ સાથે જોડવાનો છે. એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી જે પ્રતિક્રિયા આપે છે તેને એન્ઝાઇમ સાથે લેબલ કરવામાં આવે છે. એન્ઝાઇમની ક્રિયા હેઠળ સબસ્ટ્રેટના રૂપાંતરણના આધારે, વ્યક્તિ એન્ટિજેન એન્ટિબોડી પ્રતિક્રિયાના ક્રિયાપ્રતિક્રિયા ઘટકની માત્રા નક્કી કરી શકે છે. માં એન્ઝાઇમ આ બાબતેમાર્કર તરીકે સેવા આપે છે રોગપ્રતિકારક પ્રતિક્રિયાઅને તમને તેને દૃષ્ટિની અથવા વાદ્ય રીતે અવલોકન કરવાની મંજૂરી આપે છે.
ઉત્સેચકો ખૂબ જ અનુકૂળ ટૅગ્સ છે કારણ કે તેમના ઉત્પ્રેરક ગુણધર્મો તેમને એમ્પ્લીફાયર તરીકે કાર્ય કરવાની મંજૂરી આપે છે, કારણ કે એક એન્ઝાઇમ પરમાણુ પ્રતિ મિનિટ ઉત્પ્રેરક પ્રતિક્રિયા ઉત્પાદનના 1 × 105 કરતાં વધુ અણુઓની રચનાને પ્રોત્સાહન આપી શકે છે. એક એન્ઝાઇમ પસંદ કરવું જરૂરી છે જે તેની ઉત્પ્રેરક પ્રવૃત્તિને લાંબા સમય સુધી જાળવી રાખે, એન્ટિજેન અથવા એન્ટિબોડી સાથે જોડાય ત્યારે તેને ગુમાવતું નથી અને સબસ્ટ્રેટના સંદર્ભમાં ઉચ્ચ વિશિષ્ટતા ધરાવે છે.
એન્ઝાઇમ-લેબલવાળા એન્ટિબોડીઝ અથવા એન્ટિજેન્સ અને કન્જુગેટ્સ બનાવવા માટેની મુખ્ય પદ્ધતિઓ છે: રાસાયણિક, રોગપ્રતિકારક અને આનુવંશિક ઇજનેરી. ELISA માટે મોટાભાગે ઉપયોગમાં લેવાતા ઉત્સેચકો હોર્સરાડિશ પેરોક્સિડેઝ, આલ્કલાઇન ફોસ્ફેટેઝ, ગેલેક્ટોસિડેઝ વગેરે છે.
પ્રતિક્રિયાના વિઝ્યુઅલ અને ઇન્સ્ટ્રુમેન્ટલ રેકોર્ડિંગના હેતુ માટે એન્ટિજેન-એન્ટિબોડી સંકુલમાં એન્ઝાઇમની પ્રવૃત્તિને શોધવા માટે, ક્રોમોજેનિક સબસ્ટ્રેટનો ઉપયોગ કરવામાં આવે છે, જેનાં ઉકેલો, શરૂઆતમાં રંગહીન, એન્ઝાઇમેટિક પ્રતિક્રિયા દરમિયાન રંગ મેળવે છે, જેની તીવ્રતા રકમના પ્રમાણમાં હોય છે. એન્ઝાઇમનું. આમ, ઘન-તબક્કા ELISA માં હોર્સરાડિશ પેરોક્સિડેઝની પ્રવૃત્તિને શોધવા માટે, 5-એમિનોસાલિસિલિક એસિડ, જે તીવ્ર કથ્થઈ રંગ ઉત્પન્ન કરે છે, અને ઓર્થો-ફેનીલેનેડિયામાઇન, જે નારંગી-પીળો રંગ ઉત્પન્ન કરે છે, સબસ્ટ્રેટ તરીકે ઉપયોગમાં લેવાય છે. આલ્કલાઇન ફોસ્ફેટ અને β-ગાલાટોસીડેઝની પ્રવૃત્તિ શોધવા માટે, અનુક્રમે નાઇટ્રોફેનીલફોસ્ફેટ્સ અને નાઇટ્રોફેનીલગાલેક્ટોસાઇડ્સનો ઉપયોગ થાય છે.
રંગીન ઉત્પાદનની રચનામાં પ્રતિક્રિયાનું પરિણામ દૃષ્ટિની રીતે અથવા સ્પેક્ટ્રોફોટોમીટરનો ઉપયોગ કરીને નક્કી કરવામાં આવે છે જે ચોક્કસ તરંગલંબાઇ સાથે પ્રકાશના શોષણને માપે છે.
ELISA કરવા માટે ઘણા વિકલ્પો છે. સજાતીય અને વિજાતીય વિકલ્પો છે.
ઉત્પાદન પદ્ધતિ અનુસાર, સ્પર્ધાત્મક અને બિન-સ્પર્ધાત્મક ELISA પદ્ધતિઓ અલગ પડે છે. જો પ્રથમ તબક્કે માત્ર વિશ્લેષણ કરેલ સંયોજન અને તેના અનુરૂપ બંધન કેન્દ્રો (એન્ટિજેન અને ચોક્કસ એન્ટિબોડીઝ) સિસ્ટમમાં હાજર હોય, તો પદ્ધતિ બિન-સ્પર્ધાત્મક છે. જો પ્રથમ તબક્કે વિશ્લેષિત સંયોજન (એન્ટિજેન) અને તેના એનાલોગ (એન્ઝાઇમ-લેબલવાળા એન્ટિજેન) હાજર હોય, ચોક્કસ બંધન કેન્દ્રો (એન્ટિબોડીઝ) કે જે ટૂંકા પુરવઠામાં છે તેના બંધન માટે એકબીજા સાથે સ્પર્ધા કરે છે, તો પદ્ધતિ સ્પર્ધાત્મક છે. આ કિસ્સામાં, સોલ્યુશનમાં જેટલા વધુ ટેસ્ટ એન્ટિજેન હોય છે, બાઉન્ડ લેબલવાળા એન્ટિજેન્સની સંખ્યા ઓછી હોય છે.
ફ્લોરેસીંગ એન્ટિબોડીઝ (એમએફએ) અથવા ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ પ્રતિક્રિયા (આરઆઈએફ) ની પદ્ધતિ
ઇમ્યુનોફ્લોરોસેન્સ પદ્ધતિ એ પરીક્ષણ સામગ્રીમાં અજાણ્યા સુક્ષ્મસજીવોની ઝડપી તપાસ અને ઓળખ માટે પસંદગીની પદ્ધતિ છે.
Ag + AT + ઇલેક્ટ્રોલાઇટ = યુવી કિરણોમાં ઝળહળતું જટિલ
ફ્લોરોક્રોમ સાથે લેબલ થયેલ માઇક્રોબ સીરમ
ફ્લોરોસીન આઇસોથિયોસાયનેટ FITC નો વારંવાર ઉપયોગ થાય છે
આ પદ્ધતિનો અભ્યાસ કરતી વખતે, ફ્લોરોસન્ટ માઇક્રોસ્કોપનો ઉપયોગ થાય છે.
સ્ટેજીંગ RIF
30 μl FITC-લેબલવાળા એન્ટિબોડી સોલ્યુશનને સમીયર પર લાગુ કરવામાં આવે છે.
ગ્લાસને ભેજવાળી ચેમ્બરમાં મૂકો અને તેને ઓરડાના તાપમાને 20-25 મિનિટ માટે અથવા થર્મોસ્ટેટમાં 37°C પર 15 મિનિટ માટે રાખો.
કાચને ચાલતા મશીનમાં ધોઈ લો નળ નું પાણી 2 મિનિટ, નિસ્યંદિત પાણી અને હવા સૂકા સાથે કોગળા.
સૂકા સમીયર પર માઉન્ટિંગ લિક્વિડનું એક ડ્રોપ લાગુ કરવામાં આવે છે, સ્મીયરને કવરસ્લિપથી આવરી લેવામાં આવે છે અને ફ્લોરોસન્ટ માઇક્રોસ્કોપ અથવા પરંપરાગત ઓપ્ટિકલ માઇક્રોસ્કોપ સાથે ફ્લોરોસન્ટ જોડાણનો ઉપયોગ કરીને માઇક્રોસ્કોપ કરવામાં આવે છે.
