आरएसके नकारात्मक है. पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) इस तथ्य पर आधारित है कि एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स हमेशा पूरक को अपने आप में सोख लेता है (बांध लेता है)।

इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से एंटीजन की पहचान और संक्रमणों के सेरोडायग्नोसिस में उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से स्पाइरोकेट्स (वासेरमैन प्रतिक्रिया), रिकेट्सिया और वायरस के कारण होने वाली बीमारियों* में।

आरएससी एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है। इसमें पूरक और दो एंटीजन-एंटीबॉडी सिस्टम शामिल हैं। मूलतः, ये दो सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं हैं।

पहली प्रणाली - मुख्य में एक एंटीजन और एक एंटीबॉडी होती है (एक ज्ञात है, दूसरा नहीं)। इसमें एक निश्चित मात्रा में पूरक जोड़ा जाता है। यदि इस प्रणाली के एंटीजन और एंटीबॉडी मेल खाते हैं, तो वे पूरक से जुड़ेंगे और बांधेंगे। परिणामी परिसर सूक्ष्मता से फैला हुआ है और दिखाई नहीं देता है।

इस कॉम्प्लेक्स के गठन का पता दूसरे हेमोलिटिक या संकेतक प्रणाली का उपयोग करके लगाया जाता है। इसमें भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं (एंटीजन) और संबंधित हेमोलिटिक सीरम (एंटीबॉडी), यानी एक तैयार प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स शामिल हैं। इस प्रणाली में, लाल रक्त कोशिकाओं का लसीका केवल पूरक की उपस्थिति में ही हो सकता है। यदि पूरक पहली प्रणाली से बंधा हुआ है (यदि एंटीजन और एंटीबॉडी इसमें मेल खाते हैं), तो दूसरी प्रणाली में कोई हेमोलिसिस नहीं होगा - क्योंकि कोई मुफ्त पूरक नहीं है। हेमोलिसिस की अनुपस्थिति (ट्यूब की सामग्री धुंधली है या नीचे एरिथ्रोसाइट्स का तलछट है) को सकारात्मक आरएससी परिणाम के रूप में दर्ज किया गया है।

यदि पहले सिस्टम में एंटीजन, एंटीबॉडी से मेल नहीं खाता तो इम्यून कॉम्प्लेक्स नहीं बनेगा और पूरक मुक्त रहेगा! मुक्त रहकर, पूरक दूसरी प्रणाली में भाग लेता है, जिससे हेमोलिसिस होता है; आरएससी परिणाम नकारात्मक होता है (ट्यूबों की सामग्री पारदर्शी होती है - "लाह रक्त")।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया के घटक:

एंटीजन - आमतौर पर लाइसेट, अर्क, हैप्टेन; कम बार निलंबन.

1. रोगी प्रणाली का एंटीबॉडी-सीरम
2. पूरक - सीरम गिनी सूअर

3. एंटीजन - भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं

4.एंटीबॉडी - भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं के लिए हेमोलिसिन

5. आइसोटोनिक समाधान

इस तथ्य के कारण कि आरएससी में बड़ी संख्या में जटिल घटक शामिल हैं, उन्हें पहले शीर्षक दिया जाना चाहिए और सटीक मात्रा में प्रतिक्रिया में लिया जाना चाहिए। समान मात्रा: 0.5 या 0.25, कम अक्सर 0.2 मिली। तदनुसार, पूरा प्रयोग 2.5, 1.25 या 1.0 मिलीलीटर की मात्रा में किया जाता है (बड़ी मात्रा अधिक सटीक परिणाम देती है)। प्रतिक्रिया घटकों का अनुमापन प्रयोग के समान मात्रा में किया जाता है, लापता अवयवों को एक आइसोटोनिक समाधान के साथ बदल दिया जाता है।

सामग्री तैयार करना

हेमोलिटिक सीरम (हेमोलिसिन)। सीरम अपने अनुमापांक से 3 गुना कम पतला होता है (देखें पृष्ठ 211)। पूरे प्रयोग के लिए सीरम का एक सामान्य तनुकरण तैयार करें, जिसकी मात्रा एक टेस्ट ट्यूब (उदाहरण के लिए, 0.5 मिली) में सीरम की मात्रा को टेस्ट ट्यूब की संख्या से गुणा करके निर्धारित की जाती है, जो प्रयोग में संख्या से थोड़ा अधिक है।

2. भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं। प्रयोग में परीक्षण ट्यूबों की पूरी संख्या के लिए धुली हुई भेड़ एरिथ्रोसाइट्स (पृष्ठ 211 देखें) का 3% निलंबन तैयार करें। हेमोलिटिक प्रणाली तैयार करने के लिए, इसे प्रयोग में शामिल करने से 30 मिनट पहले, पतला हेमोलिसिन और लाल रक्त कोशिकाओं के निलंबन को समान मात्रा में मिलाएं, लाल रक्त कोशिकाओं में सीरम मिलाएं, अच्छी तरह मिलाएं और 37˚C पर 30 मिनट के लिए सेते रहें।

3.पूरक आमतौर पर 1:10 पतला होता है। प्रत्येक प्रयोग से पहले इसका शीर्षक अवश्य दिया जाना चाहिए। पूरक टिटर इसकी सबसे छोटी मात्रा है, जब हेमोलिटिक प्रणाली में जोड़ा जाता है, तो 37˚C पर 1 घंटे के भीतर पूर्ण हेमोलिसिस होता है। पूरक अनुमापन योजना तालिका 21 में प्रस्तुत की गई है।

ध्यान! प्रशंसा को मुख्य प्रयोग के समान मात्रा में शीर्षक दें, लापता सामग्री को एक आइसोटोनिक समाधान से बदलें।

परिणामों के लिए लेखांकन. नियंत्रणों में हेमोलिसिस का निशान भी नहीं होना चाहिए, क्योंकि उनमें से एक में पूरक नहीं होता है, और दूसरे में हेमोलिसिन नहीं होता है। नियंत्रणों से संकेत मिलता है कि प्रतिक्रिया घटकों में हेमोटॉक्सिसिटी (लाल रक्त कोशिकाओं को स्वचालित रूप से नष्ट करने की क्षमता) नहीं है।

दी गई तालिका में 21 उदाहरण में, 1:10 के तनुकरण पर पूरक अनुमापांक 0.15 मिली है। एक प्रयोग में, प्रतिक्रिया के अन्य घटकों द्वारा इसके गैर-विशिष्ट सोखना के कारण पूरक की गतिविधि कम हो सकती है, इसलिए, प्रयोग के लिए, पूरक की मात्रा बढ़ जाती है: अनुमापांक के बाद की खुराक ली जाती है। यह काम करने की खुराक है. दिए गए उदाहरण में, यह 1:10 के तनुकरण में 0.2 पूरक के बराबर है। चूंकि आरएससी में शामिल सभी घटकों को समान मात्रा में लिया जाना चाहिए (हमारे उदाहरण में यह 0:5 मिली है), पूरक की कार्यशील खुराक (0.2 मिली1:10) में 0.3 मिली आइसोटोनिक समाधान जोड़ना आवश्यक है। पूरे प्रयोग के लिए, उनमें से प्रत्येक की मात्रा (पूरक और आइसोटोनिक समाधान।

पूरे प्रयोग के लिए, उनमें से प्रत्येक (पूरक और आइसोटोनिक समाधान) की मात्रा आरएससी में भाग लेने वाली टेस्ट ट्यूबों की संख्या से गुणा की जाती है। उदाहरण के लिए, 50 टेस्ट ट्यूबों में एक प्रयोग करने के लिए, आपको 10 मिलीलीटर पूरक 1:10 (0.2 mlx50) और 15 मिलीलीटर आइसोटोनिक समाधान (0.3 mlx50) लेने की आवश्यकता है।

4. एंटीजन आमतौर पर उसके टिटर संकेत के साथ तैयार रूप में प्राप्त किया जाता है, यानी। वह मात्रा जो एंटीजन को पतला करने के बाद 1 मिली में समाहित होनी चाहिए। उदाहरण के लिए, 0.4 के अनुमापांक के साथ, इसे 0.96 मिली आइसोटोनिक घोल में पतला किया जाता है। प्रयोग के लिए, मैं आधे टिटर (0.5 मिली) के बराबर एंटीजन की मात्रा लेता हूं। ये उनकी काम करने की खुराक है. प्रयोग में परीक्षण ट्यूबों की संख्या से 0.5 मिलीलीटर को गुणा करके पूरे प्रयोग के लिए कुल एंटीजन कमजोर पड़ने की गणना करें।

5. एंटीबॉडी - रोगी का सीरम। प्रयोग से पहले ताजा सीरम को निष्क्रिय कर दिया जाता है ताकि उसमें मौजूद पूरक को नष्ट किया जा सके। ऐसा करने के लिए, इसे पानी के स्नान में या थर्मोस्टेट वाले निष्क्रियकर्ता में 56˚C पर 30 मिनट तक गर्म किया जाता है। बाद वाली विधि बेहतर है: यह मट्ठा को अधिक गर्म करने की संभावना को समाप्त कर देती है, यानी, इसके विकृतीकरण को। विकृत सीरा परीक्षण के लिए उपयुक्त नहीं हैं। रोगी के सीरम का उपयोग आमतौर पर 1:10 से 1:160 के तनुकरण में किया जाता है।

तालिका संख्या 14

सामग्री, एमएल	परीक्षण नलियाँ
अनुभव	नियंत्रण
										हेमोलिटिक प्रणाली	लाल रक्त कोशिकाओं
आइसोटोनिक समाधान	1,45	1,4	1,35	1,3	1,25	1,2	1,15	1,1	1,05	1,0	1,5	1,5
पूरक 1:10	0,05	0,1	0,15	0,2	0,25	0,3	0,35	0,4	0,45	0,5	―	0,5
हेमोलिटिक प्रणाली	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	―
भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं का 3% निलंबन	―	―	―	―	―	―	―	―	―	―	―	0,5
ट्यूबों को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और 1 घंटे के लिए 37˚C पर इनक्यूबेट किया जाता है।
परिणाम	कोई हेमोलिसिस नहीं	hemolysis	कोई हेमोलिसिस नहीं

प्रतिरक्षा सीरा अक्सर उत्पादन स्थितियों में तैयार किया जाता है और निष्क्रिय रूप में जारी किया जाता है। वे 1:50 और उच्चतर पतला होते हैं।

सभी सामग्रियां थोड़ी अधिक मात्रा में तैयार की जाती हैं.

सामग्री, एमएल	परीक्षण नलियाँ
अनुभव नियंत्रण
	सीरम	एंटीजन	हेमोलिटिक प्रणाली	कार्यशील खुराक में पूरक
½
चरण 1 आइसोटोनिक समाधान	―	0,5	0,5	1,5	1,25	1,0	0,5
परीक्षण सीरम पतला 1:10	0,5	0,5	―	―	―	―	―
कार्यशील खुराक पर एंटीजन	0,5		0,5	―	―	―	―
कार्यशील खुराक में 1:10 लागू करें	0,5	0,5	0,5	―	0,25	0,5	1,0
ट्यूबों को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और 37°C पर 45 मिनट 1 घंटे के लिए या 4°C पर 18 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है।
चरण 2 हेमोलिटिक प्रणाली	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0
ट्यूब 2, 3, 6 और 7 में पूर्ण हेमोलिसिस होने तक ट्यूबों को पूरी तरह से हिलाया जाता है और 37˚C पर इनक्यूबेट किया जाता है।
परिणाम	सकारात्मक या नकारात्मक	―	―	++++	(+)	―	―

तालिका संख्या 15

मुख्य प्रयोग का संचालन

प्रयोग स्थापित करते समय, यह अत्यंत महत्वपूर्ण है; घटकों को जोड़ने का क्रम महत्वपूर्ण है। प्रयोग दो चरणों में किया जाता है।

चरण I. आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की आवश्यक मात्रा को परीक्षण ट्यूबों में डाला जाता है, फिर पतला सीरम की आवश्यक मात्रा और एंटीजन की कार्यशील खुराक और उसी मात्रा में पूरक। प्रयोग के साथ इसमें शामिल सभी अवयवों का नियंत्रण होना चाहिए: सीरम, एंटीजन, हेमोलिटिक प्रणाली और पूरक।

ट्यूबों को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और 37°C पर 45 मिनट-1 घंटे के लिए या 4°C ("ठंड में RSC") पर 18 घंटे के लिए इनक्यूबेट किया जाता है। इस दौरान, एक विशिष्ट परिसर की उपस्थिति में, पूरक बंधन होता है। प्रतिक्रिया को "ठंड में" करने से इसकी संवेदनशीलता और विशिष्टता काफी बढ़ जाती है।

फेस II। ऊष्मायन के अंत में, सभी परीक्षण ट्यूबों में 1 मिलीलीटर हेमोलिटिक प्रणाली डाली जाती है, जिसे पहले 30 मिनट (सेंसिटाइज्ड) के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है। टेस्ट ट्यूबों को हिलाया जाता है और वापस थर्मोस्टेट में रख दिया जाता है।

लेखांकन परिणाम के बारे में. ट्यूब 2, 3, 6 और 7 में पूर्ण हेमोलिसिस (एक और दो खुराक के लिए सीरम, एंटीजन और पूरक का नियंत्रण) होने तक ट्यूबों को थर्मोस्टेट में छोड़ दिया जाता है। हेमोलिसिस सबसे पहले 7वीं टेस्ट ट्यूब में होगा, जिसमें दोगुनी मात्रा में पूरक होता है। इस ट्यूब में हेमोलिसिस होने और इसकी सामग्री पूरी तरह से पारदर्शी हो जाने के बाद, आपको शेष नियंत्रणों की विशेष रूप से सावधानीपूर्वक निगरानी करने की आवश्यकता है। जैसे ही दूसरी, तीसरी और छठी टेस्ट ट्यूब में तरल पारदर्शी हो जाता है, आपको तुरंत थर्मोस्टेट से टेस्ट ट्यूब के साथ रैक को हटा देना चाहिए। तथ्य यह है कि प्रयोग को आवश्यकता से अधिक समय तक थर्मोस्टेट में नहीं रखा गया था, यह 5वीं टेस्ट ट्यूब में थोड़ी सी मैलापन (अपूर्ण हेमोलिसिस) की उपस्थिति से संकेत मिलता है - इसमें पूरक की केवल आधी कार्यशील खुराक होती है और यदि प्रयोग किया जाता है तो पूर्ण हेमोलिसिस नहीं हो सकता है सही ढंग से स्थापित करें.

सीरम और एंटीजन नियंत्रण (ट्यूब 2 और 3) में हेमोलिसिस इंगित करता है कि उनकी खुराक सही ढंग से चुनी गई थी और न तो सीरम और न ही एंटीजन स्वयं पूरक को बांधते हैं।

हेमोलिटिक सिस्टम (टेस्ट ट्यूब 4) के नियंत्रण में, यदि यह ठीक से काम कर रहा है, तो हेमोलिसिस का निशान भी नहीं होना चाहिए - इसमें कोई पूरक नहीं है।

एक बार जब आप आश्वस्त हो जाएं कि नियंत्रण सही ढंग से पूरा हो गया है, तो आप अनुभव को ध्यान में रख सकते हैं। टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस की अनुपस्थिति को प्रतिक्रिया का सकारात्मक परिणाम माना जाता है। यह इंगित करता है कि सीरम में लिए गए एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी शामिल हैं। उन्होंने जो कॉम्प्लेक्स बनाया, वह पूरक बन गया और हेमोलिसिस प्रतिक्रिया में इसकी भागीदारी को रोक दिया। यदि टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस होता है, तो प्रतिक्रिया परिणाम नकारात्मक माना जाता है। में इस मामले मेंएंटीजन और एंटीबॉडी के बीच कोई पत्राचार नहीं है, पूरक बाध्य नहीं है और हेमोलिसिस प्रतिक्रिया में शामिल है।

रोगी के सीरम के समानांतर, एक ही प्रयोग स्पष्ट रूप से सकारात्मक सीरम (यानी, उस सीरम के साथ जिसमें किसी दिए गए एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं) और स्पष्ट रूप से नकारात्मक सीरम के साथ किया जाता है, जिसमें विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं होते हैं। यदि प्रयोग सही ढंग से स्थापित किया गया है, तो पहले मामले में हेमोलिसिस में देरी होनी चाहिए, और दूसरे मामले में, हेमोलिसिस होगा।

प्रतिक्रिया की तीव्रता इस प्रकार व्यक्त की गई है:

हेमोलिसिस की पूर्ण देरी। लाल रक्त कोशिकाएं एक समान मैलापन बनाती हैं या नीचे तक जम जाती हैं। इस स्थिति में, परखनली में तरल रंगहीन हो जाता है;

लगभग 25% लाल रक्त कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं। इसमें तलछट कम होती है, इसके ऊपर का तरल थोड़ा गुलाबी होता है। आरएससी का परिणाम भी अत्यधिक सकारात्मक आंका गया है;

लगभग 50% लाल रक्त कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं। तलछट छोटी है, तरल गुलाबी है। सकारात्मक आरएससी परिणाम;

लगभग 75% लाल रक्त कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं। हल्की सी तलछट, जिसके ऊपर गहरे रंग का तरल पदार्थ है। संदिग्ध आरएससी परिणाम;

सभी लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट कर दिया गया। तरल गहरे रंग का और पूरी तरह से पारदर्शी है। नकारात्मक आरएसके परिणाम.

इस प्रतिक्रिया का उपयोग बैक्टीरिया, वायरल, प्रोटोजोअल संक्रमण वाले रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के साथ-साथ रोगियों से पृथक वायरस की पहचान और प्रकार करने के लिए किया जाता है।

आरएससी जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं को संदर्भित करता है जिसमें एंटीजन, एंटीबॉडी और पूरक के अलावा, हेमोलिटिक प्रणाली भी भाग लेती है, जिससे प्रतिक्रिया के परिणाम सामने आते हैं। आरएससी दो चरणों में आगे बढ़ता है: पहला पूरक की भागीदारी के साथ एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की बातचीत है और दूसरा हेमोलिटिक प्रणाली का उपयोग करके पूरक बंधन की डिग्री की पहचान करना है। इस प्रणाली में भेड़ की लाल रक्त कोशिकाएं और प्रयोगशाला जानवरों को लाल रक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित करके प्राप्त हेमोलिटिक सीरम शामिल हैं। एरिथ्रोसाइट्स को 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर सीरम जोड़कर संसाधित किया जाता है - संवेदनशील बनाया जाता है। संवेदनशील भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का विश्लेषण केवल तभी होता है जब वे हेमोलिटिक पूरक प्रणाली में शामिल होते हैं। इसकी अनुपस्थिति में लाल रक्त कोशिकाओं में परिवर्तन नहीं होता है। आरएससी के परिणाम परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी की उपस्थिति पर निर्भर करते हैं। यदि सीरम में प्रतिक्रिया में उपयोग किए गए एंटीजन के समरूप एंटीबॉडी होते हैं, तो परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बांधता है और पूरक बांधता है। हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ते समय, इस मामले में, हेमोलिसिस नहीं होगा, क्योंकि सभी पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के विशिष्ट बंधन पर खर्च किए जाते हैं।

लाल रक्त कोशिकाएं अपरिवर्तित रहती हैं, इसलिए टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस की अनुपस्थिति को सकारात्मक आरबीसी के रूप में दर्ज किया जाता है। सीरम में एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी की अनुपस्थिति में, एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक मुक्त रहता है। जब एक हेमोलिटिक सिस्टम जोड़ा जाता है, तो पूरक इससे जुड़ जाता है और लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस का कारण बनता है। लाल रक्त कोशिकाओं का विनाश और उनका हेमोलिसिस एक नकारात्मक प्रतिक्रिया की विशेषता है।

आरएससी को चरणबद्ध करने के लिए, निम्नलिखित की आवश्यकता होती है: रोगी का सीरम, पूरक, एक हेमोलिटिक प्रणाली जिसमें भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम, साथ ही एक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान शामिल है।

प्रतिक्रिया सीरोलॉजिकल ट्यूबों में की जाती है। भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं को डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान से तीन बार धोकर प्राप्त किया जाता है। हेमोलिटिक सीरम एम्पौल्स में तैयार किया जाता है, जिसका लेबल इसके टिटर को इंगित करता है, यानी, सीरम का अधिकतम पतलापन, जो पूरक की उपस्थिति में लाल रक्त कोशिकाओं में जोड़े जाने पर भी हेमोलिसिस का कारण बनता है। हेमोलिटिक सीरम खरगोश जैसे जानवरों को भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं से प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया जाता है। प्रतिक्रिया स्थापित करते समय, सीरम का उपयोग ट्रिपल टिटर में किया जाता है। उदाहरण के लिए, हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक 1:1200 है, और कार्यशील तनुकरण 1:400 है। ताजा गिनी पिग रक्त सीरम (24-48 घंटों के भीतर) या ampoules में सूखा पूरक पूरक के रूप में उपयोग किया जाता है।

आरएससी करने से पहले, पूरक को 1:10 में पतला किया जाता है और अनुमापांक स्थापित करने के लिए अनुमापन किया जाता है - पूरक की सबसे छोटी मात्रा जो इस प्रतिक्रिया में प्रयुक्त हेमोलिटिक प्रणाली के साथ संयुक्त होने पर लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस द्वारा उत्पन्न होती है। एंटीजन के संभावित पूरक-विरोधी गुणों को ध्यान में रखते हुए, प्रतिक्रिया का मंचन करते समय, पूरक के स्थापित कार्यशील अनुमापांक में 20-30% की वृद्धि की जाती है।

आरएससी के लिए एंटीजन मारे गए जीवाणुओं के निलंबन, इन निलंबन से तैयार अर्क और रोगाणुओं के व्यक्तिगत रासायनिक अंश हैं। एंटीजन के लिए मुख्य आवश्यकता पूरक गतिविधि के निषेध की अनुपस्थिति है। इसमें पूरक-विरोधी गुण नहीं होने चाहिए। एंटीजन के इन गुणों की पहचान करने के लिए, प्रतिक्रिया में प्रयुक्त एंटीजन की उपस्थिति में पूरक को अतिरिक्त रूप से शीर्षक दिया जाता है। आरएससी के मंचन के लिए कुछ योजनाएं हैं। प्रतिक्रिया के परिणामों को हेमोलिटिक प्रणाली में लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस की उपस्थिति या अनुपस्थिति द्वारा ध्यान में रखा जाता है। आरएससी का उपयोग सिफलिस (वास्सरमैन प्रतिक्रिया), गोनोरिया (बोर्डेट-गेंगौ प्रतिक्रिया), टोक्सोप्लाज़मोसिज़, रिकेट्सियल और के निदान में किया जाता है। वायरल रोग.

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) यह है कि जब एंटीजन और एंटीबॉडी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, तो वे एक प्रतिरक्षा परिसर बनाते हैं जिसमें पूरक (सी) एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े के माध्यम से जुड़ा होता है, यानी, पूरक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से बंधा होता है। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है, तो पूरक मुक्त रहता है।

एजी और एटी की विशिष्ट अंतःक्रिया पूरक के सोखने (बंधन) के साथ होती है। चूँकि पूरक निर्धारण की प्रक्रिया दृष्टिगत रूप से स्पष्ट नहीं है, जे. बोर्डेट और ओ. झांगू ने एक संकेतक के रूप में हेमोलिटिक प्रणाली (भेड़ लाल रक्त कोशिकाओं + हेमोलिटिक सीरम) का उपयोग करने का प्रस्ताव रखा, जो दर्शाता है कि पूरक एजी-एटी कॉम्प्लेक्स द्वारा तय किया गया है या नहीं। यदि एजी और एटी एक-दूसरे से मेल खाते हैं, यानी एक प्रतिरक्षा कॉम्प्लेक्स का गठन किया गया है, तो पूरक इस कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है और हेमोलिसिस नहीं होता है। यदि एटी एजी के अनुरूप नहीं है, तो कॉम्प्लेक्स नहीं बनता है और पूरक, मुक्त रहकर, दूसरी प्रणाली के साथ जुड़ जाता है और हेमोलिसिस का कारण बनता है।

प्रतिक्रिया प्रगति

प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है जिसमें दो प्रणालियाँ शामिल होती हैं; बैक्टीरियल और हेमोलिटिक। पहली प्रतिक्रिया (विशिष्ट) में एंटीजन 4-+ एंटीबॉडी + पूरक शामिल है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया परिणाम, जो तब होता है जब एंटीबॉडी एक एंटीजन से मेल खाते हैं, सोखने के साथ एक विशिष्ट जीवाणु एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स के गठन की विशेषता होती है, या, जैसा कि वे कहते हैं, "बाध्य" पूरक। अदृश्य रहते हुए, कॉम्प्लेक्स उस वातावरण में कोई बाहरी परिवर्तन नहीं करता है जिसमें इसका गठन किया गया था। एक नकारात्मक आरएससी परिणाम एंटीजन और सीरम एंटीबॉडी के बीच विशिष्ट संबंध की अनुपस्थिति में होता है और मुक्त सक्रिय पूरक के संरक्षण की विशेषता है। आरएससी का पहला चरण थर्मोस्टेट में 37°C (1-2 घंटे) पर या रेफ्रिजरेटर में 3-4°C (18-20 घंटे) पर किया जा सकता है। ठंड में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिरक्षा परिसर के लंबे समय तक गठन के साथ, पूरक का अधिक पूर्ण बंधन होता है और, परिणामस्वरूप, प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता बढ़ जाती है। तुलनात्मक प्रयोगों का संचालन करते समय, सोवियत प्रतिरक्षाविज्ञानी शिक्षाविद। वी.आई. इओफ़े और उनके छात्रों ने दिखाया कि ठंड में लंबे समय तक पूरक निर्धारण की स्थिति में, 100-500 गुना छोटी मात्रा में एंटीजन को पकड़ना और प्राप्त करना संभव है सकारात्मक नतीजे 1-2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पूरक निर्धारण प्रयोग की तुलना में प्रतिरक्षा सीरम के उच्च तनुकरण पर प्रतिक्रिया का दूसरा चरण (सूचक) हेमोलिटिक प्रणाली के अभिकर्मकों (3% निलंबन का मिश्रण) के बीच होता है। एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम समान मात्रा में) 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर केवल पूरक की उपस्थिति में जो प्रतिक्रिया के पहले चरण (नकारात्मक प्रतिक्रिया) से मुक्त रहे। मुक्त सक्रिय पूरक की अनुपस्थिति में, विशिष्ट हेमोलिसिन के प्रभाव में लाल रक्त कोशिकाओं का हेमोलिसिस नहीं होता है (प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है)।

अवयव

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) एक जटिल सीरोलॉजिकल प्रतिक्रिया है। इसे पूरा करने के लिए, 5 अवयवों की आवश्यकता होती है, अर्थात्: एजी, एटी और पूरक (पहली प्रणाली), भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और हेमोलिटिक सीरम (दूसरी प्रणाली)।

आरएससी के लिए एंटीजन विभिन्न मारे गए सूक्ष्मजीवों, उनके लाइसेट्स, बैक्टीरिया के घटकों, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और की संस्कृतियां हो सकती हैं। सामान्य अंग, ऊतक लिपिड, वायरस और वायरस युक्त सामग्री।

ताजा या सूखे गिनी पिग सीरम का उपयोग पूरक के रूप में किया जाता है।

प्रतिक्रिया तंत्र

आरएसके दो चरणों में किया जाता है: पहला चरण - तीन घटकों एंटीजन + एंटीबॉडी + पूरक वाले मिश्रण का ऊष्मायन; दूसरा चरण (संकेतक) - भेड़ के एरिथ्रोसाइट्स और उनके प्रति एंटीबॉडी वाले हेमोलिटिक सीरम से युक्त एक हेमोलिटिक प्रणाली को जोड़कर मिश्रण में मुक्त पूरक का पता लगाना। प्रतिक्रिया के पहले चरण में, जब एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है, पूरक बंधता है, और फिर दूसरे चरण में, एंटीबॉडी द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस नहीं होगा; प्रतिक्रिया सकारात्मक है. यदि एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे से मेल नहीं खाते हैं (परीक्षण नमूने में कोई एंटीजन या एंटीबॉडी नहीं है), तो पूरक मुक्त रहता है और दूसरे चरण में एरिथ्रोसाइट - एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स में शामिल हो जाएगा, जिससे हेमोलिसिस हो जाएगा; प्रतिक्रिया नकारात्मक है.

आवेदन

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग इसके लिए किया जा सकता है:
1) ज्ञात प्रकृति के एंटीजन के साथ उनकी बातचीत के आधार पर अज्ञात सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी की पहचान;
2) किसी ज्ञात विशिष्ट सीरम के साथ प्रतिक्रिया में एंटीजन के गुणों का अध्ययन करना। आरएससी के मंचन के लिए सामग्री तैयार करना।

1. अनुसंधान के लिए प्राप्त रक्त सीरम को, प्रतिक्रिया की पूर्व संध्या पर, अपने स्वयं के पूरक को निष्क्रिय करने के लिए पानी के स्नान में 56 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट तक गर्म किया जाता है। निष्क्रिय सीरम को 3-4°C पर 5-6 दिनों तक संग्रहित किया जा सकता है। प्रयोग के दिन, सीरम को 1:5 के अनुपात में आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से पतला किया जाता है (परीक्षण सीरम का 0.1 मिली + आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल का 0.4 मिली)।

2. सीएससी के उत्पादन के लिए एंटीजन विभिन्न रोगाणुओं, जीवाणु प्रोटीन और माइक्रोबियल संस्कृतियों से प्राप्त अर्क, पैथोलॉजिकल रूप से परिवर्तित और सामान्य अंगों और ऊतकों की संस्कृतियां हो सकती हैं। एंटीजन तैयारी की विशिष्टताएं संक्रामक प्रक्रिया की प्रकृति और इसके रोगज़नक़ की विशेषताओं से निर्धारित होती हैं।

3. पूरक 3-5 स्वस्थ गिनी सूअरों से प्राप्त सीरम का मिश्रण है, या ampoules में सूखा पूरक है।

उपयोग से तुरंत पहले, स्टॉक समाधान प्राप्त करने के लिए गिनी पिग सीरम को 1:10 के अनुपात में सोडियम क्लोराइड के आइसोटोनिक समाधान के साथ पतला किया जाता है।

4. प्रयोग करने से पहले, हेमोलिटिक सीरम को 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर गर्म करके निष्क्रिय किया जाता है। मुख्य आरएससी प्रयोग करने के लिए, साथ ही पूरक और एंटीजन को टाइट्रेट करने के लिए, ट्रिपल टिटर में हेमोलिटिक सीरम का उपयोग किया जाता है। उदाहरण के लिए, यदि हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक 1:1800 है, तो प्रतिक्रिया में 1:600 ​​के सीरम तनुकरण का उपयोग किया जाता है।

5. एरिथ्रोसाइट्स डिफाइब्रिनेटेड भेड़ के रक्त से प्राप्त होते हैं। फाइब्रिन फिल्मों को हटाने के लिए, रक्त को तीन-परत धुंध फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। परिणामस्वरूप निस्पंद को सेंट्रीफ्यूज किया जाता है, सीरम को चूसा जाता है और सूखा दिया जाता है, और एरिथ्रोसाइट्स को आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ 3-4 बार सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा धोया जाता है। जब लाल रक्त कोशिकाओं को आखिरी बार धोया जाता है, तो तरल की सतह पर तैरने वाली परत पूरी तरह से पारदर्शी होनी चाहिए। आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में धुली हुई लाल रक्त कोशिकाओं से 3% सस्पेंशन तैयार किया जाता है। उपरोक्त तरीके से आरएससी में शामिल सामग्री तैयार करने के बाद, हेमोलिटिक सीरम, पूरक और एंटीजन के अनुमापन के लिए आगे बढ़ें।



पाठ्यपुस्तक में सात भाग हैं। भाग एक - "सामान्य सूक्ष्म जीव विज्ञान" - बैक्टीरिया की आकृति विज्ञान और शरीर विज्ञान के बारे में जानकारी शामिल है। भाग दो बैक्टीरिया के आनुवंशिकी के लिए समर्पित है। भाग तीन - "जीवमंडल का माइक्रोफ्लोरा" - माइक्रोफ्लोरा की जांच करता है पर्यावरण, प्रकृति में पदार्थों के चक्र में इसकी भूमिका, साथ ही मानव माइक्रोफ्लोरा और इसका महत्व। भाग चार - "संक्रमण का सिद्धांत" - सूक्ष्मजीवों के रोगजनक गुणों, उनकी भूमिका के लिए समर्पित है संक्रामक प्रक्रिया, और इसमें एंटीबायोटिक दवाओं और उनकी कार्रवाई के तंत्र के बारे में भी जानकारी शामिल है। भाग पाँच - "प्रतिरक्षा का सिद्धांत" - प्रतिरक्षा के बारे में आधुनिक विचार शामिल हैं। छठा भाग - "वायरस और उनके कारण होने वाली बीमारियाँ" - वायरस के मूल जैविक गुणों और उनके कारण होने वाली बीमारियों के बारे में जानकारी प्रदान करता है। भाग सात - "निजी चिकित्सा सूक्ष्म जीव विज्ञान" - कई के रोगजनकों की आकृति विज्ञान, शरीर विज्ञान, रोगजनक गुणों के बारे में जानकारी शामिल है संक्रामक रोग, और इसके बारे में भी आधुनिक तरीकेउनका निदान, विशिष्ट रोकथामऔर थेरेपी.

पाठ्यपुस्तक छात्रों, स्नातक छात्रों और उच्च चिकित्सा के शिक्षकों के लिए है शिक्षण संस्थानों, विश्वविद्यालय, सभी विशिष्टताओं के सूक्ष्म जीवविज्ञानी और अभ्यास करने वाले डॉक्टर।

5वां संस्करण, संशोधित और विस्तारित

किताब:

<<< Назад

आगे >>>

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया

विभिन्न प्रकृति के एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को विशेष रूप से बांधने की पूरक की अनूठी क्षमता पाई गई है व्यापक अनुप्रयोगपूरक निर्धारण प्रतिक्रिया (सीएफआर) में। आरएससी का एक विशेष लाभ यह है कि इसमें शामिल एंटीजन की प्रकृति (कॉर्पसकुलर या घुलनशील) कोई मायने नहीं रखती है, क्योंकि पूरक आईजीजी और आईजीएम से संबंधित किसी भी एंटीबॉडी के एफसी टुकड़े को बांधता है, भले ही इसकी एंटीबॉडी विशिष्टता कुछ भी हो। इसके अलावा, आरएसए बहुत संवेदनशील है: यह आपको उदाहरण के लिए, वर्षा प्रतिक्रिया की तुलना में 10 गुना कम एंटीबॉडी की मात्रा का पता लगाने की अनुमति देता है। आरएससी का प्रस्ताव 1901 में जे. बोर्डेट और ओ. झांग द्वारा किया गया था। यह पूरक के दो गुणों पर आधारित है:

1) एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से जुड़ने की क्षमता;

2) हेमोलिटिक सीरम प्राप्त करने के लिए लाल रक्त कोशिकाओं का विश्लेषण किया जाता है।

आरएसके दो चरणों में किया जाता है, और इसमें क्रमशः दो प्रणालियाँ शामिल होती हैं - प्रयोगात्मक, या नैदानिक, और संकेतक। डायग्नोस्टिक प्रणाली में परीक्षण (या डायग्नोस्टिक) सीरम होता है, जिसे इसमें मौजूद पूरक और एंटीजन को निष्क्रिय करने के लिए प्रतिक्रिया करने से पहले 30 मिनट के लिए 56 डिग्री सेल्सियस पर गर्म किया जाता है। इस प्रणाली में मानक पूरक जोड़ा जाता है। इसका स्रोत ताजा या सूखा गिनी पिग मट्ठा है। मिश्रण को एक घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी हैं, तो वे अतिरिक्त एंटीजन के साथ बातचीत करेंगे, और परिणामी एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स अतिरिक्त पूरक को बांध देंगे। यदि सीरम में कोई एंटीबॉडी नहीं हैं, तो एंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का निर्माण नहीं होगा, और पूरक मुक्त रहेगा। प्रतिक्रिया के इस चरण में आमतौर पर पूरक निर्धारण की कोई अभिव्यक्तियाँ दिखाई नहीं देती हैं। इसलिए, इस प्रश्न को स्पष्ट करने के लिए कि पूरक निर्धारण हुआ है या नहीं, एक दूसरा संकेतक सिस्टम (निष्क्रिय हेमोलिटिक सीरम + भेड़ एरिथ्रोसाइट्स) जोड़ा जाता है, और सभी आरएससी घटकों के मिश्रण को फिर से 30 - 60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। जिसमें प्रतिक्रिया के परिणामों का आकलन किया जाता है। यदि निदान प्रणाली में पहले चरण में पूरक बंधा हुआ है, यानी रोगी के सीरम में एंटीबॉडी हैं, और पूरक एंटीबॉडी + + एंटीजन कॉम्प्लेक्स से बंधा हुआ है, तो एरिथ्रोसाइट्स का कोई विश्लेषण नहीं होगा - आरबीसी सकारात्मक है: तरल है रंगहीन, ट्यूब के नीचे एरिथ्रोसाइट्स का तलछट होता है। यदि सीरम में कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं और डायग्नोस्टिक सिस्टम में पूरक बंधन नहीं होता है, यानी आरएससी नकारात्मक है, तो डायग्नोस्टिक सिस्टम में अव्ययित पूरक लाल रक्त कोशिकाओं + संकेतक प्रणाली और हेमोलिसिस के एंटीबॉडी के परिसर से बांधता है होता है: टेस्ट ट्यूब में "लैकर्ड ब्लड", लाल रक्त कोशिका तलछट संख्या। आरएससी की तीव्रता का आकलन हेमोलिसिस विलंब की डिग्री और लाल रक्त कोशिका तलछट की उपस्थिति के आधार पर चार-क्रॉस प्रणाली का उपयोग करके किया जाता है। प्रतिक्रिया उचित नियंत्रण के साथ होती है: सीरम नियंत्रण (एंटीजन के बिना) और एंटीजन नियंत्रण (सीरम के बिना), क्योंकि कुछ सीरा और कुछ एंटीजन में पूरक-विरोधी प्रभाव होता है। आरएससी करने से पहले, परीक्षण सीरम या एंटीजन को छोड़कर, इसमें शामिल सभी घटकों को सावधानीपूर्वक अनुमापन के अधीन किया जाता है। प्रतिक्रिया में पूरक की सटीक खुराक शामिल करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है, क्योंकि इसकी कमी या अधिकता से प्रतिक्रिया हो सकती है गलत परिणाम. पूरक अनुमापांक वह न्यूनतम मात्रा है, जो हेमोलिटिक सीरम की कार्यशील खुराक की उपस्थिति में, लाल रक्त कोशिकाओं का पूर्ण विघटन सुनिश्चित करती है। मुख्य प्रयोग स्थापित करने के लिए, स्थापित अनुमापांक की तुलना में 20-25% अधिक पूरक खुराक लें। हेमोलिटिक सीरम का अनुमापांक इसका अधिकतम तनुकरण है, जो 10% पूरक समाधान की समान मात्रा के साथ मिश्रित होने पर 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 1 घंटे के भीतर लाल रक्त कोशिकाओं की संबंधित खुराक को पूरी तरह से हेमोलाइज कर देता है। मुख्य प्रयोग में सीरम को उसके अनुमापांक के 1/3 तक पतला करना शामिल है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया पारंपरिक में से एक है सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं, कई वायरल बीमारियों के निदान के लिए उपयोग किया जाता है, और कुछ अन्य पता लगाने के तरीकों का आधार भी बनता है एंटीवायरल एंटीबॉडीज. यद्यपि उदासीनीकरण की प्रतिक्रिया, रक्तगुल्म का निषेध, अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परखसंवेदनशीलता में पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया से बेहतर, हालांकि, तकनीक की सादगी, एंटीबॉडी का शीघ्र पता लगाना, साथ ही वायरल एंटीजन का पता लगाना जिनमें हेमग्लूटिनेटिंग गुण नहीं होते हैं, वायरोलॉजिकल अध्ययनों में इसके व्यापक उपयोग की व्याख्या करते हैं।

इसके उत्पादन के लिए एंटीजेनिक दवाओं की इतनी उच्च स्तर की सांद्रता और शुद्धता की आवश्यकता नहीं होती है, जो कई अन्य प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रतिक्रियाओं के लिए आवश्यक हैं। इसके अलावा, कई वायरस के पूरक-फिक्सिंग एंटीजन की समूह विशिष्टता बड़े पैमाने पर निदान में पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग करना संभव बनाती है: यह प्रतिक्रिया तनाव अंतर को प्रकट नहीं करती है और वायरस के बीच एंटीजेनिक संबंधों का अध्ययन करते समय विशेष महत्व रखती है।

नाम ही काफी हद तक विधि के सार को दर्शाता है, जिसमें दो अलग-अलग प्रतिक्रियाएं शामिल हैं। पहले चरण में, प्रतिक्रिया में एंटीजन और एंटीबॉडी शामिल होते हैं (इन घटकों में से एक पहले से ज्ञात होता है), साथ ही अनुमापित मात्रा में पूरक भी शामिल होते हैं। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी मेल खाते हैं, तो उनके जटिल बंधन पूरक होते हैं, जिसे दूसरे चरण में एक संकेतक प्रणाली (भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं और उनके लिए एंटीसेरम का मिश्रण) का उपयोग करके पता लगाया जाता है। यदि एंटीजन और एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया के दौरान पूरक बंधा हुआ है, तो भेड़ की लाल रक्त कोशिकाओं का लसीका नहीं होता है ( सकारात्मक प्रतिक्रियापूरक निर्धारण)। नकारात्मक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया के मामले में, अनफिक्स्ड पूरक हेमोलिसिस को बढ़ावा देता है, जिसका उपयोग प्रतिक्रिया के परिणामों का न्याय करने के लिए किया जाता है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया के मुख्य घटक एंटीजन (ज्ञात या पता लगाने योग्य), एंटीबॉडी (ज्ञात एंटीसेरा या परीक्षण सेरा), पूरक, हेमोलिटिक सीरम और भेड़ लाल रक्त कोशिकाएं हैं; आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान (पीएच 7.2-7.4) या विभिन्न बफर समाधानों का उपयोग मंदक के रूप में किया जाता है। एंटीजन और सीरा पूरक-विरोधी हो सकते हैं, अर्थात। पूरक को सोखने की क्षमता, जो हेमोलिसिस में देरी करती है और प्रतिक्रिया के परिणाम को विकृत करती है।

सीएससी के लिए एंटीजन संक्रमित जानवरों के अंगों, संक्रमित चिकन भ्रूण के एलांटोइक या एमनियोटिक द्रव, साथ ही ऊतक कोशिका संस्कृतियों में वायरस की खेती के बाद संस्कृति तरल पदार्थ से तैयार किए जाते हैं। एंटीजेनिक तैयारियों में हमेशा पशु कोशिकाओं या ऊतक संस्कृतियों से बहुत सारे गिट्टी पदार्थ होते हैं, जो प्रतिक्रिया के परिणामों को विकृत भी कर सकते हैं।

परिणामी वायरल एंटीजन निष्क्रिय कर दिए जाते हैं, कार्यशील खुराक, साथ ही पूरक-विरोधी और हेमोलिटिक गुण निर्धारित किए जाते हैं। फिर एंटीजन को पूरक की उपस्थिति में शीर्षक दिया जाता है।

प्रतिक्रिया के मंचन में दूसरा मुख्य घटक पूरक है। इस शब्द का अर्थ है जटिल सिस्टमजानवरों और मनुष्यों के रक्त में मौजूद प्रोटीन और कारक। आमतौर पर, गिनी पिग रक्त सीरम का उपयोग पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया में किया जाता है। पूरक की गतिविधि (अनुमापांक) इसकी सबसे छोटी मात्रा है, जिसकी उपस्थिति में हेमोलिसिन प्रयुक्त हेमोलिटिक प्रणाली के पूर्ण हेमोलिसिस का कारण बनता है।

वायरस के लिए पूरक-फिक्सिंग एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए, सीरम को 30 मिनट के लिए 560C पर पूरक को खत्म करने के लिए निष्क्रिय करना आवश्यक है। प्रतिरक्षित पशुओं के सीरा का उपयोग आमतौर पर संदर्भ सीरा के रूप में किया जाता है। इसके अलावा, टीकाकरण के लिए, वायरल एंटीजन का उपयोग किया जाता है जो ऊतक अशुद्धियों से पूरी तरह से शुद्ध होते हैं, अन्यथा एक स्पष्ट गैर-विशिष्ट प्रतिक्रिया होती है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का एक अनिवार्य घटक हेमोलिटिक प्रणाली है, जिसमें भेड़ एरिथ्रोसाइट्स और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के साथ खरगोशों को हाइपरइम्यूनाइजिंग द्वारा प्राप्त हेमोलिटिक सीरम शामिल है।

पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया को निष्पादित करने के लिए, निम्नलिखित संशोधनों का उपयोग किया जाता है: ताकाची प्रणाली माइक्रोटाइट्रेटर में पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया की सूक्ष्म विधि, दीर्घकालिक पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, अप्रत्यक्ष पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, एक जेल में पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, माइक्रोड्रॉपलेट पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया, ठोस-आधारित पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया।

यद्यपि पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता कम है, लेकिन इसमें उच्च विशिष्टता है। इस संबंध में, युवा मवेशियों में वायरल न्यूमोएंटेराइटिस के निदान के लिए इसका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।