ಔಷಧೀಯ ಉಲ್ಲೇಖ ಪುಸ್ತಕ ಜಿಯೋಟಾರ್. ಔಷಧಿಗಳ ಬಗ್ಗೆ ಎಲ್ಲಾ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ 2 ಬಿ ಮಾನವ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಸೂಚನೆಗಳು

ಆವಿಷ್ಕಾರವು ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ ತಳೀಯ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್, ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ, ಔಷಧ, ಔಷಧಶಾಸ್ತ್ರ. ಹೊಸ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಮಲ್ಟಿಕಾಪಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pSX50, ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಆಲ್ಫಾ-2b ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಪ್ರವರ್ತಕಗಳ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್. ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pSX50 ನೊಂದಿಗೆ ಸ್ವೀಕರಿಸುವವರ ಸ್ಟ್ರೈನ್ E. ಕೊಲಿ BL21 ನ ಕೋಶಗಳ ರೂಪಾಂತರದ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಸ್ಟ್ರೈನ್ E. ಕೋಲಿ SX50 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಯಿತು - 0.9-1.0 ಗ್ರಾಂ ವರೆಗೆ ಉತ್ಪಾದಕತೆಯೊಂದಿಗೆ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಹ್ಯೂಮನ್ ಆಲ್ಫಾ -2b ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ನಿರ್ಮಾಪಕ 1 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಆಲ್ಫಾ-2ಬಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್. ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಧಾನವು ಇ. ಕೊಲಿ ಎಸ್ಎಕ್ಸ್ 50 ರ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ತಳಿಯ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿದೆ ಮತ್ತು ಇದರೊಂದಿಗೆ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅದರ ಆಳವಾದ ಕೃಷಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಕಡಿಮೆಯಾದ ವಿಷಯಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪೋಷಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್, ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳ ಕೋಶಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ನಾಶ ತೀವ್ರ ರಕ್ತದೊತ್ತಡ, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್‌ನ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕರಗುವಿಕೆ, ನಂತರ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಪುನರುಜ್ಜೀವನವನ್ನು ಚೋಟ್ರೊಪಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಅದರ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ +2 ಅಯಾನುಗಳು, SM ಪ್ರಕಾರದ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ರಾಳಗಳ ಮೇಲೆ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಸೆಫ್ಸ್ರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಡೆಕ್ಸ್ 75 ವಿಧದ ರೆಸಿನ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರೇಶನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ 99% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶುದ್ಧತೆಯ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಸ್ತುವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. RF HPLC ಪ್ರಕಾರ ಬೆಳ್ಳಿ ಮತ್ತು 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಕಲೆ ಹಾಕುವಾಗ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುವುದು ಮತ್ತು 1 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಕನಿಷ್ಠ 400-800 mg ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ ಪೈರೋಜೆನ್‌ಗಳನ್ನು (LAL ಪರೀಕ್ಷೆ) ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ. 3 ಎನ್. ಮತ್ತು 3 ಸಂಬಳದ ಸ್ಥಾನಗಳು, 6 ಅನಾರೋಗ್ಯ.

RF ಪೇಟೆಂಟ್ 2242516 ಗಾಗಿ ರೇಖಾಚಿತ್ರಗಳು

ಆವಿಷ್ಕಾರವು ಜೈವಿಕ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದಿಂದ ಪಡೆದ ತಳೀಯವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಿದ ಔಷಧಿಗಳಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ ವಿಧಾನಗಳಿಗೆ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಉತ್ಪಾದನೆಪುನರ್ಸಂಯೋಜಕ ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಉದ್ದೇಶಗಳು(ಇನ್ನು ಮುಂದೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಎಂದು ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ), ಹಾಗೆಯೇ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ (ಇ.ಕೋಲಿ) ಮತ್ತು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ತಳಿಗಳಿಗೆ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಳು 15,000 ರಿಂದ 21,000 ಡಾಲ್ಟನ್‌ಗಳ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಣುಗಳಾಗಿವೆ ಮತ್ತು ವೈರಲ್ ಸೋಂಕು ಅಥವಾ ಇತರ ರೋಗಕಾರಕಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಳ ಮೂರು ಮುಖ್ಯ ಗುಂಪುಗಳಿವೆ: ಆಲ್ಫಾ, ಬೀಟಾ ಮತ್ತು ಗಾಮಾ. ಈ ಗುಂಪುಗಳು ಸ್ವತಃ ಏಕರೂಪವಾಗಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಹಲವಾರು ವಿಭಿನ್ನ ಆಣ್ವಿಕ ಜಾತಿಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರಬಹುದು. ಹೀಗಾಗಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾದ 14 ಕ್ಕೂ ಹೆಚ್ಚು ಆನುವಂಶಿಕ ಪ್ರಭೇದಗಳನ್ನು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ, ಅವುಗಳು ಆಸಕ್ತಿ ಮತ್ತು ಕಂಡುಕೊಳ್ಳುತ್ತವೆ ವ್ಯಾಪಕ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ವೈದ್ಯಕೀಯದಲ್ಲಿ ಆಂಟಿವೈರಲ್, ಆಂಟಿಪ್ರೊಲಿಫೆರೇಟಿವ್ ಮತ್ತು ಇಮ್ಯುನೊಮಾಡ್ಯುಲೇಟರಿ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳಾಗಿ.

ವೈರಸ್ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಪ್ರಚೋದಕಗಳಿಂದ (SU1713591, RU 2066188, RU 2080873) ಪ್ರೇರಿತವಾದ ಮಾನವ ದಾನಿ ರಕ್ತದ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ಗಳಿಂದ ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯುವ ವಿಧಾನಗಳಿವೆ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಈ ವಿಧಾನಗಳ ಮುಖ್ಯ ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಬಿ ಮತ್ತು ಸಿ ವೈರಸ್, ಇಮ್ಯುನೊ ಡಿಫಿಷಿಯನ್ಸಿ ವೈರಸ್, ಇತ್ಯಾದಿಗಳಂತಹ ಮಾನವ ವೈರಸ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನದ ಮಾಲಿನ್ಯದ ಸಾಧ್ಯತೆ.

ಪ್ರಸ್ತುತ, ಸೂಕ್ಷ್ಮ ಜೀವವಿಜ್ಞಾನದ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯಿಂದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಧಾನವು ಹೆಚ್ಚು ಭರವಸೆಯೆಂದು ಗುರುತಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ, ಇದು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಅಗ್ಗದ ಆರಂಭಿಕ ವಸ್ತುಗಳಿಂದ ಗಣನೀಯವಾಗಿ ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯೊಂದಿಗೆ ಗುರಿ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಇಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾದ ವಿಧಾನಗಳು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಗೆ ಸೂಕ್ತವಾದ ರಚನಾತ್ಮಕ ಜೀನ್‌ನ ರೂಪಾಂತರಗಳನ್ನು ರಚಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುವಂತೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಹಾಗೆಯೇ ಅದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯನ್ನು ನಿಯಂತ್ರಿಸುವ ನಿಯಂತ್ರಕ ಅಂಶಗಳು.

ಬಳಸಿದ ಆರಂಭಿಕ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳು ವಿವಿಧ ವಿನ್ಯಾಸಗಳುಪಿಚಿಯಾ ಪ್ಯಾಸ್ಟೋರಿಸ್, ಸ್ಯೂಡೋಮೊನಾಸ್ ಪುಟಿಡಾ ಮತ್ತು ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ತಳಿಗಳು.

P. ಪ್ಯಾಸ್ಟೋರಿಸ್ ಅನ್ನು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ನಿರ್ಮಾಪಕರಾಗಿ ಬಳಸುವ ಅನನುಕೂಲತೆ (J.N. ಗಾರ್ಸಿಯಾ, J.A. Aguiar ಮತ್ತು ಇತರರು. //Picia pastoris ನಲ್ಲಿ ಮಾನವ IFN-2b ನ ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ.// Biotecnologia Aplicada, 12(3),152-155, 1995 ), ಈ ರೀತಿಯ ಯೀಸ್ಟ್‌ನ ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಅತ್ಯಂತ ಕಷ್ಟಕರವಾಗಿವೆ, ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪ್ರಚೋದಕದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಮೆಥನಾಲ್ ಅನ್ನು ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಅವಶ್ಯಕತೆಯಿದೆ. Ps ಅನ್ನು ಬಳಸುವ ಅನಾನುಕೂಲತೆ. ಪುಟಿಡಾ (SU1364343, SU1640996, SU1591484, RU1616143, RU2142508) ಕಡಿಮೆ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಹುದುಗುವಿಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಸಂಕೀರ್ಣತೆಯಾಗಿದೆ (1 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ 10 ಮಿಗ್ರಾಂ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್). ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ತಳಿಗಳ ಬಳಕೆ ಹೆಚ್ಚು ಉತ್ಪಾದಕವಾಗಿದೆ (ಸೆಮಿನ್. ಓಂಕೋಲ್., 1997, ಐಯುನ್; 24 (3 ಸಪ್ಲಿ. 9): S9-41-S9-51).

ಹೆಚ್ಚಿನ ಸಂಖ್ಯೆಯ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ರಚಿಸಲಾದ ಇ. ಕೊಲಿ ತಳಿಗಳು ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ವ್ಯಕ್ತಪಡಿಸುತ್ತವೆ ಎಂದು ತಿಳಿದುಬಂದಿದೆ: E. ಕೊಲಿ ATCC 31633 ಮತ್ತು 31644 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 ಅಥವಾ Z-pBR 322(Pstl)/ HclN SN 35 -AHL6 (SU 1764515), E. ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ pINF-AP2 (SU 1312961), E. ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ pINF-F-Pa (AU 1312962), E. Coli ಸ್ಟ್ರೈನ್ SG 20050 ಜೊತೆಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SG 20050 (V.K/20050 P20K/dko ಮತ್ತು ಇತರೆ ಜೈವಿಕ ರಸಾಯನಶಾಸ್ತ್ರ, 1987, v. 13, ಸಂ. 9, pp. 1186-1193), ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pINF14 (SU 1703691) ಜೊತೆಗೆ ಸ್ಟ್ರೈನ್ E. ಕೋಲಿ SG 20050 (p20050) ಮತ್ತು ಇತ್ಯಾದಿ. ಈ ತಳಿಗಳ ಬಳಕೆಯ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನಗಳ ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಅವುಗಳ ಅಸ್ಥಿರತೆ, ಜೊತೆಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಸಾಕಷ್ಟು ಮಟ್ಟ.

ಬಳಸಿದ ತಳಿಗಳ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳ ಜೊತೆಗೆ, ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ದಕ್ಷತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ಬಳಸುವ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿರುತ್ತದೆ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ತಿಳಿದಿರುವ ವಿಧಾನವಿದೆ, ಇದು Ps ಕೋಶಗಳನ್ನು ಬೆಳೆಸುವುದನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಪುಟಿಡಾ, ಜೀವರಾಶಿ ನಾಶ, ಪಾಲಿಎಥಿಲೆನಿಮೈನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ, ಅಮೋನಿಯಂ ಸಲ್ಫೇಟ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಭಿನ್ನರಾಶಿ, ಫಿನೈಲ್ಸಿಲೋಕ್ರೋಮ್ C-80 ನಲ್ಲಿ ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, ಲೈಸೇಟ್‌ನ pH ಭಿನ್ನರಾಶಿ, ಅದರ ಏಕಾಗ್ರತೆ ಮತ್ತು ಡಯಾಫಿಲ್ಟ್ರೇಶನ್, ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ DE-52 ನಲ್ಲಿ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ, a pH eluditionent ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ SM -52, ಸೆಫಡೆಕ್ಸ್ G-100 (SU 1640996) ನಲ್ಲಿ ಫಿಲ್ಟರ್ ಕ್ಯಾಸೆಟ್ ಮತ್ತು ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರೇಶನ್ ಮೂಲಕ ಹಾದುಹೋಗುವ ಮೂಲಕ ಉಂಟಾಗುವ ಎಲುಯೆಂಟ್‌ನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ವಿನಿಮಯ. ಈ ವಿಧಾನದ ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ, ಸಂಕೀರ್ಣ ಬಹು-ಹಂತದ ಹುದುಗುವಿಕೆಗೆ ಹೆಚ್ಚುವರಿಯಾಗಿ, ಅಂತಿಮ ಉತ್ಪನ್ನವನ್ನು ಪಡೆಯುವಲ್ಲಿ ಬಹು-ಹಂತದ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿದೆ.

ಥರ್ಮೋಸ್ಟಾಟ್ ಶೇಕರ್‌ನಲ್ಲಿ ಫ್ಲಾಸ್ಕ್‌ಗಳಲ್ಲಿ LB ಸಾರುಗಳಲ್ಲಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SG 20050/pIF16 ಅನ್ನು ಬೆಳೆಸುವುದು, ಜೀವರಾಶಿಯನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸುವುದು, ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ತೊಳೆಯುವುದು ಮತ್ತು ಜೀವಕೋಶಗಳನ್ನು ನಾಶಮಾಡಲು ಅಲ್ಟ್ರಾಸಾನಿಕ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ತಿಳಿದಿರುವ ವಿಧಾನವೂ ಇದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಲೈಸೇಟ್ ಅನ್ನು ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ 3M ಯೂರಿಯಾ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಕ್ಲೋರೈಡ್‌ನ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಅಲ್ಟ್ರಾಸೌಂಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ, ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಸಲ್ಫಿಟೊಲಿಸಿಸ್, 8 M ಯೂರಿಯಾ ವಿರುದ್ಧ ಡಯಾಲಿಸಿಸ್, ಮರುಪ್ರಕೃತಿ ಮತ್ತು CM-ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಲ್ಲಿ ಅಂತಿಮ ಎರಡು ಹಂತಗಳು 52 ಸೆಲ್ಯುಲೋಸ್ ಮತ್ತು ಸೆಫಾಡೆಕ್ಸ್ G-50 (RU 2054041). ಈ ವಿಧಾನದ ಅನಾನುಕೂಲಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಮುಖ್ಯ ಹಂತಗಳ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಉತ್ಪಾದಕತೆಯಾಗಿದೆ. ಇದು ವಿಶೇಷವಾಗಿ ಉತ್ಪನ್ನದ ಅಲ್ಟ್ರಾಸಾನಿಕ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗೆ ಅನ್ವಯಿಸುತ್ತದೆ, ಡಯಾಲಿಸಿಸ್ ಮತ್ತು ಆಕ್ಸಿಡೇಟಿವ್ ಸಲ್ಫಿಟೊಲಿಸಿಸ್, ಇದು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಬಿಡುಗಡೆಯಲ್ಲಿ ಅಸ್ಥಿರತೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ, ಜೊತೆಗೆ ಈ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಅಸಾಧ್ಯತೆ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಉತ್ಪಾದನೆಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್.

ಹತ್ತಿರದ ಅನಲಾಗ್ (ಪ್ರೋಟೊಟೈಪ್) ನಂತೆ, ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಸೂಚಿಸಬಹುದು, ಇದು E. ಕೊಲಿಯ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ತಳಿಯನ್ನು ಬೆಳೆಸುವುದು, ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಜೀವರಾಶಿಯನ್ನು -70 ° C ಮೀರದ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಘನೀಕರಿಸುವುದು, ಕರಗಿಸುವುದು, ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿ ಕೋಶಗಳನ್ನು ನಾಶಪಡಿಸುವುದು. ಲೈಸೋಜೈಮ್‌ನೊಂದಿಗೆ, ಡಿಎನ್‌ಎಸೆ ಲೈಸೇಟ್‌ಗೆ ಪರಿಚಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ಮತ್ತು ಆರ್‌ಎನ್‌ಎಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವುದು ಮತ್ತು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಿಂದ ತೊಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಕರಗದ ರೂಪವನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸುವುದು, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಕರಗಿಸುವುದು, ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣ ಮತ್ತು ಒಂದು ಹಂತದ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ. ಮೂರು ಪ್ರವರ್ತಕಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSS5 ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆದ E. ಕೊಲಿ SS5 ಸ್ಟ್ರೈನ್: P lac, P t7 ಮತ್ತು P trp, ಮತ್ತು ಪರಿಚಯಿಸಲಾದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಆಲ್ಫಾ-ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಮಾಪಕರಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಈ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಹೊಂದಿರುವ E. ಕೊಲಿ SS5 ಸ್ಟ್ರೈನ್‌ನಿಂದ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಮೂರು ಪ್ರವರ್ತಕಗಳಿಂದ ನಿಯಂತ್ರಿಸಲ್ಪಡುತ್ತದೆ: P lac , P t7 ಮತ್ತು P trp . ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಮಟ್ಟವು 1 ಲೀಟರ್ ಸೆಲ್ ಅಮಾನತು (RU 2165455) ಪ್ರತಿ 800 mg ಆಗಿದೆ.

ಈ ವಿಧಾನದ ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಜೀವಕೋಶಗಳ ಎಂಜೈಮ್ಯಾಟಿಕ್ ನಾಶ, ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳ DNA ಮತ್ತು RNA ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಒಂದು ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಬಳಸುವ ಕಡಿಮೆ ತಾಂತ್ರಿಕ ದಕ್ಷತೆಯಾಗಿದೆ. ಇದು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಬಿಡುಗಡೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಅಸ್ಥಿರತೆಯನ್ನು ಉಂಟುಮಾಡುತ್ತದೆ, ಅದರ ಗುಣಮಟ್ಟದಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ಮೇಲಿನ ಯೋಜನೆಯನ್ನು ಬಳಸುವ ಸಾಧ್ಯತೆಯನ್ನು ಮಿತಿಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನ ಅನನುಕೂಲಗಳು ಮತ್ತು ಅದರ ಆಧಾರದ ಮೇಲೆ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಇ. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ BL21 (DE3) ನಲ್ಲಿ T7 ಫೇಜ್‌ನ ಪ್ರಬಲವಾದ ಅನಿಯಂತ್ರಿತ ಪ್ರವರ್ತಕನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನಲ್ಲಿನ ಬಳಕೆಯಾಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ T7 RNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಜೀನ್ ಪ್ರವರ್ತಕ ಅಡಿಯಲ್ಲಿದೆ. ಲ್ಯಾಕ್ ಒಪೆರಾನ್ ಮತ್ತು ಇದು ಯಾವಾಗಲೂ "ಹರಿಯುತ್ತಿರುತ್ತದೆ". ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಕೋಶದಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ನಿರಂತರವಾಗಿ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ನ ವಿಘಟನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಕೋಶಗಳ ಕಾರ್ಯಸಾಧ್ಯತೆಯ ಇಳಿಕೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇದರ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಇಳುವರಿಯಲ್ಲಿ ಇಳಿಕೆ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ.

ಈ ಆವಿಷ್ಕಾರದ ಉದ್ದೇಶವು ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೊಸ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಬಳಸಿಕೊಂಡು E. ಕೊಲಿಯ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಉತ್ಪಾದಕ ತಳಿಯನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಗುಣಮಟ್ಟಕ್ಕೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಬಳಕೆಗಾಗಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಸ್ತುವನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸಲು ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಕೈಗಾರಿಕಾ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಅಭಿವೃದ್ಧಿಪಡಿಸುವುದು. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ-2ಬಿ ವಸ್ತುವಿಗಾಗಿ "ಯುರೋಪಿಯನ್ ಫಾರ್ಮಾಕೋಪೋಯಾ" ಗೆ.

ಫೆಡರಲ್ ಸ್ಟೇಟ್ ಯೂನಿಟರಿ ಎಂಟರ್‌ಪ್ರೈಸ್ ಸ್ಟೇಟ್ ರಿಸರ್ಚ್ ಇನ್‌ಸ್ಟಿಟ್ಯೂಟ್ ಆಫ್ ಜೆನೆಟಿಕ್ಸ್‌ನ ಆಲ್-ರಷ್ಯನ್ ಕಲೆಕ್ಷನ್ ಆಫ್ ಇಂಡಸ್ಟ್ರಿಯಲ್ ಸ್ಟ್ರೇನ್ಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಠೇವಣಿ ಮಾಡಲಾದ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pSX50 ಮತ್ತು ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ಅನ್ನು ರಚಿಸುವ ಮೂಲಕ ಈ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲಾಗಿದೆ, ಸಂಖ್ಯೆ VKPM B-8550,

ಹಾಗೆಯೇ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಆಲ್ಫಾ-2b ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಧಾನ, E. ಕೊಲಿ SX50 ನ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಆಧರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಕಡಿಮೆ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಅದರ ಆಳವಾದ ಕೃಷಿಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿಗಳ ಕೋಶಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ನಾಶ, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್‌ನ ಸಾಂದ್ರೀಕೃತ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಕರಗುವಿಕೆ, ನಂತರ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಪುನರುಜ್ಜೀವನವನ್ನು ಅಸ್ತವ್ಯಸ್ತವಾಗಿರುವ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಮತ್ತು ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಮೇಲೆ ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ, Cu +2 ಅಯಾನುಗಳೊಂದಿಗೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ, ಸಿಎಮ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಡೆಕ್ಸ್ 75 ನಂತಹ ರಾಳಗಳ ಮೇಲೆ ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರೇಶನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯಂತಹ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ರಾಳಗಳ ಮೇಲೆ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.

ಆವಿಷ್ಕಾರದ ಪ್ರಕಾರ, ಹೊಸ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಮಲ್ಟಿಕಾಪಿ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pSX50 ಅನ್ನು ಪ್ರಸ್ತಾಪಿಸಲಾಗಿದೆ, ಇದು ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದರ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಸ್ ಮತ್ತು ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಪ್ರವರ್ತಕರು ಮತ್ತು ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್‌ನ ನಿಯಂತ್ರಣದಲ್ಲಿದೆ. ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 3218 ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳನ್ನು (bp) ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತುಣುಕುಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ:

ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ 1 ರಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ (ಎನ್ಟಿ) 176 ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮವು ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಪ್ರವರ್ತಕ (ಪಿ ಟಿಆರ್ಪಿ) ಹೊಂದಿರುವ 176 ಬಿಪಿ ಡಿಎನ್ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ;

177 nt ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. ಗೆ 194 ಎನ್. ಶೈನ್ ಡೆಲ್ಗಾರ್ನೊ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 18 ಬಿಪಿಯ ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಅನುವಾದದ ಪ್ರಾರಂಭಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ;

195 nt ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. ಗೆ 695 ಎನ್. ಕೆಳಗಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 501 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ 37, ಎ ಟು ಸಿ ಬದಲಿಯಾಗಿ, 39 ನೇ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ, ಜಿಯಿಂದ ಟಿಗೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ, 40 ನೇ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ, ಎ ಗೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ C, ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ 42 ರಲ್ಲಿ, G ನಿಂದ T ಗೆ ಪರ್ಯಾಯವಾಗಿ, 67 ರಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು C ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 69 ರಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು ಬದಲಿಸುವುದು, G ಅನ್ನು T ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ 70, A ಅನ್ನು C ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 72 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು ಬದಲಿಸುವುದು T, ಸ್ಥಾನ 96 ರಲ್ಲಿ, G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ 100 ರಲ್ಲಿ, A ಅನ್ನು C ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 102 ರಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು T ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 114 ರಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು T ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, A ಅನ್ನು C ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 120 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ C ಬದಲಿಗೆ C G ನೊಂದಿಗೆ, 126 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ, G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 129 ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ, G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 330 ರಲ್ಲಿ G ಅನ್ನು ಬದಲಿಸುವುದು, G ಅನ್ನು G ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 339 ರಲ್ಲಿ G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 342 ರಲ್ಲಿ G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, ಸ್ಥಾನ 487 A ಅನ್ನು C ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 489 ರಲ್ಲಿ A ಅನ್ನು T ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, 495 ರಲ್ಲಿ G ಅನ್ನು A ಯಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸುವುದು;

696 nt ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. 713 ಎನ್ ಪ್ರಕಾರ. ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಪಾಲಿಲಿಂಕರ್ ಹೊಂದಿರುವ 18 ಬಿಪಿಯ ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ;

714 nt ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. ಗೆ 1138 ಎನ್. 4129 nt ಜೊತೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pKK223-3 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಗೆ 4553 ಎನ್. 425 bp ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾದ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ rrnBT 1 T 2 ರ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ;

1139 b ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. ಗೆ 1229 ಎನ್. 2487 nt ಜೊತೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pUC19 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. ಗೆ 2577 ಎನ್. 91 bp ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, β-ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಮಾಸ್ ಜೀನ್‌ನ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ (ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ಪ್ರತಿರೋಧ ಜೀನ್ - Amp R);

1230 b ನಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ. ಗೆ 2045 ಎನ್. 720 nt ಜೊತೆ pUC4K ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 1535 ಕ್ರಿ.ಶ 816 bp ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಕಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ;

2046 ರಿಂದ ಅನುಕ್ರಮ ಬಿ. ಗೆ 3218 ಎನ್. 1625 ರಿಂದ 453 nt ವರೆಗಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pUC19 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 1173 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ರೆಪ್ಲಿಕೇಶನ್ (ಓರಿ) ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕ್ ಪ್ರವರ್ತಕ (ಪಿ ಲ್ಯಾಕ್) ಗೆ ಕಾರಣವಾದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

ಚಿತ್ರಗಳು 1-5 ವಿನ್ಯಾಸ ರೇಖಾಚಿತ್ರಗಳನ್ನು ತೋರಿಸುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಭೌತಿಕ ನಕ್ಷೆ pSH50 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳು.

ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 ಗಾಗಿ ನಿರ್ಧರಿಸಲಾದ ಸಂಪೂರ್ಣ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಚಿತ್ರ 6 ತೋರಿಸುತ್ತದೆ.

ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ಅನ್ನು ಸಾಂಪ್ರದಾಯಿಕವಾಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು pSX50 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ Escherichia coli BL21 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು. ಜೆನೆಟಿಕ್ ಎಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನ. E.Coli SX50 ತಳಿಯು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳಿಂದ ನಿರೂಪಿಸಲ್ಪಟ್ಟಿದೆ.

ಸಾಂಸ್ಕೃತಿಕ ಮತ್ತು ರೂಪವಿಜ್ಞಾನದ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು

ಜೀವಕೋಶಗಳು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುತ್ತವೆ, ನೇರವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ದಪ್ಪನಾದ ರಾಡ್-ಆಕಾರದ, ಗ್ರಾಂ-ಋಣಾತ್ಮಕ, ಬೀಜಕ-ಬೇರಿಂಗ್ ಅಲ್ಲ. ಸರಳ ಪೋಷಕಾಂಶಗಳ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶಗಳು ಚೆನ್ನಾಗಿ ಬೆಳೆಯುತ್ತವೆ. ಡಿಫ್ಕೊ ಅಗರ್ ಮೇಲೆ ಬೆಳೆಯುವಾಗ, ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ, ನಯವಾದ, ಪೀನ, ಮೋಡ, ಹೊಳೆಯುವ, ಬೂದು ವಸಾಹತುಗಳು ನಯವಾದ ಅಂಚುಗಳೊಂದಿಗೆ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತವೆ. ದ್ರವ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ (ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಅಥವಾ ಎಲ್ಬಿ ಸಾರುಗಳೊಂದಿಗೆ ಕನಿಷ್ಠ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ) ಬೆಳೆದಾಗ, ತೀವ್ರವಾದ, ಸಹ ಪ್ರಕ್ಷುಬ್ಧತೆ ರೂಪುಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ.

ಭೌತಿಕ ಮತ್ತು ಜೈವಿಕ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳು

ಏರೋಬ್. ಬೆಳವಣಿಗೆಗೆ ತಾಪಮಾನದ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು 4-42 ° C ಆಗಿದ್ದು, ಗರಿಷ್ಠ pH 6.5-7.5 ಆಗಿದೆ.

ಸಾರಜನಕದ ಮೂಲವಾಗಿ, ಅಮೋನಿಯಂ ಮತ್ತು ನೈಟ್ರೇಟ್ ರೂಪಗಳಲ್ಲಿ ಖನಿಜ ಲವಣಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಹಾಗೆಯೇ ಸಾವಯವ ಸಂಯುಕ್ತಗಳುಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳ ರೂಪದಲ್ಲಿ, ಪೆಪ್ಟೋನ್, ಟ್ರಿಪ್ಟೋನ್, ಯೀಸ್ಟ್ ಸಾರ, ಇತ್ಯಾದಿ.

ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳು, ಗ್ಲಿಸರಾಲ್ ಮತ್ತು ಕಾರ್ಬೋಹೈಡ್ರೇಟ್‌ಗಳನ್ನು ಕಾರ್ಬನ್ ಮೂಲವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪ್ರತಿಜೀವಕ ಪ್ರತಿರೋಧ. ಜೀವಕೋಶಗಳು ಕ್ಯಾನಮೈಸಿನ್‌ಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ಪ್ರದರ್ಶಿಸುತ್ತವೆ (100 μg/ml ವರೆಗೆ).

ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ 8X50 ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಉತ್ಪಾದಕವಾಗಿದೆ.

ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಶೇಖರಣಾ ಮಾಧ್ಯಮದ ವಿಧಾನ, ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಮತ್ತು ಸಂಯೋಜನೆ

L-ಅರೇಪ್‌ನಲ್ಲಿ ಎಣ್ಣೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ 20 mcg/ml ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಕ್ಯಾನಮೈಸಿನ್ ಅನ್ನು ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 15% ಗ್ಲಿಸರಾಲ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ L-ಸಾರು ಮತ್ತು ಮೈನಸ್ 70 ° C ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಆಂಪೂಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಪ್ರತಿಜೀವಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ, ಆಂಪೂಲ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಲೈಯೋಫೈಲೈಸ್ಡ್ ಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಜೊತೆಗೆ 4 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ ತಾಪಮಾನ.

ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ಅನ್ನು ಬರ್ಗೆಸ್ ಗೈಡ್ (1974) ಪ್ರಕಾರ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಜಾತಿಯ ತಳಿ ಎಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಕೈಗಾರಿಕಾ ಉತ್ಪಾದನೆಗೆ ವಿಧಾನ

ಪ್ರಸ್ತಾವಿತ ವಿಧಾನದ ವೈಶಿಷ್ಟ್ಯವೆಂದರೆ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನದ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯಾಗಿದ್ದು ಅದು ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹವಾಗುವ ಕರಗದ ರೂಪದಿಂದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ, ಇದು ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಸರಳೀಕರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ತಾಂತ್ರಿಕ ಯೋಜನೆಪ್ರತ್ಯೇಕತೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಗುರಿ ಉತ್ಪನ್ನದ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸುತ್ತದೆ.

ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪೋಷಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರಗಳು, ಮೇಲಾಗಿ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ಯೀಸ್ಟ್ ಸಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SH50 ಅನ್ನು ಪೋಷಕಾಂಶದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಬೆಳೆಸುವುದು, ಮೇಲಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ, ಹೆಚ್ಚಿನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿ ಕೋಶಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ನಾಶವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. 700-900 ಬಾರ್, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್‌ನ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಕರಗುವಿಕೆ, ಅಸ್ತವ್ಯಸ್ತವಾಗಿರುವ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಪುನರಾವರ್ತನೆ, ನಂತರ ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್ ಸಿ + ಇಮ್ಮೊಬಿಲೈಸ್ಡ್ ರೆಸ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ 2 ಅಯಾನುಗಳು, CM ಸೆಫರೋಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್ ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ರೆಸಿನ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಡೆಕ್ಸ್ 75 ನಂತಹ ರೆಸಿನ್‌ಗಳ ಮೇಲೆ ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಉತ್ಪಾದನೆಯ ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಹಂತಗಳನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲು ಸೂಕ್ತವಾದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ಹೀಗಿವೆ:

ಸಂಪೂರ್ಣ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯ ಉದ್ದಕ್ಕೂ ತಲಾಧಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಹುದುಗುವಿಕೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ, ಇದು ನಿರ್ಧರಿಸುತ್ತದೆ ಉನ್ನತ ಮಟ್ಟದಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿ;

900 ಬಾರ್‌ನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಗೌಲಿನ್ ಪ್ರಕಾರದ ವಿಘಟನೆಯಲ್ಲಿ ಜೀವಕೋಶದ ನಾಶವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ;

ಕರಗುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಘಟಕಗಳನ್ನು (ಡಿಎನ್ಎ, ಆರ್ಎನ್ಎ, ಪ್ರೋಟೀನ್ಗಳು, ಲಿಪೊಪೊಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್ಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ) ತೆಗೆಯುವುದು ಡಿಟರ್ಜೆಂಟ್ಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಕರಗದ ರೂಪವನ್ನು ತೊಳೆಯುವ ಮೂಲಕ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ (ಟ್ರಿಟಾನ್ XI00, ಯೂರಿಯಾ, ಇತ್ಯಾದಿ);

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಹೊಂದಿರುವ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು 6 M ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ನ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಕರಗಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ;

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಪುನರ್ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಚೋಟ್ರೋಪಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್ಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುವ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ;

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ, Cu +2 ಅಯಾನುಗಳೊಂದಿಗೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಕ್ಯಾಷನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ರಾಳ SM ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಡೆಕ್ಸ್ 75 ವಿಧದ ರಾಳದ ಮೇಲೆ ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ;

ಪ್ರತಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ನಂತರ, 0.22 ಮೈಕ್ರಾನ್‌ಗಳ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪೈರೋಜೆನ್-ಮುಕ್ತ ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಶೋಧನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ.

ವಿವರಿಸಿದ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸುವ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಇಳುವರಿ 1 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮಕ್ಕೆ ಸುಮಾರು 400-800 ಮಿಗ್ರಾಂ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಗಿದೆ. ಫಲಿತಾಂಶದ ಉತ್ಪನ್ನದ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಸ್ತುವಿನ "ಯುರೋಪಿಯನ್ ಫಾರ್ಮಾಕೊಪೊಯಿಯ" ಮಾನದಂಡಗಳು ಮತ್ತು ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಅನುಸರಿಸುತ್ತದೆ.

ಪ್ರಸ್ತಾವಿತ ವಿಧಾನ ಮತ್ತು ಮೂಲಮಾದರಿಯ ನಡುವಿನ ಗಮನಾರ್ಹ ವ್ಯತ್ಯಾಸಗಳು:

ಹೆಚ್ಚಿನ ಉತ್ಪಾದಕತೆಯೊಂದಿಗೆ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ವಿನ್ಯಾಸದ ಬಳಕೆ, ಇದು ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ 1 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ;

ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಜೀವರಾಶಿಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿ ಯಾಂತ್ರಿಕ ವಿನಾಶದ ಬಳಕೆ, ಇದು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕರಗದ ರೂಪದ ಶುದ್ಧ ಸಾರವನ್ನು ಹೆಚ್ಚು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಸ್ವಲ್ಪ ಸಮಯ, ಕಡಿಮೆ ನಷ್ಟಗಳೊಂದಿಗೆ;

ಚೋಟ್ರೋಪಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಪುನರುಜ್ಜೀವನದ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ಪರಿಹಾರಗಳ ಬಳಕೆಯು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಸರಿಯಾಗಿ ಮರುರೂಪಿಸಲಾದ ರೂಪದ ಇಳುವರಿಯನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ;

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವು ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನ ಪ್ರಕಾರ 99% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಶುದ್ಧತೆಯ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಸ್ತುವನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆಗೊಳಿಸದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಜೆಲ್‌ಗಳನ್ನು ಬೆಳ್ಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಕಲೆ ಹಾಕುವಾಗ ಮತ್ತು 98% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು RF HPLC ಪ್ರಕಾರ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಪೈರೋಜೆನ್‌ಗಳಿಂದ ಮುಕ್ತವಾಗಿದೆ. (LAL ಪರೀಕ್ಷೆ).

ಹೇಳಲಾದ ಗುಂಪಿನ ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳ ಸಾರ ಮತ್ತು ಅನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಉದಾಹರಣೆಗಳಿಂದ ವಿವರಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಉದಾಹರಣೆ 1. ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSH50 ನಿರ್ಮಾಣ

pSX50 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಅನ್ನು ನಿರ್ಮಿಸುವ ವಿಧಾನವು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ:

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 ನಿರ್ಮಾಣ;

1. ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 (2641 bp) ನಿರ್ಮಾಣ

2. ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 (2553 bp) ನಿರ್ಮಾಣ

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX41 (3218 bp) ನಿರ್ಮಾಣ;

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX43 (3218 bp) ನಿರ್ಮಾಣ;

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX45 (3218 bp) ನಿರ್ಮಾಣ;

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 (3218 bp) ನಿರ್ಮಾಣ

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 ನಿರ್ಮಾಣ

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 ಒಂದು pUC19 ವೆಕ್ಟರ್ ಆಗಿದ್ದು, ಇದರಲ್ಲಿ ಬೀಟಾ ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಮಾಸ್ ಜೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅನುಕ್ರಮವು ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್‌ಗೆ ಪ್ರತಿರೋಧವನ್ನು ನೀಡುತ್ತದೆ, ಇದನ್ನು ಕಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಅನುಕ್ರಮದಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು pKK223-3 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನಿಂದ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುತ್ತದೆ.

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSS10 ನಿರ್ಮಾಣವನ್ನು ಎರಡು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 (2641 bp) ತಯಾರಿಕೆ, ಇದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pUC19 ಆಗಿದೆ, ಇದರಲ್ಲಿ amp ಜೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಕಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ಕೋಡಿಂಗ್ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ ಬದಲಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ;

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 (2553 bp) ತಯಾರಿಕೆ, ಇದು ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 ಆಗಿದ್ದು, ಇದರಲ್ಲಿ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಕ್ರಿಪ್ಷನ್ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ rBT 1 T 2 ಅನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ DNA ತುಣುಕನ್ನು BamHI ಸೈಟ್‌ನ ಹಿಂದೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 ಪಡೆಯಲು ಐದು ಸುತ್ತಿನ ಡಿಎನ್ಎ ವರ್ಧನೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನ(ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸರಣಿ ಕ್ರಿಯೆಯ). ಮೊದಲ ಸುತ್ತಿನ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, pUC19 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ, 1828 bp ಗಾತ್ರದ DNA ತುಣುಕು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ. (ತುಣುಕು PU1-PU2) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ:

ಇದು ಮತ್ತು ನಂತರದ PCR ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ: 20 mM Tis-HCl, pH 8.8, 10 mM (NH 4) 2 SO 4, 10 mM KCl, 2 tM MgCl 2, 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್ X100, 0.1 mg/ml BSA, ಪ್ರತಿ dNTP ಯ 0.2 mM, 1.25 ಘಟಕಗಳು. Pfu DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್, 100 ng DNA. ವರ್ಧನೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: 5 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವುದು, 35 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C, 2 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. ವರ್ಧನೆಯ ನಂತರ (ಮತ್ತು ನಂತರದ ವರ್ಧನೆಗಳ ನಂತರ), 1% ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್‌ನಿಂದ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೇ ಮತ್ತು ಮೂರನೇ ಸುತ್ತುಗಳ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, pUC4K ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ, 555 bp DNA ತುಣುಕು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ. (ತುಣುಕು KM1-KM2) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ:

ಮತ್ತು 258 ಬಿಪಿಯ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕಿನ ವರ್ಧನೆ. (KMZ-KM4) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಿಂದ

PCR ನ ಐದನೇ ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ, ತುಣುಕುಗಳು (PU1-PU2) ಮತ್ತು (KM1-KM4) ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ: 5 ನಿಮಿಷಕ್ಕೆ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿಮಾಡುವುದು, 5 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C , 10 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. ಕೊನೆಯ PCR ನಂತರ ಪಡೆದ DNA ನೇರವಾಗಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5 ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕನಾಮೈಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿತವಾಗಿದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 2641 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು, PCR ಅನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಮೂರು ಸುತ್ತಿನ DNA ವರ್ಧನೆಗಳನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮೊದಲ ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ, pSX3 ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ, 2025 bp DNA ತುಣುಕು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ. (ತುಣುಕು 10.1-10.2) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ:

ಎರಡನೇ ಸುತ್ತಿನ ಸಮಯದಲ್ಲಿ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pKK223-3 ನ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಬಳಸಿ, 528 bp ಗಾತ್ರದ DNA ತುಣುಕು ವರ್ಧಿಸುತ್ತದೆ. (ತುಣುಕು KK1-KK2) ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿ:

PCR ನ ಮೂರನೇ ಸುತ್ತಿನಲ್ಲಿ, ತುಣುಕುಗಳು (10.1-10.2) ಮತ್ತು (KK1-KK2) ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ: 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವುದು, 5 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C , 10 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. ಕೊನೆಯ PCR ನಂತರ ಪಡೆದ DNA ನೇರವಾಗಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5 ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕನಾಮೈಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿತವಾಗಿದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 2553 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX10 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX41 ನಿರ್ಮಾಣ

ರಿಕಾಂಬಿನೆಂಟ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX41 ಒಂದು ಹಿಂದ್ III - BamHI ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕು ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 (2529 bp), ಹಿಂದ್ III - 168 bp ನ EcoRI ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕು, E. ಕೊಲಿ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಒಪೆರಾನ್ (P) ನ ಪ್ರವರ್ತಕವನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ (PasynthbaI), ಎಕೋರಿ-X SD ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು (ಶೈನ್-ಡೆಲ್ಗಾರ್ನೊ) ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ 20 bp ಯ DNA ತುಣುಕು ಮತ್ತು 501 bp ನ XbaI-BamHI DNA ತುಣುಕು ಮಾನವ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ 2b ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

ವೆಕ್ಟರ್ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 (2529 bp) ನ ಹಿಂದ್ III - BamHI ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX3 ನ DNA ಅನ್ನು ಹಿಂಡ್‌ಐಐ ಮತ್ತು ಬಾಮ್‌ಹೆಚ್‌ಐ ಎಂಬ ನಿರ್ಬಂಧಿತ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ನೀಡಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ 1% ಅಗರೋಸ್ ಜೆಲ್‌ನಲ್ಲಿ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಒಪೆರಾನ್ (P trp) ನ ಪ್ರವರ್ತಕ ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ 168 bp ನ ಹಿಂದ್ III EcoRI DNA ತುಣುಕು PCR ನಿಂದ ಒಟ್ಟು E. ಕೊಲಿ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಆಗಿ ಮತ್ತು TRP1 ಮತ್ತು PRP2 ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ ಹಿಂಡ್ಲ್ ಮತ್ತು EcoRI ನಿರ್ಬಂಧದೊಂದಿಗೆ ವರ್ಧಿತ ತುಣುಕಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಕಿಣ್ವಗಳು:

EcoRI-Xbal 20 bp ಯ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಪಡೆಯಲು SD ಅನುಕ್ರಮ (ಶೈನ್-ಡೆಲ್ಗಾರ್ನೊ) ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್, ಕೆಳಗಿನ ಪೂರಕ ಆಲಿಗೋನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ:

XbaI-BamIII ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕು 501 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಮಾನವ ಆಲ್ಫಾ 2 ಬಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್ ಅನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಪಿಸಿಆರ್‌ನಿಂದ ಒಟ್ಟು ಮಾನವ ಡಿಎನ್‌ಎಯನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್‌ನಂತೆ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳಾದ ಐಎಫ್‌ಎನ್1 ಮತ್ತು ಐಎಫ್‌ಎನ್ 2 ಬಳಸಿ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಂತರ ವರ್ಧಿತ ತುಣುಕನ್ನು ಎಕ್ಸ್‌ಬಾಲ್ ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಮಿಐಐ ನಿರ್ಬಂಧ ಕಿಣ್ವಗಳೊಂದಿಗೆ ಸಂಸ್ಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಮುಂದೆ, ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕಲಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, T4 ಫೇಜ್ ಲಿಗೇಸ್ ಕಿಣ್ವದೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಡಿಎನ್‌ಎಯು E. ಕೊಲಿ DH5 ಸ್ಟ್ರೈನ್‌ನ ಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕ್ಯಾನಮೈಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ DNA ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 3218 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX41 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಮುಂದೆ, ಗುರಿ ಉತ್ಪನ್ನದ ಅಭಿವ್ಯಕ್ತಿಯ ಮಟ್ಟವನ್ನು ಹೆಚ್ಚಿಸಲು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ಹಂತ-ಹಂತದ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ರೂಪಾಂತರವು E. ಕೊಲಿಯಲ್ಲಿ ಅಪರೂಪವಾಗಿ ಕಂಡುಬರುವ ತ್ರಿವಳಿಗಳನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವುದು, ಅನುಗುಣವಾದ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದು, E. ಕೊಲಿಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಕಂಡುಬರುವ ತ್ರಿವಳಿಗಳೊಂದಿಗೆ ಅದೇ ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲಗಳನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವುದು. ಪಿಸಿಆರ್ ವಿಧಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ಡಿಎನ್‌ಎ ರೂಪಾಂತರವನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX43 ನಿರ್ಮಾಣ

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX43 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX41 ನ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು IFN3 ಮತ್ತು IFN4 ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು PCR ನಿಂದ ಒಂದು ಸುತ್ತಿನ DNA ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ: 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವುದು, 20 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C, 10 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. PCR ನಂತರ ಪಡೆದ DNA ನೇರವಾಗಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5 ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕನಾಮೈಸಿನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ DNA ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 3218 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX43 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX45 ನಿರ್ಮಾಣ

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX45 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX43 ನ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು IFN5 ಮತ್ತು IFN6 ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು PCR ನಿಂದ ಒಂದು ಸುತ್ತಿನ DNA ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಷರತ್ತುಗಳ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ: 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವುದು, 20 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C, 10 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. PCR ನಂತರ ಪಡೆದ DNA ನೇರವಾಗಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5 ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕನಮೈಸಿನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್ಎ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ DNA ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 3218 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX45 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 ನಿರ್ಮಾಣ.

ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX45 ನ DNA ಅನ್ನು ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಮತ್ತು ಪ್ರೈಮರ್‌ಗಳು IFN7 ಮತ್ತು IFN8 ಆಗಿ ಬಳಸಿಕೊಂಡು PCR ನಿಂದ ಒಂದು ಸುತ್ತಿನ DNA ವರ್ಧನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ:

ಪಿಸಿಆರ್ ಅನ್ನು ಈ ಕೆಳಗಿನ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ: 5 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ 95 ° C ನಲ್ಲಿ ಬಿಸಿ ಮಾಡುವುದು, 20 PCR ಚಕ್ರಗಳು (30 ಸೆಕೆಂಡ್ 95 ° C, 30 ಸೆಕೆಂಡ್ 56 ° C, 10 ನಿಮಿಷ 72 ° C) ಮತ್ತು 72 ° C ನಲ್ಲಿ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು. PCR ನಂತರ ಪಡೆದ DNA ನೇರವಾಗಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ DH5 ನ ಜೀವಕೋಶಗಳಾಗಿ ರೂಪಾಂತರಗೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 20 μg/ml ಕನಾಮೈಸಿನ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ LA ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಲೇಪಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 37 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕಾವು ನಂತರ, ತದ್ರೂಪುಗಳನ್ನು ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ನಿರ್ಬಂಧದ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಪ್ರಾಥಮಿಕ ಡಿಎನ್‌ಎ ರಚನೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ, 3218 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಉದಾಹರಣೆ 2. E. ಕೊಲಿ SX50 ಸ್ಟ್ರೈನ್ ತಯಾರಿಕೆ - ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ನಿರ್ಮಾಪಕ

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್-ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸ್ಟ್ರೈನ್ E. ಕೊಲಿ SX50 ಅನ್ನು ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pSX50 ನೊಂದಿಗೆ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ BL21 ಕೋಶಗಳನ್ನು ಪರಿವರ್ತಿಸುವ ಮೂಲಕ ಪಡೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಅನ್ನು 30 ಲೀಟರ್ ಹುದುಗುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ 25.0-30.0 p.u ನ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಬೆಳೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 38-39 ° C ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ 1% ಕ್ಯಾಸಿನ್ ಆಸಿಡ್ ಹೈಡ್ರೊಲೈಜೆಟ್ (ಡಿಫ್ಕೊ), 1% ಗ್ಲೂಕೋಸ್, 40 µg/ml ಕನಾಮೈಸಿನ್ ಹೊಂದಿರುವ M9 ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ. ಹುದುಗುವಿಕೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ಗ್ರಾವಿಮೆಟ್ರಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪೋಷಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರದ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಉದಾಹರಣೆ 3. E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ನಿಂದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸುವ ವಿಧಾನ

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು 4 ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ:

ಹಂತ 1. E. ಕೊಲಿ ತಳಿ SX50 ಕೃಷಿ.

ಹಂತ 2. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಕರಗದ ರೂಪದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ.

ಹಂತ 3. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಿಸರ್ಜನೆ ಮತ್ತು ಪುನರುಜ್ಜೀವನ.

ಹಂತ 4. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ.

ಹಂತ 1. E. ಕೊಲಿ ತಳಿ SX50 ಕೃಷಿ

26 ° C ನಲ್ಲಿ 12 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ 3 ಲೀಟರ್ ಶ್ರೀಮಂತ LB ಮಾಧ್ಯಮದ ಪರಿಮಾಣದಲ್ಲಿ E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ನ ಬೆಳೆದ ಇನಾಕ್ಯುಲಮ್ ಅನ್ನು 27 ಲೀಟರ್ ಸ್ಟೆರೈಲ್ ಮಾಧ್ಯಮದ M9, 1% ಕ್ಯಾಸಿನ್ ಆಸಿಡ್ ಹೈಡ್ರೊಲೈಜೆಟ್, 1% ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಹೊಂದಿರುವ ಹುದುಗುವಿಕೆಗೆ ಪರಿಚಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 1 mM MgCl 2, 0.1 mM CaCl 2, 40 mg/ml kanamycin. 40% ಸೋಡಿಯಂ ಹೈಡ್ರಾಕ್ಸೈಡ್ ದ್ರಾವಣದೊಂದಿಗೆ ಸ್ವಯಂಚಾಲಿತ ಟೈಟರೇಶನ್ ಮೂಲಕ 7± 0.15 pH ಅನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸುವ ಮೂಲಕ 38-39 ° C ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಹುದುಗುವಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಕೃಷಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. 100 ರಿಂದ 800 rpm ಗೆ ಸ್ಟಿರರ್ ವೇಗ ಮತ್ತು 1 ರಿಂದ 15 l/min ಗೆ ಗಾಳಿಯ ಪೂರೈಕೆಯನ್ನು ಬದಲಾಯಿಸುವ ಮೂಲಕ ಶುದ್ಧತ್ವದ (50±10)% ವ್ಯಾಪ್ತಿಯಲ್ಲಿ ಕರಗಿದ ಆಮ್ಲಜನಕದ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ತಲಾಧಾರಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ಯೀಸ್ಟ್ ಸಾರವನ್ನು ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಗ್ರಾವಿಮೆಟ್ರಿಕ್ ನಿಯಂತ್ರಕವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಪೆರಿಸ್ಟಾಲ್ಟಿಕ್ ಪಂಪ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಕೇಂದ್ರೀಕೃತ ದ್ರಾವಣಗಳ ಪೂರೈಕೆಯ ದರವನ್ನು ಬದಲಿಸುವ ಮೂಲಕ ಅವುಗಳ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಕರಗದ ರೂಪದಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಶೇಖರಣೆಯನ್ನು ಹಂತ ಕಾಂಟ್ರಾಸ್ಟ್ ಮೈಕ್ರೋಸ್ಕೋಪಿ, 15% ಪಾಲಿಯಾಕ್ರಿಲಮೈಡ್ ಜೆಲ್ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ (SDS-PAAG) ಮತ್ತು ರಿವರ್ಸ್ ಫೇಸ್ ಹೈ ಪರ್ಫಾರ್ಮೆನ್ಸ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ (RF HPLC) ಬಳಸಿ ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ಗರಿಷ್ಠ ಆಪ್ಟಿಕಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯನ್ನು (~ 25-30 p.u.) ತಲುಪಿದಾಗ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆ ನಿಂತಾಗ ಹುದುಗುವಿಕೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹುದುಗುವಿಕೆಯ ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ, 5000-10000 rpm ನ ತಿರುಗುವಿಕೆಯ ವೇಗದಲ್ಲಿ ಹರಿವಿನ ರೋಟರ್ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿ ಮೂಲಕ ಸಾಂಸ್ಕೃತಿಕ ದ್ರವವನ್ನು ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಬಯೋಮಾಸ್ ಅನ್ನು ಪ್ಯಾಕ್ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ಪ್ಲಾಸ್ಟಿಕ್ ಚೀಲಗಳುಮತ್ತು ಮೈನಸ್ 70 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್‌ನಲ್ಲಿ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿರುತ್ತದೆ.

ಹಂತ 2. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಕರಗದ ರೂಪದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣ

E. ಕೊಲಿ ಸ್ಟ್ರೈನ್ SX50 ನ 300-400 ಗ್ರಾಂ ಹೆಪ್ಪುಗಟ್ಟಿದ ಜೀವರಾಶಿಯನ್ನು 3000 ಮಿಲಿ ಬಫರ್ 1 ನಲ್ಲಿ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 10 mM EDTA, 0.1% ಟ್ರೈಟಾನ್ X100). ಸಸ್ಪೆನ್ಶನ್ ಅನ್ನು ಗೌಲಿನ್ ಮಾದರಿಯ ಫ್ಲೋ ಹೋಮೊಜೆನೈಜರ್ ಮೂಲಕ ರವಾನಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, 900 ಬಾರ್‌ನ ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 15,000 ಆರ್‌ಪಿಎಮ್‌ನಲ್ಲಿ ಫ್ಲೋ ರೋಟರ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೇಂದ್ರಾಪಗಾಮಿಗೊಳಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು ಬಫರ್‌ಗಳು 2 (20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 1 mM EDTA, 3 M ಯೂರಿಯಾ) ಮತ್ತು ಬಫರ್ 3 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 1 mM EDTA) ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಇದೇ ರೀತಿಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ತೊಳೆಯಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅವಕ್ಷೇಪವನ್ನು 200 ಮಿಲಿ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸಲಾಗಿದೆ 3. ಈ ಸಂದರ್ಭದಲ್ಲಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕರಗದ ರೂಪದ ಪ್ರತ್ಯೇಕತೆ ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಸಮಯವು 5 ಗಂಟೆಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿಲ್ಲ.

ಹಂತ 3. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ವಿಸರ್ಜನೆ ಮತ್ತು ಪುನರುಜ್ಜೀವನ

ಹಿಂದಿನ ಹಂತದಲ್ಲಿ ಪಡೆದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕರಗದ ರೂಪದ ಅಮಾನತುಗೊಳಿಸುವಿಕೆಗೆ, ಡ್ರೈ ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್ ಅನ್ನು 6 M ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಸೇರಿಸಿ, ಡಿಥಿಯೋಥ್ರೆಟಾಲ್ ಅನ್ನು 50 mM ಗೆ ಸೇರಿಸಿ, Tris-HCl pH 8.0 ಗೆ 50 mM ಗೆ, NaCl ಗೆ 150 mM ಮತ್ತು ಟ್ರಿಟಾನ್ X100 ಸಾಂದ್ರತೆಯು 0.1% ಗೆ, 2 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ಕೋಣೆಯ ಉಷ್ಣಾಂಶದಲ್ಲಿ ಕಾವುಕೊಡುವ ಮೂಲಕ 0.22 ಮೈಕ್ರಾನ್ಗಳ ರಂಧ್ರದ ವ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೊರೆಗಳ ಮೂಲಕ ಶೋಧನೆಯನ್ನು ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಬೇರ್ಪಡಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಬಫರ್ 4 (20 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM NaCl, 0.1 mM EDTA) ನೊಂದಿಗೆ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪರಿಹಾರವನ್ನು 100-200 ಬಾರಿ ನಿಧಾನವಾಗಿ ದುರ್ಬಲಗೊಳಿಸುವ ಮೂಲಕ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಪುನರುತ್ಪಾದನೆಯನ್ನು ಕೈಗೊಳ್ಳಲಾಗುತ್ತದೆ. ಅದರ ನಂತರ 4-8 ° C ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ 12-15 ಗಂಟೆಗಳ ಕಾಲ ನಿರಂತರವಾಗಿ ಸ್ಫೂರ್ತಿದಾಯಕದೊಂದಿಗೆ ಪುನರಾವರ್ತನೆಯ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಕಾವುಕೊಡಲಾಗುತ್ತದೆ. ನಂತರ ಮೆಗ್ನೀಸಿಯಮ್ ಸಲ್ಫೇಟ್ ಅನ್ನು 1 mM ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಸೇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು 0.22 ಮೈಕ್ರಾನ್ಗಳ ರಂಧ್ರದ ವ್ಯಾಸವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಪೊರೆಯ ಫಿಲ್ಟರ್ ಮೂಲಕ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಶೋಧನೆಯಿಂದ ಒಟ್ಟುಗೂಡಿದ ವಸ್ತುವನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಹಂತ 4. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಮೂರು ಹಂತಗಳಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

1. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಪುನರಾವರ್ತಿತ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಮೊದಲು Cu +2 ಅಯಾನುಗಳೊಂದಿಗೆ ನಿಶ್ಚಲಗೊಳಿಸಲಾದ ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ರೆಸಿನ್ (ಅಮರ್ಶಮ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್) ಮೇಲೆ ಅಫಿನಿಟಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಬಳಸಿ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಇದನ್ನು ಮಾಡಲು, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು Cu +2 ಚೆಲೇಟಿಂಗ್ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋನೊಂದಿಗೆ ಕಾಲಮ್ಗೆ ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು 0.1 M ಬಫರ್ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸಿಟ್ರಿಕ್ ಆಮ್ಲ pH 2.2.

2. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಎರಡನೇ ಹಂತದಲ್ಲಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ದ್ರಾವಣವನ್ನು CM ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್ ಕ್ಯಾಷನ್ ಎಕ್ಸ್ಚೇಂಜ್ ರಾಳಕ್ಕೆ (ಅಮರ್ಶಮ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್) ಅನ್ವಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು 50 mM ನಲ್ಲಿ ದ್ರಾವಣಗಳ ಗ್ರೇಡಿಯಂಟ್ (0.0-0.5 M NaCl) ನೊಂದಿಗೆ ಹೊರಹಾಕಲಾಗುತ್ತದೆ. Na(CH 3 COO) ಬಫರ್, pH 5.5.

3. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಪಾಲಿಮರಿಕ್ ರೂಪಗಳ ಅವಶೇಷಗಳಿಂದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ನ ಮೊನೊಮೆರಿಕ್ ರೂಪದ ಶುದ್ಧೀಕರಣವನ್ನು ಸೂಪರ್ಡೆಕ್ಸ್ 75 ರೆಸಿನ್ (ಅಮರ್ಶಮ್ ಬಯೋಸೈನ್ಸ್) ನಲ್ಲಿ ಜೆಲ್ ಶೋಧನೆಯ ಮೂಲಕ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ಮೂರನೇ ಹಂತದಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿಯನ್ನು 0.15 M NaCl ಹೊಂದಿರುವ 50 mM Na (CH 3 COO), pH 5.0 ನ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಲು ಮತ್ತು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲು ವಿವರಿಸಿದ ವಿಧಾನವು 10 ಲೀಟರ್ ಸಂಸ್ಕೃತಿ ಮಾಧ್ಯಮದಿಂದ ಪಡೆದ ಜೀವರಾಶಿಯಿಂದ 7-10 ದಿನಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದು ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಚಕ್ರದಲ್ಲಿ 4-8 ಗ್ರಾಂ ಹೆಚ್ಚು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ. ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಗುಣಮಟ್ಟವು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ವಸ್ತುವಿನ "ಯುರೋಪಿಯನ್ ಫಾರ್ಮಾಕೋಪಿಯಾ" ದ ಅವಶ್ಯಕತೆಗಳನ್ನು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ಅನುಸರಿಸುತ್ತದೆ, ಅವುಗಳೆಂದರೆ:

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸಾಂದ್ರತೆಯು 2 × 10 8 IU / ml ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿಲ್ಲ;

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಚಟುವಟಿಕೆಯು 2.0×10 8 IU/mg ಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಿಲ್ಲ;

ಬೆಳ್ಳಿಯೊಂದಿಗೆ ಜೆಲ್ಗಳನ್ನು ಕಲೆ ಹಾಕಿದಾಗ ಔಷಧದ ಎಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಟಿಕ್ ಶುದ್ಧತೆಯು ಕನಿಷ್ಟ 99% ನಷ್ಟು ಕಡಿಮೆ ಮತ್ತು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡದ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳಲ್ಲಿ ಇರುತ್ತದೆ;

ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಐಸೋಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಪಾಯಿಂಟ್ pH 5.8-6.3 ಪ್ರದೇಶದಲ್ಲಿದೆ;

ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ನಕ್ಷೆಯು ಯುರೋಪಿಯನ್ ಸ್ಟ್ಯಾಂಡರ್ಡ್ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ 2b CRS ಗಾಗಿ ಪೆಪ್ಟೈಡ್ ನಕ್ಷೆಯಿಂದ ಮೂಲಭೂತವಾಗಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿಲ್ಲ;

ನೀಡಿರುವ ಉದಾಹರಣೆಗಳಿಂದ ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ, ಆವಿಷ್ಕಾರಗಳ ಕ್ಲೈಮ್ ಗುಂಪು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಸರಳ ಮತ್ತು ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ತಂತ್ರಜ್ಞಾನವನ್ನು ಬಳಸಿಕೊಂಡು ಹೆಚ್ಚಿನ ಇಳುವರಿಯೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಅನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗಿಸುತ್ತದೆ.

ಹಕ್ಕು

1. ಮರುಸಂಯೋಜಿತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ DNA pSX50, ಮರುಸಂಯೋಜಿತ ಮಾನವ ಆಲ್ಫಾ-2b ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಎನ್ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುತ್ತದೆ, ಇದು 3218 ಬೇಸ್ ಜೋಡಿಗಳ (bp) ಗಾತ್ರವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ ಮತ್ತು ಈ ಕೆಳಗಿನ ತುಣುಕುಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: 1 ರಿಂದ 176 ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್‌ಗಳನ್ನು (bp) ಒಳಗೊಂಡಿದೆ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಪ್ರವರ್ತಕ (P trp) ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 176 bp ನ ಒಂದು ತುಣುಕು DNA, 177 ರಿಂದ 194 nt ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮ. ಶೈನ್ ಡೆಲ್ಗಾರ್ನೊ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 18 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದ ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಡಿಎನ್‌ಎ ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇದು ಅನುವಾದದ ಪ್ರಾರಂಭಕ್ಕೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ, 195 ರಿಂದ 695 nt ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮ. ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೊಟೈಡ್ ಪರ್ಯಾಯಗಳೊಂದಿಗೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ-2b ಜೀನ್ ಹೊಂದಿರುವ 501 bp ಯ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ: 37 (A>C), 39 (G>T), 40 (A>C), 42 (G>T), 67 (A> C), 69 (G>T), 70 (A>C), 72 (A>T), 96 (G>A), 100 (A>C), 102 (A>T), 114 (A >С ), 120 (C>G), 126 (G>A), 129 (G>A), 330 (C>G), 339 (G>A), 342 (G>A), 487 (A> C) , 489 (A>T), 495 (G>A), 696 ರಿಂದ 713 nt ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮ. 714 ರಿಂದ 1138 nt ವರೆಗಿನ ಸಿಂಥೆಟಿಕ್ ಪಾಲಿಲಿಂಕರ್ ಅನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ 18 bp ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಿತ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 4129 ರಿಂದ 4553 nt ವರೆಗಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pKK223-3 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 425 bp ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಕಟ್ಟುನಿಟ್ಟಾದ ಪ್ರತಿಲೇಖನ ಟರ್ಮಿನೇಟರ್ rrnBT 1 T 2 ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ, 1139 ರಿಂದ 1229 nt ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮ. 2487 ರಿಂದ 2577 nt ವರೆಗಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pUC19 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 91 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, -ಲ್ಯಾಕ್ಟೋಮಾಸ್ ಜೀನ್‌ನ ಪ್ರವರ್ತಕ (ಆಂಪಿಸಿಲಿನ್ ರೆಸಿಸ್ಟೆನ್ಸ್ ಜೀನ್ -Amp R), 1230 ರಿಂದ 2045 nt ವರೆಗಿನ ಅನುಕ್ರಮ. 720 nt ಜೊತೆ pUC4K ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 1535 ಕ್ರಿ.ಶ 816 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಕಾನ್ ಜೀನ್‌ನ ರಚನಾತ್ಮಕ ಪ್ರದೇಶವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, 2046 ಬಿಪಿಯೊಂದಿಗೆ ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿದೆ. ಗೆ 3218 ಎನ್. 1625 ರಿಂದ 453 nt ವರೆಗಿನ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ pUC19 ನ DNA ತುಣುಕನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ. 1173 ಬಿಪಿ ಗಾತ್ರದಲ್ಲಿ, ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್ ರೆಪ್ಲಿಕೇಶನ್ (ಓರಿ) ಮತ್ತು ಲ್ಯಾಕ್ ಪ್ರವರ್ತಕ (ಪಿ ಲ್ಯಾಕ್) ಗೆ ಕಾರಣವಾದ ಅನುಕ್ರಮವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

2. ಕ್ಲೈಮ್ 1 ರ ಪ್ರಕಾರ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ನೊಂದಿಗೆ ರೂಪಾಂತರಗೊಂಡ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಸ್ಟ್ರೈನ್ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ SX50 ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ-2b ಯ ಉತ್ಪಾದಕವಾಗಿದೆ.

3. ಜೈವಿಕ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ ಪೋಷಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಪೌಷ್ಟಿಕಾಂಶದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಕ್ಲೈಮ್ 2 ರ ಪ್ರಕಾರ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ SX5 ತಳಿಯನ್ನು ಬೆಳೆಸುವುದು ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾನವ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ-2b ಅನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವ ವಿಧಾನ, 700- ಒತ್ತಡದಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ಷ್ಮಜೀವಿ ಕೋಶಗಳ ಯಾಂತ್ರಿಕ ನಾಶ 900 ಬಾರ್, ಗ್ವಾನಿಡಿನ್ ಹೈಡ್ರೋಕ್ಲೋರೈಡ್‌ನ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣದಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಕರಗಿಸುವುದು, ಚೋಟ್ರೊಪಿಕ್ ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಉಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ಶಾರೀರಿಕ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಪುನರುಜ್ಜೀವನ, ಚೆಲೇಟಿಂಗ್‌ನಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್‌ನ ಮೂರು-ಹಂತದ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣ ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್ ರೆಸಿನ್‌ಗಳ ವಿನಿಮಯ, Cu CM ಸೆಫರೋಸ್ ಫಾಸ್ಟ್ ಫ್ಲೋ ಟೈಪ್ ಅಯಾನ್ ಎಕ್ಸ್‌ಚೇಂಜ್ ರೆಸಿನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ ಮತ್ತು ಸೂಪರ್‌ಡೆಕ್ಸ್ 75 ಟೈಪ್ ರೆಸಿನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಜೆಲ್ ಫಿಲ್ಟರೇಶನ್ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೋಗ್ರಫಿ.

4. ಕ್ಲೈಮ್ 3 ರ ಪ್ರಕಾರ ವಿಧಾನ, ಇದರಲ್ಲಿ ಪೋಷಕಾಂಶದ ತಲಾಧಾರಗಳು, ಮೇಲಾಗಿ ಗ್ಲೂಕೋಸ್ ಮತ್ತು ಯೀಸ್ಟ್ ಸಾರಗಳ ನಿರಂತರ ಸೇರ್ಪಡೆಯೊಂದಿಗೆ ಕಡಿಮೆಯಾದ ಟ್ರಿಪ್ಟೊಫಾನ್ ಅಂಶದೊಂದಿಗೆ ಪೋಷಕಾಂಶದ ಮಾಧ್ಯಮದಲ್ಲಿ ಕೃಷಿಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

5. ಕ್ಲೈಮ್ 3 ರ ಪ್ರಕಾರ ವಿಧಾನ, ಇದರಲ್ಲಿ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಅನ್ನು ಕರಗಿಸುವ ಮೊದಲು, ಡಿಎನ್‌ಎ, ಆರ್‌ಎನ್‌ಎ, ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳು, ಲಿಪೊಪೊಲಿಸ್ಯಾಕರೈಡ್‌ಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ ಕರಗುವ ಸೆಲ್ಯುಲಾರ್ ಘಟಕಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವ ಮೂಲಕ ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ, ಟ್ರೈಟಾನ್ XI 00, ಯೂರಿಯಾದಂತಹ ಮಾರ್ಜಕಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವ ಬಫರ್ ದ್ರಾವಣಗಳೊಂದಿಗೆ ತೊಳೆಯುವುದು.

6. ಕ್ಲೈಮ್ 3 ರ ಪ್ರಕಾರ ವಿಧಾನ, ಇದರಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿ ಕ್ರೊಮ್ಯಾಟೊಗ್ರಾಫಿಕ್ ಶುದ್ಧೀಕರಣದ ನಂತರ, 0.22 ಮೈಕ್ರಾನ್‌ಗಳ ರಂಧ್ರದ ಗಾತ್ರದೊಂದಿಗೆ ಫಿಲ್ಟರ್‌ಗಳ ಮೂಲಕ ಕ್ರಿಮಿನಾಶಕ ಶೋಧನೆಯನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಜೊತೆ ನಡೆಸಿದ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ ವ್ಯಾಪಕಸೂಚನೆಗಳು ಮತ್ತು ವ್ಯಾಪಕವಾದ ಡೋಸ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ (ವಾರಕ್ಕೆ 6 ಮಿಲಿಯನ್ IU/m2 - ಕೂದಲುಳ್ಳ ಜೀವಕೋಶದ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ; ವಾರಕ್ಕೆ 100 ಮಿಲಿಯನ್ IU/m2 ವರೆಗೆ - ಮೆಲನೋಮಕ್ಕೆ), ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳು ಜ್ವರ, ಆಯಾಸ, ತಲೆನೋವು, ಮೈಯಾಲ್ಜಿಯಾ. ಔಷಧವನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಿದ 72 ಗಂಟೆಗಳ ನಂತರ ಜ್ವರ ಮತ್ತು ಆಯಾಸವನ್ನು ಪರಿಹರಿಸಲಾಗಿದೆ. ಜ್ವರವು ಇನ್ಫ್ಲುಯೆನ್ಸ ತರಹದ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್‌ನ ಒಂದು ಲಕ್ಷಣವಾಗಿದ್ದರೂ ಇಂಟರ್‌ಫೆರಾನ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಕಂಡುಬರುತ್ತದೆ, ಇತರರನ್ನು ತಳ್ಳಿಹಾಕಲು ಮೌಲ್ಯಮಾಪನವನ್ನು ನಡೆಸಬೇಕು. ಸಂಭವನೀಯ ಕಾರಣಗಳುನಿರಂತರ ಜ್ವರ.
  ಕೆಳಗಿನ ಸುರಕ್ಷತಾ ಪ್ರೊಫೈಲ್ ಅನ್ನು 4 ರಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ ವೈದ್ಯಕೀಯ ಪ್ರಯೋಗಗಳುದೀರ್ಘಕಾಲದ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಸಿ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಅನ್ನು ಮೊನೊಥೆರಪಿಯಾಗಿ ಅಥವಾ 1 ವರ್ಷಕ್ಕೆ ರಿಬಾವಿರಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜಿಸಲಾಗಿದೆ. ಎಲ್ಲಾ ರೋಗಿಗಳು ವಾರಕ್ಕೆ 3 ಬಾರಿ 3 ಮಿಲಿಯನ್ IU ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಪಡೆದರು.
  1 ವರ್ಷಕ್ಕೆ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ (ಅಥವಾ ರಿಬಾವಿರಿನ್ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ) ಅನ್ನು ಸ್ವೀಕರಿಸುವ ಹಿಂದೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆ ಪಡೆಯದ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ 10% ಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚು ಅಥವಾ ಸಮಾನವಾದ ಆವರ್ತನದಲ್ಲಿ ಸಂಭವಿಸುವ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ಟೇಬಲ್ 2 ತೋರಿಸುತ್ತದೆ. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಗಮನಿಸಿದ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳು ಸೌಮ್ಯ ಅಥವಾ ಮಧ್ಯಮ.
  ಕೋಷ್ಟಕ 2.

ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳು	ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ (n=806)	ಇಂಟ್ರಾನ್ A + ರಿಬಾವಿರಿನ್ (n=1010)
ಸ್ಥಳೀಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ಉರಿಯೂತದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳುಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಸೈಟ್ನಲ್ಲಿ	9–16%	6–17%
ಇತರ ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಸೈಟ್ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು	5–8%	3–36%
ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ತಲೆನೋವು	51–64%	48–64%
ಆಯಾಸ	42–79%	43–68%
ಚಳಿ	15–39%	19–41%
ಜ್ವರ	29–39%	29–41%
ಫ್ಲೂ ತರಹದ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್	19–37%	18–29%
ಅಸ್ತೇನಿಯಾ	9–30%	9–30%
ತೂಕ ಇಳಿಕೆ	6–11%	9–19%
ಜೀರ್ಣಾಂಗವ್ಯೂಹದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ವಾಕರಿಕೆ	18–31%	25–44%
ಅನೋರೆಕ್ಸಿಯಾ	14–19%	19–26%
ಅತಿಸಾರ	12–22%	13–18%
ಹೊಟ್ಟೆ ನೋವು	9–17%	9–14%
ವಾಂತಿ	3–10%	6–10%
ಮಸ್ಕ್ಯುಲೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ನಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ಮೈಯಾಲ್ಜಿಯಾ	41–61%	30–62%
ಆರ್ತ್ರಾಲ್ಜಿಯಾ	25–31%	21–29%
ಮೂಳೆಗಳು ಮತ್ತು ಸ್ನಾಯುಗಳಲ್ಲಿ ನೋವು	15–20%	11–20%
ಕೇಂದ್ರ ನರಮಂಡಲದಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ಖಿನ್ನತೆ	16–36%	25–34%
ಸಿಡುಕುತನ	13–27%	18–34%
ನಿದ್ರಾಹೀನತೆ	21–28%	33–41%
ಆತಂಕ	8–12%	8–16%
ಕೇಂದ್ರೀಕರಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯದ ದುರ್ಬಲತೆ	8–14%	9–21%
ಭಾವನಾತ್ಮಕ ಕೊರತೆ	8–14%	5–11%
ಚರ್ಮದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು
ಅಲೋಪೆಸಿಯಾ	22–31%	26–32%
ತುರಿಕೆ	6–9%	18–37%
ಒಣ ಚರ್ಮ	5–8%	5–7%
ರಾಶ್	10–21%	15–24%
ಹೊರಗಿನಿಂದ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು ಉಸಿರಾಟದ ವ್ಯವಸ್ಥೆ
ಫಾರಂಜಿಟಿಸ್	3–7%	7–13%
ಕೆಮ್ಮು	3–7%	8–11%
ಡಿಸ್ಪ್ನಿಯಾ	2–9%	10–22%
ಇತರರು
ತಲೆತಿರುಗುವಿಕೆ	8–18%	10–22%
ವೈರಾಣು ಸೋಂಕು	0–7%	3–10%

  ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ ವೈರಲ್ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ಸಿ, ಅಭಿವೃದ್ಧಿಯ ಆವರ್ತನದಲ್ಲಿ ಕೆಲವು ಡೋಸ್-ಅವಲಂಬಿತ ಹೆಚ್ಚಳದೊಂದಿಗೆ ಇತರ ಸೂಚನೆಗಳಿಗಾಗಿ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಅನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ ಗುರುತಿಸಲ್ಪಟ್ಟವುಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿರುತ್ತವೆ.
  ಇತರ ಸೂಚನೆಗಳಿಗಾಗಿ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಬಳಸುವಾಗ (ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಅಲ್ಲದ ಅಧ್ಯಯನಗಳಲ್ಲಿ) ವಿರಳವಾಗಿ (|1/10000,< 1/1000) или очень редко (.
  ಒಟ್ಟಾರೆಯಾಗಿ ದೇಹದಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಮುಖದ ಊತ.
  ಅಸ್ತೇನಿಕ್ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು (ಅಸ್ತೇನಿಯಾ, ಅಸ್ವಸ್ಥತೆ ಮತ್ತು ಆಯಾಸ), ನಿರ್ಜಲೀಕರಣ, ಬಡಿತ, ಸೋರಿಯಾಸಿಸ್, ಶಿಲೀಂಧ್ರಗಳ ಸೋಂಕು ಮತ್ತು ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಸೋಂಕು(ಸೆಪ್ಸಿಸ್ ಸೇರಿದಂತೆ).
  ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಸಾರ್ಕೊಯಿಡೋಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಅದರ ಉಲ್ಬಣ.
  ಇಡಿಯೋಪಥಿಕ್ ಅಥವಾ ಥ್ರಂಬೋಟಿಕ್ ಥ್ರಂಬೋಸೈಟೋಪೆನಿಕ್ ಪರ್ಪುರಾ, ರುಮಟಾಯ್ಡ್ ಆರ್ಥ್ರೈಟಿಸ್, ಸಿಸ್ಟಮಿಕ್ ಲೂಪಸ್ ಎರಿಥೆಮಾಟೋಸಸ್, ವ್ಯಾಸ್ಕುಲೈಟಿಸ್ ಮತ್ತು ವೋಗ್ಟ್-ಕೊಯಾನಗಿ-ಹರಾಡಾ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಆಲ್ಫಾ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಳ ಬಳಕೆಯೊಂದಿಗೆ ವಿವಿಧ ಸ್ವಯಂ ನಿರೋಧಕ ಮತ್ತು ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆ-ಮಧ್ಯಸ್ಥ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಗಳು ವರದಿಯಾಗಿದೆ.
  ಪ್ರಕರಣಗಳು ವರದಿಯಾಗಿವೆ ತೀವ್ರ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳುಉರ್ಟೇರಿಯಾ, ಆಂಜಿಯೋಡೆಮಾ ಮತ್ತು ಅನಾಫಿಲ್ಯಾಕ್ಸಿಸ್ ಸೇರಿದಂತೆ ಅತಿಸೂಕ್ಷ್ಮತೆ.
  ಹೊರಗಿನಿಂದ ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ: ವಿರಳವಾಗಿ - ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಹಿಂದಿನ ಕಾಯಿಲೆಗಳ ಇತಿಹಾಸ ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಅಥವಾ ಹಿಂದಿನ ಕಾರ್ಡಿಯೋಟಾಕ್ಸಿಕ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ), ಅಸ್ಥಿರ ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಕಾರ್ಡಿಯೊಮಿಯೋಪತಿ (ಹೃದಯನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಹೊರೆಯ ಇತಿಹಾಸವಿಲ್ಲದ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ); ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಅಪಧಮನಿಯ ಹೈಪೊಟೆನ್ಷನ್, ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಲ್ ಇಷ್ಕೆಮಿಯಾ ಮತ್ತು ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಲ್ ಇನ್ಫಾರ್ಕ್ಷನ್.
  ಕೇಂದ್ರ ನರಮಂಡಲ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯದಿಂದ ನರಮಂಡಲದ. ವಿರಳವಾಗಿ - ಆತ್ಮಹತ್ಯಾ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು; ಬಹಳ ಅಪರೂಪವಾಗಿ - ಆಕ್ರಮಣಕಾರಿ ನಡವಳಿಕೆ, ಇತರ ಜನರನ್ನು ಗುರಿಯಾಗಿಸಿಕೊಂಡವು ಸೇರಿದಂತೆ, ಆತ್ಮಹತ್ಯಾ ಪ್ರಯತ್ನಗಳು, ಆತ್ಮಹತ್ಯೆ, ಸೈಕೋಸಿಸ್ (ಭ್ರಮೆಗಳು ಸೇರಿದಂತೆ), ದುರ್ಬಲ ಪ್ರಜ್ಞೆ, ನರರೋಗ, ಪಾಲಿನ್ಯೂರೋಪತಿ, ಎನ್ಸೆಫಲೋಪತಿ, ಸೆರೆಬ್ರೊವಾಸ್ಕುಲರ್ ಇಷ್ಕೆಮಿಯಾ, ಸೆರೆಬ್ರೊವಾಸ್ಕುಲರ್ ಹೆಮರೇಜ್, ಬಾಹ್ಯ ನರರೋಗ, ಸೆಳೆತ.
  ಶ್ರವಣ ಅಂಗದ ಕಡೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಶ್ರವಣ ನಷ್ಟ.
  ಅಂತಃಸ್ರಾವಕ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಮಧುಮೇಹ ಮೆಲ್ಲಿಟಸ್, ಅಸ್ತಿತ್ವದಲ್ಲಿರುವ ಹದಗೆಡುತ್ತಿದೆ ಮಧುಮೇಹ.
  ಜಠರಗರುಳಿನ ಪ್ರದೇಶದಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಪ್ಯಾಂಕ್ರಿಯಾಟೈಟಿಸ್, ಹೆಚ್ಚಿದ ಹಸಿವು, ರಕ್ತಸ್ರಾವ ಒಸಡುಗಳು, ಕೊಲೈಟಿಸ್.
  ಯಕೃತ್ತು ಮತ್ತು ಪಿತ್ತರಸ ನಾಳಗಳಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಹೆಪಟೊಟಾಕ್ಸಿಸಿಟಿ (ಸೇರಿದಂತೆ ಮಾರಣಾಂತಿಕ).
  ಹಲ್ಲುಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿದಂತದ ಬದಲಾವಣೆಗಳು. ನೈಟ್ರಾನ್ ಎ ಮತ್ತು ರಿಬಾವಿರಿನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ಪಡೆಯುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ, ಇವೆ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯ ಬದಲಾವಣೆಗಳುಹಲ್ಲುಗಳು ಮತ್ತು ಪರಿದಂತದಿಂದ. ದೀರ್ಘಕಾಲದವರೆಗೆ ಒಣ ಬಾಯಿ ಸಂಯೋಜನೆಯ ಚಿಕಿತ್ಸೆರಿಬಾವಿರಿನ್ ಮತ್ತು ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಹಲ್ಲು ಮತ್ತು ಬಾಯಿಯ ಲೋಳೆಪೊರೆಯ ಹಾನಿಗೆ ಕಾರಣವಾಗಬಹುದು. ರೋಗಿಗಳು ದಿನಕ್ಕೆ ಎರಡು ಬಾರಿ ಹಲ್ಲುಜ್ಜಬೇಕು ಮತ್ತು ನಿಯಮಿತವಾಗಿ ದಂತ ತಪಾಸಣೆ ಮಾಡಬೇಕು. ಜೊತೆಗೆ, ಕೆಲವು ರೋಗಿಗಳು ವಾಂತಿ ಅನುಭವಿಸಬಹುದು.
  ಚಯಾಪಚಯ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕಡೆಯಿಂದ.ವಿರಳವಾಗಿ - ಹೈಪರ್ಗ್ಲೈಸೆಮಿಯಾ, ಹೈಪರ್ಟ್ರಿಗ್ಲಿಸರೈಡಿಮಿಯಾ.
  ಮಸ್ಕ್ಯುಲೋಸ್ಕೆಲಿಟಲ್ ಸಿಸ್ಟಮ್ನಿಂದ.ವಿರಳವಾಗಿ - ರಾಬ್ಡೋಮಿಯೊಲಿಸಿಸ್ (ಕೆಲವೊಮ್ಮೆ ತೀವ್ರ), ಲೆಗ್ ಸೆಳೆತ, ಬೆನ್ನು ನೋವು, ಮೈಯೋಸಿಟಿಸ್.
  ಚರ್ಮದ ಕಡೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಎರಿಥೆಮಾ ಮಲ್ಟಿಫಾರ್ಮ್, ಸ್ಟೀವನ್ಸ್-ಜಾನ್ಸನ್ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್, ವಿಷಕಾರಿ ಎಪಿಡರ್ಮಲ್ ನೆಕ್ರೋಲಿಸಿಸ್, ಇಂಜೆಕ್ಷನ್ ಸೈಟ್ನಲ್ಲಿ ನೆಕ್ರೋಸಿಸ್.
  ಉಸಿರಾಟದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ.ವಿರಳವಾಗಿ - ನ್ಯುಮೋನಿಯಾ; ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ - ಶ್ವಾಸಕೋಶದ ಒಳನುಸುಳುವಿಕೆಗಳು, ನ್ಯುಮೋನಿಟಿಸ್.
  ಮೂತ್ರದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ಅಪರೂಪವಾಗಿ - ನೆಫ್ರೋಟಿಕ್ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್, ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆ, ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ವೈಫಲ್ಯ.
  ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ.ಬಹಳ ವಿರಳವಾಗಿ, ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಅನ್ನು ಮೊನೊಥೆರಪಿಯಾಗಿ ಅಥವಾ ರಿಬಾವಿರಿನ್ ಜೊತೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸುವಾಗ, ಅಪ್ಲ್ಯಾಸ್ಟಿಕ್ ರಕ್ತಹೀನತೆ ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣ ಕೆಂಪು ಅಪ್ಲಾಸಿಯಾವನ್ನು ಗಮನಿಸಲಾಯಿತು. ಮೂಳೆ ಮಜ್ಜೆ.
  ದೃಷ್ಟಿಯ ಅಂಗದ ಬದಿಯಿಂದ.ಅಪರೂಪವಾಗಿ - ರೆಟಿನಾದ ರಕ್ತಸ್ರಾವ, ಫಂಡಸ್‌ನಲ್ಲಿನ ಫೋಕಲ್ ಬದಲಾವಣೆಗಳು, ರೆಟಿನಾದ ಅಪಧಮನಿಗಳು ಮತ್ತು ರಕ್ತನಾಳಗಳ ಥ್ರಂಬೋಸಿಸ್, ದೃಷ್ಟಿ ತೀಕ್ಷ್ಣತೆ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ, ದೃಷ್ಟಿಗೋಚರ ಕ್ಷೇತ್ರಗಳು, ನರಗಳ ಉರಿಯೂತ ಆಪ್ಟಿಕ್ ನರ, ಪಾಪಿಲ್ಲೆಡೆಮಾ.
  ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ ಗಮನಾರ್ಹ ಬದಲಾವಣೆಗಳುಪ್ರಯೋಗಾಲಯ ಸೂಚಕಗಳು.(10 ಮಿಲಿಯನ್ IU / ದಿನಕ್ಕಿಂತ ಹೆಚ್ಚಿನ ಪ್ರಮಾಣದಲ್ಲಿ drug ಷಧಿಯನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡಿದಾಗ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಗಮನಿಸಲಾಗಿದೆ) - ಗ್ರ್ಯಾನುಲೋಸೈಟ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್‌ಗಳ ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆ, ಹಿಮೋಗ್ಲೋಬಿನ್ ಮಟ್ಟಗಳು ಮತ್ತು ಪ್ಲೇಟ್‌ಲೆಟ್ ಎಣಿಕೆಗಳಲ್ಲಿನ ಇಳಿಕೆ, ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫೇಟೇಸ್, ಎಲ್‌ಡಿಹೆಚ್ ಚಟುವಟಿಕೆಯಲ್ಲಿ ಹೆಚ್ಚಳ , ಕ್ರಿಯೇಟಿನೈನ್ ಮತ್ತು ಸೀರಮ್ ಯೂರಿಯಾ ನೈಟ್ರೋಜನ್ ಮಟ್ಟ. ರಕ್ತ ಪ್ಲಾಸ್ಮಾದಲ್ಲಿ ALT ಮತ್ತು AST ಯ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಹೆಚ್ಚಳವು ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಹೊರತುಪಡಿಸಿ ಎಲ್ಲಾ ಸೂಚನೆಗಳಿಗೆ ಬಳಸಿದಾಗ ರೋಗಶಾಸ್ತ್ರೀಯವೆಂದು ಗುರುತಿಸಲಾಗಿದೆ, ಹಾಗೆಯೇ HBV ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಪಸ್ಥಿತಿಯಲ್ಲಿ ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಬಿ ಹೊಂದಿರುವ ಕೆಲವು ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ.
  ಯಾವುದೇ ಸೂಚನೆಗಾಗಿ ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಬಳಸುವಾಗ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳು ಬೆಳವಣಿಗೆಯಾದರೆ, ಡೋಸ್ ಅನ್ನು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬೇಕು ಅಥವಾ ಪ್ರತಿಕೂಲ ಘಟನೆಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕುವವರೆಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ತಾತ್ಕಾಲಿಕವಾಗಿ ಅಡ್ಡಿಪಡಿಸಬೇಕು. ಸಾಕಷ್ಟು ಡೋಸೇಜ್ ಕಟ್ಟುಪಾಡುಗಳಿಗೆ ನಿರಂತರ ಅಥವಾ ಮರುಕಳಿಸುವ ಅಸಹಿಷ್ಣುತೆ ಬೆಳವಣಿಗೆಯಾದರೆ ಅಥವಾ ರೋಗವು ಮುಂದುವರೆದರೆ, ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಬೇಕು.   ಔಷಧದ ಪ್ಯಾರೆನ್ಟೆರಲ್ ಆಡಳಿತದೊಂದಿಗೆ, ಶೀತ, ಜ್ವರ, ಆಯಾಸ, ತಲೆನೋವು, ಅಸ್ವಸ್ಥತೆ ಮತ್ತು ಜ್ವರ ತರಹದ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್ ಸಾಧ್ಯ. ಈ ಅಡ್ಡ ಪರಿಣಾಮಗಳನ್ನು ಪ್ಯಾರಸಿಟಮಾಲ್ ಅಥವಾ ಇಂಡೊಮೆಥಾಸಿನ್ ನಿಂದ ಭಾಗಶಃ ನಿವಾರಿಸಲಾಗಿದೆ.
  ನಲ್ಲಿ ಸ್ಥಳೀಯ ಅಪ್ಲಿಕೇಶನ್ಕಣ್ಣಿನ ಲೋಳೆಯ ಪೊರೆಯ ಮೇಲೆ ಔಷಧದ, ಕಾಂಜಂಕ್ಟಿವಲ್ ಸೋಂಕು, ಕಣ್ಣಿನ ಲೋಳೆಯ ಪೊರೆಯ ಹೈಪೇರಿಯಾ, ಏಕ ಕೋಶಕಗಳು, ಕೆಳಗಿನ ಫೋರ್ನಿಕ್ಸ್ನ ಕಾಂಜಂಕ್ಟಿವಾ ಊತ ಸಾಧ್ಯ.
  ಔಷಧವನ್ನು ಬಳಸುವಾಗ, ಸಾಮಾನ್ಯ ಪ್ರಯೋಗಾಲಯದ ನಿಯತಾಂಕಗಳಿಂದ ವಿಚಲನಗಳು ಸಾಧ್ಯ, ಲ್ಯುಕೋಪೆನಿಯಾ, ಲಿಂಫೋಪೆನಿಯಾ, ಥ್ರಂಬೋಸೈಟೋಪೆನಿಯಾ, ಅಲನೈನ್ ಅಮಿನೊಟ್ರಾನ್ಸ್ಫರೇಸ್, ಕ್ಷಾರೀಯ ಫಾಸ್ಫಟೇಸ್ನ ಹೆಚ್ಚಿದ ಮಟ್ಟಗಳಿಂದ ವ್ಯಕ್ತವಾಗುತ್ತದೆ. ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಈ ವಿಚಲನಗಳನ್ನು ಸಮಯೋಚಿತವಾಗಿ ಪತ್ತೆಹಚ್ಚಲು, ಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳುರಕ್ತ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ 2 ವಾರಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಮತ್ತು ಜೀವರಾಸಾಯನಿಕ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳನ್ನು ಪ್ರತಿ 4 ವಾರಗಳಿಗೊಮ್ಮೆ ಪುನರಾವರ್ತಿಸಬೇಕು. ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ, ಈ ಬದಲಾವಣೆಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚಿಕ್ಕದಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಲಕ್ಷಣರಹಿತವಾಗಿರುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಹಿಂತಿರುಗಿಸಬಹುದಾಗಿದೆ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಬೀಟಾದ ಅಡ್ಡಪರಿಣಾಮಗಳು.

  ಲ್ಯುಕೋಪೆನಿಯಾ. ಥ್ರಂಬೋಸೈಟೋಪೆನಿಯಾ. ರಕ್ತಹೀನತೆ. ಆಟೋಇಮ್ಯೂನ್ ಹಿಮೋಲಿಸಿಸ್. ಅನೋರೆಕ್ಸಿಯಾ. ಅತಿಸಾರ. ಹೆಚ್ಚಿದ ಟ್ರಾನ್ಸಮಿನೇಸ್ ಮಟ್ಟಗಳು. ಹೈಪೊಟೆನ್ಷನ್. ಟಾಕಿಕಾರ್ಡಿಯಾ. ಡಿಸ್ಪ್ನಿಯಾ. ತಲೆತಿರುಗುವಿಕೆ. ನಿದ್ರೆಯ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಗಳು. ಮೂಳೆಗಳು ಮತ್ತು ಕೀಲುಗಳಲ್ಲಿ ನೋವು. ಜ್ವರ. ದೌರ್ಬಲ್ಯ. ಮೈಯಾಲ್ಜಿಯಾ. ತಲೆನೋವು. ವಾಕರಿಕೆ. ವಾಂತಿ; ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಬಳಕೆಯೊಂದಿಗೆ - ಕೂದಲು ಉದುರುವಿಕೆ.

ಈ ವಿಭಾಗವು ಪ್ರಸ್ತುತಪಡಿಸುತ್ತದೆ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ 2 ಬಿ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ 2 ಎ ಬಳಕೆಗೆ ಸೂಚನೆಗಳುಮೊದಲ ತಲೆಮಾರಿನ, ಇದನ್ನು ರೇಖೀಯ, ಸರಳ ಅಥವಾ ಅಲ್ಪಾವಧಿ ಎಂದೂ ಕರೆಯುತ್ತಾರೆ. ಈ ಸಿದ್ಧತೆಗಳ ಏಕೈಕ ಪ್ರಯೋಜನವೆಂದರೆ ಅವುಗಳ ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಡಿಮೆ ಬೆಲೆ.

1943 ರಲ್ಲಿ, V. ಮತ್ತು J. ಹೀಲ್ ಹಸ್ತಕ್ಷೇಪ ವಿದ್ಯಮಾನ ಎಂದು ಕರೆಯಲ್ಪಡುವದನ್ನು ಕಂಡುಹಿಡಿದರು. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಆರಂಭಿಕ ಕಲ್ಪನೆ ಹೀಗಿತ್ತು: ವೈರಸ್‌ಗಳ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿಯನ್ನು ತಡೆಯುವ ಅಂಶ. 1957 ರಲ್ಲಿ, ಇಂಗ್ಲಿಷ್ ವಿಜ್ಞಾನಿ ಅಲಿಕ್ ಐಸಾಕ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸ್ವಿಸ್ ಸಂಶೋಧಕ ಜೀನ್ ಲಿಂಡೆನ್ಮನ್ ಈ ಅಂಶವನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕಿಸಿ, ಅದನ್ನು ಸ್ಪಷ್ಟವಾಗಿ ವಿವರಿಸಿದರು ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಎಂದು ಕರೆದರು.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ (IFN) ಮಾನವ ದೇಹದಲ್ಲಿ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುವ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅಣುವಾಗಿದೆ. ಮಾನವ ಆನುವಂಶಿಕ ಉಪಕರಣವು ಅದರ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಗೆ (ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಜೀನ್) "ಪಾಕವಿಧಾನ" ವನ್ನು ಸಂಕೇತಿಸುತ್ತದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸೈಟೊಕಿನ್‌ಗಳಲ್ಲಿ ಒಂದಾಗಿದೆ, ಇದು ಆಡುವ ಅಣುಗಳನ್ನು ಸಂಕೇತಿಸುತ್ತದೆ ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಣೆಯಲ್ಲಿ.

IFN ನ ಆವಿಷ್ಕಾರದ ನಂತರ ಅರ್ಧ ಶತಮಾನದಲ್ಲಿ, ಈ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ನ ಡಜನ್ಗಟ್ಟಲೆ ಗುಣಲಕ್ಷಣಗಳನ್ನು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ. ವೈದ್ಯಕೀಯ ದೃಷ್ಟಿಕೋನದಿಂದ, ಮುಖ್ಯವಾದವುಗಳು ಆಂಟಿವೈರಲ್ ಮತ್ತು ಆಂಟಿಟ್ಯೂಮರ್ ಕಾರ್ಯಗಳಾಗಿವೆ.

ಮಾನವ ದೇಹವು ಸುಮಾರು 20 ವಿಧಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುತ್ತದೆ - ಇಡೀ ಕುಟುಂಬ - ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳು. IFN ಅನ್ನು ಎರಡು ವಿಧಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ: I ಮತ್ತು II.

ಟೈಪ್ I IFN ಗಳು - ಆಲ್ಫಾ, ಬೀಟಾ, ಒಮೆಗಾ, ಥೀಟಾ - ವೈರಸ್‌ಗಳು ಮತ್ತು ಇತರ ಕೆಲವು ಏಜೆಂಟ್‌ಗಳ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ದೇಹದ ಹೆಚ್ಚಿನ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆ. ಟೈಪ್ II IFN ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಗಾಮಾವನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ, ಇದು ವಿದೇಶಿ ಏಜೆಂಟ್ಗಳ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಯಾಗಿ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಉತ್ಪತ್ತಿಯಾಗುತ್ತದೆ.

ಆರಂಭದಲ್ಲಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಸಿದ್ಧತೆಗಳನ್ನು ದಾನಿ ರಕ್ತ ಕಣಗಳಿಂದ ಮಾತ್ರ ಪಡೆಯಲಾಯಿತು; ಅವುಗಳನ್ನು ಹೀಗೆ ಕರೆಯಲಾಗುತ್ತಿತ್ತು: ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳು. 1980 ರಲ್ಲಿ, ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಅಥವಾ ತಳೀಯವಾಗಿ ವಿನ್ಯಾಸಗೊಳಿಸಲಾದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳ ಯುಗವು ಪ್ರಾರಂಭವಾಯಿತು. ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಔಷಧಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯು ಮಾನವ ದಾನಿ ರಕ್ತ ಅಥವಾ ಇತರ ಜೈವಿಕ ಕಚ್ಚಾ ವಸ್ತುಗಳಿಂದ ಒಂದೇ ರೀತಿಯ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಉತ್ಪಾದಿಸುವುದಕ್ಕಿಂತ ಗಮನಾರ್ಹವಾಗಿ ಅಗ್ಗವಾಗಿದೆ; ಅವುಗಳ ಉತ್ಪಾದನೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ ದಾನಿ ರಕ್ತಇದು ಸೋಂಕಿನ ಮೂಲವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುತ್ತದೆ. ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಔಷಧಗಳುವಿದೇಶಿ ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿರುವುದಿಲ್ಲ ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ಕಡಿಮೆ ಹೊಂದಿರುತ್ತವೆ ಅಡ್ಡ ಪರಿಣಾಮಗಳು. ಅವರ ಗುಣಪಡಿಸುವ ಸಾಮರ್ಥ್ಯವು ಇದೇ ರೀತಿಯ ನೈಸರ್ಗಿಕ ಔಷಧಿಗಳಿಗಿಂತ ಹೆಚ್ಚಾಗಿದೆ.

ವೈರಲ್ ರೋಗಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಗಾಗಿ, ನಿರ್ದಿಷ್ಟವಾಗಿ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಸಿ, ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ (IFN-α) ಅನ್ನು ಮುಖ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. "ಸರಳ" ("ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ") ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳು ಆಲ್ಫಾ 2 ಬಿ ಮತ್ತು ಆಲ್ಫಾ 2 ಎ ಮತ್ತು ಪೆಜಿಲೇಟೆಡ್ (ಪೆಗಿಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಎ ಮತ್ತು ಪೆಗಿಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ) ಇವೆ. "ಸರಳ" ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳನ್ನು ಪ್ರಾಯೋಗಿಕವಾಗಿ EU ಮತ್ತು USA ನಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುವುದಿಲ್ಲ, ಆದರೆ ನಮ್ಮ ದೇಶದಲ್ಲಿ, ಅವುಗಳ ತುಲನಾತ್ಮಕ ಅಗ್ಗದತೆಯಿಂದಾಗಿ, ಅವುಗಳನ್ನು ಸಾಕಷ್ಟು ಬಾರಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಸಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ, "ಸಣ್ಣ" IFN-α ನ ಎರಡೂ ರೂಪಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ: ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಎ ಮತ್ತು ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ (ಒಂದು ಅಮೈನೋ ಆಮ್ಲದಲ್ಲಿ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ). ಸರಳವಾದ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದುಗಳನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಪ್ರತಿ ದಿನವೂ ಮಾಡಲಾಗುತ್ತದೆ (ಪೆಗಿಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳೊಂದಿಗೆ - ವಾರಕ್ಕೊಮ್ಮೆ). ಪ್ರತಿ ದಿನವೂ ನಿರ್ವಹಿಸಿದಾಗ ಅಲ್ಪಾವಧಿಯ IFN ಗಳೊಂದಿಗಿನ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವು ಪೆಗಿಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳಿಗಿಂತ ಕಡಿಮೆಯಾಗಿದೆ. ಕೆಲವು ತಜ್ಞರು "ಸರಳ" IFN ನ ದೈನಂದಿನ ಚುಚ್ಚುಮದ್ದನ್ನು ಶಿಫಾರಸು ಮಾಡುತ್ತಾರೆ, ಏಕೆಂದರೆ AVT ಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವು ಸ್ವಲ್ಪ ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ.

"ಸಣ್ಣ" IFN ಗಳ ವ್ಯಾಪ್ತಿಯು ಸಾಕಷ್ಟು ವಿಸ್ತಾರವಾಗಿದೆ. ಅವರನ್ನು ಬಿಡುಗಡೆ ಮಾಡಲಾಗಿದೆ ವಿವಿಧ ತಯಾರಕರಿಂದಅಡಿಯಲ್ಲಿ ವಿವಿಧ ಹೆಸರುಗಳು: ರೋಫೆರಾನ್-ಎ, ಇಂಟ್ರಾನ್ ಎ, ಲಾಫೆರಾನ್, ರೀಫೆರಾನ್-ಇಸಿ, ರಿಯಲ್ಡಿರಾನ್, ಎಬೆರಾನ್, ಇಂಟರ್ಲ್, ಅಲ್ಟೆವಿರ್, ಅಲ್ಫರೋನಾ ಮತ್ತು ಇತರರು.
ಹೆಚ್ಚು ಅಧ್ಯಯನ ಮಾಡಿದ (ಮತ್ತು ಆದ್ದರಿಂದ ದುಬಾರಿ) ರೋಫೆರಾನ್-ಎ ಮತ್ತು ಇಂಟ್ರಾನ್-ಎ. ವೈರಸ್ ಮತ್ತು ಇತರ ಅಂಶಗಳ ಜೀನೋಟೈಪ್ ಅನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ರಿಬಾವಿರಿನ್ ಸಂಯೋಜನೆಯೊಂದಿಗೆ ಈ IFN ಗಳ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಪರಿಣಾಮಕಾರಿತ್ವವು 30% ರಿಂದ 60% ವರೆಗೆ ಇರುತ್ತದೆ. ಮುಖ್ಯ ಪಟ್ಟಿ ಬ್ರಾಂಡ್‌ಗಳುಸರಳ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಳ ತಯಾರಕರು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ವಿವರಣೆಯನ್ನು ಕೋಷ್ಟಕದಲ್ಲಿ ನೀಡಲಾಗಿದೆ.

ಎಲ್ಲಾ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳನ್ನು ಶೈತ್ಯೀಕರಣದಲ್ಲಿ ಸಂಗ್ರಹಿಸಬೇಕು (+2 ರಿಂದ +8 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ವರೆಗೆ). ಅವುಗಳನ್ನು ಬಿಸಿ ಮಾಡಬಾರದು ಅಥವಾ ಫ್ರೀಜ್ ಮಾಡಬಾರದು. ಔಷಧವನ್ನು ಅಲುಗಾಡಿಸಬೇಡಿ ಅಥವಾ ನಿರ್ದೇಶಿಸಲು ಒಡ್ಡಬೇಡಿ ಸೂರ್ಯನ ಕಿರಣಗಳು. ವಿಶೇಷ ಧಾರಕಗಳಲ್ಲಿ ಔಷಧಿಗಳನ್ನು ಸಾಗಿಸಲು ಇದು ಅವಶ್ಯಕವಾಗಿದೆ.

ವಸ್ತು-ಪರಿಹಾರ: ಪ್ಯಾಕ್ಗಳುರೆಗ್. ಸಂಖ್ಯೆ: LSR-007009/08

ಕ್ಲಿನಿಕಲ್ ಮತ್ತು ಔಷಧೀಯ ಗುಂಪು:

ಬಿಡುಗಡೆ ರೂಪ, ಸಂಯೋಜನೆ ಮತ್ತು ಪ್ಯಾಕೇಜಿಂಗ್

ವಸ್ತು - ಪರಿಹಾರ.

ಬಾಟಲಿಗಳು (1) - ಕಾರ್ಡ್ಬೋರ್ಡ್ ಪ್ಯಾಕ್ಗಳು.

ಔಷಧದ ಸಕ್ರಿಯ ಘಟಕಗಳ ವಿವರಣೆ " ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ»

ಔಷಧೀಯ ಪರಿಣಾಮ

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್. ಇದು 19,300 ಡಾಲ್ಟನ್‌ಗಳ ಆಣ್ವಿಕ ತೂಕದೊಂದಿಗೆ ಹೆಚ್ಚು ಶುದ್ಧೀಕರಿಸಿದ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಗಿದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ನ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯನ್ನು ಎನ್‌ಕೋಡಿಂಗ್ ಮಾಡುವ ಮಾನವ ಲ್ಯುಕೋಸೈಟ್ ಜೀನ್‌ನೊಂದಿಗೆ ಬ್ಯಾಕ್ಟೀರಿಯಾದ ಪ್ಲಾಸ್ಮಿಡ್‌ಗಳನ್ನು ಹೈಬ್ರಿಡೈಸ್ ಮಾಡುವ ಮೂಲಕ ಎಸ್ಚೆರಿಚಿಯಾ ಕೋಲಿ ಕ್ಲೋನ್‌ನಿಂದ ಪಡೆಯಲಾಗಿದೆ. ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್‌ಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿ, ಆಲ್ಫಾ-2ಎ ಅರ್ಜಿನೈನ್ ಅನ್ನು 23ನೇ ಸ್ಥಾನದಲ್ಲಿ ಹೊಂದಿದೆ.

ಇದು ಆಂಟಿವೈರಲ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ನಿರ್ದಿಷ್ಟ ಮೆಂಬರೇನ್ ಗ್ರಾಹಕಗಳೊಂದಿಗಿನ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆ ಮತ್ತು ಆರ್ಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಣೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆ ಮತ್ತು ಅಂತಿಮವಾಗಿ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳಿಂದ ಉಂಟಾಗುತ್ತದೆ. ಎರಡನೆಯದು, ಪ್ರತಿಯಾಗಿ, ವೈರಸ್ನ ಸಾಮಾನ್ಯ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ ಅಥವಾ ಅದರ ಬಿಡುಗಡೆಯನ್ನು ತಡೆಯುತ್ತದೆ.

ಇದು ಇಮ್ಯುನೊಮಾಡ್ಯುಲೇಟರಿ ಚಟುವಟಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಇದು ಫಾಗೊಸೈಟೋಸಿಸ್ನ ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವಿಕೆ, ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು ಮತ್ತು ಲಿಂಫೋಕಿನ್ಗಳ ರಚನೆಯ ಪ್ರಚೋದನೆಯೊಂದಿಗೆ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ.

ಗೆಡ್ಡೆಯ ಕೋಶಗಳ ಮೇಲೆ ಆಂಟಿಪ್ರೊಲಿಫೆರೇಟಿವ್ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.

ಸೂಚನೆಗಳು

ತೀವ್ರವಾದ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಬಿ, ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ಬಿ, ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಹೆಪಟೈಟಿಸ್ ಸಿ.

ಹೇರಿ ಸೆಲ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ, ದೀರ್ಘಕಾಲದ ಮೈಲೋಯ್ಡ್ ಲ್ಯುಕೇಮಿಯಾ, ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಜೀವಕೋಶದ ಕಾರ್ಸಿನೋಮ, ಏಡ್ಸ್‌ನಿಂದ ಉಂಟಾಗುವ ಕಪೋಸಿಯ ಸಾರ್ಕೋಮಾ, ಚರ್ಮದ ಟಿ-ಸೆಲ್ ಲಿಂಫೋಮಾ (ಮೈಕೋಸಿಸ್ ಫಂಗೈಡ್ಸ್ ಮತ್ತು ಸೆಜರಿ ಸಿಂಡ್ರೋಮ್), ಮಾರಣಾಂತಿಕ ಮೆಲನೋಮ.

ಡೋಸೇಜ್ ಕಟ್ಟುಪಾಡು

ಇಂಟ್ರಾವೆನಸ್ ಅಥವಾ ಸಬ್ಕ್ಯುಟೇನಿಯಸ್ ಆಗಿ ನಿರ್ವಹಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಸೂಚನೆಗಳನ್ನು ಅವಲಂಬಿಸಿ ಡೋಸ್ ಮತ್ತು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಕಟ್ಟುಪಾಡುಗಳನ್ನು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿ ಹೊಂದಿಸಲಾಗಿದೆ.

ಅಡ್ಡ ಪರಿಣಾಮ

ಜ್ವರ ತರಹದ ಲಕ್ಷಣಗಳು: ಆಗಾಗ್ಗೆ - ಜ್ವರ, ಶೀತ, ಮೂಳೆಗಳಲ್ಲಿ ನೋವು, ಕೀಲುಗಳು, ಕಣ್ಣುಗಳು, ಮೈಯಾಲ್ಜಿಯಾ, ತಲೆನೋವು, ಹೆಚ್ಚಿದ ಬೆವರು, ತಲೆತಿರುಗುವಿಕೆ.

ಹೊರಗಿನಿಂದ ಜೀರ್ಣಾಂಗ ವ್ಯವಸ್ಥೆ: ಹಸಿವಿನ ಸಂಭವನೀಯ ನಷ್ಟ, ವಾಕರಿಕೆ, ವಾಂತಿ, ಅತಿಸಾರ, ಮಲಬದ್ಧತೆ, ಅಡಚಣೆ ರುಚಿ ಸಂವೇದನೆಗಳು, ಒಣ ಬಾಯಿ, ತೂಕ ನಷ್ಟ, ಸೌಮ್ಯವಾದ ಹೊಟ್ಟೆ ನೋವು, ಯಕೃತ್ತಿನ ಕ್ರಿಯೆಯ ಪರೀಕ್ಷೆಗಳಲ್ಲಿ ಸ್ವಲ್ಪ ಬದಲಾವಣೆಗಳು (ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ ಸಾಮಾನ್ಯಗೊಳಿಸುತ್ತವೆ).

ಕೇಂದ್ರ ನರಮಂಡಲ ಮತ್ತು ಬಾಹ್ಯ ನರಮಂಡಲದಿಂದ:ವಿರಳವಾಗಿ - ತಲೆತಿರುಗುವಿಕೆ, ಮಾನಸಿಕ ಚಟುವಟಿಕೆಯ ಕ್ಷೀಣತೆ, ನಿದ್ರಾ ಭಂಗ, ಮೆಮೊರಿ ದುರ್ಬಲತೆ, ಆತಂಕ, ಹೆದರಿಕೆ, ಆಕ್ರಮಣಶೀಲತೆ, ಯೂಫೋರಿಯಾ, ಖಿನ್ನತೆ (ನಂತರ ದೀರ್ಘಕಾಲೀನ ಚಿಕಿತ್ಸೆ), ಪ್ಯಾರೆಸ್ಟೇಷಿಯಾ, ನರರೋಗ, ನಡುಕ; ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ - ಆತ್ಮಹತ್ಯೆ ಪ್ರವೃತ್ತಿಗಳು, ಅರೆನಿದ್ರಾವಸ್ಥೆ.

ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ:ಸಾಧ್ಯ - ಟಾಕಿಕಾರ್ಡಿಯಾ (ಜ್ವರದೊಂದಿಗೆ), ಅಪಧಮನಿಯ ಹೈಪೊಟೆನ್ಷನ್ ಅಥವಾ ಅಧಿಕ ರಕ್ತದೊತ್ತಡ, ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ; ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ - ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಅಸ್ವಸ್ಥತೆಗಳು, ಪರಿಧಮನಿಯ ಕಾಯಿಲೆ, ಮಯೋಕಾರ್ಡಿಯಲ್ ಇನ್ಫಾರ್ಕ್ಷನ್.

ಉಸಿರಾಟದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ:ವಿರಳವಾಗಿ - ಎದೆ ನೋವು, ಕೆಮ್ಮು, ಸ್ವಲ್ಪ ಉಸಿರಾಟದ ತೊಂದರೆ; ಕೆಲವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ - ನ್ಯುಮೋನಿಯಾ, ಪಲ್ಮನರಿ ಎಡಿಮಾ.

ಹೆಮಟೊಪಯಟಿಕ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯಿಂದ:ಸಂಭವನೀಯ ಸ್ವಲ್ಪ ಲ್ಯುಕೋಪೆನಿಯಾ, ಥ್ರಂಬೋಸೈಟೋಪೆನಿಯಾ, ಗ್ರ್ಯಾನುಲೋಸೈಟೋಪೆನಿಯಾ.

ಚರ್ಮರೋಗ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು:ಸಂಭವನೀಯ ತುರಿಕೆ, ರಿವರ್ಸಿಬಲ್ ಅಲೋಪೆಸಿಯಾ.

ಇತರೆ:ವಿರಳವಾಗಿ - ಸ್ನಾಯು ಬಿಗಿತ; ಪ್ರತ್ಯೇಕ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ - ನೈಸರ್ಗಿಕ ಅಥವಾ ಮರುಸಂಯೋಜಕ ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ಗಳಿಗೆ ಪ್ರತಿಕಾಯಗಳು.

ವಿರೋಧಾಭಾಸಗಳು

ಭಾರೀ ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ಕಾಯಿಲೆಗಳು, ಡಿಕಂಪೆನ್ಸೇಟೆಡ್ ಲಿವರ್ ಸಿರೋಸಿಸ್, ತೀವ್ರ ಖಿನ್ನತೆ, ಸೈಕೋಸಿಸ್, ಮದ್ಯ ಅಥವಾ ಮಾದಕ ವ್ಯಸನ, ಹೆಚ್ಚಿದ ಸಂವೇದನೆಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಗೆ.

ಗರ್ಭಧಾರಣೆ ಮತ್ತು ಹಾಲೂಡಿಕೆ

ತಾಯಿಗೆ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಿರೀಕ್ಷಿತ ಪ್ರಯೋಜನವು ಭ್ರೂಣಕ್ಕೆ ಸಂಭವನೀಯ ಅಪಾಯವನ್ನು ಮೀರಿದರೆ ಮಾತ್ರ ಗರ್ಭಾವಸ್ಥೆಯಲ್ಲಿ ಬಳಕೆ ಸಾಧ್ಯ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಸ್ರವಿಸುತ್ತದೆಯೇ ಎಂಬುದು ತಿಳಿದಿಲ್ಲ ಎದೆ ಹಾಲು. ಹಾಲುಣಿಸುವ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಅದನ್ನು ಬಳಸುವುದು ಅಗತ್ಯವಿದ್ದರೆ, ಸ್ತನ್ಯಪಾನವನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸುವ ಸಮಸ್ಯೆಯನ್ನು ನಿರ್ಧರಿಸಬೇಕು.

ಹೆರಿಗೆಯ ವಯಸ್ಸಿನ ಮಹಿಳೆಯರು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ವಿಶ್ವಾಸಾರ್ಹ ಗರ್ಭನಿರೋಧಕವನ್ನು ಬಳಸಬೇಕು.

ಯಕೃತ್ತಿನ ಅಪಸಾಮಾನ್ಯ ಕ್ರಿಯೆಗೆ ಬಳಸಿ

ಡಿಕಂಪೆನ್ಸೇಟೆಡ್ ಲಿವರ್ ಸಿರೋಸಿಸ್ನಲ್ಲಿ ವಿರುದ್ಧಚಿಹ್ನೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ. ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ಯಕೃತ್ತಿನ ಕ್ರಿಯೆಯ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬಳಸಿ.

ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ದುರ್ಬಲತೆಗೆ ಬಳಸಿ

ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ಮೂತ್ರಪಿಂಡದ ಕ್ರಿಯೆಯ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬಳಸಿ.

ವಿಶೇಷ ಸೂಚನೆಗಳು

ದುರ್ಬಲಗೊಂಡ ಮೂತ್ರಪಿಂಡ, ಯಕೃತ್ತು, ಮೂಳೆ ಮಜ್ಜೆಯ ಹೆಮಟೊಪೊಯಿಸಿಸ್ ಅಥವಾ ಆತ್ಮಹತ್ಯೆ ಪ್ರಯತ್ನಗಳ ಪ್ರವೃತ್ತಿ ಹೊಂದಿರುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬಳಸಿ.

ಹೃದಯರಕ್ತನಾಳದ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ರೋಗಗಳ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ, ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ ಸಾಧ್ಯ. ಆರ್ಹೆತ್ಮಿಯಾ ಕಡಿಮೆಯಾಗದಿದ್ದರೆ ಅಥವಾ ಹೆಚ್ಚಾಗದಿದ್ದರೆ, ಡೋಸ್ ಅನ್ನು 2 ಬಾರಿ ಕಡಿಮೆ ಮಾಡಬೇಕು ಅಥವಾ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯನ್ನು ನಿಲ್ಲಿಸಬೇಕು.

ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ಅವಧಿಯಲ್ಲಿ, ನರವೈಜ್ಞಾನಿಕ ಮತ್ತು ಮಾನಸಿಕ ಸ್ಥಿತಿಯನ್ನು ಮೇಲ್ವಿಚಾರಣೆ ಮಾಡುವುದು ಅವಶ್ಯಕ.

ಮೂಳೆ ಮಜ್ಜೆಯ ಹೆಮಟೊಪೊಯಿಸಿಸ್ನ ತೀವ್ರ ನಿಗ್ರಹದ ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ, ಬಾಹ್ಯ ರಕ್ತದ ಸಂಯೋಜನೆಯ ನಿಯಮಿತ ಪರೀಕ್ಷೆ ಅಗತ್ಯ.

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಪ್ರತಿರಕ್ಷಣಾ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಮೇಲೆ ಉತ್ತೇಜಕ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಬೀರುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಸ್ವಯಂ ನಿರೋಧಕ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳ ಹೆಚ್ಚಿನ ಅಪಾಯದಿಂದಾಗಿ ಸ್ವಯಂ ನಿರೋಧಕ ಕಾಯಿಲೆಗಳಿಗೆ ಒಳಗಾಗುವ ರೋಗಿಗಳಲ್ಲಿ ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಬಳಸಬೇಕು.

ಔಷಧದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು

ಔಷಧದ ಪರಸ್ಪರ ಕ್ರಿಯೆಗಳು

ಇಂಟರ್ಫೆರಾನ್ ಆಲ್ಫಾ -2 ಬಿ ಥಿಯೋಫಿಲಿನ್‌ನ ಚಯಾಪಚಯವನ್ನು ಪ್ರತಿಬಂಧಿಸುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ಅದರ ತೆರವು ಕಡಿಮೆ ಮಾಡುತ್ತದೆ.