Rumah Pulpitis Reaksi aglutinasi diagnostik. Tindak balas aglutinasi

Pulpitis

Reaksi aglutinasi diagnostik. Tindak balas aglutinasi

Tindak balas aglutinasi adalah berdasarkan interaksi spesifik antibodi (aglutinin) dengan keseluruhan mikrob atau sel lain. Hasil daripada interaksi ini, zarah-zarah aglomerat terbentuk yang mendakan (aglutinat). Bakteria, protozoa, kulat, yis, rickettsia, eritrosit dan sel-sel lain, kedua-duanya hidup dan terbunuh, boleh mengambil bahagian dalam tindak balas aglutinasi. Reaksi berlaku dalam dua fasa: yang pertama adalah gabungan antigen dan antibodi khusus, yang kedua adalah tidak spesifik, iaitu pembentukan aglutinat yang kelihatan. Pemendakan aglutinat berlaku dengan kehadiran elektrolit, seperti natrium klorida. Mikroorganisma dalam aglutinat kekal hidup, tetapi kehilangan mobilitinya.

Reaksi aglutinasi digunakan secara meluas untuk diagnosis serologi penyakit berjangkit dan penentuan struktur antigen mikrob terpencil. Untuk menentukan struktur antigenik patogen yang diasingkan daripada badan pesakit atau pembawa, serum imun khusus digunakan, diperoleh dengan mengimunkan haiwan (arnab, keldai, biri-biri) dengan mikroorganisma tertentu. Pengenalpastian mikrob dijalankan dalam tindak balas aglutinasi pada kaca dengan sera terjerap atau monoreseptor atau dalam tabung uji dengan sera aglutinasi tertentu. Sera terjerap mengandungi antibodi hanya kepada antigen khusus untuk mikrob tertentu, dan sera monoreseptor mengandungi antibodi hanya kepada satu antigen spesifik patogen.

Sera spesies mengandungi antibodi kepada semua antigen mikrob tertentu.

Sama ada kultur mikroorganisma terpencil kepunyaan spesies ini ditentukan oleh aglutinasi dengan serum yang diketahui kepada titer antibodi yang ditunjukkan pada label ampul serum. Titer antibodi serum dianggap sebagai pencairan terakhirnya, di mana aglutinasi kultur mikrob yang digunakan untuk mengimunkan haiwan masih diperhatikan. Sera terjerap dan monoreseptor biasanya digunakan tidak cair dalam tindak balas aglutinasi kaca.

Apabila menentukan kehadiran antibodi dalam serum darah pesakit, ia dicairkan dengan larutan natrium klorida isotonik bermula dari pencairan 1: 50 hingga 1: 800 atau lebih. Penggantungan mikrob hidup atau mati ditambahkan pada setiap pencairan. Sediaan yang mengandungi mikrob yang dibunuh oleh haba atau formaldehid dipanggil diagnosticums. Diagnostik yang diperoleh dengan memanaskan kultur mikroorganisma hanya mengandungi antigen somatik. Apabila hanya menggunakan formaldehid, mikrob mengekalkan antigen flagellar mereka.

Dengan kehadiran antibodi dalam darah pesakit, ujian diagnostik yang diambil dalam tindak balas melekat bersama dan mendakan (aglutinat) terbentuk pada dua tabung uji. Dalam kes ini, keputusan tindak balas aglutinasi dianggap sebagai positif. Dalam tiub kawalan, di mana larutan natrium klorida isotonik dan diagnostikum ditambah, penggantungan mikrob harus homogen (tindak balas aglutinasi negatif).

Keputusan tindak balas aglutinasi dalam beberapa penyakit, seperti leptospirosis, diambil kira hanya secara mikroskopik dalam medan pandangan gelap mikroskop (mikroaglutinasi). Untuk membuat diagnosis serologi penyakit, ambil kira penyakit diagnostik. Ia biasanya sepadan dengan pencairan serum 1:100 atau 1:200.

Antibodi dalam serum darah pesakit boleh dikesan menggunakan tindak balas aglutinasi dalam kes demam kepialu dan demam paratifoid (tindak balas Vidal), brucellosis (tindak balas Wright), tularemia, dll.
Reaksi Castellani. Untuk beberapa penyakit berjangkit atau imunisasi dengan mikroorganisma yang mengandungi antigen kumpulan, dalam serum darah, sebagai tambahan kepada antibodi khusus untuk jenis tertentu, antibodi kumpulan juga muncul. Dalam kes ini, spesies bakteria yang berkaitan akan diagregatkan oleh sera yang terhasil.

Castellani mencadangkan kaedah untuk penjerapan antibodi kumpulan daripada sera imun, berdasarkan penyingkirannya dengan bantuan mikroorganisma spesies berkaitan yang mempunyai antigen kumpulan tetapi kekurangan yang khusus. Budaya mikroorganisma sedemikian yang ditambahkan pada serum menyerap antibodi kumpulan tidak spesifik, dan selepas penyingkiran kompleks antigen-antibodi melalui sentrifugasi, hanya imunoglobulin tertentu yang kekal dalam serum. Sera yang diproses mengikut kaedah Castellani boleh digunakan dalam tindak balas aglutinasi sebagai sangat spesifik.

Aglutinasi ialah pelekatan bakteria akibat interaksi AT tertentu dengan mereka. Untuk menjalankan RA, tiga komponen diperlukan: 1) AG (aglutinogen); 2) AT (aglutinin); 3) larutan elektrolit (larutan natrium klorida isotonik). Hanya antigen korpuskular (bakteria, sel darah merah, zarah lateks yang dimuatkan antigen) mengambil bahagian dalam tindak balas aglutinasi.

Tindak balas aglutinasi pada kaca. Letakkan titisan pada slaid kaca tanpa gris menggunakan pipet. serum diagnostik(pencairan serum 1:10 - 1:20). Menggunakan gelung bakteriologi, kultur tulen mikroorganisma yang dikaji diambil dari permukaan agar-agar senget, dipindahkan ke setitik serum dan dicampur. Hasil tindak balas diambil kira dengan mata kasar selepas 3-5 minit. Sekiranya tindak balas positif, penampilan kepingan (besar atau kecil) dicatatkan dalam setitik serum, jelas kelihatan pada latar belakang gelap apabila slaid digoncang. Dalam kes tindak balas negatif, cecair kekal seragam keruh.

Tindak balas aglutinasi dalam tabung uji. 1 ml larutan fisiologi ditambah ke dalam barisan tabung uji. Isipadu yang sama serum darah yang sedang diuji ditambah ke dalam tabung uji pertama. Pencairan dua kali ganda bersiri serum disediakan (titrasi serum), selepas itu 2 titis penggantungan bakteria tidak aktif (diagnosticum) ditambah kepada setiap tabung uji. Tiub diletakkan dalam termostat pada 37 °C selama 2 jam. Reaksi diteruskan dengan pembentukan kepingan kecil, tidak dapat dilihat dengan mata kasar, jadi hasilnya direkodkan di bawah pembesaran sedikit dalam peranti khas - agglutinoscope. Keamatan aglutinasi diambil kira mengikut sistem "empat tambah": aglutinasi lengkap - 4+, aglutinasi separa - 3+ atau 2+, hasil yang boleh dipersoalkan - +. Pencairan terakhir di mana aglutinasi 2+ diperhatikan diambil sebagai titer antibodi dalam serum ujian.

Tindak balas aglutinasi dalam tabung uji (tindak balas aglutinasi yang meluas) dijalankan untuk menentukan titer antibodi kepada agen penyebab demam kepialu dan paratifoid (tindak balas Vidal), brucellosis (tindak balas Wright), dan tipus (tindak balas Weigl).

Aglutinasi (dari bahasa Latin agglutinatio - gluing) ialah pelekatan (sambungan) zarah korpuskular yang mengandungi antigen (seluruh sel, zarah lateks, dll.) dengan molekul antibodi tertentu dengan kehadiran elektrolit, yang berakhir dengan pembentukan kepingan atau sedimen (aglutinat) boleh dilihat dengan mata kasar. Sifat sedimen bergantung pada sifat antigen: bakteria berbendera menghasilkan sedimen flokulen kasar, bakteria berbendera dan bukan kapsul menghasilkan sedimen berbutir halus, dan bakteria kapsul menghasilkan sedimen bertali. Perbezaan dibuat antara aglutinasi langsung, di mana antigen sendiri bakteria atau mana-mana sel lain, seperti eritrosit, secara langsung mengambil bahagian dalam interaksi dengan antibodi tertentu; dan tidak langsung, atau pasif, di mana sel bakteria atau eritrosit, atau zarah lateks adalah pembawa bukan dari mereka sendiri, tetapi antigen asing (atau antibodi) diserap pada mereka untuk mengenal pasti antibodi (atau antigen) khusus untuk mereka. Tindak balas aglutinasi terutamanya melibatkan antibodi kepunyaan kelas IgG dan IgM. Ia berlaku dalam dua fasa: pertama, interaksi khusus pusat aktif antibodi dengan penentu antigen berlaku peringkat ini boleh berlaku tanpa ketiadaan elektrolit dan tidak disertai perubahan yang boleh dilihat sistem tindak balas. Untuk peringkat kedua - pembentukan aglutinat - kehadiran elektrolit adalah perlu, yang mengurangkan cas elektrik kompleks antigen + antibodi dan mempercepatkan proses pelekatannya. Fasa ini berakhir dengan pembentukan aglutinat.

Tindak balas aglutinasi dilakukan sama ada pada kaca atau plat kadbod licin, atau dalam tiub aglutinasi steril. Tindak balas aglutinasi (langsung dan pasif) pada kaca biasanya digunakan sebagai kaedah dipercepatkan pengesanan antibodi khusus dalam serum pesakit (contohnya, dengan brucellosis) atau untuk pengenalpastian serologi patogen. Dalam kes kedua, sera diagnostik yang telah disucikan dengan baik (terjerap) yang mengandungi hanya antibodi monoreseptor atau satu set daripadanya kepada pelbagai antigen biasanya digunakan. Kelebihan tindak balas aglutinasi yang tidak diragukan pada kaca adalah kesederhanaan pelaksanaannya dan hakikat bahawa ia mengambil masa beberapa minit atau bahkan saat, kerana kedua-dua komponen digunakan dalam bentuk pekat. Walau bagaimanapun, ia hanya mempunyai nilai kualitatif dan kurang sensitif daripada tabung uji. Tindak balas aglutinasi yang meluas dalam tabung uji memberikan hasil yang lebih tepat, kerana ia membolehkan anda menentukan kandungan kuantitatif antibodi dalam serum (mewujudkan titernya) dan, jika perlu, daftarkan fakta peningkatan titer antibodi, yang mempunyai nilai diagnostik . Untuk menetapkan tindak balas, serum yang dicairkan dengan cara tertentu dengan larutan NaCl 0.85% dan isipadu yang sama (biasanya 0.5 ml) penggantungan diagnostikum standard (atau kultur ujian) yang mengandungi 1 bilion bakteria dalam 1 ml ditambah kepada tiub aglutinasi. Keputusan tindak balas aglutinasi direkodkan terlebih dahulu selepas 2 jam pengeraman tiub pada 37 °C dan akhirnya selepas 20-24 jam mengikut dua kriteria: kehadiran dan saiz mendakan dan tahap ketelusan cecair supernatan. Penilaian dijalankan mengikut sistem empat silang. Tindak balas semestinya disertai dengan kawalan serum dan antigen. Dalam kes di mana tindak balas aglutinasi terperinci dalam tabung uji dilakukan untuk pengecaman serologi patogen, ia mempunyai nilai diagnostik jika tindak balas dinilai sebagai positif apabila serum diagnostik dicairkan kepada sekurang-kurangnya separuh titernya.

Ia mesti diambil kira bahawa apabila mencampurkan penyelesaian antigen dan antibodi homolog, manifestasi tindak balas aglutinasi yang kelihatan tidak selalu diperhatikan. Mendakan terbentuk hanya pada nisbah optimum tertentu bagi kedua-dua komponen tindak balas. Di luar had ini, dengan lebihan antigen atau antibodi yang ketara, tiada tindak balas diperhatikan. Fenomena ini dipanggil "fenomena prozon." Ia diperhatikan dalam tindak balas aglutinasi dan dalam tindak balas pemendakan. Penampilan prozon dalam tindak balas imun dijelaskan oleh fakta bahawa antigen yang terlibat di dalamnya, sebagai peraturan, adalah polideterminan, dan molekul Antibodi IgG mempunyai dua pusat aktif. Dengan lebihan antibodi, permukaan setiap zarah antigen ditutup dengan molekul antibodi supaya tidak ada kumpulan penentu bebas yang tinggal, jadi pusat antibodi kedua yang tidak terikat tidak boleh berinteraksi dengan zarah antigen lain dan mengikatnya antara satu sama lain. Pembentukan aglutinat atau mendakan yang kelihatan juga ditindas apabila terdapat lebihan antigen, apabila tiada satu pun pusat aktif bebas antibodi kekal, dan oleh itu kompleks antigen + antibodi + antigen tidak dapat membesar lagi.

Pilihan untuk tindak balas aglutinasi dipercepatkan. Reaksi hemaglutinasi pasif dan variannya

Tindak balas aglutinasi klasik melibatkan penggunaan antigen korpuskular. Walau bagaimanapun, antigen larut juga mungkin terlibat. Untuk membolehkan ini, antigen tersebut diserap pada zarah lengai secara imunologi. Zarah lateks atau bentonit boleh digunakan sebagai pembawa, tetapi pada masa ini eritrosit haiwan atau manusia paling kerap digunakan, meningkatkan sifat penjerapannya dengan merawatnya dengan larutan tanin, formalin atau benzidin. Sel darah merah yang telah menjerap antigen pada diri mereka dipanggil tersensitisasi oleh antigen ini, dan tindak balas imun di mana mereka mengambil bahagian adalah tindak balas hemagglutinasi tidak langsung atau pasif (IRHA, atau RPHA), kerana sel darah merah mengambil bahagian di dalamnya secara pasif.

RPGA diletakkan di dalam plat polistirena khas dengan lubang yang mempunyai bahagian bawah hemisfera. Apabila menggunakannya untuk diagnostik serologi Dalam telaga ini, pencairan dua kali ganda serum ujian disediakan dalam larutan fisiologi, dan kemudian penggantungan eritrosit tersensitisasi ditambah kepadanya sebagai agen diagnostik. Keputusan direkodkan selepas 2 jam pengeraman pada 37 °C menggunakan sistem empat silang. Dengan tindak balas positif, sel darah merah terkumpul mengendap di bahagian bawah lubang dan menutupnya secara merata dalam bentuk payung terbalik. Pada reaksi negatif sel darah merah juga mendap, cecair menjadi telus, sedimen kelihatan seperti "cakera" kecil di tengah lubang. Titer serum dalam RPHA dianggap sebagai pencairan terakhirnya, yang masih memberikan hemagglutinasi yang jelas tanpa tanda-tanda ketara kehadiran "cakera".

RPGA juga boleh digunakan sebagai kaedah diagnostik bakteriologi yang dipercepatkan untuk mengesan secara langsung dalam bahan ujian bakteria, virus, toksin yang tidak diketahui, contohnya, patogen wabak, enterotoksin staphylococcal, dsb. Dengan versi RPGA ini, eritrosit yang telah terserap dikenali kerana kekhususan digunakan sebagai komponen yang diketahui antibodi tindak balas - antibodi erythrocyte diagnosticum. Jika bahan ujian mengandungi jumlah antigen yang diketahui yang mencukupi, RPGA akan menjadi positif.

Pilihan untuk menggunakan RPHA ialah: tindak balas peneutralan antigen (RNAg), tindak balas peneutralan antibodi (RNAb), tindak balas perencatan hemagglutinasi pasif (PHA). Untuk tindak balas ini, diagnostik eritrosit antigen dan antibodi digunakan. Dua tindak balas satu arah yang saling mengawal boleh digunakan secara serentak, contohnya, RPHA dengan diagnosticum antigen dan RNAg dengan diagnosticum erythrocyte antibodi.

Tindak balas peneutralan antibodi (RNAb) terdiri daripada mencampurkan suspensi yang mengandungi antigen yang dikehendaki dengan serum imun khusus yang mengandungi antibodi yang diketahui dalam jumlah yang sesuai dan mengeram pada 37 °C selama dua jam. Selepas ini, diagnostikum eritrosit antigenik ditambah. Campuran digoncang dan dibiarkan pada suhu bilik. Keputusan diambil kira selepas 3-4 jam dan akhirnya selepas 18-24 jam Jika bahan ujian mengandungi antigen, ia akan mengikat antibodi (meneutralkan mereka), dan oleh itu hematglutinasi tidak akan berlaku.

Tindak balas peneutralan antigen (RNAg) dilakukan menggunakan prinsip yang sama. Hanya dalam kes ini antibodi dikesan dalam bahan ujian. Antigen khusus yang ditambahkan pada bahan ujian sedemikian akan mengikat antibodi yang terkandung di dalamnya, iaitu, peneutralan antigen oleh antibodi akan berlaku, dan oleh itu hemagglutinasi tidak akan berlaku apabila menambah antibodi erythrocyte diagnosticum.

Tindak balas koaglutinasi. Ia adalah salah satu pilihan untuk pasif, iaitu, tindak balas aglutinasi dipercepatkan pada kaca yang dimediasi oleh sel pembawa antibodi. Tindak balas ini berdasarkan sifat unik Staphylococcus aureus, yang mengandungi protein A dalam dinding selnya, mengikat serpihan Fc IgG dan IgM. Dalam kes ini, pusat aktif antibodi kekal bebas dan boleh berinteraksi dengan penentu antigen tertentu. Setitik 2% penggantungan staphylococci, tersensitisasi dengan antibodi yang sesuai, disapu pada slaid kaca, dan setitik penggantungan bakteria yang sedang dikaji ditambah. Jika antigen sepadan dengan antibodi, aglutinasi jelas staphylococci yang sarat dengan antibodi berlaku dalam masa 30-60 s.

Tindak balas aglutinasi lateks (LAR). Pembawa antibodi dalam sistem diagnostik ini adalah zarah lateks piawai kecil. Tindak balas dilakukan menggunakan kaedah mikro dalam telaga pada kaca. Syarat utama untuk menjayakan pementasan PAH ialah pematuhan ketat kepada nisbah kuantitatif komponen sistem: 10 μl penyediaan lateks yang disensitisasi dengan antibodi ditambah kepada 50 μl bahan ujian. Kekhususan PAH dikawal menggunakan tiga ujian kawalan yang terkandung dalam sistem ujian komersial: diketahui reaksi positif, jelas tindak balas negatif dan kawalan kualiti penggantungan lateks untuk lateks PAH-unsensitized (tidak membawa antibodi) dengan bahan ujian. Di negara kita, polistirena monodisperse lateks dengan diameter zarah yang berbeza (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 μm) digunakan sebagai pembawa antibodi tertentu. LAG digunakan untuk pengesanan pantas mikroorganisma atau antigennya dalam bahan ujian.

Pengesanan immunomagnet antigen. Salah satu pilihan untuk tindak balas aglutinasi dipercepatkan pada kaca dikaitkan dengan penggunaan zarah polimer supermagnet yang disalut dengan antibodi tertentu. Satu zarah sedemikian mengikat sehingga 107-108 sel mikroorganisma, disebabkan oleh kepekaan yang kaedah ini mencapai 5 CFU/ml. Pengesanan imunomagnet mikroorganisma boleh digunakan dalam kombinasi dengan CPR.

Tindak balas hemagglutinasi agregat (AHA). Membolehkan anda mengesan dengan cepat dalam darah pesakit kedua-dua antigen yang beredar bebas (antigenemia) dan antigen yang berkaitan dengan antibodi - kompleks imun yang beredar (CIC). Untuk RAHA, sel darah merah yang dipekakan dengan antibodi yang sesuai digunakan. Penambahan serum darah pesakit, yang mengandungi antigen, kepada eritrosit tersensitisasi di mana antibodi ditetapkan, membawa kepada pelekatan (aglutinasi) eritrosit dan kompleks imun.

Ujian Antiglobulin Coombs (tindak balas R. Coombs). Antibodi penuh (divalen) ditentukan menggunakan tindak balas aglutinasi langsung dan pasif. Antibodi yang tidak lengkap (monovalen, menyekat) tidak dikesan oleh kaedah ini, kerana, apabila mereka bergabung dengan antigen, mereka menyekatnya, tetapi tidak boleh menyebabkan pengagregatan antigen menjadi konglomerat besar. Antibodi tidak lengkap (menyekat) adalah antibodi yang hanya satu pusat aktif berfungsi; pusat aktif kedua tidak berfungsi atas sebab yang tidak diketahui. Untuk mengesan antibodi yang tidak lengkap, tindak balas Coombs khas digunakan (Rajah 72). Reaksi melibatkan: serum pesakit, di mana antibodi tidak lengkap ditentukan, antigen-diagnostik korpuskular, serum antiglobulin yang mengandungi antibodi kepada globulin manusia. Reaksi berlaku dalam dua peringkat:

Interaksi antigen dengan antibodi yang tidak lengkap. Tiada manifestasi yang kelihatan. Peringkat pertama diselesaikan dengan membasuh antigen dari serum pesakit yang tinggal.

Interaksi serum antiglobulin yang diperoleh hasil daripada imunisasi haiwan dengan globulin manusia dengan antibodi yang tidak lengkap terserap pada antigen. Disebabkan oleh fakta bahawa antibodi antiglobulin adalah bivalen, mereka mengikat dua antibodi monovalen kompleks AG + yang berasingan antibodi yang tidak lengkap, yang membawa kepada pelekatan dan kemunculan sedimen yang boleh dilihat.

Aglutinasi ialah pelekatan dan pemendakan mikrob atau sel lain di bawah pengaruh antibodi dengan kehadiran elektrolit (larutan natrium klorida isotonik). Kumpulan bakteria (sel) terpaku dipanggil aglutinat. Komponen berikut diperlukan untuk tindak balas aglutinasi:

1. Antibodi (aglutinin) yang terdapat dalam serum haiwan yang sakit atau imun.

2. Antigen - penggantungan mikrob hidup atau terbunuh, sel darah merah atau sel lain.

3. Larutan natrium klorida isotonik (0.9%).

Tindak balas aglutinasi untuk serodiagnosis digunakan untuk demam kepialu dan demam paratifoid (tindak balas Vidal), brucellosis (tindak balas Wright dan Heddleson), tularemia, dsb. Antibodi adalah serum pesakit, dan antigen adalah mikrob yang diketahui. Apabila mengenal pasti mikrob atau sel lain, penggantungan mereka digunakan sebagai antigen, dan serum imun yang diketahui digunakan sebagai antibodi. Tindak balas ini digunakan secara meluas untuk diagnostik jangkitan usus, batuk kokol, dsb.

Kaedah untuk pementasan RA

Anggaran RA pada kaca

Dikerahkan RA

(kaedah volum)

Tindak balas koaglutinasi

RA tidak dilipat pada kaca (pengenalan sero)

Tindak balas aglutinasi pada kaca. Dua titik serum khusus (terjerap) dan setitik larutan natrium klorida isotonik disapu pada slaid kaca tanpa lemak. Serum yang tidak terserap dicairkan terlebih dahulu dalam nisbah 1:5 - 1:100. Titisan mesti digunakan pada kaca supaya terdapat jarak di antara mereka. Kultur ditumbuk dengan teliti di atas kaca dengan gelung atau pipet, dan kemudian ditambah kepada titisan larutan natrium klorida isotonik dan kepada salah satu titisan serum, kacau setiap sehingga penggantungan homogen terbentuk. Setitik serum tanpa kultur adalah kawalan serum.

Perhatian! Anda tidak boleh memindahkan kultur dari serum ke titisan larutan natrium klorida isotonik, yang berfungsi sebagai kawalan antigen. Tindak balas berlaku pada suhu bilik selama 1-3 minit. Jika kawalan serum kekal telus, kekeruhan seragam diperhatikan dalam kawalan antigen, dan kepingan aglutinat muncul dalam titisan di mana budaya dicampur dengan serum dengan latar belakang cecair jernih, hasil tindak balas dianggap positif.

Fisiologi Diagnostik

serum + larutan kultur + kultur

Tindak balas aglutinasi terperinci (kaedah isipadu). Siri, selalunya dua kali ganda, pencairan serum disediakan. Kaedah ini dipanggil volumetrik. Untuk menentukan titer antibodi dalam serum darah, ambil 6 tiub. Tuangkan 1 ml pencairan serum asal 1:50 ke dalam tabung uji pertama dan tambah 1 ml larutan garam ke dalam kesemua 6 tabung uji menggunakan pipet bergraduat. Tabung uji pertama akan menghasilkan pencairan serum 1:100 dengan isipadu 2 ml. Pindahkan 1 ml dari tabung uji pertama ke tabung uji kedua, di mana pencairan menjadi 1:200. Jadi buat satu siri pencairan bersiri serum dalam 5 tabung uji pertama (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Dari tabung uji kelima, tuangkan 1 ml ke dalam larutan pembasmi kuman. Tambah 2 titis diagnosticum ke semua 6 tabung uji. Tiub keenam adalah kawalan kultur, kerana ia hanya mengandungi larutan garam dan diagnosticum.

Kawalan sedemikian adalah perlu untuk mengecualikan aglutinasi spontan budaya. Tiub digoncang dan diletakkan di dalam termostat pada suhu 37°C selama 2 jam, dan kemudian dibiarkan selama sehari pada suhu bilik, selepas itu keputusan tindak balas aglutinasi direkodkan. Apabila melakukan tindak balas aglutinasi dengan sera kanak-kanak pada bulan pertama kehidupan, disebabkan oleh kelemahan fungsi pembentukan antibodi, adalah perlu untuk mengenal pasti titer antibodi yang lebih rendah, yang diambil kira apabila mencairkan serum. Pencairan serum awal ialah 1:25. Dalam tabung uji pertama, pencairan 1:50 diperolehi, kemudian 1:100, dsb.

Pada hasil positif tindak balas dalam tabung uji, sel melekit dalam bentuk bijirin atau kepingan kelihatan dengan latar belakang cecair jernih. Aglutinat secara beransur-ansur mendap ke bahagian bawah dalam bentuk "payung", dan cecair di atas sedimen menjadi jelas. Kawalan antigen adalah seragam keruh.

Berdasarkan sifat sedimen, aglutinasi berbutir halus dan kasar (berkeping) dibezakan. Aglutinasi berbutir halus diperoleh apabila bekerja dengan O-sera. Berbutir kasar - apabila mikrob motil berinteraksi dengan flagellar H-sera. Ia berlaku lebih cepat daripada butiran halus, dan sedimen yang terhasil sangat longgar dan mudah pecah.

Keamatan tindak balas dinyatakan seperti berikut:

Semua sel telah mendap, cecair dalam tabung uji benar-benar telus. Hasil tindak balas adalah positif secara mendadak;

Terdapat kurang sedimen, cecair tidak jelas sepenuhnya. Hasil tindak balas adalah positif;

Terdapat lebih sedikit sedimen, cecair lebih keruh. Hasil tindak balas adalah diragui;

Terdapat sedikit sedimen di bahagian bawah tabung uji, cecairnya keruh. Keputusan tindak balas yang boleh dipersoalkan;

Tiada sedimen, cecair seragam mendung, seperti dalam kawalan antigen. Hasil tindak balas negatif

Tindak balas aglutinasi Tindak balas aglutinasi

(RA) - kaedah mengenal pasti dan kuantifikasi Ag dan At, berdasarkan keupayaan mereka untuk membentuk aglomerat yang boleh dilihat dengan mata kasar. Di jabatan penyakit berjangkit. penyakit atau untuk tujuan lain digunakan untuk mengenal pasti mikrob dan sel yang tidak diketahui, untuk menentukan kehadiran dan jumlah Ab dalam darah dan cecair lain. Prinsip penentuan adalah berdasarkan kekhususan interaksi antara Ag dan Ab dan terdiri daripada mencari yang diketahui daripada yang tidak diketahui. Terdapat banyak pilihan untuk RA: kuantitatif dan kualitatif, tabung uji dan kaca, volumetrik dan titisan, kaedah konvensional, dipercepat dan ekspres. Untuk peringkat RA anda perlukan: 1) s-ka darah. Dalam varian dengan menentukan jenis (var) bakteria, ujian aglutinasi industri digunakan, dihasilkan oleh arnab yang mengimunkan. Dalam varian dengan penentuan jenis Ab, sampel darah diambil daripada ujian. manusia atau haiwan. Larutan mestilah steril dan bebas daripada zarah terampai. Sediakan pencairan asas dalam larutan garam. Ia sepatutnya 2-4 kali lebih rendah daripada titer diagnostik untuk penyakit ini; 2) Ag. Dalam versi tindak balas dengan penentuan jenis Ab, kit diagnostik industri digunakan; dalam varian dengan penentuan Ag, diagnosticums disediakan sendiri dalam bentuk penggantungan 1-3 bilion dalam larutan garam ujian agar-agar 18-20 jam (kurang kerap sup). mikrob dinyahaktifkan dengan memanaskan dalam tab mandi air pada suhu 70°C selama 1 jam atau dengan pengeraman 24 jam pada suhu 37°C dengan formaldehid (kepekatan akhir 0.2%); 3) elektrolit dalam bentuk larutan garam. Teknik pementasan tiub bersiri volumetrik RA untuk menentukan titer Ab dalam s-ki: beberapa baris pencairan kerja disediakan daripada pencairan utama s-ki. Bilangan baris bergantung pada bilangan diagnosticum yang diambil ke dalam eksperimen; bilangan dan faktor pencairan ditentukan oleh titer diagnostik penyakit yang disyaki. Siri mestilah sekurang-kurangnya mengandungi pencairan yang sepadan dengan titer Ab diagnostik, dua pencairan di bawah dan dua pencairan di atasnya. sebagai contoh, jika titer diagnostik ialah 1:100, maka dengan kaedah volumetrik pementasan RA, pencairan berikut perlu disediakan: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; dengan titisan kaedah, pencairan pertama (1:25) tidak diperlukan, tetapi pencairan lain yang lebih tinggi diperlukan - 1:800 B. kajian saintifik s-ku dititrasi kepada tindak balas negatif. Ia dicairkan seperti berikut: 0.25 ml larutan garam dituangkan ke dalam semua tabung uji, kecuali yang pertama, apabila tindak balas dilakukan dalam isipadu 0.5 ml, dan 0.5 ml apabila tindak balas dilakukan dalam jumlah 1. ml. Tuangkan 0.25 (0.5) ml pencairan utama ke dalam tabung uji pertama dan kedua, dari tabung uji kedua, ke dalam isipadu potongan dan pembiakan s-k dan meningkat 2 kali ganda, 0.25 (0.5) ml dipindahkan ke yang ke-3, dari yang ke-3 ke yang ke-4, dsb. hingga yang terakhir, daripada potongan 0.25 (0.5) ml dituangkan ke dalam segala-galanya untuk mengimbangi isipadu. Setiap pencairan dijalankan menggunakan pipet berasingan. Jika beberapa diagnosticum diambil ke dalam percubaan, maka bagi setiap daripada mereka siri pencairannya sendiri disediakan dengan cara yang sama. Diagnosticum ditambah kepada setiap pencairan tabung uji dalam isipadu yang sama dengan isipadu tabung uji, akibatnya pencairan dalam setiap tabung uji digandakan. Eksperimen sepadan dengan kawalan s-ki (0.25 - 0.5 ml pencairan utama s-ki dan jumlah larutan garam yang sama) dan kawalan Ag (0.25 - 0.5 ml diagnostikum dan jumlah larutan garam yang sama). Jika beberapa diagnosticum digunakan dalam eksperimen, maka masing-masing mempunyai kawalan antigen sendiri. Rak dengan tabung uji digoncang dengan baik dan diletakkan dalam termostat pada 37°C selama 4 jam, dan kemudian dibiarkan pada suhu bilik sehingga keesokan harinya, selepas itu PA direkodkan berdasarkan jumlah sedimen dan tahap pembersihan cecair. Penentuan penunjuk ini, bergantung pada sifat aglutinat, dilakukan dengan mata kasar pada latar belakang gelap, dalam agglutinoscope atau di atas permukaan cekung cermin mikroskop. Perakaunan bermula dengan kawalan: kawalan C harus telus, Ag harus keruh seragam (selepas menggoncang tiub). Jika kawalan adalah baik, wujudkan kehadiran dan tahap aglutinasi dalam semua tabung uji, yang ditetapkan oleh tambah: sedimen besar dan pembersihan lengkap cecair - 4 tambah; sedimen besar dan pembersihan cecair yang tidak lengkap - 3 tambah; sedimen ketara dan pembersihan ketara cecair adalah 2 tambah. Selepas ini, titer ditentukan: pencairan tertinggi dengan keamatan aglutinasi sekurang-kurangnya 2 tambah. Penyelidikan tajuk s-ki dibandingkan dengan titer diagnostik untuk penyakit ini. Jika titer dikaji. s-ki adalah 2 kali lebih rendah daripada nilai diagnostik, tindak balas dinilai sebagai ragu; jika titer adalah sama diagnostik - bagaimana lemah positif; jika ia adalah 2-4 kali lebih tinggi, ia dianggap positif; jika ia adalah 8 atau lebih tinggi, ia dianggap positif secara mendadak. Dengan pengedaran meluas Ab orang yang sihat Untuk menilai RA, peningkatan dalam titer Ab digunakan. Untuk menentukan jenis Ar dalam siri RA, bilangan baris mesti sepadan dengan nombor yang diambil untuk pengenalan ujian diagnostik. Daripada pencairan utama ujian diagnostik, satu siri pencairan dua kali ganda berturut-turut disediakan dengan cara yang sama seperti dalam RA untuk menentukan titer Ab. Faktor pencairan bergantung kepada titer ujian aglutinasi Dalam eksperimen, kehadiran pencairan yang sama dengan titer ujian adalah perlu, serta 2, 4, 6, 8 kali lebih rendah daripada itu titer ujian diagnostik ialah 1 3200, maka anda harus menggunakan pencairan 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Isipadu yang sama bagi Ag yang diuji ditambah kepada pencairan ujian, sebagai hasilnya, pencairan ujian bertambah sebanyak 2 kali ganda dan Ag ditambah kepada eksperimen Jika dalam eksperimen itu beberapa s-k terlibat, maka setiap satu daripadanya memerlukan kawalan sendiri Setelah selesai tindak balas, dirian digoncang dengan kuat dan diletakkan dalam termostat pada 37 ° C. Keputusan diambil kira seperti yang dinyatakan di atas Penilaian tindak balas mempunyai ciri-ciri Untuk membuat kesimpulan tentang pematuhan kajian. Ag diambil ke dalam eksperimen, titer tindak balas mesti sepadan dengan sekurang-kurangnya separuh titer ujian diagnostik standard Titer 1 4 dan ke bawah dianggap sebagai tindak balas kumpulan Titiskan md pementasan RA berbeza daripada isipadu kerana s-ku dicairkan dalam isipadu 1 ml, Ag digunakan dalam kepekatan yang lebih tinggi (10 bilion/ml) dan ia ditambah 1 - 2 jatuh ke dalam tabung uji Pencairan ubat selepas menambah Ag dianggap tidak berubah Jika tidak, kaedah penetapan, rakaman dan penilaian adalah serupa dengan kaedah volumetrik

(Sumber: Kamus Istilah Mikrobiologi)

Tindak balas aglutinasi (dari lat. aglutinasi- gluing) - gluing corpuscles (bakteria, sel darah merah, dll.) oleh antibodi dengan kehadiran elektrolit.

Tindak balas aglutinasi menampakkan dirinya dalam bentuk kepingan atau sedimen yang terdiri daripada corpuscles (contohnya, bakteria) "dilekatkan bersama" oleh antibodi (Rajah 7.37). Tindak balas aglutinasi digunakan untuk: menentukan patogen yang diasingkan daripada pesakit; penentuan antibodi dalam serum darah pesakit; penentuan kumpulan darah.

nasi. 7.37 a, b. Tindak balas aglutinasi denganIgM-antibodi (a) danIgG-antibodi (b)

1. Penentuan patogen yang diasingkan daripada pesakit Anggaran tindak balas aglutinasi pada kaca (Rajah 7.38). Penggantungan bakteria yang diasingkan daripada pesakit ditambah kepada setitik serum penggumpal (pencairan 1:20). Mendakan flokulen terbentuk.

nasi. 7.38.

Tindak balas aglutinasi yang meluas dengan patogen yang diasingkan daripada pesakit (Rajah 7.39). Penggantungan bakteria yang diasingkan daripada pesakit ditambah kepada pencairan serum aglutinasi.

nasi. 52

2. Penentuan antibodi dalam serum darah pesakit
Tindak balas aglutinasi terperinci dengan serum darah pesakit (Rajah 7.39). Diagnosticum ditambah kepada pencairan serum pesakit.
- Aglutinasi dengan O-diagnosticum (bakteria dibunuh oleh haba, mengekalkan O-antigen) berlaku dalam bentuk aglutinasi berbutir halus.
- Aglutinasi dengan H-diagnosticum (bakteria dibunuh oleh formaldehid, mengekalkan antigen H-flagellar) adalah besar dan berlaku lebih cepat.
3. Tindak balas aglutinasi untuk menentukan kumpulan darah Tindak balas aglutinasi untuk menentukan kumpulan darah digunakan untuk menubuhkan sistem ABO (Jadual b) menggunakan aglutinasi eritrosit dengan antibodi serum imun terhadap antigen kumpulan darah A (I), B (III). Kawalannya ialah: serum yang tidak mengandungi antibodi, i.e. serum AB (IV) kumpulan darah; antigen yang terkandung dalam sel darah merah kumpulan A (II), B (III). Kawalan negatif tidak mengandungi antigen, iaitu, kumpulan O (I) eritrosit digunakan.

Jadual 7.6. Penentuan kumpulan darah ABO