ضایعات پوستی ویروسی تست کومبس. کم خونی های همولیتیک خود ایمنی

آنتی بادی هاکه روی سطح گلبول های قرمز قرار دارد، می تواند در حالت ایستا یا آزاد باشد پلاسمای خون. بسته به وضعیت آنتی بادی ها، واکنش کومبس مستقیم یا غیرمستقیم انجام می شود. اگر دلیلی برای این باور وجود داشته باشد که آنتی بادی ها روی سطح گلبول های قرمز ثابت شده اند، آزمایش کومبز مستقیم انجام می شود. در این مورد، آزمون در یک مرحله - اضافه کردن - انجام می شود سرم آنتی گلوبولین. اگر آنتی بادی های ناقص روی سطح گلبول های قرمز وجود داشته باشد، آگلوتیناسیونگلبول های قرمز

واکنش غیر مستقیم

واکنش غیر مستقیم کومبس در 2 مرحله رخ می دهد. ابتدا باید به صورت مصنوعی پیاده سازی کنید حساس شدنگلبول های قرمز برای انجام این کار، گلبول های قرمز و سرم خون مورد آزمایش انکوبه می شوند که باعث می شود آنتی بادی ها روی سطح گلبول های قرمز ثابت شوند. پس از آن مرحله دوم آزمایش کومبس انجام می شود - افزودن سرم آنتی گلوبولین.

واکنش بارش - RP (از لاتین praecipilo به رسوب) تشکیل و رسوب مجموعه ای از آنتی ژن مولکولی محلول با آنتی بادی ها به صورت ابری است که به آن می گویند. رسوب می کند. هنگامی که آنتی ژن ها و آنتی بادی ها در مقادیر معادل مخلوط می شوند، تشکیل می شود. واکنش ته نشینی در لوله های آزمایش (واکنش رسوب حلقه ای)، در ژل ها، محیط های غذایی و غیره انجام می شود. Ouchterlony، ایمونودیفیوژن رادیاپی، ایمونوپکتروفورزو غیره

واکنش بارش حلقه ای. واکنش در لوله‌های باریک رسوب انجام می‌شود: یک آنتی ژن محلول روی سرم ایمنی لایه‌ای قرار می‌گیرد. با نسبت بهینه آنتی ژن و آنتی بادی، یک لایه مات در مرز این دو محلول تشکیل می شود..
اگر از عصاره های بافت جوشانده و صاف شده به عنوان آنتی ژن در واکنش استفاده شود، این واکنش اولین واکنش حرارتی رسوب (واکنشی که در آن هاپتن سیاه زخم شناسایی می شود) نامیده می شود.واکنش ایمونودیفیوژن دوگانه Ouchterlony
.برای تنظیم واکنش، یک لایه نازک از ژل آگار ذوب شده را روی یک صفحه شیشه ای ریخته و پس از سفت شدن، چاه هایی در آن بریده می شود. آنتی ژن ها و سرم های ایمنی به طور جداگانه در چاهک های ژل قرار می گیرند که به سمت یکدیگر پخش می شوند. در نقطه ملاقات، به نسبت های معادل، رسوبی را به شکل نوار سفید تشکیل می دهند. در سیستم های چند جزئی، چندین خط رسوب بین چاهک ها با آنتی ژن ها و آنتی بادی ها ظاهر می شود. در AGهای یکسان، خطوط رسوب ادغام می شوند. در AG های غیر یکسان آنها را قطع می کنند.واکنش ایمونودیفیوژن شعاعی
سرم ایمنی با ژل آگار مذاب به طور یکنواخت روی شیشه ریخته می شود. پس از انجماد در ژل، چاه هایی ساخته می شود که آنتی ژن در رقت های مختلف در آنها قرار می گیرد.آنتی ژن، با انتشار در ژل، مناطق رسوب حلقه ای را در اطراف چاهک ها با آنتی بادی تشکیل می دهد. قطر حلقه رسوب متناسب با غلظت آنتی ژن است.
این واکنش برای تعیین ایمونوگلوبولین ها در سرم خون استفاده می شودکلاس های مختلف

، اجزای سیستم مکمل و غیرهایمونوالکتروفورز

- ترکیبی از الکتروفورز و ایمونوفورز: مخلوطی از آنتی ژن ها به چاهک های ژل وارد می شود و با استفاده از الکتروفورز در ژل جدا می شود، سپس ایمونوسروم به شیار موازی با مناطق الکتروفورز اضافه می شود که آنتی بادی های آن در ژل منتشر می شود و خطوط بارش را در محل "ملاقات" با آنتی ژن تشکیل می دهند. واکنش لخته سازی(به گفته رامون) (از لاتین f1oecus - ورقه های پشمی) - ظاهر شدن مات یا توده لخته ای (ایمونوفیلاسیون) در لوله آزمایش در حین واکنش سم - آنتی توکسین یا توکسوئید - آنتی سم. برای تعیین فعالیت سرم یا توکسوئید آنتی توکسیک استفاده می شود. تایپ HLA، انتخاب اهداکنندگان برای پیوند عضو - این شامل مقایسه نتایج HLA تایپ بافت های دهنده و گیرنده است. با استفاده از تایپ HLA مشخص می شود که همسران تا چه حد از نظر آنتی ژن های سازگاری بافتی مشابه یا متفاوت هستند تا موارد ناباروری تشخیص داده شود.

تایپ HLA پیشنهاد می کند تجزیه و تحلیل پلی مورفیسم HLAو به دو روش سرولوژیکی و ژنتیکی مولکولی انجام می شود. روش کلاسیک سرولوژیکی تایپ HLA مبتنی بر آزمایش میکرولنفوسیتوتوکسیک است و روش مولکولی از PCR (واکنش زنجیره ای پلیمراز) استفاده می کند.

سرولوژیکی تایپ HLAبر روی جمعیت های سلولی جدا شده انجام می شود. آنتی ژن های اصلی کمپلکس سازگاری بافتی عمدتاً توسط لنفوسیت ها حمل می شوند. بنابراین، سوسپانسیون لنفوسیت های T به عنوان حامل اصلی آنتی ژن های کلاس I و سوسپانسیون لنفوسیت های B برای تعیین آنتی ژن های HLA کلاس II استفاده می شود. برای جداسازی جمعیت سلولی مورد نیاز از خون کامل، از سانتریفیوژ یا جداسازی ایمونومغناطیسی استفاده می شود. اعتقاد بر این است که روش اول می تواند به داده های مثبت کاذب منجر شود، زیرا این منجر به مرگ برخی از سلول ها می شود. روش دوم به عنوان خاص تر شناخته می شود - بیش از 95٪ از سلول ها زنده می مانند.

اما مبنای انجام آزمایش لنفوسیتوتوکسیک تایپ HLAیک سرم اختصاصی حاوی آنتی بادی برای انواع مختلف آللی آنتی ژن های کلاس I و II HLA است. آزمایش سرولوژی می تواند نوع HLA را با بررسی اینکه کدام سرم با لنفوسیت ها واکنش نشان می دهد و کدام نه، تعیین می کند.

اگر واکنشی بین سلول ها و سرم رخ دهد، نتیجه آن تشکیل یک کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی در سطح سلول است. پس از افزودن محلول حاوی مکمل، لیز سلولی و مرگ رخ می دهد. تست سرولوژیکی HLA با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس برای ارزیابی واکنش های مثبت (فلورسانس قرمز) و منفی (فلورسانس سبز) یا میکروسکوپ فاز کنتراست برای رنگ آمیزی هسته سلول های مرده ارزیابی می شود. نتیجه تایپ HLA با در نظر گرفتن ویژگی سرم های واکنش داده شده و گروه های واکنش متقابل آنتی ژن ها و شدت واکنش سمیت سلولی به دست می آید.

مضرات سرولوژیک تایپ HLAوجود واکنش های متقاطع، میل ترکیبی ضعیف آنتی بادی یا بیان کم آنتی ژن های HLA، عدم وجود محصولات پروتئینی در تعدادی از ژن های HLA است.

روش های مولکولی مدرن تر تایپ HLAآنها از نمونه های مصنوعی استاندارد شده استفاده می کنند که نه با آنتی ژن های روی سطح لکوسیت ها، بلکه با DNA واکنش می دهند و مستقیماً نشان می دهند که کدام آنتی ژن در نمونه وجود دارد. روش های مولکولی نیازی به لکوسیت زنده ندارند سلول انسانیرا می توان مطالعه کرد و چند میکرولیتر خون برای کار کافی است یا می توانید خود را به خراش دادن از مخاط دهان محدود کنید.

ژنتیک مولکولی تایپ HLAاز روش PCR استفاده می کند که اولین مرحله آن بدست آوردن DNA ژنومی خالص (از خون کامل، سوسپانسیون لکوسیت ها، بافت ها) است.

نمونه DNA سپس کپی می شود - در شرایط آزمایشگاهی با استفاده از پرایمرها (DNA تک رشته ای کوتاه) مخصوص یک مکان خاص HLA تکثیر می شود. انتهای هر جفت پرایمر باید کاملاً مکمل توالی منحصر به فرد مربوط به یک آلل خاص باشد، در غیر این صورت تقویت رخ نخواهد داد.

پس از PCR در طی کپی مکرر تعداد زیادی قطعه DNA به دست می آید که می توان آنها را به صورت دیداری ارزیابی کرد. برای انجام این کار، مخلوط‌های واکنش تحت الکترولیز یا هیبریداسیون قرار می‌گیرند و اینکه آیا تقویت خاصی رخ داده است با استفاده از یک برنامه یا جدول مشخص می‌شود. نتیجه تایپ HLA در قالب یک گزارش جامع در سطح ژن و آللی ارائه شده است. با توجه به استاندارد بودن نمونه های مورد استفاده، مولکولی تایپ HLAبه طور دقیق سرولوژیکی علاوه بر این، اطلاعات بیشتر (الل های DNA جدید بیشتر) و بیشتر را فراهم می کند سطح بالاجزئیات آن، زیرا نه تنها آنتی ژن ها، بلکه خود آلل ها را نیز شناسایی می کند، که تعیین می کند کدام آنتی ژن در سلول وجود دارد.

واکنش لیز ایمنیاین واکنش بر اساس توانایی آنتی‌بادی‌های خاص برای تشکیل کمپلکس‌های ایمنی با سلول‌ها، از جمله گلبول‌های قرمز و باکتری‌ها است که منجر به فعال شدن سیستم کمپلمان در طول مسیر کلاسیک و لیز سلولی می‌شود. از واکنش‌های لیز ایمنی، واکنش همولیز بیشتر استفاده می‌شود و واکنش باکتریولیز به ندرت استفاده می‌شود (عمدتاً در تمایز وبا و ویبریوهای شبه وبا).

واکنش همولیزتحت تأثیر واکنش با آنتی بادی ها در حضور مکمل، سوسپانسیون کدر گلبول های قرمز به دلیل انتشار هموگلوبین به مایع شفاف قرمز روشن - "خون لاکی" تبدیل می شود. هنگام تنظیم یک واکنش تشخیصی تثبیت مکمل (FFR)، واکنش همولیز به عنوان یک شاخص استفاده می شود: برای آزمایش وجود یا عدم وجود (تثبیت) مکمل آزاد.

واکنش همولیز موضعی در ژل(واکنش ارنه) یکی از انواع واکنش همولیز است. این به شما امکان می دهد تعداد سلول های تشکیل دهنده آنتی بادی را تعیین کنید. تعداد سلول های ترشح کننده آنتی بادی ها - همولیزین ها - با تعداد پلاک های همولیز که در ژل آگار حاوی گلبول های قرمز ظاهر می شوند، تعلیق سلول های بافت لنفاوی مورد مطالعه و مکمل تعیین می شود.

روش ایمونوفلورسانس

(RIF، واکنش ایمونوفلورسانس) روشی برای تشخیص Ags خاص (Abs) با استفاده از Abs (Ags) کونژوگه به ​​فلوروکروم است. حساسیت و ویژگی بالایی دارد. برای تشخیص سریع عفونت ها استفاده می شود. بیماری ها (شناسایی پاتوژن در مواد تحقیق)، و همچنین برای تعیین گیرنده های Ab و سطحی و نشانگرهای لکوسیت ها (ایمونوفنوتایپ) و سایر سلول ها. مستقیم I. m.شامل پردازش یک بخش از بافت یا یک اسمیر از مواد پاتولوژیک یا پوسته میکروبی حاوی Abs خاص کونژوگه با فلوروکروم است. آماده‌سازی شسته می‌شود تا آن را از Abs آزاد کند و زیر میکروسکوپ فلورسنت بررسی می‌شود. در موارد مثبت، یک کمپلکس ایمنی درخشان در اطراف محیط جسم ظاهر می شود. کنترل برای حذف لومینسانس غیر اختصاصی ضروری است. در غیر مستقیم مندر مرحله اول، یک بخش بافتی یا اسمیر با یک عامل خاص غیر فلورسنت درمان می شود، در مرحله دوم - با یک عامل شب تاب در برابر -گلوبولین های حیوان که در مرحله اول استفاده شد. در حالت مثبت، یک کمپلکس نورانی متشکل از Ar، At به آن و At در مقابل At (روش ساندویچی) تشکیل می‌شود. علاوه بر یک میکروسکوپ فلورسنت، RIF برای در نظر گرفتن فنوتیپ سلول ها استفاده می شود. مرتب کننده سلول لیزری .

فلوسیتومتری- روشی برای اندازه گیری نوری پارامترهای یک سلول، اندامک های آن و فرآیندهای رخ داده در آن.

این تکنیک شامل تشخیص پراکندگی نور از پرتو لیزر در حین عبور سلول از درون آن در جریانی از مایع است و درجه پراکندگی نور به فرد اجازه می دهد تا ایده ای از اندازه و ساختار سلول داشته باشد. علاوه بر این، تجزیه و تحلیل سطح فلورسانس ترکیبات شیمیایی را که بخشی از سلول هستند (اتوفلورسانس) یا قبل از فلوسیتومتری به نمونه اضافه شده است، در نظر می گیرد.

سوسپانسیون سلولی که از قبل با آنتی بادی های مونوکلونال فلورسنت یا رنگ های فلورسنت برچسب گذاری شده است، وارد جریان مایع عبوری از سلول جریان می شود. شرایط به گونه ای انتخاب می شوند که سلول ها یکی پس از دیگری به دلیل به اصطلاح. تمرکز هیدرودینامیکی جت در جت در لحظه ای که یک سلول از پرتو لیزر عبور می کند، آشکارسازها ثبت می کنند:

پراکندگی نور در زوایای کوچک (از 1 درجه تا 10 درجه) ( این ویژگیبرای تعیین اندازه سلول استفاده می شود).

پراکندگی نور در زاویه 90 درجه (به ما امکان می دهد در مورد نسبت هسته به سیتوپلاسم و همچنین ناهمگنی و دانه بندی سلول ها قضاوت کنیم).

شدت فلورسانس از طریق چندین کانال فلورسانس (از 2 تا 18-20) - به شما امکان می دهد ترکیب زیر جمعیتی سوسپانسیون سلولی و غیره را تعیین کنید.

اصل آنتی گلوبولین. آنتی بادی های ضد گلبول قرمز از نوع ناقص و مولکول های مکمل (C) واقع در سطح گلبول های قرمز - یک آزمایش مستقیم - با آگلوتیناسیون آنها در تماس با سرم حیوانی حاوی آنتی بادی های آنتی گلوبولین انسانی (سرم آنتی گلوبولین) شناسایی می شوند. آنتی بادی های ناقص آزاد در سرم - یک آزمایش غیرمستقیم - با اتصال آنها به مخلوطی از گلبول های قرمز گروه 0 نرمال که همه آنتی ژن های آن متعلق به سیستم شناخته شده Rh هستند، شناسایی می شوند و سپس تحت تأثیر سرم آنتی گلوبولین آگلوتینه می شوند.

مواد، معرف های تست آنتی گلوبولین کومبس: لوله های آزمایش 10/100 میلی لیتر; پیپت مدرج 1، 2 میلی لیتر؛ پیپت پاستور؛ سه پایه; اسلایدهای شیشه ای زمین نشده؛ محلول 8.5 ‰ NaCl؛ گلبول های قرمز گلبول‌های قرمز بیمار و همچنین آنهایی که متعلق به گروه 0 هستند، از خون تازه گرفته شده با استفاده از یک ماده ضد انعقاد (محلول EDTA) به دست می‌آیند.

گلبول های قرمز گروه 0 باید به گونه ای انتخاب شوند که از افراد عادی و حاوی همه باشند آنتی ژن های Rh. آنها را می توان تا 7 روز در پلاسمای اتولوگ در دمای +4 درجه سانتیگراد نگهداری کرد. در صورت عدم وجود گلبول های قرمز گروه 0، می توان از موزاییک آنتی ژنیک شناخته شده، مخلوطی از گلبول های قرمز گروه 0، گلبول های قرمز Rh مثبت و Rh منفی استفاده کرد.

سرمبیمار باید تازه انتخاب شده باشد.

سرم آنتی گلوبولینتولید شده توسط موسسه Dr. I. Cantacuzino به شکل لیوفیلیزه در آمپول های 1 میلی لیتری موجود است. پس از حل شدن، سرم را در دمای 20- درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

تکنیک تست آنتی گلوبولین کومبس:
الف) تست کومبز مستقیم: گلبول های قرمز بیمار را 3 بار با محلول NaCl 8.5 ‰ شستشو دهید.
یک قطره بزرگ از رقت های سرم آنتی گلوبولین را روی چند لام شیشه ای و در کنار آنها، یک قطره کوچک از رسوب گلبول های قرمز بیمار بمالید. قطره ها را با گوشه لیوان مخلوط کنید. مواد آماده شده را به مدت 5 دقیقه روی میز بگذارید سپس وجود آگلوتینات ها را بررسی کنید. اگر نتیجه مثبت بود، حداکثر تیتر آگلوتیناسیون را تعیین کنید.

ب) تست کومبس غیر مستقیمگلبول های قرمز گروه 0، Rh مثبت و Rh منفی، 3 بار با محلول NaCl 8.5 ‰ شستشو داده و به میزان 2 قطره گلبول قرمز در هر 8-10 قطره سرم در معرض سرم بیمار قرار دهید، سپس به مدت 60 دقیقه در انکوباتور قرار دهید. دمای 37 درجه با. پس از این، گلبول های قرمز را مجدداً سه بار بشویید و طبق دستورالعمل آزمایش مستقیم کومبس، آنها را با سرم آنتی گلوبولین درمان کنید.

وقتی می آید در مورد آنتی بادی های فعال سرماخوردگیگلبول های قرمز گروه 0 را به مدت 60 دقیقه حساس کنید. در دمای +4 درجه سانتیگراد.

توجه داشته باشید: 1) آزمایش کومبس مستقیم را روی گلبول های قرمز که برای یک یا چند روز در دمای +4 درجه سانتیگراد یا دمای اتاق نگهداری می شود انجام ندهید، زیرا ممکن است به دلیل تثبیت آنتی بادی های فعال سرماخوردگی ناقص موجود در سرم طبیعی، نتایج مثبت کاذب باشد. . 2) در موارد هیپرپروتئینمی شدید گلبول های قرمز را 5-4 بار شستشو داده و عدم وجود پروتئین های سرم را در آخرین مایع شستشو با استفاده از اسید سولفوسالیسیلیک بررسی کنید.

باقیمانده احتمالی 2 میکروگرم IgG/ml در رسوب گلبول قرمز ممکن است سرم آنتی گلوبولین را خنثی می کند. آزمایش کومبس همچنین می‌تواند با استفاده از سرم‌های تک اختصاصی ضد IgG، -IgM، -IgA -C3 و -C4 انجام شود تا نوع سلول‌های واقع در سطح گلبول‌های قرمز خون، به عنوان مثال، در بیماران مبتلا به همولیتیک خودایمنی مشخص شود. کم خونی

تست کومبز- سنجشی برای تشخیص آنتی بادی های متصل به سطح یا محلول در پلاسما. برای تشخیص ایمن سازی و آنتی بادی های گلبول های قرمز خون استفاده می شود. نام دوم تست آنتی گلوبولین است. می تواند مستقیم یا غیر مستقیم باشد.

در آزمایش آنتی گلوبولین مستقیمآنتی بادی های ثابت شده روی سطح گلبول های قرمز را تشخیص می دهد. در صورت مشکوک بودن به سایر بیماری های خودایمنی، پس از مصرف داروها (متیل دوپا، پنی سیلین، کینین) و غیره انجام می شود.

گلبول‌های قرمز در داخل بدن حساس شده‌اند - آنتی‌بادی‌ها از قبل محکم به آنها چسبیده‌اند و افزودن سرم آنتی‌گلوبولین (ضد IgG) باعث می‌شود سلول‌های حساس به هم بچسبند که با چشم غیرمسلح قابل مشاهده است.

تست کومبس غیر مستقیمآنتی بادی های ضد گلبول قرمز را در پلاسمای خون تشخیص می دهد، قبل از تزریق خون و در طی آن انجام می شود.

آنتی بادی های ضد گلبول قرمز نوعی اتوآنتی بادی هستند، یعنی. آنتی بادی ها علیه بافت های خود اتوآنتی بادی در طول واکنش پاتولوژیک رخ می دهد سیستم ایمنیبرای برخی داروها، به عنوان مثال، دوزهای بالای پنی سیلین.

گلبول های قرمز در سطح خود حاوی ساختارهای شیمیایی مختلفی (گلیکولیپیدها، ساکاریدها، گلیکوپروتئین ها و پروتئین ها) هستند که در پزشکی آنتی ژن نامیده می شوند. فرد نقشه خاصی از آنتی ژن ها را در هر گلبول قرمز از والدین خود به ارث می برد.

آنتی ژن ها به گروه ها ترکیب می شوند و سپس خون به چندین گروه تقسیم می شود - طبق سیستم AB0، Rh، Kell، Lewis، Kidd، Duffy. معروف ترین و شاخص ترین آنها در کار پزشک AB0 و فاکتور Rh (Rh) هستند.

سیستم AB0

وضعیت Rh فرد با وجود این آنتی ژن ها تعیین می شود. یکی از آنتی ژن های مهم گلبول های قرمز آنتی ژن D است. اگر وجود داشته باشد، آنها از آن صحبت می کنند Rh مثبت خون RhD، و اگر آنجا نباشد - اوه Rh منفی Rhd.

اگر آنتی بادی مربوطه به آنتی ژن های گلبول قرمز بچسبد، گلبول قرمز از بین می رود - همولیز.

نشانه ها

نشانه اصلی برای مستقیمتست آنتی گلوبولین- مشکوک به کم خونی همولیتیک. اغلب برای کم خونی همولیتیک خود ایمنی اولیه، همولیز در روماتیسم، تومور، انجام می شود. بیماری های عفونی، همولیز ناشی از دارو.

اگر کم خونی چند روز یا چند ماه پس از تزریق خون یا با زردی طولانی مدت در نوزاد ظاهر شود، آزمایش کومبز مستقیم نیز انجام می شود.

غیر مستقیمآزمایش آنتی گلوبولین انجام می شودقبل از تزریق خون و در دوران بارداری یک زن Rh منفی.

کم خونی همولیتیک خود ایمنی

کم خونی همولیتیک خود ایمنی (اولیه)- یک بیماری خودایمنی کلاسیک با علل ناشناخته. تعامل درون سیستم ایمنی مختل می شود، که منجر به درک گلبول های قرمز خون خود به عنوان خارجی می شود. در غدد لنفاوی، آنتی‌بادی‌های کلاس IgG (در دمای 37 درجه سانتی‌گراد واکنش نشان می‌دهند) و/یا IgM (در دمای 40 درجه سانتی‌گراد) سنتز می‌شوند که وقتی به سطح گلبول قرمز متصل می‌شوند، تعدادی آنزیم را تحریک می‌کنند. سیستم مکمل) و دیواره گلبول قرمز را " سوراخ می کند" که منجر به تخریب آن - همولیز می شود.

اولین علائم هم به دلیل تخریب گلبول های قرمز و هم کاهش هموگلوبین ایجاد می شود. از جمله:

• خستگی، ضعف عمومی، تحریک پذیری
• تنگی نفس
• درد شکم و قفسه سینه، حالت تهوع
• رنگ ادرار تیره
• کمر درد
• تغییر رنگ عفونی پوست و غشاهای مخاطی
• کاهش تعداد گلبول های قرمز خون و

نتیجه مثبتمستقیم تست های کومبس 100٪ تشخیص کم خونی همولیتیک خودایمنی را تایید می کند و منشا خود ایمنی آن را ثابت می کند. در عین حال، نتیجه منفی حذف تشخیص را ممکن نمی کند.

کم خونی همولیتیک ثانویه

کم خونی همولیتیک خودایمنی ثانویه و تست کومبس مثبت می تواند در بیماری های زیر رخ دهد:

• سندرم ایوانز
• عفونت پنومونی

مثبت بودن تست آنتی گلوبولین برای این بیماری ها یکی از علائم است و ملاک تشخیص نیست.

بیماری همولیتیک نوزادان

علت بیماری همولیتیکنوزادان -ناسازگاری گروه خونی مادر و جنین، در اکثر موارد با توجه به سیستم Rh، در موارد منفرد - بر اساس سیستم AB0، به طور تصادفی - با توجه به آنتی ژن های دیگر.

اگر جنین یک زن Rh منفی خون Rh مثبت را از پدر به ارث ببرد، تضاد Rh ایجاد می شود.

این بیماری در نوزاد تازه متولد شده تنها در صورتی ایجاد می‌شود که مادر قبلاً آنتی‌بادی‌هایی را علیه آنتی‌ژن‌های مربوطه ایجاد کرده باشد که پس از بارداری‌های قبلی، سقط جنین و تزریق خون ناسازگار اتفاق می‌افتد. بیشتر دلیل مشترکتحریک سنتز آنتی بادی ها به آنتی ژن های غشای گلبول های قرمز - زایمان (خونریزی جنینی-مادر). اولین زایمان معمولاً بدون عارضه انجام می شود، اما زایمان های بعدی مملو از بیماری همولیتیک نوزاد در روزهای اول پس از تولد است.

علائم بیماری همولیتیک در نوزادان:

• زردی پوست
• ، و غشاهای مخاطی
• کبد و طحال بزرگ شده است
• مشکلات تنفسی
• تورم کل بدن
• تحریک و فرورفتگی تدریجی مرکز سیستم عصبی

کم خونی پس از تزریق خون

تست کومبس غیر مستقیمقبل از انتقال خون برای ارزیابی سازگاری، و آزمایش کومبز مستقیم - پس از آن در صورت مشکوک شدن به همولیز پس از تزریق خون انجام می شود. در صورت وجود علائمی مانند تب، آبیاری (در زیر بخوانید). هدف از این تجزیه و تحلیل شناسایی آنتی بادی‌هایی برای گلبول‌های قرمز خونی است که به گلبول‌های قرمز خون گیرنده متصل شده‌اند و عامل همولیز پس از تزریق هستند و همچنین حذف زودرس گلبول‌های قرمز اهداکننده از گردش خون. گیرنده (کسی که خون را دریافت کرد).

علائم:

• افزایش دمای بدن
• بثورات پوستی
• کمر درد
• قرمز
• حالت تهوع
• سرگیجه

رمزگشایی

شایان ذکر است که قوانین اساسی برای رمزگشایی آزمایش های آنتی گلوبولین مستقیم و غیر مستقیم یکسان است. تنها تفاوت در محل آنتی بادی ها - در خون یا روی گلبول قرمز است.

• اگر تست مستقیم کومبز منفی است- این بدان معنی است که آنتی بادی روی گلبول های قرمز "نشسته" است و باید علت علائم را بیشتر جستجو کرد و انجام داد. نمونه غیر مستقیمکومبز
• اگر نتیجه مثبت آزمایش کومبس پس از تزریق خون، عفونت ها، داروها تشخیص داده شود - مثبت بودن تا 3 ماه ادامه دارد (عمر گلبول های قرمز 120 روز - 3 ماه)
• نتیجه تست آنتی گلوبولین مثبت با بیماری خود ایمنیماه ها و حتی سال ها طول می کشد

هنجار

• تست کومبز مستقیم - منفی است
• تست کومبس غیر مستقیم - منفی است

یک نتیجه کیفی مثبت در تعداد مثبت ها از یک تا چهار (+، ++، +++، ++++) و از نظر کمی به صورت دیجیتال - 1:16، 1:256 و غیره اندازه گیری می شود.

بله. پزشک شما قطعا باید بداند که شما تزریق خون دریافت کرده اید، زیرا در حال حاضر بر تفسیر صحیح نتایج آزمایش تأثیر می گذارد. هنگام دریافت خون شخص دیگری (البته بارها آزمایش شده)، همیشه این احتمال وجود دارد که بدن شما در برابر خون تزریق شده آنتی بادی ایجاد کند. این آنتی بادی ها هستند که تأثیر منفی بر سلامتی خواهند داشت. برای انتقال خون بعدی، پزشک باید بداند که شما قبلاً تزریق خون دریافت کرده اید، به این معنی که زمان برای سنتز آنتی بادی ها وجود داشته است. برای زنان باردار این اطلاعاتحتی مرتبط تر است.

3. در صورت عدم تطابق فاکتور Rh بین مادر و کودک، آیا همه کودکان بیمار خواهند بود؟

بستگی به Rh مثبت یا منفی کودک (RhD) دارد. ناقلین گروه های خونی I، II، III و IV می توانند Rh مثبت یا منفی باشند. در شرایطی که مادر Rh منفی و کودک Rh مثبت است، آنتی بادی ها از قبل با اولین بارداری تولید می شوند، اما تنها پس از اولین زایمان (یا خاتمه بارداری) تماس مستقیم بین خون مادر و مادر وجود خواهد داشت. کودک اثر همولیتیک آنتی بادی ها تنها در طول دوم و تولد بعدی، که منجر به بیماری همولیتیک در نوزاد خواهد شد.

هر زن با فاکتور Rh منفی باید در دوران بارداری و بعد از زایمان به دقت مورد بررسی قرار گیرد درمان پیشگیرانهبرای جلوگیری از ظهور آنتی بادی ها و عوارض بعدی.

4. آیا در دوران بارداری قبل از انجام آزمایش کومبس باید گروه خونی همسرم را بدانم؟

شما نه تنها باید بدانید، بلکه باید گروه خونی پدر بیولوژیکی کودک را در دوران بارداری نیز بررسی کنید.

حقایق

• اولین بار در سال 1945 در کمبریج پیشنهاد شد
• آستانه حساسیت - حداقل 300 مولکول آنتی بادی ثابت روی یک گلبول قرمز
• تعداد آنتی بادی هایی که همولیز را آغاز می کنند - به صورت جداگانه برای هر فرد (از 16-30 تا 300)
• پویایی سایر شاخص های آزمایشگاهی کم خونی همولیتیک (هموگلوبین، بیلی روبین، رتیکولوسیت ها) ممکن است عادی شود و تست کومبز در همان سطح باقی می ماند.

آخرین ویرایش آزمون کومبز: 16 مارس 2018 توسط ماریا بودیان

واکنش کومبس - روش موثرتشخیص آنتی ژن های گلبول قرمز و آنتی بادی های ضد گلبول قرمز در خون انسان واکنش غیر مستقیمآگلوتیناسیون اساس آزمایش استفاده از معرف های مونوکلونال اختصاصی مبتنی بر ایمونوگلوبولین های کلاس G (IgG) برای تایپ آنتی ژن های گلبول های قرمز و به دنبال آن استفاده از سرم آنتی گلوبولین کومبس (AGS) در مرحله دوم است.

AGS با مخلوط کردن سرم از خون حیوانات آزمایشگاهی ایمن شده با ایمونوگلوبولین های G انسانی و آنتی بادی های مونوکلونال به یکی از اجزای - مکمل C3D سرم انسانی تولید می شود. AGS باعث آگلوتیناسیون گلبول های قرمز حساس شده با آنتی بادی های خاص می شود. در صورت عدم وجود آنتی بادی بر روی گلبول های قرمز تحت تأثیر AGS واکنش مثبتاتفاق نمی افتد

واکنش غیرمستقیم کومبس به شما امکان می دهد حضور موارد زیر را تعیین کنید:

• آنتی ژن های گلبول قرمز شناسایی شده توسط معرف های IgG (آنتی بادی های "ناقص"، به عنوان مثال، معرف های مونوکلونال anti-D، anti-F Y a، anti-F Y b).
• آنتی بادی های ضد گلبول قرمز از کلاس IgG.

آزمایش آنتی گلوبولین غیر مستقیم: تشخیص آنتی ژن های گلبول قرمز

ما روش واکنش غیرمستقیم کومبس را با استفاده از مثال کولیکلون anti-D IgG ارائه می‌کنیم.

1. برچسب زدن به لوله آزمایش تمیز: نام فرد مورد آزمایش را مشخص کنید.
2. 2 قطره (تقریباً 0.1 میلی لیتر) زولیکلون anti-D IgG را به لوله آزمایش اضافه کنید.
3. 2 قطره از یک سوسپانسیون 5٪ از گلبول های قرمز را که قبلاً با محلول فیزیولوژیکی شسته شده است، اضافه کنید. نمونه های آزمایشی را با زولیکلون مخلوط کنید.
4. مخلوط را در یک حمام آب یا در یک ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید.
5. 5 تا 10 میلی لیتر محلول نمکی را با استفاده از پیپت پاستور به لوله آزمایش اضافه کنید.
6. لوله را با شتاب گریز از مرکز 1200 گرم در دمای 18 تا 25 درجه سانتیگراد به مدت یک دقیقه سانتریفیوژ کنید.
7. محلول نمک را بردارید.
8. روش شستشوی گلبول های قرمز با استفاده از سانتریفیوژ را 2 تا 3 بار دیگر تکرار کنید.
9. 2 قطره سرم آنتی گلوبولین را به رسوب سلول های خونی اضافه کرده و مخلوط کنید.
10. لوله را با شتاب گریز از مرکز 1200 گرم به مدت یک دقیقه در دمای 18 تا 25 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ کنید.
11. با استفاده از دیسپنسر یا پیپت پاستور، 3 تا 5 قطره محلول نمکی اضافه کنید.
12. رسوب را مجدداً معلق کنید و از نظر بصری آگلوتیناسیون را ارزیابی کنید. آگلوتیناسیون های تلفظ شده در پایین لوله آزمایش در برابر پس زمینه محلول شفافنشان دهنده تشخیص آنتی ژن گلبول قرمز است. تعلیق غیر شفاف سلول های خونی نشان دهنده عدم وجود آنتی ژن است.

تست کومبس: غربالگری آنتی بادی های ضد گلبول قرمز ایزوایمیون

این مطالعه به عنوان بخشی از آزمایش سازگاری فردی برای همه آنتی ژن‌های گلبول قرمز اهداکننده و گیرنده انجام می‌شود. نتیجه گیری در مورد سازگاری کاملسرم های گیرنده با گلبول های قرمز اهدا کننده بر اساس عدم وجود همولیز و/یا آگلوتیناسیون در تمام مراحل تجزیه و تحلیل تولید می شوند. علائم همولیز و/یا آگلوتیناسیون در هر مرحله از آزمایش نشان دهنده ناسازگاری نمونه های خون است.

ارزیابی سازگاری با استفاده از سیستم AB0، تشخیص آنتی بادی های "سرد".

1. تهیه نمونه خون اهداکننده:
   • 0.2 میلی لیتر خون را با استفاده از دستگاه پخش خودکار به لوله آزمایش اضافه کنید.
   • گلبول های قرمز را در 5.0 میلی لیتر سالین 3 بار بشویید.
   • گلوله را مجدداً در 3 تا 4 میلی لیتر محلول LISS با قدرت یونی کم معلق کنید.
2. دومین لوله تمیز را برچسب بزنید: نام گیرنده و نام اهدا کننده را مشخص کنید.
3. از یک توزیع کننده خودکار برای توزیع 0.1 میلی لیتر سرم گیرنده در یک لوله برچسب دار استفاده کنید.
4. 2 قطره سوسپانسیون 5% گلبول قرمز را در محلول LISS اضافه کنید.
5. بلافاصله مخلوط را با شتاب گریز از مرکز 1200 گرم در دمای 18 تا 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 تا 20 ثانیه سانتریفیوژ کنید.
6. با تکان دادن آرام لوله آزمایش، رسوب را از پایین جدا کنید. وجود آگلوتینات ها را ارزیابی کنید. وجود همولیز و/یا آگلوتینات به این معنی است:
   • ناسازگاری با توجه به سیستم AB0؛
   • وجود آنتی بادی های "سرد" در سرم بیمار کلاس IgMیا IgA، مختص آنتی ژن های AB0 نیست.

تشخیص آنتی بادی های "گرم".

1. در صورت عدم همولیز و/یا آگلوتیناسیون، لوله را به مدت 10 تا 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
2. لوله را در دمای 1200 گرم به مدت 15 تا 20 ثانیه در دمای اتاق سانتریفیوژ کنید.
3. لوله را تکان دهید و همولیز و/یا آگلوتینات ها را در مایع رویی بررسی کنید. یک نتیجه مثبت نشان دهنده تشخیص آنتی بادی های IgM "گرم" علیه آنتی ژن های اریتروسیت دهنده در سرم بیمار است.

تشخیص آنتی بادی های IgG در تست کومبس

1. اگر نتیجه در مرحله قبل از مطالعه منفی بود، با استفاده از پیپت پاستور، 5 میلی لیتر محلول NaCl 0.9% به لوله آزمایش اضافه کنید.
2. لوله را در دمای 1200 گرم به مدت 15 تا 20 ثانیه در دمای هوای 18 تا 25 درجه سانتی گراد سانتریفیوژ کنید. از یک پیپت پاستور برای دور ریختن مایع رویی استفاده کنید.
3. شستشوی گلبول قرمز را 2 تا 3 بار دیگر تکرار کنید.
4. 1 تا 2 قطره سرم آنتی گلوبولین را به لوله آزمایش اضافه کنید. مخلوط کردن کامل را انجام دهید.
5. لوله را در 1200 گرم به مدت 15 تا 20 ثانیه سانتریفیوژ کنید.
6. رسوب گلبول قرمز را با دقت بشکنید و نتیجه واکنش را به صورت بصری ارزیابی کنید. تشخیص آگلوتیناسیون به معنای وجود آنتی بادی های IgG در سرم بیمار علیه آنتی ژن های گلبول قرمز اهداکننده است.

تست کومبز مستقیم. این آزمایش برای اثبات وجود آنتی بادی های مسدود کننده تثبیت شده در گلبول های قرمز خون کودک استفاده می شود. یک آزمایش مستقیم مثبت نشان دهنده حساسیت است و به عنوان یک نشانه قانع کننده از بیماری همولیتیک نوزاد تازه متولد شده حتی قبل از ظهور سایر موارد عمل می کند. علائم بالینی. به عنوان یک استثنا و فقط در موارد بسیار شدید، آزمایش مستقیم کومبس ممکن است به دلیل همولیز تقریباً کامل گلبول های قرمز حساس شده منفی باشد.

آزمایش مستقیم کومبس به شرح زیر انجام می شود: 5 قطره خون گرفته شده از پاشنه پا در لوله آزمایش قرار می گیرد و 5 میلی لیتر نمک به آن اضافه می شود. خوب هم بزنید و 10 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع شفاف بالای رسوب گلبول قرمز جدا می شود. سپس مجدداً 5 میلی لیتر سالین اضافه کنید، مخلوط کرده و سانتریفیوژ کنید. پس از سه بار مخلوط شدن با سالین، گلبول های قرمز به خوبی شسته می شوند. پس از آخرین جداسازی مایع رویی، رسوب گلبول قرمز به مقدار 0.1 میلی لیتر با 0.9 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی مخلوط می شود. 2 تا 3 قطره از این مخلوط را روی یک لام شیشه ای بریزید و یک قطره از سرم کومبس را اضافه کنید. وجود آگلوتیناسیون نشان دهنده مثبت بودن واکنش است (تست کومبز مستقیم مثبت). مطالعه باید در دمای اتاق بالای 16 درجه انجام شود تا از اثر آگلوتینین سرد جلوگیری شود.

تست کومبس غیر مستقیمبه عنوان شواهدی از وجود آنتی بادی های آزاد در سرم مادر عمل می کند و با سرم مادر انجام می شود.

بیماری همولیتیک در نوزادی با ناسازگاری Rh معمولاً بعد از بارداری دوم خود را نشان می دهد. فرزند اول سالم به دنیا می آید، فرزند دوم با علائم کم خونی خفیف، و تنها پس از بارداری سوم کودکانی نشانه های روشنبیماری همولیتیک فقط زنانی که از قبل حساس شده اند می توانند فرزندی با علائم بیماری همولیتیک در اولین بارداری خود به دنیا بیاورند. در برخی موارد، ایمن سازی باعث سقط جنین و زایمان می شود بچه های مرده. برای شروع و شدت بیماری، وضعیت جفت و مدت زمان قرار گرفتن در معرض آگلوتینین های مادر با جنین مهم است. هنگامی که آگلوتینین ها 10-14 هفته قبل از تولد ظاهر می شوند، کودک معمولاً اشکال تحت بالینی را تجربه می کند. ظهور زودرس آگلوتینین ها، 15-26 هفته قبل از تولد، باعث می شود اشکال شدیدبیماری ها در همه اشکال بیماری، فرآیند اصلی همولیز است. پیامد واکنش آنتی ژن-آنتی بادی همولیز، آسیب به کبد و مویرگ های مغز است. بسته به اینکه کدام ضایعه غالب باشد، نیز وجود دارد اشکال مختلفبیماری ها برخی از پدیده های آنافیلاکتیک نیز خطرناک هستند. آنها منجر به تشکیل مواد هیستامین مانند می شوند و باعث آسیب شدید به سلول های کبد و به ویژه به سلول های گانگلیونی عقده های پایه، شاخ آمون، بصل النخاع و حتی قشر مغز می شوند. هنگامی که سلول های کبد آسیب می بینند، زردی کبدی به زردی خارج کبدی اضافه می شود. کودکان به دلیل علائم شدید کرنیکتروس می میرند. در صورت زنده ماندن، علائم آسیب به سیستم عصبی باقی می ماند (اختلالات سیستم خارج هرمی با حرکات کرئوآتتوز، راه رفتن عجیب و غریب در رقص، حرکات اجباری سر، گاهی اوقات اختلال هماهنگی حرکات ارادیبا سقوط های مکرر، افزایش لحنماهیچه ها، عقب ماندگی ذهنی، یعنی با نشانه هایی از به اصطلاح. انسفالوپاتی posticteria infantum).