Ախտորոշիչ ագլյուտինացիոն ռեակցիա. Դասախոսություն՝ Ագլյուտինացման ռեակցիա (ՀՀ)

Ագլյուտինացման ռեակցիա (լատ. ագլյուտինացիա- սոսնձում) - դիակների (բակտերիաներ, կարմիր արյան բջիջներ և այլն) սոսնձում հակամարմիններով էլեկտրոլիտների առկայության դեպքում:

Ագլյուտինացման ռեակցիադրսևորվում է փաթիլների կամ նստվածքի տեսքով, որը բաղկացած է հակամարմիններով «սոսնձված» դիակներից (օրինակ՝ բակտերիաներից) (նկ. 7.37): Ագլյուտինացման ռեակցիան օգտագործվում է. որոշելու հիվանդից մեկուսացված հարուցիչը. հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմինների որոշում; արյան խմբերի որոշում.

Բրինձ. 7.37 ա, բ. Ագլյուտինացման ռեակցիա հետIgM- հակամարմիններ (ա) ևIgG- հակամարմիններ (բ)

1. Հիվանդից մեկուսացված հարուցչի որոշում Մոտավոր ռեակցիաագլյուտինացիա ապակու վրա (նկ. 7.38): Հիվանդից մեկուսացված բակտերիաների կասեցումը ավելացվում է ագլյուտինացնող շիճուկի կաթիլին (1:20 նոսրացում): Առաջանում է ճկուն նստվածք։

Բրինձ. 7.38.

Ընդարձակ ագլյուտինացիոն ռեակցիա հիվանդից մեկուսացված պաթոգենով (նկ. 7.39): Հիվանդից մեկուսացված բակտերիաների կասեցումը ավելացվում է ագլուտինացնող շիճուկի նոսրացումներին:

Բրինձ. 52

2. Հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմինների որոշում
Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիա հիվանդի արյան շիճուկով (նկ. 7.39): Diagnosticum-ը ավելացվում է հիվանդի շիճուկի նոսրացումներին:
- O-diagnosticum-ով (ջերմությունից սպանված բակտերիաներ, որոնք պահպանում են O-անտիգենը) ագլյուտինացիան տեղի է ունենում մանրահատիկ ագլյուտինացիայի տեսքով:
- Ագլյուտինացիան H-diagnosticum-ով (մանրէներ, որոնք սպանվում են ֆորմալդեհիդով, պահպանելով դրոշակակիր H-հակագինը) մեծ է և տեղի է ունենում ավելի արագ:
3. Ագլյուտինացիոն ռեակցիա արյան խմբերի որոշման համարԱրյան խմբերը որոշելու համար ագլյուտինացիոն ռեակցիան օգտագործվում է ABO համակարգը հաստատելու համար (Աղյուսակ բ)՝ օգտագործելով էրիթրոցիտների ագլյուտինացիա իմունային շիճուկի հակամարմիններով՝ արյան A (I), B (III) անտիգենների դեմ: Վերահսկիչն է՝ շիճուկ, որը չի պարունակում հակամարմիններ, այսինքն. շիճուկ AB (IV) արյան խումբ; հակագեններ, որոնք պարունակվում են A (II), B (III) խմբերի կարմիր արյան բջիջներում: Բացասական վերահսկողությունը չի պարունակում անտիգեններ, այսինքն՝ օգտագործվում են O (I) խմբի էրիթրոցիտներ:

Աղյուսակ 7.6. ABO արյան խմբերի որոշում

Ռեակցիայի արդյունքները		Խումբ
		պատկանող
		հետազոտվել է արյուն
կարմիր արյան բջիջների հետ	շիճուկ (պլազմա)
ստանդարտ	ստանդարտով
շիճուկներ

«Իմունոմոդուլյատորներ. Վարակիչ հիվանդությունների իմունաախտորոշում» թեմայի բովանդակության աղյուսակ.

Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիա (ՀՀ) Հիվանդի արյան շիճուկում AT-ն որոշելու համար ա ընդարձակ ագլյուտինացիոն ռեակցիա (ՀՀ). Դա անելու համար արյան շիճուկի մի շարք նոսրացումներին ավելացվում է դիագնոստիկ՝ սպանված միկրոօրգանիզմների կամ մասնիկների կասեցում սորբացված Ag-ով: Առավելագույն նոսրացում տալը ագլյուտինացիա Ag-ը կոչվում է շիճուկի տիտր:

Ագլուտինացման ռեակցիայի տեսակները (ՀՀ AT-ի հայտնաբերման համար՝ արյան կաթիլային թեստ տուլարեմիայի համար (ախտորոշումով, որը կիրառվում է արյան մի կաթիլի վրա և տեսանելի սպիտակավուն ագլյուտինատների տեսքով) և բրուցելոզի համար Հադլսոնի թեստ (գենտիական մանուշակով ներկված դիագնոստիկով, որը կիրառվում է արյան մի կաթիլի վրա։ շիճուկ):

Մոտավոր ագլյուտինացիոն ռեակցիա (ՀՀ)

Մեկուսացված միկրոօրգանիզմները բացահայտելու համար ապակե սլայդների վրա տեղադրվում է մոտավոր ՌԱ: Դրա համար ախտածին կուլտուրան ավելացվում է ստանդարտ ախտորոշիչ հակաշիճուկի կաթիլին (նոսրացված 1:10, 1:20): ժամը դրական արդյունքկատարել մանրակրկիտ ռեակցիա՝ հակաշիճուկի ավելացող նոսրացումներով:

Արձագանքհամարվում է դրական, եթե ախտորոշիչ շիճուկի տիտրին մոտ նոսրացումներում նկատվում է ագլյուտինացիա:

OAS. Սոմատիկ Օ-Ագսջերմակայուն են և կարող են դիմակայել եռման 2 ժամ։ԱԹ–ի հետ փոխազդելիս ձևավորում են մանրահատիկ ագրեգատներ։

Ն-Ագ. N-Ag (դրոշիկներ)ջերմակայուն են և արագ քայքայվում են 100 °C ջերմաստիճանում, ինչպես նաև էթանոլի ազդեցության տակ։ H- հակաշիճուկի հետ ռեակցիաներում, 2 ժամ ինկուբացիայից հետո, առաջանում են չամրացված մեծ փաթիլներ (առաջանում են բակտերիաների կողմից, որոնք կպչում են բակտերիաների հետ միասին):

Վի-Արորովայնային բակտերիաները համեմատաբար ջերմակայուն են (2 ժամ դիմանում է 60-62 °C ջերմաստիճանին); Vi հակաշիճուկով ինկուբացիայի ժամանակ առաջանում է մանրահատիկ ագլյուտինատ։

Ուղղակի հեմագլյուտինացման ռեակցիաներ

Դրանցից ամենապարզը ռեակցիաներ - ագլյուտինացիակարմիր արյան բջիջներ կամ հեմագլյուտինացիա, որն օգտագործվում է ABO համակարգում արյան խմբերը որոշելու համար: Որոշելու համար ագլյուտինացիա(կամ դրա բացակայությունը) օգտագործել ստանդարտ հակաշիճուկներ հակա-A և հակա-B ագլյուտինիններով: Ռեակցիան կոչվում է ուղղակի, քանի որ ուսումնասիրվող Ags-ը կարմիր արյան բջիջների բնական բաղադրիչներն են:

Ընդհանուր հետ ուղղակի հեմագլյուտինացիավիրուսային հեմագլյուտինացիան ունի մեխանիզմներ. Շատ վիրուսներ ունակ են ինքնաբուխ սոսնձել թռչունների և կաթնասունների էրիթրոցիտները, դրանց ավելացումը էրիթրոցիտների կասեցմանն առաջացնում է դրանցից ագրեգատների ձևավորում:

Ագլյուտինացման ռեակցիա Ագլյուտինացման ռեակցիա

(ՀՀ) - նույնականացման մեթոդ և քանակականացում Ag և At՝ հիմնվելով անզեն աչքով տեսանելի ագլոմերատներ ձևավորելու իրենց կարողության վրա: Վարակիչ հիվանդությունների բաժանմունքում։ հիվանդությունների կամ այլ նպատակների համար օգտագործվում է անհայտ միկրոբների և բջիջների նույնականացման, արյան և այլ հեղուկների մեջ Ab-ի առկայությունը և քանակը որոշելու համար: Որոշման սկզբունքը հիմնված է Ag-ի և Ab-ի փոխազդեցության առանձնահատկությունների վրա և բաղկացած է անհայտից հայտնիը գտնելուց: ՀՀ-ի համար կան բազմաթիվ տարբերակներ՝ քանակական և որակական, փորձանոթային և ապակի, ծավալային և կաթիլային, պայմանական, արագացված և էքսպրես մեթոդներ։ RA բեմադրելու համար անհրաժեշտ է՝ 1) ս-կա արյուն.Բակտերիաների (var) տեսակի որոշման տարբերակում օգտագործվում են արդյունաբերական ագլյուտինացիոն թեստեր՝ արտադրված ճագարների իմունիզացիայի միջոցով։ Աբի տեսակի որոշման տարբերակում թեստից արյան նմուշ են վերցվում։ մարդիկ կամ կենդանիներ. Լուծույթը պետք է լինի ստերիլ և առանց կասեցված մասնիկների: Պատրաստեք հիմնական նոսրացումը աղի լուծույթում: Այն պետք է լինի 2-4 անգամ ցածր այս հիվանդության ախտորոշիչ տիտրից; 2) Ագ.Աբ տիպի որոշմամբ ռեակցիայի տարբերակում օգտագործվում են արդյունաբերական ախտորոշիչ փաթեթներ. Ag-ի որոշման տարբերակում ախտորոշիչները պատրաստվում են ինքնուրույն 1-3 միլիարդ կախոցի տեսքով 18-20-ժամյա ագարի (ավելի հաճախ արգանակ) փորձարկման աղի լուծույթում: միկրոբն ապաակտիվացված է 70°C ջրային բաղնիքում 1 ժամ տաքացնելով կամ 37°C-ում 24-ժամյա ինկուբացիայից ֆորմալդեհիդով (վերջնական կոնցենտրացիան 0,2%); 3) էլեկտրոլիտ աղի լուծույթի տեսքով:Բեմադրության տեխնիկա ծավալային սերիական խողովակՀՀ-ն որոշել Ab titer-ը s-ki-ում. s-ki-ի հիմնական նոսրացումից պատրաստվում են աշխատանքային նոսրացումների մի քանի շարք: Տողերի քանակը կախված է փորձի մեջ ընդունված ախտորոշիչների քանակից, քանակը և նոսրացման գործակիցները որոշվում են կասկածելի հիվանդության ախտորոշիչ տիտրով: Շարքը պետք է առնվազն պարունակի նոսրացում, որը համապատասխանում է ախտորոշիչ Ab տիտրին, երկու նոսրացում ներքևում և երկու նոսրացում դրա վերևում: օրինակ, եթե ախտորոշիչ տիտրը 1:100 է, ապա ՌԱ բեմադրման ծավալային մեթոդով պետք է պատրաստել հետևյալ նոսրացումները՝ 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400, կաթիլային. մեթոդով, առաջին նոսրացումը (1:25) անհրաժեշտ չէ, բայց անհրաժեշտ է մեկ այլ ավելի բարձր նոսրացում՝ 1:800: գիտական ​​հետազոտություն s-ku-ն տիտրվում է բացասական արձագանք. Այն նոսրացվում է հետևյալ կերպ. բոլոր փորձանոթների մեջ լցնում են 0,25 մլ աղի լուծույթ, բացառությամբ 1-ին, երբ ռեակցիան իրականացվում է 0,5 մլ ծավալով, և 0,5 մլ, երբ ռեակցիան իրականացվում է 1 ծավալով։ մլ. 1-ին և 2-րդ փորձանոթների մեջ լցնել 0,25 (0,5) մլ հիմնական նոսրացում, 2-րդ փորձանոթից կտրված ծավալի մեջ և բուծման ս-կեւ ավելացել է 2 անգամ, 0,25 (0,5) մլ տեղափոխվում է 3-րդ, 3-ից 4-րդ եւ այլն։ մինչև վերջինը, կտրվածքից 0,25 (0,5) մլ լցնում են ամեն ինչի մեջ՝ ծավալները հավասարակշռելու համար։ Յուրաքանչյուր նոսրացում իրականացվում է առանձին խողովակի միջոցով: Եթե ​​մի քանի դիագնոստիկա են վերցվում փորձի մեջ, ապա դրանցից յուրաքանչյուրի համար նույն կերպ պատրաստվում է նոսրացումների իր շարքը։ Փորձանոթի յուրաքանչյուր նոսրացմանը Diagnosticum ավելացվում է փորձանոթի ծավալին հավասար ծավալով, որի արդյունքում յուրաքանչյուր փորձանոթում նոսրացումը կրկնապատկվում է: Փորձը համապատասխանում է s-ki կոնտրոլին (0,25 - 0,5 մլ s-ki-ի հիմնական նոսրացման և նույն քանակությամբ աղի լուծույթի) և Ag կոնտրոլին (0,25 - 0,5 մլ դիագնոստիկ և նույն քանակությամբ աղի լուծույթ): Եթե ​​փորձի ժամանակ օգտագործվում են մի քանի ախտորոշիչներ, ապա յուրաքանչյուրն ունի իր հակագենային հսկողությունը: Փորձանոթներով դարակը լավ թափահարում են և տեղադրում 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ 4 ժամ, այնուհետև թողնում սենյակային ջերմաստիճանում մինչև հաջորդ օրը, որից հետո PA-ն գրանցվում է՝ ելնելով նստվածքի քանակից և մաքրման աստիճանից: հեղուկը։ Այս ցուցանիշների որոշումը, կախված ագլյուտինատների բնույթից, իրականացվում է անզեն աչքով՝ մուգ ֆոնի վրա, ագլյուտինոսկոպով կամ մանրադիտակի հայելու գոգավոր մակերեսի վրա։ Հաշվապահական հաշվառումը սկսվում է հսկիչներից. C հսկողությունը պետք է լինի թափանցիկ, Ag-ը պետք է լինի միատեսակ պղտոր (խողովակը թափահարելուց հետո): Եթե ​​հսկիչները լավ են, հաստատեք ագլյուտինացիայի առկայությունը և աստիճանը բոլոր փորձանոթներում, որոնք նշանակված են պլյուսներով. մեծ նստվածք և հեղուկի ամբողջական մաքրում - 4 պլյուս; մեծ նստվածք և հեղուկի թերի մաքրում - 3 պլյուս; նկատելի նստվածքը և հեղուկի նկատելի մաքրումը 2 պլյուս են: Դրանից հետո որոշվում է տիտրը. ամենաբարձր նոսրացումը առնվազն 2 պլյուս ագլյուտինացիայի ինտենսիվությամբ: Տիտրային հետազոտություն s-ki-ն համեմատվում է այս հիվանդության ախտորոշիչ տիտրի հետ: Եթե ​​տիտրը հետազոտվի. s-ki-ն ախտորոշիչ արժեքից 2 անգամ ցածր է, ռեակցիան գնահատվում է որպես կասկածելի. եթե տիտրը հավասար է ախտորոշիչ - ինչպեսթույլ դրական; եթե 2-4 անգամ ավելի է, ապա համարվում է դրական, եթե 8 կամ ավելի անգամ՝ կտրուկ դրական։ Աբի լայն տարածումով առողջ մարդիկՌԱ-ն գնահատելու համար օգտագործվում է Աբ տիտրի բարձրացում։ Սերիական ՀՀ-ում Ar-ի տեսակը որոշելու համար տողերի թիվը պետք է համապատասխանի նույնականացման համար վերցված թվին. ախտորոշիչ թեստեր. Ախտորոշիչ թեստի հիմնական նոսրացումից Աբ տիտրը որոշելու համար պատրաստվում են մի շարք հաջորդական երկակի նոսրացումներ, ինչպես ՀՀ-ում: Նոսրացման գործակիցները կախված են ագլյուտինացման թեստի տիտրից: Փորձի ժամանակ անհրաժեշտ է թեստի տիտրին հավասար նոսրացման առկայությունը, ինչպես նաև դրանից 2, 4, 6, 8 անգամ ցածր: Օրինակ, եթե Ախտորոշիչ թեստի տիտրը 1 3200 է, այնուհետև պետք է օգտագործել նոսրացումներ 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Փորձարկված Ag-ի նույն ծավալը ավելացվում է թեստի նոսրացումներին, արդյունքում՝ նոսրացում: թեստն ավելանում է 2 անգամ։ Փորձին ավելացվում են թեստի 2 հսկիչ և Ag։ Եթե փորձին մի քանի s-k ներգրավված է, ապա դրանցից յուրաքանչյուրը իր վերահսկողության կարիքն ունի։ Ռեակցիայի ավարտից հետո ստենդը ուժեղ թափահարում և տեղադրում են։ 37 ° C ջերմաստիճանում թերմոստատում: Արդյունքները հաշվի են առնվում ինչպես նկարագրված է վերևում: Ռեակցիայի գնահատումն ունի առանձնահատկություններ: Հետազոտության համապատասխանության վերաբերյալ եզրակացություն անելու համար: Փորձի մեջ ընդունված Ag, ռեակցիայի տիտրը պետք է համապատասխանի ստանդարտ ախտորոշիչ թեստի տիտրի առնվազն կեսին: 1 4 և ցածր տիտրերը համարվում են խմբային ռեակցիա: Կաթել մդՀՀ-ի փուլավորումը տարբերվում է ծավալայինից նրանով, որ s-ku-ն նոսրացվում է 1 մլ ծավալով, Ag օգտագործվում է ավելի բարձր կոնցենտրացիայով (10 մլրդ/մլ) և ավելացվում է 1. - 2 կաթիլներ փորձանոթի մեջ Ag ավելացնելուց հետո դեղամիջոցի նոսրացումը համարվում է անփոփոխ, հակառակ դեպքում սահմանման, գրանցման և գնահատման եղանակը նման է ծավալային մեթոդին:

(Աղբյուր՝ Dictionary of Microbiology Terms)

իմունոմիկրոբիոլոգիական հետազոտություններ

Իմունոլոգիական մեթոդները օգտագործվում են բազմաթիվ խնդիրների լուծման համար.

1. Վիճակի գնահատում իմմունային համակարգմարդ ( իմունային կարգավիճակը) ըստ քանակական և ֆունկցիոնալ բնութագրերըիմունային համակարգի բջիջները և դրանց արտադրանքները.

2. Մարդու հյուսվածքների բաղադրության և բնութագրերի որոշումը՝ արյան խմբեր, Rh գործոն, փոխպատվաստման անտիգեններ:

3. Վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշում և դրանց նկատմամբ դիմադրողականություն՝ հայտնաբերելով և հաստատելով հակամարմինների տիտրերը (սերոախտորոշում), բացահայտելով պաթոգեն անտիգենները մարմնում և որոշելով բջջային ռեակցիաները այդ անտիգեններին:

4. Մարդու և կենդանիների մարմնից մեկուսացված բակտերիաների և վիրուսների մշակույթների սերոիդ նույնականացում:

5. Հայտնաբերում մարդու մարմնում և ներս արտաքին միջավայրհակագենային կամ հապտենային հատկություններ ունեցող ցանկացած նյութ (հորմոններ, ֆերմենտներ, թույներ, դեղամիջոցներ, դեղեր և այլն):

6. Իմունոպաթոլոգիական վիճակների, ալերգիայի, փոխպատվաստման և հակաուռուցքային ռեակցիաների հայտնաբերում:

Անտիգենի և հակամարմինների փոխազդեցության գործընթացը սերոլոգիական ռեակցիաներտեղի է ունենում երկու փուլով.

1) կոնկրետ- փոխազդեցության փուլ, որում տեղի է ունենում հակամարմինների (պարատոպների) և հակագենի էպիտոպների ակտիվ կենտրոնների կոմպլեմենտար համակցություն: Այս փուլը սովորաբար տևում է մի քանի վայրկյան կամ րոպե;

2) ոչ հատուկ- դրսևորման փուլ, բնութագրվում է արտաքին նշաններիմունային համալիրների ձևավորում. Այս փուլը կարող է զարգանալ մի քանի րոպեից մինչև մի քանի ժամ:

Հակամարմինների օպտիմալ սպեցիֆիկ փոխազդեցությունը հակագենի հետ տեղի է ունենում իզոտոնիկ լուծույթում, որի pH-ը մոտ է չեզոքին: Անտիգեն-հակամարմին ռեակցիան in vitro համակարգում կարող է ուղեկցվել մի քանի երևույթների առաջացմամբ.

· ագլյուտինացիա,

· տեղումներ,

· լիզիս.

Արտաքին դրսևորումներռեակցիաները կախված են անտիգենի ֆիզիկաքիմիական հատկություններից (մասնիկների չափը, ֆիզիկական վիճակ), հակամարմինների դասը և տեսակը (ամբողջական և թերի), ինչպես նաև փորձարարական պայմանները (միջին հետևողականություն, աղի կոնցենտրացիան, pH, ջերմաստիճան):

Հակագենների և հակամարմինների բազմավալենտությունը ապահովում է անզեն աչքով տեսանելի ագրեգատների ձևավորում։ Դա տեղի է ունենում ցանցի ձևավորման տեսության համաձայն, որի համաձայն այլ հակամարմիններ և հակագենային մոլեկուլներ հաջորդաբար կցվում են ստացված հակագեն-հակամարմին համալիրին: Արդյունքում ձևավորվում են ցանցային կառուցվածքներ, որոնք վերածվում են նստվածքի ագրեգատների։ Ռեակցիայի բնույթն ու սրությունը կախված են անտիգենների և հակամարմինների քանակական հարաբերակցությունից։ Առավել ինտենսիվ ռեակցիաները տեղի են ունենում, երբ ռեակտիվները համարժեք համամասնություններ ունեն:

Նախադրյալվանդակաճաղերի ձևավորում (ցանցեր) - յուրաքանչյուր անտիգենի մոլեկուլի համար ավելի քան երեք հակագենային որոշիչների և հակամարմինների յուրաքանչյուր մոլեկուլի համար երկու ակտիվ կենտրոնների առկայություն: Հակագենի մոլեկուլները ցանցային հանգույցներ են, իսկ հակամարմինների մոլեկուլները միացնող օղակներ են: Հակագենի և հակամարմինների կոնցենտրացիաների օպտիմալ հարաբերակցությունների (համարժեքության գոտի) շրջանը, երբ նստվածքի ձևավորումից հետո վերին նյութում չեն հայտնաբերվում ոչ ազատ անտիգեններ, ոչ էլ ազատ հակամարմիններ:

Ագրեգատներ, որոնք կարող են նստվածք առաջանալ, ձևավորվում են, երբ անտիգենները միանում են ամբողջական հակամարմիններին: Անավարտ հակամարմիններ(միավալենտ) չեն առաջացնում ցանցային կառուցվածքների և խոշոր ագրեգատների ձևավորում: Նման հակամարմինները հայտնաբերելու համար օգտագործեք հատուկ մեթոդներհիմնված հակագլոբուլինների օգտագործման վրա (Coombs ռեակցիա):

Շճաբանական ռեակցիաները, իրենց բարձր սպեցիֆիկության և զգայունության պատճառով, օգտագործվում են անտիգենների և հակամարմինների հայտնաբերման և քանակականացման համար: Ռեակցիաներում իմունոռեակտիվների քանակը արտահայտվում է տիտրով` շիճուկի կամ հակագենի առավելագույն նոսրացում, որի դեպքում դեռևս նկատվում է ռեակցիա:

Շճաբանական ռեակցիաները մանրէաբանական և իմունոլոգիական լաբորատորիաներում օգտագործվում են երկու նպատակով.

1) միկրոօրգանիզմների, տոքսինների, ընդհանրապես անտիգենների սերոիդենտիֆիկացման համար՝ օգտագործելով հայտնի հակամարմին (իմունային ախտորոշիչ շիճուկ),

2) սերոախտորոշման համար՝ հիվանդի արյան շիճուկում հակամարմինների բնույթի որոշում բակտերիալ, վիրուսային և ավելի քիչ հաճախ այլ վարակիչ հիվանդությունների համար՝ օգտագործելով հայտնի հակագեն (diagnosticum):

Հակագենի ընդհանուր, տեսակը և տեսակը որոշելու համար պահանջվում են իմունային իմունային անալիզներ: ախտորոշիչ շիճուկներ. Դրանք ձեռք են բերվում կենդանիների (սովորաբար նապաստակների) կրկնակի ընդունմամբ՝ սպանված կամ կենդանի միկրոօրգանիզմների, դրանց քայքայման արտադրանքի, չեզոքացված կամ բնիկ տոքսինների աճող չափաբաժիններով: Կենդանիների իմունիզացիայի որոշակի ցիկլից հետո կատարվում է կենդանու զանգվածային արյունահոսություն կամ ընդհանուր արյունահոսություն։ Ստերիլ տարայի մեջ հավաքված արյունը սկզբում տեղադրվում է 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ 4-6 ժամ՝ մակարդումը արագացնելու համար, այնուհետև մեկ օր սառցե տուփի մեջ: Ստացված թափանցիկ շիճուկը ներծծվում է ստերիլ տարայի մեջ, ավելացվում են կոնսերվանտներ, որոշվում է հակամարմինների տիտրը, ստուգվում է անպտղության համար և լցնում ամպուլների մեջ։

Օգտագործվում են ոչ կլանվածԵվ կլանվածախտորոշիչ շիճուկներ. Unadsorbed շիճուկներ ունեն բարձր տիտրերհակամարմիններ, սակայն ընդունակ են խմբային (խաչ) ռեակցիաներ տալ։

Adsorbed շիճուկները բնութագրվում են գործողության խիստ սպեցիֆիկությամբ (նրանք արձագանքում են միայն հոմոլոգ անտիգենի հետ): Միայն մեկ կոնկրետ անտիգենի նկատմամբ հակամարմիններ պարունակող շիճուկները կոչվում են monoreceptor.

Նրանք նաև արտադրում են ֆտորոքրոմներով, ֆերմենտներով և ռադիոիզոտոպներով պիտակավորված շիճուկներ, որոնք հնարավորություն են տալիս բարձր ճշգրտությամբ հայտնաբերել հակագենի նույնիսկ հետքերը։

Կենդանի կամ սպանված բակտերիաների կասեցումները, դրանց քայքայման արտադրանքները, տոքսինները և վիրուսները օգտագործվում են որպես անտիգեններ (ախտորոշիչներ) շճաբանական ռեակցիաներում: Որոշ դեպքերում օգտագործվում են միկրոօրգանիզմների և կենդանիների հյուսվածքների քաղվածքներ կամ քիմիապես մեկուսացված անտիգեններ:

Բոլոր իմունային մանրէաբանական մեթոդները կարելի է բաժանել 3 խմբի:

1) հիման վրա անտիգենի անմիջական փոխազդեցությունը հակամարմինների հետ(ագլյուտինացիայի, տեղումների, հեմագլյուտինացիայի, անշարժացման և այլնի երևույթներ);

2) հիման վրա անտիգենի միջնորդավորված փոխազդեցությունը հակամարմինների հետ(արձագանքները անուղղակի հեմագլյուտինացիա, կոագլյուտինացիա, լատեքսային ագլյուտինացիա, ածխածնի ագլոմերացիա, բենտոնիտային ագլյուտինացիա, կոմպլեմենտի ֆիքսացիա և այլն);

3) օգտագործելով պիտակավորված հակամարմիններ կամ անտիգեններ(ֆլյուորեսցենտային հակամարմինների մեթոդ, ֆերմենտային կապակցված իմունոսորբենտ և ռադիոիմունային անալիզներ և այլ մեթոդներ):

ԱԳԼՈՒՏԻՆԱՑՄԱՆ ՌԵԱԿՑԻԱՆԵՐ

Այս ռեակցիաները ներառում են անտիգեններ մասնիկների տեսքով (մանրէաբանական բջիջներ, կարմիր արյան բջիջներ և այլ կորպուսկուլյար անտիգեններ), որոնք սոսնձվում են միմյանց հակամարմիններով և նստվածք են ստանում:

Ագլուտինացման ռեակցիա իրականացնելու համար(ՀՀ) անհրաժեշտ է երեք բաղադրիչ՝ 1) հակագեն (ագլյուտինոգեն);

2) հակամարմին (ագլյուտինին)

3) էլեկտրոլիտ (իզոտոնիկ նատրիումի քլորիդի լուծույթ).

Մոտավոր ագլյուտինացիոն ռեակցիա (ՀՀ)

Սենյակային ջերմաստիճանում ապակե սլայդի վրա տեղադրվում է ցուցիչ կամ ափսե ՌԱ: Դա անելու համար օգտագործեք Pasteur pipette-ը, ապակու վրա առանձին կաթիլ շիճուկ քսեք 1:10-ից 1:20 հարաբերակցությամբ նոսրացումով և հսկիչ կաթիլ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթ: Գաղութները կամ բակտերիաների ամենօրյա կուլտուրան (մի կաթիլ դիագնոստիկ) ներմուծվում են և՛ մանրէաբանական օղակների մեջ, և՛ մանրակրկիտ խառնվում: Ռեակցիաները տեսողականորեն հաշվի են առնվում մի քանի րոպե անց՝ երբեմն օգտագործելով խոշորացույց (x5): Դրական RA-ի դեպքում նշվում է մեծ և փոքր փաթիլների առաջացումը շիճուկի կաթիլներում, բացասական RA-ի դեպքում շիճուկը մնում է միատեսակ պղտոր:

Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիահիվանդի մոտ հատուկ հակամարմինների տիտրը որոշելու համար:

Հիվանդների շիճուկում կատարվում է լիարժեք ՌԱ սերոախտորոշման համար: Այն նաև նոսրացվում է նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթում 1:50 - 1:100 մինչև 1:800 կամ 1:1600: Քանի որ շիճուկի ցածր տիտրերը կարող են պարունակել նորմալ ագլյուտինիններ, որոնք հայտնաբերվել են առողջ մարդկանց կամ այլ ախտորոշմամբ հիվանդների մոտ (ախտորոշիչ տիտր): Որպես հակագեն այս ռեակցիայի մեջ, օգտագործվում են ախտորոշիչներ՝ հայտնի կասեցումներ, սովորաբար սպանված բակտերիաների:

1 մլ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթը նախ լցնում են ագլյուտինացիոն խողովակների մեջ։ Առաջինին ավելացնում են 1 մլ 1:100 նոսրացված շիճուկ, իսկ խառնելուց հետո 1 մլ տեղափոխում են երկրորդին, երկրորդից երրորդին և այլն։ Ստացված շիճուկների կրկնակի նոսրացումներին (1:100-ից 1:1600 կամ ավելի) ավելացվում է բակտերիալ կախույթի 1-2 կաթիլ, որը պարունակում է 3 միլիարդ մանրէաբանական մարմին 1 մլ-ում: Խողովակները թափահարում են և 2 ժամով տեղադրում 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ, ապա 24 ժամ պահում սենյակային ջերմաստիճանում։

Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիան հաշվի է առնվում յուրաքանչյուր փորձանոթի հաջորդական գնահատմամբ՝ սկսած հսկիչներից, մեղմ թափահարումով։ Հսկիչ խողովակներում ագլյուտինացիա չպետք է լինի: Ագլյուտինացման ռեակցիայի ինտենսիվությունը նշվում է հետևյալ նշաններով. +++ - թերի ագլյուտինացիա (փաթիլներ մի փոքր օպալեսցենտ հեղուկի մեջ); ++ - մասնակի ագլյուտինացիա (փաթիլները հստակ տեսանելի են, հեղուկը մի փոքր պղտոր է); + - թույլ, կասկածելի ագլյուտինացիա - հեղուկը շատ պղտոր է, դրա մեջ փաթիլները դժվար է տարբերել; - - ագլյուտինացիայի բացակայություն (հեղուկը միատեսակ պղտոր է):

Շիճուկի տիտրը ընդունվում է որպես նրա վերջին նոսրացում, որում ագլյուտինացիայի ինտենսիվությունը գնահատվում է ոչ պակաս, քան երկու պլյուս (++)

Դասախոսություն թիվ 16

Բառարան

ՈՒՂԻՂ –ուղիղ հաջորդ՝ առանց որևէ բանի, առանց հետագա հղումների։

ԱՆՈՒՂԻՂ- այլ բջիջների միջոցով, ոչ ուղղակիորեն:

ՆՎԱԶԵԼ ≠ ԱՎԵԼԱՑՈՒՄ (բջջային ակտիվություն):

ՄԵՐԺԵԼ –չընդունել, մերժել. Մարմինը մերժում է փոխպատվաստված օրգանը։

Իմունային ռեակցիաներ.

Իմունային ռեակցիաները հակագենի և հակամարմինի կամ հակագենի և զգայուն T-լիմֆոցիտների հատուկ փոխազդեցության (կապման) ռեակցիաներ են:

Այս ռեակցիաները տեղի են ունենում in vitro (փորձանոթում) և in vivo (կենդանի օրգանիզմում):

Այս ռեակցիաները ներառում են շիճուկ (շիճուկ), որի պատճառով նրանք կոչվում են սերոլոգիական.

Իմունային պատասխանները օգտագործվում են վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշում.Այս դեպքում անհայտ բաղադրիչը որոշվում է հայտնի բաղադրիչով, որը հիմնված է հակագենի հակամարմինների հետ փոխազդեցության առանձնահատկությունների վրա: Եթե հայտնի հակամարմին, ապա կարող ես բացահայտել (հայտնաբերել) անհայտ անտիգեն. Եթե հայտնի հակագեն, ապա դուք կարող եք օգտագործել այն հայտնաբերել անհայտ հակամարմիններ.

Այսպիսով, իմունային ռեակցիաները օգտագործվում են.

1) համար սերոլոգիական ախտորոշումհիվանդությունների (սերոախտորոշում) -հիվանդ մարդկանց արյան շիճուկում վարակիչ հիվանդության հատուկ հարուցիչի (հայտնի անտիգեն) հակամարմինների հայտնաբերում. եթե հիվանդ մարդու արյան շիճուկում առկա են որևէ պաթոգենի հակամարմիններ, ապա հենց այս պաթոգենն է առաջացրել դա. վարակ;

2) համար մանրէների սերոլոգիական նույնականացում (սերոլոգիական նույնականացում).իմունային ախտորոշիչ շիճուկների միջոցով (հայտնի հակամարմիններ) որոշելու պաթոգենների տեսակը. եթե հակամարմինները կապում են հիվանդ մարդուց մեկուսացված պաթոգենին, ապա այս միկրոբը նույնական է այն միկրոբին, որով պատվաստվել է կենդանին։ ստացողիմունային ախտորոշիչ շիճուկ .

Իմունային ռեակցիաները տեղի են ունենում 2 փուլով.

1) կոնկրետ փուլ– հակամարմինների ակտիվ կենտրոնի միացում անտիգենի որոշիչ խմբի հետ՝ հակագեն-հակամարմին համալիրների ձևավորմամբ. այս փուլը արագ է ընթանում, բայց տեսանելի ազդեցություն չկա.

2) ոչ հատուկ փուլ- արտաքին տեսքը տեսանելի ազդեցությունհակագենի և հակամարմինների փոխազդեցություն - կորուստ նախագիծը(ագլյուտինացիա) կամ ամպամածություն(տեղումներ), որը թույլ է տալիս տեսնելկրթություն հակագեն-հակամարմինների համալիրներև եզրակացություն արեք դրա մասին համապատասխանությունըհակագեն և հակամարմիններ միմյանց նկատմամբ:

Իմունային ռեակցիաները ներառում են ագլյուտինացման ռեակցիա (RA), տեղումների ռեակցիա (RP), կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա (CFR):

Ագլյուտինացման ռեակցիա- սա մանրէների կամ այլ բջիջների (էրիթրոցիտների) սոսնձումն ու նստեցումն է հակամարմինների ազդեցության տակ էլեկտրոլիտի առկայության դեպքում: Ռեակցիայի տեսանելի ազդեցությունը (ագլյուտինացիայի երեւույթը) նստվածքի առաջացումն է, որը կոչվում է ագլյուտինացնել.

Այս ռեակցիան օգտագործվում է սերոախտորոշումԵվ seroidentification. ՌԱ-ն օգտագործվում է սերոախտորոշման համար (հիվանդների արյան շիճուկում հակամարմինների հայտնաբերում) որովայնային տիֆև պարատիֆ(Վիդալ ռեակցիա), բրուցելոզ(Ռայթի արձագանքը) տուլարեմիա և լեպտոսպիրոզ. ՌԱ-ն օգտագործվում է սերոիդենտիֆիկացիայի համար (հիվանդից մեկուսացված հարուցչի տեսակը որոշելիս), երբ աղիքային վարակներ, կապույտ հազ, խոլերաև այլն։

Բաղադրիչներռեակցիաներ:

1. Ա ntigen (agglutinogen) –դրանք ամբողջական (ոչ ոչնչացված) մանրէաբանական կամ այլ բջիջներ են ( կորպուսուլյար, չլուծվող հակագեն). Ագլյուտինոգեններ- սա կասեցում է կենդանիկամ սպանվածմանրէաբանական բջիջներ կամ ցանկացած այլ բջիջ: Հակագենները կարող են լինել կամ անհայտ կամ հայտնի: Անհայտ ագլյուտինոգենը հիվանդի մարմնից մեկուսացված մանրէաբանական կուլտուրա է, որը պետք է որոշվի: Հայտնի հակագեն - ախտորոշում- ախտորոշիչ դեղամիջոց. մահացածների կասեցումմանրէներ հայտնի տեսակներաղի լուծույթում: Այս կասեցումը ամպամած (անթափանց), որովհետեւ մանրէաբանական բջիջները չեն լուծվում, բայց մնում են անձեռնմխելի: Հայտնի ագլյուտինոգենը կօգտագործվի հիվանդների արյան շիճուկում անհայտ հակամարմիններ հայտնաբերելու համար:

2. Հակամարմիններ (ագլյուտինին)- հայտնաբերվել է արյան շիճուկում: Հակամարմինները կարող են լինել նաև անհայտ կամ հայտնի: Անհայտ հակամարմիններ, որոնք պետք է որոշվեն, գտնվում են արյան շիճուկում հիվանդ մարդ. Հայտնի հակամարմիններ են հայտնաբերվել իմունային ախտորոշիչ շիճուկներորոնք կոչվում են ագլյուտինացնող շիճուկներ. Դրանք օգտագործվում են սերո-նույնականացման համար, այսինքն. որոշելու անհայտ անտիգեն - մանրէաբանական մշակույթի տեսակ:

3. Էլեկտրոլիտ- 0,9% նատրիումի քլորիդի լուծույթ:

Ախտորոշիչ թեստի ստացում.

Թեք ագարի վրա աճեցված հայտնի տեսակի հարուցչի մաքուր կուլտուրան (օրինակ՝ որովայնային տիֆի հարուցիչը) լվանում են 3-4 մլ իզոտոնիկ լուծույթով, տեղադրվում ստերիլ խողովակի մեջ, որոշ մանրէները սպանվում են։ ճանապարհով (օրինակ, եռացնելով և որոշվում է խտությունը (1 մլ-ում պետք է լինի 3 միլիարդ մանրէաբանական բջիջ): Եթե մանրէաբանական բջիջները սպանվեն. բարձր ջերմաստիճանի, ապա ստանում են O-diagnosticum (O-antigen), բայց եթե այն բուժվում է ֆորմալդեհիդով, ապա ստանում են H-diagnosticum (H-անտիգեն)։

Ախտորոշման օրինակներ: salmonella diagnosticum, brucellosis diagnosticum, tularemia diagnosticum:

Ագլյուտինացնող շիճուկների պատրաստում.

Կենդանիներին (սովորաբար նապաստակներին) պարենտերալ կերպով ներարկում են մանրէաբանական ախտորոշիչներ՝ ընդմիջումներով 5-7 անգամ ավելացող չափաբաժիններով ( իրականացնել հիպերիմունիզացիա), իսկ հետո վերցվում է նրանց արյան շիճուկը, որը պարունակում է հակամարմիններ այն մանրէների դեմ, որոնցից պատրաստվում է դիագնոստիկումը։ Եթե ​​իմունիզացիան իրականացվում է O-diagnosticum-ով, ապա ստացվում են O-ագլյուտինացնող շիճուկներ (պարունակում են O-հակամարմիններ), եթե H-diagnosticum-ով` H-ագլյուտինացնող շիճուկներ։

Ագլյուտինացնող շիճուկները կարող են լինել unadsorbedկամ հայրենի ու կլանված.

Չներծծվող շիճուկներպարունակում են խմբային հակամարմիններ մի քանի սերտորեն կապված մանրէների տեսակների նկատմամբ:

Adsorbed շիճուկներպարունակում են հակամարմիններ մեկ կամ մի քանի տեսակի մանրէների անտիգենների նկատմամբ: Եթե ​​շիճուկները պարունակում են հակամարմիններ միայն մեկ անտիգենի նկատմամբ, դրանք կոչվում են monoreceptorկամ միավալենտ,եթե մի քանի անտիգենների, խումբկլանված շիճուկներ .

Ագլյուտինացնող շիճուկների օրինակներ.Salmonella monoreceptor H-agglutinating շիճուկ, Salmonella խմբի adsorbed O-agglutinating շիճուկ, anticholera O-agglutinating շիճուկ և այլն:.

Տիտրագլյուտինացնող շիճուկ - շիճուկի ամենաբարձր նոսրացումը, որի ժամանակ դեռ հայտնաբերվում է հակագենով ագլյուտինացիոն ռեակցիա (տիտրը կախված է արյան մեջ հակամարմինների քանակից. որքան շատ հակամարմիններ, այնքան բարձր է շիճուկի տիտրը):

ՌՀ բեմադրության մեթոդներ.

1. Մոտավոր (շերտավոր) ՀՀ- իրականացվում է ապակու վրա: Ապակե սլայդի վրա քսեք 2 կաթիլ շիճուկ և 1 կաթիլ իզոտոնիկ լուծույթ: Մանրէաբանական մշակույթը ներմուծվում է շիճուկի կաթիլներից մեկի մեջ և օղակաձև իզոտոնիկ լուծույթի մեջ և խառնվում: Իզոտոնիկ լուծույթի մի կաթիլ մանրէներով – հակագենի հսկողություն, մի կաթիլ մանրէազերծ շիճուկներ – հակամարմինների վերահսկում, մի կաթիլ մանրէներով շիճուկներ – փորձը։Եթե ​​շիճուկը պարունակում է մանրէային անտիգեններին համապատասխան հակամարմիններ, որոնք խառնվում են դրա հետ, ապա հակամարմինները և անտիգենները հատուկ կկապվեն միմյանց հետ և 1-3 րոպե հետո փորձարկման կաթիլում կհայտնվեն ագլյուտինատային փաթիլներ: Հակագենի հսկողությունը պետք է լինի պղտոր, իսկ հակամարմինների հսկողությունը՝ պարզ: Ռեակցիայի արդյունքները գրանցվում են ագլյուտինատային փաթիլների տեսքի հիման վրա . Եթե ​​փաթիլները թափվում են, արձագանքը դրական է, այսինքն. Հակագենը համապատասխանում է հակամարմինին, և հակագենը կարող է օգտագործվել հակամարմինը որոշելու համար կամ հակառակը: Եթե ​​ամպամածությունը մնում է, արձագանքը բացասական է։

2. Մանրամասն ագլյուտինացիոն ռեակցիա -իրականացվում է փորձանոթներում: Նախ պատրաստեք հիվանդ մարդու արյան շիճուկի 2 անգամ նոսրացումներ 1:50-ից մինչև 1:1600: 1 մլ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթը լցնում են 6 փորձանոթների մեջ։ Առաջին փորձանոթին ավելացնում են հիվանդի արյան շիճուկ 1 մլ 1:50 հարաբերակցությամբ, խառնում և ստացվում է 1:100 նոսրացում, ապա 1 մլ 1:100 նոսրացումից տեղափոխվում է երկրորդ փորձանոթ: եւ ստացվում է 1։200 նոսրացում եւ այլն։ Անտիգենի և շիճուկի հսկողության համար պահվում են երկու խողովակ: Շիճուկի կոնտրոլին ավելացրեք միայն շիճուկ 1:50 նոսրացման դեպքում, հակագենի կոնտրոլին` միայն հակագենը: Մնացած բոլոր փորձանոթներին ավելացրեք 0,1 մլ հակագեն - ախտորոշիչ (O- կամ H-) և բոլոր փորձանոթները տեղադրեք 37°C ջերմաստիճանի թերմոստատի մեջ 18-20 ժամ: Ռեակցիայի արդյունքները գրանցվում են ըստ բնույթի, առաջացած նստվածքի (ագլյուտինատի) քանակի և պղտորության աստիճանի։ Վերահսկիչում հաշվառումն իրականացվում է միայն հետևյալ արդյունքներով՝ շիճուկի հսկողություն՝ թափանցիկ, անտիգենի հսկողություն՝ ամպամած։ O-հակամարմինները տալիս են մանրահատիկ նստվածք։ H-հակամարմիններ – կոպիտ հատիկավոր: Վերջին փորձանոթի հիման վրա, որում ագլյուտինացիոն ռեակցիան դեռ տեսանելի է, այն հաստատվում է ախտորոշիչ տիտր.

Սերոախտորոշման ժամանակհիվանդություններ, կարևոր է ոչ միայն հայտնաբերել որոշակի պաթոգենին ուղղված հատուկ հակամարմիններ, այլև բացահայտել դրանց քանակը, այսինքն. սահմանել այդպիսի հակամարմինների տիտրԵ՞րբ կարելի է խոսել այս հարուցիչով առաջացած հիվանդության առկայության մասին։ . Այս տիտրը կոչվում է ախտորոշիչ տիտր:Օրինակ, որովայնային տիֆը ախտորոշելու համար անհրաժեշտ է բացահայտել հակամարմինների տիտրը 1:400, բայց ոչ պակաս: Տալիս է նույնիսկ ավելի ճշգրիտ արդյունքներ զուգակցված շիճուկներում հակամարմինների ավելացման հայտնաբերում:Հիվանդի շիճուկը հավաքվում է հիվանդության սկզբում և 3-ից 5 կամ ավելի օր հետո: Եթե ​​հակամարմինների տիտրը ավելանում է առնվազն 4 անգամ, հետևաբար, կարելի է խոսել ընթացիկ հիվանդություն.

Եթե ​​սերոիդենտիֆիկացիայի համար կատարվում է մանրակրկիտ ագլյուտինացիոն ռեակցիա, ապա օգտագործվում են ագլյուտինացիոն ախտորոշիչ շիճուկներ՝ նոսրացված մինչև տիտրը կամ դրանց տիտրի կեսը: RA-ն համարվում է դրական, եթե ագլյուտինացիան հայտնաբերվում է ախտորոշիչ շիճուկի տիտրին մոտ նոսրացումով: