Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան (CFR) հիմնված է այն փաստի վրա, որ կոնկրետ հակագեն-հակամարմին համալիրը միշտ կլանում է (կապում) լրացնում է իրեն:
Այս ռեակցիան լայնորեն օգտագործվում է անտիգենների նույնականացման և վարակների, հատկապես սպիրոխետների (Վասերմանի ռեակցիա), ռիկետսիայի և վիրուսների հետևանքով առաջացած հիվանդությունների սերոդախտորոշման ժամանակ։
RSC-ը բարդ սերոլոգիական ռեակցիա է: Այն ներառում է կոմպլեմենտ և երկու հակագեն-հակամարմին համակարգեր: Ըստ էության, դրանք երկու սերոլոգիական ռեակցիաներ են։
Առաջին համակարգը՝ հիմնականը բաղկացած է անտիգենից և հակամարմինից (մեկը հայտնի է, մյուսը՝ ոչ): Դրան ավելացվում է որոշակի քանակությամբ լրացում։ Եթե այս համակարգի անտիգենն ու հակամարմինը համընկնեն, դրանք կմիանան և կկապեն կոմպլեմենտը: Ստացված բարդույթը մանր ցրված է և տեսանելի չէ։
Այս համալիրի ձևավորումը հայտնաբերվում է երկրորդ հեմոլիտիկ կամ ցուցիչ համակարգի միջոցով: Այն ներառում է ոչխարի արյան կարմիր բջիջներ (հակագին) և համապատասխան հեմոլիտիկ շիճուկ (հակամարմին), այսինքն՝ պատրաստի իմունային համալիր։ Այս համակարգում կարմիր արյան բջիջների լիզը կարող է տեղի ունենալ միայն կոմպլեմենտի առկայության դեպքում: Եթե կոմպլեմենտը կապված է առաջին համակարգով (եթե հակագենը և հակամարմինը համապատասխանում են դրան), ապա երկրորդ համակարգում հեմոլիզ չի լինի, քանի որ ազատ կոմպլեմենտ չկա: Հեմոլիզի բացակայությունը (խողովակի պարունակությունը պղտոր է կամ ներքևում առկա է էրիթրոցիտների նստվածք) գրանցվում է որպես դրական RSC արդյունք:
Եթե առաջին համակարգում անտիգենը չի համապատասխանում հակամարմինին, ապա իմունային համալիրը չի ձևավորվի և կոմպլեմենտը կմնա ազատ: Մնալով ազատ՝ կոմպլեմենտը մասնակցում է երկրորդ համակարգին՝ առաջացնելով հեմոլիզ, RSC արդյունքը բացասական է (խողովակների պարունակությունը թափանցիկ է՝ «լաք արյուն»)։
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիայի բաղադրիչները.
Հակագեն - սովորաբար լիզատ, քաղվածք, հապտեն; ավելի քիչ հաճախ կասեցում:
1.Պացիենտի համակարգի հակամարմին-շիճուկ
2. Կոմպլեմենտ - շիճուկ ծովախոզուկներ
3. Հակագեն - ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ
4. ՀԱԿԱԾԻՆ - հեմոլիզին ոչխարի կարմիր արյան բջիջներին
5.Իզոտոնիկ լուծույթ
Հաշվի առնելով այն հանգամանքը, որ RSC-ում ներգրավված են մեծ թվով բարդ բաղադրիչներ, դրանք նախ պետք է տիտրվեն և ընդունվեն ռեակցիայի մեջ ճշգրիտ քանակությամբ և հավասար ծավալներ 0,5 կամ 0,25, պակաս հաճախ 0,2 մլ: Համապատասխանաբար, ամբողջ փորձն իրականացվում է 2,5, 1,25 կամ 1,0 մլ ծավալներով (ավելի մեծ ծավալներն ավելի ճշգրիտ արդյունք են տալիս)։ Ռեակցիայի բաղադրիչների տիտրումը կատարվում է նույն ծավալով, ինչ փորձը՝ փոխարինելով բացակայող բաղադրիչները իզոտոնիկ լուծույթով։
Բաղադրիչների պատրաստում
Հեմոլիտիկ շիճուկ (հեմոլիզին): Շիճուկը նոսրացվում է 3 անգամ ավելի քիչ, քան իր տիտրը (տե՛ս էջ 211): Ամբողջ փորձի համար պատրաստեք շիճուկի ընդհանուր նոսրացում, որի ծավալը որոշվում է մեկ փորձանոթում (օրինակ՝ 0,5 մլ) շիճուկի ծավալը բազմապատկելով փորձանոթների քանակով, մի փոքր գերազանցելով փորձի քանակը:
2. Ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ. Պատրաստել լվացված ոչխարի էրիթրոցիտների 3% կախոց (տե՛ս էջ 211) փորձարկման ողջ քանակի փորձանոթների համար: Հեմոլիտիկ համակարգը պատրաստելու համար փորձին ավելացնելուց 30 րոպե առաջ խառնեք հավասար ծավալներով նոսրացված հեմոլիզին և կարմիր արյան բջիջների կախույթ, շիճուկը ավելացնելով արյան կարմիր բջիջներին, մանրակրկիտ խառնեք և 30 րոպե ինկուբացրեք 37˚C ջերմաստիճանում:
3. Կոմպլեմենտը սովորաբար նոսրացվում է 1:10: Այն պետք է տիտրվի յուրաքանչյուր փորձից առաջ: Կոմպլեմենտի տիտրը նրա ամենափոքր քանակությունն է, երբ հեմոլիտիկ համակարգին ավելացվում է, ամբողջական հեմոլիզը տեղի է ունենում 1 ժամվա ընթացքում 37˚C ջերմաստիճանում: Կոմպլեմենտի տիտրման սխեման ներկայացված է Աղյուսակ 21-ում:
Ուշադրություն. Տիտրեք հաճոյախոսությունը նույն ծավալով, ինչ հիմնական փորձը՝ փոխարինելով բացակայող բաղադրիչները իզոտոնիկ լուծույթով:
Արդյունքների հաշվառում: Հեմոլիզի հետքեր անգամ չպետք է լինեն կոնտրոլներում, քանի որ դրանցից մեկը չի պարունակում կոմպլեմենտ, իսկ մյուսը՝ հեմոլիզին։ Վերահսկիչները ցույց են տալիս, որ ռեակցիայի բաղադրիչները չունեն հեմոտոքսիկություն (արյան կարմիր բջիջների ինքնաբուխ լիզման ունակություն):
Տրված աղյուսակում 21 օրինակում կոմպլեմենտի տիտրը 1:10 նոսրացման դեպքում կազմում է 0,15 մլ: Փորձի ժամանակ կոմպլեմենտի ակտիվությունը կարող է նվազել՝ կապված ռեակցիայի այլ բաղադրիչների կողմից դրա ոչ սպեցիֆիկ կլանման հետ, հետևաբար, փորձի համար ավելանում է կոմպլեմենտի քանակը՝ վերցվում է տիտրին հաջորդող դոզան։ Սա աշխատանքային դոզան է: Բերված օրինակում այն հավասար է 0,2 կոմպլեմենտի՝ 1:10 նոսրացման դեպքում: Քանի որ RSC-ում ներգրավված բոլոր բաղադրիչները պետք է ընդունվեն հավասար ծավալներով (մեր օրինակում այն 0:5 մլ է), անհրաժեշտ է ավելացնել 0,3 մլ իզոտոնիկ լուծույթ կոմպլեմենտի աշխատանքային չափաբաժնի մեջ (0,2 մլ1:10): Ամբողջ փորձի համար դրանցից յուրաքանչյուրի ծավալը (կոմպլեմենտ և իզոտոնիկ լուծույթ.
Ամբողջ փորձի համար դրանցից յուրաքանչյուրի ծավալը (կոմպլեմենտ և իզոտոնիկ լուծույթ) բազմապատկվում է RSC-ին մասնակցող փորձանոթների քանակով։ Օրինակ, 50 փորձանոթով փորձ անցկացնելու համար անհրաժեշտ է վերցնել 10 մլ կոմպլեմենտ 1:10 (0,2 մլx50) և 15 մլ իզոտոնիկ լուծույթ (0,3 մլx50):
4. Հակագենը սովորաբար ստացվում է պատրաստի վիճակում, որի տիտրը նշված է, այսինքն. այն քանակությունը, որը հակագենը նոսրացնելուց հետո պետք է պարունակի 1 մլ. օրինակ՝ 0,4 տիտրով այն նոսրացնում են 0,96 մլ իզոտոնիկ լուծույթում։ Փորձի համար ես վերցնում եմ հակագենի քանակությունը, որը հավասար է տիտրի կեսին (0,5 մլ): Սա նրա աշխատանքային չափաբաժինն է։ Հաշվեք ամբողջ փորձի համար անտիգենի ընդհանուր նոսրացումը՝ 0,5 մլ-ը բազմապատկելով փորձարկման խողովակների քանակով:
5. Հակամարմին – հիվանդի շիճուկ: Թարմ շիճուկն ապաակտիվացվում է փորձից առաջ՝ դրանում առկա կոմպլեմենտը ոչնչացնելու համար: Դրա համար այն 30 րոպե տաքացնում են 56˚C ջերմաստիճանում ջրային բաղնիքում կամ թերմոստատով ինակտիվատորում։ Նախընտրելի է վերջին մեթոդը. այն վերացնում է շիճուկի գերտաքացման, այսինքն՝ դենատուրացիայի հնարավորությունը։ Դենատուրացված շիճուկները պիտանի չեն փորձարկման համար: Հիվանդի շիճուկը սովորաբար օգտագործվում է 1:10-ից 1:160 հարաբերակցությամբ նոսրացումով:
Աղյուսակ թիվ 14
| Բաղադրությունը, մլ | փորձարկման խողովակներ | |||||||||||
| փորձը | վերահսկողություն | |||||||||||
| Հեմոլիտիկ համակարգ | կարմիր արյան բջիջները | |||||||||||
| Իզոտոնիկ լուծույթ | 1,45 | 1,4 | 1,35 | 1,3 | 1,25 | 1,2 | 1,15 | 1,1 | 1,05 | 1,0 | 1,5 | 1,5 |
| Լրացում 1։10 | 0,05 | 0,1 | 0,15 | 0,2 | 0,25 | 0,3 | 0,35 | 0,4 | 0,45 | 0,5 | ― | 0,5 |
| Հեմոլիտիկ համակարգ | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | ― |
| Ոչխարի կարմիր արյան բջիջների 3% կասեցում | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | 0,5 |
| Խողովակները մանրակրկիտ թափահարում են և 1 ժամ ինկուբացնում 37˚C ջերմաստիճանում: | ||||||||||||
| արդյունք | Հեմոլիզ չկա | Հեմոլիզ | Հեմոլիզ չկա |
Իմունային շիճուկներն ամենից հաճախ պատրաստվում են արտադրական պայմաններում և թողարկվում անակտիվացված վիճակում: Դրանք նոսրացվում են 1:50 և ավելի բարձր:
Բոլոր բաղադրիչները պատրաստվում են մի փոքր ավելցուկով։
| Բաղադրությունը, մլ | Փորձարկման խողովակներ | |||||||
| Փորձի վերահսկում | ||||||||
| շիճուկ | հակագեն | Հեմոլիտիկ համակարգ | Լրացրեք աշխատանքային չափաբաժինով | |||||
| ½ | ||||||||
| Փուլ 1 Իզոտոնիկ լուծույթ | ― | 0,5 | 0,5 | 1,5 | 1,25 | 1,0 | 0,5 | |
| Փորձարկման շիճուկ նոսրացված 1:10 | 0,5 | 0,5 | ― | ― | ― | ― | ― | |
| Հակագենը աշխատանքային դոզանով | 0,5 | 0,5 | ― | ― | ― | ― | ||
| Լրացրեք 1:10 աշխատանքային չափաբաժինով | 0,5 | 0,5 | 0,5 | ― | 0,25 | 0,5 | 1,0 | |
| Խողովակները մանրակրկիտ թափահարվում են և ինկուբացվում են 37°C ջերմաստիճանում 45 րոպե 1 ժամ կամ 4°C 18 ժամ: | ||||||||
| 2-րդ փուլ հեմոլիտիկ համակարգ | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |
| Խողովակները մանրակրկիտ թափահարվում և ինկուբացվում են 37˚C ջերմաստիճանում մինչև ամբողջական հեմոլիզացումը 2, 3, 6 և 7 խողովակներում: | ||||||||
| Արդյունք | Դրական կամ բացասական | ― | ― | ++++ | (+) | ― | ― | |
Աղյուսակ թիվ 15
Հիմնական փորձի անցկացում
Փորձը կարգավորելիս դա չափազանց է. Կարևոր է բաղադրիչների ավելացման հերթականությունը: Փորձն իրականացվում է երկու փուլով.
Փուլ I. Նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթի պահանջվող քանակությունը լցվում է փորձանոթների մեջ, այնուհետև նոսրացված շիճուկի պահանջվող ծավալը և անտիգենի և կոմպլեմենտի աշխատանքային չափաբաժինները նույն ծավալով: Փորձը պետք է ուղեկցվի դրանում ներգրավված բոլոր բաղադրիչների վերահսկողությամբ՝ շիճուկ, հակագեն, հեմոլիտիկ համակարգ և կոմպլեմենտ:
Խողովակները մանրակրկիտ թափահարվում են և ինկուբացվում են 37°C ջերմաստիճանում 45 րոպե-1 ժամ կամ 4°C («Սառը սառը վիճակում») 18 ժամվա ընթացքում։ «Սառը ժամանակ» ռեակցիայի իրականացումը զգալիորեն մեծացնում է դրա զգայունությունն ու առանձնահատկությունը:
Փուլ II. Ինկուբացիայի ավարտին բոլոր փորձանոթներին ավելացվում է 1 մլ հեմոլիտիկ համակարգ, որը նախապես 30 րոպե պահվում է թերմոստատում (զգայունացված): Փորձարկման խողովակները թափահարվում են և նորից տեղադրվում թերմոստատի մեջ:
Հաշվապահական հաշվառման արդյունքը: Խողովակները թողնվում են թերմոստատում մինչև ամբողջական հեմոլիզ 2, 3, 6 և 7 խողովակներում (շիճուկի, անտիգենի և կոմպլեմենտի վերահսկում մեկ և երկու չափաբաժինների համար): Հեմոլիզը նախ տեղի կունենա 7-րդ փորձանոթում, որը պարունակում է կրկնակի քանակությամբ կոմպլեմենտ: Այն բանից հետո, երբ հեմոլիզը տեղի է ունենում այս խողովակում և դրա պարունակությունը դառնում է ամբողջովին թափանցիկ, դուք պետք է հատկապես ուշադիր հետևեք մնացած հսկիչ սարքերին: Հենց որ 2-րդ, 3-րդ և 6-րդ փորձանոթների հեղուկը դառնում է թափանցիկ, դուք պետք է անհապաղ թերմոստատից հանեք փորձանոթներով դարակը: Այն, որ փորձը թերմոստատում ավելի երկար չի պահվել, քան անհրաժեշտ է, վկայում է 5-րդ փորձանոթում թեթև պղտորության (անավարտ հեմոլիզ) առկայությամբ. այն պարունակում է կոմպլեմենտի աշխատանքային չափաբաժնի միայն կեսը, և ամբողջական հեմոլիզ չի կարող տեղի ունենալ, եթե փորձը ճիշտ կարգավորել:
Հեմոլիզը շիճուկում և հակագենի հսկողության մեջ (խողովակներ 2 և 3) ցույց է տալիս, որ դրանց չափաբաժինները ճիշտ են ընտրվել, և որ ոչ շիճուկը, ոչ էլ հակագենն իրենք չեն կապում լրացմանը:
Հեմոլիտիկ համակարգի հսկողության մեջ (փորձանոթ 4), եթե այն ճիշտ է աշխատում, ապա հեմոլիզի հետքեր անգամ չպետք է լինեն՝ դրանում լրացում չկա։
Երբ վստահ լինեք, որ վերահսկումները ճիշտ են կատարվել, կարող եք հաշվի առնել փորձը: Փորձանոթներում հեմոլիզի բացակայությունը դիտվում է որպես ռեակցիայի դրական արդյունք: Այն ցույց է տալիս, որ շիճուկը պարունակում է ընդունված հակագենին հատուկ հակամարմիններ: Համալիրը նրանք ձևավորեցին կապված լրացնում և կանխում նրա մասնակցությունը հեմոլիզի ռեակցիային: Եթե փորձանոթներում հեմոլիզ է առաջանում, ռեակցիայի արդյունքը գնահատվում է որպես բացասական։ IN այս դեպքումՀակագենի և հակամարմինների միջև համապատասխանություն չկա, կոմպլեմենտը կապված չէ և ներգրավված է հեմոլիզի ռեակցիայի մեջ:
Հիվանդի շիճուկին զուգահեռ նույն փորձը կատարվում է ակնհայտ դրական շիճուկով (այսինքն՝ շիճուկով, որը պարունակում է տվյալ անտիգենի հակամարմիններ) և ակնհայտ բացասական շիճուկով, որը չի պարունակում հատուկ հակամարմիններ։ Եթե փորձը ճիշտ կարգավորվի, ապա առաջին դեպքում հեմոլիզը պետք է ուշանա, իսկ երկրորդ դեպքում՝ հեմոլիզ։
Ռեակցիայի ինտենսիվությունը արտահայտվում է հետևյալ կերպ.
Հեմոլիզի ամբողջական ուշացում: Արյան կարմիր բջիջները ձևավորում են միատեսակ պղտորություն կամ նստում են հատակին: Այս դեպքում փորձանոթի հեղուկը դառնում է անգույն;
Մոտավորապես 25% կարմիր արյան բջիջների lysed. Ավելի քիչ նստվածք կա, դրա վերևում գտնվող հեղուկը մի փոքր վարդագույն է։ ՌՀԿ-ի արդյունքը նույնպես գնահատվում է խիստ դրական.
Մոտավորապես 50% կարմիր արյան բջիջների lysed. Նստվածքը փոքր է, հեղուկը՝ վարդագույն։ RSC-ի դրական արդյունք;
Մոտավորապես 75% կարմիր արյան բջիջների lysed. Թեթև նստվածք, որի վերևում ինտենսիվ գունավոր հեղուկ է։ Կասկածելի RSC արդյունք;
Արյան բոլոր կարմիր բջիջները լիզվել են: Հեղուկը ինտենսիվ գունավոր է և ամբողջովին թափանցիկ: RSK բացասական արդյունք:
Այս ռեակցիան օգտագործվում է բակտերիալ, վիրուսային, նախակենդանիների վարակներով հիվանդների արյան շիճուկում հակամարմիններ հայտնաբերելու, ինչպես նաև հիվանդներից մեկուսացված վիրուսները հայտնաբերելու և տեսակավորելու համար:
RSC-ն վերաբերում է բարդ շճաբանական ռեակցիաներին, որոնցում, բացի անտիգենից, հակամարմիններից և կոմպլեմենտից, մասնակցում է նաև հեմոլիտիկ համակարգը՝ բացահայտելով ռեակցիայի արդյունքները։ RSC-ն ընթանում է երկու փուլով. առաջինը հակագենի փոխազդեցությունն է հակամարմինների հետ կոմպլեմենտի մասնակցությամբ, իսկ երկրորդը՝ կոմպլեմենտի կապակցման աստիճանի հայտնաբերումը հեմոլիտիկ համակարգի միջոցով: Այս համակարգը բաղկացած է ոչխարի կարմիր արյան բջիջներից և հեմոլիտիկ շիճուկից, որը ստացվում է լաբորատոր կենդանիներին արյան կարմիր բջիջներով իմունիզացիայի արդյունքում: Էրիտրոցիտները մշակվում են - զգայունացվում են՝ 30 րոպե 37°C ջերմաստիճանում դրանց վրա շիճուկ ավելացնելով։ Ոչխարի զգայունացված էրիթրոցիտների լիզը տեղի է ունենում միայն այն դեպքում, եթե դրանք միանան հեմոլիտիկ կոմպլեմենտ համակարգին: Դրա բացակայության դեպքում արյան կարմիր բջիջները չեն փոխվում: RSC-ի արդյունքները կախված են թեստային շիճուկում հակամարմինների առկայությունից: Եթե շիճուկը պարունակում է ռեակցիայի մեջ օգտագործվող հակագենին հոմոլոգ հակամարմիններ, ապա ստացված հակագեն-հակամարմին համալիրը կապում և կապում է կոմպլեմենտը։ Հեմոլիտիկ համակարգ ավելացնելիս այս դեպքում հեմոլիզ չի առաջանա, քանի որ ամբողջ կոմպլեմենտը ծախսվում է հակագեն-հակամարմին համալիրի հատուկ կապի վրա։
Արյան կարմիր բջիջները մնում են անփոփոխ, ուստի փորձանոթում հեմոլիզի բացակայությունը գրանցվում է որպես դրական RBC: Շիճուկում անտիգենին համապատասխան հակամարմինների բացակայության դեպքում հակագեն-հակամարմին սպեցիֆիկ համալիր չի ձևավորվում, և կոմպլեմենտը մնում է ազատ։ Երբ հեմոլիտիկ համակարգ է ավելացվում, կոմպլեմենտը կցվում է դրան և առաջացնում է կարմիր արյան բջիջների հեմոլիզ: Կարմիր արյան բջիջների ոչնչացումը և դրանց հեմոլիզը բնութագրում են բացասական ռեակցիա:
RSC փուլի համար անհրաժեշտ են հետևյալը՝ հիվանդի շիճուկ, կոմպլեմենտ, ոչխարի էրիթրոցիտներից և հեմոլիտիկ շիճուկից բաղկացած հեմոլիտիկ համակարգ, ինչպես նաև նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթ:
Ռեակցիան իրականացվում է սերոլոգիական խողովակներում: Ոչխարի կարմիր արյան բջիջները ձեռք են բերվում դեֆիբրինացված ոչխարի արյունից՝ երեք անգամ լվանալով նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով: Հեմոլիտիկ շիճուկը պատրաստվում է պատրաստի ամպուլներում, որի պիտակի վրա նշվում է դրա տիտրը, այսինքն՝ շիճուկի առավելագույն նոսրացումը, որը դեռևս առաջացնում է հեմոլիզ, երբ ավելացվում է կարմիր արյան բջիջներին կոմպլեմենտի առկայության դեպքում: Հեմոլիտիկ շիճուկը ձեռք է բերվում կենդանիների, օրինակ՝ նապաստակների, ոչխարի արյան կարմիր բջիջներով իմունիզացիայի միջոցով: Ռեակցիան կարգավորելիս շիճուկն օգտագործվում է եռակի տիտրով: Օրինակ՝ հեմոլիտիկ շիճուկի տիտրը 1։1200 է, իսկ աշխատանքային նոսրացումը՝ 1։400։ Որպես հավելում օգտագործվում է ծովախոզուկի թարմ արյան շիճուկ (24-48 ժամվա ընթացքում) կամ չոր հավելում ամպուլներում։
Նախքան RSC կատարելը, կոմպլեմենտը նոսրացվում է 1:10 և տիտրվում է տիտրը հաստատելու համար՝ կոմպլեմենտի ամենափոքր քանակությունը, որն արտադրվում է կարմիր արյան բջիջների հեմոլիզով, երբ զուգակցվում է այս ռեակցիայի մեջ օգտագործվող հեմոլիտիկ համակարգի հետ: Հաշվի առնելով անտիգենի հնարավոր հակակոմպլեմենտար հատկությունները, ռեակցիա բեմադրելիս 20-30%-ով ավելանում է կոմպլեմենտի սահմանված աշխատանքային տիտրը։
RSC-ի հակագենը սպանված բակտերիաների կասեցումն է, այդ կախույթներից պատրաստված քաղվածքները և մանրէների առանձին քիմիական ֆրակցիաները: Հակագենի հիմնական պահանջը կոմպլեմենտի գործունեության արգելման բացակայությունն է: Այն չպետք է ունենա հակակոմպլեմենտար հատկություն։ Հակագենի այս հատկությունները բացահայտելու համար կոմպլեմենտը լրացուցիչ տիտրացվում է ռեակցիայի մեջ օգտագործվող հակագենի առկայության դեպքում: Գոյություն ունեն RSC-ի բեմադրության որոշակի սխեմաներ: Ռեակցիայի արդյունքները հաշվի են առնվում հեմոլիտիկ համակարգում կարմիր արյան բջիջների հեմոլիզի առկայությամբ կամ բացակայությամբ: RSC-ն օգտագործվում է սիֆիլիսի (Վասերմանի ռեակցիա), գոնորխի (Բորդետ-Գենգուի ռեակցիա), տոքսոպլազմոզի, ռիկետսիալ և վիրուսային հիվանդություններ.
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան (CFR) այն է, որ երբ անտիգեններն ու հակամարմինները համապատասխանում են միմյանց, նրանք ձևավորում են իմունային համալիր, որին կոմպլեմենտը (C) կցվում է հակամարմինների Fc հատվածի միջոցով, այսինքն՝ կոմպլեմենտը կապված է հակագեն-հակամարմին համալիրով: Եթե հակագեն-հակամարմին համալիրը չի ձևավորվում, ապա կոմպլեմենտը մնում է ազատ։
AG-ի և AT-ի սպեցիֆիկ փոխազդեցությունը ուղեկցվում է կոմպլեմենտի ադսորբցիայով (կապումով): Քանի որ կոմպլեմենտի ֆիքսման գործընթացը տեսողականորեն ակնհայտ չէ, Ջ. Բորդեթը և Օ. Ժանգուն առաջարկեցին օգտագործել հեմոլիտիկ համակարգը (ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ + հեմոլիտիկ շիճուկ) որպես ցուցիչ, որը ցույց է տալիս, թե արդյոք կոմպլեմենտը ֆիքսված է AG-AT համալիրով: Եթե AG-ն և AT-ը համապատասխանում են միմյանց, այսինքն՝ ձևավորվել է իմունային համալիր, ապա կոմպլեմենտը կապված է այս բարդույթով և հեմոլիզ չի առաջանում: Եթե AT-ը չի համապատասխանում AG-ին, ապա կոմպլեքսը չի ձևավորվում և լրացնում է, մնալով ազատ, միանում է երկրորդ համակարգի հետ և առաջացնում հեմոլիզ։
Ռեակցիայի առաջընթաց
Ռեակցիան տեղի է ունենում երկու փուլով, որոնք ներառում են երկու համակարգեր. բակտերիալ և հեմոլիտիկ: Առաջին ռեակցիան (հատուկ) ներառում է հակագեն 4-+ հակամարմին + կոմպլեմենտ: Դրական ռեակցիայի արդյունքը, որն առաջանում է, երբ հակամարմինները համընկնում են անտիգենի հետ, բնութագրվում է հատուկ բակտերիալ հակագեն-հակամարմին համալիրի ձևավորմամբ՝ ներծծված կամ, ինչպես ասում են, «կապված» լրացմամբ: Մնալով անտեսանելի՝ համալիրը ոչ մի արտաքին փոփոխություն չի առաջացնում այն միջավայրում, որտեղ այն ձևավորվել է: Բացասական RSC արդյունքը տեղի է ունենում հակագենի և շիճուկի հակամարմինների միջև հատուկ մերձեցման բացակայության դեպքում և բնութագրվում է ազատ ակտիվ լրացման պահպանմամբ: RSC-ի առաջին փուլը կարող է իրականացվել 37°C (1-2 ժամ) թերմոստատում կամ 3-4°C (18-20 ժամ) սառնարանում: Սառը ժամանակ հակագեն-հակամարմին իմունային համալիրի երկարատև ձևավորմամբ տեղի է ունենում կոմպլեմենտի ավելի ամբողջական կապ, և արդյունքում մեծանում է ռեակցիայի զգայունությունը: Համեմատական փորձեր կատարելիս սովետական իմունոլոգ ակադեմիկոս. Ioffe-ը և նրա աշակերտները ցույց են տվել, որ ցրտին կոմպլեմենտի երկարատև ֆիքսման պայմաններում հնարավոր է բռնել 100-500 անգամ ավելի փոքր քանակությամբ հակագեն և ստանալ:դրական արդյունքներ
իմունային շիճուկի ավելի բարձր նոսրացումների դեպքում, քան կոմպլեմենտի ֆիքսման փորձի ժամանակ 37 ° C ջերմաստիճանում 1-2 ժամվա ընթացքում Ռեակցիայի երկրորդ փուլը (ցուցանիշը) տեղի է ունենում հեմոլիտիկ համակարգի ռեակտիվների միջև (3% կասեցման խառնուրդ): էրիթրոցիտները և հեմոլիտիկ շիճուկը հավասար ծավալներով) 37 °C ջերմաստիճանում միայն կոմպլեմենտի առկայության դեպքում, որը զերծ է մնացել ռեակցիայի առաջին փուլից (բացասական ռեակցիա): Ազատ ակտիվ կոմպլեմենտի բացակայության դեպքում հատուկ հեմոլիզինների ազդեցությամբ էրիթրոցիտների հեմոլիզ չի լինում (արձագանքը դրական է)։
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան (CFR) բարդ շճաբանական ռեակցիա է: Այն իրականացնելու համար անհրաժեշտ է 5 բաղադրիչ, այն է՝ AG, AT և կոմպլեմենտ (առաջին համակարգ), ոչխարի էրիթրոցիտներ և հեմոլիտիկ շիճուկ (երկրորդ համակարգ)։
RSC-ի հակագենը կարող է լինել տարբեր սպանված միկրոօրգանիզմների կուլտուրաները, դրանց լիզատները, բակտերիաների բաղադրամասերը՝ պաթոլոգիկորեն փոփոխված և նորմալ օրգաններ, հյուսվածքային լիպիդներ, վիրուսներ և վիրուս պարունակող նյութեր։
Թարմ կամ չորացրած ծովախոզուկի շիճուկը օգտագործվում է որպես հավելում:
Ռեակցիայի մեխանիզմ
RSK-ն իրականացվում է երկու փուլով. 1-ին փուլ՝ երեք բաղադրիչ անտիգեն + հակամարմին + կոմպլեմենտ պարունակող խառնուրդի ինկուբացիա; 2-րդ փուլ (ցուցանիշ) - խառնուրդում ազատ կոմպլեմենտի հայտնաբերում` դրան ավելացնելով ոչխարի էրիթրոցիտներից և դրանց նկատմամբ հակամարմիններ պարունակող հեմոլիտիկ շիճուկից բաղկացած հեմոլիտիկ համակարգ: Ռեակցիայի 1-ին փուլում, երբ ձևավորվում է հակագեն-հակամարմին համալիր, կոմպլեմենտը կապվում է, իսկ հետո 2-րդ փուլում հակամարմիններով զգայուն էրիթրոցիտների հեմոլիզ չի առաջանա. արձագանքը դրական է. Եթե հակագենը և հակամարմինը չեն համընկնում (փորձանմուշում չկա հակագեն կամ հակամարմին), ապա կոմպլեմենտը մնում է ազատ և 2-րդ փուլում կմիանա էրիթրոցիտ-հակաէրիթրոցիտային հակամարմինների համալիրին՝ առաջացնելով հեմոլիզ; արձագանքը բացասական է.
Դիմում
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան կարող է օգտագործվել հետևյալի համար.
1) անհայտ շիճուկում սպեցիֆիկ հակամարմինների նույնականացում՝ հայտնի բնույթի անտիգենի հետ դրանց փոխազդեցության հիման վրա.
2) ուսումնասիրելով հակագենի հատկությունները հայտնի հատուկ շիճուկի հետ ռեակցիայի մեջ: Բաղադրիչների պատրաստում RSC բեմադրության համար.
1. Հետազոտության համար ստացված արյան շիճուկը, ռեակցիայի նախօրեին, տաքացնում են ջրային բաղնիքում 56°C ջերմաստիճանում 30 րոպե՝ սեփական կոմպլեմենտն ապաակտիվացնելու համար։ Անակտիվացված շիճուկը կարելի է պահել 3-4°C ջերմաստիճանում 5-6 օր: Փորձի օրը շիճուկը նոսրացվում է նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով 1:5 հարաբերակցությամբ (0,1 մլ փորձնական շիճուկ + 0,4 մլ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթ):
2. CSC-ի արտադրության հակագենը կարող է լինել տարբեր մանրէների, բակտերիալ սպիտակուցների և մանրէաբանական կուլտուրաներից ստացված բակտերիաների, պաթոլոգիկորեն փոփոխված և նորմալ օրգանների և հյուսվածքների կուլտուրաները: Հակագենի պատրաստման առանձնահատկությունները որոշվում են վարակիչ գործընթացի բնույթով և դրա պաթոգենի բնութագրերով:
3. Կոմպլեմենտը շիճուկների խառնուրդ է, որը ստացվում է 3-5 առողջ ծովախոզուկից, կամ չոր կոմպլեմենտ ամպուլներում։
Օգտագործելուց անմիջապես առաջ ծովախոզուկի շիճուկը նոսրացվում է նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով 1:10 հարաբերակցությամբ՝ պաշարային լուծույթ ստանալու համար:
4. Մինչ փորձն իրականացնելը հեմոլիտիկ շիճուկն ապաակտիվացվում է 30 րոպե տաքացնելով 56 °C ջերմաստիճանում: Հիմնական RSC փորձը կատարելու, ինչպես նաև կոմպլեմենտի և անտիգենի տիտրման համար հեմոլիտիկ շիճուկն օգտագործվում է եռակի տիտրով: Օրինակ, եթե հեմոլիտիկ շիճուկի տիտրը 1:1800 է, ապա ռեակցիայի մեջ օգտագործվում է շիճուկի նոսրացում 1:600:
5. Էրիտրոցիտները ստացվում են դեֆիբրինացված ոչխարի արյունից։ Ֆիբրինային թաղանթները հեռացնելու համար արյունը զտվում է եռաշերտ շղարշ ֆիլտրի միջոցով: Ստացված ֆիլտրատը ցենտրիֆուգվում է, շիճուկը ծծվում և ցամաքեցնում են, իսկ էրիթրոցիտները լվանում են 3-4 անգամ ցենտրիֆուգով՝ նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով: Երբ կարմիր արյան բջիջները լվանում են վերջին անգամ, հեղուկի վերին շերտը պետք է ամբողջովին թափանցիկ լինի: Նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթում լվացված կարմիր արյան բջիջներից պատրաստվում է 3% կասեցում: Վերոնշյալ ձևով պատրաստելով RSC-ում ներգրավված բաղադրիչները, անցեք հեմոլիտիկ շիճուկի, կոմպլեմենտի և անտիգենի տիտրմանը:
Դասագիրքը բաղկացած է յոթ մասից. Առաջին մասը՝ «Ընդհանուր մանրէաբանություն», պարունակում է տեղեկատվություն բակտերիաների մորֆոլոգիայի և ֆիզիոլոգիայի մասին: Երկրորդ մասը նվիրված է բակտերիաների գենետիկային: Երրորդ մասը՝ «Կենսոլորտի միկրոֆլորան», ուսումնասիրում է միկրոֆլորան միջավայրը, նրա դերը բնության մեջ առկա նյութերի ցիկլում, ինչպես նաև մարդու միկրոֆլորան և դրա նշանակությունը։ Չորրորդ մասը՝ «Վարակության դոկտրինան», նվիրված է միկրոօրգանիզմների ախտածին հատկություններին, նրանց դերին. վարակիչ գործընթաց, ինչպես նաև պարունակում է տեղեկատվություն հակաբիոտիկների և դրանց գործողության մեխանիզմների մասին: Հինգերորդ մասը՝ «Իմունիտետի վարդապետությունը», պարունակում է ժամանակակից պատկերացումներ անձեռնմխելիության մասին: Վեցերորդ մասը՝ «Վիրուսները և դրանց պատճառած հիվանդությունները», ներկայացնում է տեղեկատվություն վիրուսների հիմնական կենսաբանական հատկությունների և դրանց պատճառած հիվանդությունների մասին։ Մաս յոթերորդ՝ «Մասնավոր բժշկական մանրէաբանություն» - պարունակում է տեղեկատվություն բազմաթիվ պաթոգենների մորֆոլոգիայի, ֆիզիոլոգիայի, պաթոգեն հատկությունների մասին։ վարակիչ հիվանդություններ, և նաև մոտ ժամանակակից մեթոդներնրանց ախտորոշումը, հատուկ կանխարգելումև թերապիա.
Դասագիրքը նախատեսված է ուսանողների, ասպիրանտների և բարձրագույն բժշկական ֆակուլտետի ուսուցիչների համար ուսումնական հաստատություններ, բուհեր, բոլոր մասնագիտությունների մանրէաբաններ և գործող բժիշկներ։
5-րդ հրատարակություն՝ վերանայված և ընդլայնված
Գիրք:
| <<< Назад
|
Առաջ >>> |
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա
Հայտնաբերվել է կոմպլեմենտի եզակի կարողությունը՝ հատուկ կապվելու տարբեր բնույթի անտիգեն + հակամարմինների համալիրներին լայն կիրառությունկոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիայում (CFR): RSC-ի հատուկ առավելությունն այն է, որ դրանում ներգրավված հակագենի բնույթը (կորպուսուլյար կամ լուծվող) նշանակություն չունի, քանի որ կոմպլեմենտը կապվում է IgG-ի և IgM-ի հետ կապված ցանկացած հակամարմինի Fc հատվածի հետ՝ անկախ հակամարմինների առանձնահատկություններից: Բացի այդ, RSA-ն շատ զգայուն է. այն թույլ է տալիս հայտնաբերել հակամարմինների քանակը 10 անգամ ավելի քիչ, քան, օրինակ, տեղումների ռեակցիայի ժամանակ: RSC-ն առաջարկվել է 1901 թվականին J. Bordet-ի և O. Zhang-ի կողմից։ Այն հիմնված է լրացման երկու հատկությունների վրա.
1) հակագեն + հակամարմինների համալիրին կապվելու ունակություն.
2) կարմիր արյան բջիջների լիզը, որն օգտագործվում է հեմոլիտիկ շիճուկ ստանալու համար:
RSK-ն իրականացվում է երկու փուլով, և դրանում ներգրավված են համապատասխանաբար երկու համակարգեր՝ փորձարարական, կամ ախտորոշիչ և ցուցիչ։ Ախտորոշման համակարգը բաղկացած է թեստային (կամ ախտորոշիչ) շիճուկից, որը տաքացվում է 56 °C ջերմաստիճանում 30 րոպե առաջ ռեակցիան իրականացնելուց՝ դրանում առկա կոմպլեմենտն ու անտիգենն ապաակտիվացնելու համար։ Այս համակարգին ավելացվել է ստանդարտ լրացում: Դրա աղբյուրը թարմ կամ չորացրած ծովախոզուկի շիճուկն է։ Խառնուրդը մեկ ժամ ինկուբացնում են 37 °C ջերմաստիճանում։ Եթե փորձարկման շիճուկը պարունակում է հակամարմիններ, դրանք փոխազդում են ավելացված անտիգենի հետ, և արդյունքում ստացված հակագեն + հակամարմին համալիրները կկապեն ավելացված կոմպլեմենտը: Եթե շիճուկում հակամարմիններ չկան, հակագեն + հակամարմինների համալիրի ձևավորումը չի առաջանա, և կոմպլեմենտը կմնա ազատ։ Սովորաբար ռեակցիայի այս փուլում կոմպլեմենտի ամրագրման տեսանելի դրսեւորումներ չկան։ Հետևաբար, պարզաբանելու համար, թե արդյոք տեղի է ունեցել կոմպլեմենտի ֆիքսացիա, թե ոչ, ավելացվում է երկրորդ ցուցիչ համակարգը (անակտիվացված հեմոլիտիկ շիճուկ + ոչխարի կարմիր արյան բջիջներ), և բոլոր RSC բաղադրիչների խառնուրդը կրկին ինկուբացվում է 37 °C ջերմաստիճանում 30-60 րոպե: , որից հետո գնահատվում են ռեակցիայի արդյունքները։ Եթե կոմպլեմենտը կապվում է առաջին փուլում՝ ախտորոշման համակարգում, այսինքն՝ հիվանդի շիճուկում կան հակամարմիններ, իսկ կոմպլեմենտը կապված է հակամարմին + + հակագենային համալիրով, ապա չէր լինի էրիթրոցիտների լիզացիա, RBC-ն դրական է. հեղուկը անգույն, խողովակի ստորին մասում առկա է էրիթրոցիտների նստվածք: Եթե շիճուկում չկան սպեցիֆիկ հակամարմիններ, և կոմպլեմենտի կապը չի առաջանում ախտորոշման համակարգում, այսինքն՝ RSC-ն բացասական է, ապա ախտորոշման համակարգում չծախսված կոմպլեմենտը կապվում է կարմիր արյան բջիջների և ցուցիչ համակարգի հակամարմինների համալիրին և հեմոլիզին: տեղի է ունենում փորձանոթում «լաքապատ արյուն», կարմիր արյան բջիջների նստվածք No. RSC-ի ինտենսիվությունը գնահատվում է չորս խաչաձեւ համակարգի միջոցով՝ կախված հեմոլիզի հետաձգման աստիճանից և կարմիր արյան բջիջների նստվածքի առկայությունից: Ռեակցիան ուղեկցվում է համապատասխան հսկողությամբ՝ շիճուկի հսկողություն (առանց հակագենի) և հակագենի հսկողություն (առանց շիճուկի), քանի որ որոշ շիճուկներ և որոշ անտիգեններ ունեն հակակոմպլեմենտար ազդեցություն: Նախքան RSC-ն իրականացնելը, դրանում ներգրավված բոլոր բաղադրիչները, բացառությամբ փորձարկման շիճուկի կամ անտիգենի, ենթակա են մանրակրկիտ տիտրացման: Հատկապես կարևոր է ռեակցիայի մեջ ներմուծել կոմպլեմենտի ճշգրիտ չափաբաժինը, քանի որ դրա բացակայությունը կամ ավելցուկը կարող է հանգեցնել կեղծ արդյունքներ. Կոմպլեմենտի տիտրն այն նվազագույն քանակությունն է, որը հեմոլիտիկ շիճուկի աշխատանքային դոզայի առկայության դեպքում ապահովում է կարմիր արյան բջիջների ամբողջական տարրալուծումը։ Հիմնական փորձը կարգավորելու համար ընդունեք կոմպլեմենտի չափաբաժին, որն ավելացել է 20-25%-ով սահմանված տիտրի համեմատ: Հեմոլիտիկ շիճուկի տիտրը նրա առավելագույն նոսրացումն է, որը, երբ խառնվում է հավասար ծավալի 10% կոմպլեմենտ լուծույթի հետ, 1 ժամվա ընթացքում 37 °C ջերմաստիճանում ամբողջությամբ հեմոլիզացնում է կարմիր արյան բջիջների համապատասխան չափաբաժինը: Հիմնական փորձը ներառում է շիճուկի ընդունումը, որը նոսրացված է իր տիտրի 1/3-ին:
Կոմպլեմենտի ամրացման ռեակցիան ավանդականներից է սերոլոգիական ռեակցիաներ, օգտագործվում է բազմաթիվ վիրուսային հիվանդություններ ախտորոշելու համար, ինչպես նաև հիմք է հանդիսանում հայտնաբերման որոշ այլ մեթոդների համար հակավիրուսային հակամարմիններ. Չնայած չեզոքացման ռեակցիան, հեագլյուտինացիայի արգելակումը, անուղղակի հեմագլյուտինացիա, ֆերմենտային իմունային վերլուծությունզգայունությամբ գերազանցում է կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան, սակայն տեխնիկայի պարզությունը, հակամարմինների վաղ հայտնաբերումը, ինչպես նաև վիրուսային անտիգենների հայտնաբերումը, որոնք չունեն հեմագլյուտինացնող հատկություն, բացատրում են դրա լայն կիրառումը վիրուսաբանական հետազոտություններում:
Դրա արտադրությունը չի պահանջում հակագենային դեղամիջոցների կոնցենտրացիայի և մաքրության այնպիսի բարձր աստիճան, որոնք անհրաժեշտ են մի շարք այլ իմունոլոգիական ռեակցիաների համար: Բացի այդ, շատ վիրուսների կոմպլեմենտ ամրագրող անտիգենների խմբային առանձնահատկությունը հնարավորություն է տալիս օգտագործել կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան զանգվածային ախտորոշման մեջ.
Անունն ինքնին մեծապես արտացոլում է մեթոդի էությունը, որը բաղկացած է երկու առանձին ռեակցիաներից։ Առաջին փուլում ռեակցիան ներառում է անտիգեններ և հակամարմիններ (այդ բաղադրիչներից մեկը նախապես հայտնի է), ինչպես նաև լրացնում է տիտրացված քանակությամբ: Եթե հակագենը և հակամարմինները համընկնում են, ապա դրանց համալիրը կապում է կոմպլեմենտին, որը հայտնաբերվում է երկրորդ փուլում՝ օգտագործելով ցուցիչ համակարգը (ոչխարի կարմիր արյան բջիջների և դրանց հակաշիճուկի խառնուրդ): Եթե կոմպլեմենտը կապված է անտիգենի և հակամարմինների փոխազդեցության ժամանակ, ապա ոչխարի կարմիր արյան բջիջների լիզացիա տեղի չի ունենում ( դրական արձագանքլրացման ֆիքսացիա): Կոմպլեմենտի ֆիքսման բացասական ռեակցիայի դեպքում չֆիքսված կոմպլեմենտը նպաստում է հեմոլիզին, որն օգտագործվում է ռեակցիայի արդյունքները գնահատելու համար։
Կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիայի հիմնական բաղադրիչներն են անտիգենները (հայտնի կամ հայտնաբերելի), հակամարմինները (հայտնի հակաշիճուկներ կամ թեստային շիճուկներ), կոմպլեմենտը, հեմոլիտիկ շիճուկը և ոչխարի կարմիր արյան բջիջները; Որպես լուծիչ օգտագործվում են նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթ (pH 7,2-7,4) կամ տարբեր բուֆերային լուծույթներ։ Հակագենները և շիճուկները կարող են հակակոմպլեմենտար լինել, այսինքն. կոմպլեմենտ կլանելու ունակությունը, որը հետաձգում է հեմոլիզը և խեղաթյուրում ռեակցիայի արդյունքը։
CSC-ի համար հակագենները պատրաստվում են վարակված կենդանիների օրգաններից, վարակված հավի սաղմերի ալանտոիկ կամ ամնիոտիկ հեղուկից, ինչպես նաև կուլտուրական հեղուկից՝ հյուսվածքային բջիջների կուլտուրաներում վիրուսներ մշակելուց հետո: Հակագենային պատրաստուկները միշտ պարունակում են շատ բալաստ նյութեր կենդանիների բջիջներից կամ հյուսվածքային կուլտուրաներից, որոնք նույնպես կարող են խեղաթյուրել ռեակցիայի արդյունքները։
Ստացված վիրուսային անտիգեններն ապաակտիվացվում են, որոշվում է աշխատանքային չափաբաժինը, ինչպես նաև հակակոմպլեմենտար և հեմոլիտիկ հատկությունները։ Այնուհետեւ հակագենը տիտրացվում է կոմպլեմենտի առկայության դեպքում:
Ռեակցիայի փուլավորման երկրորդ հիմնական բաղադրիչը կոմպլեմենտն է: Այս տերմինը նշանակում է բարդ համակարգսպիտակուցներ և գործոններ, որոնք առկա են կենդանիների և մարդկանց արյան մեջ: Որպես կանոն, ծովախոզուկի արյան շիճուկը օգտագործվում է կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիայի մեջ: Կոմպլեմենտի ակտիվությունը (տիտրը) նրա ամենափոքր քանակությունն է, որի առկայության դեպքում հեմոլիզինը առաջացնում է օգտագործվող հեմոլիտիկ համակարգի ամբողջական հեմոլիզ։
Վիրուսների նկատմամբ կոմպլեմենտը ամրագրող հակամարմինները հայտնաբերելու համար անհրաժեշտ է շիճուկի ապաակտիվացում՝ 560C ջերմաստիճանում կոմպլեմենտը վերացնելու համար 30 րոպե: Իմունացված կենդանիների շիճուկները սովորաբար օգտագործվում են որպես տեղեկատու շիճուկներ: Ավելին, իմունիզացիայի համար օգտագործվում են վիրուսային անտիգեններ, որոնք մանրակրկիտ մաքրվում են հյուսվածքների կեղտից, քանի որ հակառակ դեպքում առաջանում է ընդգծված ոչ սպեցիֆիկ ռեակցիա:
Կոմպլեմենտի ֆիքսման ռեակցիայի պարտադիր բաղադրիչը հեմոլիտիկ համակարգն է, որը ներառում է ոչխարի էրիթրոցիտներ և հեմոլիտիկ շիճուկ, որը ստացվում է ոչխարի էրիթրոցիտներով նապաստակների հիպերիմունիզացիայի արդյունքում:
Կոմպլեմենտի ֆիքսման ռեակցիան իրականացնելու համար օգտագործվում են հետևյալ փոփոխությունները՝ կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիայի միկրոմեթոդը Takachi համակարգի միկրոտիտրատորում, կոմպլեմենտի ֆիքսման երկարատև ռեակցիան, կոմպլեմենտի ֆիքսման անուղղակի ռեակցիան, կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիան գելում, միկրոկաթիլը։ կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա, պինդ հիմքի վրա կոմպլեմենտի ամրագրման ռեակցիա։
Չնայած կոմպլեմենտի ամրացման ռեակցիայի զգայունությունը ցածր է, այն ունի բարձր սպեցիֆիկություն: Այս առումով այն լայնորեն կիրառվում է երիտասարդ եղջերավոր անասունների վիրուսային պնևմոէնտերիտի ախտորոշման համար։
