Ev Pulpitis Tanısal aglütinasyon reaksiyonu. Aglütinasyon reaksiyonu

Pulpitis

Tanısal aglütinasyon reaksiyonu. Aglütinasyon reaksiyonu

Aglütinasyon reaksiyonu, antikorların (aglutininler) bütün mikrobiyal veya diğer hücrelerle spesifik etkileşimine dayanır. Bu etkileşimin bir sonucu olarak, çöken (aglutinat) aglomera parçacıkları oluşur. Bakteriler, protozoalar, mantarlar, mayalar, riketsiyalar, eritrositler ve hem yaşayan hem de öldürülmüş diğer hücreler aglütinasyon reaksiyonuna katılabilir. Reaksiyon iki aşamada meydana gelir: birincisi spesifik bir antijen ve antikor kombinasyonudur, ikincisi spesifik değildir, yani görünür bir aglütinat oluşumu. Aglütinat çökelmesi, sodyum klorür gibi elektrolitlerin varlığında meydana gelir. Aglütinattaki mikroorganizmalar canlı kalır ancak hareket kabiliyetlerini kaybederler.

Aglütinasyon reaksiyonu, bulaşıcı hastalıkların serolojik tanısında ve izole edilen mikropların antijenik yapısının belirlenmesinde yaygın olarak kullanılmaktadır. Bir hastanın veya taşıyıcının vücudundan izole edilen bir patojenin antijenik yapısını belirlemek için, hayvanların (tavşan, eşek, koyun) belirli mikroorganizmalarla immünize edilmesiyle elde edilen spesifik immün serum kullanılır. Mikrobun tanımlanması, adsorbe edilmiş veya monoreseptör serumlarla cam üzerinde aglütinasyon reaksiyonuyla veya spesifik aglütinasyon serumları içeren test tüplerinde gerçekleştirilir. Adsorbe edilmiş serumlar yalnızca belirli bir mikroba özgü antijenlere karşı antikorlar içerir ve monoreseptör serumları, patojenin yalnızca belirli bir antijenine karşı antikorlar içerir.

Tür serumları, belirli bir mikrobun tüm antijenlerine karşı antikorlar içerir.

İzole edilen mikroorganizma kültürünün ait olup olmadığı bu tür bilinen bir serumla, serum ampulünün etiketi üzerinde belirtilen antikor titresine aglütinasyon yoluyla belirlenir. Bir serumun antikor titresi, hayvanı immünize etmek için kullanılan mikrop kültürünün aglütinasyonunun hala gözlemlendiği son seyreltme olarak kabul edilir. Adsorbe edilmiş ve monoreseptör serumları genellikle cam aglütinasyon reaksiyonunda seyreltilmeden kullanılır.

Hastanın kan serumunda antikor varlığı belirlenirken 1:50 ila 1:800 veya daha fazla seyreltmeden başlayarak izotonik sodyum klorür çözeltisi ile seyreltilir. Her seyreltmeye canlı veya öldürülmüş mikroplardan oluşan bir süspansiyon eklenir. Isı veya formaldehit ile öldürülen mikropları içeren preparatlara diagnostik denir. Mikroorganizma kültürlerinin ısıtılmasıyla elde edilen teşhisler yalnızca somatik antijenler içerir. Yalnızca formaldehit kullanıldığında mikroplar flagellar antijenlerini korurlar.

Hastanın kanında antikor bulunması durumunda reaksiyonda alınan tanı testi birbirine yapışır ve iki test tüpünde çökelti (aglutinat) oluşur. Bu durumda aglütinasyon reaksiyonunun sonuçları pozitif olarak kabul edilir. İzotonik sodyum klorür çözeltisi ve diagnostikumun eklendiği kontrol tüpünde mikrop süspansiyonunun homojen olması gerekir (negatif aglütinasyon reaksiyonu).

Leptospiroz gibi bazı hastalıklarda aglütinasyon reaksiyonunun sonuçları, mikroskobun karanlık görüş alanında yalnızca mikroskobik olarak dikkate alınır (mikroaglütinasyon). Bir hastalığın serolojik teşhisini yapmak için şunları dikkate alın: teşhis hastalığı. Genellikle 1:100 veya 1:200 serum dilüsyonuna karşılık gelir.

Tifo ve paratifo ateşi (Vidal reaksiyonu), bruselloz (Wright reaksiyonu), tularemi vb. durumlarda aglütinasyon reaksiyonu kullanılarak hastanın kan serumundaki antikorlar tespit edilebilir.
Castellani'nin tepkisi. Bazı bulaşıcı hastalıklar veya grup antijenleri içeren mikroorganizmalarla immünizasyon, kan serumunda belirli bir tipe özgü antikorların yanı sıra grup antikorları da ortaya çıkar. Bu durumda ilgili bakteri türleri ortaya çıkan serumlar tarafından aglütine edilecektir.

Castellani, grup antijenlerine sahip ancak spesifik antijenleri olmayan ilgili türlerin mikroorganizmalarının yardımıyla bunların uzaklaştırılmasına dayanan grup antikorlarının bağışıklık serumundan adsorpsiyonu için bir yöntem önerdi. Seruma eklenen bu tür mikroorganizmaların kültürü, spesifik olmayan grup antikorları adsorbe eder ve antijen-antikor kompleksinin santrifüjleme yoluyla çıkarılmasından sonra serumda yalnızca spesifik immünoglobulinler kalır. Castellani yöntemine göre işlenen serum, aglütinasyon reaksiyonunda oldukça spesifik olarak kullanılabilir.

Aglütinasyon, spesifik AT'lerin onlarla etkileşimi sonucu bakterilerin yapıştırılmasıdır. RA'yı gerçekleştirmek için üç bileşen gereklidir: 1) AG (aglütinojen); 2) AT (aglutinin); 3) elektrolit çözeltisi (izotonik sodyum klorür çözeltisi). Aglütinasyon reaksiyonunda yalnızca korpüsküler antijenler (bakteriler, kırmızı kan hücreleri, antijen yüklü lateks partikülleri) yer alır.

Camda aglütinasyon reaksiyonu. Bir pipet kullanarak yağsız bir cam slayt üzerine bir damla yerleştirin. teşhis serumu(serum seyreltmesi 1:10 - 1:20). Bakteriyolojik döngü kullanılarak, incelenen mikroorganizmanın saf kültürü eğimli agarın yüzeyinden alınır, bir damla seruma aktarılır ve karıştırılır. Reaksiyonun sonucu 3-5 dakika sonra çıplak gözle dikkate alınır. Reaksiyon pozitifse, bir damla serumda pulların (büyük veya küçük) görünümü not edilir ve slayt çalkalandığında koyu bir arka planda açıkça görülebilir. Negatif reaksiyon durumunda sıvı eşit şekilde bulanık kalır.

Test tüplerinde aglütinasyon reaksiyonu. Bir sıra test tüpüne 1 ml fizyolojik çözelti eklenir. Test edilen kan serumunun eşit hacmi birinci test tüpüne eklenir. Seri iki kat serum seyreltmeleri hazırlanır (serum titrasyonu), ardından her test tüpüne 2 damla inaktif bakteri süspansiyonu (diagnosticum) eklenir. Tüpler 2 saat süreyle 37°C'deki bir termostata yerleştirilir. Reaksiyon, çıplak gözle görülemeyen küçük pulların oluşmasıyla ilerler, bu nedenle sonuçlar özel bir cihaz olan aglütinoskopta hafif bir büyütme altında kaydedilir. Aglütinasyonun yoğunluğu “dört artı” sistemine göre dikkate alınır: tam aglütinasyon - 4+, kısmi aglütinasyon - 3+ veya 2+, şüpheli sonuç - +. 2+ aglütinasyonunun gözlemlendiği son seyreltme, test serumundaki antikor titresi olarak alınır.

Tifo ateşi ve paratifo ateşinin (Vidal reaksiyonu), brusellozun (Wright reaksiyonu) ve tifüsün (Weigl reaksiyonu) etken maddelerine karşı antikorların titresini belirlemek için test tüplerinde bir aglütinasyon reaksiyonu (kapsamlı bir aglütinasyon reaksiyonu) gerçekleştirilir.

Aglütinasyon (Latince aglütinatio - yapıştırmadan), antijen taşıyan korpüsküler parçacıkların (tüm hücreler, lateks parçacıkları vb.) elektrolitlerin varlığında spesifik antikor molekülleri ile pul veya tortu oluşumuyla sonuçlanan yapıştırılmasıdır (bağlantısı). (aglutinat) çıplak gözle görülebilen. Tortunun doğası antijenin doğasına bağlıdır: kamçılı bakteriler kaba topaklayıcı bir tortu üretir, kamçılı ve kapsüler olmayan bakteriler ince taneli bir tortu üretir ve kapsüler bakteriler lifsi bir tortu üretir. Bir bakterinin kendi antijenlerinin veya eritrositler gibi başka herhangi bir hücrenin spesifik antikorlarla etkileşime doğrudan katıldığı doğrudan aglütinasyon arasında bir ayrım yapılır; ve bakteriyel hücrelerin veya eritrositlerin veya lateks parçacıklarının kendilerinin değil, kendilerine özgü antikorları (veya antijenleri) tanımlamak için üzerlerine emilen yabancı antijenlerin (veya antikorların) taşıyıcıları olduğu dolaylı veya pasif. Aglütinasyon reaksiyonu esas olarak IgG ve IgM sınıflarına ait antikorları içerir. İki aşamada meydana gelir: Birincisi, antikorların aktif merkezi ile antijenin determinantı arasında spesifik bir etkileşim meydana gelir; bu aşama elektrolitlerin yokluğunda meydana gelebilir ve eşlik etmez görünür değişiklikler tepki veren sistem. İkinci aşama için - aglütinat oluşumu - azaltan elektrolitlerin varlığı gereklidir. elektrik şarjı antijen + antikor kompleksleri oluşturur ve yapışma sürecini hızlandırır. Bu aşama aglütinat oluşumuyla sona erer.

Aglütinasyon reaksiyonları cam veya düz karton plakalar üzerinde veya steril aglütinasyon tüplerinde gerçekleştirilir. Cam üzerindeki aglütinasyon reaksiyonları (direkt ve pasif) genellikle şu şekilde kullanılır: hızlandırılmış yöntem hastanın serumunda (örneğin brusellozda) spesifik antikorların tespiti veya patojenin serolojik tanımlanması için. İkinci durumda, genellikle yalnızca monoreseptör antikorları veya bunlardan çeşitli antijenlere yönelik bir dizi içeren iyi saflaştırılmış (adsorbe edilmiş) teşhis serumları kullanılır. Cam üzerindeki aglütinasyon reaksiyonunun şüphesiz avantajı, uygulanmasının basitliği ve her iki bileşenin de konsantre formda kullanılması nedeniyle birkaç dakika, hatta saniyeler sürmesidir. Ancak yalnızca niteliksel bir değeri vardır ve test tüpünden daha az hassastır. Test tüplerinde kapsamlı bir aglütinasyon reaksiyonu daha doğru sonuçlar verir, çünkü serumdaki antikorların kantitatif içeriğini belirlemenize (titresini oluşturmanıza) ve gerekirse teşhis değeri olan antikor titresindeki bir artış gerçeğini kaydetmenize olanak tanır. . Reaksiyonu hazırlamak için, %0,85'lik NaCl çözeltisi ile belirli bir şekilde seyreltilmiş bir serum ve 1 ml'de 1 milyar bakteri içeren eşit hacimde (genellikle 0,5 ml) standart diagnostik (veya test kültürü) süspansiyonu ilave edilir. aglütinasyon tüpleri. Aglütinasyon reaksiyonunun sonuçları, ilk önce tüplerin 37 °C'de 2 saatlik inkübasyonundan sonra ve son olarak iki kritere göre 20-24 saat sonra kaydedilir: çökeltinin varlığı ve boyutu ve süpernatan sıvının şeffaflık derecesi. Değerlendirme dörtlü çapraz sisteme göre yapılır. Reaksiyona mutlaka serum ve antijen kontrolü eşlik eder. Patojenin serolojik tanımlanması için test tüpünde ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonunun yapıldığı durumlarda, tanısal serum titresinin en az yarısına kadar seyreltildiğinde reaksiyonun pozitif olarak değerlendirilmesi durumunda tanı değeri vardır.

Homolog antijenlerin ve antikorların çözeltilerini karıştırırken aglütinasyon reaksiyonunun gözle görülür belirtilerinin her zaman gözlemlenmediği dikkate alınmalıdır. Bir çökelti yalnızca her iki reaksiyon bileşeninin belirli optimal oranlarında oluşur. Bu sınırların dışında, önemli miktarda antijen veya antikor fazlalığında herhangi bir reaksiyon gözlenmez. Bu olguya “prozon olgusu” denir. Hem aglütinasyon reaksiyonunda hem de çökelme reaksiyonunda gözlenir. Prozonun bağışıklık reaksiyonlarında ortaya çıkışı, bunlara dahil olan antijenlerin kural olarak polideterminant olması ve moleküllerin olmasıyla açıklanmaktadır. IgG antikorları iki aktif merkezi vardır. Antikorların fazla olması durumunda, her bir antijen parçacığının yüzeyi antikor molekülleri ile kaplanır, böylece serbest belirleyici grup kalmaz, böylece antikorların ikinci, bağlanmamış aktif merkezi başka bir antijen parçacığı ile etkileşime giremez ve bunları birbirine bağlayamaz. Görünür bir aglütinat veya çökeltinin oluşumu, antijen fazlalığı olduğunda, antikorların tek bir serbest aktif merkezi kalmadığında ve dolayısıyla antijen + antikor + antijen kompleksleri artık büyüyemediğinde de baskılanır.

Hızlandırılmış aglütinasyon reaksiyonları için seçenekler. Reaksiyon pasif hemaglutinasyon ve çeşitleri

Klasik aglütinasyon reaksiyonu korpüsküler antijenlerin kullanımını içerir. Bununla birlikte çözünebilir antijenler de söz konusu olabilir. Bunu mümkün kılmak için bu tür antijenler immünolojik açıdan inert parçacıklar üzerine adsorbe edilir. Lateks veya bentonit parçacıkları taşıyıcı olarak kullanılabilir, ancak şu anda en sık hayvan veya insan eritrositleri kullanılmaktadır ve bunların adsorbe etme özellikleri tanen, formalin veya benzidin çözeltileriyle işlenerek geliştirilmektedir. Bir antijeni kendi üzerine adsorbe eden kırmızı kan hücrelerine bu antijen tarafından duyarlılaştırılmış denir ve bağışıklık reaksiyonu Kırmızı kan hücreleri pasif olarak katıldığından, bunların katıldığı dolaylı veya pasif hemaglütinasyon reaksiyonudur (IRHA veya RPHA).

RPGA, yarım küre şeklinde bir tabana sahip delikleri olan özel polistiren plakalara yerleştirilir. Bunun için kullanırken serolojik teşhis Bu oyuklarda, fizyolojik çözelti içinde test serumunun iki kat seyreltilmesi hazırlanır ve ardından buna teşhis maddesi olarak duyarlılaştırılmış eritrositlerin bir süspansiyonu eklenir. Sonuçlar, dört çapraz sistem kullanılarak 37°C'de 2 saatlik inkübasyonun ardından kaydedilir. Olumlu bir reaksiyonla, aglütine kırmızı kan hücreleri deliğin dibine yerleşir ve onu ters bir şemsiye şeklinde eşit şekilde kaplar. Şu tarihte: olumsuz tepki kırmızı kan hücreleri de yerleşir, sıvı şeffaf hale gelir, tortu deliğin ortasında küçük bir "disk" gibi görünür. RPHA'daki serum titresi, bir "disk" varlığına dair önemli işaretler olmadan hala belirgin hemaglutinasyon veren son seyreltme olarak kabul edilir.

RPGA ayrıca test materyalinde bilinmeyen bakterileri, virüsleri, toksinleri, örneğin veba patojenlerini, stafilokokal enterotoksinleri vb. doğrudan tespit etmek için hızlandırılmış bir bakteriyolojik teşhis yöntemi olarak da kullanılabilir. RPGA'nın bu versiyonuyla, adsorbe edilmiş eritrositler, özellikleriyle bilinen özgüllük, reaksiyon antikorlarının bilinen bir bileşeni olarak kullanılır - antikor eritrosit diagnostiği. Test materyali yeterli miktarda bilinen bir antijen içeriyorsa RPGA pozitif olacaktır.

RPHA kullanma seçenekleri şunlardır: antijen nötralizasyon reaksiyonu (RNAg), antikor nötralizasyon reaksiyonu (RNAb), pasif hemaglutinasyon inhibisyon reaksiyonu (PHA). Bu reaksiyonlar için antijen ve antikor eritrosit teşhisi kullanılır. Karşılıklı olarak kontrol edilen iki tek yönlü reaksiyon aynı anda kullanılabilir; örneğin, bir antijen diagnostiği ile RPHA ve bir antikor eritrosit diagnostiği ile RNAg.

Antikor nötralizasyon reaksiyonu (RNAb), istenen antijeni içeren bir süspansiyonun, uygun hacimlerde bilinen antikorları içeren spesifik bir bağışıklık serumu ile karıştırılması ve 37 °C'de iki saat süreyle inkübe edilmesinden oluşur. Bundan sonra antijenik eritrosit diagnostiği eklenir. Karışım çalkalanır ve oda sıcaklığında bırakılır. Sonuçlar 3-4 saat sonra ve son olarak 18-24 saat sonra dikkate alınır.Test materyali antijen içeriyorsa antikorları bağlayacak (onları nötralize edecek) ve dolayısıyla hemaglutinasyon oluşmayacaktır.

Antijen nötralizasyon reaksiyonu (RNAg) aynı prensip kullanılarak gerçekleştirilir. Sadece bu durumda test materyalinde antikorlar tespit edilir. Böyle bir test malzemesine eklenen spesifik bir antijen, içinde bulunan antikorlara bağlanacaktır, yani antijenin antikorlar tarafından nötrleştirilmesi meydana gelecek ve bu nedenle, bir antikor eritrosit diagnostiği eklenirken hemaglutinasyon meydana gelmeyecektir.

Pıhtılaşma reaksiyonu. Antikor taşıyan hücrelerin aracılık ettiği cam üzerinde pasif, yani hızlandırılmış aglütinasyon reaksiyonu için seçeneklerden biridir. Bu reaksiyon benzersiz bir özelliğe dayanmaktadır Stafilokok aureus Hücre duvarında protein A içeren IgG ve IgM'nin Fc fragmanlarına bağlanır. Bu durumda antikorların aktif merkezleri serbest kalır ve antijenlerin spesifik belirleyicileri ile etkileşime girebilir. Uygun antikorlarla duyarlı hale getirilmiş bir damla %2'lik stafilokok süspansiyonu bir cam slayta uygulanır ve incelenen bakteri süspansiyonundan bir damla eklenir. Antijen antikorlarla eşleşirse, antikor yüklü stafilokoklarda 30-60 saniye içinde net bir aglütinasyon meydana gelir.

Lateks aglütinasyon reaksiyonu (LAR). Bu teşhis sistemindeki antikorların taşıyıcısı küçük standart lateks parçacıklarıdır. Reaksiyon cam üzerindeki kuyucuklarda mikro yöntem kullanılarak gerçekleştirilir. PAH'ın başarılı evrelemesinin ana koşulu, sistem bileşenlerinin kantitatif oranlarına sıkı sıkıya bağlı kalmaktır: 50 ul test materyaline antikorlarla duyarlılaştırılmış 10 ul lateks preparatı eklenir. PAH'ın özgüllüğü, ticari test sistemlerinde yer alan üç kontrol testi kullanılarak kontrol edilir: bilinen olumlu tepki, test materyali ile PAH'a duyarlı olmayan (antikor taşımayan) lateksler için lateks süspansiyonunun açıkça negatif reaksiyonu ve kalite kontrolü. Ülkemizde spesifik antikorların taşıyıcısı olarak farklı partikül çaplarına (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 μm) sahip polistiren monodispers lateksler kullanılmaktadır. LAG, test materyalindeki mikroorganizmaların veya antijenlerinin hızlı tespiti için kullanılır.

Antijenlerin immünomanyetik tespiti. Cam üzerinde hızlandırılmış aglütinasyon reaksiyonuna yönelik seçeneklerden biri, spesifik antikorlarla kaplanmış süpermanyetik polimer parçacıklarının kullanılmasıyla ilişkilidir. Böyle bir parçacık, hassasiyet nedeniyle 107-108 mikroorganizma hücresine bağlanır. Bu method 5 CFU/ml'ye ulaşır. Mikroorganizmaların immünomanyetik tespiti CPR ile birlikte kullanılabilir.

Agrega hemaglutinasyon reaksiyonu (AHA). Hastaların kanında hem serbestçe dolaşan antijenleri (antijenemi) hem de antikorlarla ilişkili antijenleri - dolaşımdaki bağışıklık komplekslerini (CIC) hızlı bir şekilde tespit etmenizi sağlar. RAHA için uygun antikorlarla duyarlı hale getirilmiş kırmızı kan hücreleri kullanılır. Antijen içeren hastanın kan serumunun, antikorların sabitlendiği duyarlılaştırılmış eritrositlere eklenmesi, eritrositlerin ve bağışıklık komplekslerinin yapışmasına (aglutinasyona) yol açar.

Antiglobulin Coombs testi (R. Coombs reaksiyonu). Tam (iki değerlikli) antikorlar, doğrudan ve pasif aglütinasyon reaksiyonları kullanılarak belirlenir. Eksik (tek değerlikli, bloke edici) antikorlar, antijenle birleştiklerinde onu bloke ettikleri, ancak antijenin büyük kümeler halinde toplanmasına neden olamadıkları için bu yöntemlerle tespit edilmez. Eksik (bloke edici) antikorlar, yalnızca bir aktif merkezin işlev gördüğü antikorlardır; ikinci aktif merkez bilinmeyen bir nedenden dolayı çalışmıyor. Eksik antikorları tespit etmek için özel bir Coombs reaksiyonu kullanılır (Şekil 72). Reaksiyon şunları içerir: eksik antikorların belirlendiği hasta serumu, korpüsküler antijen-diagnostikum, insan globulinine karşı antikorlar içeren antiglobülin serumu. Reaksiyon iki aşamada gerçekleşir:

Antijenin eksik antikorlarla etkileşimi. Görünür hiçbir tezahür yoktur. Hastanın kalan serumundan antijenin yıkanması ile ilk aşama tamamlanır.

Bir hayvanın insan globulini ile immünizasyonu sonucu elde edilen antiglobulin serumunun, antijen üzerine adsorbe edilmiş eksik antikorlarla etkileşimi. Antiglobulin antikorlarının iki değerlikli olması nedeniyle, ayrı AG + komplekslerinden oluşan iki tek değerlikli antikora bağlanırlar. eksik antikor bu da onların yapışmasına ve görünür tortunun ortaya çıkmasına neden olur.

Aglütinasyon, bir elektrolit (izotonik sodyum klorür çözeltisi) varlığında antikorların etkisi altında mikropların veya diğer hücrelerin yapıştırılması ve çökeltilmesidir. Yapıştırılmış bakteri (hücre) gruplarına aglütinat denir. Aglütinasyon reaksiyonu için aşağıdaki bileşenler gereklidir:

1. Hasta veya bağışıklık kazanmış bir hayvanın serumunda bulunan antikorlar (aglutininler).

2. Antijen - yaşayan veya öldürülmüş mikropların, kırmızı kan hücrelerinin veya diğer hücrelerin bir süspansiyonu.

3. İzotonik (%0,9) sodyum klorür çözeltisi.

Serodiyagnoz için aglütinasyon testi şu amaçlarla kullanılır: Tifo ve paratifo ateşi (Vidal reaksiyonu), bruselloz (Wright ve Heddleson reaksiyonu), tularemi vb. Antikor hastanın serumudur, antijen ise bilinen bir mikroptur. Mikropları veya diğer hücreleri tanımlarken antijen olarak bunların süspansiyonu kullanılır ve antikor olarak bilinen bir bağışıklık serumu kullanılır. Bu reaksiyon teşhis amacıyla yaygın olarak kullanılmaktadır. bağırsak enfeksiyonları, boğmaca öksürüğü vb.

RA evreleme yöntemleri

Cam üzerinde yaklaşık RA

Dağıtılan RA

(hacim yöntemi)

Pıhtılaşma reaksiyonu

Cam üzerinde açılmış RA (serotanımlama)

Camda aglütinasyon reaksiyonu. Yağsız bir cam slayta iki damla spesifik (adsorbe edilmiş) serum ve bir damla izotonik sodyum klorür çözeltisi uygulanır. Adsorbe edilmemiş serumlar 1:5 - 1:100 oranında önceden seyreltilir. Aralarında mesafe olacak şekilde cama damlalar uygulanmalıdır. Kültür, bir öze veya pipetle cam üzerinde iyice öğütülür ve daha sonra bir damla izotonik sodyum klorür çözeltisine ve serum damlalarından birine eklenir, her biri homojen bir süspansiyon oluşana kadar karıştırılır. Kültürsüz bir damla serum, serum kontrolüdür.

Dikkat! Kültürü serumdan, antijen kontrolü görevi gören bir damla izotonik sodyum klorür çözeltisine aktaramazsınız. Reaksiyon oda sıcaklığında 1-3 dakika süreyle gerçekleştirilir. Serum kontrolü şeffaf kalırsa, antijen kontrolünde tek biçimli bir bulanıklık gözlenirse ve kültürün serumla berrak bir sıvı arka planına karşı karıştırıldığı damlada aglütinat pullar ortaya çıkarsa, reaksiyon sonucu pozitif kabul edilir.

Teşhis Fizyolojik

serum + kültür çözeltisi + kültür

Ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu (hacim yöntemi). Serumun seri, çoğunlukla iki katlı dilüsyonları hazırlanır. Yönteme hacimsel denir. Kan serumundaki antikor titresini belirlemek için 6 tüp alın. İlk test tüpüne 1 ml orijinal serum seyreltisinden 1:50 dökün ve dereceli bir pipet kullanarak 6 test tüpünün tümüne 1 ml salin solüsyonu ekleyin. İlk test tüpü, 2 ml hacimde 1:100 oranında serum dilüsyonu sağlayacaktır. Birinci test tüpünden 1 ml'yi ikinci test tüpüne aktarın; burada seyreltme 1:200 olacaktır. Bu nedenle, ilk 5 test tüpünde (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) serumun bir dizi seri seyreltmesini yapın. Beşinci test tüpünden dezenfektan solüsyonuna 1 ml dökün. 6 test tüpünün tamamına 2 damla diagnostik ekleyin. Altıncı tüp, yalnızca salin solüsyonu ve diagnostikum içerdiğinden bir kültür kontrolüdür.

Bu tür bir kontrol, kültürün kendiliğinden aglütinasyonunu dışlamak için gereklidir. Tüpler çalkalanır ve 37°C sıcaklıktaki bir termostata 2 saat süreyle yerleştirilir ve ardından bir gün oda sıcaklığında bırakılır, ardından aglütinasyon reaksiyonunun sonuçları kaydedilir. Yaşamın ilk aylarında çocukların serumlarıyla aglütinasyon reaksiyonu yapılırken, antikor oluşumunun fonksiyonel yetersizliği nedeniyle, serumu seyreltirken dikkate alınan daha düşük antikor titrelerinin belirlenmesi gerekir. Başlangıçtaki serum dilüsyonu 1:25'tir. İlk test tüpünde 1:50, ardından 1:100 vb. seyreltme elde edilir.

Şu tarihte: olumlu sonuç Test tüplerindeki reaksiyonlar, tanecikler veya pullar şeklindeki yapışkan hücreler, berrak bir sıvının arka planında görülebilir. Aglütinat yavaş yavaş bir “şemsiye” şeklinde dibe çöker ve tortunun üzerindeki sıvı berraklaşır. Antijen kontrolü eşit şekilde bulanıktır.

Tortunun doğasına bağlı olarak ince ve kaba taneli (pul pul) aglütinasyon ayırt edilir. O-sera ile çalışırken ince taneli aglütinasyon elde edilir. İri taneli - hareketli mikroplar flagellar H-sera ile etkileşime girdiğinde. İnce taneli olandan daha hızlı oluşur ve ortaya çıkan tortu çok gevşektir ve kolayca kırılır.

Reaksiyonun yoğunluğu şu şekilde ifade edilir:

Tüm hücreler yerleşmiştir, test tüpündeki sıvı tamamen şeffaftır. Reaksiyonun sonucu son derece olumlu;

Daha az tortu var, sıvı tamamen berraklaşmıyor. Reaksiyonun sonucu olumludur;

Daha da az tortu var, sıvı daha bulanık. Reaksiyonun sonucu şüphelidir;

Test tüpünün dibinde hafif bir tortu var, sıvı bulanık. Şüpheli reaksiyon sonucu;

Tortu yok, sıvı antijen kontrolünde olduğu gibi tekdüze bulanık. Negatif reaksiyon sonucu

Aglütinasyon reaksiyonu Aglütinasyon reaksiyonu

(RA) - tanımlama ve tanımlama yöntemi nicelik belirleme Ag ve At, çıplak gözle görülebilen topaklanmalar oluşturma yeteneklerine dayanmaktadır. Bulaşıcı hastalıklar bölümünde. hastalıklarda veya başka amaçlarla bilinmeyen mikropları ve hücreleri tanımlamak, kan ve diğer sıvılarda Ab varlığını ve miktarını belirlemek için kullanılır. Belirleme ilkesi Ag ve Ab arasındaki etkileşimin özgüllüğüne dayanır ve bilinmeyenden bilineni bulmayı içerir. RA için birçok seçenek vardır: niceliksel ve niteliksel, test tüpü ve cam, hacimsel ve damlacık, geleneksel, hızlandırılmış ve ekspres yöntemler. RA'yı evrelemek için ihtiyacınız olan: 1) s-ka kan. Bakteri tipinin (var) belirlenmesine yönelik varyantta, tavşanların immünizasyonuyla üretilen endüstriyel aglütinasyon testleri kullanılır. Ab tipinin belirlendiği varyantta testten kan örneği alınır. insanlar veya hayvanlar. Çözelti steril olmalı ve asılı parçacıklardan arındırılmış olmalıdır. Temel seyreltmeyi salin solüsyonunda hazırlayın. Bu hastalığın tanısal titresinden 2-4 kat daha düşük olmalıdır; 2) Ag. Ab tipinin belirlendiği reaksiyonun versiyonunda endüstriyel teşhis kitleri kullanılır; Ag'nin belirlendiği varyantta, teşhisler, 18-20 saatlik agar (daha az sıklıkla et suyu) testinin tuzlu çözeltisinde 1-3 milyar süspansiyon şeklinde kendileri hazırlanır. mikrop, 70°C'de bir su banyosunda 1 saat ısıtılarak veya formaldehitle 37°C'de 24 saat inkübasyonla etkisiz hale getirilir (nihai konsantrasyon %0,2); 3) tuzlu su çözeltisi formunda elektrolit. Evreleme tekniği hacimsel seri tüp S-ki'de Ab titresini belirlemek için RA: s-ki'nin ana seyreltisinden birkaç sıra çalışma seyreltisi hazırlanır. Satır sayısı, deneye alınan teşhislerin sayısına bağlıdır; sayı ve seyreltme faktörleri, şüphelenilen hastalığın teşhis titresine göre belirlenir. Seri en azından tanısal Ab titresine karşılık gelen bir dilüsyon, bunun altında iki dilüsyon ve üstünde iki dilüsyon içermelidir. örneğin, teşhis titresi 1:100 ise, RA evrelemesinin hacimsel yöntemiyle aşağıdaki dilüsyonlar hazırlanmalıdır: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; damlama ile Yöntemde, ilk seyreltmeye (1:25) gerek yoktur, ancak daha yüksek bir seyreltmeye (1:800) ihtiyaç vardır. bilimsel araştırma s-ku negatif reaksiyona titre edilir. Aşağıdaki şekilde seyreltilir: Reaksiyon 0,5 ml'lik bir hacimde gerçekleştirildiğinde 1'inci hariç tüm test tüplerine 0,25 ml tuzlu su çözeltisi, reaksiyon 1'lik bir hacimde gerçekleştirilirken 0,5 ml dökülür. ml. 1. ve 2. test tüplerine, 2. test tüpünden 0,25 (0,5) ml ana seyreltiyi kesilen hacme dökün ve üreme s-k ve 2 kat arttırılarak 0,25 (0,5) ml 3'e, 3'ten 4'e vb. aktarılır. sonuncuya kadar hacimleri dengelemek için kesimden itibaren her şeye 0,25 (0,5) ml dökülür. Her seyreltme ayrı bir pipet kullanılarak gerçekleştirilir. Deneye birden fazla diagnostik alınırsa, her biri için aynı şekilde kendi seyreltme serileri hazırlanır. Test tüpünün her seyreltilmesine, test tüpünün hacmine eşit bir hacimde Diagnosticum eklenir, bunun sonucunda her test tüpündeki seyreltme iki katına çıkar. Deney, s-ki kontrolüne (0,25 - 0,5 ml s-ki ana seyreltisinin ve aynı miktarda salin solüsyonu) ve Ag kontrolüne (0,25 - 0,5 ml diagnostikum ve aynı miktarda salin solüsyonunun) karşılık gelir. Deneyde birden fazla teşhis kullanılıyorsa, her birinin kendi antijen kontrolü vardır. Test tüplerinin bulunduğu raf iyice çalkalanır ve 37°C'deki bir termostata 4 saat süreyle yerleştirilir ve ardından ertesi güne kadar oda sıcaklığında bırakılır, ardından çökelti miktarı ve temizlenme derecesine göre PA kaydedilir. sıvı. Bu göstergelerin belirlenmesi, aglütinatların doğasına bağlı olarak, çıplak gözle, karanlık bir arka plan üzerinde, aglütinoskopta veya mikroskop aynasının içbükey yüzeyi üzerinde gerçekleştirilir. Muhasebe kontrollerle başlar: Kontrol C şeffaf olmalı, Ag tekdüze bulanık olmalıdır (tüpü çalkaladıktan sonra). Kontroller iyiyse, tüm test tüplerinde artılarla belirtilen aglütinasyonun varlığını ve derecesini belirleyin: büyük tortu ve sıvının tamamen temizlenmesi - 4 artı; büyük tortu ve sıvının eksik temizlenmesi - 3 artı; gözle görülür tortu ve sıvının gözle görülür şekilde temizlenmesi 2 artıdır. Bundan sonra titre belirlenir: en az 2 artı aglütinasyon yoğunluğuna sahip en yüksek seyreltme. Titre araştırması s-ki bu hastalığın tanısal titresi ile karşılaştırılır. Titre incelenirse. s-ki tanısal değerden 2 kat daha düşükse reaksiyon şüpheli olarak değerlendirilir; titre eşitse teşhis - nasıl zayıf pozitif; 2-4 kat daha yüksekse pozitif, 8 veya daha fazla ise keskin pozitif kabul edilir. Ab'nin yaygın dağılımı ile sağlıklı insanlar RA'yı değerlendirmek için Ab titresindeki bir artış kullanılır. Seri RA'daki Ar tipini belirlemek için satır sayısı, tanımlama için alınan sayıya karşılık gelmelidir teşhis testleri. Diagnostik testin ana dilüsyonundan, Ab titresini belirlemek için RA'da olduğu gibi bir dizi ardışık iki kat dilüsyon hazırlanır. Seyreltme faktörleri aglütinasyon testinin titresine bağlıdır.Deneyde, testin titresine eşit bir seyreltmenin yanı sıra bundan 2, 4, 6, 8 kat daha düşük bir seyreltmenin varlığı gereklidir. tanısal testin titresi 1 3200 ise, 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 dilüsyonlarını kullanmalısınız. Test dilüsyonlarına aynı hacimde test edilen Ag eklenir, bunun sonucunda test 2 kat artar. Deneye 2 kontrol test ve Ag eklenir. Deneyde birden fazla S-k yer alıyorsa her birinin kendi kontrolüne ihtiyacı vardır. Reaksiyonun tamamlanmasının ardından stand kuvvetlice çalkalanır ve yerine yerleştirilir. 37 °C'de bir termostatta.Sonuçlar yukarıda açıklandığı gibi dikkate alınır.Reaksiyonun değerlendirilmesi özellikleri vardır.Çalışmanın uygunluğu hakkında bir sonuç çıkarmak için. Deneye alınan Ag'nin reaksiyonunun titresi, standart teşhis testinin titresinin en az yarısına karşılık gelmelidir.1 4 ve altındaki titreler grup reaksiyonu olarak kabul edilir. Damla md RA'nın evrelemesi, s-ku'nun 1 ml'lik bir hacimde seyreltilmesi, Ag'nin daha yüksek bir konsantrasyonda (10 milyar/ml) kullanılması ve 1 eklenmesiyle hacimselden farklıdır. - 2 bir test tüpüne düşer Ag eklendikten sonra ilacın seyreltilmesi değişmemiş olarak kabul edilir, aksi takdirde ayarlama, kaydetme ve değerlendirme yöntemi hacimsel yönteme benzer

(Kaynak: Mikrobiyoloji Terimleri Sözlüğü)

Aglütinasyon reaksiyonu (lat. aglütinasyon- yapıştırma) - elektrolitlerin varlığında korpüsküllerin (bakteri, kırmızı kan hücreleri vb.) antikorlar tarafından yapıştırılması.

Aglütinasyon reaksiyonu Antikorlar tarafından "birbirine yapıştırılmış" parçacıklardan (örneğin bakterilerden) oluşan pullar veya tortular şeklinde kendini gösterir (Şekil 7.37). Aglütinasyon reaksiyonu şu amaçlarla kullanılır: hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi; hastanın kan serumundaki antikorların belirlenmesi; kan gruplarının belirlenmesi.

Pirinç. 7.37a,b. ile aglütinasyon reaksiyonuIgM-antikorlar (a) veIgG-antikorlar (b)

1. Hastadan izole edilen patojenin belirlenmesi Yaklaşık reaksiyon cam üzerinde aglütinasyon (Şekil 7.38). Hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu, bir damla aglütinasyon serumuna (1:20 seyreltme) eklenir. Topaklı bir çökelti oluşur.

Pirinç. 7.38.

Bir hastadan izole edilen bir patojenle kapsamlı bir aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Hastadan izole edilen bir bakteri süspansiyonu aglütinasyon serumunun seyreltilerine eklenir.

Pirinç. 52

2. Hastanın kan serumunda antikorların belirlenmesi
Hastanın kan serumu ile ayrıntılı aglütinasyon reaksiyonu (Şekil 7.39). Hasta serumunun seyreltilerine Diagnosticum eklenir.
- O-diagnosticum ile aglütinasyon (ısı ile öldürülen, O-antijeni tutan bakteri) ince taneli aglütinasyon şeklinde meydana gelir.
- H-diagnosticum ile aglütinasyon (kamçılı H-antijenini koruyan, formaldehit tarafından öldürülen bakteri) büyüktür ve daha hızlı gerçekleşir.
3. Kan gruplarının belirlenmesi için aglütinasyon reaksiyonu Kan gruplarını belirlemek için aglütinasyon reaksiyonu, eritrositlerin kan grubu antijenleri A (I), B (III)'e karşı immün serum antikorları ile aglütinasyonunu kullanarak ABO sistemini oluşturmak için kullanılır (Tablo b). Kontrol: antikor içermeyen serum, yani. serum AB (IV) kan grubu; A (II), B (III) gruplarının kırmızı kan hücrelerinde bulunan antijenler. Negatif kontrol antijen içermez, yani grup O(I) eritrositler kullanılır.

Tablo 7.6. ABO kan gruplarının belirlenmesi