Mājas Pulpīts Diagnostiskā aglutinācijas reakcija. Aglutinācijas reakcija

Pulpīts

Diagnostiskā aglutinācijas reakcija. Aglutinācijas reakcija

Aglutinācijas reakcijas pamatā ir specifiska antivielu (aglutinīnu) mijiedarbība ar veselām mikrobu vai citām šūnām. Šīs mijiedarbības rezultātā veidojas aglomerāta daļiņas, kas izgulsnējas (aglutina). Aglutinācijas reakcijā var piedalīties baktērijas, vienšūņi, sēnītes, raugs, riketsija, eritrocīti un citas šūnas, gan dzīvas, gan nogalinātas. Reakcija notiek divās fāzēs: pirmā ir specifiska antigēna un antivielu kombinācija, otrā ir nespecifiska, t.i., veidojas redzams aglutināts. Aglutināta nogulsnēšanās notiek elektrolītu, piemēram, nātrija hlorīda, klātbūtnē. Aglutinātā esošie mikroorganismi paliek dzīvi, bet zaudē savu mobilitāti.

Aglutinācijas reakciju plaši izmanto infekcijas slimību seroloģiskai diagnostikai un izolētu mikrobu antigēnās struktūras noteikšanai. No pacienta vai nesēja ķermeņa izolēta patogēna antigēnās struktūras noteikšanai tiek izmantots specifisks imūnserums, kas iegūts, imunizējot dzīvniekus (trušus, ēzeļus, aitas) ar noteiktiem mikroorganismiem. Mikroba identifikāciju veic aglutinācijas reakcijā uz stikla ar adsorbētiem vai monoreceptoru serumiem vai mēģenēs ar specifiskiem aglutinējošiem serumiem. Adsorbētie serumi satur antivielas tikai pret konkrētam mikrobam raksturīgiem antigēniem, bet monoreceptoru serumi satur antivielas tikai pret vienu specifisku patogēna antigēnu.

Sugas serumi satur antivielas pret visiem konkrēta mikroba antigēniem.

Vai izolētā mikroorganismu kultūra pieder šī suga nosaka, aglutinējot ar zināmu serumu līdz antivielu titram, kas norādīts uz seruma ampulas etiķetes. Seruma antivielu titrs tiek uzskatīts par tā pēdējo atšķaidījumu, kurā joprojām tiek novērota dzīvnieka imunizācijai izmantoto mikrobu kultūras aglutinācija. Adsorbētie un monoreceptoru serumi parasti tiek izmantoti neatšķaidītā veidā stikla aglutinācijas reakcijā.

Nosakot antivielu klātbūtni pacienta asins serumā, to atšķaida ar izotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, sākot ar atšķaidījumu no 1:50 līdz 1:800 vai vairāk. Katram atšķaidījumam pievieno dzīvu vai nogalinātu mikrobu suspensiju. Preparātus, kas satur mikrobus, kurus iznīcina karstums vai formaldehīds, sauc par diagnostikas līdzekļiem. Diagnostikas, kas iegūtas, sildot mikroorganismu kultūras, satur tikai somatiskos antigēnus. Lietojot tikai formaldehīdu, mikrobi saglabā savus flagellas antigēnus.

Ja pacienta asinīs ir antivielas, reakcijā ņemtā diagnostikas viela salīp kopā un uz divām mēģenēm veidojas nogulsnes (aglutināts). Šajā gadījumā aglutinācijas reakcijas rezultāti tiek uzskatīti par pozitīviem. Kontroles mēģenē, kurā pievienots izotoniskais nātrija hlorīda šķīdums un diagnostikas līdzeklis, mikrobu suspensijai jābūt viendabīgai (negatīva aglutinācijas reakcija).

Aglutinācijas reakcijas rezultāti dažu slimību, piemēram, leptospirozes, gadījumā tiek ņemti vērā tikai mikroskopiski tumšā mikroskopa redzes laukā (mikroaglutinācija). Lai noteiktu slimības seroloģisko diagnozi, jāņem vērā diagnostikas slimība. Parasti tas atbilst seruma atšķaidījumam 1:100 vai 1:200.

Antivielas pacienta asins serumā var noteikt, izmantojot aglutinācijas reakciju vēdertīfa un paratīfa (Vidal reakcija), brucelozes (Raita reakcija), tularēmijas u.c. gadījumos.
Kastelāni reakcija. Dažiem infekcijas slimības vai imunizācija ar mikroorganismiem, kas satur grupas antigēnus, asins serumā papildus konkrētajam tipam specifiskām antivielām parādās arī grupu antivielas. Šajā gadījumā radniecīgās baktēriju sugas tiks aglutinētas ar iegūtajiem serumiem.

Castellani ierosināja metodi grupu antivielu adsorbcijai no imūnserumiem, pamatojoties uz to izņemšanu ar radniecīgu sugu mikroorganismu palīdzību, kuriem ir grupas antigēni, bet trūkst specifisku. Šādu mikroorganismu kultūra, kas pievienota serumam, adsorbē nespecifiskās grupas antivielas, un pēc antigēna-antivielu kompleksa noņemšanas ar centrifugēšanu serumā paliek tikai specifiski imūnglobulīni. Serumus, kas apstrādāti pēc Castellani metodes, var izmantot aglutinācijas reakcijā kā ļoti specifiskus.

Aglutinācija ir baktēriju salīmēšana specifisku AT mijiedarbības rezultātā ar tām. Lai veiktu RA, ir nepieciešami trīs komponenti: 1) AG (aglutinogēns); 2) AT (aglutinīns); 3) elektrolīta šķīdums (izotoniskais nātrija hlorīda šķīdums). Aglutinācijas reakcijā piedalās tikai korpuskulārie antigēni (baktērijas, sarkanās asins šūnas, ar antigēnu iekrautas lateksa daļiņas).

Aglutinācijas reakcija uz stikla. Uzlieciet pilienu uz beztauku stikla priekšmetstikliņa, izmantojot pipeti. diagnostikas serums(seruma atšķaidījums 1:10 - 1:20). Izmantojot bakterioloģisko cilpu, no slīpā agara virsmas ņem pētāmā mikroorganisma tīrkultūru, pārnes uz seruma pilienu un sajauc. Reakcijas rezultāts tiek ņemts vērā ar neapbruņotu aci pēc 3-5 minūtēm. Ja reakcija ir pozitīva, seruma pilē tiek novērotas pārslas (lielas vai mazas), kas skaidri redzamas uz tumša fona, kad priekšmetstikliņu sakrata. Negatīvās reakcijas gadījumā šķidrums paliek vienmērīgi duļķains.

Aglutinācijas reakcija mēģenēs. Mēģenīšu rindai pievieno 1 ml fizioloģiskā šķīduma. Pirmajai mēģenei pievieno vienādu daudzumu pārbaudāmā asins seruma. Tiek sagatavoti sērijveida divkārši seruma atšķaidījumi (seruma titrēšana), pēc tam katrā mēģenē pievieno 2 pilienus inaktivētu baktēriju suspensijas (diagnosticum). Caurules ievieto termostatā 37 °C uz 2 stundām. Reakcija norisinās, veidojot mazas, ar neapbruņotu aci neredzamas pārsliņas, tāpēc rezultāti tiek fiksēti ar nelielu palielinājumu īpašā ierīcē – aglutinoskopā. Aglutinācijas intensitāte tiek ņemta vērā pēc “četri plus” sistēmas: pilnīga aglutinācija - 4+, daļēja aglutinācija - 3+ vai 2+, apšaubāms rezultāts - +. Pēdējais atšķaidījums, kurā tiek novērota aglutinācija 2+, tiek ņemts par antivielu titru testa serumā.

Tiek veikta aglutinācijas reakcija mēģenēs (plaša aglutinācijas reakcija), lai noteiktu antivielu titru pret vēdertīfa un paratīfa (Vidal reakcija), brucelozes (Raita reakcija) un tīfa (Veigla reakcija) izraisītājiem.

Aglutinācija (no latīņu valodas agglutinatio — līmēšana) ir antigēnu saturošu korpuskulāro daļiņu (veselu šūnu, lateksa daļiņu u.c.) salīmēšana (savienošana) ar specifisku antivielu molekulām elektrolītu klātbūtnē, kas beidzas ar pārslu vai nogulumu veidošanos. (aglutināts), kas redzams ar neapbruņotu aci. Sedimentu raksturs ir atkarīgs no antigēna rakstura: kažokādas baktērijas rada rupjus flokulentus nogulsnes, ar kauliņiem un nekapsulāras baktērijas rada smalkgraudainus nogulumus, bet kapsulārās baktērijas rada stīgas nogulsnes. Izšķir tiešo aglutināciju, kurā baktēriju vai jebkuras citas šūnas, piemēram, eritrocītu, pašu antigēni tieši piedalās mijiedarbībā ar specifiskām antivielām; un netiešās jeb pasīvās, kurās baktēriju šūnas vai eritrocīti, vai lateksa daļiņas ir ne pašu, bet svešu antigēnu (vai antivielu) nesēji, kas uz tiem ir sorbēti, lai identificētu tām specifiskās antivielas (vai antigēnus). Aglutinācijas reakcija galvenokārt ietver antivielas, kas pieder IgG un IgM klasēm. Tas notiek divās fāzēs: pirmkārt, notiek specifiska antivielu aktīvā centra mijiedarbība ar antigēna noteicēju; šī stadija var notikt, ja nav elektrolītu, un to nepavada. redzamas izmaiņas reaģēšanas sistēma. Otrajam posmam - aglutināta veidošanai - nepieciešama elektrolītu klātbūtne, kas samazina elektriskais lādiņš antigēnu + antivielu kompleksus un paātrina to līmēšanas procesu. Šī fāze beidzas ar aglutināta veidošanos.

Aglutinācijas reakcijas veic vai nu uz stikla vai gludām kartona plāksnēm, vai sterilās aglutinācijas mēģenēs. Aglutinācijas reakcijas (tiešās un pasīvās) uz stikla parasti izmanto kā paātrināta metode specifisku antivielu noteikšana pacienta serumā (piemēram, ar brucelozi) vai patogēna seroloģiskai identificēšanai. Pēdējā gadījumā parasti izmanto labi attīrītus (adsorbētus) diagnostikas serumus, kas satur tikai monoreceptoru antivielas vai to komplektu pret dažādiem antigēniem. Stikla aglutinācijas reakcijas neapšaubāmā priekšrocība ir tās īstenošanas vienkāršība un fakts, ka tas aizņem vairākas minūtes vai pat sekundes, jo abas sastāvdaļas tiek izmantotas koncentrētā veidā. Tomēr tai ir tikai kvalitatīva vērtība, un tā ir mazāk jutīga nekā mēģene. Plašāka aglutinācijas reakcija mēģenēs dod precīzākus rezultātus, jo ļauj noteikt kvantitatīvo antivielu saturu serumā (noteikt tā titru) un nepieciešamības gadījumā reģistrēt antivielu titra pieauguma faktu, kam ir diagnostiska vērtība. . Lai izveidotu reakciju, pievieno serumu, kas noteiktā veidā atšķaidīts ar 0,85% NaCl šķīdumu, un vienādu tilpumu (parasti 0,5 ml) standarta diagnostikas (vai testa kultūras) suspensijas, kas satur 1 miljardu baktēriju 1 ml. aglutinācijas caurules. Aglutinācijas reakcijas rezultātus reģistrē vispirms pēc 2 stundu ilgas stobriņu inkubācijas 37 °C temperatūrā un visbeidzot pēc 20–24 stundām saskaņā ar diviem kritērijiem: nogulšņu klātbūtni un lielumu un supernatanta šķidruma caurspīdīguma pakāpi. Vērtēšana tiek veikta pēc četru krustu sistēmas. Reakciju obligāti papildina seruma un antigēna kontrole. Gadījumos, kad patogēna seroloģiskai identificēšanai tiek veikta detalizēta aglutinācijas reakcija mēģenē, tai ir diagnostiskā vērtība, ja reakcija novērtēta kā pozitīva, ja diagnostiskais serums ir atšķaidīts vismaz līdz pusei no tā titra.

Jāņem vērā, ka, sajaucot homologu antigēnu un antivielu šķīdumus, ne vienmēr tiek novērotas redzamas aglutinācijas reakcijas izpausmes. Nogulsnes veidojas tikai pie noteiktām optimālām abu reakcijas komponentu attiecībām. Ārpus šīm robežām, ja ir ievērojams antigēna vai antivielu pārpalikums, reakcija netiek novērota. Šo parādību sauc par "prozona fenomenu". To novēro gan aglutinācijas reakcijā, gan nokrišņu reakcijā. Prozona parādīšanās imūnreakcijās ir izskaidrojama ar to, ka tajās iesaistītie antigēni, kā likums, ir polideterminanti, un molekulas IgG antivielas ir divi aktīvi centri. Ar antivielu pārpalikumu katras antigēna daļiņas virsma tiek pārklāta ar antivielu molekulām, lai nepaliktu brīvas determinantu grupas, līdz ar to otrs, nesaistītais antivielu aktīvais centrs nevar mijiedarboties ar citu antigēna daļiņu un saistīt tās viena ar otru. Redzama aglutināta vai nogulšņu veidošanās tiek nomākta arī tad, ja ir antigēna pārpalikums, kad nepaliek neviena brīva aktīvā antivielu centra, un līdz ar to antigēna + antivielas + antigēna kompleksi vairs nevar palielināties.

Iespējas paātrinātām aglutinācijas reakcijām. Reakcija pasīvā hemaglutinācija un tā varianti

Klasiskā aglutinācijas reakcija ietver korpuskulāro antigēnu izmantošanu. Tomēr var būt iesaistīti arī šķīstošie antigēni. Lai tas būtu iespējams, šādi antigēni tiek adsorbēti uz imunoloģiski inertām daļiņām. Par nesēju var izmantot lateksa vai bentonīta daļiņas, bet šobrīd visbiežāk tiek izmantoti dzīvnieku vai cilvēka eritrocīti, uzlabojot to adsorbcijas īpašības, apstrādājot tos ar tanīna, formalīna vai benzidīna šķīdumiem. Sarkanās asins šūnas, kas ir adsorbējušas antigēnu uz sevi, sauc par sensibilizētām ar šo antigēnu, un imūnā reakcija kurā tie piedalās, ir netieša vai pasīva hemaglutinācijas reakcija (IRHA jeb RPHA), jo sarkanās asins šūnas tajā piedalās pasīvi.

RPGA tiek ievietota īpašās polistirola plāksnēs ar caurumiem ar puslodes formu. Lietojot to priekš seroloģiskā diagnostikaŠajās iedobēs fizioloģiskā šķīdumā sagatavo divkāršus testa seruma atšķaidījumus, un pēc tam tam kā diagnostikas līdzekli pievieno sensibilizētu eritrocītu suspensiju. Rezultātus reģistrē pēc 2 stundu inkubācijas 37 °C temperatūrā, izmantojot četru krustu sistēmu. Ar pozitīvu reakciju aglutinētie sarkanie asinsķermenīši nosēžas cauruma apakšā un vienmērīgi pārklāj to apgriezta lietussarga veidā. Plkst negatīva reakcija arī sarkanās asins šūnas nosēžas, šķidrums kļūst caurspīdīgs, nogulsnes izskatās kā mazs “disks” cauruma centrā. Seruma titrs RPHA tiek uzskatīts par tā pēdējo atšķaidījumu, kas joprojām rada izteiktu hemaglutināciju bez būtiskām “diska” klātbūtnes pazīmēm.

RPGA var izmantot arī kā paātrinātu bakterioloģiskās diagnostikas metodi, lai tieši testa materiālā atklātu nezināmas baktērijas, vīrusus, toksīnus, piemēram, mēra patogēnus, stafilokoku enterotoksīnus utt. Izmantojot šo RPGA versiju, eritrocīti, kas ir adsorbēti, ir pazīstami ar savu specifiskumu izmanto kā zināmu reakcijas komponentu antivielas - antivielu eritrocītu diagnosticum. Ja testa materiāls satur pietiekamu daudzumu zināma antigēna, RPGA būs pozitīva.

RPHA izmantošanas iespējas ir: antigēna neitralizācijas reakcija (RNAg), antivielu neitralizācijas reakcija (RNAb), pasīvā hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija (PHA). Šīm reakcijām tiek izmantota antigēnu un antivielu eritrocītu diagnostika. Vienlaikus var izmantot divas savstarpēji kontrolējošas vienvirziena reakcijas, piemēram, RPHA ar antigēna diagnostiku un RNSg ar antivielu eritrocītu diagnostiku.

Antivielu neitralizācijas reakcija (RNSb) sastāv no suspensijas, kas satur vēlamo antigēnu, sajaukšanas ar specifisku imūnserumu, kas atbilstos tilpumos satur zināmas antivielas, un divas stundas inkubējot 37 °C temperatūrā. Pēc tam pievieno antigēnu eritrocītu diagnostikas līdzekli. Maisījumu sakrata un atstāj istabas temperatūrā. Rezultāti tiek ņemti vērā pēc 3-4 stundām un visbeidzot pēc 18-24 stundām.Ja testa materiāls satur antigēnu, tas saistīs antivielas (neitralizēs tās), un tāpēc hemaglutinācija nenotiks.

Antigēna neitralizācijas reakcija (RNSg) tiek veikta, izmantojot to pašu principu. Tikai šajā gadījumā testa materiālā tiek noteiktas antivielas. Šādam testa materiālam pievienots specifisks antigēns saistīsies ar tajā esošajām antivielām, t.i., notiks antigēna neitralizācija ar antivielām, un līdz ar to, pievienojot eritrocītu diagnostisko antivielu, nenotiks hemaglutinācija.

Koaglutinācijas reakcija. Tā ir viena no iespējām pasīvai, t.i., paātrinātai aglutinācijas reakcijai uz stikla, ko mediē antivielas nesošās šūnas. Šīs reakcijas pamatā ir unikāla īpašība Staphylococcus aureus, kura šūnu sieniņā satur proteīnu A, saistās ar IgG un IgM Fc fragmentiem. Šajā gadījumā antivielu aktīvie centri paliek brīvi un var mijiedarboties ar specifiskiem antigēnu determinantiem. Uz stikla priekšmetstikliņa uzklāj pilienu 2% stafilokoku suspensijas, kas sensibilizēta ar atbilstošām antivielām, un pievieno pilienu pētāmo baktēriju suspensijas. Ja antigēns sakrīt ar antivielām, 30-60 s laikā notiek skaidra ar antivielām piesātināto stafilokoku aglutinācija.

Lateksa aglutinācijas reakcija (LAR). Antivielu nesējs šajā diagnostikas sistēmā ir mazas standarta lateksa daļiņas. Reakciju veic, izmantojot mikrometodi stikla iedobēs. Galvenais nosacījums veiksmīgai PAH inscenēšanai ir stingra sistēmas komponentu kvantitatīvo attiecību ievērošana: 50 μl testa materiāla pievieno 10 μl lateksa preparāta, kas sensibilizēts ar antivielām. PAO specifiku kontrolē, izmantojot trīs kontroles testus, kas ietverti komerciālās testēšanas sistēmās: zināms pozitīva reakcija, acīmredzami negatīva reakcija un lateksa suspensijas kvalitātes kontrole PAH nesensibilizētiem (bez antivielām) lateksiem ar testa materiālu. Mūsu valstī kā specifisku antivielu nesēji tiek izmantoti polistirola monodispersie lateksi ar dažādu daļiņu diametru (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 μm). VVG izmanto mikroorganismu vai to antigēnu ātrai noteikšanai testa materiālā.

Antigēnu imūnmagnētiskā noteikšana. Viena no paātrinātas aglutinācijas reakcijas iespējām uz stikla ir saistīta ar supermagnētisku polimēru daļiņu izmantošanu, kas pārklātas ar specifiskām antivielām. Viena no šādām daļiņām saista līdz 107-108 mikroorganismu šūnām, kuru dēļ jutīgums šī metode sasniedz 5 KVV/ml. Mikroorganismu imūnmagnētisko noteikšanu var izmantot kombinācijā ar CPR.

Kopējā hemaglutinācijas reakcija (AHA). Ļauj ātri noteikt pacientu asinīs gan brīvi cirkulējošos antigēnus (antigēnēmiju), gan ar antivielām saistītos antigēnus – cirkulējošos imūnkompleksus (CIC). RAHA gadījumā izmanto sarkanās asins šūnas, kas sensibilizētas ar atbilstošām antivielām. Pacienta asins seruma, kas satur antigēnus, pievienošana sensibilizētiem eritrocītiem, uz kuriem ir fiksētas antivielas, noved pie eritrocītu un imūnkompleksu līmēšanas (aglutinācijas).

Antiglobulīna Kumbsa tests (R. Kumbsa reakcija). Pilnas (divalentās) antivielas tiek noteiktas, izmantojot tiešas un pasīvas aglutinācijas reakcijas. Nepilnīgas (monovalentas, bloķējošas) antivielas ar šīm metodēm netiek atklātas, jo, apvienojoties ar antigēnu, tās to bloķē, bet nevar izraisīt antigēna agregāciju lielos konglomerātos. Nepilnīgas (bloķējošas) antivielas ir tās, kurās darbojas tikai viens aktīvais centrs; otrais aktīvais centrs nezināma iemesla dēļ nedarbojas. Lai noteiktu nepilnīgas antivielas, tiek izmantota īpaša Kumbsa reakcija (72. att.). Reakcijā ietilpst: pacienta serums, kurā tiek noteiktas nepilnīgas antivielas, korpuskulārā antigēna diagnostika, antiglobulīna serums, kas satur antivielas pret cilvēka globulīnu. Reakcija notiek divos posmos:

Antigēna mijiedarbība ar nepilnīgām antivielām. Nav redzamu izpausmju. Pirmais posms tiek pabeigts, mazgājot antigēnu no pacienta atlikušā seruma.

Antiglobulīna seruma mijiedarbība, kas iegūta dzīvnieka imunizācijas rezultātā ar cilvēka globulīnu ar nepilnīgām antivielām, kas adsorbētas uz antigēna. Sakarā ar to, ka antiglobulīna antivielas ir divvērtīgas, tās saista divas monovalentas antivielas no atsevišķiem AG+ kompleksiem nepilnīga antiviela, kas noved pie to salīmēšanas un redzamu nogulumu parādīšanās.

Aglutinācija ir mikrobu vai citu šūnu līmēšana un izgulsnēšana antivielu ietekmē elektrolīta (izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma) klātbūtnē. Līmēto baktēriju (šūnu) grupas sauc par aglutinātiem. Aglutinācijas reakcijai ir nepieciešami šādi komponenti:

1. Antivielas (aglutinīni), kas atrodamas slima vai imūna dzīvnieka serumā.

2. Antigēns - dzīvo vai nogalinātu mikrobu, sarkano asins šūnu vai citu šūnu suspensija.

3. Izotonisks (0,9%) nātrija hlorīda šķīdums.

Aglutinācijas testu izmanto serodiagnostikai vēdertīfs un paratīfs (Vidal reakcija), bruceloze (Raita un Hedlesona reakcija), tularēmija utt. Antiviela ir pacienta serums, un antigēns ir zināms mikrobs. Identificējot mikrobus vai citas šūnas, to suspensiju izmanto kā antigēnu, bet zināmu imūnserumu izmanto kā antivielu. Šo reakciju plaši izmanto diagnostikā zarnu infekcijas, garo klepu utt.

RA inscenēšanas metodes

Aptuvenais RA uz stikla

Izvietots RA

(apjoma metode)

Koaglutinācijas reakcija

Atlocīts RA uz stikla (seridentifikācija)

Aglutinācijas reakcija uz stikla. Uz beztauku stikla priekšmetstikliņa uzklāj divus pilienus specifiska (adsorbēta) seruma un pilienu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Neadsorbētie serumi ir iepriekš atšķaidīti proporcijā 1:5 - 1:100. Uz stikla jāuzklāj pilieni, lai starp tiem būtu attālums. Kultūru rūpīgi samaļ uz stikla ar cilpu vai pipeti un pēc tam pievieno izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma pilienam un vienam no seruma pilieniem, katru maisot, līdz veidojas viendabīga suspensija. Seruma piliens bez kultūras ir seruma kontrole.

Uzmanību! Jūs nevarat pārnest kultūru no seruma uz izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma pilienu, kas kalpo kā antigēna kontrole. Reakcija notiek istabas temperatūrā 1-3 minūtes. Ja seruma kontrole paliek caurspīdīga, antigēna kontrolē tiek novērota vienmērīga duļķainība un pilē, kur kultūra tiek sajaukta ar serumu uz dzidra šķidruma fona, parādās aglutināta pārslas, reakcijas rezultāts tiek uzskatīts par pozitīvu.

Diagnostikas fizioloģiskais

serums + kultūras šķīdums + kultūra

Detalizēta aglutinācijas reakcija (tilpuma metode). Tiek sagatavoti sērijveida, visbiežāk divkārši, seruma atšķaidījumi. Šo metodi sauc par tilpuma metodi. Lai noteiktu antivielu titru asins serumā, ņem 6 mēģenes. Pirmajā mēģenē ielej 1 ml sākotnējā seruma atšķaidījuma 1:50 un pievieno 1 ml sāls šķīduma visās 6 mēģenēs, izmantojot graduētu pipeti. Pirmā mēģene dos seruma atšķaidījumu 1:100 ar tilpumu 2 ml. Pārnes 1 ml no pirmās mēģenes uz otro mēģeni, kur atšķaidījums kļūst 1:200. Tāpēc pirmajās 5 mēģenēs veiciet sērijveida seruma atšķaidījumu sēriju (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). No piektās mēģenes dezinficējošā šķīdumā ielej 1 ml. Visām 6 mēģenēm pievienojiet 2 pilienus diagnostikas. Sestā caurule ir kultūras kontrole, jo tajā ir tikai sāls šķīdums un diagnostikas līdzeklis.

Šāda kontrole ir nepieciešama, lai izslēgtu kultūras spontānu aglutināciju. Caurules sakrata un ievieto termostatā 37°C temperatūrā uz 2 stundām, pēc tam atstāj uz dienu istabas temperatūrā, pēc tam reģistrē aglutinācijas reakcijas rezultātus. Veicot aglutinācijas reakciju ar serumu bērniem pirmajos dzīves mēnešos, antivielu veidošanās funkcionālās nepilnības dēļ ir nepieciešams identificēt zemākus antivielu titrus, kas tiek ņemts vērā, atšķaidot serumu. Sākotnējais seruma atšķaidījums ir 1:25. Pirmajā mēģenē iegūst atšķaidījumu 1:50, pēc tam 1:100 utt.

Plkst pozitīvs rezultāts reakcijas mēģenēs, lipīgās šūnas graudu vai pārslu veidā ir redzamas uz dzidra šķidruma fona. Aglutināts pamazām nosēžas apakšā “lietussarga” formā, un šķidrums virs nogulumiem kļūst dzidrs. Antigēna kontrole ir vienmērīgi duļķaina.

Pamatojoties uz nogulumu raksturu, izšķir smalku un rupji graudainu (pārslveida) aglutināciju. Strādājot ar O-serumiem, tiek iegūta smalkgraudaina aglutinācija. Rupjgraudains - kad kustīgie mikrobi mijiedarbojas ar karogdziedzera H-serumiem. Tas rodas ātrāk nekā smalkgraudains, un rezultātā radušās nogulsnes ir ļoti irdenas un viegli saplīst.

Reakcijas intensitāti izsaka šādi:

Visas šūnas ir nosēdušās, šķidrums mēģenē ir pilnīgi caurspīdīgs. Reakcijas rezultāts ir asi pozitīvs;

Ir mazāk nosēdumu, šķidrums pilnībā neizdalās. Reakcijas rezultāts ir pozitīvs;

Nogulumu ir vēl mazāk, šķidrums ir duļķaināks. Reakcijas rezultāts ir apšaubāms;

Mēģenes apakšā ir nelielas nogulsnes, šķidrums ir duļķains. Apšaubāms reakcijas rezultāts;

Nav nosēdumu, šķidrums ir vienmērīgi duļķains, tāpat kā antigēna kontrolē. Negatīvs reakcijas rezultāts

Aglutinācijas reakcija Aglutinācijas reakcija

(RA) - identifikācijas metode un kvantitatīvā noteikšana Ag un At, pamatojoties uz to spēju veidot ar neapbruņotu aci redzamus aglomerātus. Infekcijas slimību nodaļā. slimībām vai citiem mērķiem izmanto nezināmu mikrobu un šūnu identificēšanai, Ab klātbūtnes un daudzuma noteikšanai asinīs un citos šķidrumos. Noteikšanas princips ir balstīts uz Ag un Ab mijiedarbības specifiku, un tas sastāv no zināmā atrašanas no nezināmā. RA ir daudz iespēju: kvantitatīvā un kvalitatīvā, mēģene un stikls, tilpuma un pilienu, parastās, paātrinātās un ekspresmetodes. RA stadijai jums ir nepieciešams: 1) s-ka asinis. Variantā ar baktēriju veida (var) noteikšanu tiek izmantoti rūpnieciskie aglutinācijas testi, kas iegūti imunizējot trušus. Variantā ar Ab veida noteikšanu no testa tiek ņemts asins paraugs. cilvēkiem vai dzīvniekiem. Šķīdumam jābūt sterilam un bez suspendētām daļiņām. Sagatavo bāzes atšķaidījumu sāls šķīdumā. Tam jābūt 2-4 reizes zemākam par šīs slimības diagnostikas titru; 2) Ag. Reakcijas versijā ar Ab tipa noteikšanu tiek izmantoti rūpnieciskās diagnostikas komplekti; variantā ar Ag noteikšanu diagnostikas gatavo paši 1-3 miljardu suspensijas veidā sāls šķīdumā 18-20 stundu agara (retāk buljona) testa. mikrobs inaktivēts, karsējot ūdens vannā 70°C 1 stundu vai inkubējot 24 stundas 37°C temperatūrā ar formaldehīdu (galīgā koncentrācija 0,2%); 3) elektrolīts sāls šķīduma veidā. Iestudējuma tehnika tilpuma sērijas caurule RA, lai noteiktu Ab titru s-ki: no galvenā s-ki atšķaidījuma sagatavo vairākas darba atšķaidījumu rindas. Rindu skaits ir atkarīgs no eksperimentā ņemto diagnostiku skaita, skaitu un atšķaidīšanas koeficientus nosaka aizdomīgās slimības diagnostiskais titrs. Sērijā jāsatur vismaz atšķaidījums, kas atbilst diagnostikas Ab titram, divus atšķaidījumus zem un divus atšķaidījumus virs tā. piemēram, ja diagnostikas titrs ir 1:100, tad ar tilpuma metodi RA stadijas noteikšanai jāsagatavo šādi atšķaidījumi: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ar pilienu metodi, pirmais atšķaidījums (1:25) nav vajadzīgs, bet nepieciešams vēl viens lielāks atšķaidījums - 1:800. zinātniskie pētījumi s-ku tiek titrēts līdz negatīvai reakcijai. To atšķaida šādi: visās mēģenēs, izņemot 1., ielej 0,25 ml fizioloģiskā šķīduma, ja reakcija notiek 0,5 ml tilpumā, un 0,5 ml, ja reakcija notiek 1 tilpumā. ml. Ielejiet 0,25 (0,5) ml galvenā atšķaidījuma 1. un 2. mēģenē, no 2. mēģenes, izgrieztajā tilpumā un vaislas s-k un palielināts 2 reizes, 0,25 (0,5) ml tiek pārnests uz 3., no 3. uz 4. utt. uz pēdējo, no griezuma visam ielej 0,25 (0,5) ml, lai līdzsvarotu apjomus. Katru atšķaidīšanu veic, izmantojot atsevišķu pipeti. Ja eksperimentā tiek ņemti vairāki diagnostikas materiāli, tad katram no tiem tiek sagatavota sava atšķaidījumu sērija tādā pašā veidā. Katram mēģenes atšķaidījumam tiek pievienots Diagnosticum tilpumā, kas vienāds ar mēģenes tilpumu, kā rezultātā atšķaidījums katrā mēģenē tiek dubultots. Eksperiments atbilst s-ki kontrolei (0,25 - 0,5 ml s-ki galvenā atšķaidījuma un tāds pats daudzums fizioloģiskā šķīduma) un Ag kontrolei (0,25 - 0,5 ml diagnosticum un tāds pats daudzums fizioloģiskā šķīduma). Ja eksperimentā izmanto vairākas diagnostikas, tad katrai ir sava antigēna kontrole. Statīvu ar mēģenēm kārtīgi sakrata un ievieto termostatā 37°C uz 4 stundām, un pēc tam atstāj istabas temperatūrā līdz nākamajai dienai, pēc tam reģistrē PA, pamatojoties uz nosēdumu daudzumu un attīrīšanās pakāpi. šķidrums. Šo rādītāju noteikšana atkarībā no aglutinātu rakstura tiek veikta ar neapbruņotu aci uz tumša fona, aglutinoskopā vai virs mikroskopa spoguļa ieliektās virsmas. Uzskaite sākas ar vadīklām: kontrolei C jābūt caurspīdīgai, Ag jābūt vienmērīgi duļķainam (pēc mēģenes sakratīšanas). Ja kontroles ir labas, noskaidrojiet aglutinācijas esamību un pakāpi visās mēģenēs, kas apzīmētas ar plusiem: lielas nogulsnes un pilnīga šķidruma attīrīšana - 4 plusi; lielas nogulsnes un nepilnīga šķidruma notīrīšana - 3 plusi; pamanāmas nogulsnes un jūtama šķidruma attīrīšanās ir 2 plusi. Pēc tam tiek noteikts titrs: augstākais atšķaidījums ar aglutinācijas intensitāti vismaz 2 plusi. Titru izpēte s-ki tiek salīdzināti ar šīs slimības diagnostisko titru. Ja tiek pārbaudīts titrs. s-ki ir 2 reizes zemāks par diagnostisko vērtību, reakcija tiek novērtēta kā apšaubāma; ja titrs ir vienāds diagnostika - kā vāji pozitīvs; ja tas ir 2-4 reizes lielāks, tas tiek uzskatīts par pozitīvu, ja tas ir 8 vai vairāk reizes lielāks, tas tiek uzskatīts par krasi pozitīvu. Ar plašu izplatību Ab veseliem cilvēkiem Lai novērtētu RA, tiek izmantots Ab titra pieaugums. Lai noteiktu Ar veidu sērijveida RA, rindu skaitam jāatbilst identifikācijai ņemtajam numuram diagnostikas testi. No diagnostikas testa galvenā atšķaidījuma tiek sagatavota virkne secīgu divkāršu atšķaidījumu tādā pašā veidā kā RA, lai noteiktu Ab titru. Atšķaidīšanas koeficienti ir atkarīgi no aglutinācijas testa titra.Eksperimentā ir nepieciešama atšķaidījuma klātbūtne, kas vienāda ar testa titru, kā arī 2, 4, 6, 8 reizes mazāka par to. Piemēram, ja diagnostikas testa titrs ir 1 3200, tad jāizmanto atšķaidījumi 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Testa atšķaidījumiem pievieno tādu pašu daudzumu pārbaudītā Ag, kā rezultātā tiek atšķaidīts tests palielinās 2 reizes.Eksperimentam pievieno 2 kontroles testa un Ag.Ja eksperimentā ir iesaistīti vairāki s-k,tad katram no tiem ir nepieciešama sava kontrole.Reakcijas beigās statīvu enerģiski sakrata un novieto termostatā 37 ° C. Rezultāti tiek ņemti vērā, kā aprakstīts iepriekš.Reakcijas novērtēšanai ir pazīmes.Lai izdarītu secinājumu par pētījuma atbilstību. Eksperimentā ņemts Ag, reakcijas titram jāatbilst vismaz pusei no standarta diagnostikas testa titra.Titri 1 4 un mazāk tiek uzskatīti par grupas reakciju Pilināt md RA stadija atšķiras no tilpuma ar to, ka s-ku atšķaida 1 ml tilpumā, Ag izmanto lielākā koncentrācijā (10 miljardi/ml) un pievieno 1 - 2 pilieni mēģenē Zāļu atšķaidīšana pēc Ag pievienošanas tiek uzskatīta par nemainīgu. Pretējā gadījumā iestatīšanas, reģistrēšanas un novērtēšanas metode ir līdzīga tilpuma metodei

(Avots: Mikrobioloģijas terminu vārdnīca)

Aglutinācijas reakcija (no lat. aglutinācija- līmēšana) - asinsķermenīšu (baktērijas, sarkanās asins šūnas utt.) līmēšana ar antivielām elektrolītu klātbūtnē.

Aglutinācijas reakcija izpaužas pārslu vai nogulumu veidā, kas sastāv no asinsķermenīšiem (piemēram, baktērijām), kas “salīmēti kopā” ar antivielām (7.37. att.). Aglutinācijas reakciju izmanto, lai: noteiktu no pacienta izolēto patogēnu; antivielu noteikšana pacienta asins serumā; asins grupu noteikšana.

Rīsi. 7.37 a, b. Aglutinācijas reakcija arIgM-antivielas (a) unIgG- antivielas (b)

1. No pacienta izolētā patogēna noteikšana Aptuvenā reakcija aglutinācija uz stikla (7.38. att.). No pacienta izolētu baktēriju suspensiju pievieno aglutinējošā seruma pilienam (atšķaidījums 1:20). Veidojas flokulējošas nogulsnes.

Rīsi. 7.38.

Plaša aglutinācijas reakcija ar no pacienta izolētu patogēnu (7.39. att.). Aglutinējošā seruma atšķaidījumiem pievieno no pacienta izolētu baktēriju suspensiju.

Rīsi. 52

2. Antivielu noteikšana pacienta asins serumā
Detalizēta aglutinācijas reakcija ar pacienta asins serumu (7.39. att.). Diagnosticum pievieno pacienta seruma atšķaidījumiem.
- Aglutinācija ar O-diagnosticum (baktērijas iznīcina karstuma ietekmē, saglabā O-antigēnu) notiek smalkgraudainas aglutinācijas veidā.
- Aglutinācija ar H-diagnosticum (baktērijas iznīcina formaldehīds, saglabājot flagellar H-antigēnu) ir liela un notiek ātrāk.
3. Aglutinācijas reakcija asins grupu noteikšanai Aglutinācijas reakciju asins grupu noteikšanai izmanto, lai izveidotu ABO sistēmu (b tabula), izmantojot eritrocītu aglutināciju ar imūnseruma antivielām pret asins grupas antigēniem A (I), B (III). Kontrole ir: serums, kas nesatur antivielas, t.i. seruma AB (IV) asins grupa; antigēni, ko satur A (II), B (III) grupas sarkanās asins šūnas. Negatīvā kontrole nesatur antigēnus, t.i., tiek izmantoti O (I) grupas eritrocīti.

7.6. tabula. ABO asinsgrupu noteikšana