Tindak balas aglutinasi pasif. Tindak balas aglutinasi tidak langsung. Tindak balas hemagglutinasi tidak langsung atau pasif (IRHA, RPHA). RNGA terbalik. Tindak balas perencatan hemaglutinasi pasif (PHA).
Ini tindak balas dipanggil tidak langsung (pasif), kerana mereka menggunakan Ag (atau AT) yang diserap secara buatan pada permukaan pelbagai zarah korpuskular.
Tindak balas hemagglutinasi tidak langsung atau pasif (RNGA, RPGA) adalah salah satu tindak balas serologi yang paling sensitif. Ia berdasarkan keupayaan AT untuk berinteraksi dengan Ag yang ditetapkan pada pelbagai sel darah merah, yang kemudiannya menggumpal. Untuk kestabilan diagnostik yang lebih tinggi, sel darah merah diformalkan.
RNGA terbalik digunakan untuk mengesan Ag dalam serum darah; Untuk tujuan ini, bukan Ag, tetapi AT ditetapkan pada eritrosit. Reaksi jenis ini digunakan secara meluas untuk mendiagnosis penyakit berjangkit, mewujudkan kehamilan, mengesan hipersensitiviti kepada ubat-ubatan, dsb.
Sambutan brek hemaglutinasi pasif (RTPGA) - perkembangan selanjutnya RNGA; dalam erti kata mengawal kekhususannya. Tidak seperti RNGA, merangkumi tiga komponen; Ag, AT dan Ag (AT) terserap pada eritrosit. Pada mulanya, Ag bertindak balas dengan AT (antiserum standard), kemudian eritrosit yang tersensitisasi dengan Ag (atau AT) yang sama ditambah kepada campuran. Jika, semasa interaksi Ag dengan AT, tiada AT bebas (atau Ag) kekal dalam sistem, maka aglutinasi diagnostikum eritrosit tidak diperhatikan.
Ia menggunakan sel darah merah atau neutral bahan sintetik(contohnya, zarah lateks), pada permukaannya antigen (bakteria, virus, tisu) atau antibodi diserap. Aglutinasi mereka berlaku apabila sera atau antigen yang sesuai ditambah. Sel darah merah yang tersensitisasi dengan antigen dipanggil diagnosticum erythrocyte antigen dan digunakan untuk mengesan dan mentitrasi antibodi. Eritrosit sensitif dengan antibodi. dipanggil immunoglobulin erythrocyte diagnosticums dan digunakan untuk mengesan antigen.
Tindak balas hemagglutinasi pasif digunakan untuk mendiagnosis penyakit yang disebabkan oleh bakteria ( demam kepialu dan demam paratifoid, disentri, brucellosis, wabak, taun, dsb.), protozoa (malaria) dan virus (influenza, jangkitan adenovirus, hepatitis virus B, campak, ensefalitis bawaan kutu, demam berdarah Crimean, dsb.), serta untuk menentukan hormon tertentu, mengenal pasti peningkatan sensitiviti pesakit terhadap ubat-ubatan dan hormon seperti penisilin dan insulin.
Tindak balas hemagglutinasi pasif (RPHA). Ujian hemagglutinasi pasif adalah kaedah sensitif diagnostik serologi dan digunakan untuk diagnosis awal dan retrospektif, serta untuk menentukan keadaan imunopogik orang yang divaksin. Pada pesakit dengan tularemia, antibodi biasanya dikesan pada akhir minggu ke-1 atau ke-2 penyakit; selepas 1-1.5 bulan, titer RPHA mencapai prestasi maksimum(1:100000-1:20000, jarang lebih tinggi), selepas itu mereka berkurangan dan kekal pada tahap 1:100-1:200 untuk masa yang lama.
Pada orang yang divaksinasi, antibodi juga sentiasa dikesan, bagaimanapun, dalam titer yang lebih rendah, tidak melebihi 1:2000-1:5000 1-1.5 bulan selepas vaksinasi, dan kekal selama beberapa tahun pada tahap rendah 1:20-1:80.
Antigen untuk pementasan RPHA ialah tularemia erythrocyte diagnosticum (antigenik). Ubat ini adalah sel darah merah kambing biri-biri yang diformalkan, dipekakan dengan antigen tularemia, tersedia dalam bentuk cecair dan kering. Penyediaan cecair - penggantungan 10% sel darah merah dalam larutan formaldehid dengan kepekatan 10%. Penyediaan lyophilized kering adalah penggantungan 10% sel darah merah yang dikeringkan dengan vakum tanpa pengawet. Sebelum digunakan, ia dicairkan mengikut arahan pada label. Untuk menyediakan tindak balas dalam plat polistirena, kedua-dua ubat digunakan dalam kepekatan 2.5%, dan apabila menyediakan tindak balas dalam mikrovolum - pada kepekatan 0.5%.
Teknik untuk menyediakan RPGA. Sera ujian dicairkan dengan larutan fisiologi 1:5 (1:10) dan dipanaskan pada suhu 56 darjah C selama 30 minit. Selepas ini, untuk mengeluarkan antibodi heterogen kepada eritrosit biri-biri, sera dirawat dengan penggantungan 50% eritrosit biri-biri yang diformalkan. Untuk melakukan ini, tambahkan sel darah merah pada kadar 2 titis (0.05 ml) setiap 1 ml serum dan gaul sebati dengan menggoncang. Serum dibiarkan sehingga eritrosit telah mendap sepenuhnya, atau disentrifugasi selepas satu jam pada suhu bilik, selepas itu ia bersedia untuk pemeriksaan.
Cecair pencairan dituangkan dalam jumlah 0.5 ml ke dalam barisan telaga pada plat polistirena. Semasa kajian awal sera, adalah dinasihatkan untuk mengujinya dengan menyediakan tindak balas dalam barisan pendek plat (6-telaga). Jika antibodi dikesan dalam siri pendek, sera diuji semula dalam siri pencairan yang panjang (12 telaga). Selepas menumpahkan cecair pencairan, tambahkan 0.5 ml sera ujian dalam pencairan 1:5 ke telaga pertama setiap baris (pendek atau panjang). Kemudian isipadu serum yang sama dititrasi dengan pencairan dua kali ganda. Oleh itu, pencairan serum diperolehi dalam siri pendek dari 1:10 hingga 1:320, dan dalam siri panjang dari 1:10 hingga 1:20480. Selepas pentitratan sera, satu titis (0.05 ml) penggantungan 2.5% yang berfungsi bagi eritrosit tersensitisasi ditambah kepada setiap telaga. Kandungan plat digoncang dengan teliti sehingga penggantungan homogen diperolehi. Plat dibiarkan pada suhu bilik di atas permukaan meja pegun. Rakaman awal tindak balas dijalankan selepas 2-3 jam, penentuan akhir titer dibuat selepas pemendapan lengkap sel darah merah di dalam telaga. Kawalan berikut disediakan untuk tindak balas: 1) serum ujian dicairkan 1:10 dalam isipadu 0.5 ml + 1 titis penggantungan 2.5% eritrosit yang tidak sensitif; 2) cecair pencairan dalam jumlah 0.5 ml + 1 titis penggantungan 2.5% eritrosit yang tidak sensitif; 3) cecair pencairan dalam isipadu 0.5 ml + 1 titis penggantungan 2.5% eritrosit tersensitisasi. Semua kawalan harus memberikan reaksi negatif yang jelas.
Perakaunan dan penilaian RPGA. Reaksi dinilai oleh rajah berikut:
1) secara mendadak reaksi positif(++++) - sel darah merah jatuh ke bahagian bawah lubang dalam lapisan yang sama dalam bentuk "payung", yang selalunya mempunyai peleburan bergigi di tepi;
2) tindak balas positif (+++) - sel darah merah meliputi sekurang-kurangnya 2/3 bahagian bawah telaga;
3) tindak balas positif lemah (++) - aglutinat adalah kecil dan terletak di tengah-tengah telaga;
4) tindak balas yang boleh dipersoalkan (+) - di sekeliling sedimen eritrosit di tengah-tengah telaga terdapat butiran individu aglutinat;
5) negatif (-) - di bahagian bawah lubang, sel darah merah menetap dalam bentuk "butang" atau cincin kecil dengan tepi licin dan jelas.
Titer serum diambil kira berdasarkan pencairan terakhir serum, yang memberikan reaksi yang sangat jelas (sekurang-kurangnya tiga tambah). Pencairan 1:100 atau lebih tinggi dianggap sebagai titer diagnostik; walau bagaimanapun, sama seperti dalam kes RA, adalah perlu untuk memantau peningkatannya.
RPGA untuk tularemia agak spesifik dan mengesan beberapa tindak balas silang hanya dengan serum brucellosis. Diagnosis pembezaan mungkin dengan ketinggian titer dalam RPGA, yang jauh lebih tinggi dengan antigen homolog.
Teknik untuk menyediakan RPHA dalam volum mikro. RPGA boleh dilakukan dalam jilid mikro menggunakan mikrotitrator jenis Takachi (atau plat mikro bahagian bawah bulat dengan mikropipet), yang membolehkan pentitratan bahan dalam jumlah 25 μl dan 50 μl. Teknik tindak balas dan urutan semua operasi adalah sama seperti semasa belajar dalam plat polistirena. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa sensitiviti kaedah mikro biasanya satu pencairan (iaitu, 2 kali) lebih rendah daripada kaedah makro.
Untuk menyediakan tindak balas dalam mikrotitrator, cecair pencairan dalam isipadu 50 μl ditambah kepada setiap telaga menggunakan pipet penitis. Kemudian, menggunakan titrator dengan kepala 50 μl, serum ujian dikumpulkan dengan merendam kepala di dalamnya. Pastikan cecair telah memenuhi kepala titrator. Titrator dengan serum dipindahkan ke telaga pertama dan, menahannya kedudukan menegak, lakukan beberapa pergerakan putaran pergi balik. Kemudian titrator dipindahkan ke telaga seterusnya dan manipulasi diulang. Pentitratan boleh dijalankan serentak dalam beberapa baris. Selepas mentitrasi keseluruhan siri, titrator dibasuh dengan air suling (menukar 2 bahagian) dengan pergerakan berputar, air dikeluarkan dari kepala menggunakan swab dan dibakar di atas api penunu.
Selepas titrasi, tambahkan 25 μl cecair diagnostik eritrosit ke dalam telaga. Kepekatan diagnosticum untuk RPHA dalam volum mikro hendaklah 0.5% (iaitu, penggantungan 2.5% sel darah merah tambahan dicairkan 5 kali). Selepas menambah sel darah merah, plat perlu digoncang sedikit sehingga penggantungan homogen diperolehi. Keputusan boleh direkodkan dalam masa 1-1.5 jam, yang merupakan kelebihan penting RPGA dalam mikrotiter. Di samping itu, teknik ini memerlukan kuantiti yang kecil semua bahan tindak balas dan sera ujian.
Tindak balas diambil kira mengikut skema berikut:
1) "+" - hemagglutination lengkap, di mana sel darah merah jatuh ke bahagian bawah telaga dalam lapisan yang sama dalam bentuk "payung", menduduki sekurang-kurangnya 2/3 bahagian bawah;
2) "+-" - hemagglutinasi separa, di mana sel darah merah jatuh ke bahagian bawah dalam bentuk cincin longgar saiz kecil;
3) “-“ – ketiadaan hematglutinasi, apabila sel darah merah jatuh ke bahagian bawah dalam bentuk butang atau cincin kecil dengan tepi licin.
Kekhususan keputusan positif yang diperolehi dalam RPHA boleh diuji menggunakan tindak balas tiga komponen - tindak balas perencatan hemagglutinasi pasif (PHA).
Teknik untuk menyediakan RTPGA. Tindak balas ini digunakan untuk mengesahkan kekhususan keputusan RPGA positif apabila ia diragui atau mempunyai kepentingan epidemiologi tertentu. Mekanisme tindak balas adalah perencatan khusus hemagglutinasi apabila penggantungan bakteria tularemia yang terbunuh ditambah ke dalam serum ujian. Tiga komponen berinteraksi dalam tindak balas: serum ujian, antigen tularemia spesifik dan antigen erythrocyte diagnosticum RTPHA biasanya diletakkan dalam deretan 7-8 telaga. Adalah dinasihatkan untuk memasang RPGA berulang selari dengan RTPGA. 0.25 ml cecair pencairan dituangkan ke dalam dua baris telaga, kemudian serum ujian dalam isipadu 0.25 ml ditambah ke telaga pertama kedua-dua baris dan pentitratan dilakukan. Dua baris pencairan serum yang sama diperolehi. Tambah 0.25 ml cecair pencairan ke semua telaga baris kedua, dan 0.25 ml penggantungan bakteria tularemia ke telaga baris pertama. Tularemia diagnosticum digunakan (mengandungi 25 bilion bakteria tularemia dalam 1 ml), sebelum ini dicairkan 50 kali. Suspensi ini mengandungi 500 juta bakteria dalam 1 ml atau 125 juta dalam isipadu 0.25 ml. Selepas menambah antigen, plat dibiarkan selama 1 jam pada suhu bilik, selepas itu satu titis (0.05 ml) erythrocyte diagnosticum ditambah ke semua telaga kedua-dua baris, plat digoncang dan dibiarkan di atas permukaan meja rata. Perakaunan dijalankan selepas 2-3 jam.
Perakaunan dan penilaian RTPGA. Jika serum ujian mengandungi antibodi tularemia khusus, ia dinetralkan oleh antigen tambahan dan hemagglutinasi tidak akan berlaku pada baris pertama telaga, atau, dengan titer serum yang tinggi, hemaglutinasi akan diperhatikan dalam bilangan yang lebih kecil (2-4). telaga daripada dalam barisan dengan RPHA. Dalam kes ini, kekhususan keputusan telah disahkan. Jika hemagglutinasi dicatatkan dalam kedua-dua baris, i.e. Jika keputusan RTPGA dan RPGA bertepatan, ini menunjukkan ketiadaan antibodi tularemia dalam serum ujian. Dalam kes ini, hasil utama RPGA dianggap tidak spesifik.
Teknik untuk pementasan RTHG dalam mikrovolum. RTPGA, seperti RPGA, boleh dilakukan dalam volum mikro menggunakan mikrotiter jenis Takachi. Untuk melakukan ini, tambahkan 0.25 μl cecair cair ke dalam telaga mikroplat dalam dua baris 7-8 telaga setiap satu. Kemudian, menggunakan titrator, 0.25 μl serum ujian ditambah dan dititrasi dalam kedua-dua baris. Selepas ini, 25 μl antigen tularemia (kepekatannya ialah 500 juta bakteria tularemia dalam 1 ml) ditambah kepada setiap telaga di baris pertama, dan 25 μl cecair pencairan ditambah ke baris kedua. Plat dibiarkan selama 1 jam pada suhu bilik, selepas itu 25 μl diagnostikum zritrocytic antigenik (kepekatan 0.5%) ditambahkan ke semua telaga kedua-dua baris. Perakaunan dan penilaian keputusan dijalankan sama seperti tindak balas dalam makrovolum.
Tindak balas hemaglutinasi pasif) kaedah untuk mengesan dan mengenal pasti antigen atau antibodi, berdasarkan fenomena aglutinasi sel darah merah yang berlaku di hadapannya, pada permukaan yang spesifik atau antigen yang sepadan sebelum ini telah diserap.
1. Ensiklopedia perubatan kecil. - M.: Ensiklopedia perubatan. 1991-96 2. Pertama penjagaan kesihatan. - M.: Ensiklopedia Besar Rusia. 1994 3. Kamus Ensiklopedia istilah perubatan. - M.: Ensiklopedia Soviet. - 1982-1984.
Lihat apakah "Tindak balas hemagglutinasi tidak langsung" dalam kamus lain:
tindak balas hemagglutinasi tidak langsung- RNGA Ujian makmal menggunakan diagnostik eritrosit. [Glosari Inggeris-Rusia istilah asas dalam vaksinologi dan imunisasi. Pertubuhan Kesihatan Sedunia, 2009] Topik vaksinologi, imunisasi Sinonim RNGA EN... ... Panduan Penterjemah Teknikal
- (RNHA; sinonim untuk tindak balas hemagglutinasi pasif) kaedah untuk pengesanan dan pengenalpastian antigen atau antibodi, berdasarkan fenomena aglutinasi eritrosit yang berlaku di hadapannya, pada permukaan yang sebelum ini diserap... .. . Kamus perubatan yang besar
- (RPHA) lihat tindak balas hemagglutinasi tidak langsung... Kamus perubatan yang besar
Halaman ini ialah glosari. # A... Wikipedia
Singkatan asas yang diterima pakai dalam Kamus Ensiklopedia Veterinar- a., aa, artena, arteriae aa ana (sama-sama) Akademi Sains Perubatan USSR Akademi Sains Perubatan USSR Akademi Sains USSR Akademi Sains USSR Bac. Bacillus Bact. Bakteria BSSR Byelorussian SSR c., berabad-abad. abad, abad v., vv. vena, venae VASKHNIL All-Union Order of Lenin dan... ...
Istilah ini mempunyai makna lain, lihat Wabak. Distemper karnivor (penyakit Kare) akut atau subakut berjangkit penyakit virus, dimanifestasikan oleh demam, keradangan catarrhal membran mukus, lesi kulit, pusat ... ... Wikipedia
- (renes) organ perkumuhan dan endokrin berpasangan yang mengawal homeostasis kimia badan melalui fungsi pembentukan air kencing. LAKARAN FISIOLOGI ANATOMI Buah pinggang terletak di dalam ruang retroperitoneal (ruang retroperitoneal) pada... ... Ensiklopedia perubatan
I (trichinellosis; sinonim: trichinosis, "bengkak") helminthiasis daripada kumpulan nematod, dicirikan oleh demam, myalgia, bengkak muka, ruam kulit, eosinofilia darah, dan dalam kes yang teruk, lesi organ dalaman dan pusat... ... Ensiklopedia perubatan
- (nematodosis) helminthiases yang disebabkan oleh cacing gelang nematod kelas Nematoda. Antara helminthiases lain, N. mempunyai nilai tertinggi dalam patologi manusia, kebanyakannya adalah geohelminthiasis (lihat Helminthiasis); perkembangan telur atau larva mereka... ... Ensiklopedia perubatan
epididimitis berjangkit- Nasi. 1. Pembesaran testis kiri pada biri-biri dengan epididimitis berjangkit. nasi. 1. Pembesaran testis kiri pada biri-biri dengan epididimitis berjangkit. epididymitis berjangkit biri-biri (Epididymitis infectiosa arietum), berjangkit kronik... ... Kamus ensiklopedia veterinar
Lihat tindak balas hemagglutinasi tidak langsung... Kamus perubatan yang besar
Reaksi diberikan:
1) untuk pengesanan polisakarida, protein, ekstrak bakteria dan bahan lain yang sangat tersebar, rickettsia dan virus, kompleks yang dengan aglutinin tidak dapat dilihat dalam RA konvensional,
2) untuk mengesan antibodi dalam sera pesakit terhadap bahan yang sangat tersebar dan mikroorganisma kecil ini.
Penggumpalan tidak langsung, atau pasif, difahami sebagai tindak balas di mana antibodi berinteraksi dengan antigen pra-terjerap pada zarah lengai (lateks, selulosa, polistirena, barium oksida, dsb. atau sel darah merah biri-biri, I(0) -kumpulan darah manusia)
Dalam tindak balas hemagglutinasi pasif (RPHA), sel darah merah. Sel darah merah yang dimuatkan antigen melekat bersama dengan kehadiran antibodi khusus kepada antigen ini dan mendakan. Eritrosit sensitif antigen digunakan dalam RPGA sebagai diagnosticum eritrosit untuk pengesanan antibodi (serodiagnosis). Jika sel darah merah dimuatkan dengan antibodi (erythrocyte antibodi diagnosticum), ia boleh digunakan untuk mengesan antigen.
nasi. 3. Skim RPGA: sel darah merah (1), dimuatkan dengan antigen (3), diikat oleh antibodi tertentu (4).
Pementasan. Satu siri pencairan bersiri serum disediakan dalam telaga plat polistirena. Tambah 0.5 ml serum yang jelas positif ke telaga kedua terakhir dan 0.5 ml larutan fisiologi (kawalan) ke telaga terakhir. Kemudian 0.1 ml diagnostikum erythrocyte yang dicairkan ditambah ke semua telaga, digoncang dan diletakkan dalam termostat selama 2 jam.
Perakaunan. DALAM kes positif eritrosit menetap di bahagian bawah lubang dalam bentuk lapisan sel yang sama dengan tepi berlipat atau bergerigi (payung terbalik), secara negatif - mereka menetap dalam bentuk butang atau cincin.
Rajah.4. Perakaunan untuk RNGA (RPGA).
Mengakaunkan keputusan ujian x-ray yang dilakukan untuk mengesan toksin botulinum.
Agen penyebab botulisme, Clostridium botulinum, menghasilkan toksin tujuh serovar (A, B, C, D, E, F, G), tetapi serovar A, B, dan E adalah lebih biasa. Semua toksin berbeza dalam sifat antigen dan boleh dibezakan dalam tindak balas menggunakan sera khusus jenis . Untuk tujuan ini, tindak balas hemagglutinasi pasif (tidak langsung) boleh dilakukan dengan serum pesakit, di mana kehadiran toksin diandaikan, dan sel darah merah dimuatkan dengan antibodi serum anti-botulinum antitoksik jenis A, B, E. Normal. serum berfungsi sebagai kawalan.
nasi. 3. Penyata dan keputusan RNGA.
Perakaunan. Dalam kes positif, sel darah merah menetap di bahagian bawah lubang dalam bentuk lapisan sel yang sekata dengan tepi berlipat atau bergerigi (payung terbalik); dalam kes negatif, mereka menetap dalam bentuk butang atau cincin. .
Kesimpulan: Toksin botulinum jenis E dikesan dalam serum pesakit.
Tindak balas perencatan hemaglutinasi (HRT).
nasi. 8. Tindak balas perencatan hemaglutinasi (HAI) (skim).
Prinsip tindak balas adalah berdasarkan keupayaan AT untuk mengikat pelbagai virus dan meneutralkannya, menjadikannya mustahil untuk mengaglutinasi sel darah merah. Secara visual, kesan ini menunjukkan dirinya dalam "perencatan" hematglutinasi. RTGA digunakan dalam diagnosis jangkitan virus untuk mengenal pasti antihemagglutinin tertentu dan mengenal pasti pelbagai virus oleh hemagglutinin mereka, yang mempamerkan sifat Ag.
Penaipan virus dijalankan dalam tindak balas RTGA dengan set sera khusus jenis. Keputusan tindak balas diambil kira dengan ketiadaan hemaglutinasi. Subjenis virus jenis A dengan antigen H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 dan lain-lain boleh dibezakan dalam RTGA dengan set sera khusus jenis homolog
nasi. 9. Keputusan RTGA untuk menaip virus influenza
Lagenda: - perencatan hematglutinasi (butang); - hemagglutinasi (payung).
Kesimpulan: Bahan yang dikaji mengandungi virus influenza jenis A dengan antigen H3N2
Tindak balas hemagglutinasi tidak langsung (pasif) (IRHA) adalah berdasarkan fakta bahawa sel darah merah, jika antigen larut diserap pada permukaannya, memperoleh keupayaan untuk menggumpal apabila berinteraksi dengan antibodi kepada antigen yang terserap. Rajah RNGA ditunjukkan dalam Rajah. 34. RNGA digunakan secara meluas dalam diagnosis beberapa jangkitan.
nasi. 34. Skim tindak balas hemagglutinasi pasif (RPHA). A - mendapatkan diagnosticum erythrocyte: B - RPGA: 1 - eritrosit: 2 - antigen sedang dikaji; 3 - diagnosticum eritrosit; 4 - antibodi kepada antigen yang sedang dikaji: 5 - aglutinat
Menyediakan reaksi. Serum ujian dipanaskan selama 30 minit pada 56° C, dicairkan secara berurutan dalam nisbah 1:10 - 1:1280 dan dituangkan ke dalam 0.25 ml ke dalam tabung uji atau telaga, di mana 2 titis erythrocyte diagnosticum (eritrosit dengan antigen terserap padanya. ) kemudian ditambah.
Kawalan: penggantungan diagnosticum erythrocyte dengan serum imun yang diketahui; penggantungan diagnosticum dengan serum biasa; penggantungan sel darah merah normal dengan serum ujian. Dalam kawalan pertama, aglutinasi harus berlaku, dalam kedua dan ketiga ia tidak sepatutnya berlaku.
Menggunakan RIGA, anda boleh mengesan antigen yang tidak diketahui jika antibodi yang diketahui diserap ke dalam sel darah merah.
Tindak balas hemagglutinasi boleh dilakukan dalam isipadu 0.025 ml (kaedah mikro) menggunakan mikrotitrator Takachi.
1. Apakah yang ditunjukkan? hasil positif RHA antara sel darah merah dan bahan yang diuji untuk kehadiran virus?
2. Adakah penggumpalan sel darah merah berlaku jika virus dan serum yang sepadan ditambah kepada mereka? Apakah nama tindak balas yang mendedahkan fenomena ini?
Senaman
Ambil kira dan daftar keputusan RIGA.
Tindak balas pemendakan
Dalam tindak balas pemendakan, kompleks imun tertentu dimendakan, terdiri daripada antigen larut (lisat, ekstrak, hapten) dan antibodi khusus dengan kehadiran elektrolit.
Gelang keruh atau mendakan yang terbentuk akibat tindak balas ini dipanggil mendakan. Tindak balas ini berbeza terutamanya daripada tindak balas aglutinasi dalam saiz zarah antigen.
Tindak balas pemendakan biasanya digunakan untuk menentukan antigen dalam diagnosis beberapa jangkitan ( antraks, meningitis, dll.); dalam perubatan forensik - untuk menentukan spesies darah, sperma, dll.; dalam kajian kebersihan dan kebersihan - apabila mewujudkan pemalsuan produk; dengan bantuannya, hubungan filogenetik haiwan dan tumbuhan ditentukan. Untuk tindak balas yang anda perlukan:
1. Antibodi (presipitin) - serum imun dengan titer tinggi antibodi (tidak lebih rendah daripada 1:100000). Titer serum pemendakan ditentukan oleh pencairan tertinggi antigen yang mana ia bertindak balas. Serum biasanya digunakan tanpa cair atau dalam pencairan 1:5 - 1:10.
2. Antigen - bahan terlarut protein atau sifat polisakarida lipoid (antigen penuh dan hapten).
3. Larutan isotonik.
Kaedah utama untuk menjalankan tindak balas pemendakan ialah: tindak balas pemendakan cincin dan tindak balas pemendakan dalam agar (gel).
Perhatian! Semua komponen yang terlibat dalam tindak balas pemendakan mestilah telus sepenuhnya.
Tindak balas pemendakan cincin. Menggunakan pipet Pasteur, tambahkan 0.2-0.3 ml (5-6 titis) serum ke dalam tiub pemendakan (serum tidak boleh terkena pada dinding tiub). Antigen dalam jumlah yang sama dilapisi dengan teliti pada serum, menuangkannya dengan pipet Pasteur nipis di sepanjang dinding tabung uji. Tabung uji disimpan dalam keadaan condong. Apabila berlapis dengan betul, harus ada sempadan yang jelas antara serum dan antigen. Berhati-hati, supaya tidak mencampurkan cecair, letakkan tabung uji dalam dirian. Jika tindak balas adalah positif, "cincin" keruh terbentuk di antara muka antigen dan antibodi - mendakan (lihat Rajah 48).
Tindak balas disertai dengan beberapa kawalan (Jadual 18). Urutan penambahan bahan tindak balas ke dalam tabung uji adalah sangat penting. Anda tidak boleh melapisi serum pada antigen (dalam kawalan - pada larutan isotonik), kerana ketumpatan relatif serum lebih besar, ia akan tenggelam ke bahagian bawah tabung uji, dan sempadan antara cecair tidak akan didedahkan.
Jadual 18. Skim untuk menyediakan tindak balas pemendakan cincin
Catatan. + kehadiran "cincin"; - ketiadaan "cincin".
Keputusan direkodkan selepas 5-30 minit, dalam beberapa kes selepas satu jam, seperti biasa bermula dengan kawalan. "Cincin" dalam tabung uji ke-2 menunjukkan keupayaan serum imun untuk masuk tindak balas tertentu dengan antigen yang sepadan. Tidak sepatutnya ada "cincin" dalam 3-5 tabung uji - tiada antibodi dan antigen yang sepadan antara satu sama lain. "Cincin" dalam tiub pertama - hasil tindak balas positif - menunjukkan bahawa antigen ujian sepadan dengan serum imun yang diambil, ketiadaan "cincin" ("cincin" hanya dalam tiub ke-2) menunjukkan ketidakkonsistenan mereka - negatif hasil tindak balas.
Tindak balas pemendakan dalam agar (gel). Keanehan tindak balas ialah interaksi antigen dan antibodi berlaku dalam medium padat, iaitu dalam gel. Mendakan yang terhasil memberikan coretan keruh dalam ketebalan medium. Ketiadaan jalur menunjukkan percanggahan antara komponen tindak balas. Tindak balas ini digunakan secara meluas dalam penyelidikan bioperubatan, khususnya dalam kajian pembentukan toksin dalam agen penyebab difteria.
Soalan kawalan
1. Apakah perbezaan utama antara tindak balas aglutinasi dan pemendakan?
2. Mengapakah bahan keruh tidak boleh digunakan dalam tindak balas pemendakan?
Senaman
1. Sediakan tindak balas pemendakan cincin dan lakarkan hasilnya.
2. Kaji sifat interaksi antigen dengan antibodi dalam tindak balas pemendakan dalam agar-agar, lakarkan hasilnya (dapatkan cawan daripada guru anda).
Tindak balas lisis (sitolisis imun)
Lisis imun ialah pembubaran sel di bawah pengaruh antibodi apabila penyertaan wajib pelengkap. Untuk tindak balas yang anda perlukan:
1. Antigen - mikrob, sel darah merah atau sel lain.
2. Antibodi (lysine) - serum imun, serum pesakit kurang kerap. Serum bakteriolitik mengandungi antibodi yang terlibat dalam lisis bakteria; hemolitik - hemolysin yang menggalakkan lisis sel darah merah; untuk lisis spirochetes, spirochetolysins diperlukan, sel - itolysin, dll.
3. Pelengkap. Paling pelengkap dalam serum babi guinea. Serum ini (campuran daripada beberapa haiwan) biasanya digunakan sebagai pelengkap. Pelengkap segar (asli) tidak stabil dan mudah dimusnahkan oleh pemanasan, goncangan atau penyimpanan, jadi ia boleh digunakan tidak lebih daripada dua hari selepas penerimaan. Untuk mengekalkan pelengkap, 2% ditambah kepadanya asid borik dan 3% natrium sulfat. Pelengkap ini boleh disimpan pada suhu 4°C sehingga dua minggu. Pelengkap kering paling kerap digunakan. Sebelum digunakan, ia dibubarkan dalam larutan isotonik kepada isipadu asal (ditunjukkan pada label).
4. Larutan isotonik.
Reaksi hemolisis(Jadual 19). Untuk tindak balas yang anda perlukan:
1. Antigen - 3% penggantungan eritrosit biri-biri yang dibasuh pada kadar 0.3 ml sedimen eritrosit dan 9.7 ml larutan isotonik.
2. Antibodi - serum hemolitik (hemolysin) terhadap eritrosit biri-biri; biasanya disediakan dalam pengeluaran, terliofilisasi dan titer yang ditunjukkan pada label.
Titer Hemolysin ialah pencairan tertinggi serum di mana hemolisis lengkap penggantungan 3% sel darah merah berlaku dengan kehadiran pelengkap. Untuk tindak balas hemolisis, hemolysin diambil dalam titer tiga kali ganda, iaitu dicairkan 3 kali kurang daripada sebelum titer. Contohnya, dengan titer serum 1:1200, serum dicairkan 1:400 (0.1 ml serum * dan 39.9 ml larutan isotonik). Hemolysin yang berlebihan adalah perlu, kerana sebahagian daripadanya boleh diserap oleh komponen tindak balas yang lain.
* (Anda tidak boleh mengambil kurang daripada 0.1 ml serum - ketepatan pengukuran akan terjejas.)
3. Pelengkap dicairkan 1:10 (0.2 ml pelengkap dan 1.8 ml larutan isotonik).
4. Larutan isotonik.
Jadual 19. Skim tindak balas hemolisis
Perakaunan untuk keputusan. Sekiranya tindak balas dilakukan dengan betul, hemolisis akan berlaku dalam tabung uji pertama - kandungannya akan menjadi telus. Dalam kawalan, cecair kekal keruh: dalam tiub ke-2 tidak ada pelengkap yang cukup untuk hemolisis berlaku, dalam tiub ke-3 tidak ada hemolysin, dalam tiub ke-4 tidak terdapat hemolysin mahupun pelengkap, dalam tiub ke-5 antigen tidak tidak sepadan dengan antibodi,
Jika perlu, serum hemolitik dititrasi mengikut skema berikut (Jadual 20).
Sebelum pentitratan, sediakan pencairan serum awal sebanyak 1:100 (0.1 ml serum dan 9.9 ml larutan isotonik), dari mana pencairan yang diperlukan, Sebagai contoh:
Daripada pencairan ini, tambahkan 0.5 ml serum ke dalam tabung uji titrasi, seperti ditunjukkan dalam Jadual. 20.
Jadual 20. Skim pentitratan untuk serum hemolitik (hemolysin)
Dalam contoh yang diberikan dalam jadual. 20, titer serum hemolitik ialah 1:1200.
Apabila menggunakan serum hemolitik segar, ia mesti dinyahaktifkan untuk memusnahkan pelengkap yang ada di dalamnya. Untuk melakukan ini, ia dipanaskan selama 30 minit pada 56 ° C dalam tab mandi air atau dalam inaktivator dengan termostat. Kaedah terakhir adalah lebih baik: ia menghapuskan kemungkinan terlalu panas whey, iaitu, denaturasinya. Sera yang didenaturasi tidak sesuai untuk ujian.
Tindak balas bakteriolisis. Dalam tindak balas ini, pelengkap melisiskan bakteria dengan kehadiran serum yang sesuai (homolog). Skim tindak balas pada asasnya serupa dengan skema tindak balas hemolisis. Perbezaannya ialah selepas pengeraman selama dua jam, semua tabung uji disemai ke dalam piring Petri dengan medium yang sesuai untuk mikroorganisma yang dibawa ke dalam eksperimen untuk mengetahui sama ada ia terlisis. Jika eksperimen dijalankan dengan betul, kultur dari 2-5 tabung uji (kawalan) harus menunjukkan pertumbuhan yang banyak. Kekurangan pertumbuhan atau pertumbuhan lemah dalam inokulasi dari tabung uji pertama (eksperimen) menunjukkan kematian mikrob, iaitu, bahawa mereka adalah homolog dengan antibodi.
Perhatian! Tindak balas bakteriolisis mesti dijalankan di bawah keadaan aseptik.
Soalan kawalan
1. Apakah yang akan berlaku kepada sel darah merah jika air suling digunakan dan bukannya larutan natrium klorida isotonik? Apakah asas fenomena ini?
2. Apakah tindak balas yang akan berlaku apabila eritrosit berinteraksi dengan serum imun homolog tanpa ketiadaan pelengkap?
Senaman
Sediakan tindak balas hemolisis. Catat dan lakarkan hasilnya.
Maklumat berkaitan.
