Tindak balas aglutinasi (dari lat. aglutinasi- gluing) - gluing corpuscles (bakteria, sel darah merah, dll.) oleh antibodi dengan kehadiran elektrolit.
Tindak balas aglutinasi menampakkan dirinya dalam bentuk kepingan atau sedimen yang terdiri daripada corpuscles (contohnya, bakteria) "dilekatkan bersama" oleh antibodi (Rajah 7.37). Tindak balas aglutinasi digunakan untuk: menentukan patogen yang diasingkan daripada pesakit; penentuan antibodi dalam serum darah pesakit; penentuan kumpulan darah.
nasi. 7.37 a, b. Tindak balas aglutinasi denganIgM-antibodi (a) danIgG-antibodi (b)
1. Penentuan patogen yang diasingkan daripada pesakit Tindak balas anggaran aglutinasi pada kaca (Rajah 7.38). Penggantungan bakteria yang diasingkan daripada pesakit ditambah kepada setitik serum penggumpal (pencairan 1:20). Mendakan flocculent terbentuk.
nasi. 7.38.
Tindak balas aglutinasi yang meluas dengan patogen yang diasingkan daripada pesakit (Rajah 7.39). Penggantungan bakteria yang diasingkan daripada pesakit ditambah kepada pencairan serum aglutinasi.
nasi. 52
2. Penentuan antibodi dalam serum darah pesakit
Tindak balas aglutinasi terperinci dengan serum darah pesakit (Rajah 7.39). Diagnosticum ditambah kepada pencairan serum pesakit.
- Aglutinasi dengan O-diagnosticum (bakteria dibunuh oleh haba, mengekalkan O-antigen) berlaku dalam bentuk aglutinasi berbutir halus.
- Aglutinasi dengan H-diagnosticum (bakteria dibunuh oleh formaldehid, mengekalkan antigen H-flagellar) adalah besar dan berlaku lebih cepat.
3. Tindak balas aglutinasi untuk menentukan kumpulan darah Tindak balas aglutinasi untuk menentukan kumpulan darah digunakan untuk menubuhkan sistem ABO (Jadual b) menggunakan aglutinasi eritrosit dengan antibodi serum imun terhadap antigen kumpulan darah A (I), B (III). Kawalannya ialah: serum yang tidak mengandungi antibodi, i.e. serum AB (IV) kumpulan darah; antigen yang terkandung dalam sel darah merah kumpulan A (II), B (III). Kawalan negatif tidak mengandungi antigen, iaitu, kumpulan O (I) eritrosit digunakan.
Jadual 7.6. Penentuan kumpulan darah ABO
| Hasil tindak balas |
Kumpulan |
|
|
kepunyaan |
||
|
diteliti |
||
|
sel darah merah dengan |
serum (plasma) |
|
|
standard |
dengan standard |
|
|
serum | ||
Tindak balas aglutinasi terperinci (RA). Untuk menentukan AT dalam serum darah pesakit, a tindak balas aglutinasi meluas (RA). Untuk melakukan ini, diagnosticum ditambah kepada satu siri pencairan serum darah - penggantungan mikroorganisma atau zarah terbunuh dengan Ag yang diserap. Pemberian pencairan maksimum penggumpalan Ag dipanggil titer serum.
Jenis tindak balas aglutinasi (RA) untuk mengesan AT - ujian titisan darah untuk tularemia (dengan diagnosticum yang digunakan pada titisan darah dan rupa aglutinat keputihan yang kelihatan) dan ujian Huddleson untuk brucellosis (dengan diagnosticum yang diwarnai dengan gentian violet yang digunakan pada setitik darah serum).
Anggaran tindak balas aglutinasi (RA)
Untuk mengenal pasti mikroorganisma terpencil, anggaran RA diletakkan pada slaid kaca. Untuk melakukan ini, budaya patogen ditambah kepada titisan antiserum diagnostik standard (dicairkan 1:10, 1:20). Pada hasil positif melakukan tindak balas terperinci dengan peningkatan pencairan antiserum.
Reaksi dianggap positif jika aglutinasi diperhatikan dalam pencairan yang hampir dengan titer serum diagnostik.
OAS. O-Ags somatik adalah stabil haba dan boleh menahan mendidih selama 2 jam. Apabila berinteraksi dengan AT, ia membentuk agregat berbutir halus.
N-Ag. N-Ag (flagellates) adalah termolabile dan cepat merosot pada 100 °C, serta di bawah pengaruh etanol. Dalam tindak balas dengan H-antiserum, selepas 2 jam pengeraman, kepingan besar yang longgar terbentuk (dibentuk oleh bakteria yang melekat bersama dengan flagela).
Vi-Ar bakteria kepialu agak stabil haba (menahan suhu 60-62 °C selama 2 jam); Apabila diinkubasi dengan antiserum Vi, aglutinat berbutir halus terbentuk.
Tindak balas hemaglutinasi langsung
Yang paling mudah daripada ini tindak balas - penggumpalan sel darah merah, atau hemaglutinasi, digunakan untuk menentukan kumpulan darah dalam sistem ABO. Untuk menentukan penggumpalan(atau kekurangannya) gunakan antisera standard dengan aglutinin anti-A dan anti-B. Tindak balas itu dipanggil langsung, kerana Ags yang sedang dikaji adalah komponen semula jadi sel darah merah.
Biasa dengan hemaglutinasi langsung hemagglutinasi virus mempunyai mekanisme. Banyak virus mampu secara spontan mengaglutinasi eritrosit burung dan mamalia; penambahannya kepada penggantungan eritrosit menyebabkan pembentukan agregat daripadanya.
Tindak balas aglutinasi Tindak balas aglutinasi
(RA) - kaedah mengenal pasti dan kuantifikasi Ag dan At, berdasarkan keupayaan mereka membentuk aglomerat yang boleh dilihat dengan mata kasar. Di jabatan penyakit berjangkit. penyakit atau untuk tujuan lain digunakan untuk mengenal pasti mikrob dan sel yang tidak diketahui, untuk menentukan kehadiran dan jumlah Ab dalam darah dan cecair lain. Prinsip penentuan adalah berdasarkan kekhususan interaksi antara Ag dan Ab dan terdiri daripada mencari yang diketahui daripada yang tidak diketahui. Terdapat banyak pilihan untuk RA: kuantitatif dan kualitatif, tabung uji dan kaca, volumetrik dan titisan, kaedah konvensional, dipercepatkan dan ekspres. Untuk peringkat RA anda perlukan: 1) s-ka darah. Dalam varian dengan menentukan jenis (var) bakteria, ujian aglutinasi industri digunakan, dihasilkan oleh arnab yang mengimunkan. Dalam varian dengan penentuan jenis Ab, sampel darah diambil daripada ujian. manusia atau haiwan. Larutan mestilah steril dan bebas daripada zarah terampai. Sediakan pencairan asas dalam larutan garam. Ia sepatutnya 2-4 kali lebih rendah daripada titer diagnostik untuk penyakit ini; 2) Ag. Dalam versi tindak balas dengan penentuan jenis Ab, kit diagnostik industri digunakan; dalam varian dengan penentuan Ag, diagnosticums disediakan sendiri dalam bentuk penggantungan 1-3 bilion dalam larutan garam ujian agar-agar 18-20 jam (kurang kerap sup). mikrob dinyahaktifkan dengan memanaskan dalam tab mandi air pada suhu 70°C selama 1 jam atau dengan pengeraman 24 jam pada suhu 37°C dengan formaldehid (kepekatan akhir 0.2%); 3) elektrolit dalam bentuk larutan garam. Teknik pementasan tiub bersiri volumetrik RA untuk menentukan titer Ab dalam s-ki: beberapa baris pencairan kerja disediakan daripada pencairan utama s-ki. Bilangan baris bergantung pada bilangan diagnostik yang diambil ke dalam eksperimen; bilangan dan faktor pencairan ditentukan oleh titer diagnostik penyakit yang disyaki. Siri mestilah sekurang-kurangnya mengandungi pencairan yang sepadan dengan titer Ab diagnostik, dua pencairan di bawah dan dua pencairan di atasnya. sebagai contoh, jika titer diagnostik ialah 1:100, maka dengan kaedah volumetrik pementasan RA, pencairan berikut perlu disediakan: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; dengan titisan kaedah, pencairan pertama (1:25) tidak diperlukan, tetapi pencairan lain yang lebih tinggi diperlukan - 1:800. kajian saintifik s-ku dititrasi ke reaksi negatif. Ia dicairkan seperti berikut: 0.25 ml larutan garam dituangkan ke dalam semua tabung uji, kecuali yang pertama, apabila tindak balas dilakukan dalam isipadu 0.5 ml, dan 0.5 ml apabila tindak balas dilakukan dalam jumlah 1. ml. Tuangkan 0.25 (0.5) ml pencairan utama ke dalam tabung uji pertama dan kedua, dari tabung uji kedua, ke dalam isipadu potongan dan pembiakan s-k dan meningkat 2 kali ganda, 0.25 (0.5) ml dipindahkan ke yang ke-3, dari yang ke-3 ke yang ke-4, dsb. hingga yang terakhir, daripada potongan 0.25 (0.5) ml dituangkan ke dalam segala-galanya untuk mengimbangi isipadu. Setiap pencairan dijalankan menggunakan pipet berasingan. Jika beberapa diagnosticum diambil ke dalam eksperimen, maka bagi setiap daripada mereka siri pencairannya sendiri disediakan dengan cara yang sama. Diagnosticum ditambah kepada setiap pencairan tabung uji dalam isipadu yang sama dengan isipadu tabung uji, akibatnya pencairan dalam setiap tabung uji digandakan. Eksperimen sepadan dengan kawalan s-ki (0.25 - 0.5 ml pencairan utama s-ki dan jumlah larutan garam yang sama) dan kawalan Ag (0.25 - 0.5 ml diagnostikum dan jumlah larutan garam yang sama). Jika beberapa diagnosticum digunakan dalam eksperimen, maka masing-masing mempunyai kawalan antigen sendiri. Rak dengan tabung uji digoncang dengan baik dan diletakkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 4 jam, dan kemudian dibiarkan pada suhu bilik sehingga keesokan harinya, selepas itu PA direkodkan berdasarkan jumlah sedimen dan tahap pembersihan cecair itu. Penentuan penunjuk ini, bergantung kepada sifat aglutinat, dilakukan dengan mata kasar pada latar belakang gelap, dalam agglutinoscope atau di atas permukaan cekung cermin mikroskop. Perakaunan bermula dengan kawalan: kawalan C harus telus, Ag harus keruh seragam (selepas menggoncang tiub). Jika kawalan adalah baik, wujudkan kehadiran dan tahap aglutinasi dalam semua tabung uji, yang ditetapkan oleh tambah: sedimen besar dan pembersihan lengkap cecair - 4 tambah; sedimen besar dan pembersihan cecair yang tidak lengkap - 3 tambah; sedimen ketara dan pembersihan ketara cecair adalah 2 tambah. Selepas ini, titer ditentukan: pencairan tertinggi dengan keamatan aglutinasi sekurang-kurangnya 2 tambah. Penyelidikan tajuk s-ki dibandingkan dengan titer diagnostik untuk penyakit ini. Jika titer diteliti. s-ki adalah 2 kali lebih rendah daripada nilai diagnostik, tindak balas dinilai sebagai ragu; jika titer adalah sama diagnostik - bagaimana lemah positif; jika ia 2-4 kali lebih tinggi, ia dianggap positif, jika ia 8 kali atau lebih tinggi, ia dianggap positif secara mendadak. Dengan pengedaran meluas Ab orang yang sihat Untuk menilai RA, peningkatan dalam titer Ab digunakan. Untuk menentukan jenis Ar dalam siri RA, bilangan baris mesti sepadan dengan nombor yang diambil untuk pengenalan ujian diagnostik. Daripada pencairan utama ujian diagnostik, satu siri pencairan dua kali ganda berturut-turut disediakan dengan cara yang sama seperti dalam RA untuk menentukan titer Ab. Faktor pencairan bergantung pada titer ujian aglutinasi. Dalam eksperimen, kehadiran pencairan yang sama dengan titer ujian adalah perlu, serta 2, 4, 6, 8 kali lebih rendah daripadanya. Contohnya, jika titer ujian diagnostik ialah 1 3200, maka anda harus menggunakan pencairan 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Isipadu yang sama bagi Ag yang diuji ditambah kepada pencairan ujian, sebagai hasilnya, pencairan ujian meningkat sebanyak 2 kali ganda. 2 kawalan ujian dan Ag ditambah pada eksperimen. Jika dalam eksperimen beberapa s-k terlibat, maka setiap satu daripadanya memerlukan kawalan sendiri. Setelah selesai tindak balas, dirian digoncang dengan kuat dan diletakkan dalam termostat pada 37 ° C. Keputusan diambil kira seperti yang diterangkan di atas. Penilaian tindak balas mempunyai ciri. Untuk membuat kesimpulan tentang pematuhan kajian. Ag diambil ke dalam eksperimen, titer tindak balas mesti sepadan dengan sekurang-kurangnya separuh titer ujian diagnostik standard. Titer 1 4 dan ke bawah dianggap sebagai tindak balas kumpulan Titiskan md pementasan RA berbeza daripada isipadu kerana s-ku dicairkan dalam isipadu 1 ml, Ag digunakan dalam kepekatan yang lebih tinggi (10 bilion/ml) dan ia ditambah 1 - 2 jatuh ke dalam tabung uji Pencairan ubat selepas menambah Ag dianggap tidak berubah. Jika tidak, kaedah penetapan, rakaman dan penilaian adalah serupa dengan kaedah volumetrik
(Sumber: Kamus Istilah Mikrobiologi)
KAJIAN IMUNOMIKROBIOLOGI
Kaedah imunologi digunakan untuk menyelesaikan banyak masalah:
1. Penilaian keadaan sistem imun orang ( status imun) mengikut takrifan kuantitatif dan ciri fungsi sel sistem imun dan produknya.
2. Penentuan komposisi dan ciri-ciri tisu manusia: kumpulan darah, faktor Rh, antigen pemindahan.
3. Diagnosis penyakit berjangkit dan ketahanan terhadapnya dengan mengesan dan mewujudkan titer antibodi (serodiagnosis), mengenal pasti antigen patogen dalam badan, dan menentukan tindak balas selular terhadap antigen ini.
4. Pengenalpastian seroid bagi kultur bakteria dan virus yang diasingkan daripada badan manusia dan haiwan.
5. Pengesanan dalam badan manusia dan dalam persekitaran luaran sebarang bahan dengan sifat antigenik atau hapten (hormon, enzim, racun, ubat-ubatan, ubat-ubatan, dll.).
6. Pengenalpastian keadaan imunopatologi, alahan, pemindahan dan tindak balas antitumor.
Proses interaksi antara antigen dan antibodi tindak balas serologi berlaku dalam dua fasa:
1) khusus- fasa interaksi di mana gabungan pelengkap pusat aktif antibodi (paratopes) dan epitop antigen berlaku. Biasanya fasa ini berlangsung beberapa saat atau minit;
2) tidak spesifik- fasa manifestasi, dicirikan tanda-tanda luaran pembentukan kompleks imun. Fasa ini boleh berkembang dari beberapa minit hingga beberapa jam.
Interaksi spesifik optimum antibodi dengan antigen berlaku dalam larutan isotonik dengan pH hampir neutral. Tindak balas antigen-antibodi dalam sistem in vitro boleh disertai dengan berlakunya beberapa fenomena.
· penggumpalan,
· hujan,
· lisis.
Manifestasi luaran tindak balas bergantung kepada sifat fizikokimia antigen (saiz zarah, keadaan fizikal), kelas dan jenis antibodi (lengkap dan tidak lengkap), serta keadaan eksperimen (konsistensi sederhana, kepekatan garam, pH, suhu).
Polivalensi antigen dan antibodi memastikan pembentukan agregat dapat dilihat dengan mata kasar. Ini berlaku mengikut teori pembentukan rangkaian, mengikut mana molekul antibodi dan antigen lain secara berurutan dilekatkan pada kompleks antigen-antibodi yang terhasil. Akibatnya, struktur rangkaian terbentuk, yang bertukar menjadi agregat yang mendakan. Sifat dan keterukan tindak balas bergantung kepada nisbah kuantitatif antigen dan antibodi. Tindak balas yang paling sengit berlaku apabila reagen berada dalam perkadaran yang setara.
Prasyarat pembentukan kekisi (rangkaian) - kehadiran lebih daripada tiga penentu antigen untuk setiap molekul antigen dan dua pusat aktif untuk setiap molekul antibodi. Molekul antigen ialah nod kekisi, dan molekul antibodi adalah pautan penghubung. Kawasan nisbah optimum (zon kesetaraan) antigen dan kepekatan antibodi, apabila antigen bebas atau antibodi bebas tidak dikesan dalam supernatan selepas pembentukan sedimen.
Agregat yang boleh mendakan terbentuk apabila antigen bergabung dengan antibodi penuh. Antibodi yang tidak lengkap(monovalent) tidak menyebabkan pembentukan struktur rangkaian dan agregat besar. Untuk mengesan antibodi tersebut, gunakan kaedah khas berdasarkan penggunaan antiglobulin (tindak balas Coombs).
Reaksi serologi, kerana kekhususan dan kepekaan yang tinggi, digunakan untuk pengesanan dan kuantifikasi antigen dan antibodi. Jumlah imunoreagen dalam tindak balas dinyatakan dengan titer - pencairan maksimum serum atau antigen di mana tindak balas masih diperhatikan.
Reaksi serologi dalam makmal mikrobiologi dan imunologi digunakan untuk dua tujuan:
1) untuk seroidentifikasi mikroorganisma, toksin, antigen secara umum menggunakan antibodi yang diketahui (serum diagnostik imun),
2) untuk serodiagnosis - menentukan sifat antibodi dalam serum darah pesakit untuk bakteria, virus, dan penyakit berjangkit lain yang kurang kerap menggunakan antigen yang diketahui (diagnosticum).
Untuk menentukan generik, spesies dan jenis antigen, ujian imun yang diketahui diperlukan. sera diagnostik. Ia diperoleh melalui pemberian berulang kepada haiwan (biasanya arnab) dalam meningkatkan dos mikroorganisma yang terbunuh atau hidup, produk pereputannya, toksin yang dineutralkan atau asli. Selepas kitaran imunisasi haiwan tertentu, pendarahan besar-besaran atau pendarahan menyeluruh haiwan dilakukan. Darah yang dikumpul dalam bekas steril mula-mula diletakkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 4 - 6 jam untuk mempercepatkan pembekuan, kemudian dalam peti ais selama sehari. Serum telus yang terhasil disedut ke dalam bekas steril, pengawet ditambah, titer antibodi ditentukan, diperiksa untuk kemandulan dan dituangkan ke dalam ampul.
Digunakan tidak terserap Dan terserap sera diagnostik. Serum yang tidak diserap mempunyai titer tinggi antibodi, tetapi mampu memberikan tindak balas kumpulan (silang).
Sera terjerap dicirikan oleh kekhususan tindakan yang ketat (mereka bertindak balas hanya dengan antigen homolog). Sera yang mengandungi antibodi kepada hanya satu antigen tertentu dipanggil monoreseptor.
Mereka juga menghasilkan serum yang dilabelkan dengan fluorochromes, enzim, dan radioisotop, yang memungkinkan untuk mengesan walaupun kesan antigen dengan tahap ketepatan yang tinggi.
Penggantungan bakteria hidup atau mati, produk pecahannya, toksin, dan virus digunakan sebagai antigen (diagnostik) dalam tindak balas serologi. Dalam sesetengah kes, ekstrak atau antigen terpencil secara kimia daripada mikroorganisma dan tisu haiwan digunakan.
Semua kaedah imunomikrobiologi boleh dibahagikan kepada 3 kumpulan:
1) berdasarkan interaksi langsung antigen dengan antibodi(fenomena aglutinasi, pemendakan, hemagglutinasi, imobilisasi, dll.);
2) berdasarkan Interaksi pengantara antigen dengan antibodi(tindak balas hemaglutinasi tidak langsung, penggumpalan, penggumpalan lateks, penggumpalan karbon, penggumpalan bentonit, penetapan pelengkap, dsb.);
3) menggunakan antibodi atau antigen berlabel(kaedah antibodi pendarfluor, imunosorben berkaitan enzim dan ujian radioimun dan kaedah lain).
TINDAK BALAS PENGGULATAN
Tindak balas ini melibatkan antigen dalam bentuk zarah (sel mikroba, sel darah merah dan antigen korpuskular lain), yang dilekatkan bersama oleh antibodi dan mendakan.
Untuk melakukan tindak balas aglutinasi(RA) tiga komponen diperlukan: 1) antigen (aglutinogen);
2) antibodi (aglutinin)
3) elektrolit (larutan natrium klorida isotonik).
Anggaran tindak balas aglutinasi (RA)
Indikatif, atau plat, RA diletakkan pada slaid kaca pada suhu bilik. Untuk melakukan ini, gunakan pipet Pasteur untuk menyapu setitik serum pada pencairan 1:10 hingga 1:20 dan titisan kawalan larutan natrium klorida isotonik secara berasingan pada kaca. Koloni atau budaya harian bakteria (setitis diagnosticum) dimasukkan ke dalam kedua-dua gelung bakteriologi dan dicampur dengan teliti. Tindak balas diambil kira secara visual selepas beberapa minit, kadangkala menggunakan kanta pembesar (x5). Dengan RA positif, penampilan serpihan besar dan kecil dalam penurunan serum diperhatikan; dengan RA negatif, serum kekal mendung seragam.
Tindak balas aglutinasi terperinci untuk mengenal pasti titer antibodi spesifik dalam pesakit.
RA penuh untuk serodiagnosis dibuat dalam serum pesakit. Ia juga dicairkan dalam larutan natrium klorida isotonik dari 1:50 - 1:100 hingga 1:800 atau 1:1600. Memandangkan titer serum yang lebih rendah mungkin mengandungi aglutinin normal yang ditemui pada orang yang sihat atau pesakit dengan diagnosis lain (titer diagnostik). Sebagai antigen dalam tindak balas ini, diagnosticum digunakan - penggantungan yang diketahui, biasanya bakteria yang terbunuh.
1 ml larutan natrium klorida isotonik dituang dahulu ke dalam tiub penggumpalan. 1 ml serum yang dicairkan 1:100 ditambah kepada yang pertama, dan selepas mencampurkannya, 1 ml dipindahkan ke yang kedua, dari yang kedua ke yang ketiga, dsb. 1-2 titik penggantungan bakteria yang mengandungi 3 bilion badan mikrob dalam 1 ml ditambah kepada pencairan dua kali ganda sera yang terhasil (dari 1:100 hingga 1:1600 atau lebih). Tiub digoncang dan diletakkan dalam termostat pada 37°C selama 2 jam, kemudian disimpan pada suhu bilik selama 24 jam.
Tindak balas aglutinasi terperinci diambil kira dengan menilai setiap tabung uji secara berurutan, bermula dengan yang kawalan, dengan goncangan lembut. Seharusnya tiada aglutinasi dalam tiub kawalan. Keamatan tindak balas aglutinasi ditandakan dengan tanda-tanda berikut: ++++ - aglutinasi lengkap (serpihan aglutinasi dalam cecair telus mutlak); +++ - aglutinasi tidak lengkap (serpihan dalam cecair sedikit opalescent); ++ - penggumpalan separa (serpihan kelihatan jelas, cecair sedikit keruh); + - penggumpalan lemah, dipersoalkan - cecair sangat keruh, kepingan di dalamnya sukar untuk dibezakan; - - ketiadaan aglutinasi (cecair adalah keruh seragam).
Titer serum dianggap sebagai pencairan terakhirnya, di mana keamatan aglutinasi dinilai sebagai tidak kurang daripada dua tambah (++)
Kuliah Bil 16
Kamus
TERUS – lurus seterusnya tanpa apa-apa, tanpa pautan seterusnya.
SECARA TIDAK LANGSUNG– melalui sel lain, bukan secara langsung.
MENURUN ≠ MENINGKAT (aktiviti sel).
TOLAK – tak terima, tolak. Badan menolak organ yang dipindahkan.
Reaksi imun.
Tindak balas imun ialah tindak balas interaksi khusus (mengikat) antigen dan antibodi atau antigen dan T-limfosit yang tersensitisasi.
Tindak balas ini berlaku secara in vitro (dalam tabung uji) dan in vivo (dalam organisma hidup).
Tindak balas ini melibatkan serum (serum), itulah sebabnya ia dipanggil serologi.
Tindak balas imun digunakan untuk diagnosis penyakit berjangkit. Dalam kes ini, komponen yang tidak diketahui ditentukan oleh komponen yang diketahui, yang berdasarkan kekhususan interaksi antigen dengan antibodi. Jika antibodi yang diketahui, maka anda boleh mengenal pasti (menemui) antigen yang tidak diketahui. Jika antigen yang diketahui, maka anda boleh menggunakannya mengesan antibodi yang tidak diketahui.
Oleh itu, tindak balas imun digunakan:
1) untuk diagnostik serologi(serodiagnosis) penyakit - pengesanan dalam serum darah orang sakit antibodi kepada agen penyebab tertentu penyakit berjangkit (antigen yang diketahui); jika antibodi kepada mana-mana patogen terdapat dalam serum darah orang yang sakit, maka patogen inilah yang menyebabkannya jangkitan;
2) untuk pengenalpastian serologi (seroidentifikasi) mikrob - untuk menentukan jenis patogen menggunakan sera diagnostik imun (antibodi yang diketahui); jika antibodi mengikat patogen yang diasingkan daripada orang yang sakit, maka mikrob ini adalah sama dengan yang haiwan itu diimunisasi menerima serum diagnostik imun .
Reaksi imun berlaku dalam 2 fasa:
1) fasa tertentu– sambungan pusat aktif antibodi dengan kumpulan penentu antigen dengan pembentukan kompleks antigen-antibodi; fasa ini berjalan dengan cepat, tetapi tiada kesan yang boleh dilihat;
2) fasa tidak spesifik– rupa kesan yang boleh dilihat interaksi antigen dan antibodi - kehilangan draf(aglutinasi) atau keadaan mendung(kerpasan), yang membolehkan lihat pendidikan kompleks antigen-antibodi dan buat kesimpulan tentang pematuhan antigen dan antibodi antara satu sama lain.
Reaksi imun termasuk tindak balas aglutinasi (RA), tindak balas pemendakan (RP), tindak balas penetapan pelengkap (CFR).
Tindak balas aglutinasi- ini adalah pelekatan dan pemendakan mikrob atau sel lain (eritrosit) di bawah pengaruh antibodi dengan kehadiran elektrolit. Kesan tindak balas yang boleh dilihat (fenomena aglutinasi) ialah pembentukan mendakan dipanggil menggumpal.
Tindak balas ini digunakan untuk serodiagnosis Dan pengenalpastian sero. RA digunakan untuk serodiagnosis (pengesanan antibodi dalam serum darah pesakit) demam kepialu dan paratifoid(Reaksi Vidal), brucellosis(reaksi Wright), tularemia dan leptospirosis. RA digunakan untuk pengecaman sero (menentukan jenis patogen yang diasingkan daripada pesakit) apabila jangkitan usus, batuk kokol, taun dan lain-lain.
Komponentindak balas:
1. A ntigen (aglutinogen) – ini adalah keseluruhan (tidak dimusnahkan) mikrob atau sel lain ( korpuskular, antigen tidak larut). Aglutinogen- ini adalah penggantungan hidup atau dibunuh sel mikrob atau mana-mana sel lain. Antigen boleh sama ada tidak diketahui atau diketahui. Aglutinogen yang tidak diketahui ialah budaya mikrob yang diasingkan daripada badan pesakit yang perlu ditentukan. Antigen yang diketahui - diagnosticum- ubat diagnostik - penggantungan orang mati mikrob spesies yang diketahui dalam larutan garam. Penggantungan ini mendung (legap), kerana sel mikrob tidak larut, tetapi kekal utuh. Aglutinogen yang diketahui akan digunakan untuk mengesan antibodi yang tidak diketahui dalam serum darah pesakit.
2. Antibodi (aglutinin)- terdapat dalam serum darah. Antibodi juga boleh sama ada tidak diketahui atau diketahui. Antibodi yang tidak diketahui untuk ditentukan berada dalam serum darah orang sakit. Antibodi yang diketahui terdapat dalam sera diagnostik imun yang dipanggil sera penggumpal. Mereka digunakan untuk pengenalan sero, i.e. untuk menentukan antigen yang tidak diketahui - sejenis kultur mikrob.
3. Elektrolit– 0.9% larutan natrium klorida.
Mendapatkan ujian diagnostik.
Kultur tulen patogen spesies yang diketahui yang ditanam pada agar-agar senget (contohnya, agen penyebab demam kepialu) dibasuh dengan 3-4 ml larutan isotonik, diletakkan dalam tiub steril, mikrob dibunuh dalam beberapa cara (contohnya, dengan mendidih dan ketumpatan ditentukan (perlu ada 3 bilion sel mikrob dalam 1 ml). Jika sel mikrob terbunuh suhu tinggi, kemudian mereka mendapat O-diagnosticum (O-antigen), tetapi jika ia dirawat dengan formaldehid, maka mereka mendapat H-diagnosticum (H-antigen).
Contoh diagnostik: salmonella diagnosticum, brucellosis diagnosticum, tularemia diagnosticum.
Penyediaan sera aglutinasi.
Haiwan (biasanya arnab) disuntik secara parenteral dengan diagnostikum mikrob dalam dos yang meningkat 5-7 kali pada selang waktu ( menjalankan hiperimunisasi), dan kemudian serum darah mereka diambil, yang mengandungi antibodi kepada mikrob dari mana diagnostikum disediakan. Jika imunisasi dijalankan dengan O-diagnosticum, maka sera O-aglutinating (mengandungi O-antibodi) diperolehi, jika dengan H-diagnosticum, sera aglutinating H diperolehi.
Sera aglutinasi boleh tidak terserap atau asli dan terserap.
Serum yang tidak diserap mengandungi antibodi kumpulan kepada beberapa spesies mikrob yang berkait rapat.
Serum yang diserap mengandungi antibodi kepada satu atau lebih antigen bagi satu jenis mikrob. Jika sera mengandungi antibodi kepada hanya satu antigen, ia dipanggil monoreseptor atau monovalen, jika kepada beberapa antigen – kumpulan serum terserap .
Contoh sera aglutinasi:Salmonella monoreceptor H-aglutinating serum, Salmonella group serum O-aglutinating terjerap, antikolera O-aglutinating serum, dsb..
Titer serum aglutinasi - pencairan tertinggi serum di mana tindak balas aglutinasi dengan antigen masih dikesan (titer bergantung pada jumlah antibodi dalam darah: lebih banyak antibodi, lebih tinggi titer serum).
Kaedah untuk pementasan RA.
1. Anggaran (lamellar) RA– dijalankan pada kaca. Sapukan 2 titis serum dan 1 titis larutan isotonik pada slaid kaca. Kultur mikrob ditambah dalam gelung ke dalam salah satu titisan serum dan ke dalam titisan larutan isotonik dan dicampur. Setitik larutan isotonik dengan kuman – kawalan antigen, setitik serum bebas kuman – kawalan antibodi, setitik serum dengan mikrob – pengalaman. Jika serum mengandungi antibodi yang sepadan dengan antigen mikrob yang bercampur dengannya, maka antibodi dan antigen secara khusus akan mengikat satu sama lain dan selepas 1-3 minit kepingan aglutinat akan muncul dalam titisan ujian. Kawalan antigen hendaklah keruh dan kawalan antibodi harus jelas. Keputusan tindak balas direkodkan berdasarkan penampilan kepingan aglutinat . Jika serpihan jatuh, tindak balas adalah positif, i.e. Antigen sepadan dengan antibodi dan antigen boleh digunakan untuk menentukan antibodi atau sebaliknya. Jika kekeruhan kekal, tindak balas adalah negatif.
2. Tindak balas aglutinasi terperinci - dijalankan dalam tabung uji. Pertama, sediakan 2 kali ganda pencairan serum darah orang sakit dari 1:50 hingga 1:1600. 1 ml larutan natrium klorida isotonik dituang ke dalam 6 tabung uji. 1 ml serum darah pesakit pada pencairan 1:50 dimasukkan ke dalam tabung uji pertama, dicampur dan pencairan 1:100 diperoleh, kemudian 1 ml pencairan 1:100 dipindahkan ke tabung uji kedua dan pencairan 1:200 diperolehi, dsb. Dua tiub disimpan untuk kawalan antigen dan serum. Pada kawalan serum tambahkan hanya serum pada pencairan 1:50, kepada kawalan antigen - hanya antigen. Tambah 0.1 ml antigen - diagnosticum (O- atau H-) ke semua tabung uji lain dan letakkan semua tabung uji dalam termostat pada 37°C selama 18-20 jam. Keputusan tindak balas direkodkan mengikut sifat, jumlah mendakan (aglutinat) yang terbentuk dan tahap kekeruhan. Perakaunan dijalankan hanya dengan keputusan berikut dalam kawalan: kawalan serum - telus, kawalan antigen - mendung. O-antibodi memberikan mendakan berbutir halus. H-antibodi - berbutir kasar. Berdasarkan tabung uji terakhir di mana tindak balas aglutinasi masih kelihatan, ia ditubuhkan titer diagnostik.
Semasa serodiagnosis penyakit, adalah penting bukan sahaja untuk mengesan antibodi khusus kepada patogen tertentu, tetapi juga untuk mengenal pasti kuantiti mereka, i.e. mewujudkan titer antibodi sedemikian kepada Bilakah kita boleh bercakap tentang kehadiran penyakit yang disebabkan oleh patogen ini? . Titer ini dipanggil titer diagnostik. Sebagai contoh, untuk mendiagnosis demam kepialu, anda perlu mengenal pasti titer antibodi 1:400, tetapi tidak kurang. Memberikan hasil yang lebih tepat pengesanan peningkatan antibodi dalam sera berpasangan. Serum pesakit dikumpul pada permulaan penyakit dan selepas 3 hingga 5 hari atau lebih. Jika titer antibodi meningkat sekurang-kurangnya 4 kali ganda, oleh itu, kita boleh bercakap tentang penyakit semasa.
Jika tindak balas aglutinasi terperinci dilakukan untuk pengecaman sero, maka sera diagnostik aglutinasi digunakan, dicairkan kepada titer atau separuh titernya. RA dianggap positif jika aglutinasi dikesan pada pencairan yang hampir dengan titer serum diagnostik.
