திரட்டுதல் எதிர்வினை (lat இலிருந்து. திரட்டுதல்- gluing) - எலக்ட்ரோலைட்டுகளின் முன்னிலையில் ஆன்டிபாடிகள் மூலம் கார்பஸ்கல்ஸ் (பாக்டீரியா, சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் போன்றவை) ஒட்டுதல்.
திரட்டுதல் எதிர்வினைஉடற்கூறுகள் (உதாரணமாக, பாக்டீரியா) "ஒட்டப்பட்ட" ஆன்டிபாடிகள் (படம் 7.37) கொண்ட செதில்கள் அல்லது வண்டல் வடிவத்தில் தன்னை வெளிப்படுத்துகிறது. திரட்டல் எதிர்வினை பயன்படுத்தப்படுகிறது: நோயாளியிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமியை தீர்மானிக்கவும்; நோயாளியின் இரத்த சீரம் உள்ள ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானித்தல்; இரத்த குழுக்களை தீர்மானித்தல்.
அரிசி. 7.37 a, b. உடன் திரட்டுதல் எதிர்வினைIgMஆன்டிபாடிகள் (அ) மற்றும்IgGஆன்டிபாடிகள் (பி)
1. நோயாளியிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமியை தீர்மானித்தல் கண்ணாடி மீது தோராயமான திரட்டல் எதிர்வினை (படம் 7.38). நோயாளியிடமிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பாக்டீரியாவின் இடைநீக்கம் ஒரு துளி திரட்டும் சீரம் (1:20 நீர்த்தல்) சேர்க்கப்படுகிறது. ஒரு மிதவை வீழ்படிவு உருவாகிறது.
அரிசி. 7.38.
ஒரு நோயாளியிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட ஒரு நோய்க்கிருமியுடன் ஒரு விரிவான திரட்டல் எதிர்வினை (படம் 7.39). நோயாளியிடமிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட பாக்டீரியாவின் இடைநீக்கம், aglutinating சீரம் நீர்த்துப்போகச் சேர்க்கப்படுகிறது.
அரிசி. 52
2. நோயாளியின் இரத்த சீரம் உள்ள ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானித்தல்
நோயாளியின் இரத்த சீரம் (படம் 7.39) உடன் விரிவான திரட்டல் எதிர்வினை. நோயறிதல் நோயாளியின் சீரம் நீர்த்துப்போகச் சேர்க்கப்படுகிறது.
- O-diagnosticum உடன் திரட்டுதல் (வெப்பத்தால் கொல்லப்படும் பாக்டீரியா, O-ஆன்டிஜெனைத் தக்கவைத்தல்) நேர்த்தியான திரட்டல் வடிவத்தில் ஏற்படுகிறது.
- H-diagnosticum உடன் திரட்டுதல் (ஃபார்மால்டிஹைடால் கொல்லப்படும் பாக்டீரியா, ஃபிளாஜெல்லர் H-ஆன்டிஜெனைத் தக்கவைத்தல்) பெரியது மற்றும் வேகமாக நிகழ்கிறது.
3. இரத்தக் குழுக்களைத் தீர்மானிப்பதற்கான திரட்டல் எதிர்வினை A (I), B (III) என்ற இரத்தக் குழுவின் ஆன்டிஜென்களுக்கு எதிராக நோய் எதிர்ப்பு சீரம் ஆன்டிபாடிகளுடன் எரித்ரோசைட்டுகளின் திரட்டலைப் பயன்படுத்தி ABO அமைப்பை (அட்டவணை b) நிறுவுவதற்கு இரத்தக் குழுக்களைத் தீர்மானிப்பதற்கான திரட்டல் எதிர்வினை பயன்படுத்தப்படுகிறது. கட்டுப்பாடு: ஆன்டிபாடிகள் இல்லாத சீரம், அதாவது. சீரம் ஏபி (IV) இரத்தக் குழு; A (II), B (III) குழுக்களின் சிவப்பு இரத்த அணுக்களில் உள்ள ஆன்டிஜென்கள். எதிர்மறை கட்டுப்பாட்டில் ஆன்டிஜென்கள் இல்லை, அதாவது, குழு O (I) எரித்ரோசைட்டுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
அட்டவணை 7.6. ABO இரத்தக் குழுக்களைத் தீர்மானித்தல்
| எதிர்வினை முடிவுகள் |
குழு |
|
|
சேர்ந்தது |
||
|
ஆய்வு செய்தார் |
||
|
உடன் சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் |
சீரம் (பிளாஸ்மா) |
|
|
தரநிலை |
தரத்துடன் |
|
|
சீரம்கள் | ||
ஒரு திரட்டல் எதிர்வினை (RA) என்பது ஒரு எலக்ட்ரோலைட்டின் முன்னிலையில் ஆன்டிபாடிகளின் செல்வாக்கின் கீழ் நுண்ணுயிரிகள் அல்லது பிற செல்களின் ஒட்டுதல் மற்றும் மழைப்பொழிவு ஆகும். இதன் விளைவாக வரும் வீழ்படிவு ஒரு aglutinate என்று அழைக்கப்படுகிறது.
RA பயன்படுத்தப்படுகிறது:
1. நோயாளியின் இரத்த சீரம் (செரோடியோக்னோசிஸ்) உள்ள ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய.
2. ஒரு நோயாளியிலிருந்து (செரோடைப்பிங்) தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமி நுண்ணுயிரிகளின் தூய கலாச்சாரத்தின் வகை மற்றும் செரோவரை தீர்மானிக்க.
நோயாளிகளின் இரத்த சீரம் உள்ள ஆன்டிபாடிகளை தீர்மானிக்க, திரட்டுதல் எதிர்வினை பயன்படுத்தப்படுகிறது, எடுத்துக்காட்டாக, டைபாய்டு காய்ச்சல் மற்றும் பாராடைபாய்டு காய்ச்சல் (வைடல் எதிர்வினை), புருசெல்லோசிஸ் (ரைட், ஹெடில்சன் எதிர்வினை), துலரேமியா, லெப்டோஸ்பிரோசிஸ் மற்றும் பிற. தொற்று நோய்கள், அத்துடன் நோயாளியிடமிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமியைத் தீர்மானிக்கவும் ( குடல் தொற்றுகள், வூப்பிங் இருமல், முதலியன). இரத்த குழுக்கள், Rh காரணி போன்றவற்றை தீர்மானிக்க RA பயன்படுத்தப்படுகிறது.
எதிர்வினைக்கு பின்வரும் கூறுகள் தேவை:
1. ஆன்டிஜென் (agglutinogen) கார்பஸ்குலர் இருக்க வேண்டும், அதாவது, அது வாழும் அல்லது கொல்லப்பட்ட நுண்ணுயிரிகளின் இடைநீக்கம் (கண்டறிதல் மீ), எரித்ரோசைட்டுகள் அல்லது பிற செல்கள். பொதுவாக, அகர் சாய்வுகளில் வளர்க்கப்படும் நுண்ணுயிரிகளின் தினசரி கலாச்சாரம் பயன்படுத்தப்படுகிறது. கலாச்சாரம் 3 - 4 மில்லி ஐசோடோனிக் கரைசலுடன் கழுவப்பட்டு, ஒரு மலட்டு குழாய்க்கு மாற்றப்பட்டு, அடர்த்தி தீர்மானிக்கப்படுகிறது. இடைநீக்கம் ஒரே மாதிரியாக இருக்க வேண்டும் மற்றும் 1 மில்லிக்கு 3 பில்லியன் நுண்ணுயிர் செல்களைக் கொண்டிருக்க வேண்டும். கொல்லப்பட்ட நுண்ணுயிரிகளின் இடைநீக்கத்தைப் பயன்படுத்துதல் - கண்டறிதல் - வேலை (உற்பத்தியில் தயாரிக்கப்பட்டது) எளிதாக்குகிறது.
2. ஆன்டிபாடிகள் (அக்லூட்டினின்கள்) நோயாளியின் சீரம் (செரோடியோக்னோசிஸின் போது) அல்லது திரட்டும் சீரம் (செரோடைப்பிங்கின் போது) காணப்படுகின்றன. கொல்லப்படும் பாக்டீரியாக்களுடன் முயல்களுக்கு தடுப்பூசி போடுவதன் மூலம் திரட்டும் செரா பெறப்படுகிறது.
ஒருங்கிணைக்கும் டைட்டர்சீரம் அதன் மிக உயர்ந்த நீர்த்தல் என்று அழைக்கப்படுகிறது, இதில் சில சோதனை நிலைமைகளின் கீழ் தொடர்புடைய ஆன்டிஜெனுடன் வினைபுரிகிறது.
திரட்டும் செரா பூர்வீகமாக (உறிஞ்சப்படாதது) மற்றும் உறிஞ்சப்பட்டதாக இருக்கலாம். சிறிய நீர்த்தங்களில் உள்ள நேட்டிவ் செரா, விலங்குகள் சீரம் பெறுவதற்கு நோய்த்தடுப்பு செய்யப்பட்ட நுண்ணுயிரிகளுடன் மட்டுமல்லாமல், தொடர்புடைய வகை நுண்ணுயிரிகளுடனும் தொடர்பு கொள்கின்றன, ஏனெனில் அவை குழு ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்டிருக்கின்றன (பொதுவான ஆன்டிஜென்களைக் கொண்ட நுண்ணுயிரிகளுக்கு ஆன்டிபாடிகள்). நேட்டிவ் செரா ஒரு விரிவான திரட்டல் எதிர்வினைக்கு (செரோடயாக்னோசிஸ்) பயன்படுத்தப்படுகிறது, இது எதிர்வினையின் இருப்பை மட்டுமல்ல, ஆன்டிபாடி டைட்டரின் அதிகரிப்பின் இயக்கவியலையும் கணக்கில் எடுத்துக்கொள்கிறது.
குழு ஆன்டிபாடிகள் குழு ஆன்டிஜென்களைக் கொண்ட தொடர்புடைய பாக்டீரியாக்களுடன் தொடர்புகொள்வதன் மூலம் பூர்வீக சீரம் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்டால் (அட்சார்பட்) உறிஞ்சப்பட்ட செரா பெறப்படுகிறது. உறிஞ்சப்பட்ட செரா ஒரு ஆன்டிஜென் ஏற்பிக்கான ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்ட மோனோரெசெப்டராக இருக்கலாம் (அல்லது வகை-குறிப்பிட்டது), பாலிவலன்ட் செரா பல உறிஞ்சப்பட்ட அல்லது உறிஞ்சப்படாத செராவின் கலவையைக் கொண்டுள்ளது. உறிஞ்சப்பட்ட செரா கண்ணாடி திரட்டல் எதிர்வினைக்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது.
விலங்குகளுக்கு H-ஆன்டிஜெனுடன் மோடைல் பாக்டீரியாவுடன் நோய்த்தடுப்பு அளிக்கப்படும்போது, H-ஆன்டிபாடிகளைக் கொண்ட H-அக்ளுடினேட்டிங் செரா பெறப்படுகிறது (உதாரணமாக, சால்மோனெல்லா மோனோரெசெப்டர் H-அக்ளுடினேட்டிங் சீரம்). O-ஆன்டிஜென் மூலம் நோய்த்தடுப்பு மூலம், O-ஆன்டிபாடிகள் கொண்ட O-அக்ளுடினேட்டிங் செரா பெறப்படுகிறது (உதாரணமாக, சால்மோனெல்லா குழு உறிஞ்சப்பட்ட ஓ-அக்ளுடினேட்டிங் சீரம், ஆன்டிகோலெரா ஓ-அக்ளுடினேட்டிங் சீரம்). H- மற்றும் O- ஆன்டிஜென்களுடன் நோய்த்தடுப்பு மூலம், H- மற்றும் O- ஆன்டிபாடிகள் கொண்ட செரா பெறப்படுகிறது.
மேலும், ஓ-அக்ளுட்டினின்கள் ஒரு நுண்ணிய-தானிய அக்லூட்டினேட்டை உருவாக்குகின்றன, மேலும் எச்-அக்ளுடினின்கள் கரடுமுரடான-தானிய வண்டலை உருவாக்குகின்றன.
3. எலக்ட்ரோலைட் - ஐசோடோனிக் NaCl கரைசல் (0.9% சோடியம் குளோரைடு கரைசல் காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் தயாரிக்கப்படுகிறது).
ஒரு திரட்டல் வினையைச் செய்வதற்கு இரண்டு முக்கிய முறைகள் உள்ளன: கண்ணாடி மீது ஒரு எதிர்வினை (சில சமயங்களில் ஒரு அறிகுறி அல்லது தட்டு எதிர்வினை என்று அழைக்கப்படுகிறது) மற்றும் ஒரு விரிவான எதிர்வினை (சோதனை குழாய்களில்)
கண்ணாடி மீது ஒரு திரட்டல் எதிர்வினை அமைத்தல். இரண்டு சொட்டு சீரம் மற்றும் ஒரு துளி ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல் கொழுப்பு இல்லாத கண்ணாடி ஸ்லைடில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. நோயறிதல் திரட்டும் சீரம் ஒரு நீர்த்தலில் எடுக்கப்படுகிறது, இது அதன் டைட்டரைப் பொறுத்து, 1:10, 1:25, 1:50 அல்லது 1:100 ஆகும். ஆய்வின் கீழ் உள்ள நுண்ணுயிரிகளின் கலாச்சாரம் ஒரு துளி சீரம் மற்றும் ஒரு துளி ஐசோடோனிக் கரைசலில் ஒரு சுழற்சியைப் பயன்படுத்தி முழுமையாக கலக்கப்படுகிறது. நுண்ணுயிரிகளுடன் சோடியம் குளோரைடு ஒரு துளி ஆன்டிஜென் கட்டுப்பாடு, நுண்ணுயிரிகள் இல்லாமல் சீரம் ஒரு துளி சீரம் கட்டுப்பாடு ஆகும். சீரம் உள்ள ஒரு துளியிலிருந்து NaCl உடன் ஒரு துளிக்கு கலாச்சாரத்தை மாற்ற முடியாது. எதிர்வினை 1-3 நிமிடங்கள் அறை வெப்பநிலையில் நடைபெறுகிறது. சீரம் கட்டுப்பாடு தெளிவாக இருந்தால், ஆன்டிஜென் கட்டுப்பாட்டில் சீரான கொந்தளிப்பு காணப்பட்டது, மேலும் சீரம் கலந்த கலாச்சாரம் துளியில் அக்லூட்டினேட் செதில்கள் தோன்றும், இதன் விளைவாக நேர்மறையானதாக கருதப்படுகிறது. சீரம் மற்றும் ஆன்டிஜெனுடன் துளியில் சீரான கொந்தளிப்பு இருந்தால், இது எதிர்மறையான விளைவாகும். இருண்ட பின்னணியில் எதிர்வினை மிகவும் தெளிவாகத் தெரியும்.
சீரம்
1. ஆன்டிஜென் கட்டுப்பாடு
2. சீரம் கட்டுப்பாடு
நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகள். நோயறிதலில் நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகளின் பயன்பாடு தொற்று நோய்கள்.
திட்டம்:
நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகளின் வகைகள்.
செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகளை நடத்துவதற்கான நிபந்தனைகள்.
சீரம் தேவைகள்.
நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை முடிவுகளின் கருத்து.
முக்கிய உள்ளடக்கங்கள்:
நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகளின் வகைகள்.
நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினை – இது ஆன்டிபாடியுடனான ஆன்டிஜெனின் தொடர்பு ஆகும், இது ஆன்டிஜென்களின் எபிடோப்களுடன் ஆன்டிபாடியின் (பாராடோப்) செயலில் உள்ள மையங்களின் குறிப்பிட்ட தொடர்பு மூலம் தீர்மானிக்கப்படுகிறது.
நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகளின் பொதுவான வகைப்பாடு:
செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகள் ஆன்டிஜென்கள் (ஏஜி) மற்றும் ஆன்டிபாடிகள் (ஐஜி) இடையே எதிர்வினைகள்
ஆய்வுக்கூட சோதனை முறையில் ;
செல்லுலார் எதிர்வினைகள் நோயெதிர்ப்பு திறன் கொண்ட உயிரணுக்களின் பங்கேற்புடன்;
ஒவ்வாமை சோதனைகள் - அதிக உணர்திறன் கண்டறிதல்.
செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகள்: 1) வரையறை, 2) கட்டங்கள், 3) இலக்குகள், 4) பொது வகைப்பாடு.
1) வரையறை
செரோலாஜிக்கல் முறைகள்ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி எதிர்வினையைப் பயன்படுத்தி ஆராய்ச்சி (லத்தீன் சீரம் - சீரம் மற்றும் லோகோக்கள் - கற்பித்தல்).
2) கட்டங்கள்
தொடர்புகளின் 2 கட்டங்கள்:
நான். குறிப்பிட்ட (தெரியும்) - விரைவாக நிகழ்கிறது, ஆன்டிபாடிகள் அவற்றின் தொடர்புடைய ஆன்டிஜென்களுடன் இணைகின்றன. இந்த கட்டத்தில், ஆன்டிஜென்களின் (ஏஜி) தீர்மானிக்கும் குழுக்கள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் செயலில் உள்ள மையங்கள் (ஏடி) தொடர்பு கொள்கின்றன.
AG + AT வளாகத்தை உருவாக்குவதில் ஈடுபட்டுள்ள சக்திகள்:
பதக்கத்தில்;
வான் டெர் வால்ஸ்
ஹைட்ரஜன் பிணைப்புகள்.
இல்லை காணக்கூடிய மாற்றங்கள்இந்த கட்டத்தில் இல்லை. எலக்ட்ரான் நுண்ணோக்கி AG+AT வளாகத்தை ஒரு லட்டு வடிவத்தில் காட்டுகிறது.
II. குறிப்பிடப்படாதது - மெதுவாக நிகழ்கிறது, இதன் விளைவாக உருவாகும் ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகம் கூடுதல் குறிப்பிடப்படாத சுற்றுச்சூழல் காரணியுடன் வினைபுரிகிறது. , கரைதிறன் குறைகிறது, காணக்கூடிய கூட்டுத்தொகுதிகள் உருவாகின்றன , வீழ்படிவு (அக்ளுடினேட்).
3) இலக்குகளை அமைத்தல் :
அ) ஆன்டிஜெனை அடையாளம் காண (ஆன்டிபாடி அறியப்பட்ட நோயறிதல் சீரம்):
serological அடையாளம் (இனங்கள் அடையாளம்);
serotyping (serovar நிர்ணயம்) - திரிபு நிர்ணயம்;
நோயியல் பொருளில் (விரைவான கண்டறிதல்);
தூய கலாச்சாரத்தில்:
ஆ) ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய (Ig) (ஆன்டிஜென் அறியப்படுகிறது-கண்டறிதல்):
இருப்பு (தரமான எதிர்வினைகள்);
அளவுகள் (டைட்டரில் அதிகரிப்பு - "ஜோடி சீரம்" முறை).
4) பொது வகைப்பாடு செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகள் :
a) எளிய (2-கூறு: Ag+Ig):
RA திரட்டல் எதிர்வினைகள் (கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜெனுடன்);
PR மழைப்பொழிவு எதிர்வினைகள் (கரையக்கூடிய ஆன்டிஜெனுடன்);
b) சிக்கலான (3-கூறு: Ag+Ig+C);
c) குறிச்சொல்லைப் பயன்படுத்துதல்.
திரட்டுதல் மற்றும் மழைப்பொழிவு எதிர்வினைகளின் மாறுபாடுகள்
திரட்டுதல் எதிர்வினை :
திரட்டுதல் எதிர்வினை (RA) என்பது உடலியல் கரைசலில் ஆன்டிஜென்களுடன் ஆன்டிஜென்களின் (எரித்ரோசைட்டுகள், பாக்டீரியாக்கள்) இடைநீக்கத்தின் இடைவினையின் நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினை ஆகும்.
திரட்டலின் போது, AT துகள்கள் ஒன்றாக ஒட்டிக் கொண்டு ஒரு மிதவை வண்டலை உருவாக்குகின்றன.
எதிர்வினை செயலற்ற ஹீமாக்ளூட்டினேஷன்(RPGA) என்பது ஒரு வகை திரட்டுதல் எதிர்வினை ஆகும், இதில் ஆன்டிபாடி அல்லது ஆன்டிஜென் எரித்ரோசைட் கண்டறிதல் (அவற்றின் மேற்பரப்பில் AT அல்லது AG உறிஞ்சப்பட்ட எரித்ரோசைட்டுகள்) பயன்படுத்தப்படுகிறது.
இந்த எதிர்வினையில் இரத்த சிவப்பணுக்கள் செயலற்ற கேரியர்களாக செயல்படுகின்றன.
RPGA இன் முடிவுகளின் மதிப்பீடு பின்வருமாறு மேற்கொள்ளப்படுகிறது:
- மணிக்கு நேர்மறை எதிர்வினை செயலற்ற முறையில் ஒட்டப்பட்ட சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் U- அல்லது V-வடிவ துளையின் அடிப்பகுதியை ஸ்காலப் செய்யப்பட்ட விளிம்புகளுடன் ("குடை") சம அடுக்கில் மூடுகின்றன;
- மணிக்கு எதிர்மறை எதிர்வினை (திரட்டுதல் இல்லாத நிலையில்), சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் துளையின் மைய இடைவெளியில் குவிந்து, கூர்மையாக வரையறுக்கப்பட்ட விளிம்புகளுடன் ஒரு சிறிய "பொத்தானை" உருவாக்குகின்றன.
ஹெமாக்ளூட்டினேஷன் இன்ஹிபிஷன் டெஸ்ட் (HAI) வைரஸ் தொற்றுகளைக் கண்டறிவதில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. சில வைரஸ்கள் அவற்றின் மேற்பரப்பில் ஹெமாக்ளூட்டினின் என்ற புரதத்தைக் கொண்டிருக்கின்றன, இது இரத்த சிவப்பணுக்களை ஒன்றாக ஒட்டுகிறது. குறிப்பிட்ட ஆன்டிவைரல் ஆன்டிபாடிகள் கூடுதலாக வைரஸ் ஹீமாக்ளூட்டினினைத் தடுக்கிறது - ஹேமக்ளூட்டினேஷன் இல்லை.
மறைமுக ஹீமாக்ளூட்டினேஷன் எதிர்வினை (IRHA), அல்லது கூம்ப்ஸ் எதிர்வினை, முழுமையற்ற ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறியப் பயன்படுகிறது. ஆன்டிகுளோபுலின் சீரம் (AT எதிராக மனித Ig) சேர்ப்பது எதிர்வினையின் முடிவுகளை மேம்படுத்துகிறது. Rh காரணியை தீர்மானிக்க RNGA பயன்படுத்தப்படுகிறது.
ஒரு திரட்டல் எதிர்வினை (RA) செய்ய, மூன்று கூறுகள் தேவை:
1) ஆன்டிஜென் (agglutinogen) ஏஜி;
2) ஆன்டிபாடி(aglutinin) AT;
3)
எலக்ட்ரோலைட்
(ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல்).
Ag + AT + எலக்ட்ரோலைட் = agglutinate
திரட்டுதல் (லத்தீன் agglutinatio - gluing) - எலக்ட்ரோலைட்கள் முன்னிலையில் ஆன்டிபாடிகளுடன் கார்பஸ்கிள்ஸ் (பாக்டீரியா, சிவப்பு இரத்த அணுக்கள், முதலியன) ஒட்டுதல் - சோடியம் குளோரைடு.
ஆன்டிபாடிகளால் "ஒட்டப்பட்ட" கார்பஸ்கல்ஸ் (உதாரணமாக, பாக்டீரியா, சிவப்பு இரத்த அணுக்கள்) கொண்ட செதில்கள் அல்லது வண்டல் வடிவத்தில் RA தன்னை வெளிப்படுத்துகிறது.
RA இதற்குப் பயன்படுத்தப்படுகிறது:
நேரடி நுண்ணுயிர் திரட்டல் எதிர்வினை (RA).
இந்த எதிர்வினையில், ஆன்டிபாடிகள் (அக்லூட்டினின்கள்) நேரடியாக கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்களை (அக்லூட்டினோஜென்கள்) திரட்டுகின்றன.
அவை பொதுவாக செயலிழந்த நுண்ணுயிரிகளின் இடைநீக்கத்தால் குறிப்பிடப்படுகின்றன (நுண்ணுயிர் திரட்டல் எதிர்வினை).
நுண்ணுயிரிகளின் வகையை தீர்மானிக்க, பயன்படுத்தவும்நிலையான கண்டறியும் திரட்டுதல் சீரம் (பிரபலமான ஏடி ).
மிகவும் பொதுவானது லேமல்லர் (தோராயமான) மற்றும் விரிவாக்கப்பட்ட RA.
தட்டு RA கண்ணாடி மீது வைக்கப்படுகிறது. என பயன்படுத்தவும் துரிதப்படுத்தப்பட்ட முறைஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிதல் அல்லது நுண்ணுயிரிகளின் அடையாளம்.
கூறுகள்:
1. நிலையான கண்டறியும் திரட்டல் செரா (AT);
2. நோயாளியிடமிருந்து படிப்பின் கீழ் தூய கலாச்சாரம்;
3. உப்பு கரைசல்.
ஆய்வின் கீழ் உள்ள தூய கலாச்சாரத்தில், ஆன்டிஜென்கள் (AG) துகள்கள் (நுண்ணுயிர் செல்கள், எரித்ரோசைட்டுகள் மற்றும் பிற கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்கள்) வடிவத்தில் உள்ளன, அவை ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் வீழ்படிவு மூலம் ஒன்றாக ஒட்டப்படுகின்றன.
உதாரணமாக:
அரங்கேற்றம் குறிக்கும் திரட்டுதல் எதிர்வினைகள் (ஆர்.ஏ ) கண்ணாடி மீது கோலிஃபார்ம் பாக்டீரியாவை அடையாளம் காணும் நோக்கத்திற்காக.
கண்ணாடி ஸ்லைடில் சொட்டுகளைப் பயன்படுத்துங்கள்:
1
வயிற்றுப்போக்கு
;
2
-வது துளி: - நோய்க்கிருமிகளுக்கு எதிராக சீரம் திரட்டுதல்டைபாயிட் ஜுரம்
;
(1-2 கண்டறியும் சீரம்)
3
-வது துளி: - உப்பு கரைசல் (கட்டுப்பாடு).
ஒவ்வொரு துளியிலும் சோதிக்கப்பட்ட தூய பாக்டீரியா கலாச்சாரத்தைச் சேர்க்கவும். அசை.
விளைவாக
:
நேர்மறை
- அக்லுட்டினேட் செதில்களின் இருப்பு,
எதிர்மறை
- திரட்டப்பட்ட செதில்கள் இல்லாதது
முடிவுரை:ஆய்வு செய்யப்பட்ட பாக்டீரியாக்கள் டைபாய்டு காய்ச்சலுக்கு காரணமான முகவர்கள் (ஆன்டிஜென்கள் தீர்மானிக்கப்பட்டது).
நோயாளியின் சீரம் (செரோலாஜிக்கல் நோயறிதல்), ஒரு நிலையான நுண்ணுயிரியில் AT ஐ தீர்மானிக்கநோய் கண்டறிதல் , இடைநீக்கம் கொண்டதுபிரபலமான நுண்ணுயிரிகள் அல்லது அவற்றின் ஆன்டிஜென்கள்ஏஜி .
ABO இரத்தக் குழுக்களைத் தீர்மானித்தல் (ஹெமாக்ளூட்டினேஷன் ரியாக்ஷன் (HRA)) - இரத்த சிவப்பணுக்களை திரட்டுகிறது.
எதிர்வினை கூறுகள்:
1. AG (சிவப்பு இரத்த அணுக்கள்) இரத்தத்தை சோதிக்கிறது
2. AT (எரித்ரோடெஸ்ட்கள் - சோலிக்லோன்ஸ்)
சோலிக்லோன்களின் தொகுப்பு:
கோலிக்லோன் ஆன்டி-ஏ ரீஜென்ட் (இளஞ்சிவப்பு)
கோலிக்லோன் எதிர்ப்பு பி மறுஉருவாக்கம் (நீலம்)
ரியாஜென்ட் சோலிக்லான் எதிர்ப்பு ஏவி (நிறமற்றது)
3. எலக்ட்ரோலைட் (உப்பு கரைசல்)
தீர்மானிக்கும் நுட்பம்:
1
.
ஒரு துளி (0.1 மில்லி) ஆன்டி-ஏ, ஆன்டி-பி மற்றும் ஆன்டி-ஏபி ஜோலிகோன் மாத்திரையின் கிணறுகளில் (கட்டுப்பாட்டுக்காக) பயன்படுத்தப்படுகிறது.
2.
மறுஉருவாக்கத்தின் ஒவ்வொரு துளிக்கும் அடுத்ததாக, பரிசோதிக்கப்படும் இரத்தத்தின் ஒரு சிறிய (0.05-0.01 மில்லி) துளி பயன்படுத்தப்படுகிறது.
பின்னர் ஒரு துளி சோலிக்லோன் ஒரு துளி இரத்தத்துடன் தனிப்பட்ட சுத்தமான கண்ணாடி கம்பியைப் பயன்படுத்தி கலக்கப்படுகிறது.
3.
தட்டு மெதுவாக அசைக்கப்படும்போது முதல் 3-5 வினாடிகளில் திரட்டுதல் எதிர்வினை உருவாகிறது.
சொட்டுகளை கலந்து 2.5 - 3 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு எதிர்வினை முடிவுகள் கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகின்றன. கிணறுகளில் இடமிருந்து வலமாக ஆன்டி-ஏ, ஆண்டி-பி, ஆன்டி-ஏபி.
ஒரு நேர்மறையான முடிவு ஒரு சிறுமணி வண்டல் (அக்லூட்டினேட்) தோற்றம் ஆகும்.
நேர்மறை RA (+)
எதிர்மறை - வண்டல் இல்லை.
எதிர்மறை RA(-)
4.
முடிவுகளின் பகுப்பாய்வு.
ஓ(நான்) α β - திரட்டுதல் இல்லை
ஏ(II) β - எதிர்ப்பு A உடன் திரட்டுதல்
பி(III) α - எதிர்ப்பு B உடன் திரட்டுதல்
ஏபி(IV)O - எதிர்ப்பு A உடன் திரட்டுதல், எதிர்ப்பு B உடன்
திரட்டலின் திட்டவட்டமான பிரதிநிதித்துவம்.
எரித்ரோசைட்டுகளில் உள்ள Ag ஆன்டிஜென்கள் (கண்டறியக்கூடியது) + ஆன்டிபாடிAT(ஜோலிக்லான்) கண்டறியும் சீரம்
மாத்திரைகளில் திரட்சிக்கான கணக்கு
மழைப்பொழிவு எதிர்வினை:
மழைப்பொழிவு எதிர்வினை என்பது உடலியல் கரைசலில் ஆன்டிஜெனுடன் கரையக்கூடிய நிலையில் ஆன்டிஜெனின் தொடர்புகளின் நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினை ஆகும்.
மழைப்பொழிவின் போது, ஒரு மேக்ரோமாலிகுலர் நோயெதிர்ப்பு வளாகம் உருவாகிறது, இது ஒரு வெளிப்படையான கூழ் கரைசலை ஒரு ஒளிபுகா இடைநீக்கம் அல்லது வீழ்படிவாக மாற்றுவதன் மூலம் வெளிப்படுகிறது.
இரண்டு உலைகளின் அளவு கண்டிப்பாக வரையறுக்கப்பட்ட விகிதத்தில் இருக்க வேண்டும், ஏனெனில் அவற்றில் ஒன்று அதிகமாக இருந்தால் முடிவைக் குறைக்கிறது.
உள்ளது பல்வேறு வழிகளில்மழைப்பொழிவு எதிர்வினையை நிலைநிறுத்துகிறது.
1. வளைய மழைப்பொழிவு எதிர்வினை சிறிய விட்டம் கொண்ட மழைக் குழாய்களில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது. நோயெதிர்ப்பு சீரம் சோதனைக் குழாயில் சேர்க்கப்பட்டு கரையக்கூடிய ஆன்டிஜென் கவனமாக அடுக்கப்படுகிறது. மூலக்கூறுகளின் வெப்ப இயக்கம் காரணமாக AG மற்றும் AT கலந்து, அவை தொடர்பு கொள்கின்றன. மணிக்கு நேர்மறையான முடிவுஇரண்டு தீர்வுகளின் எல்லையில் ஒளிபுகா வீழ்படிவு வளையம் உருவாகிறது.
2. Ouchterlony இரட்டை இம்யூனோடிஃப்யூஷன் வினையானது ஒரு அகார் ஜெல்லில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது, அதில் ஒரு AG கரைசல் அல்லது AT கரைசல் திட்டத்தின் படி சேர்க்கப்படும். AG மற்றும் AT ஆகியவை ஜெல்லில் ஒன்றுக்கொன்று பரவுகின்றன, எதிர்வினை நேர்மறையாக இருந்தால், மழைப்பொழிவு கோடுகளாகத் தெரியும் நோய் எதிர்ப்பு வளாகங்களை உருவாக்குகின்றன.
மழைப்பொழிவு எதிர்வினை -இது உருவாக்கம்மற்றும் படிவு எனப்படும் மேகமாக கரையக்கூடிய மூலக்கூறு ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தின் மழைப்பொழிவு. ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளை சமமான அளவில் கலப்பதன் மூலம் இது உருவாகிறது.
RA கூறுகள்:
வீழ்படியும் சீரம் (AT-precipitin அறியப்படுகிறது);
சோதனை சீரம் (தெரியாத precipitinogen ஆன்டிஜென்);
உடல் தீர்வு.
மழைப்பொழிவு எதிர்வினை சிறப்பு குறுகிய சோதனைக் குழாய்களில் (ரிங் மழைப்பொழிவு எதிர்வினை) அல்லது ஜெல், ஊட்டச்சத்து ஊடகம் போன்றவற்றில் பெட்ரி உணவுகளில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
ரிங்-பிரிசிபிட்டேஷன் எதிர்வினை
எதிர்வினை முடிவுகளின் அறிக்கை மற்றும் பதிவுவளைய மழைப்பொழிவுநோய்க்கிருமிகளைக் கண்டறிவதற்காக ஆந்த்ராக்ஸ்(அஸ்கோலி எதிர்வினை).
அரங்கேற்றம் .
1. ஆய்வின் கீழ் உள்ள பொருள் (தோல், கம்பளி, உணர்ந்தேன், முட்கள், துணி, இறைச்சி, மண், விலங்கு மலம் போன்றவை) உப்பு கரைசலில் 5-45 நிமிடங்கள் வேகவைக்கப்படுகிறது. ஐசோடோனிக் சாறு (சாறு) பெற. வடிகட்டப்பட்டது.
2. ஆந்த்ராக்ஸ் எதிர்ப்பு சீரம் ஒரு சோதனைக் குழாயில் ஊற்றப்படுகிறது.
3. சோதனைப் பொருளை (சாறு) கவனமாக அதன் மீது அடுக்கவும்.
கணக்கியல் .
அடுத்த 10 நிமிடங்களுக்குள். நேர்மறை நிகழ்வுகளில், சீரம் மற்றும் சாறு (வளைய மழை) இடையே இடைமுகத்தில் கொந்தளிப்பு வளையம் தோன்றும். அஸ்கோலி எதிர்வினை மிகவும் உணர்திறன் மற்றும் குறிப்பிட்டது
அதன் உதவியுடன், ஆந்த்ராக்ஸால் பாதிக்கப்பட்ட பொருட்களை விரைவாக அடையாளம் காண முடியும்.
அகாரில் மழைப்பொழிவு எதிர்வினை
முடிவுகளின் அறிக்கை மற்றும் பதிவுஅகாரில் மழைப்பொழிவு எதிர்வினைகள்கோரினேபாக்டீரியாவின் நச்சுத்தன்மையை தீர்மானிக்க (டிஃப்தீரியாவை உண்டாக்கும் முகவர்கள்)
அரங்கேற்றம்
ஒரு பெட்ரி டிஷில் பாஸ்பேட் பெப்டோன் அகர் மீது வைக்கப்படுகிறது.
1. கோப்பையின் நடுவில் ஈரப்படுத்தப்பட்ட மலட்டு வடிகட்டி காகிதத்தை வைக்கவும்.ஆன்டிடாக்ஸிக் சீரம்.
2. உலர்த்திய பிறகு, துண்டு விளிம்பிலிருந்து 1 செமீ தொலைவில், 10 மிமீ விட்டம் கொண்ட பிளேக்குகள் விதைக்கப்படுகின்றன.தேர்ந்தெடுக்கப்பட்ட பயிர்கள்.
ஒரு கோப்பையில் நீங்கள் 3 முதல் 10 பயிர்களை விதைக்கலாம், அவற்றில் ஒன்றுகட்டுப்பாடு, தெரிந்திருக்க வேண்டும்விஷத்தை உண்டாக்கும்.
பயிர்கள் ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் வைக்கப்படுகின்றன.
கணக்கியல்
பகுப்பாய்வு 24-48-72 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
நேர்மறையான முடிவு - (கலாச்சாரம்நச்சுத்தன்மையுள்ள) - காகித துண்டு இருந்து சிறிது தூரத்தில் தோன்றும்படிவு கோடுகள், « முனை அம்புகள்", இவை கடத்தப்பட்ட ஒளியில் தெளிவாகத் தெரியும்.
டிப்தீரியா பேசிலியின் நச்சுத்தன்மையை தீர்மானிக்க அகாரில் மழைப்பொழிவு எதிர்வினையை படம் காட்டுகிறது. நடுத்தர கலாச்சாரங்கள் "அம்பு-தசைகளை" உருவாக்கவில்லை; இவை நச்சுத்தன்மையுள்ள நோய்க்கிருமிகள் அல்ல.
டிஃப்தீரியாவின் காரணமான முகவரின் விகாரங்கள் நச்சுத்தன்மை (எக்ஸோடாக்சின் உற்பத்தி) மற்றும் நச்சுத்தன்மையற்றதாக இருக்கலாம். ஒரு எக்ஸோடாக்சின் உருவாக்கம் ஒரு எக்ஸோடாக்சின் உருவாவதற்கு குறியாக்கம் செய்யும் நச்சு மரபணுவைக் கொண்டு செல்லும் ஒரு புரோபேஜின் பாக்டீரியாவில் இருப்பதைப் பொறுத்தது.
நோய் ஏற்பட்டால், அனைத்து டிப்தீரியா நோய்க்கிருமிகளும் நச்சுத்தன்மைக்காக சோதிக்கப்படுகின்றன - அகாரில் மழைப்பொழிவு எதிர்வினையைப் பயன்படுத்தி டிப்தீரியா எக்ஸோடாக்சின் உற்பத்தி
சிக்கலான செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகள் ( 3-கூறு: Ag+Ig+C):
நிரப்பு நிர்ணய எதிர்வினை (CFR).
எதிர்வினை இரண்டு நிலைகளில் மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
முதல் கட்டத்தில், AT ஆன்டிஜென் மற்றும் நிரப்புதலுடன் தொடர்பு கொள்கிறது; இரண்டாவது கட்டத்தில், ஒரு காட்டி சேர்க்கப்படுகிறது - ஹீமோலிடிக் அமைப்பு (எரித்ரோசைட்டுகள் மற்றும் எதிர்ப்பு எரித்ரோசைட் சீரம் கலவை).
முடிவு நேர்மறையாக இருந்தால், முதல் கட்டத்தில், ஆன்டிபாடிகள் ஆன்டிஜென்களுடன் ஒரு நோயெதிர்ப்பு வளாகத்தை உருவாக்குகின்றன, இது எதிர்வினை கலவையின் நிரப்புதலை பிணைக்கிறது.
இந்த வழக்கில், இரண்டாவது கட்டத்தில் சேர்க்கப்பட்ட ஹீமோலிடிக் அமைப்பின் சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் அழிக்கப்படுவதில்லை.
இல்லையெனில், வரம்பற்ற நிரப்புதல் காட்டி சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் சிதைவை ஏற்படுத்துகிறது.
அதை செயல்படுத்த, ஐந்து பொருட்கள் தேவை: ஏஜி, ஏடி மற்றும் நிரப்பு (முதல் அமைப்பு), செம்மறி எரித்ரோசைட்டுகள் மற்றும் ஹீமோலிடிக் சீரம் (இரண்டாவது அமைப்பு) (படம் 1).
எதிர்வினை இரண்டு கட்டங்களில் நிகழ்கிறது (படம் 3).
முதல் கட்டம் - போது ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் தொடர்பு கட்டாய பங்கேற்புநிரப்பு.
இரண்டாவது - ஒரு காட்டி ஹீமோலிடிக் அமைப்பைப் பயன்படுத்தி எதிர்வினை முடிவுகளை அடையாளம் காணுதல் (செம்மறியாடு சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் மற்றும் ஹீமோலிடிக் சீரம்). ஹீமோலிடிக் சீரம் மூலம் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் அழிவு ஹீமோலிடிக் அமைப்பில் நிரப்பப்பட்டால் மட்டுமே நிகழ்கிறது. ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தில் நிரப்பு முன்பு உறிஞ்சப்பட்டிருந்தால், எரித்ரோசைட்டுகளின் ஹீமோலிசிஸ் ஏற்படாது (படம்.).
அனுபவ முடிவு
மதிப்பிடப்பட்டது (படம் 2), அனைத்து குழாய்களிலும் ஹீமோலிசிஸின் இருப்பு அல்லது இல்லாமையைக் குறிப்பிடுகிறது. ஹீமோலிசிஸ் முற்றிலும் தாமதமாகும்போது, சோதனைக் குழாயில் உள்ள திரவம் நிறமற்றதாகவும், சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் கீழே குடியேறும்போதும், எதிர்மறையானது - சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் முழுவதுமாக லைஸ் செய்யப்படும்போது, திரவம் தீவிர நிறத்தில் இருக்கும்போது (“வார்னிஷ்” இரத்தம்) எதிர்வினை நேர்மறையாகக் கருதப்படுகிறது. )
ஹீமோலிசிஸ் தாமதத்தின் அளவு திரவத்தின் நிறத்தின் தீவிரம் மற்றும் கீழே உள்ள இரத்த சிவப்பணு வண்டலின் அளவைப் பொறுத்து மதிப்பிடப்படுகிறது (++++, +++, ++, +).
அரிசி. 4. RSC இன் அறிக்கை மற்றும் முடிவு.
முடிவுரை:சோதனை சீரத்தில் ஆன்டிபாடிகள் கண்டறியப்பட்டன.
வைரஸின் அதே செரோடைப்பின் எந்த விகாரத்திற்கும் ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய RSK உங்களை அனுமதிக்கிறது.
கண்டறியும் மதிப்புஅது உள்ளது:
ஜோடி செராவில் ஆன்டிபாடி டைட்டரில் நான்கு மடங்கு அதிகரிப்பு (இன்ஃப்ளூயன்ஸா தொற்றுநோய்களின் போது);
ஒரு சிறப்பியல்பு மருத்துவ படம் கொண்ட நோயாளிகளின் இரத்த சீரம் இரு மடங்கு அதிகரிப்பு.
குறிச்சொல்லைப் பயன்படுத்தி எதிர்வினைகள் :
இந்த முறைகள் அதிக உணர்திறன் கொண்டவை. சாயங்கள், கதிரியக்க ஐசோடோப்புகள், என்சைம்கள் போன்றவை ஆன்டிஜென்கள் அல்லது ஆன்டிபாடிகளுக்கு லேபிள்களாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
RIF - இம்யூனோஃப்ளோரசன்ஸ் எதிர்வினை
இம்யூனோஃப்ளோரெசன்ஸ் எதிர்வினை ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தின் ஒளி குறிப்பை அடிப்படையாகக் கொண்டது
இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் மதிப்பீடு.
இரத்தத்தில் உள்ள குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் அல்லது குறிப்பிட்ட நோய்களுக்கான ஆன்டிஜென்களைத் தேடும் ஒரு நவீன ஆய்வக சோதனை, நோயின் காரணத்தை மட்டுமல்ல, நோயின் நிலையையும் அடையாளம் காணும்.
ELISA முடிவுகளை தரம் மற்றும் அளவு வழங்கலாம்.
தற்போது, ELISA பின்வரும் சூழ்நிலைகளில் பயன்படுத்தப்படுகிறது:
1) எந்தவொரு தொற்று நோய்க்கும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைத் தேடுங்கள்;
2) ஏதேனும் நோய்களின் ஆன்டிஜென்களைத் தேடுங்கள் (தொற்று, வெனிரோலாஜிக்கல்);
3) ஆராய்ச்சி ஹார்மோன் நிலைநோயாளி;
4) கட்டி குறிப்பான்களுக்கான பரிசோதனை;
5) ஆட்டோ இம்யூன் நோய்கள் இருப்பதற்கான பரிசோதனை.
படத்தில், திட-நிலை ELISA அறியப்பட்ட ஆன்டிஜென்களை (இடதுபுறம்) ஒரு தட்டின் கிணற்றில் உறிஞ்சப்பட்டதைக் காட்டுகிறது, (வலதுபுறம்) ஒரு தட்டு அறியப்பட்ட ஆன்டிஜென்களின் கிணறுகளில்
ELISA முறையின் நன்மைகள்:
1) ELISA முறையின் உயர் விவரக்குறிப்பு மற்றும் உணர்திறன் (90% க்கும் அதிகமானவை).
2) நோயைத் தீர்மானிக்கும் திறன் மற்றும் செயல்முறையின் இயக்கவியலைக் கண்காணிக்கும் திறன், அதாவது வெவ்வேறு காலகட்டங்களில் ஆன்டிபாடிகளின் எண்ணிக்கையை ஒப்பிடுதல்.
3) எந்த மருத்துவ நிறுவனத்திலும் ELISA நோயறிதல் கிடைக்கும்.
உறவினர் குறைபாடு: நோயெதிர்ப்பு மறுமொழியைக் கண்டறிதல் (ஆன்டிபாடிகள்), ஆனால் நோய்க்கிருமி அல்ல, குறி நொதியுடன் இணைந்தது.
ELISA சோதனை (பொது பொறிமுறை):
என்சைம் இம்யூனோஅசேயின் அடிப்படையானது ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடியின் நோயெதிர்ப்பு வினையாகும், இது நோயெதிர்ப்பு வளாகத்தை உருவாக்குகிறது: ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி, இது ஆன்டிபாடிகளின் மேற்பரப்பில் குறிப்பிட்ட குறிகளின் நொதி செயல்பாட்டில் மாற்றத்தை ஏற்படுத்துகிறது.
எதிர்வினை கூறுகள்:
1. AG(AT) தெரிந்தது - மாத்திரையின் கிணற்றில்.
2. AT (AG) படிக்கப்படுகிறது.
3. நொதியுடன் கூடிய AT, AT(AG)-AG(AT) வளாகத்திற்கு குறிப்பிட்டது
4. என்சைமுடன் தொடர்பு கொள்ளும் குரோமோஜெனிக் அடி மூலக்கூறு
5. தீர்வு நிறுத்து
ELISA இன் முக்கிய நிலைகள்
1. தட்டின் கிணறுகளின் மேற்பரப்பில் ஒரு குறிப்பிட்ட நோய்க்கிருமியின் சுத்திகரிக்கப்பட்ட ஆன்டிஜென் உள்ளது. அவர்கள் சேர்க்கிறார்கள் உயிரியல் பொருள்நோயாளி, இந்த ஆன்டிஜென் மற்றும் விரும்பிய ஆன்டிபாடி (இம்யூனோகுளோபுலின்) இடையே ஒரு குறிப்பிட்ட எதிர்வினை ஏற்படுகிறது. ஒரு வளாகம் உருவாகிறது.
2. ஒரு இணைப்பான் சேர்க்கப்படுகிறது - நொதியுடன் AT. முதல் கட்டத்தின் AT-AG வளாகத்திற்கு இணையானது குறிப்பிட்டது. என்சைம் செயல்படுத்தப்படுகிறது.
3. அடி மூலக்கூறு சேர்க்கப்பட்டு, செயலில் உள்ள நொதி அதனுடன் வினைபுரிந்து, கரைசலின் நிறமற்ற நிறத்தை மாற்றுகிறது.
4. என்சைம்-அடி மூலக்கூறு தொடர்புகளை நிறுத்த ஒரு நிறுத்த தீர்வு சேர்க்கப்படுகிறது.
கணக்கியல்.
நேர்மறை விளைவு - மாற்றம்நிறங்கள், படத்தில் - மஞ்சள்.
இம்யூனோக்ரோமடோகிராஃபிக் பகுப்பாய்வு
இம்யூனோக்ரோமடோகிராஃபிக் பகுப்பாய்வு முறை (ஐசிஏ, விரைவான சோதனைகள்) என்பது ஒரு உயர்தர பூர்வாங்க ஸ்கிரீனிங் முறையாகும், இது ஒரு சில நிமிடங்களில், எந்த நிபந்தனைகளின் கீழும் விரைவாக பகுப்பாய்வு செய்ய உங்களை அனுமதிக்கிறது. "புலம்".
ICA இன் நன்மைகள் பின்வருமாறு:
வேகம் மற்றும் பயன்பாட்டின் எளிமை;
சிறிய மாதிரி தொகுதிகள், மாதிரி தயாரிப்பின் பற்றாக்குறை;
உற்பத்தியாளர் மற்றும் நுகர்வோருக்கு மலிவானது;
பெரிய அளவுகளில் சோதனைகளை உருவாக்கும் சாத்தியம்;
முடிவின் வாசிப்பு மற்றும் விளக்கத்தின் எளிமை;
அதிக உணர்திறன் மற்றும் இனப்பெருக்கம்;
அளவு நிர்ணயம் சாத்தியம்;
கணினியுடன் இணக்கமான போர்ட்டபிள் ரீடர்களைப் பயன்படுத்துவதற்கான சாத்தியம்;
பல பகுப்பாய்வு சாத்தியம்.
கூறுகள் (சோதனை துண்டுக்கு பொருந்தும்):
1. கூழ் தங்க லேபிளுடன் இணைந்திருப்பது கண்டறியப்பட்ட ஆன்டிஜெனுக்குக் குறிப்பிட்டதாகும்.
2. AT சோதனை வரி - AT-AG வளாகத்திற்கு குறிப்பிட்டது
3. கட்டுப்பாட்டுக் கோட்டின் ஏபிஎஸ் இணைப்புக்கு குறிப்பிட்டது.
ICA அமைப்பு:
1. பட்டையின் நியமிக்கப்பட்ட தொடக்கப் பகுதிக்கு மாதிரியைப் பயன்படுத்தவும்.
2. சோதனை மற்றும் கட்டுப்பாட்டு கோடுகளின் இடத்தில் வண்ண கோடுகளின் தோற்றத்தின் வடிவத்தில் முடிவைப் பெறுதல்.
கணக்கியல்
நேர்மறை - சோதனைக் கோடு படிந்திருக்கும் போது.
எதிர்மறை - சோதனைக் கோட்டின் கறை இல்லை என்றால்.
தவறானது - கட்டுப்பாட்டுக் கோடு கறைபடவில்லை என்றால்.
ICA இன் பொதுவான வழிமுறை:
1. மாதிரியானது தொடக்கப் புலத்தில் (மாதிரித் திண்டு) அறிமுகப்படுத்தப்பட்டு, கான்ஜுகேட் பேடில் அமைந்துள்ள கான்ஜுகேட்டுடன் (வண்ண லேபிளுடன் ஒரு குறிப்பிட்ட உடல்) தொடர்புடையது. இதன் விளைவாக, ஒரு வண்ண வளாகம் உருவாகிறது.
2. இதன் விளைவாக வரும் வண்ண நோயெதிர்ப்பு வளாகம் நைட்ரோசெல்லுலோஸ் சவ்வு வழியாக தந்துகி சக்திகளின் செயல்பாட்டின் கீழ் நகர்கிறது.மற்றும் தொடர்பு கொள்கிறதுAT சோதனை வரியுடன்.இதன் விளைவாக ஒற்றை நிற இளஞ்சிவப்பு-சிவப்பு பட்டை உள்ளது.
3. AT (இணைப்பு) சோதிக்கப்பட்ட இசைக்குழுவில் பிணைக்கப்படவில்லைமேலும் நகர்ந்து கட்டுப்பாட்டுக் கோட்டை அடைகிறது, கட்டுப்பாட்டுக் கோட்டின் AT உடன் தொடர்பு கொள்கிறது.இதன் விளைவாக, இரண்டாவது வண்ண பட்டை தோன்றும்.பகுப்பாய்வு சரியாக மேற்கொள்ளப்பட்டால், உயிரியல் திரவ மாதிரியில் சோதனை ஆன்டிஜென் (ஆன்டிபாடி) இருப்பதைப் பொருட்படுத்தாமல், கட்டுப்பாட்டுக் கோடு எப்போதும் தோன்றும்.
2. செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகளை நடத்துவதற்கான நிபந்தனைகள்.
1. ஹோமோலோகஸ் இருப்பு - ஒருவருக்கொருவர் ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிக்கு ஒத்திருக்கிறது.
2. சுத்தமான, உலர்ந்த உணவுகள்.
3. மருந்துகளின் ஒரு குறிப்பிட்ட விகிதம் (பெரும்பாலும் சமமாக).
4. எலக்ட்ரோலைட்டின் கட்டாய இருப்பு (ஐசோடோனிக் NaCl தீர்வு).
5. pH நடுநிலை அல்லது சற்று காரத்திற்கு அருகில்.
6. வெப்பநிலை +37 ° C அல்லது அறை வெப்பநிலை (அவசியம் நேர்மறை).
7. ஆன்டிஜென் கட்டுப்பாடு மற்றும் சீரம் (ஆன்டிபாடி) கட்டுப்பாடு மேற்கொள்ளப்படுகிறது.
3 சீரம் தேவைகள்
சீரம் செல்களின் கலவை இல்லாமல் முற்றிலும் வெளிப்படையானதாக இருக்க வேண்டும்.
அவர்கள் வழக்கமாக நோயின் 2 வது வாரத்தில், ஆன்டிபாடிகள் ஏற்கனவே கிடைக்கும்போது அதைப் பெறுகிறார்கள்.
வெறும் வயிற்றில் அல்லது சாப்பிட்ட 6 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு 3-5 மில்லி அளவு இரத்தம் எடுக்கப்படுகிறது.
சீரம் பெற, இரத்தம் அறை வெப்பநிலையில் 1 மணி நேரம் விடப்படுகிறது அல்லது மையவிலக்கு செய்யப்படுகிறது. உருவான உறுப்புகளைப் பிடிக்காதபடி சீரம் மிகவும் கவனமாக உறிஞ்சப்படுகிறது.
நோயெதிர்ப்பு சீரம் மக்கள் அல்லது விலங்குகளின் இரத்தத்தில் இருந்து பெறப்படுகிறது (பொதுவாக முயல்கள் மற்றும் குதிரைகள்), தொடர்புடைய ஆன்டிஜென் (தடுப்பூசி) மூலம் ஒரு குறிப்பிட்ட திட்டத்தின் படி நோய்த்தடுப்பு செய்யப்படுகிறது. சீரம் பொதுவாக உற்பத்தியில் தயாரிக்கப்படுகிறது.
4. நேர்மறை மற்றும் எதிர்மறை முடிவுகளின் கருத்து.
ஆர்.ஏ.
ஒரு நேர்மறையான எதிர்வினையுடன், செயலற்ற முறையில் ஒட்டப்பட்ட சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் துளையின் அடிப்பகுதியை ஸ்காலப் செய்யப்பட்ட விளிம்புகளுடன் ("குடை") சம அடுக்கில் மூடுகின்றன; திரட்டுதல் இல்லாத நிலையில், சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் துளையின் மைய இடைவெளியில் குவிந்து, கூர்மையாக வரையறுக்கப்பட்ட விளிம்புகளுடன் ஒரு சிறிய "பொத்தானை" உருவாக்குகின்றன (மேலே உள்ள படங்களைப் பார்க்கவும்).
ஆர்.பி.
முடிவு நேர்மறையாக இருந்தால், இரண்டு தீர்வுகளின் இடைமுகத்தில் ஒரு பால் வளையம் உருவாகிறது (மேலே உள்ள படங்களைப் பார்க்கவும்).
எலிசா.
தீர்வு நிறத்தில் மாற்றம் நேர்மறை எதிர்வினையுடன் நிகழ்கிறது.
ஆர்.எஸ்.கே.
தாமதமான ஹீமோலிசிஸ் - எதிர்வினை நேர்மறை; நிரப்பு இலவசம் என்றால், ஹீமோலிசிஸ் அனுசரிக்கப்படுகிறது - எதிர்வினை எதிர்மறையானது(மேலே உள்ள படங்களை பார்க்கவும்).
வாசர்மேன் எதிர்வினையின் முடிவுகள்:
a - ஹீமோலிசிஸின் முழுமையான தாமதம் (+ + ++);
b - ஹீமோலிசிஸில் உச்சரிக்கப்படும் தாமதம் (+ ++);
c - ஹீமோலிசிஸின் பகுதி தாமதம் (++);
d - ஹீமோலிசிஸில் சிறிது தாமதம் (+);
d - முழுமையான ஹீமோலிசிஸ் (-).
ஹீமோலிசிஸின் பகுதியளவு, உச்சரிக்கப்படும் மற்றும் முழுமையான தாமதத்துடன் எதிர்வினை நேர்மறையானது, இது வெளிர் இளஞ்சிவப்பு முதல் பிரகாசமான சிவப்பு வரை குழாய்களின் உள்ளடக்கங்களின் கறையின் அளவைக் கொண்டு தீர்மானிக்கப்படுகிறது; ஹீமோலிஸ் செய்யப்படாத எரித்ரோசைட்டுகள் பின்னர் ஒரு சிவப்பு வீழ்படிவை உருவாக்குகின்றன.
1. பொருளைப் படிக்கவும்
வீடியோவில் 3 குறிப்புகளை உருவாக்கவும்
நுண்ணுயிரியலில்
"திரட்டுதல் எதிர்வினை மற்றும் அதன் வகைகள் (RA)"
திட்டம்:
1. அறிமுகம்………………………………………………………………………………………………
2. கண்ணாடி மீது RA ………………………………………………………………………….4
3. சோதனைக் குழாய் RA……………………………………………………………………………………. 5
4. பயன்படுத்தப்பட்ட இலக்கியம் ……………………………………………………………….7
1. அறிமுகம்.
நுண்ணுயிர் ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் தொடர்பு இயற்கையில் கண்டிப்பாக குறிப்பிட்டது மற்றும் நோய்க்கிருமி மற்றும் அதன் நச்சுகளை நடுநிலையாக்குவதை நோக்கமாகக் கொண்டது. விட்ரோவில் உள்ள ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் தொடர்பு, சில நிபந்தனைகளின் கீழ், காணக்கூடிய நிகழ்வுகளுடன் (திரட்சி, மழைப்பொழிவு, நோயெதிர்ப்பு சிதைவு), இது நடைமுறை நோக்கங்களுக்காக செரோலாஜிக்கல் (லத்தீன் சீரம்) எனப்படும் AG-AT எதிர்வினைகளைப் பயன்படுத்த அனுமதிக்கிறது. பயோஃபாக்டரிகள் ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் நோயெதிர்ப்பு செரா (ஆன்டிபாடிகள்) அறியப்பட்ட குறிப்பிட்ட தன்மையை (நோயறிதல்) உற்பத்தி செய்கின்றன. செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகளில் இத்தகைய செராவைப் பயன்படுத்துவதன் மூலம், அறியப்படாத நுண்ணுயிரிகளை அடையாளம் காண முடியும் அல்லது அறியப்பட்ட ஆன்டிஜெனைப் பயன்படுத்தி, நோய்க்கிருமியின் அறிமுகத்திற்கு பதிலளிக்கும் விதமாக உடலில் உள்ள ஆன்டிபாடிகளை கண்டறியலாம், இதனால் நோயறிதலைச் செய்யலாம் (செரோலாஜிக்கல் நோயறிதல்). கூடுதலாக, தடுப்பூசி அல்லது ஒரு தொற்று நோய்க்குப் பிறகு நோய் எதிர்ப்பு சக்தியின் தீவிரத்தை மதிப்பிடுவதற்கு செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகள் பயன்படுத்தப்படலாம்.
மறைமுக திரட்டுதல் மற்றும் கூம்ப்ஸ் போன்ற திரட்டுதல் எதிர்வினைகள், ஆன்டிபாடிகளுடன் கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்களின் இன் விட்ரோ தொடர்பு மற்றும் அதன் விளைவாக வரும் வளாகங்களின் வீழ்படிவு திறன் ஆகியவற்றை அடிப்படையாகக் கொண்டது. நுண்ணுயிரிகளில் இருந்து பிரித்தெடுக்கப்பட்ட பாக்டீரியா செல்கள் அல்லது கரையக்கூடிய ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் கேரியர் கார்பஸ்கல்களில் உறிஞ்சப்படுகின்றன: சிவப்பு இரத்த அணுக்கள், லேடெக்ஸ் துகள்கள் போன்றவை கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்களாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்களின் ஆன்டிஜெனிக் தீர்மானிப்பான்கள் குறிப்பாக ஹோமோலோகஸ் ஆன்டிபாடிகளுடன் (குறிப்பிட்ட, கண்ணுக்குத் தெரியாத எதிர்வினையின் கட்டம்) தொடர்பு கொள்கின்றன, பின்னர் ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகங்கள் நிர்வாணக் கண்ணுக்குத் தெரியும் பெரிய கூட்டுத்தொகைகளை உருவாக்குகின்றன, அவை துரிதப்படுத்துகின்றன - ஒரு திரட்டு (குறிப்பிடாத, எதிர்வினையின் புலப்படும் கட்டம். ) நுண்ணுயிரிகளின் கொடியில்லாத வடிவங்கள் (புருசெல்லா) சிறுமணி திரட்டிகளை உருவாக்குகின்றன, அதே சமயம் கொடிய வடிவங்கள் (எஸ்செரிச்சியா, சால்மோனெல்லா) பெரிய-பருத்தி திரட்டிகளை உருவாக்குகின்றன, அவை சோதனைக் குழாயின் அடிப்பகுதியில் தலைகீழான குடையின் வடிவத்தில் குடியேறி, அசைக்கும்போது எளிதில் உடைந்துவிடும். ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் ஆன்டிபாடிகள் எலக்ட்ரோலைட் (0.8% சோடியம் குளோரைடு கரைசல்) முன்னிலையில் மட்டுமே தொடர்பு கொள்கின்றன. எலக்ட்ரோலைட்டில் உள்ள உப்பு செறிவு, இடைநீக்கத்தில் உள்ள நுண்ணுயிர் உயிரணுக்களின் எண்ணிக்கை, சீரம் செறிவு, pH, வெப்பநிலை மற்றும் பிற காரணிகளால் எதிர்வினையின் போக்கு பாதிக்கப்படுகிறது.
திரட்டல் எதிர்வினை (ரா).
ஆன்டிஜெனின் தொடர்புகளை அடிப்படையாகக் கொண்ட குறிப்பிட்ட திரட்டல் உள்ளன உடன்ஒரே மாதிரியான ஆன்டிபாடி , இந்த ஆன்டிஜென் அறிமுகப்படுத்தப்பட்ட விலங்கின் உடலில் உள்ளது (இம்யூனோக்ளூட்டினேஷன்); குறிப்பிடப்படாத (வேதியியல்), சுற்றுச்சூழலின் pH இல் ஏற்படும் மாற்றங்களிலிருந்து எழும், எலக்ட்ரோலைட்டுகளின் செறிவு; தன்னிச்சையானது, இது பாக்டீரியா (ஆர்-வடிவத்தில்) உடலியல் கரைசலில் இடைநிறுத்தப்படும்போது மற்றும் வெப்பமடையும் போது கவனிக்கப்படுகிறது, இது பாக்டீரியா கலத்தின் கூழ் நிலையில் ஏற்படும் மாற்றத்துடன் தொடர்புடையது. ஆன்டிஜென் , RA இல் ஈடுபடுவது அக்லூட்டினோஜென் என்றும், ஆன்டிபாடி ஒரு அக்லுட்டினின் என்றும், இதன் விளைவாக வரும் வீழ்படிவு ஒரு அக்லுட்டினேட் என்றும் அழைக்கப்படுகிறது. ஒரு அக்லூட்டினேட் உருவாகும்போது, ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் அளவு விகிதம் முக்கியமானது (உகந்த நிகழ்வு). ஆன்டிபாடிகளின் அதிகப்படியான அல்லது பற்றாக்குறையுடன், ஒரு தாமதம் ஏற்படுகிறது.
நுண்ணுயிரியல் நடைமுறையில் பயன்படுத்தப்படும் முதல் நோயெதிர்ப்பு எதிர்வினைகளில் ஒன்று திரட்டுதல் எதிர்வினை (RA) ஆகும். முதன்முறையாக (1895), டைபாய்டு காய்ச்சலைக் கண்டறிய எஃப்.விடல் RA ஐப் பயன்படுத்தினார். பின்னர் (1897), A. ரைட் அதே எதிர்வினையை மனிதர்களில் புருசெல்லோசிஸ் கண்டறிய பயன்படுத்தினார். கோழிகளில் புல்லோரோசிஸ், லெப்டோஸ்பிரோசிஸ், மாரஸின் தொற்று கருக்கலைப்பு மற்றும் அறியப்படாத நுண்ணுயிர் கலாச்சாரங்களைத் தட்டச்சு செய்வதற்கும் அறியப்பட்ட திரட்டும் சீரம் மூலம் RA பயன்பாட்டைக் கண்டறிந்துள்ளது. RA அதிக உணர்திறன் கொண்டது; 1 மில்லியில் 0.01 μg ஆன்டிபாடி புரதம் நைட்ரஜனைக் கண்டறிய இதைப் பயன்படுத்தலாம்.
திரட்டல் வினையின் பல மாறுபாடுகள் உருவாக்கப்பட்டுள்ளன, அவை முறையான செயலாக்கம் மற்றும் ஆய்வின் நோக்கத்தில் வேறுபடுகின்றன.
2. கண்ணாடி மீது ரா.
RA இன் இந்த மாறுபாட்டில், சோதனை பாடங்கள் சீரம் அல்லது ஆன்டிஜெனாக இருக்கலாம், ஆனால் பெரும்பாலும் இந்த விருப்பம் நுண்ணுயிரிகளை அடையாளம் காண பயன்படுத்தப்படுகிறது.
1. நுண்ணுயிரிகளை (m/o) அடையாளம் காண, அறியப்பட்ட திரட்டும் சீரம் ஒரு துளி, உதாரணமாக சால்மோனெல்லா சீரம் மற்றும் ஒரு துளி உடலியல் தீர்வு (கட்டுப்பாடு) ஆகியவை கொழுப்பு இல்லாத கண்ணாடி ஸ்லைடில் தனித்தனியாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. பின்னர், ஒரு பாக்டீரியாவியல் வளையத்தைப் பயன்படுத்தி, ஆய்வு செய்யப்பட்ட கலாச்சாரத்தின் பாக்டீரியா நிறை ஒரு பெட்ரி டிஷில் உள்ள ஒரு காலனியில் இருந்து அல்லது ஒரு சோதனைக் குழாயில் ஒரு சாய்ந்த MPA மேற்பரப்பில் இருந்து எடுக்கப்பட்டு, ஒரே மாதிரியான இடைநீக்கம் கிடைக்கும் வரை நோயெதிர்ப்பு சீரம் மற்றும் உடலியல் கரைசலில் தனித்தனியாக நிறுத்தப்படுகிறது. . இதன் விளைவாக 2 ... 4 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகிறது.
முடிவுகளுக்கான கணக்கியல்: கட்டுப்பாட்டு மாதிரியில் எந்த மாற்றமும் இருக்கக்கூடாது. பாக்டீரியா கலாச்சாரம் குறிப்பாக நோயெதிர்ப்பு சீரம் பொருந்தினால், அக்லூட்டினேட் செதில்கள் தோன்றும் (நேர்மறையான முடிவு); திரட்டுதல் நிகழ்வு இல்லை என்றால், ஆய்வின் கீழ் உள்ள பாக்டீரியா கலாச்சாரம் நோயெதிர்ப்பு சீரம் உடன் பொருந்தாது என்று முடிவு செய்யப்படுகிறது.
2. புருசெல்லோசிஸ் நோய் கண்டறிதலில் பயன்படுத்தப்படும் ரோஜா பெங்கால் சோதனையின் உதாரணத்தைப் பயன்படுத்தி, சோதனை இரத்த சீரம் உள்ள அனிட்டல்களைக் கண்டறிவதைக் கருத்தில் கொள்வோம். 0.3 மில்லி சோதனை விலங்கு இரத்த சீரம் மற்றும் 0.03 மில்லி ப்ரூசெல்லோசிஸ் ஆன்டிஜென் (ரோஜா-வங்காள-புருசெல்லா செல்கள்) ஒரு கண்ணாடி ஸ்லைடில் பயன்படுத்தப்படுகிறது. கண்ணாடியை அசைப்பதன் மூலம் கூறுகள் முழுமையாக கலக்கப்படுகின்றன, இதன் விளைவாக 4 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகிறது.
முடிவுகளின் பதிவு: எதிர்வினை நேர்மறையாக இருந்தால், அக்லூட்டினேட்டின் இளஞ்சிவப்பு செதில்கள் தோன்றும். இந்த வகையின் செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினை தரமானதாக வகைப்படுத்தப்படுகிறது, ஏனெனில் இது விலங்குகளின் இரத்த சீரம் உள்ள நோய்க்கிருமிக்கு ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறியப் பயன்படுகிறது, ஆனால் அவற்றின் அளவு உள்ளடக்கத்தை மதிப்பிடுவது சாத்தியமில்லை.
1.1 திரட்டுதல் எதிர்வினை (RA)
திரட்டுதல் எதிர்வினை (RA)
அதன் தனித்தன்மை, செயல்திறன் மற்றும் ஆர்ப்பாட்டத்தின் எளிமை ஆகியவற்றின் காரணமாக, பல தொற்று நோய்களைக் கண்டறிவதற்கான நுண்ணுயிரியல் நடைமுறையில் திரட்டல் எதிர்வினை பரவலாகிவிட்டது.
முழு நுண்ணுயிர் அல்லது பிற உயிரணுக்களுடன் (அக்லூட்டினோஜென்கள்) ஆன்டிபாடிகளின் (அக்லூட்டினின்கள்) தொடர்புகளின் தனித்தன்மையை அடிப்படையாகக் கொண்டது திரட்டுதல் எதிர்வினை. இந்த இடைவினையின் விளைவாக, துகள்கள் மற்றும் திரட்டுகள் உருவாகின்றன, அவை செதில்களாக (அக்லூடினேட்) படிகின்றன.
திரட்டல் எதிர்வினை நேரடி மற்றும் கொல்லப்பட்ட பாக்டீரியாக்கள், ஸ்பைரோசெட்டுகள், பூஞ்சைகள், புரோட்டோசோவா, ரிக்கெட்சியா, அத்துடன் இரத்த சிவப்பணுக்கள் மற்றும் பிற செல்களை உள்ளடக்கியது. எதிர்வினை இரண்டு கட்டங்களில் நிகழ்கிறது: முதல் (கண்ணுக்கு தெரியாத) குறிப்பிட்ட, ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் கலவை, இரண்டாவது (தெரியும்) குறிப்பிடப்படாதது, ஆன்டிஜென்களின் ஒட்டுதல், அதாவது. aglutinate உருவாக்கம்.
ஒரு டைவலன்ட் ஆன்டிபாடியின் ஒரு செயலில் உள்ள மையம் ஆன்டிஜெனின் தீர்மானிக்கும் குழுவுடன் இணைந்தால் ஒரு அக்லுட்டினேட் உருவாகிறது. எந்தவொரு செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினையையும் போலவே, திரட்டல் எதிர்வினை எலக்ட்ரோலைட்டுகளின் முன்னிலையில் நிகழ்கிறது.
வெளிப்புறமாக, நேர்மறை திரட்டல் எதிர்வினையின் வெளிப்பாடு இரு மடங்கு தன்மையைக் கொண்டுள்ளது. சோமாடிக் O2 ஆன்டிஜென் மட்டுமே உள்ள கொடிய நுண்ணுயிரிகளில், நுண்ணுயிர் செல்கள் நேரடியாக ஒன்றாக ஒட்டிக்கொள்கின்றன. இந்த திரட்டல் நுண்ணிய தானியம் என்று அழைக்கப்படுகிறது. இது 18 22 மணி நேரத்திற்குள் நிகழ்கிறது. v
ஃபிளாஜெலேட் நுண்ணுயிரிகள் இரண்டு ஆன்டிஜென்களைக் கொண்டுள்ளன: சோமாடிக் O2 ஆன்டிஜென் மற்றும் ஃபிளாஜெல்லர் H2 ஆன்டிஜென். ஃபிளாஜெல்லாவால் செல்கள் ஒன்றாக ஒட்டப்பட்டால், பெரிய, தளர்வான செதில்கள் உருவாகின்றன மற்றும் இந்த திரட்டல் எதிர்வினை கரடுமுரடான-தானியம் என்று அழைக்கப்படுகிறது. இது 24 மணி நேரத்திற்குள் நிகழ்கிறது.
நோயாளியின் இரத்த சீரம் உள்ள குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளின் தரமான மற்றும் அளவு தீர்மானத்தின் நோக்கத்திற்காகவும், தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமியின் இனங்களை தீர்மானிக்கும் நோக்கத்திற்காகவும் திரட்டுதல் எதிர்வினை இரண்டும் செய்யப்படலாம். v
திரட்டல் எதிர்வினை விரிவாக்கப்பட்ட பதிப்பில் செய்யப்படலாம், இது ஒரு கண்டறியும் டைட்டரில் நீர்த்த சீரம் மற்றும் மாறுபாட்டுடன் வேலை செய்ய உங்களை அனுமதிக்கிறது. அறிகுறி எதிர்வினை, இது கொள்கையளவில், குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய அல்லது நோய்க்கிருமியின் இனங்களைத் தீர்மானிக்க அனுமதிக்கிறது.
ஒரு விரிவான திரட்டல் எதிர்வினையைச் செய்யும்போது, பொருளின் இரத்த சீரம் உள்ள குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய, சோதனை சீரம் 1:50 அல்லது 1:100 நீர்த்தலில் எடுக்கப்படுகிறது. சாதாரண ஆன்டிபாடிகள் முழு அல்லது சிறிது நீர்த்த சீரம் மிக அதிக செறிவுகளில் இருக்கலாம், பின்னர் எதிர்வினை முடிவுகள் தவறானதாக இருக்கலாம் என்பதே இதற்குக் காரணம். எதிர்வினையின் இந்த பதிப்பில் சோதிக்கப்படும் பொருள் நோயாளியின் இரத்தமாகும்.
இரத்தம் வெறும் வயிற்றில் எடுக்கப்படுகிறது அல்லது உணவுக்கு 6 மணி நேரத்திற்கு முன்பே எடுக்கப்படுகிறது (இல்லையெனில் இரத்த சீரத்தில் கொழுப்புத் துளிகள் இருக்கலாம், இது மேகமூட்டமாகவும் ஆராய்ச்சிக்கு பொருத்தமற்றதாகவும் இருக்கும்). நோயாளியின் இரத்த சீரம் பொதுவாக நோயின் இரண்டாவது வாரத்தில் பெறப்படுகிறது, க்யூபிடல் நரம்பில் இருந்து 3 × 4 மில்லி இரத்தத்தை மலட்டுத்தன்மையுடன் சேகரிக்கிறது (இந்த நேரத்தில் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளின் அதிகபட்ச அளவு குவிந்துள்ளது). ஒரு குறிப்பிட்ட ஆன்டிஜெனிக் கட்டமைப்பைக் கொண்ட ஒரு குறிப்பிட்ட இனத்தின் கொல்லப்பட்ட ஆனால் அழிக்கப்படாத நுண்ணுயிர் உயிரணுக்களிலிருந்து தயாரிக்கப்பட்ட ஒரு கண்டறியும் ஆன்டிஜெனாகப் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
நோய்க்கிருமியின் இனங்கள் மற்றும் வகையைத் தீர்மானிக்க விரிவான திரட்டல் எதிர்வினையைச் செய்யும்போது, ஆன்டிஜென் என்பது ஆய்வு செய்யப்படும் பொருளிலிருந்து தனிமைப்படுத்தப்பட்ட ஒரு நேரடி நோய்க்கிருமியாகும். நோயெதிர்ப்பு கண்டறியும் சீரத்தில் உள்ள ஆன்டிபாடிகள் அறியப்படுகின்றன. v
நோய் எதிர்ப்பு சக்தி கண்டறியும் சீரம்தடுப்பூசி போடப்பட்ட முயலின் இரத்தத்திலிருந்து பெறப்பட்டது. டைட்டரைத் தீர்மானித்த பிறகு (ஆன்டிபாடிகள் கண்டறியப்பட்ட அதிகபட்ச நீர்த்தல்), கண்டறியும் சீரம் ஒரு பாதுகாப்பைச் சேர்ப்பதன் மூலம் ஆம்பூல்களில் ஊற்றப்படுகிறது. தனிமைப்படுத்தப்பட்ட நோய்க்கிருமியின் ஆன்டிஜெனிக் கட்டமைப்பால் அடையாளம் காண இந்த சீரம் பயன்படுத்தப்படுகிறது.
திரட்டுதல் எதிர்வினையின் விருப்பங்கள்
இந்த எதிர்வினைகளில் ஆன்டிஜென்கள் துகள்கள் (நுண்ணுயிர் செல்கள், சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் மற்றும் பிற கார்பஸ்குலர் ஆன்டிஜென்கள்) ஆகியவை அடங்கும், அவை ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் வீழ்படிவுகளால் ஒன்றாக ஒட்டப்படுகின்றன.
ஒரு திரட்டல் எதிர்வினை (RA), மூன்று கூறுகள் தேவை: 1) ஆன்டிஜென் (agglutinogen); 2) ஆன்டிபாடி (அக்லூட்டினின்) மற்றும் 3) எலக்ட்ரோலைட் (ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசல்).
ஓரியண்டேடிவ் (தட்டு) திரட்டுதல் எதிர்வினை (RA)
ஒரு அறிகுறி அல்லது தட்டு, RA அறை வெப்பநிலையில் ஒரு கண்ணாடி ஸ்லைடில் வைக்கப்படுகிறது. இதைச் செய்ய, 1:10 1:20 நீர்த்துப்போகும்போது ஒரு துளி சீரம் மற்றும் கண்ணாடி மீது ஐசோடோனிக் சோடியம் குளோரைடு கரைசலின் கட்டுப்பாட்டுத் துளியைத் தனித்தனியாகப் பயன்படுத்த, ஒரு பாஸ்டர் பைப்பெட்டைப் பயன்படுத்தவும். காலனிகள் அல்லது பாக்டீரியாவின் தினசரி கலாச்சாரம் (ஒரு துளி கண்டறிதல்) இரண்டு பாக்டீரியாவியல் சுழல்களிலும் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டு முழுமையாக கலக்கப்படுகிறது. சில நிமிடங்களுக்குப் பிறகு, சில நேரங்களில் பூதக்கண்ணாடி (x5) பயன்படுத்தி எதிர்வினைகள் பார்வைக்கு கணக்கில் எடுத்துக்கொள்ளப்படுகின்றன. நேர்மறை RA உடன், சீரம் ஒரு துளியில் பெரிய மற்றும் சிறிய செதில்களின் தோற்றம் குறிப்பிடப்படுகிறது; எதிர்மறையுடன், சீரம் ஒரே மாதிரியாக மேகமூட்டமாக இருக்கும்.
மறைமுக (செயலற்ற) இரத்த உறைதல் எதிர்வினை (RNGA, RPGA)
எதிர்வினை செய்யப்படுகிறது: 1) பாலிசாக்கரைடுகள், புரதங்கள், பாக்டீரியாவின் சாறுகள் மற்றும் பிற மிகவும் சிதறிய பொருட்கள், rickettsiae மற்றும் வைரஸ்கள், agglutinins கொண்ட வளாகங்களை வழக்கமான RA களில் காண முடியாது, அல்லது 2) நோயாளிகளின் செராவில் உள்ள ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய இந்த மிகவும் சிதறடிக்கப்பட்ட பொருட்கள் மற்றும் சிறிய நுண்ணுயிரிகள்.
மறைமுக, அல்லது செயலற்ற, திரட்டுதல் என்பது மந்த துகள்களில் (லேடெக்ஸ், செல்லுலோஸ், பாலிஸ்டிரீன், பேரியம் ஆக்சைடு, முதலியன அல்லது செம்மறி சிவப்பு இரத்த அணுக்கள், மனித இரத்தக் குழு I(0)) முன் உறிஞ்சப்பட்ட ஆன்டிஜென்களுடன் தொடர்பு கொள்ளும் எதிர்வினையாக புரிந்து கொள்ளப்படுகிறது.
செயலற்ற ஹீமாக்ளூட்டினேஷன் எதிர்வினையில் (RPHA), சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் ஒரு கேரியராகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. ஆன்டிஜென்-ஏற்றப்பட்ட சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் இந்த ஆன்டிஜெனுக்கு குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் முன்னிலையில் ஒன்றாக ஒட்டிக்கொண்டு வீழ்படிகின்றன. ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிவதற்கான எரித்ரோசைட் நோயறிதலாக RPGA இல் ஆன்டிஜென் உணர்திறன் கொண்ட எரித்ரோசைட்டுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன (செரோடியோக்னோசிஸ்). இரத்த சிவப்பணுக்களில் ஆன்டிபாடிகள் (எரித்ரோசைட் ஆன்டிபாடி டயக்னோஸ்டிகம்) ஏற்றப்பட்டிருந்தால், ஆன்டிஜென்களைக் கண்டறிய இதைப் பயன்படுத்தலாம்.
அரங்கேற்றம். பாலிஸ்டிரீன் தகடுகளின் கிணறுகளில் சீரம் தொடர்ச்சியான நீர்த்தங்களின் தொடர் தயாரிக்கப்படுகிறது. இறுதிக் கிணற்றில் 0.5 மில்லி வெளிப்படையான நேர்மறை சீரம் மற்றும் கடைசி கிணற்றில் 0.5 மில்லி உடலியல் தீர்வு (கட்டுப்பாடுகள்) சேர்க்கவும். பின்னர் அனைத்து கிணறுகளிலும் 0.1 மில்லி நீர்த்த எரித்ரோசைட் டயக்னோஸ்டிகம் சேர்த்து, குலுக்கி, ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் 2 மணி நேரம் வைக்கவும்.
கணக்கியல். IN நேர்மறை வழக்குஎரித்ரோசைட்டுகள் துளையின் அடிப்பகுதியில் மடிந்த அல்லது துண்டிக்கப்பட்ட விளிம்புடன் (தலைகீழ் குடை) செல்களின் சீரான அடுக்கு வடிவத்தில் குடியேறுகின்றன; எதிர்மறையாக அவை ஒரு பொத்தான் அல்லது மோதிரத்தின் வடிவத்தில் குடியேறுகின்றன.
1.2 நடுநிலைப்படுத்தல் எதிர்வினை. LYSIS,
ஒப்சோனோபாகோசைடிக் ரியாக்ஷன், ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி ரியாக்ஷன்
ஆன்டிடாக்சின் (RN) உடன் எக்ஸோடாக்சின் நடுநிலையாக்கத்தின் எதிர்வினை
எக்ஸோடாக்சின் விளைவை நடுநிலையாக்கும் ஆன்டிடாக்ஸிக் சீரம் திறனை அடிப்படையாகக் கொண்டது எதிர்வினை. இது ஆன்டிடாக்ஸிக் சீரம்களின் டைட்ரேஷன் மற்றும் எக்ஸோடாக்சின் தீர்மானத்திற்கு பயன்படுத்தப்படுகிறது.
சீரம் டைட்ரேட் செய்யும் போது, தொடர்புடைய நச்சு ஒரு குறிப்பிட்ட அளவு ஆன்டிடாக்ஸிக் சீரம் பல்வேறு நீர்த்த சேர்க்கப்படுகிறது. ஆன்டிஜென் முற்றிலும் நடுநிலையான மற்றும் செலவழிக்கப்படாத ஆன்டிபாடிகள் இல்லாதபோது, ஆரம்ப ஃப்ளோகுலேஷன் ஏற்படுகிறது. ஃப்ளோகுலேஷன் எதிர்வினை சீரம் (உதாரணமாக, டிஃப்தீரியா) டைட்ரேஷனுக்கு மட்டுமல்ல, நச்சு மற்றும் டாக்ஸாய்டின் டைட்ரேஷனுக்கும் பயன்படுத்தப்படலாம். ஆன்டிடாக்சினுடன் நச்சு நடுநிலைப்படுத்தலின் எதிர்வினை, ஆன்டிடாக்ஸிக் சிகிச்சை சீரம்களின் செயல்பாட்டை நிர்ணயிப்பதற்கான ஒரு முறையாக மிகவும் நடைமுறை முக்கியத்துவம் வாய்ந்தது. இந்த எதிர்வினையில் உள்ள ஆன்டிஜென் ஒரு உண்மையான எக்சோடாக்சின் ஆகும்.
ஆன்டிடாக்ஸிக் சீரம் வலிமை AE இன் வழக்கமான அலகுகளால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது.
1 AE போட்லினம் சீரம் அதன் அளவு 1000 DLM போட்லினம் நச்சுத்தன்மையை நடுநிலையாக்குகிறது. எக்ஸோடாக்சின் இனங்கள் அல்லது வகையைத் தீர்மானிப்பதற்கான நடுநிலைப்படுத்தல் எதிர்வினை (டெட்டனஸ், போட்யூலிசம், டிஃப்தீரியா, முதலியன) விட்ரோவில் மேற்கொள்ளப்படலாம் (ரமோனின் கூற்றுப்படி), மற்றும் நுண்ணுயிர் உயிரணுக்களின் நச்சுத்தன்மையை தீர்மானிக்கும் போது - ஒரு ஜெல்லில் ( Ouchterlony படி).
லிசிஸ் எதிர்வினை (ஆர்எல்)
நோயெதிர்ப்பு சீரம் பாதுகாப்பு பண்புகளில் ஒன்று உடலில் நுழையும் நுண்ணுயிரிகள் அல்லது செல்லுலார் கூறுகளை கரைக்கும் திறன் ஆகும்.
உயிரணுக் கரைப்பை (லிசிஸ்) ஏற்படுத்தும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் லைசின்கள் என்று அழைக்கப்படுகின்றன. ஆன்டிஜெனின் தன்மையைப் பொறுத்து, அவை பாக்டீரியோலிசின்கள், சைட்டோலிசின்கள், ஸ்பைரோசெட்டோலிசின்கள், ஹீமோலிசின்கள் போன்றவையாக இருக்கலாம்.
கூடுதல் நிரப்பு காரணி முன்னிலையில் மட்டுமே லைசின்கள் அவற்றின் விளைவை வெளிப்படுத்துகின்றன. ஒரு குறிப்பிடப்படாத காரணியாக நிரப்புதல் நகைச்சுவை நோய் எதிர்ப்பு சக்தி, செரிப்ரோஸ்பைனல் திரவம் மற்றும் முன்புற அறை திரவம் தவிர, கிட்டத்தட்ட அனைத்து உடல் திரவங்களிலும் காணப்படுகிறது. மனித இரத்த சீரத்தில் மிகவும் உயர்ந்த மற்றும் நிலையான நிரப்பு உள்ளடக்கம் குறிப்பிடப்பட்டுள்ளது மற்றும் இரத்த சீரம் நிறைய உள்ளது கினிப் பன்றி. மற்ற பாலூட்டிகளில், இரத்த சீரம் உள்ள நிரப்பு உள்ளடக்கம் வேறுபட்டது.
நிரப்பு என்பது ஒரு சிக்கலான அமைப்புமோர் புரதங்கள். இது நிலையற்றது மற்றும் 30 நிமிடங்களுக்கு 55 டிகிரியில் சரிகிறது. அறை வெப்பநிலையில், நிரப்பு இரண்டு மணி நேரத்திற்குள் அழிக்கப்படுகிறது. நீடித்த குலுக்கல், அமிலங்கள் மற்றும் புற ஊதா கதிர்களுக்கு மிகவும் உணர்திறன். இருப்பினும், நிரப்பு குறைந்த வெப்பநிலையில் உலர்ந்த நிலையில் நீண்ட நேரம் (ஆறு மாதங்கள் வரை) சேமிக்கப்படுகிறது. நிரப்பு நுண்ணுயிர் செல்கள் மற்றும் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் சிதைவை ஊக்குவிக்கிறது.
பாக்டீரியோலிசிஸ் மற்றும் ஹீமோலிசிஸ் ஆகியவற்றின் எதிர்வினைகளுக்கு இடையே ஒரு வேறுபாடு உள்ளது.
பாக்டீரியோலிசிஸ் எதிர்வினையின் சாராம்சம் என்னவென்றால், ஒரு குறிப்பிட்ட நோயெதிர்ப்பு சீரம் அதனுடன் தொடர்புடைய ஹோமோலோகஸ் வாழும் நுண்ணுயிர் உயிரணுக்களுடன் இணைந்தால், நுண்ணுயிர் சிதைவு ஏற்படுகிறது.
ஹீமோலிசிஸ் எதிர்வினை என்னவென்றால், எரித்ரோசைட்டுகள் ஒரு குறிப்பிட்ட சீரம் வெளிப்படும் போது அவை நோய் எதிர்ப்பு சக்தி கொண்டவை (ஹீமோலிடிக்) நிரப்புதல் முன்னிலையில், எரித்ரோசைட்டுகளின் கலைப்பு கவனிக்கப்படுகிறது, அதாவது. ஹீமோலிசிஸ்.
ஆய்வக நடைமுறையில் ஹீமோலிசிஸ் எதிர்வினை நிரப்பு வரம்பை தீர்மானிக்கவும், அதே போல் முடிவுகளை பதிவு செய்யவும் பயன்படுத்தப்படுகிறது. கண்டறியும் எதிர்வினைகள்நிரப்பு நிர்ணயம். நிரப்பு டைட்டர் அதன் மிகச்சிறிய அளவு ஆகும், இது 2.5 மில்லி அளவில் ஹீமோலிடிக் அமைப்பில் 30 நிமிடங்களுக்குள் இரத்த சிவப்பணுக்களின் சிதைவை ஏற்படுத்துகிறது. அனைத்து செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினைகளைப் போலவே லிசிஸ் எதிர்வினையும் ஒரு எலக்ட்ரோலைட்டின் முன்னிலையில் நிகழ்கிறது.
ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினைகள் (ஒவ்வாமை)
ஆன்டிஜெனின் சில வடிவங்கள், உடலுடன் மீண்டும் மீண்டும் தொடர்பு கொள்ளும்போது, அதன் அடிப்படையில் குறிப்பிட்ட ஒரு எதிர்வினையை ஏற்படுத்தலாம், ஆனால் கடுமையான அழற்சி எதிர்வினையின் குறிப்பிட்ட செல்லுலார் மற்றும் மூலக்கூறு காரணிகளை உள்ளடக்கியது. ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டியின் இரண்டு அறியப்பட்ட வடிவங்கள் உள்ளன: உடனடி-வகை மிகை உணர்திறன் (IHT) மற்றும் தாமதமான-வகை அதிக உணர்திறன் (DTH). முதல் வகை எதிர்வினை ஆன்டிபாடிகளின் பங்கேற்புடன் நிகழ்கிறது, மேலும் ஒவ்வாமையுடன் மீண்டும் மீண்டும் தொடர்பு கொண்ட 2 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு எதிர்வினை உருவாகிறது. இரண்டாவது வகை அழற்சி டி செல்கள் (டிஜிசி) மூலம் எதிர்வினையின் முக்கிய விளைவுகளாக உணரப்படுகிறது, இது அழற்சியின் பகுதியில் மேக்ரோபேஜ்கள் குவிவதை உறுதி செய்கிறது; எதிர்வினை 6-8 மணி நேரத்திற்குப் பிறகும் அதற்குப் பிறகும் வெளிப்படுகிறது.
ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினையின் வளர்ச்சியானது ஆன்டிஜெனுடன் ஒரு சந்திப்பு மற்றும் உணர்திறன் ஏற்படுவதற்கு முன்னதாக உள்ளது, அதாவது. ஆன்டிபாடிகளின் தோற்றம், செயலில் உணர்திறன் கொண்ட லிம்போசைட்டுகள் மற்றும் பிற லுகோசைட்டுகளின் செயலற்ற உணர்திறன் சைட்டோபிலிக் ஆன்டிபாடிகள் (மேக்ரோபேஜ்கள், கிரானுலோசைட்டுகள்).
ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினைகள் வளர்ச்சியின் மூன்று கட்டங்களைக் கொண்டுள்ளன: நோயெதிர்ப்பு; நோய் வேதியியல்; நோய்க்குறியியல்.
முதல், குறிப்பிட்ட கட்டத்தில், ஒவ்வாமை ஆன்டிபாடிகள் மற்றும் (அல்லது) உணர்திறன் உயிரணுக்களுடன் தொடர்பு கொள்கிறது. இரண்டாவது கட்டத்தில், உயிரியல் வெளியீடு ஏற்படுகிறது செயலில் உள்ள பொருட்கள்செயல்படுத்தப்பட்ட கலங்களிலிருந்து. வெளியிடப்பட்ட மத்தியஸ்தர்கள் (ஹிஸ்டமைன், செரோடோனின், லுகோட்ரைன்கள், பிராடிகினின் போன்றவை) தொடர்புடைய வகை எதிர்வினையின் மூன்றாம் கட்டத்தின் சிறப்பியல்பு பல்வேறு புற விளைவுகளை ஏற்படுத்துகின்றன.
எதிர்வினைகள் அதிக உணர்திறன்நான்காவது வகை
இந்த வகை எதிர்வினைகள் உணர்திறன் கொண்ட டி-ஹெல்பர் செல்கள், சைட்டோடாக்ஸிக் டி-லிம்போசைட்டுகள் (டி-கில்லர் செல்கள்) மற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட் அமைப்பின் செயல்படுத்தப்பட்ட செல்கள் ஆகியவற்றின் நோய்க்கிருமி இடைச்செருகல் தொடர்புகளால் ஏற்படுகின்றன. உடலின் நோயெதிர்ப்பு மண்டலத்தின் ஒப்பீட்டு பற்றாக்குறையை அகற்றுவதற்கு உள் சூழல்தொற்று நோய்களின் பாக்டீரியா நோய்க்கிருமிகள். இந்த அதிக உணர்திறன் எதிர்வினைகள் காசநோய் கொண்ட நுரையீரல் துவாரங்கள், அவற்றின் கேசியஸ் நெக்ரோசிஸ் மற்றும் காசநோயால் பாதிக்கப்பட்ட நோயாளிகளுக்கு பொதுவான போதை. காசநோய் மற்றும் தொழுநோய் ஆகியவற்றில் உள்ள தோல் கிரானுலோமாடோசிஸ் பெரும்பாலும் நான்காவது வகையின் அதிக உணர்திறன் எதிர்வினைகளால் ஆனது.
பெரும்பாலானவை பிரபலமான உதாரணம்நான்காவது வகையின் ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினைகள் இது ஒரு மாண்டூக்ஸ் எதிர்வினை ஆகும், இது மைக்கோபாக்டீரியல் ஆன்டிஜென்களுக்கு உணர்திறன் கொண்ட ஒரு நோயாளிக்கு டியூபர்குலின் இன்ட்ராடெர்மல் ஊசி இடத்தில் உருவாகிறது. எதிர்வினையின் விளைவாக, மையத்தில் நெக்ரோசிஸ் கொண்ட ஒரு அடர்த்தியான ஹைபர்மிக் பருப்பு உருவாகிறது, இது டியூபர்குலின் இன்ட்ராடெர்மல் ஊசிக்குப் பிறகு சில மணிநேரங்கள் (மெதுவாக) தோன்றும். ஒரு பாப்புலின் உருவாக்கம் வாஸ்குலர் படுக்கையிலிருந்து இன்டர்செல்லுலர் இடைவெளிகளில் இரத்தத்தை சுற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட்டுகளின் வெளியீட்டில் தொடங்குகிறது. அதே நேரத்தில், வாஸ்குலர் படுக்கையில் இருந்து பாலிமார்போநியூக்ளியர் செல்கள் குடியேற்றம் தொடங்குகிறது. பின்னர் நியூட்ரோபில்களின் ஊடுருவல் குறைகிறது, மேலும் ஊடுருவல் முக்கியமாக லிம்போசைட்டுகள் மற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட்டுகளைக் கொண்டிருக்கத் தொடங்குகிறது. இது ஆர்தஸ் வினையிலிருந்து மாண்டூக்ஸ் வினையிலிருந்து வேறுபடுகிறது, இதில் முக்கியமாக பாலிமார்போநியூக்ளியர் லுகோசைட்டுகள் புண் ஏற்பட்ட இடத்தில் குவிகின்றன.
வகை 4 ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினைகளில், ஆன்டிஜென்களுடன் கூடிய உணர்திறன் கொண்ட லிம்போசைட்டுகளின் நீண்டகால தூண்டுதலுக்கு வழிவகுக்கிறது நோயியல் மாற்றங்கள்டி ஹெல்பர் செல்கள் மூலம் சைட்டோகைன்களை நோயியல் ரீதியாக தீவிரமான மற்றும் நீண்டகாலமாக வெளியிடுவதற்கு திசுக்கள். திசு சேதத்தின் இடத்தில் சைட்டோகைன்களின் தீவிர வெளியீடு அங்கு அமைந்துள்ள மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட் அமைப்பின் உயிரணுக்களின் அதிவேகத்தை ஏற்படுத்துகிறது, அவற்றில் பல, மிகைப்படுத்தப்பட்ட நிலையில், எபிதெலாய்டு செல்களின் இழைகளை உருவாக்குகின்றன, மேலும் சில ஒன்றுடன் ஒன்று இணைந்து மாபெரும் செல்களை உருவாக்குகின்றன. மேக்ரோபேஜ்கள், பாக்டீரியா மற்றும் வைரஸ் ஆன்டிஜென்கள் வெளிப்படும் மேற்பரப்பில், Tkillers (இயற்கை கொலையாளிகள்) செயல்பாட்டின் மூலம் அழிக்கப்படலாம்.
நான்காவது வகை ஹைபர்சென்சிட்டிவிட்டி எதிர்வினை, டி ஹெல்பர் செல்கள் மூலம் வெளிநாட்டு பாக்டீரியா ஆன்டிஜெனை அங்கீகரிப்பதன் மூலம் தூண்டப்படுகிறது. எண்டோசைட்டோசிஸ் மற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட்டுகள் மூலம் வெளிநாட்டு இம்யூனோஜென்களின் செயலாக்கத்திற்குப் பிறகு ஆன்டிஜென் வழங்கும் உயிரணுக்களின் மேற்பரப்பில் வெளிப்படும் ஆன்டிஜென்களுடன் தூண்டிகளின் தொடர்பு என்பது அங்கீகாரத்திற்கான அவசியமான நிபந்தனையாகும். மற்றொன்று தேவையான நிபந்தனைமுக்கிய ஹிஸ்டோகாம்பேட்டிபிலிட்டி வளாகத்தில் இருந்து வகுப்பு I மூலக்கூறுகளுடன் இணைந்து ஆன்டிஜென்களின் வெளிப்பாடு. ஆன்டிஜென் அங்கீகாரத்திற்குப் பிறகு, உணர்திறன் கொண்ட ஹெல்பர் செல்கள் சைட்டோகைன்களை வெளியிடுகின்றன, குறிப்பாக இன்டர்லூகின் 2, இது இயற்கையான கொலையாளி செல்கள் மற்றும் மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட்டுகளை செயல்படுத்துகிறது. செயல்படுத்தப்பட்ட மோனோநியூக்ளியர் பாகோசைட்டுகள் புரோட்டியோலிடிக் என்சைம்கள் மற்றும் இலவச ஆக்ஸிஜன் ரேடிக்கல்களை வெளியிடுகின்றன, அவை திசுக்களை சேதப்படுத்துகின்றன.
தோல் ஒவ்வாமை சோதனைகள் ஒவ்வாமைக்கு உடலின் உணர்திறனை நிறுவுவதற்கான சோதனைகள், அதன் தொற்று அளவை தீர்மானிக்க, எடுத்துக்காட்டாக, காசநோய், புருசெல்லோசிஸ், மந்தை நோய் எதிர்ப்பு சக்திஎடுத்துக்காட்டாக, துலரேமியாவுக்கு. ஒவ்வாமை நிர்வாகத்தின் தளத்தின் அடிப்படையில், உள்ளன: 1) தோல் சோதனைகள்; 2) ஸ்கார்ஃபிகேஷன்; 3) இன்ட்ராடெர்மல்; 4) தோலடி. தோல் ஒவ்வாமை பரிசோதனையின் போது ஒவ்வாமைக்கான மருத்துவ எதிர்வினை உள்ளூர், பொது மற்றும் குவியமாக பிரிக்கப்பட்டுள்ளது, அத்துடன் உடனடி மற்றும் தாமதமானது.
மத்தியஸ்தர் வகை ஜிஎன்டியின் உள்ளூர் எதிர்வினைகள் 520 நிமிடங்களுக்குப் பிறகு நிகழ்கின்றன, சிவப்பணு மற்றும் கொப்புளத்தின் வடிவத்தில் வெளிப்படுத்தப்படுகின்றன, சில மணிநேரங்களுக்குப் பிறகு மறைந்துவிடும், மேலும் மிமீ அளவிடப்படும் எரித்மாவின் அளவு மூலம் பிளஸ் முறையால் மதிப்பிடப்படுகிறது. உள்ளூர் HRT எதிர்வினைகள் 24-48 மணி நேரத்திற்குள் நிகழ்கின்றன, நீண்ட நேரம் நீடிக்கும், ஒரு ஊடுருவலின் வடிவத்தில் தோன்றும், சில நேரங்களில் மையத்தில் நெக்ரோசிஸுடன், மேலும் பிளஸ் அமைப்பைப் பயன்படுத்தி மிமீ உள்ள ஊடுருவலின் அளவைக் கொண்டு மதிப்பிடப்படுகிறது. சைட்டோடாக்ஸிக் மற்றும் இம்யூனோகாம்ப்ளக்ஸ் வகை HNT உடன், ஹைபிரீமியா மற்றும் ஊடுருவல் 3-4 மணி நேரத்திற்குப் பிறகு கவனிக்கப்படுகிறது, அதிகபட்சம் 6-8 மணிநேரத்தை அடைந்து ஒரு நாளுக்குப் பிறகு குறைகிறது. சில நேரங்களில் ஒருங்கிணைந்த எதிர்வினைகள் காணப்படுகின்றன.
1.3 நிரப்புதல் சரிசெய்தல் எதிர்வினை (FFR)
இந்த எதிர்வினை பல்வேறு நோய்த்தொற்றுகளுக்கு இரத்த சீரம் உள்ள ஆன்டிபாடிகளைக் கண்டறிய ஆய்வக ஆய்வுகளில் பயன்படுத்தப்படுகிறது, அத்துடன் அதன் ஆன்டிஜெனிக் அமைப்பு மூலம் நோய்க்கிருமியை அடையாளம் காணவும்.
நிரப்பு நிலைப்படுத்தல் எதிர்வினை என்பது ஒரு சிக்கலான செரோலாஜிக்கல் எதிர்வினை மற்றும் அதிக உணர்திறன் மற்றும் குறிப்பிட்டது.
இந்த எதிர்வினையின் ஒரு அம்சம் என்னவென்றால், குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளுடன் அதன் தொடர்புகளின் போது ஆன்டிஜெனின் மாற்றம் நிரப்பு முன்னிலையில் மட்டுமே நிகழ்கிறது. "ஆன்டிபாடி ஆன்டிஜென்" வளாகத்தில் மட்டுமே நிரப்பு உறிஞ்சப்படுகிறது. சீரத்தில் உள்ள ஆன்டிஜெனுக்கும் ஆன்டிபாடிக்கும் இடையே தொடர்பு இருந்தால் மட்டுமே "ஆன்டிபாடி ஆன்டிஜென்" வளாகம் உருவாகிறது.
"ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி" வளாகத்தில் நிரப்பு உறிஞ்சுதல் அதன் பண்புகளைப் பொறுத்து ஆன்டிஜெனின் தலைவிதியில் வெவ்வேறு விளைவுகளை ஏற்படுத்தும்.
சில ஆன்டிஜென்கள் இந்த நிலைமைகளின் கீழ் கூர்மையான உருவ மாற்றங்களுக்கு உட்படுகின்றன, இதில் கரைதல் (ஹீமோலிசிஸ், ஐசேவ்-ஃபைஃபர் நிகழ்வு, சைட்டோலிடிக் நடவடிக்கை) அடங்கும். மற்றவர்கள் இயக்கத்தின் வேகத்தை மாற்றுகிறார்கள் (ட்ரெபோனேமா அசையாமை). இன்னும் சிலர் திடீர் அழிவு மாற்றங்கள் (பாக்டீரிசைடு அல்லது சைட்டோடாக்ஸிக் விளைவு) இல்லாமல் இறக்கின்றனர். இறுதியாக, எளிதில் காணக்கூடிய ஆன்டிஜென் மாற்றங்களுடன் நிரப்பு உறிஞ்சுதல் இல்லாமல் இருக்கலாம்.
RSC பொறிமுறையின் படி, இது இரண்டு கட்டங்களில் நிகழ்கிறது:
- முதல் கட்டம் "ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி" சிக்கலான உருவாக்கம் மற்றும் இந்த நிரப்பு வளாகத்தில் உறிஞ்சுதல் ஆகும். கட்டத்தின் முடிவு பார்வைக்குத் தெரியவில்லை (நிபந்தனையின் கட்டாய பங்கேற்புடன் ஆன்டிஜென் மற்றும் ஆன்டிபாடிகளின் தொடர்பு).
- இரண்டாம் கட்டம் என்பது நிரப்பு முன்னிலையில் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகளின் செல்வாக்கின் கீழ் ஆன்டிஜெனின் மாற்றம் ஆகும். கட்டத்தின் முடிவு பார்வைக்கு அல்லது புலப்படாமல் இருக்கலாம் (ஒரு காட்டி ஹீமோலிடிக் அமைப்பைப் பயன்படுத்தி எதிர்வினை முடிவுகளைக் கண்டறிதல் (செம்மறி சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் மற்றும் ஹீமோலிடிக் சீரம்).
ஹீமோலிடிக் சீரம் மூலம் சிவப்பு இரத்த அணுக்களின் அழிவு ஹீமோலிடிக் அமைப்பில் நிரப்பப்பட்டால் மட்டுமே நிகழ்கிறது. ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தில் நிரப்பு முன்பு உறிஞ்சப்பட்டிருந்தால், எரித்ரோசைட்டுகளின் ஹீமோலிசிஸ் ஏற்படாது.
பரிசோதனையின் முடிவு அனைத்து சோதனைக் குழாய்களிலும் ஹீமோலிசிஸின் இருப்பு அல்லது இல்லாமையைக் குறிப்பிடுவதன் மூலம் மதிப்பிடப்படுகிறது. ஹீமோலிசிஸ் முற்றிலும் தாமதமாகும்போது, சோதனைக் குழாயில் உள்ள திரவம் நிறமற்றதாக இருக்கும்போது மற்றும் சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் கீழே குடியேறும்போது எதிர்மறையாக, சிவப்பு இரத்த அணுக்கள் முழுவதுமாக லைஸ் செய்யப்படும்போது, திரவம் தீவிர நிறத்தில் இருக்கும்போது ("வார்னிஷ்") எதிர்வினை நேர்மறையாக கருதப்படுகிறது. இரத்தம்). ஹீமோலிசிஸ் தாமதத்தின் அளவு திரவத்தின் நிறத்தின் தீவிரம் மற்றும் கீழே உள்ள இரத்த சிவப்பணு வண்டலின் அளவைப் பொறுத்து மதிப்பிடப்படுகிறது (++++, +++, ++, +).
ஆன்டிஜெனின் மாற்றங்கள் காட்சி கண்காணிப்புக்கு அணுக முடியாத நிலையில், இரண்டாவது அமைப்பைப் பயன்படுத்துவது அவசியம், இது ஒரு குறிகாட்டியாக செயல்படுகிறது, இது நிரப்பு நிலையை மதிப்பிடுவதற்கும் எதிர்வினையின் முடிவைப் பற்றி ஒரு முடிவுக்கு வருவதற்கும் அனுமதிக்கிறது.
இந்த காட்டி அமைப்பு ஹீமோலிசிஸ் எதிர்வினையின் கூறுகளால் குறிப்பிடப்படுகிறது, இதில் செம்மறி எரித்ரோசைட்டுகள் மற்றும் ஹீமோலிடிக் சீரம் ஆகியவை அடங்கும், இதில் எரித்ரோசைட்டுகளுக்கு (ஹீமோலிசின்கள்) குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள் உள்ளன, ஆனால் நிரப்பு இல்லை. பிரதான RSC வைக்கப்பட்ட ஒரு மணி நேரத்திற்குப் பிறகு இந்த காட்டி அமைப்பு சோதனைக் குழாய்களில் சேர்க்கப்படுகிறது. நிரப்பு நிலைப்படுத்தல் எதிர்வினை நேர்மறையாக இருந்தால், ஒரு ஆன்டிபாடி ஆன்டிஜென் வளாகம் உருவாகிறது, இது உறிஞ்சும் தன்னைத்தானே பூர்த்தி செய்கிறது. ஒரே ஒரு எதிர்வினைக்குத் தேவையான அளவு நிரப்புதல் பயன்படுத்தப்படுவதாலும், எரித்ரோசைட்டுகளின் சிதைவு நிரப்புதலின் முன்னிலையில் மட்டுமே நிகழும் என்பதால், அது “ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி” வளாகத்தில் உறிஞ்சப்படும்போது, ஹீமோலிடிக் (காட்டி) அமைப்பில் எரித்ரோசைட்டுகளின் சிதைவு ஏற்படும். ஏற்படாது. நிரப்பு நிலைப்படுத்தல் எதிர்வினை எதிர்மறையாக இருந்தால், "ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி" வளாகம் உருவாகவில்லை, நிரப்பு இலவசம், மற்றும் ஹீமோலிடிக் அமைப்பு சேர்க்கப்படும் போது, எரித்ரோசைட் சிதைவு ஏற்படுகிறது.
1.4 டிஎன்ஏ ஆய்வுகள். பாலிமரேஸ் சங்கிலி எதிர்வினை (PCR),
இம்யூனோ என்சைம் முறை (எலிசா), ஃப்ளோரசிங் ஆன்டிபாடி முறை (எஃப்எஃப்ஏ)
மரபணு ஆய்வு முறைகள்
மூலக்கூறு உயிரியலின் தீவிர வளர்ச்சி மற்றும் மரபணு ஆராய்ச்சிக்கான சரியான வழிமுறை அடிப்படையை உருவாக்குதல் ஆகியவை மரபணு பொறியியலின் அடிப்படையை உருவாக்கியது. நோயறிதல் துறையில், மரபணு ஆய்வு என்று அழைக்கப்படும் டிஎன்ஏ மற்றும் ஆர்என்ஏவின் குறிப்பிட்ட நியூக்ளியோடைடு வரிசைகளை தீர்மானிக்க ஒரு திசை உருவாகி வேகமாக வளர்ந்து வருகிறது. இத்தகைய நுட்பங்கள், நிரப்பு நியூக்ளியோடைடுகளின் (AT, GC) தொடர்பு காரணமாக நியூக்ளிக் அமிலங்களின் கலப்பின மற்றும் இரட்டை இழை கட்டமைப்புகளை உருவாக்கும் திறனை அடிப்படையாகக் கொண்டவை.
விரும்பிய டிஎன்ஏ (அல்லது ஆர்என்ஏ) வரிசையைத் தீர்மானிக்க, ஒரு குறிப்பிட்ட அடிப்படை வரிசையுடன் கூடிய பாலிநியூக்ளியோடைடு ஆய்வு எனப்படும் சிறப்பு உருவாக்கப்பட்டது. ஒரு சிறப்பு லேபிள் அதன் கலவையில் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டது, இது சிக்கலான உருவாக்கத்தை அடையாளம் காண உதவுகிறது.
மரபணு ஆய்வை நோயெதிர்ப்பு வேதியியல் பகுப்பாய்வு முறையாக வகைப்படுத்த முடியாது என்றாலும், அதன் அடிப்படைக் கொள்கை (நிரப்பு கட்டமைப்புகளின் தொடர்பு) நோயெதிர்ப்பு கண்டறிதலின் காட்டி முறைகளைப் போலவே முறையாக செயல்படுத்தப்படுகிறது. கூடுதலாக, மரபணு ஆய்வு முறைகள் அதன் பினோடைபிக் வெளிப்பாடு (மரபணுவில் உட்பொதிக்கப்பட்ட வைரஸ்கள், "அமைதியான" மரபணுக்கள்) இல்லாத நிலையில் ஒரு தொற்று முகவர் பற்றிய தகவலை நிரப்புவதை சாத்தியமாக்குகிறது.
டிஎன்ஏ பகுப்பாய்வை மேற்கொள்வதற்கு, டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏ ஆய்வு மூலக்கூறுகள் வினைபுரியும் ஒற்றை இழை கட்டமைப்புகளைப் பெறுவதற்காக மாதிரி நீக்கப்பட்டது. ஆய்வுகளைத் தயாரிக்க, இயற்கையான மூலத்திலிருந்து (உதாரணமாக, ஒரு குறிப்பிட்ட நுண்ணுயிரி) தனிமைப்படுத்தப்பட்ட டிஎன்ஏ (அல்லது ஆர்என்ஏ) இன் பல்வேறு பிரிவுகள், பொதுவாக திசையன் பிளாஸ்மிட்களில் மரபணு வரிசைகளின் வடிவத்தில் வழங்கப்படுகின்றன அல்லது வேதியியல் ரீதியாக ஒருங்கிணைக்கப்பட்ட ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. சில சமயங்களில், ஜெனோமிக் டிஎன்ஏ தயாரிப்புகள், துண்டங்களாக நீராற்பகுப்பு செய்யப்படுகின்றன, சில சமயங்களில் ஆர்என்ஏ தயாரிப்புகள் மற்றும் குறிப்பாக பெரும்பாலும் ரைபோசோமால் ஆர்என்ஏ. அதே குறிகாட்டிகள் பல்வேறு வகையான நோயெதிர்ப்பு வேதியியல் பகுப்பாய்வுகளில் லேபிளாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன: கதிரியக்க ஐசோடோப்புகள், ஃப்ளோரசெசின்கள், பயோடோப் (அவிடின்-என்சைம் வளாகத்தின் மேலும் வளர்ச்சியுடன்) போன்றவை.
பகுப்பாய்வு வரிசையானது கிடைக்கக்கூடிய ஆய்வின் பண்புகளால் தீர்மானிக்கப்படுகிறது
தற்போது, தேவையான அனைத்து பொருட்களையும் கொண்ட வணிகக் கருவிகள் அதிகளவில் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
பெரும்பாலான சந்தர்ப்பங்களில், பகுப்பாய்வு செயல்முறையை பின்வரும் நிலைகளாகப் பிரிக்கலாம்: மாதிரி தயாரித்தல் (டிஎன்ஏ பிரித்தெடுத்தல் மற்றும் டினாட்டரேஷன் உட்பட), கேரியரில் மாதிரி பொருத்துதல் (பெரும்பாலும் ஒரு பாலிமர் சவ்வு வடிகட்டி), ப்ரீஹைப்ரிடைசேஷன், கலப்பினமே, கட்டுப்படாத பொருட்களைக் கழுவுதல், கண்டறிதல் . நிலையான டிஎன்ஏ அல்லது ஆர்என்ஏபிரோப் தயாரிப்பு இல்லாத நிலையில், அது முதலில் பெறப்பட்டு லேபிளிடப்படுகிறது.
ஒரு மாதிரியைத் தயாரிக்க, பாக்டீரியாவின் தனிப்பட்ட காலனிகளை அடையாளம் காண அல்லது செல் கலாச்சாரத்தில் வைரஸ்களின் செறிவை அதிகரிக்க சோதனைப் பொருளை பூர்வாங்கமாக "வளர்ப்பது" அவசியமாக இருக்கலாம். மேலும் மேற்கொள்ளப்படுகிறது நேரடி பகுப்பாய்வுஇரத்த சீரம், சிறுநீர் மாதிரிகள், வடிவ கூறுகள்ஒரு தொற்று முகவர் முன்னிலையில் இரத்தம் அல்லது முழு இரத்தம். செல்லுலார் கட்டமைப்புகளிலிருந்து நியூக்ளிக் அமிலங்களை வெளியிட, செல் சிதைவு மேற்கொள்ளப்படுகிறது, மேலும் சில சமயங்களில் டிஎன்ஏ தயாரிப்பு பினாலைப் பயன்படுத்தி சுத்திகரிக்கப்படுகிறது.
டிஎன்ஏவின் டினாட்டரேஷன், அதாவது ஒற்றை இழை வடிவத்திற்கு மாறுவது, காரத்துடன் சிகிச்சையளிக்கப்படும் போது ஏற்படுகிறது. நியூக்ளிக் அமில மாதிரியானது பின்னர் ஒரு ஆதரவு, நைட்ரோசெல்லுலோஸ் அல்லது நைலான் சவ்வு, பொதுவாக வெற்றிடத்தில் 80 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 10 நிமிடங்கள் முதல் 4 மணி நேரம் வரை அடைகாப்பதன் மூலம் சரி செய்யப்படுகிறது. மேலும், ப்ரீஹைப்ரிடைசேஷன் செயல்பாட்டில், சவ்வுடனான ஆய்வின் குறிப்பிடப்படாத தொடர்புகளைக் குறைக்க இலவச பிணைப்பு தளங்களை செயலிழக்கச் செய்வது அடையப்படுகிறது. மாதிரியில் உள்ள டிஎன்ஏவின் செறிவு, பயன்படுத்தப்பட்ட ஆய்வின் செறிவு மற்றும் அதன் அளவு ஆகியவற்றைப் பொறுத்து கலப்பின செயல்முறை 2 முதல் 20 மணிநேரம் வரை ஆகும்.
கலப்பினமாக்கல் முடிந்ததும், வரம்பற்ற பொருட்கள் கழுவப்பட்ட பிறகு, உருவாக்கப்பட்ட வளாகம் கண்டறியப்படுகிறது. ஆய்வில் ஒரு கதிரியக்க லேபிள் இருந்தால், எதிர்வினையை நிரூபிக்க, சவ்வு புகைப்படத் திரைப்படத்திற்கு (ஆட்டோரேடியோகிராபி) வெளிப்படும். மற்ற லேபிள்களுக்கு, தொடர்புடைய நடைமுறைகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
கதிரியக்கமற்ற (குளிர் என்று அழைக்கப்படும்) ஆய்வுகளைப் பெறுவது மிகவும் நம்பிக்கைக்குரியது. அதே அடிப்படையில், ஒரு கலப்பின நுட்பம் உருவாக்கப்படுகிறது, இது பிரிவு தயாரிப்புகள் மற்றும் திசு பஞ்சர்களில் ஒரு நோய்க்கிருமி இருப்பதை நிறுவுவதை சாத்தியமாக்குகிறது, இது நோய்க்குறியியல் பகுப்பாய்வில் (சிட்டு கலப்பினத்தில்) குறிப்பாக முக்கியமானது.
மரபணு ஆய்வு முறைகளின் வளர்ச்சியில் குறிப்பிடத்தக்க படியாக பாலிமரேஸ் பெருக்க எதிர்வினை (PCR) பயன்படுத்தப்பட்டது. இந்த அணுகுமுறையானது ஒரு குறிப்பிட்ட (முன் அறியப்பட்ட) டிஎன்ஏ வரிசையின் செறிவை ஒரு மாதிரியில் பல பிரதிகளை விட்ரோவில் ஒருங்கிணைத்து அதிகரிப்பதை சாத்தியமாக்குகிறது. எதிர்வினையைச் செயல்படுத்த, டிஎன்ஏ பாலிமரேஸ் என்சைம் தயாரிப்பு, தொகுப்புக்கான அதிகப்படியான டிஆக்சிநியூக்ளியோடைடுகள் மற்றும் ப்ரைமர்கள் எனப்படும் டிஎன்ஏ மாதிரிகள் ஆய்வின் கீழ் சேர்க்கப்படுகின்றன - இரண்டு வகையான ஒலிகோநியூக்ளியோடைடுகள் 2025 தளங்களின் முனையப் பிரிவுகளுடன் தொடர்புடையவை. ஆர்வத்தின் டிஎன்ஏ வரிசை. ப்ரைமர்களில் ஒன்று வாசிப்பு திசை 53 இல் குறியீட்டு டிஎன்ஏ இழையின் வாசிப்புப் பகுதியின் தொடக்கத்தின் நகலாக இருக்க வேண்டும், மேலும் இரண்டாவது குறியீட்டு அல்லாத இழையின் எதிர் முனையின் நகலாக இருக்க வேண்டும். பின்னர், பாலிமரேஸ் எதிர்வினையின் ஒவ்வொரு சுழற்சியிலும், டிஎன்ஏ பிரதிகளின் எண்ணிக்கை இரட்டிப்பாகும்.
ப்ரைமர் பைண்டிங்கை அடைய, 94 டிகிரி செல்சியஸ் டிஎன்ஏ டினாட்டரேஷன் (உருகுதல்) அவசியம், அதைத் தொடர்ந்து கலவையை 40-55 டிகிரி செல்சியஸ் வரை கொண்டு வர வேண்டும்.
எதிர்வினையைச் செயல்படுத்த, நிரல்படுத்தக்கூடிய மைக்ரோசாம்பிள் இன்குபேட்டர்கள் எதிர்வினையின் ஒவ்வொரு கட்டத்திற்கும் உகந்த வெப்பநிலையில் ஏற்படும் மாற்றங்களுக்கு இடையில் எளிதாக மாற்றுவதற்கு வடிவமைக்கப்பட்டுள்ளன.
பெருக்க வினையானது மரபணு ஆய்வின் போது பகுப்பாய்வின் உணர்திறனை கணிசமாக அதிகரிக்கலாம், இது தொற்று முகவரின் குறைந்த செறிவுகளில் குறிப்பாக முக்கியமானது.
பெருக்கத்துடன் கூடிய மரபணு ஆய்வின் குறிப்பிடத்தக்க நன்மைகளில் ஒன்று, நுண்ணோக்கி அளவு நோயியல் பொருள்களைப் படிக்கும் திறன் ஆகும்.
முறையின் மற்றொரு அம்சம், தொற்றுப் பொருட்களின் பகுப்பாய்விற்கு மிகவும் முக்கியமானது, மறைக்கப்பட்ட (அமைதியான) மரபணுக்களை அடையாளம் காணும் திறன் ஆகும். மரபணு ஆய்வின் பயன்பாட்டுடன் தொடர்புடைய முறைகள், தொற்று நோய்களைக் கண்டறியும் நடைமுறையில் நிச்சயமாக மிகவும் பரவலாக அறிமுகப்படுத்தப்படும், ஏனெனில் அவை எளிமையானதாகவும் மலிவானதாகவும் இருக்கும்.
ELISA மற்றும் RIF முறைகள் பெரும்பாலும் தரமானவை அல்லது அரை அளவு இயல்புடையவை. கூறுகளின் மிகக் குறைந்த செறிவுகளில், ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி வளாகத்தின் உருவாக்கம் பார்வை அல்லது எளிய கருவி மூலம் கண்டறிய முடியாது. ஆரம்பக் கூறுகளில் ஒன்றான ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடியில் ஒரு லேபிள் அறிமுகப்படுத்தப்பட்டால், இதுபோன்ற சந்தர்ப்பங்களில் ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி வளாகத்தின் அறிகுறி மேற்கொள்ளப்படலாம், இது பகுப்பாய்வின் தீர்மானிக்கப்பட்ட செறிவுடன் ஒப்பிடக்கூடிய செறிவுகளில் எளிதாகக் கண்டறியப்படலாம்.
கதிரியக்க ஐசோடோப்புகள் (உதாரணமாக, 125I), ஃப்ளோரசன்ட் பொருட்கள் மற்றும் என்சைம்கள் லேபிள்களாகப் பயன்படுத்தப்படலாம்.
பயன்படுத்தப்படும் லேபிளைப் பொறுத்து, ரேடியோ இம்யூன் (RIA), ஃப்ளோரசன்ட் இம்யூன் (FIA), என்சைம்-இணைக்கப்பட்ட இம்யூனோசார்பன்ட் அசே (ELISA) பகுப்பாய்வு முறைகள் போன்றவை உள்ளன. கடந்த ஆண்டுகள் ELISA பரவலான நடைமுறை பயன்பாட்டைப் பெற்றுள்ளது, இது சாத்தியம் காரணமாகும் அளவு தீர்மானங்கள், அதிக உணர்திறன், கணக்கியலின் தனித்தன்மை மற்றும் ஆட்டோமேஷன்.
என்சைம் இம்யூனோஅசே முறைகள் என்பது ஒரு நொதியால் பிளவுபட்டு நிறத்தை உருவாக்கும் அடி மூலக்கூறைப் பயன்படுத்தி ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தைக் கண்டறிய அனுமதிக்கும் முறைகளின் குழுவாகும்.
ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி எதிர்வினையின் கூறுகளை அளவிடப்பட்ட நொதி லேபிளுடன் இணைப்பதே முறையின் சாராம்சம். வினைபுரியும் ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடி ஒரு நொதியுடன் பெயரிடப்பட்டுள்ளது. என்சைமின் செயல்பாட்டின் கீழ் அடி மூலக்கூறின் மாற்றத்தின் அடிப்படையில், ஆன்டிஜென் ஆன்டிபாடி எதிர்வினையின் ஊடாடும் கூறுகளின் அளவை ஒருவர் தீர்மானிக்க முடியும். என்சைம் உள்ளே இந்த வழக்கில்குறிப்பானாக செயல்படுகிறது நோய் எதிர்ப்பு எதிர்வினைமற்றும் நீங்கள் அதை பார்வை அல்லது கருவியாக கண்காணிக்க அனுமதிக்கிறது.
நொதிகள் மிகவும் வசதியான குறிச்சொற்கள், ஏனெனில் அவற்றின் வினையூக்கி பண்புகள் பெருக்கிகளாக செயல்பட அனுமதிக்கின்றன, ஏனெனில் ஒரு நொதி மூலக்கூறு நிமிடத்திற்கு 1 × 105 க்கும் மேற்பட்ட வினையூக்க எதிர்வினை உற்பத்தியின் மூலக்கூறுகளை உருவாக்குவதை ஊக்குவிக்கும். ஒரு நொதியைத் தேர்ந்தெடுப்பது அவசியம், அது அதன் வினையூக்க செயல்பாட்டை நீண்ட காலத்திற்குத் தக்க வைத்துக் கொள்கிறது, ஆன்டிஜென் அல்லது ஆன்டிபாடியுடன் பிணைக்கும்போது அதை இழக்காது, மேலும் அடி மூலக்கூறு தொடர்பாக அதிக விவரக்குறிப்பு உள்ளது.
என்சைம்-லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிபாடிகள் அல்லது ஆன்டிஜென்கள் மற்றும் கான்ஜுகேட்களை உருவாக்குவதற்கான முக்கிய முறைகள்: இரசாயன, நோயெதிர்ப்பு மற்றும் மரபணு பொறியியல். ELISA க்கு பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படும் நொதிகள் குதிரைவாலி பெராக்ஸிடேஸ், அல்கலைன் பாஸ்பேடேஸ், கேலக்டோசிடேஸ் போன்றவை.
எதிர்வினையின் காட்சி மற்றும் கருவி பதிவின் நோக்கத்திற்காக ஆன்டிஜென்-ஆன்டிபாடி வளாகத்தில் என்சைம் செயல்பாட்டைக் கண்டறிய, குரோமோஜெனிக் அடி மூலக்கூறுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன, இதன் தீர்வுகள், ஆரம்பத்தில் நிறமற்றவை, நொதி எதிர்வினையின் போது நிறத்தைப் பெறுகின்றன, அதன் தீவிரம் அளவுக்கு விகிதாசாரமாகும். நொதியின். எனவே, திட-நிலை ELISA இல் குதிரைவாலி பெராக்சிடேஸின் செயல்பாட்டைக் கண்டறிய, 5-அமினோசாலிசிலிக் அமிலம், ஒரு தீவிர பழுப்பு நிறத்தை உருவாக்குகிறது, மற்றும் ஆரஞ்சு-மஞ்சள் நிறத்தை உருவாக்கும் ஆர்த்தோ-ஃபெனிலெனெடியமைன் ஆகியவை அடி மூலக்கூறாகப் பயன்படுத்தப்படுகின்றன. அல்கலைன் பாஸ்பேடேஸ் மற்றும் β-கலாடோசிடேஸின் செயல்பாட்டைக் கண்டறிய, முறையே நைட்ரோபெனில்பாஸ்பேட் மற்றும் நைட்ரோபெனில்கலக்டோசைடுகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
ஒரு வண்ணமயமான தயாரிப்பு உருவாவதில் எதிர்வினையின் விளைவு பார்வைக்கு தீர்மானிக்கப்படுகிறது அல்லது ஒரு குறிப்பிட்ட அலைநீளத்துடன் ஒளியின் உறிஞ்சுதலை அளவிடும் ஸ்பெக்ட்ரோஃபோட்டோமீட்டரைப் பயன்படுத்துகிறது.
ELISA செய்ய பல விருப்பங்கள் உள்ளன. ஒரே மாதிரியான மற்றும் பன்முகத்தன்மை விருப்பங்கள் உள்ளன.
உற்பத்தி முறையின் படி, போட்டி மற்றும் போட்டியற்ற ELISA முறைகள் வேறுபடுகின்றன. முதல் கட்டத்தில் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட கலவை மற்றும் அதனுடன் தொடர்புடைய பிணைப்பு மையங்கள் (ஆன்டிஜென் மற்றும் குறிப்பிட்ட ஆன்டிபாடிகள்) மட்டுமே கணினியில் இருந்தால், முறை போட்டியற்றது. முதல் கட்டத்தில் பகுப்பாய்வு செய்யப்பட்ட கலவை (ஆன்டிஜென்) மற்றும் அதன் அனலாக் (என்சைம்-லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்) இருந்தால், பற்றாக்குறை உள்ள குறிப்பிட்ட பிணைப்பு மையங்களுடன் (ஆன்டிபாடிகள்) பிணைக்க ஒருவருக்கொருவர் போட்டியிடும், பின்னர் முறை போட்டித்தன்மை வாய்ந்தது. இந்த வழக்கில், தீர்வு எவ்வளவு சோதனை ஆன்டிஜெனைக் கொண்டுள்ளது, பிணைக்கப்பட்ட லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிஜென்களின் எண்ணிக்கை குறைவாக இருக்கும்.
ஃப்ளூரெஸ்ஸிங் ஆன்டிபாடிகளின் முறை (MFA) அல்லது இம்யூனோஃப்ளூரெசன்ஸ் ரியாக்ஷன் (RIF)
இம்யூனோஃப்ளோரெசென்ஸ் முறை என்பது சோதனைப் பொருளில் அறியப்படாத நுண்ணுயிரிகளை விரைவாகக் கண்டறிந்து அடையாளம் காண்பதற்கான தேர்வு முறையாகும்.
Ag + AT + எலக்ட்ரோலைட் = UV கதிர்களில் ஒளிரும் சிக்கலானது
ஃப்ளோரோக்ரோம் என்று பெயரிடப்பட்ட நுண்ணுயிர் சீரம்
பெரும்பாலும் பயன்படுத்தப்படும் சாயம் ஃப்ளோரசெசின் ஐசோதியோசயனேட் FITC ஆகும்
இந்த முறையைப் படிக்கும் போது, ஒரு ஒளிரும் நுண்ணோக்கி பயன்படுத்தப்படுகிறது.
ஸ்டேஜிங் RIF
30 μl FITC-லேபிளிடப்பட்ட ஆன்டிபாடி தீர்வு ஸ்மியர் மீது பயன்படுத்தப்படுகிறது.
கண்ணாடியை ஈரமான அறையில் வைக்கவும், அறை வெப்பநிலையில் 20-25 நிமிடங்கள் அல்லது 37 டிகிரி செல்சியஸ் வெப்பநிலையில் 15 நிமிடங்களுக்கு ஒரு தெர்மோஸ்டாட்டில் வைக்கவும்.
இயங்கும் இயந்திரத்தில் கண்ணாடியைக் கழுவவும் குழாய் நீர் 2 நிமிடங்கள், காய்ச்சி வடிகட்டிய நீர் மற்றும் காற்று உலர் கொண்டு துவைக்க.
உலர்ந்த ஸ்மியர் மீது பெருகிவரும் திரவத்தின் ஒரு துளி பயன்படுத்தப்படுகிறது, ஸ்மியர் ஒரு கவர்ஸ்லிப்பால் மூடப்பட்டிருக்கும் மற்றும் ஒரு ஒளிரும் நுண்ணோக்கி அல்லது ஒரு வழக்கமான ஆப்டிகல் நுண்ணோக்கிக்கு ஒரு ஃப்ளோரசன்ட் இணைப்பைப் பயன்படுத்தி மைக்ரோஸ்கோப் செய்யப்படுகிறது.
