تفاعل التراص التشخيصي. رد فعل التراص

يعتمد تفاعل التراص على التفاعل المحدد للأجسام المضادة (الراصات) مع الخلايا الميكروبية الكاملة أو الخلايا الأخرى. ونتيجة لهذا التفاعل، تتشكل جزيئات متكتلة تترسب (تراص). يمكن للبكتيريا والطفيليات والفطريات والخميرة والريكتسيا وخلايا الدم الحمراء والخلايا الأخرى، الحية والمقتولة، أن تشارك في تفاعل التراص. يحدث التفاعل على مرحلتين: الأولى عبارة عن مزيج محدد من المستضد والجسم المضاد، والثانية غير محددة، أي تكوين تراص مرئي. يحدث ترسيب الراصات في وجود الشوارد الكهربائية، مثل كلوريد الصوديوم. تبقى الكائنات الحية الدقيقة الموجودة في المادة المتراصة على قيد الحياة، ولكنها تفقد قدرتها على الحركة.

يستخدم تفاعل التراص على نطاق واسع في التشخيص المصلي للأمراض المعدية وتحديد التركيب المستضدي للميكروبات المعزولة. لتحديد التركيب المستضدي للعامل الممرض المعزول من جسم المريض أو الناقل، يتم استخدام مصل مناعي محدد، يتم الحصول عليه عن طريق تحصين الحيوانات (الأرنب، الحمير، الأغنام) مع بعض الكائنات الحية الدقيقة. يتم التعرف على الميكروب من خلال تفاعل تراص على الزجاج باستخدام أمصال ممتزة أو أحادية المستقبلة أو في أنابيب اختبار ذات أمصال تراص محددة. تحتوي الأمصال الممتزة على أجسام مضادة فقط لمستضدات محددة لميكروب معين، وتحتوي الأمصال أحادية المستقبلة على أجسام مضادة لمستضد واحد محدد فقط من العامل الممرض.

تحتوي أمصال الأنواع على أجسام مضادة لجميع المستضدات الخاصة بميكروب معين.

ما إذا كانت ثقافة الكائنات الحية الدقيقة المعزولة تنتمي إليها هذا النوعيتم تحديده عن طريق التراص مع مصل معروف لعيار الجسم المضاد الموضح على ملصق أمبولة المصل. يعتبر عيار الجسم المضاد للمصل هو التخفيف الأخير، حيث لا يزال يتم ملاحظة تراص ثقافة الميكروبات المستخدمة لتحصين الحيوان. عادةً ما يتم استخدام الأمصال الممتزة والمستقبلة الأحادية غير مخففة في تفاعل التراص الزجاجي.

عند تحديد وجود الأجسام المضادة في مصل دم المريض، يتم تخفيفها بمحلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بدءاً من تخفيف 1: 50 إلى 1: 800 أو أكثر. يضاف معلق من الميكروبات الحية أو المقتولة إلى كل تخفيف. تسمى المستحضرات التي تحتوي على ميكروبات تم قتلها بالحرارة أو الفورمالديهايد بالتشخيصات. تحتوي نتائج التشخيص التي يتم الحصول عليها عن طريق تسخين مزارع الكائنات الحية الدقيقة على مستضدات جسدية فقط. عند استخدام الفورمالديهايد فقط، تحتفظ الميكروبات بمستضداتها السوطية.

في حالة وجود أجسام مضادة في دم المريض، فإن الاختبار التشخيصي المأخوذ في التفاعل يلتصق ببعضه البعض ويتشكل راسب (تراص) على أنبوبي اختبار. وفي هذه الحالة تعتبر نتائج تفاعل التراص إيجابية. في أنبوب التحكم، الذي يضاف إليه محلول كلوريد الصوديوم المتساوي التوتر والتشخيص، يجب أن يكون تعليق الميكروبات متجانسًا (تفاعل تراص سلبي).

يتم أخذ نتائج تفاعل التراص في بعض الأمراض، مثل داء البريميات، في الاعتبار فقط مجهريا في مجال رؤية مظلم للمجهر (التراص الدقيق). لإجراء التشخيص المصلي للمرض، تأخذ بعين الاعتبار مرض تشخيصي. وهو يتوافق عادةً مع تخفيف المصل بنسبة 1:100 أو 1:200.

يمكن الكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض باستخدام تفاعل التراص في حالات حمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت)، والتولاريميا، وما إلى ذلك.
رد فعل كاستيلاني. بالنسبة للبعض أمراض معديةأو التحصين بالكائنات الحية الدقيقة التي تحتوي على مستضدات جماعية، في مصل الدم، بالإضافة إلى الأجسام المضادة الخاصة بنوع معين، تظهر أيضًا الأجسام المضادة الجماعية. في هذه الحالة، سيتم تراص الأنواع البكتيرية ذات الصلة بواسطة الأمصال الناتجة.

اقترح كاستيلاني طريقة لامتصاص الأجسام المضادة الجماعية من الأمصال المناعية، على أساس إزالتها بمساعدة الكائنات الحية الدقيقة من الأنواع ذات الصلة التي لديها مستضدات جماعية ولكنها تفتقر إلى مستضدات محددة. إن ثقافة هذه الكائنات الحية الدقيقة المضافة إلى المصل تمتص الأجسام المضادة للمجموعة غير المحددة، وبعد إزالة مجمع الأجسام المضادة للمستضد عن طريق الطرد المركزي، تبقى الجلوبيولينات المناعية المحددة فقط في المصل. يمكن استخدام الأمصال المعالجة وفقًا لطريقة كاستيلاني في تفاعل التراص باعتباره محددًا للغاية.

التراص هو لصق البكتيريا نتيجة تفاعل ATs معينة معها. لتنفيذ التهاب المفاصل الروماتويدي، هناك حاجة إلى ثلاثة مكونات: 1) AG (الراصات)؛ 2) ال (راصة) ؛ 3) محلول الإلكتروليت (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر). فقط المستضدات الجسيمية (البكتيريا، وخلايا الدم الحمراء، وجزيئات اللاتكس المحملة بالمستضد) تشارك في تفاعل التراص.

رد فعل التراص على الزجاج. ضع قطرة على شريحة زجاجية خالية من الشحوم باستخدام ماصة. مصل التشخيص(تخفيف المصل 1:10 - 1:20). باستخدام الحلقة البكتريولوجية، يتم أخذ مزرعة نقية للكائن الدقيق قيد الدراسة من سطح الأجار المائل، ونقلها إلى قطرة من المصل وخلطها. تؤخذ نتيجة التفاعل بعين الاعتبار بالعين المجردة بعد 3-5 دقائق. إذا كان التفاعل إيجابيا، يتم ملاحظة ظهور رقائق (كبيرة أو صغيرة) في قطرة من المصل، ويمكن رؤيتها بوضوح على خلفية داكنة عند رج الشريحة. في حالة حدوث تفاعل سلبي، يظل السائل غائما بشكل موحد.

رد فعل التراص في أنابيب الاختبار. يضاف 1 مل من المحلول الفسيولوجي إلى صف من أنابيب الاختبار. تتم إضافة كمية متساوية من مصل الدم الذي يتم اختباره إلى أنبوب الاختبار الأول. يتم تحضير التخفيفات التسلسلية ذات الشقين من المصل (معايرة المصل)، وبعد ذلك يتم إضافة قطرتين من معلق البكتيريا المعطلة (التشخيص) إلى كل أنبوب اختبار. يتم وضع الأنابيب في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. يستمر التفاعل بتكوين رقائق صغيرة غير مرئية للعين المجردة، لذلك يتم تسجيل النتائج تحت تكبير طفيف في جهاز خاص - منظار الراصات. يتم أخذ شدة التراص في الاعتبار وفقًا لنظام "أربعة زائد": تراص كامل - 4+، تراص جزئي - 3+ أو 2+، نتيجة مشكوك فيها - +. يتم أخذ التخفيف الأخير الذي يتم فيه ملاحظة تراص 2+ على أنه عيار الجسم المضاد في مصل الاختبار.

يتم إجراء تفاعل تراص في أنابيب الاختبار (تفاعل تراص واسع النطاق) لتحديد عيار الأجسام المضادة للعوامل المسببة لحمى التيفوئيد وحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت)، والتيفوس (تفاعل ويجل).

التلصيق (من اللاتينية agglutinatio - الإلتصاق) هو لصق (اتصال) الجسيمات الجسيمية الحاملة للمستضد (الخلايا الكاملة، جزيئات اللاتكس، وما إلى ذلك) مع جزيئات من أجسام مضادة محددة في وجود إلكتروليتات، والتي تنتهي بتكوين رقائق أو رواسب (تراص) يمكن رؤيته بالعين المجردة. تعتمد طبيعة الرواسب على طبيعة المستضد: تنتج البكتيريا السوطية رواسب خشنة، والبكتيريا السوطية وغير المحفظة تنتج رواسب دقيقة الحبيبات، وتنتج البكتيريا المحفظة رواسب خيطية. يتم التمييز بين التراص المباشر، حيث تشارك المستضدات الخاصة بالخلية البكتيرية أو أي خلية أخرى، مثل كريات الدم الحمراء، بشكل مباشر في التفاعل مع أجسام مضادة محددة؛ وغير المباشرة، أو السلبية، حيث تكون الخلايا البكتيرية أو كريات الدم الحمراء، أو جزيئات اللاتكس حاملة ليست خاصة بها، ولكن لمستضدات أجنبية (أو أجسام مضادة) ممتصة عليها لتحديد الأجسام المضادة (أو المستضدات) الخاصة بها. يتضمن تفاعل التراص بشكل أساسي أجسامًا مضادة تنتمي إلى فئتي IgG وIgM. وتحدث على مرحلتين: أولا، يحدث تفاعل محدد للمركز النشط للأجسام المضادة مع محدد المستضد، ويمكن أن تحدث هذه المرحلة في غياب الإلكتروليتات ولا تكون مصحوبة تغييرات مرئيةنظام رد الفعل. بالنسبة للمرحلة الثانية - تكوين الراصات - من الضروري وجود الشوارد، مما يقلل الشحنة الكهربائيةمجمعات المستضد + الأجسام المضادة وتسريع عملية لصقها. تنتهي هذه المرحلة بتكوين مادة تراصية.

يتم إجراء تفاعلات التراص إما على ألواح زجاجية أو من الورق المقوى الملساء، أو في أنابيب تراص معقمة. عادة ما تستخدم تفاعلات التراص (المباشرة والسلبية) على الزجاج طريقة معجلةالكشف عن أجسام مضادة محددة في مصل المريض (على سبيل المثال، داء البروسيلات) أو للتعرف المصلي على العامل الممرض. في الحالة الأخيرة، عادة ما يتم استخدام الأمصال التشخيصية النقية (الممتصة) التي تحتوي فقط على الأجسام المضادة أحادية المستقبل أو مجموعة منها لمستضدات مختلفة. إن الميزة التي لا شك فيها لتفاعل التراص على الزجاج هي بساطة تنفيذه وحقيقة أنه يستغرق عدة دقائق أو حتى ثواني، حيث يتم استخدام كلا المكونين في شكل مركز. ومع ذلك، فهو ذو قيمة نوعية فقط وأقل حساسية من أنبوب الاختبار. يعطي تفاعل التراص الشامل في أنابيب الاختبار نتائج أكثر دقة، لأنه يسمح لك بتحديد المحتوى الكمي للأجسام المضادة في المصل (تحديد عيارها)، وإذا لزم الأمر، تسجيل حقيقة الزيادة في عيار الأجسام المضادة، والتي لها قيمة تشخيصية . لإعداد التفاعل، يتم إضافة مصل مخفف بطريقة معينة بمحلول كلوريد الصوديوم 0.85% وحجم مساوٍ (عادة 0.5 مل) من معلق تشخيصي قياسي (أو مزرعة اختبار) يحتوي على مليار بكتيريا في 1 مل إلى أنابيب التراص. يتم تسجيل نتائج تفاعل التراص أولاً بعد ساعتين من حضانة الأنابيب عند 37 درجة مئوية وأخيراً بعد 20-24 ساعة وفقاً لمعيارين: وجود وحجم الراسب ودرجة شفافية السائل الطافي. يتم التقييم وفق النظام الرباعي. يصاحب التفاعل بالضرورة التحكم في المصل والمستضد. في الحالات التي يتم فيها إجراء تفاعل التراص التفصيلي في أنبوب اختبار للتعرف المصلي على العامل الممرض، يكون له قيمة تشخيصية إذا تم تقييم التفاعل على أنه إيجابي عندما يتم تخفيف المصل التشخيصي إلى نصف عياره على الأقل.

يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه عند خلط محاليل المستضدات والأجسام المضادة المتماثلة، لا يتم دائمًا ملاحظة المظاهر المرئية لتفاعل التراص. يتشكل الراسب فقط عند نسب مثالية معينة لكلا مكونات التفاعل. خارج هذه الحدود، مع وجود فائض كبير في المستضد أو الأجسام المضادة، لا يلاحظ أي تفاعل. وتسمى هذه الظاهرة "ظاهرة البروزون". ويلاحظ في كل من تفاعل التراص وفي تفاعل الهطول. يتم تفسير ظهور البروزون في التفاعلات المناعية من خلال حقيقة أن المستضدات المشاركة فيها، كقاعدة عامة، تكون متعددة المحددات، والجزيئات الأجسام المضادة IgGلديها مركزين نشطين. مع وجود فائض من الأجسام المضادة، يتم تغطية سطح كل جسيم مستضد بجزيئات الجسم المضاد بحيث لا تبقى مجموعات محددة حرة، وبالتالي لا يمكن للمركز النشط الثاني غير المنضم للأجسام المضادة أن يتفاعل مع جسيم مستضد آخر ويربطها ببعضها البعض. يتم أيضًا قمع تكوين تراص أو راسب مرئي عندما يكون هناك فائض من المستضد، عندما لا يبقى مركز نشط حر واحد للأجسام المضادة، وبالتالي لم يعد من الممكن تكبير مستضد + جسم مضاد + مجمعات مستضد.

خيارات لتفاعلات التراص المتسارعة. رد فعل التراص الدموي السلبيومتغيراته

يتضمن تفاعل التراص الكلاسيكي استخدام المستضدات الجسيمية. ومع ذلك، قد تشارك أيضًا المستضدات القابلة للذوبان. ولجعل ذلك ممكنًا، يتم امتصاص هذه المستضدات على جزيئات خاملة مناعيًا. يمكن استخدام جزيئات اللاتكس أو البنتونيت كحامل، ولكن حاليًا يتم استخدام كريات الدم الحمراء الحيوانية أو البشرية في أغلب الأحيان، مما يحسن خصائصها الممتصة عن طريق معالجتها بمحلول التانين أو الفورمالين أو البنزيدين. تسمى خلايا الدم الحمراء التي امتصت مستضدًا على نفسها بأنها حساسة لهذا المستضد و رد الفعل المناعيالذي تشارك فيه هو تفاعل التراص الدموي غير المباشر أو السلبي (IRHA، أو RPHA)، حيث تشارك خلايا الدم الحمراء فيه بشكل سلبي.

يتم وضع RPGA في ألواح خاصة من البوليسترين مع فتحات ذات قاع نصف كروي. عند استخدامه ل التشخيص المصليفي هذه الآبار، يتم تحضير تخفيفات مزدوجة من مصل الاختبار في محلول فسيولوجي، ثم يضاف إليها معلق من كريات الدم الحمراء الحساسة كعامل تشخيصي. يتم تسجيل النتائج بعد ساعتين من الحضانة عند 37 درجة مئوية باستخدام النظام الرباعي. مع رد فعل إيجابي، تستقر خلايا الدم الحمراء المتراصة في قاع الحفرة وتغطيها بالتساوي على شكل مظلة مقلوبة. في رد فعل سلبيكما تستقر خلايا الدم الحمراء، ويصبح السائل شفافًا، وتبدو الرواسب وكأنها "قرص" صغير في وسط الحفرة. يعتبر عيار المصل في RPHA هو التخفيف الأخير، والذي لا يزال يعطي تراصًا دمويًا واضحًا دون وجود علامات ملحوظة على وجود "القرص".

يمكن أيضًا استخدام RPGA كوسيلة سريعة للتشخيص البكتريولوجي للكشف مباشرة في مادة الاختبار عن البكتيريا والفيروسات والسموم غير المعروفة، على سبيل المثال، مسببات أمراض الطاعون والسموم المعوية للمكورات العنقودية، وما إلى ذلك. مع هذا الإصدار من RPGA، تُعرف كريات الدم الحمراء الممتصة بخصائصها. يتم استخدام الخصوصية كعنصر معروف في الأجسام المضادة للتفاعل - الأجسام المضادة لتشخيص كريات الدم الحمراء. إذا كانت مادة الاختبار تحتوي على كمية كافية من مستضد معروف، فستكون مادة RPGA إيجابية.

خيارات استخدام RPHA هي: تفاعل تحييد المستضد (RNAg)، تفاعل تحييد الأجسام المضادة (RNAb)، تفاعل تثبيط التراص الدموي السلبي (PHA). لهذه التفاعلات، يتم استخدام تشخيص كريات الدم الحمراء المستضد والأجسام المضادة. يمكن استخدام تفاعلين أحادي الاتجاه يتم التحكم فيهما بشكل متبادل في وقت واحد، على سبيل المثال، RPHA مع تشخيص المستضد وRNAg مع تشخيص كريات الدم الحمراء المضاد.

يتكون تفاعل تحييد الأجسام المضادة (RNAb) من خلط معلق يحتوي على المستضد المطلوب مع مصل مناعي محدد يحتوي على أجسام مضادة معروفة بأحجام مناسبة وحضانة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين. بعد ذلك، يتم إضافة تشخيص كريات الدم الحمراء المستضدية. يرج الخليط ويترك في درجة حرارة الغرفة. تؤخذ النتائج في الاعتبار بعد 3-4 ساعات وأخيراً بعد 18-24 ساعة، فإذا كانت مادة الاختبار تحتوي على مستضد فإنها سترتبط بالأجسام المضادة (تحييدها)، وبالتالي لن يحدث التراص الدموي.

يتم إجراء تفاعل تحييد المستضد (RNAg) باستخدام نفس المبدأ. فقط في هذه الحالة يتم اكتشاف الأجسام المضادة في مادة الاختبار. سوف يرتبط مستضد محدد يضاف إلى مادة الاختبار هذه بالأجسام المضادة الموجودة فيها، أي أنه سيتم تحييد المستضد بواسطة الأجسام المضادة، وبالتالي لن يحدث التراص الدموي عند إضافة جسم مضاد لتشخيص كريات الدم الحمراء.

رد فعل التخثر. إنه أحد الخيارات لتفاعل التراص السلبي، أي المتسارع على الزجاج بوساطة الخلايا الحاملة للأجسام المضادة. يعتمد رد الفعل هذا على خاصية فريدة المكورات العنقودية الذهبية، الذي يحتوي على البروتين A في جداره الخلوي، يرتبط بأجزاء Fc من IgG وIgM. في هذه الحالة، تبقى المراكز النشطة للأجسام المضادة حرة ويمكن أن تتفاعل مع محددات محددة للمستضدات. يتم وضع قطرة من معلق 2% من المكورات العنقودية، المحسسة بالأجسام المضادة المناسبة، على شريحة زجاجية، وتضاف قطرة من معلق البكتيريا قيد الدراسة. إذا تطابق المستضد مع الأجسام المضادة، يحدث تراص واضح للمكورات العنقودية المحملة بالأجسام المضادة خلال 30-60 ثانية.

تفاعل تراص اللاتكس (LAR). حامل الأجسام المضادة في هذا النظام التشخيصي عبارة عن جزيئات لاتكس قياسية صغيرة. يتم إجراء التفاعل باستخدام الطريقة الدقيقة في الآبار الموجودة على الزجاج. الشرط الرئيسي للتدريج الناجح للـ PAH هو الالتزام الصارم بالنسب الكمية لمكونات النظام: تتم إضافة 10 ميكرولتر من مستحضر اللاتكس الحساس بالأجسام المضادة إلى 50 ميكرولتر من مادة الاختبار. يتم التحكم في خصوصية PAH باستخدام ثلاثة اختبارات تحكم موجودة في أنظمة الاختبار التجارية: معروفة رد فعل إيجابيمن الواضح أن رد الفعل السلبي ومراقبة جودة تعليق اللاتكس لمادة اللاتكس غير الحساسة للـ PAH (التي لا تحمل أجسامًا مضادة) مع مادة الاختبار. في بلدنا، تُستخدم مادة اللاتكس أحادية البوليسترين ذات أقطار جسيمات مختلفة (0.3؛ 0.66؛ 0.75؛ 0.8 ميكرومتر) كحاملات لأجسام مضادة محددة. يستخدم LAG للكشف السريع عن الكائنات الحية الدقيقة أو مستضداتها في مادة الاختبار.

الكشف المناعي المغناطيسي للمستضدات. يرتبط أحد خيارات تفاعل التراص المتسارع على الزجاج باستخدام جزيئات البوليمر فائقة المغناطيسية المطلية بأجسام مضادة محددة. يرتبط أحد هذه الجسيمات بما يصل إلى 107-108 خلية من الكائنات الحية الدقيقة، بسبب الحساسية هذه الطريقةيصل إلى 5 CFU/ml. يمكن استخدام الكشف المناعي المغناطيسي للكائنات الحية الدقيقة مع الإنعاش القلبي الرئوي.

تفاعل التراص الدموي الكلي (AHA). يسمح لك بالكشف السريع في دم المرضى عن المستضدات المتداولة بحرية (مستضدات الدم) والمستضدات المرتبطة بالأجسام المضادة - المجمعات المناعية المنتشرة (CIC). بالنسبة لـ RAHA، يتم استخدام خلايا الدم الحمراء المحسسة بالأجسام المضادة المناسبة. تؤدي إضافة مصل دم المريض، الذي يحتوي على مستضدات، إلى كريات الدم الحمراء الحساسة التي يتم تثبيت الأجسام المضادة عليها، إلى التصاق (تراص) كريات الدم الحمراء والمجمعات المناعية.

اختبار كومبس المضاد للجلوبيولين (رد فعل كومبس). يتم تحديد الأجسام المضادة الكاملة (ثنائية التكافؤ) باستخدام تفاعلات التراص المباشرة والسلبية. لا يتم الكشف عن الأجسام المضادة غير الكاملة (أحادية التكافؤ، المعيقة) بهذه الطرق، لأنها عندما تتحد مع المستضد، فإنها تحجبه، ولكن لا يمكنها التسبب في تجميع المستضد في تكتلات كبيرة. الأجسام المضادة غير الكاملة (المانعة) هي تلك التي يعمل فيها مركز نشط واحد فقط؛ المركز النشط الثاني لا يعمل لسبب غير معروف. للكشف عن الأجسام المضادة غير المكتملة، يتم استخدام تفاعل كومبس خاص (الشكل 72). يتضمن التفاعل: مصل المريض، حيث يتم تحديد الأجسام المضادة غير المكتملة، وتشخيص المستضد الجسيمي، ومصل مضاد الجلوبيولين الذي يحتوي على أجسام مضادة للجلوبيولين البشري. يحدث التفاعل على مرحلتين:

تفاعل المستضد مع الأجسام المضادة غير الكاملة. لا توجد مظاهر مرئية. تنتهي المرحلة الأولى بغسل المستضد من المصل المتبقي للمريض.

تفاعل مصل مضاد الجلوبيولين الذي تم الحصول عليه نتيجة تحصين حيوان بالجلوبيولين البشري مع أجسام مضادة غير كاملة ممتصة على المستضد. نظرًا لأن الأجسام المضادة للجلوبيولين ثنائية التكافؤ، فإنها تربط بين جسمين مضادين أحادي التكافؤ من مجمعات AG + منفصلة جسم مضاد غير مكتملمما يؤدي إلى التصاقها وظهور الرواسب المرئية.

التلصيق هو لصق وترسيب الميكروبات أو الخلايا الأخرى تحت تأثير الأجسام المضادة في وجود المنحل بالكهرباء (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).تسمى مجموعات البكتيريا (الخلايا) الملتصقة بالتراص. المكونات التالية مطلوبة لتفاعل التراص:

1. الأجسام المضادة (الراصات) الموجودة في مصل الحيوان المريض أو ذو المناعة.

2. المستضد - تعليق الميكروبات الحية أو المقتولة أو خلايا الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى.

3. محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (0.9%).

يتم استخدام اختبار التراص للتشخيص المصلي حمى التيفودوالحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت وهيدلسون)، والتولاريميا، وما إلى ذلك. والجسم المضاد هو مصل المريض، والمستضد هو ميكروب معروف. عند التعرف على الميكروبات أو الخلايا الأخرى، يستخدم معلقها كمستضد، ويستخدم مصل مناعي معروف كجسم مضاد. يستخدم هذا التفاعل على نطاق واسع للتشخيص الالتهابات المعوية، السعال الديكي، الخ.

طرق تنظيم RA

RA التقريبي على الزجاج

تم نشر RA

(طريقة الحجم)

رد فعل التخثر

تكشفت RA على الزجاج (تحديد الهوية المصلية)

رد فعل التراص على الزجاج.يتم وضع قطرتين من مصل محدد (ممتص) وقطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على شريحة زجاجية خالية من الدهون. يتم تخفيف الأمصال غير الممتزة مسبقًا بنسبة 1:5 - 1:100. يجب وضع القطرات على الزجاج بحيث تكون هناك مسافة بينهما. يتم طحن المزرعة بشكل كامل على الزجاج باستخدام حلقة أو ماصة، ثم تضاف إلى قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر وإلى إحدى قطرات المصل، مع التحريك في كل منهما حتى يتم تكوين معلق متجانس. قطرة من المصل بدون ثقافة هي مراقبة المصل.

انتباه!لا يمكنك نقل الثقافة من المصل إلى قطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر، والذي يعمل كعنصر تحكم للمستضد. يحدث التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 1-3 دقائق. إذا ظل التحكم في المصل شفافًا، يتم ملاحظة تعكر موحد في التحكم في المستضد، وتظهر رقائق متراصة في القطرة حيث يتم خلط المزرعة مع المصل على خلفية سائل صافٍ، وتعتبر نتيجة التفاعل إيجابية.

التشخيص الفسيولوجي

مصل + محلول ثقافة + ثقافة

تفاعل التراص التفصيلي (طريقة الحجم).يتم تحضير التخفيفات التسلسلية، غالبًا ذات شقين، من المصل. الطريقة تسمى الحجمية. لتحديد عيار الأجسام المضادة في مصل الدم، خذ 6 أنابيب. صب 1 مل من المصل الأصلي المخفف بنسبة 1:50 في أنبوب الاختبار الأول وأضف 1 مل من المحلول الملحي إلى جميع أنابيب الاختبار الستة باستخدام ماصة متدرجة. سوف ينتج عن أنبوب الاختبار الأول تخفيف مصل بنسبة 1:100 بحجم 2 مل. انقل 1 مل من أنبوب الاختبار الأول إلى أنبوب الاختبار الثاني، حيث يصبح التخفيف 1:200. لذلك قم بإجراء سلسلة من التخفيفات التسلسلية للمصل في أول 5 أنابيب اختبار (1:100، 1:200، 1:400، 1:800، 1:1600). من أنبوب الاختبار الخامس، صب 1 مل في المحلول المطهر. أضف قطرتين من التشخيص إلى جميع أنابيب الاختبار الستة. الأنبوب السادس عبارة عن مزرعة للتحكم، حيث أنه يحتوي فقط على محلول ملحي وأداة تشخيصية.

مثل هذه السيطرة ضرورية لاستبعاد التراص التلقائي للثقافة. ترج الأنابيب وتوضع في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعتين، ثم تترك لمدة يوم في درجة حرارة الغرفة، وبعد ذلك يتم تسجيل نتائج تفاعل التراص. عند إجراء تفاعل تراص مع أمصال الأطفال في الأشهر الأولى من الحياة، بسبب النقص الوظيفي في تكوين الأجسام المضادة، من الضروري تحديد عيارات أقل من الأجسام المضادة، والتي تؤخذ في الاعتبار عند تخفيف المصل. التخفيف الأولي للمصل هو 1:25. في أنبوب الاختبار الأول، يتم الحصول على تخفيف بنسبة 1:50، ثم 1:100، وما إلى ذلك.

في نتيجة ايجابيةتظهر التفاعلات في أنابيب الاختبار خلايا لزجة على شكل حبيبات أو رقائق على خلفية سائل صافٍ.وتستقر المادة المتراصة تدريجياً في القاع على شكل "مظلة"، ويصبح السائل الموجود فوق الرواسب صافياً. التحكم في المستضد عكر بشكل موحد.

بناءً على طبيعة الرواسب، يتم تمييز تراص الحبيبات الدقيقة والخشنة (القشاري). يتم الحصول على تراص دقيق الحبيبات عند العمل مع O-sera. حبيبات خشنة - عندما تتفاعل الميكروبات المتحركة مع الأمصال H- السوطية. يحدث بشكل أسرع من الحبيبات الدقيقة، وتكون الرواسب الناتجة فضفاضة للغاية ويمكن كسرها بسهولة.

يتم التعبير عن شدة التفاعل على النحو التالي:

استقرت جميع الخلايا، وأصبح السائل الموجود في أنبوب الاختبار شفافًا تمامًا. نتيجة رد الفعل إيجابية بشكل حاد.

هناك رواسب أقل، والسائل لا ينظف تماما. نتيجة التفاعل إيجابية؛

هناك رواسب أقل، والسائل أكثر غائما. نتيجة رد الفعل مشكوك فيها.

هناك رواسب طفيفة في الجزء السفلي من أنبوب الاختبار، والسائل غائم. نتيجة رد فعل مشكوك فيها.

لا توجد رواسب، السائل غائم بشكل موحد، كما هو الحال في التحكم في المستضد. نتيجة رد الفعل السلبي

رد فعل التراص رد فعل التراص

(RA) - طريقة لتحديد و تحديد الكميات Ag و At، بناءً على قدرتهما على تكوين تكتلات مرئية للعين المجردة. في قسم الأمراض المعدية. للأمراض أو لأغراض أخرى، يتم استخدامه للتعرف على الميكروبات والخلايا غير المعروفة، لتحديد وجود وكمية Ab في الدم والسوائل الأخرى. يعتمد مبدأ التحديد على خصوصية التفاعل بين Ag و Ab ويتكون من إيجاد المعلوم من المجهول. هناك العديد من الخيارات لـ RA: الكمية والنوعي، وأنبوب الاختبار والزجاج، والحجمي والقطيري، والطرق التقليدية، والمتسارعة، والسريعة. لمرحلة RA تحتاج إلى: 1) دم s-ka.وفي البديل الخاص بتحديد نوع (var) البكتيريا، يتم استخدام اختبارات التراص الصناعي، التي يتم إنتاجها عن طريق تحصين الأرانب. وفي البديل مع تحديد فصيلة Ab، يتم أخذ عينة دم من الاختبار. الناس أو الحيوانات. يجب أن يكون المحلول معقمًا وخاليًا من الجزيئات العالقة. تحضير التخفيف الأساسي في محلول ملحي. وينبغي أن يكون أقل من 2-4 مرات من العيار التشخيصي لهذا المرض؛ 2) اي جي.في نسخة التفاعل مع تحديد النوع Ab، يتم استخدام مجموعات التشخيص الصناعي؛ في البديل مع تحديد Ag، يتم إعداد التشخيصات نفسها في شكل تعليق 1-3 مليار في محلول ملحي من اختبار أجار لمدة 18-20 ساعة (أقل في كثير من الأحيان مرق). يتم تعطيل الميكروب عن طريق التسخين في حمام مائي عند 70 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة أو عن طريق الحضانة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الفورمالديهايد (التركيز النهائي 0.2٪)؛ 3) المنحل بالكهرباء في شكل محلول ملحي.تقنية التدريج الأنبوب التسلسلي الحجمي RA لتحديد عيار Ab في s-ki: يتم تحضير عدة صفوف من تخفيفات العمل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki. يعتمد عدد الصفوف على عدد التشخيصات المأخوذة في التجربة؛ ويتم تحديد العدد وعوامل التخفيف بواسطة العيار التشخيصي للمرض المشتبه فيه. يجب أن تحتوي السلسلة على الأقل على تخفيف يتوافق مع عيار Ab التشخيصي، وتخفيفين أدناه وتخفيفين فوقه. على سبيل المثال، إذا كان عيار التشخيص هو 1:100، فعندئذ باستخدام الطريقة الحجمية لتحديد مرحلة التهاب المفاصل الروماتويدي، يجب تحضير التخفيفات التالية: 1:25، 1:50، 1:100، 1:200، 1"400؛ بالتنقيط الطريقة، ليست هناك حاجة للتخفيف الأول (1:25)، ولكن هناك حاجة إلى تخفيف آخر أعلى - 1:800. بحث علميتتم معايرة s-ku لرد فعل سلبي. يتم تخفيفه على النحو التالي: يُسكب 0.25 مل من المحلول الملحي في جميع أنابيب الاختبار، باستثناء الأنبوب الأول، عندما يتم التفاعل بحجم 0.5 مل، و0.5 مل عندما يتم التفاعل بحجم 1. مل. صب 0.25 (0.5) مل من التخفيف الرئيسي في أنبوبي الاختبار الأول والثاني، من أنبوب الاختبار الثاني، إلى حجم القطع و تربية s-kوزيادة مرتين، يتم نقل 0.25 (0.5) مل إلى الثالث، من الثالث إلى الرابع، وما إلى ذلك. إلى الأخير، من القطع، يتم سكب 0.25 (0.5) مل في كل شيء لتحقيق التوازن بين الأحجام. يتم تنفيذ كل تخفيف باستخدام ماصة منفصلة. إذا تم أخذ العديد من التشخيصات في التجربة، فسيتم إعداد سلسلة التخفيفات الخاصة بكل منها بنفس الطريقة. يتم إضافة التشخيص إلى كل تخفيف لأنبوب الاختبار في حجم يساوي حجم أنبوب الاختبار، ونتيجة لذلك يتم مضاعفة التخفيف في كل أنبوب اختبار. تتوافق التجربة مع التحكم s-ki (0.25 - 0.5 مل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki ونفس الكمية من المحلول الملحي) والتحكم Ag (0.25 - 0.5 مل من التشخيص ونفس الكمية من المحلول الملحي). إذا تم استخدام عدة أدوات تشخيصية في التجربة، فسيكون لكل منها سيطرة خاصة به على المستضد. يرج الحامل مع أنابيب الاختبار جيدا ويوضع في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات، ثم يترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي، وبعد ذلك يتم تسجيل PA على أساس كمية الرواسب ودرجة تصفية السائل. يتم تحديد هذه المؤشرات، اعتمادًا على طبيعة الراصات، بالعين المجردة على خلفية داكنة، في منظار الراصات أو فوق السطح المقعر لمرآة المجهر. تبدأ المحاسبة بالضوابط: يجب أن يكون التحكم C شفافًا، ويجب أن يكون Ag غائمًا بشكل موحد (بعد رج الأنبوب). إذا كانت الضوابط جيدة، حدد وجود ودرجة التراص في جميع أنابيب الاختبار، والتي يتم تحديدها بواسطة الإيجابيات: الرواسب الكبيرة والتطهير الكامل للسائل - 4 إيجابيات؛ رواسب كبيرة وتصفية غير كاملة للسائل - 3 إيجابيات؛ الرواسب الملحوظة والتصفية الملحوظة للسائل هما إيجابيتان. بعد ذلك، يتم تحديد العيار: أعلى تخفيف مع شدة تراص لا تقل عن 2 زائد. بحث بعنوان تتم مقارنة s-ki مع العيار التشخيصي لهذا المرض. إذا تم فحص العيار. s-ki أقل مرتين من القيمة التشخيصية، ويتم تقييم التفاعل على أنه مشكوك فيه؛ إذا كان العيار متساويا التشخيص - كيفإيجابية ضعيفة إذا كان أعلى من 2-4 مرات، فهو يعتبر إيجابيًا، وإذا كان أعلى 8 مرات أو أكثر، فهو يعتبر إيجابيًا بشكل حاد. مع التوزيع الواسع النطاق لـ Ab الأشخاص الأصحاءلتقييم التهاب المفاصل الروماتويدي، يتم استخدام زيادة في عيار Ab. لتحديد نوع Ar في RA التسلسلي، يجب أن يتوافق عدد الصفوف مع الرقم المأخوذ لتحديد الهوية الاختبارات التشخيصية. من التخفيف الرئيسي للاختبار التشخيصي، يتم إعداد سلسلة من التخفيفات المزدوجة المتعاقبة بنفس الطريقة كما في RA لتحديد عيار Ab. تعتمد عوامل التخفيف على عيار اختبار التراص، وفي التجربة من الضروري وجود تخفيف يساوي عيار الاختبار، وكذلك أقل منه بمقدار 2، 4، 6، 8 مرات، على سبيل المثال، إذا كانت عيار الاختبار التشخيصي هو 1 3200، فيجب عليك استخدام التخفيفات 1 3200، 1 1600، 1 800، 1 400، 1 200 ويتم إضافة نفس حجم Ag الذي تم اختباره إلى تخفيفات الاختبار، ونتيجة لذلك، يتم تخفيف اختبار Ag. يزيد الاختبار بمقدار مرتين. يتم إضافة عنصري تحكم للاختبار وAg إلى التجربة. إذا كان في التجربة عدة s-k، فإن كل واحد منهم يحتاج إلى التحكم الخاص به. عند الانتهاء من التفاعل، يتم هز الحامل بقوة ووضعه في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية، تم أخذ النتائج في الاعتبار كما هو موضح أعلاه، وتقييم التفاعل له ميزات، من أجل استخلاص نتيجة حول مدى امتثال الدراسة. عند أخذ Ag في التجربة، يجب أن يتوافق عيار التفاعل مع نصف عيار الاختبار التشخيصي القياسي على الأقل. تعتبر العيارات من 1 4 وما دون بمثابة تفاعل جماعي بالتنقيط مديختلف التدريج لـ RA عن الحجمي حيث يتم تخفيف s-ku في حجم 1 مل، ويستخدم Ag بتركيز أعلى (10 مليار/ مل) ويتم إضافته 1 - 2 قطرات في أنبوب اختبار ويعتبر تخفيف الدواء بعد إضافة Ag دون تغيير، وإلا فإن طريقة التثبيت والتسجيل والتقييم تشبه الطريقة الحجمية

(المصدر: قاموس مصطلحات علم الأحياء الدقيقة)

رد فعل التراص (من اللات. التراص- لصق) - لصق الكريات (البكتيريا، خلايا الدم الحمراء، الخ) بواسطة الأجسام المضادة في وجود الشوارد.

رد فعل التراصيتجلى في شكل رقائق أو رواسب تتكون من جسيمات (على سبيل المثال، البكتيريا) "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة (الشكل 7.37). يستخدم تفاعل التراص من أجل: تحديد العامل الممرض المعزول من المريض؛ تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض. تحديد فصائل الدم.

أرز. 7.37 أ، ب. رد فعل التراص معالغلوبولين المناعي- الأجسام المضادة (أ) ومفتش– الأجسام المضادة (ب)

1. تحديد العامل الممرض المعزول من المريض رد فعل تقريبيالتراص على الزجاج (الشكل 7.38). يتم إضافة معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى قطرة من المصل المتراص (التخفيف 1:20). أشكال راسب ندف.

أرز. 7.38.

تفاعل تراص واسع النطاق مع العامل الممرض المعزول من المريض (الشكل 7.39). يضاف معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى تخفيفات المصل المتراص.

أرز. 52

2. تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض
تفاعل التراص التفصيلي مع مصل دم المريض (الشكل 7.39). يتم إضافة التشخيص إلى التخفيفات من مصل المريض.
- التراص مع O-diagnosticum (البكتيريا التي تم قتلها بالحرارة، مع الاحتفاظ بمستضد O) يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات.
- التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يقتلها الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي) كبير ويحدث بشكل أسرع.
3. تفاعل التراص لتحديد فصائل الدميتم استخدام تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم لإنشاء نظام ABO (الجدول ب) باستخدام تراص كريات الدم الحمراء مع الأجسام المضادة في المصل المناعي ضد مستضدات فصيلة الدم A (I)، B (III). والضابط هو: المصل الذي لا يحتوي على أجسام مضادة، أي. فصيلة الدم AB (IV) ؛ المستضدات الموجودة في خلايا الدم الحمراء للمجموعات A (II)، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات، أي يتم استخدام كريات الدم الحمراء من المجموعة O (I).

الجدول 7.6. تحديد فصائل الدم ABO

نتائج رد الفعل		مجموعة
		الانتماء
		بحثت دم
خلايا الدم الحمراء مع	المصل (البلازما)
معيار	مع المعيار
الأمصال