رد فعل تراص (من اللات. التراص- لصق) - لصق الكريات (البكتيريا، خلايا الدم الحمراء، الخ) بواسطة الأجسام المضادة في وجود الشوارد.

رد فعل تراصيتجلى في شكل رقائق أو رواسب تتكون من جسيمات (على سبيل المثال، البكتيريا) "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة (الشكل 7.37). يستخدم تفاعل التراص من أجل: تحديد العامل الممرض المعزول من المريض؛ تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض. تحديد فصائل الدم.

أرز. 7.37 أ، ب. رد فعل التراص معالغلوبولين المناعي- الأجسام المضادة (أ) ومفتش– الأجسام المضادة (ب)

1. تحديد العامل الممرض المعزول من المريض تفاعل التراص التقريبي على الزجاج (الشكل 7.38). يتم إضافة معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى قطرة من المصل المتراص (التخفيف 1:20). أشكال راسب ندف.

أرز. 7.38.

تفاعل تراص واسع النطاق مع العامل الممرض المعزول من المريض (الشكل 7.39). يضاف معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى تخفيفات المصل المتراص.

أرز. 52

2. تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض
تفاعل التراص التفصيلي مع مصل دم المريض (الشكل 7.39). يتم إضافة التشخيص إلى التخفيفات من مصل المريض.
- التراص مع O-diagnosticum (البكتيريا التي تم قتلها بالحرارة، مع الاحتفاظ بمستضد O) يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات.
- التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يقتلها الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي) كبير ويحدث بشكل أسرع.
3. تفاعل التراص لتحديد فصائل الدميتم استخدام تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم لإنشاء نظام ABO (الجدول ب) باستخدام تراص كريات الدم الحمراء مع الأجسام المضادة في المصل المناعي ضد مستضدات فصيلة الدم A (I)، B (III). والضابط هو: المصل الذي لا يحتوي على أجسام مضادة، أي. فصيلة الدم AB (IV) ؛ المستضدات الموجودة في خلايا الدم الحمراء للمجموعات A (II)، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات، أي يتم استخدام كريات الدم الحمراء من المجموعة O (I).

الجدول 7.6. تحديد فصائل الدم ABO

نتائج رد الفعل		مجموعة
		الانتماء
		بحثت دم
خلايا الدم الحمراء مع	المصل (البلازما)
معيار	مع المعيار
الأمصال

تفاعل التراص (RA) هو التصاق وترسيب الميكروبات أو الخلايا الأخرى تحت تأثير الأجسام المضادة في وجود المنحل بالكهرباء. ويسمى الراسب الناتج بالتراص.

يستخدم RA:

1. الكشف عن الأجسام المضادة في مصل دم المريض (التشخيص المصلي).

2. تحديد النوع والمصل للمزرعة النقية للكائنات الحية الدقيقة المسببة للأمراض المعزولة من المريض (التنميط المصلي).

يستخدم تفاعل التراص لتحديد الأجسام المضادة في مصل الدم لدى المرضى، على سبيل المثال، المصابين بحمى التيفوئيد والحمى نظيرة التيفية (تفاعل فيدال)، وداء البروسيلات (تفاعل رايت، هيدلسون)، والتولاريميا، وداء البريميات وغيرها. أمراض معديةوكذلك تحديد العامل الممرض المعزول من المريض ( الالتهابات المعوية، السعال الديكي، الخ). يستخدم RA لتحديد فصائل الدم وعامل Rh وما إلى ذلك.

يتطلب التفاعل المكونات التالية:

1. يجب أن يكون المستضد (الراصات) جسيميًا، أي أنه عبارة عن تعليق للكائنات الحية الدقيقة الحية أو المقتولة (التشخيص م)، أو كريات الدم الحمراء أو الخلايا الأخرى. عادة، يتم استخدام الثقافة اليومية للكائنات الحية الدقيقة التي تنمو على منحدر أجار. يتم غسل الثقافة مع 3-4 مل من محلول متساوي التوتر، ونقلها إلى أنبوب معقم، ويتم تحديد الكثافة. يجب أن يكون المعلق متجانسًا ويحتوي على ما يصل إلى 3 مليارات خلية ميكروبية لكل 1 مل. إن استخدام معلق الميكروبات المقتولة - التشخيصية - يسهل العمل (المعد في الإنتاج).

2. توجد الأجسام المضادة (الراصات) في مصل المريض (أثناء التشخيص المصلي) أو في المصل المتراص (أثناء التنميط المصلي). يتم الحصول على الأمصال المتراصة عن طريق تحصين الأرانب بالبكتيريا الميتة.

عيار تراصويسمى المصل بالتخفيف الأعلى، حيث يتفاعل مع المستضد المقابل في ظل ظروف تجريبية معينة.

يمكن أن تكون الأمصال المتراصة أصلية (غير ممتزة) وممتزة. تتفاعل الأمصال الأصلية في التخفيفات الصغيرة ليس فقط مع نوع الكائنات الحية الدقيقة التي تم تحصين الحيوان بها للحصول على المصل، ولكن أيضًا مع الأنواع ذات الصلة من الكائنات الحية الدقيقة، لأنها تحتوي على أجسام مضادة جماعية (أجسام مضادة للكائنات الحية الدقيقة التي لها مستضدات مشتركة). تُستخدم الأمصال الأصلية في تفاعل التراص التفصيلي (للتشخيص المصلي)، والذي لا يأخذ في الاعتبار وجود التفاعل فحسب، بل أيضًا ديناميكيات الزيادة في عيار الأجسام المضادة.

إذا تم استخلاص (امتزاز) الأجسام المضادة الجماعية من المصل الأصلي عن طريق التفاعل مع البكتيريا ذات الصلة التي لديها مستضدات جماعية، يتم الحصول على الأمصال الممتزة. الأمصال الممتزة يمكن أن تكون مستقبلة أحادية (أو نوع محدد)، تحتوي على أجسام مضادة لمستقبل مستضد واحد فقط.تتكون الأمصال متعددة التكافؤ من خليط من عدة أمصال ممتزة أو غير ممتزة. تستخدم الأمصال الممتزة في تفاعل التراص الزجاجي.

عندما يتم تحصين الحيوانات بالبكتيريا المتحركة باستخدام مستضد H، يتم الحصول على الأمصال المتراصة لـ H والتي تحتوي على أجسام مضادة لـ H (على سبيل المثال، مصل السالمونيلا أحادي مستقبلة H). عن طريق التحصين بمستضد O، يتم الحصول على أمصال تراص O تحتوي على أجسام مضادة O (على سبيل المثال، مصل O-تراص ممتص من مجموعة السالمونيلا، مصل مضاد للكوليرا O-تراص). عن طريق التحصين بمستضدات H- وO، يتم الحصول على الأمصال التي تحتوي على الأجسام المضادة H- وO.

علاوة على ذلك، تنتج الراصات O رواسب ذات حبيبات خشنة.

3. المنحل بالكهرباء - محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (0.9٪ محلول كلوريد الصوديوم محضر في الماء المقطر).

هناك طريقتان رئيسيتان لإجراء تفاعل التراص: التفاعل على الزجاج (يُسمى أحيانًا التفاعل الإرشادي أو التفاعل اللوحي) والتفاعل التفصيلي (في أنابيب الاختبار)

إعداد رد فعل التراص على الزجاج. يتم وضع قطرتين من المصل وقطرة من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على شريحة زجاجية خالية من الدهون. يؤخذ المصل التشخيصي المتراص في تخفيف واحد، والذي، حسب عياره، هو 1:10، 1:25، 1:50 أو 1:100. تتم إضافة ثقافة الكائنات الحية الدقيقة قيد الدراسة إلى قطرة واحدة من المصل وقطرة من محلول متساوي التوتر باستخدام حلقة ويتم خلطهما جيدًا. إن قطرة كلوريد الصوديوم مع الكائنات الحية الدقيقة هي السيطرة على المستضد، وقطرة المصل بدون الكائنات الحية الدقيقة هي السيطرة على المصل. لا يمكنك نقل الثقافة من قطرة مع المصل إلى قطرة مع كلوريد الصوديوم. يحدث التفاعل في درجة حرارة الغرفة لمدة 1-3 دقائق. إذا ظلت السيطرة على المصل واضحة، لوحظ تعكر موحد في السيطرة على المستضد، وظهور رقائق متراصة في القطرة حيث يتم خلط الثقافة مع المصل، فإن النتيجة تعتبر إيجابية. إذا كان هناك تعكر موحد في القطرة مع المصل والمستضد، فهذه نتيجة سلبية. يكون رد الفعل أكثر وضوحًا على خلفية داكنة.

مصل

1. السيطرة على المستضد

2. السيطرة على المصل

ردود الفعل المناعية. تطبيق ردود الفعل المناعية في التشخيص أمراض معدية.

يخطط:

أنواع ردود الفعل المناعية.

شروط إجراء التفاعلات المصلية.

متطلبات المصل.

مفهوم النتائج الإيجابية والسلبية.

المحتويات الرئيسية:

أنواع ردود الفعل المناعية.

رد الفعل المناعي – هذا هو تفاعل المستضد مع الجسم المضاد، والذي يتم تحديده من خلال التفاعل المحدد للمراكز النشطة للجسم المضاد (المظلة) مع حواتم المستضدات.

التصنيف العام للتفاعلات المناعية:

ردود الفعل المصلية – التفاعلات بين المستضدات (Ag) والأجسام المضادة (Ig)

في المختبر ;

ردود الفعل الخلوية بمشاركة الخلايا المناعية.

اختبارات الحساسية – الكشف عن فرط الحساسية.

التفاعلات المصلية: 1) التعريف، 2) المراحل، 3) الأهداف، 4) التصنيف العام.

1) التعريف

الطرق المصليةبحث (من المصل اللاتيني – المصل والشعارات – تدريس) باستخدام تفاعل المستضد-الجسم المضاد.

2) المراحل

مرحلتان من التفاعل:

أنا. محدد (مرئي) - يحدث بسرعة، وتتحد الأجسام المضادة مع المستضدات المقابلة لها. خلال هذه المرحلة، تتفاعل المجموعات المحددة من المستضدات (AG) والمراكز النشطة للأجسام المضادة (AT).

القوى المشاركة في تشكيل مجمع AG + AT هي:

قلادة؛

فان دير فال

روابط هيدروجينية.

لا أحد تغييرات مرئيةليس في هذه المرحلة. يُظهر المجهر الإلكتروني مجمع AG+AT على شكل شبكة.

ثانيا. غير محدد - يحدث ببطء، ويتفاعل مركب المستضد والجسم المضاد الناتج مع عامل بيئي إضافي غير محدد يحدث فيه التفاعل، وهذا مرئي للعين - الالتصاق، والانحلال، ورقائق الترسيب، وما إلى ذلك. وفي وجود المنحل بالكهرباء، تنخفض الشحنة ، تنخفض القابلية للذوبان، وتتشكل تكتلات مرئية، وتترسب (تراص).

3) تحديد الأهداف :

أ) للتعرف على المستضد (المصل التشخيصي المعروف للأجسام المضادة):

• في المواد المرضية (التشخيص السريع)؛

  في الثقافة النقية:

  1. تحديد الهوية المصلية (تحديد الأنواع)؛

     التنميط المصلي (تحديد المصل) – تحديد السلالة.

ب) للكشف عن الأجسام المضادة (Ig) (المستضد معروف للتشخيص):

• الحضور (ردود الفعل النوعية) ؛

  الكميات (زيادة العيار - طريقة "المصل المزدوج").

4) التصنيف العام ردود الفعل المصلية :

أ) بسيط (مكونان: Ag+Ig):

تفاعلات تراص RA (مع المستضد الجسيمي) ؛

تفاعلات هطول الأمطار (مع المستضد القابل للذوبان)؛

ب) مركب (3 مكونات: Ag+Ig+C)؛

ج) باستخدام العلامة.

المتغيرات من تفاعلات التراص وهطول الأمطار

رد فعل تراص :

تفاعل التراص (RA) هو رد فعل مناعي لتفاعل تعليق المستضدات (كريات الدم الحمراء والبكتيريا) مع المستضدات في المحلول الفسيولوجي.

أثناء التراص، تلتصق جزيئات AT معًا لتشكل رواسب ندفية.

رد فعل التراص الدموي السلبي(RPGA) هو نوع من تفاعل التراص الذي يتم فيه استخدام جسم مضاد أو مستضد تشخيصي لكريات الدم الحمراء (كريات الدم الحمراء التي تحتوي على AT أو AG ممتزة على سطحها).

تعمل خلايا الدم الحمراء كحاملات سلبية في هذا التفاعل.

ويتم تقييم نتائج RPGA على النحو التالي:

- في رد فعل إيجابي تغطي خلايا الدم الحمراء الملتصقة بشكل سلبي الجزء السفلي من الثقب على شكل حرف U أو V في طبقة متساوية ذات حواف صدفية ("مظلة")؛

- في رد فعل سلبي (في حالة عدم التراص)، تتراكم خلايا الدم الحمراء في التجويف المركزي للثقب، لتشكل "زرًا" مضغوطًا ذو حواف محددة بشكل حاد.

يستخدم اختبار تثبيط التراص الدموي (HAI) في تشخيص الالتهابات الفيروسية. تحتوي بعض الفيروسات على بروتين يسمى الهيماجلوتينين على سطحها، والذي يقوم بلصق خلايا الدم الحمراء معًا. إضافة أجسام مضادة محددة مضادة للفيروسات تمنع الراصة الدموية الفيروسية - لا يوجد التراص الدموي.

يتم استخدام تفاعل التراص الدموي غير المباشر (IRHA)، أو تفاعل كومبس، لتحديد الأجسام المضادة غير المكتملة. إضافة مصل مضاد الجلوبيولين (AT ضد Ig البشري) يعزز نتائج التفاعل. يتم استخدام RNGA لتحديد عامل Rh.

لإجراء تفاعل التراص (RA)، يلزم وجود ثلاثة مكونات:

1) مولد المضاد (راصة) AG؛

2) جسم مضاد(راصة) ال.

3) بالكهرباء (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).
Ag + AT + المنحل بالكهرباء = متراص

التلصيق (من اللاتينية agglutinatio - الإلتصاق) - لصق الكريات (البكتيريا، خلايا الدم الحمراء، إلخ) بالأجسام المضادة في وجود الشوارد - كلوريد الصوديوم.

يتجلى التهاب المفاصل الروماتويدي في شكل رقائق أو رواسب تتكون من كريات (على سبيل المثال، البكتيريا وخلايا الدم الحمراء) "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة.

يستخدم RA ل:

تفاعل التراص الميكروبي المباشر (RA).

في هذا التفاعل، تقوم الأجسام المضادة (الراصات) بتراص مباشرة مع المستضدات الجسيمية (الراصات).

وعادة ما يتم تمثيلها بتعليق الكائنات الحية الدقيقة المعطلة (تفاعل التراص الميكروبي).

لتحديد نوع الكائنات الحية الدقيقة، استخدمالتراص التشخيصي القياسي مصل (الشهيرة في ).

الأكثر شيوعًا هي الصفائحية (التقريبية) والموسعة RA.

يتم وضع لوحة RA على الزجاج. استخدامه كما طريقة معجلةالكشف عن الأجسام المضادة أو تحديد الكائنات الحية الدقيقة.

عناصر:

1. الأمصال التشخيصية القياسية (AT)؛

2. زراعة نقية قيد الدراسة من المريض.

3. محلول ملحي.

في المزرعة النقية قيد الدراسة، تكون المستضدات (AG) على شكل جزيئات (خلايا ميكروبية وكريات الدم الحمراء ومستضدات كرياتية أخرى)، والتي يتم لصقها معًا بواسطة الأجسام المضادة وتترسب.

مثال:

التدريج إرشادية تفاعلات التراص (را ) على الزجاج لغرض التعرف على البكتيريا القولونية.

تطبيق قطرات على شريحة زجاجية:

1 الزحار ;
2 - القطرة الرابعة: - مصل ملتصق ضد مسببات الأمراضحمى التيفود ;

(1-2 الأمصال التشخيصية)
3 - القطرة الرابعة: - محلول ملحي (تحكم).
أضف الثقافة البكتيرية النقية المختبرة إلى كل قطرة. اثارة.

نتيجة : إيجابي - وجود رقائق متراصة،
سلبي - غياب الرقائق المتراصة
خاتمة:تعتبر البكتيريا المدروسة من العوامل المسببة لحمى التيفوئيد (تم تحديد المستضدات).

لتحديد AT في مصل المريض (التشخيص المصلي)، وهو معيار ميكروبيالتشخيص ، تحتوي على تعليقمشهور الميكروبات أو مستضداتهااي جي .

تحديد فصائل الدم ABO (تفاعل التراص الدموي (HRA)) – تراص خلايا الدم الحمراء.

مكونات التفاعل:

1. AG (خلايا الدم الحمراء) اختبار الدم

2. ال (كريات الدم الحمراء - الزوليكلونات)

مجموعة الزوليكلونات:

كاشف كوليكلون المضاد لـ A (وردي)

كاشف كوليكلون المضاد لـ B (الأزرق)

كاشف Tsoliklon المضاد للـ AV (عديم اللون)

3. المنحل بالكهرباء (محلول ملحي)

تقنية التحديد:

1 .

يتم تطبيق قطرة واحدة (0.1 مل) من مضاد A ومضاد B ومضاد AB على فتحات القرص (للتحكم).

2.

بجانب كل قطرة من الكاشف، يتم وضع قطرة صغيرة (0.05-0.01 مل) من الدم الذي يتم اختباره.

ثم يتم خلط قطرة من الزوليكلون مع قطرة دم باستخدام قضيب زجاجي نظيف فردي.

3.

يتطور تفاعل التراص خلال أول 3-5 ثواني عندما يتم هز اللوحة بلطف.

تؤخذ نتائج التفاعل في الاعتبار بعد 2.5 - 3 دقائق من خلط القطرات. من اليسار إلى اليمين في الآبار توجد مضادات A، ومضادات B، ومضادات AB.

والنتيجة الإيجابية هي ظهور الرواسب الحبيبية (التراص).

RA إيجابي (+)

سلبي - لا توجد رواسب.

RA سلبي (-)

4.

تحليل النتائج.

يا(أنا) α β – لا تراص

أ(ثانيا) β – تراص مع مضاد A

ب(ثالثا) α - تراص مع مضاد B

أ.ب(رابعا)O - تراص مع مضاد A، مع مضاد B

التمثيل التخطيطي للتراص.

مستضدات Ag على كريات الدم الحمراء (قابلة للاكتشاف) + جسم مضادفي(زوليكلون) مصل التشخيص

المحاسبة عن التراص في الأجهزة اللوحية

معادلة الترسيب:

رد فعل الهطول هو رد فعل مناعي لتفاعل المستضد في حالة قابلة للذوبان مع المستضد في محلول فسيولوجي.

أثناء هطول الأمطار، يتم تشكيل مجمع المناعي الجزيئي، والذي يتجلى في انتقال محلول غرواني شفاف إلى تعليق غير شفاف، أو يعجل.

يجب أن تكون كمية كلا الكاشفين بنسب محددة بدقة، لأن زيادة أحدهما تقلل النتيجة.

يخرج طرق مختلفةتنظيم رد فعل هطول الأمطار.

1. يتم تنفيذ تفاعل الترسيب الحلقي في أنابيب ترسيب ذات قطر صغير. يُضاف المصل المناعي إلى أنبوب الاختبار ويُوضع المستضد القابل للذوبان في طبقات بعناية. يختلط AG وAT بسبب الحركة الحرارية للجزيئات، ويتفاعلان. في نتيجة ايجابيةتتشكل حلقة من الراسب المعتم عند حدود الحلين.

2. يتم تنفيذ تفاعل الانتشار المناعي المزدوج Ouchterlony في هلام أجار، حيث يتم إضافة محلول AG أو محلول AT إلى الآبار وفقًا للمخطط. ينتشر AG وAT في الجل تجاه بعضهما البعض، وإذا كان التفاعل إيجابيًا، يشكلان مجمعات مناعية مرئية كخطوط هطول.

معادلة الترسيب -هذا هو التكوينوترسيب مركب المستضد والأجسام المضادة الجزيئي القابل للذوبان على شكل سحابة تسمى الراسب. يتم تشكيله عن طريق خلط المستضدات والأجسام المضادة بكميات متساوية.

مكونات را:

مصل راسب (المعروف بـ AT-precipitin) ؛

مصل الاختبار (مستضد الترسيبيتينوجين غير المعروف)؛

بدني حل.

يتم إجراء تفاعل الترسيب إما في أنابيب اختبار ضيقة خاصة (تفاعل الترسيب الحلقي)، أو في أطباق بتري في المواد الهلامية، والوسائط المغذية، وما إلى ذلك.

رد فعل التساقط الدائري

بيان وتسجيل نتائج التفاعلهطول حلقةللكشف عن مسببات الأمراض الجمرة الخبيثة(رد فعل أسكولي).

التدريج .

1. يتم غلي المواد قيد الدراسة (الجلود، الصوف، اللباد، الشعيرات، القماش، اللحوم، التربة، براز الحيوانات، وغيرها) في محلول ملحي لمدة 5-45 دقيقة. للحصول على مستخلص متساوي التوتر (مستخلص). تمت تصفيته.

2. يتم سكب المصل المضاد للجمرة الخبيثة في أنبوب اختبار.

3. ضع طبقة مادة الاختبار (المستخلص) عليها بعناية.

محاسبة .

خلال الـ10 دقائق القادمة. في الحالات الإيجابية، تظهر حلقة من التعكر في السطح البيني بين المصل والمستخلص (الترسيب الحلقي). رد فعل أسكولي حساس ومحدد للغاية

وبمساعدتها، من الممكن التعرف بسرعة على المواد المصابة بالجمرة الخبيثة.

رد فعل هطول الأمطار في أجار

بيان وتسجيل النتائجردود الفعل هطول الأمطار في أجارلتحديد سمية البكتيريا الوتدية (العوامل المسببة للدفتيريا)

التدريج

توضع على أجار الببتون الفوسفاتي في طبق بيتري.

1. ضع شريطًا من ورق الترشيح المعقم المبلل على طول منتصف الكوب.مصل مضاد للسموم.

2. بعد التجفيف، على مسافة 1 سم من حافة الشريط، يتم زرع لويحات قطرها 10 ممالمحاصيل المختارة.

في كوب واحد يمكنك زرع من 3 إلى 10 محاصيل، واحدة منهايتحكم، يجب أن يكون معروفاسامة.

يتم وضع المحاصيل في منظم الحرارة.

محاسبة

يتم التحليل بعد 24-48-72 ساعة.

نتيجة إيجابية - (ثقافةسام) - تظهر على مسافة ما من شريط الورقخطوط راسب, « سهام المحلاق"، والتي تكون مرئية بوضوح في الضوء المنقول.

يوضح الشكل تفاعل الترسيب في الأجار لتحديد مدى سمية عصيات الخناق. لم تشكل المزارع المتوسطة "محاليق الأسهم"، فهي ليست مسببات الأمراض السامة.

سلالات العامل المسبب للدفتيريا يمكن أن تكون سامة (تنتج سموما خارجية) وغير سامة. يعتمد تكوين ذيفان خارجي على وجود بكتيريا نبائية تحمل جينًا سامًا يشفر تكوين ذيفان خارجي.

في حالة المرض، يتم اختبار جميع مسببات أمراض الخناق للتأكد من سميتها - إنتاج ذيفان الخناق الخارجي باستخدام تفاعل الترسيب في الأجار

التفاعلات المصلية المعقدة ( 3-المكونات: Ag+Ig+C):

تفاعل التثبيت المكمل (CFR).

يتم التفاعل على مرحلتين.

في المرحلة الأولى، يتفاعل AT مع المستضد والمكمل، وفي المرحلة الثانية، تتم إضافة مؤشر - النظام الانحلالي (خليط من كريات الدم الحمراء والمصل المضاد لكرات الدم الحمراء).

إذا كانت النتيجة إيجابية، في المرحلة الأولى، تشكل الأجسام المضادة مجمعًا مناعيًا مع المستضدات، والذي يربط مكمل خليط التفاعل.

في هذه الحالة، لا يتم تدمير خلايا الدم الحمراء للنظام الانحلالي المضافة في المرحلة الثانية.

وبخلاف ذلك، يؤدي المكمل غير المنضم إلى تحلل خلايا الدم الحمراء المؤشرة.

لتنفيذه، هناك حاجة إلى خمسة مكونات: AG، AT والمكمل (النظام الأول)، كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي (النظام الثاني) (الشكل 1).

يحدث التفاعل على مرحلتين (الشكل 3).

الطور الأول - تفاعل المستضد والأجسام المضادة أثناء المشاركة الإلزاميةإطراء.

ثانية - تحديد نتائج التفاعل باستخدام مؤشر النظام الانحلالي (خلايا الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي). يحدث تدمير خلايا الدم الحمراء بواسطة المصل الانحلالي فقط إذا تمت إضافة المكمل إلى النظام الانحلالي. إذا تم امتزاز المكمل مسبقًا على مركب الأجسام المضادة للمستضد، فلن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء (الشكل 1).

نتيجة التجربة تم تقييمه (الشكل 2)، مع ملاحظة وجود أو عدم وجود انحلال الدم في جميع الأنابيب. يعتبر التفاعل إيجابيًا عندما يتأخر انحلال الدم تمامًا، عندما يكون السائل في أنبوب الاختبار عديم اللون وتستقر خلايا الدم الحمراء في القاع، سلبيًا - عندما تتحلل خلايا الدم الحمراء تمامًا، عندما يكون السائل ملونًا بشكل مكثف (دم "ورنيش" ).

يتم تقييم درجة تأخير انحلال الدم اعتمادًا على شدة لون السائل وحجم رواسب خلايا الدم الحمراء في الأسفل (++++، +++، ++، +).

أرز. 4. بيان ونتائج RSC.

خاتمة:تم الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الاختبار.

يسمح لك RSK باكتشاف الأجسام المضادة لأي سلالة من نفس النمط المصلي للفيروس.

القيمة التشخيصيةلديها:

زيادة أربعة أضعاف في عيار الأجسام المضادة في الأمصال المزدوجة (أثناء وباء الأنفلونزا)؛

زيادة مضاعفة في مصل الدم للمرضى الذين يعانون من صورة سريرية مميزة.

ردود الفعل باستخدام العلامة :

هذه الأساليب حساسة للغاية. تُستخدم الأصباغ والنظائر المشعة والإنزيمات وما إلى ذلك كتسميات للمستضدات أو الأجسام المضادة.

RIF - تفاعل التألق المناعي

يعتمد تفاعل التألق المناعي على إشارة ضوئية لمركب الأجسام المضادة للمستضد

مقايسة الممتز المناعي المرتبط.

اختبار معملي حديث يبحث عن أجسام مضادة محددة في الدم أو مستضدات لأمراض معينة من أجل تحديد ليس فقط المسببات، ولكن أيضًا مرحلة المرض.

يمكن إعطاء نتائج ELISA نوعيا وكميا.

حاليا، يتم استخدام ELISA في الحالات التالية:

1) البحث عن أجسام مضادة محددة لأي مرض معدي؛

2) البحث عن مستضدات أي أمراض (معدية، تناسلية)؛

3) البحث الحالة الهرمونيةمريض؛

4) فحص علامات الورم.

5) فحص وجود أمراض المناعة الذاتية.

في الشكل، يُظهر اختبار ELISA ذو الطور الصلب المستضدات المعروفة (على اليسار) الممتزة على بئر الصفيحة، (على اليمين) على فتحات الصفيحة مستضدات معروفة

مزايا طريقة ELISA:

1) خصوصية وحساسية عالية لطريقة ELISA (أكثر من 90%).

2) القدرة على تحديد المرض وتتبع ديناميكيات العملية، أي مقارنة عدد الأجسام المضادة في فترات زمنية مختلفة.

3) توفر تشخيص ELISA في أي مؤسسة طبية.

العيب النسبي: الكشف عن الاستجابة المناعية (الأجسام المضادة)، ولكن ليس العامل الممرض نفسه، المرتبط بالإنزيم الوسم.

اختبار ELISA (الآلية العامة):

أساس المقايسة المناعية الإنزيمية هو التفاعل المناعي للمستضد والجسم المضاد مع تكوين مركب مناعي: جسم مضاد للمستضد، مما يؤدي إلى تغيير في النشاط الأنزيمي لعلامات محددة على سطح الأجسام المضادة.

مكونات التفاعل:

1. AG(AT) معروف - على بئر الجهاز اللوحي.

2. AT (AG) قيد الدراسة.

3. AT مع إنزيم خاص بمركب AT(AG)-AG(AT).

4. الركيزة اللونية التي تتفاعل مع الانزيم

5. توقف عن الحل

المراحل الرئيسية للELISA

1. يوجد على سطح آبار اللوحة مستضد منقى لمسبب مرض محدد. ويضيفون مادة بيولوجيةعند المريض، يحدث تفاعل محدد بين هذا المستضد والجسم المضاد المطلوب (الجلوبيولين المناعي). يتم تشكيل المجمع.

2. يتم إضافة المرافق – AT مع الإنزيم. المرافق خاص بمجمع AT-AG في المرحلة الأولى. يتم تنشيط الانزيم.

3. تتم إضافة الركيزة ويتفاعل معها الإنزيم النشط، مما يغير لون المحلول عديم اللون.

4. تتم إضافة محلول التوقف لوقف التفاعل بين الإنزيم والركيزة.

محاسبة.

إيجابي النتيجة - التغييرالألوان في الصورة - أصفر.

التحليل المناعي

طريقة التحليل المناعي (ICA، الاختبارات السريعة) هي طريقة فحص أولية عالية الجودة تسمح لك بإجراء التحليل بسرعة، في غضون بضع دقائق، تحت أي ظروف، بما في ذلك. "مجال".

تشمل مزايا ICA ما يلي:

السرعة وسهولة الاستخدام؛

صغر حجم العينات، وعدم إعداد العينة؛

الرخص بالنسبة للمصنع والمستهلك؛

إمكانية إنتاج الاختبارات بكميات كبيرة.

سهولة القراءة وتفسير النتيجة.

حساسية عالية وإمكانية تكرار نتائج؛

إمكانية التحديد الكمي.

إمكانية استخدام أجهزة القراءة المحمولة المتوافقة مع الكمبيوتر؛

إمكانية التحليل المتعدد.

المكونات (المطبقة على شريط الاختبار):

1. إن الاتحاد ذو العلامة الذهبية الغروية خاص بالمستضد المكتشف.

2. خط اختبار AT – خاص بمجمع AT-AG

3. القيمة المطلقة لخط التحكم خاصة بالمرافقة.

إعداد ICA:

1. قم بتطبيق العينة على منطقة البداية المحددة للشريط.

2. الحصول على النتيجة على شكل ظهور خطوط ملونة مكان خطوط الاختبار والتحكم.

محاسبة

إيجابي - عندما يكون خط الاختبار ملطخًا.

سلبي - إذا لم يكن هناك تلطيخ لخط الاختبار.

غير صالح - إذا لم يكن خط التحكم ملطخًا.

الآلية العامة للICA:

1. يتم إدخال العينة في حقل البداية (لوحة العينة) وترتبط بالاقتران (جسم محدد بملصق ملون)، الموجود على اللوحة المرافقة. ونتيجة لذلك، يتم تشكيل مجمع ملون.

2. يتحرك المجمع المناعي الملون الناتج تحت تأثير القوى الشعرية على طول غشاء النيتروسليلوزو يتفاعلمع خط الاختبار.والنتيجة هي شريط أحمر وردي اللون واحد.

3. AT (مترافق) غير مرتبط بالنطاق الذي تم اختبارهيتحرك أبعد ويصل إلى خط التحكم، ويتواصل مع AT الخاص بخط التحكم.ونتيجة لذلك، يظهر شريط ملون ثان.إذا تم إجراء التحليل بشكل صحيح، فيجب أن يظهر خط التحكم دائمًا، بغض النظر عن وجود مستضد الاختبار (الجسم المضاد) في عينة السائل البيولوجي.

2. شروط إجراء التفاعلات المصلية.

1. وجود متماثل - يقابل كل من المستضد والجسم المضاد.

2. أطباق نظيفة وجافة.

3. نسبة معينة من الأدوية (متساوية في أغلب الأحيان).

4. الوجود الإلزامي للكهارل (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).

5. درجة الحموضة محايدة أو قريبة من القلوية قليلاً.

6. درجة الحرارة +37 درجة مئوية أو درجة حرارة الغرفة (إيجابية بالضرورة).

7. يتم إجراء التحكم في المستضد والتحكم في المصل (الجسم المضاد).

3 متطلبات المصل

يجب أن يكون المصل شفافًا تمامًا دون أي خليط من الخلايا.

وعادة ما يحصلون عليه في الأسبوع الثاني من المرض، عندما تكون الأجسام المضادة متاحة بالفعل.

يتم أخذ الدم بكمية 3-5 مل على معدة فارغة أو بعد 6 ساعات من الوجبة الغذائية.

للحصول على المصل، يتم ترك الدم لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة أو بالطرد المركزي. يتم امتصاص المصل بعناية شديدة حتى لا يتم التقاط العناصر المشكلة.

يتم الحصول على الأمصال المناعية من دماء الأشخاص أو الحيوانات (عادةً الأرانب والخيول)، ويتم تحصينها وفقًا لنظام معين مع المستضد المقابل (اللقاح). عادة ما يتم تحضير الأمصال في الإنتاج.

4. مفهوم النتائج الإيجابية والسلبية.

را.

مع رد فعل إيجابي، تغطي خلايا الدم الحمراء الملتصقة بشكل سلبي الجزء السفلي من الحفرة بطبقة متساوية ذات حواف صدفية ("المظلة")؛ في غياب التراص، تتراكم خلايا الدم الحمراء في التجويف المركزي للثقب، لتشكل "زرًا" مدمجًا ذو حواف محددة بشكل حاد (انظر الصور أعلاه).

ر.ب.

إذا كانت النتيجة إيجابية، تتشكل حلقة حليبية عند واجهة المحلولين (انظر الصور أعلاه).

إليسا.

يحدث تغيير في لون المحلول مع رد فعل إيجابي.

RSK.

تأخر انحلال الدم - رد الفعل إيجابي. إذا كان المكمل مجانيا، لوحظ انحلال الدم - رد الفعل سلبي(انظر الصور أعلاه).

نتائج رد فعل واسرمان:

أ - تأخير كامل لانحلال الدم (+ + ++)؛

ب - تأخير واضح في انحلال الدم (+ ++)؛

ج - تأخير جزئي لانحلال الدم (++)؛

د - تأخير طفيف في انحلال الدم (+)؛

د - انحلال الدم الكامل (-).

يكون التفاعل إيجابيًا مع تأخير جزئي واضح وكامل لانحلال الدم، يتم تحديده من خلال درجة تلطيخ محتويات الأنابيب من اللون الوردي الفاتح إلى الأحمر الفاتح؛ وتشكل كريات الدم الحمراء غير المتحللة بعد ذلك راسبًا أحمر.

العمل في المنزل:

1. دراسة المادة

قم بتدوين 3 ملاحظات على الفيديو

في علم الأحياء الدقيقة

"تفاعل التراص وأنواعه (RA)"

يخطط:

1. مقدمة …………………………………………………………………………………………………

2. RA على الزجاج ……………………………………………………………….4

3. أنبوب الاختبار RA ……………………………………………………………………….5

4. الأدبيات المستخدمة…………………………………………………………………………………………………………………………………

1 المقدمة.

إن تفاعل المستضد الميكروبي والأجسام المضادة محدد بشكل صارم بطبيعته ويهدف في جسم الحيوان إلى تحييد العامل الممرض وسمومه. تفاعل المستضد والأجسام المضادة في المختبر، في ظل ظروف معينة، يكون مصحوبًا بظواهر مرئية (تراص، ترسيب، تحلل مناعي)، مما يسمح باستخدام تفاعلات AG-AT، التي تسمى مصلية (من المصل اللاتيني)، لأغراض عملية. تنتج المصانع الحيوية مستضدات وأمصال مناعية (أجسام مضادة) ذات طبيعة نوعية معروفة (تشخيصية). باستخدام هذه الأمصال في التفاعلات المصلية، من الممكن التعرف على كائن حي دقيق غير معروف، أو باستخدام مستضد معروف، لاكتشاف الأجسام المضادة في الجسم التي تم تصنيعها استجابةً لإدخال العامل الممرض، وبالتالي إجراء التشخيص (التشخيص المصلي). بالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام التفاعلات المصلية لتقييم شدة الاستجابة المناعية بعد التطعيم أو الإصابة بمرض معدٍ.

تعتمد تفاعلات التراص، مثل التراص غير المباشر وكومبس، على التفاعل المختبري للمستضدات الجسيمية مع الأجسام المضادة وقدرة المجمعات الناتجة على الترسيب. الخلايا البكتيرية أو المستضدات القابلة للذوبان المستخرجة من الكائنات الحية الدقيقة والممتصة على الكريات الحاملة: تستخدم خلايا الدم الحمراء، وجزيئات اللاتكس، وما إلى ذلك كمستضدات جسيمية.

تتفاعل المحددات المستضدية للمستضدات الجسيمية على وجه التحديد مع الأجسام المضادة المتماثلة (مرحلة محددة وغير مرئية من التفاعل)، ثم تشكل مجمعات الأجسام المضادة للمستضد تكتلات كبيرة مرئية للعين المجردة، والتي تترسب - تراص (مرحلة غير محددة ومرئية من التفاعل ). تنتج أشكال الميكروبات الخالية من السوط (البروسيلا) مواد تراص حبيبية، في حين تنتج أشكال الميكروبات السوطية (الإشريكية والسالمونيلا) كتلًا كبيرة من القطن، والتي تستقر في قاع أنبوب الاختبار على شكل مظلة مقلوبة وتنكسر بسهولة عند اهتزازها. تتفاعل المستضدات والأجسام المضادة فقط في وجود المنحل بالكهرباء (0.8٪ محلول كلوريد الصوديوم). يتأثر مسار التفاعل بتركيز الملح في المنحل بالكهرباء، وعدد الخلايا الميكروبية في المعلق، وتركيز المصل، ودرجة الحموضة، ودرجة الحرارة وعوامل أخرى.

رد فعل التراص (رع).

هناك تراص محدد يعتمد على تفاعل المستضد معجسم مضاد متماثل , الموجودة في جسم الحيوان الذي تم إدخال هذا المستضد إليه (التراص المناعي)؛ غير محدد (كيميائي)، ينشأ عن التغيرات في درجة الحموضة في البيئة، وتركيز الشوارد؛ عفوية، والتي يتم ملاحظتها عندما يتم تعليق البكتيريا (على شكل R) في محلول فسيولوجي وعند تسخينها، والتي ترتبط بتغير في الحالة الغروية للخلية البكتيرية. مولد المضاد , يُسمى المتورط في التهاب المفاصل الروماتويدي بالراصات، ويسمى الجسم المضاد بالراصات، ويسمى الراسب الناتج بالراصات. عندما يتم تشكيل الراصات، فإن النسبة الكمية للمستضد والأجسام المضادة مهمة (الظاهرة المثلى). مع زيادة أو نقص الأجسام المضادة، يحدث تأخير.

يعد تفاعل التراص (RA) أحد التفاعلات المناعية الأولى المستخدمة في الممارسة الميكروبيولوجية. لأول مرة (1895)، استخدم F. Vidal التهاب المفاصل الروماتويدي لتشخيص حمى التيفوئيد. وفي وقت لاحق (1897)، استخدم أ. رايت نفس رد الفعل لتشخيص داء البروسيلات لدى البشر. وقد وجد RA أيضًا تطبيقًا في تشخيص داء السحب في الدجاج، وداء البريميات، والإجهاض المعدي للأفراس، وكذلك لكتابة الثقافات الميكروبية غير المعروفة باستخدام مصل تراص معروف. التهاب المفاصل الروماتويدي حساس للغاية. ويمكن استخدامه للكشف عن 0.01 ميكروغرام من نيتروجين بروتين الجسم المضاد في 1 مل.

تم تطوير العديد من المتغيرات لتفاعل التراص، والتي تختلف في التنفيذ المنهجي والغرض من الدراسة.

2. رع على الزجاج.

في هذا النوع من التهاب المفاصل الروماتويدي، يمكن أن يكون موضوع الاختبار إما مصلًا أو مستضدًا، ولكن في أغلب الأحيان يتم استخدام هذا الخيار لتحديد الكائنات الحية الدقيقة.

1. للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة (m/o)، يتم تطبيق قطرة من مصل تراص معروف، على سبيل المثال مصل السالمونيلا، وقطرة من المحلول الفسيولوجي (التحكم) بشكل منفصل على شريحة زجاجية خالية من الدهون. بعد ذلك، وباستخدام الحلقة البكتريولوجية، يتم أخذ الكتلة البكتيرية للمستنبت المدروس من مستعمرة في طبق بتري أو من سطح MPA مائل في أنبوب اختبار وتعليقها بشكل منفصل في المصل المناعي والمحلول الفسيولوجي حتى يتم الحصول على معلق متجانس. . يتم أخذ النتيجة بعين الاعتبار بعد 2...4 دقيقة.

المحاسبة عن النتائج: يجب ألا تكون هناك تغييرات في عينة المراقبة. إذا تطابقت المزرعة البكتيرية على وجه التحديد مع المصل المناعي، تظهر رقائق متراصة (نتيجة إيجابية)؛ إذا لم تكن هناك ظاهرة التراص، نستنتج أن المزرعة البكتيرية قيد الدراسة لا تتوافق مع المصل المناعي.

2. دعونا نفكر في الكشف عن الأنتيلات في اختبار مصل الدم باستخدام مثال اختبار البنغال الوردي المستخدم في التشخيص المصلي لداء البروسيلات. يتم تطبيق 0.3 مل من مصل دم حيوان الاختبار و 0.03 مل من مستضد داء البروسيلات (خلايا البروسيلا الوردية البنغالية) على شريحة زجاجية. يتم خلط المكونات جيداً عن طريق رج الزجاج وتؤخذ النتيجة بعين الاعتبار بعد 4 دقائق.

تسجيل النتائج: إذا كان التفاعل إيجابياً، تظهر رقائق وردية اللون من الراصات. يتم تصنيف التفاعل المصلي من هذا النوع على أنه نوعي، حيث يمكن استخدامه للكشف عن الأجسام المضادة للعامل الممرض في مصل دم الحيوان، لكن من المستحيل تقييم محتواها الكمي.

1.1. تفاعل التراص (RA)

تفاعل التراص (RA)

نظرًا لخصوصيته وسهولة تنفيذه وإظهاره، فقد أصبح تفاعل التراص واسع الانتشار في الممارسة الميكروبيولوجية لتشخيص العديد من الأمراض المعدية.

يعتمد تفاعل التراص على خصوصية تفاعل الأجسام المضادة (الراصات) مع الخلايا الميكروبية الكاملة أو الخلايا الأخرى (الراصات). ونتيجة لهذا التفاعل، تتشكل الجزيئات والتكتلات، التي تترسب (تراص) على شكل رقائق.

يمكن أن يشمل تفاعل التراص كلاً من البكتيريا الحية والمقتولة، واللولبيات، والفطريات، والأوالي، والريكتسيا، بالإضافة إلى خلايا الدم الحمراء والخلايا الأخرى. يحدث التفاعل على مرحلتين: الأولى (غير مرئية) محددة، وهي مزيج من المستضد والأجسام المضادة، والثانية (مرئية) غير محددة، وهي لصق المستضدات، أي. تشكيل تراص.

يتم تشكيل الراصة عندما يتحد مركز نشط من الجسم المضاد ثنائي التكافؤ مع المجموعة المحددة للمستضد. يحدث تفاعل التراص، مثل أي تفاعل مصلي، في وجود الشوارد.

خارجيا، مظهر رد فعل تراص إيجابي له طابع مزدوج. في الميكروبات ذات السوط التي تحتوي فقط على مستضد O2 الجسدي، تلتصق الخلايا الميكروبية نفسها معًا بشكل مباشر. ويسمى هذا التراص بالحبيبات الدقيقة. يحدث خلال 18 22 ساعة. الخامس

تحتوي الميكروبات السوطية على مستضدين: مستضد O2 الجسدي ومستضد السوط H2. إذا تم لصق الخلايا معًا بواسطة السوط، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة ويسمى تفاعل التراص هذا بالحبيبات الخشنة. يحدث خلال 2 4 ساعات.

يمكن إجراء تفاعل التراص لغرض التحديد النوعي والكمي لأجسام مضادة محددة في مصل دم المريض، ولغرض تحديد نوع العامل الممرض المعزول. الخامس

يمكن إجراء تفاعل التراص في نسخة موسعة، مما يسمح لك بالعمل مع مصل مخفف إلى عيار تشخيصي، وفي نسخة بديلة رد فعل إرشادي، والذي يسمح، من حيث المبدأ، باكتشاف أجسام مضادة محددة أو تحديد نوع العامل الممرض.

عند إجراء تفاعل تراص مفصل، من أجل الكشف عن أجسام مضادة محددة في مصل الدم للموضوع، يتم أخذ مصل الاختبار بتخفيف 1:50 أو 1:100. ويرجع ذلك إلى حقيقة أن الأجسام المضادة الطبيعية قد تكون موجودة بتركيزات عالية جدًا في المصل الكامل أو المخفف قليلاً، ومن ثم قد تكون نتائج التفاعل غير دقيقة. المادة التي يتم اختبارها في هذا الإصدار من التفاعل هي دم المريض.

يتم أخذ الدم على معدة فارغة أو في موعد لا يتجاوز 6 ساعات بعد تناول الوجبة (وإلا فقد تكون هناك قطرات من الدهون في مصل الدم، مما يجعلها غائمة وغير مناسبة للبحث). عادة ما يتم الحصول على مصل دم المريض في الأسبوع الثاني من المرض، عن طريق جمع 3 × 4 مل من الدم بشكل معقم من الوريد المرفقي (بحلول هذا الوقت يتم تركيز الحد الأقصى من الأجسام المضادة المحددة). يتم استخدام التشخيص المحضر من الخلايا الميكروبية المقتولة ولكن غير المدمرة لنوع معين مع بنية مستضدية محددة كمستضد معروف.

عند إجراء تفاعل تراص تفصيلي من أجل تحديد نوع ونوع العامل الممرض، فإن المستضد هو عامل ممرض حي معزول عن المادة التي تتم دراستها. ومن المعروف أن الأجسام المضادة الموجودة في مصل التشخيص المناعي. الخامس

منيع مصل التشخيصتم الحصول عليها من دم أرنب تم تطعيمه. بعد تحديد العيار (الحد الأقصى للتخفيف الذي يتم فيه اكتشاف الأجسام المضادة)، يتم سكب المصل التشخيصي في أمبولات مع إضافة مادة حافظة. يستخدم هذا المصل لتحديد البنية المستضدية لمسببات الأمراض المعزولة.

خيارات رد الفعل التراص

تتضمن هذه التفاعلات مستضدات على شكل جزيئات (خلايا ميكروبية، وخلايا دم حمراء، ومستضدات جسيمية أخرى)، والتي يتم لصقها معًا بواسطة الأجسام المضادة وتترسب.

لإجراء تفاعل التراص (RA)، يلزم وجود ثلاثة مكونات: 1) المستضد (الراصات)؛ 2) الجسم المضاد (الراصة) و3) المنحل بالكهرباء (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).

تفاعل التراص التوجيهي (اللوحة) (RA)

يتم وضع لوحة إرشادية أو لوحة RA على شريحة زجاجية في درجة حرارة الغرفة. للقيام بذلك، استخدم ماصة باستور لتطبيق قطرة من المصل بشكل منفصل عند تخفيف 1:10 1:20 وقطرة تحكم من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر على الزجاج. يتم إدخال المستعمرات أو الثقافة اليومية للبكتيريا (قطرة من التشخيص) في كل من الحلقات البكتريولوجية وخلطها جيدًا. يتم أخذ ردود الفعل في الاعتبار بصريًا بعد بضع دقائق، وأحيانًا باستخدام عدسة مكبرة (x5). مع RA الإيجابي، يُلاحظ ظهور رقائق كبيرة وصغيرة في قطرة من المصل؛ مع RA السلبي، يظل المصل غائمًا بشكل موحد.

تفاعل التلقيح الدموي غير المباشر (السلبي) (RNGA، RPGA)

يتم إجراء التفاعل: 1) للكشف عن السكريات والبروتينات ومستخلصات البكتيريا وغيرها من المواد شديدة التشتت والريكتسيات والفيروسات، والتي لا يمكن رؤية مجمعاتها مع الراصات في التهاب المفاصل الروماتويدي التقليدي، أو 2) للكشف عن الأجسام المضادة في أمصال المرضى لفحصها. هذه المواد شديدة التشتت وأصغر الكائنات الحية الدقيقة.

يُفهم التراص غير المباشر أو السلبي على أنه تفاعل تتفاعل فيه الأجسام المضادة مع المستضدات الممتصة مسبقًا على جزيئات خاملة (اللاتكس، السليلوز، البوليسترين، أكسيد الباريوم، إلخ. أو خلايا الدم الحمراء للأغنام، فصيلة الدم البشرية I (0)).

في تفاعل التراص الدموي السلبي (RPHA)، تُستخدم خلايا الدم الحمراء كحامل. تلتصق خلايا الدم الحمراء المحملة بالمستضد معًا في وجود أجسام مضادة محددة لهذا المستضد وتترسب. تُستخدم كريات الدم الحمراء الحساسة للمستضد في RPGA كتشخيص لكريات الدم الحمراء للكشف عن الأجسام المضادة (التشخيص المصلي). إذا كانت خلايا الدم الحمراء محملة بالأجسام المضادة (تشخيص الأجسام المضادة لكرات الدم الحمراء)، فيمكن استخدامها للكشف عن المستضدات.

التدريج. يتم تحضير سلسلة من التخفيفات التسلسلية للمصل في آبار ألواح البوليسترين. أضف 0.5 مل من المصل الإيجابي الواضح إلى البئر قبل الأخير و 0.5 مل من المحلول الفسيولوجي (الضوابط) إلى البئر الأخير. ثم أضف 0.1 مل من كريات الدم الحمراء التشخيصية المخففة إلى جميع الآبار، ثم قم برجها ووضعها في منظم الحرارة لمدة ساعتين.

محاسبة. في حالة إيجابيةتستقر كريات الدم الحمراء في قاع الحفرة على شكل طبقة متساوية من الخلايا ذات حافة مطوية أو خشنة (مظلة مقلوبة)، وفي الحالة السلبية تستقر على شكل زر أو حلقة.

1.2. تفاعل التعادل. تحلل،
رد فعل OPSONOPHAGOCYTIC، رد فعل فرط الحساسية

تفاعل تحييد السموم الخارجية مع مضادات السموم (RN)

يعتمد التفاعل على قدرة المصل المضاد للسموم على تحييد تأثير السموم الخارجية. يتم استخدامه لمعايرة الأمصال المضادة للسموم وتحديد السموم الخارجية.

عند معايرة المصل، تتم إضافة جرعة معينة من السم المقابل إلى التخفيفات المختلفة للمصل المضاد للسموم. عندما يتم تحييد المستضد تمامًا ولا توجد أجسام مضادة غير مستخدمة، يحدث التلبد الأولي. يمكن استخدام تفاعل التلبد ليس فقط لمعايرة المصل (على سبيل المثال، الخناق)، ولكن أيضًا لمعايرة السم والتوكسويد. إن تفاعل تحييد السموم مع مضادات السموم له أهمية عملية كبيرة كوسيلة لتحديد نشاط الأمصال العلاجية المضادة للسموم. المستضد في هذا التفاعل هو ذيفان خارجي حقيقي.

يتم تحديد قوة المصل المضاد للسموم بواسطة الوحدات التقليدية لـ AE.

1 AE من مصل البوتولينوم كميته تعادل 1000 DLM من توكسين البوتولينوم. يمكن إجراء تفاعل التعادل لتحديد نوع أو نوع السموم الخارجية (لتشخيص الكزاز والتسمم الغذائي والدفتيريا وما إلى ذلك) في المختبر (وفقًا لرامون)، وعند تحديد سمية الخلايا الميكروبية - في هلام ( بحسب أوتشتيرلوني).

رد فعل التحلل (RL)

ومن الخصائص الوقائية للمصل المناعي قدرته على إذابة الميكروبات أو العناصر الخلوية التي تدخل الجسم.

تسمى الأجسام المضادة المحددة التي تسبب انحلال الخلايا (تحللها) بالليسينات. اعتمادًا على طبيعة المستضد ، يمكن أن تكون بكتيريا ، أو سيتوليسين ، أو سبيروشيتوليزين ، أو هيموليزين ، إلخ.

تظهر اللايسينات تأثيرها فقط في وجود عامل مكمل إضافي. تكملة كعامل غير محدد الحصانة الخلطيةيوجد في جميع سوائل الجسم تقريبًا، باستثناء السائل النخاعي وسائل الغرفة الأمامية. ولوحظ وجود نسبة عالية وثابتة إلى حد ما من المكمل في مصل الدم البشري ويوجد الكثير منه في مصل الدم خنزير غينيا. في الثدييات الأخرى، يختلف محتوى المكمل في مصل الدم.

المكمل هو نظام معقدبروتين مصل اللبن. إنه غير مستقر وينهار عند 55 درجة لمدة 30 دقيقة. في درجة حرارة الغرفة، يتم تدمير المكمل خلال ساعتين. حساس جدًا للاهتزاز لفترات طويلة والأحماض والأشعة فوق البنفسجية. ومع ذلك، يتم تخزين المكمل لفترة طويلة (تصل إلى ستة أشهر) في حالة جافة في درجات حرارة منخفضة. تكملة يعزز تحلل الخلايا الميكروبية وخلايا الدم الحمراء.

يتم التمييز بين تفاعلات التحلل الجرثومي وانحلال الدم.

جوهر تفاعل التحلل الجرثومي هو أنه عندما يتحد مصل مناعي محدد مع الخلايا الميكروبية الحية المتماثلة في وجود مكمل، يحدث التحلل الميكروبي.

رد فعل انحلال الدم هو أنه عندما تتعرض كريات الدم الحمراء لمصل معين محصن ضدها (الانحلالي) في وجود مكمل، يلاحظ انحلال كريات الدم الحمراء، أي. انحلال الدم.

يتم استخدام تفاعل انحلال الدم في الممارسة المخبرية لتحديد النطاق التكميلي، وكذلك لتسجيل النتائج ردود الفعل التشخيصيةتثبيت مكمل. العيار المكمل هو أصغر كمية منه، مما يؤدي إلى تحلل خلايا الدم الحمراء خلال 30 دقيقة في النظام الانحلالي بحجم 2.5 مل. يحدث تفاعل التحلل، مثل جميع التفاعلات المصلية، في وجود المنحل بالكهرباء.

تفاعلات فرط الحساسية (الحساسية)

يمكن لأشكال معينة من المستضد، عند الاتصال المتكرر بالجسم، أن تسبب تفاعلًا محددًا في أساسه، ولكنه يشمل عوامل خلوية وجزيئية غير محددة لاستجابة التهابية حادة. هناك نوعان معروفان من فرط الحساسية: فرط الحساسية من النوع الفوري (IHT) وفرط الحساسية من النوع المتأخر (DTH). يحدث النوع الأول من التفاعل بمشاركة الأجسام المضادة، ويتطور التفاعل في موعد لا يتجاوز ساعتين بعد الاتصال المتكرر بمسببات الحساسية. أما النوع الثاني فيتحقق بمساعدة الخلايا التائية الالتهابية (Tgc) باعتبارها المستجيبات الرئيسية للتفاعل، مما يضمن تراكم الخلايا البلعمية في منطقة الالتهاب، ويظهر التفاعل بعد 6-8 ساعات وما بعدها.

يسبق تطور تفاعل فرط الحساسية لقاء مع مستضد وحدوث حساسية، أي. ظهور الأجسام المضادة والخلايا الليمفاوية الحساسة بشكل نشط والأجسام المضادة الخلوية الحساسة بشكل سلبي للكريات البيض الأخرى (الضامة والخلايا المحببة).

تفاعلات فرط الحساسية لها ثلاث مراحل من التطور: المناعية. الكيميائية المرضية. الفيزيولوجية المرضية.

في المرحلة الأولى المحددة، يتفاعل مسبب الحساسية مع الأجسام المضادة و (أو) الخلايا الحساسة. وفي المرحلة الثانية، يحدث الإطلاق البيولوجي المواد الفعالةمن الخلايا النشطة . يتسبب الوسطاء المفرج عنهم (الهستامين، السيروتونين، الليكوترين، البراديكينين، وما إلى ذلك) في حدوث تأثيرات محيطية مختلفة مميزة للنوع المقابل من تفاعل المرحلة الثالثة.

تفاعلات فرط الحساسيةالنوع الرابع

تنجم التفاعلات من هذا النوع عن التفاعلات المسببة للأمراض بين الخلايا للخلايا التائية المساعدة الحساسة والخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا (الخلايا التائية القاتلة) والخلايا المنشطة في نظام البلعمة وحيدة النواة، والتي تنتج عن التحفيز المطول للجهاز المناعي بواسطة المستضدات البكتيرية، مما يسبب قصور نسبي في جهاز المناعة في الجسم للتخلص منه البيئة الداخليةمسببات الأمراض البكتيرية للأمراض المعدية. تسبب تفاعلات فرط الحساسية هذه تجاويف الرئة السلية ونخرها الجبني والتسمم العام لدى مرضى السل. يتكون الورم الحبيبي الجلدي في مرض السل والجذام من الناحية الشكلية المرضية إلى حد كبير من تفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع.

معظم مثال مشهورتفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع هو تفاعل مانتو الذي يتطور في موقع حقن السلين داخل الأدمة لمريض يكون جسمه ونظامه حساسين لمستضدات الفطريات. نتيجة للتفاعل، يتم تشكيل حطاطة مفرطة كثيفة مع نخر في المركز، والتي تظهر بعد ساعات قليلة فقط (ببطء) بعد حقن السلين داخل الأدمة. يبدأ تكوين الحطاطة بإطلاق الخلايا البالعة وحيدة النواة للدم المنتشر من قاع الأوعية الدموية إلى المساحات بين الخلايا. وفي الوقت نفسه، تبدأ هجرة الخلايا متعددة الأشكال من قاع الأوعية الدموية. ثم يهدأ تسلل العدلات، ويبدأ الارتشاح يتكون في الغالب من الخلايا الليمفاوية والخلايا البلعمية وحيدة النواة. وهذا يختلف عن تفاعل مانتو عن تفاعل آرثوس، حيث تتراكم كريات الدم البيضاء متعددة الأشكال في موقع الآفة.

في تفاعلات فرط الحساسية من النوع الرابع، يؤدي التحفيز طويل المدى للخلايا الليمفاوية الحساسة بواسطة المستضدات إلى التغيرات المرضيةالأنسجة إلى إطلاق السيتوكينات بشكل مكثف وطويل الأمد بواسطة الخلايا التائية المساعدة. يؤدي الإطلاق المكثف للسيتوكينات في مواضع تلف الأنسجة إلى فرط نشاط خلايا نظام البلعمة أحادية النواة الموجودة هناك، والتي يشكل الكثير منها، في حالة فرط النشاط، خيوطًا من الخلايا الظهارية، ويندمج بعضها مع بعضها البعض لتكوين خلايا عملاقة. يمكن تدمير البلاعم، التي يتعرض سطحها للمستضدات البكتيرية والفيروسية، من خلال عمل Tkillers (القتلة الطبيعية).

النوع الرابع من تفاعلات فرط الحساسية يتم تحفيزه عن طريق التعرف على المستضد البكتيري الغريب بواسطة الخلايا التائية المساعدة الحساسة له. الشرط الضروري للاعتراف هو تفاعل المحرضات مع المستضدات المكشوفة على سطح الخلايا المقدمة للمستضد بعد الالتقام الخلوي ومعالجة المستضدات الأجنبية بواسطة الخلايا البالعة وحيدة النواة. آخر شرط ضروريالتعرض للمستضدات بالاشتراك مع جزيئات الدرجة الأولى من مجمع التوافق النسيجي الرئيسي. بعد التعرف على المستضد، تطلق الخلايا المساعدة الحساسة السيتوكينات، وعلى وجه الخصوص، إنترلوكين 2، الذي ينشط الخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا البالعة وحيدة النواة. تطلق الخلايا البالعة وحيدة النواة المنشطة إنزيمات محللة للبروتين وجذور الأكسجين الحرة، التي تلحق الضرر بالأنسجة.

اختبارات حساسية الجلد اختبارات لتحديد مدى حساسية الجسم لمسببات الحساسية، وتحديد مستوى الإصابة به، على سبيل المثال، مرض السل، وداء البروسيلات، مناعة القطيععلى سبيل المثال، إلى مرض التولاريميا. بناءً على موقع إعطاء مسببات الحساسية، هناك: 1) اختبارات الجلد؛ 2) الخدش. 3) داخل الأدمة. 4) تحت الجلد. ينقسم التفاعل السريري لمسببات الحساسية أثناء اختبار حساسية الجلد إلى موضعي، عام وبؤري، بالإضافة إلى فوري ومتأخر.

تحدث التفاعلات المحلية من النوع الوسيط GNT بعد 520 دقيقة، ويتم التعبير عنها على شكل حمامي وبثور، وتختفي بعد بضع ساعات، ويتم تقييمها بطريقة الزائد بحجم الحمامي، مقاسة بالملليمتر. تحدث تفاعلات العلاج التعويضي بالهرمونات الموضعية خلال 24-48 ساعة، وتستمر لفترة طويلة، وتظهر على شكل ارتشاح، وأحيانًا مع نخر في المركز، ويتم تقييمها بحجم الارتشاح بالملليمتر، باستخدام نظام الزائد أيضًا. في أنواع HNT السامة للخلايا والمعقدة مناعيًا ، يتم ملاحظة احتقان الدم والارتشاح بعد 3-4 ساعات ، ويصل إلى الحد الأقصى عند 6-8 ساعات ويهدأ بعد حوالي يوم. في بعض الأحيان يتم ملاحظة ردود الفعل المشتركة.

1.3. تفاعل التثبيت المكمل (FFR)

يستخدم هذا التفاعل في الاختبارات المعملية للكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم لمختلف أنواع العدوى، وكذلك التعرف على العامل الممرض من خلال بنيته المستضدية.

تفاعل التثبيت التكميلي هو تفاعل مصلي معقد وحساس للغاية ومحدد.

من سمات هذا التفاعل أن التغيير في المستضد أثناء تفاعله مع أجسام مضادة معينة يحدث فقط في وجود المكمل. يتم امتصاص المكمل فقط على مركب "مستضد الجسم المضاد". يتكون مجمع "مستضد الجسم المضاد" فقط في حالة وجود تقارب بين المستضد والجسم المضاد في المصل.

يمكن أن يكون لامتصاص المكمل على مركب "الجسم المضاد للمستضد" تأثيرات مختلفة على مصير المستضد اعتمادًا على خصائصه.

تخضع بعض المستضدات لتغيرات مورفولوجية حادة في ظل هذه الظروف، بما في ذلك الذوبان (انحلال الدم، وظاهرة إيزيف-فايفر، والعمل الخلوي). والبعض الآخر يغير سرعة الحركة (تجميد اللولبية). ويموت آخرون دون تغيرات مدمرة مفاجئة (تأثير مبيد للجراثيم أو سام للخلايا). وأخيرًا، قد لا يكون الامتزاز المكمل مصحوبًا بتغيرات في المستضد يمكن ملاحظتها بسهولة.

وفقًا لآلية RSC، يتم ذلك على مرحلتين:

1. المرحلة الأولى هي تكوين مركب "الجسم المضاد للمستضد" وامتزاز هذا المركب المكمل. نتيجة المرحلة غير مرئية بصريًا (تفاعل المستضد والأجسام المضادة مع المشاركة الإجبارية للمكمل).
2. المرحلة الثانية هي تغيير المستضد تحت تأثير أجسام مضادة محددة في وجود المكمل. يمكن أن تكون نتيجة المرحلة مرئية أو غير مرئية (الكشف عن نتائج التفاعل باستخدام مؤشر النظام الانحلالي (خلايا الدم الحمراء للأغنام والمصل الانحلالي).

يحدث تدمير خلايا الدم الحمراء بواسطة المصل الانحلالي فقط إذا تمت إضافة المكمل إلى النظام الانحلالي. إذا تم امتزاز المكمل مسبقًا على مركب الأجسام المضادة للمستضد، فلن يحدث انحلال الدم في كريات الدم الحمراء.

يتم تقييم نتيجة التجربة من خلال ملاحظة وجود أو عدم وجود انحلال الدم في جميع أنابيب الاختبار. يعتبر التفاعل إيجابيًا عندما يتأخر انحلال الدم تمامًا، عندما يكون السائل الموجود في أنبوب الاختبار عديم اللون وتستقر خلايا الدم الحمراء في القاع، ويكون سلبيًا عندما تتحلل خلايا الدم الحمراء بالكامل، عندما يكون السائل ملونًا بشكل مكثف ("الورنيش" دم). يتم تقييم درجة تأخير انحلال الدم اعتمادًا على شدة لون السائل وحجم رواسب خلايا الدم الحمراء في الأسفل (++++، +++، ++، +).

في حالة عدم إمكانية الوصول إلى التغييرات في المستضد للمراقبة البصرية، فمن الضروري استخدام نظام ثانٍ، يعمل كمؤشر، مما يسمح للمرء بتقييم حالة المكمل واستخلاص استنتاج حول نتيجة التفاعل.

يتم تمثيل نظام المؤشر هذا بمكونات تفاعل انحلال الدم، والذي يتضمن كريات الدم الحمراء في الأغنام والمصل الانحلالي، الذي يحتوي على أجسام مضادة محددة لكريات الدم الحمراء (الهيموليزينات)، ولكنه لا يحتوي على مكمل. يتم إضافة نظام المؤشر هذا إلى أنابيب الاختبار بعد ساعة من وضع RSC الرئيسي. إذا كان رد فعل تثبيت المتمم إيجابيًا، فسيتم تكوين مركب مستضد من الجسم المضاد، والذي يمتص المكمل على نفسه. نظرًا لأن المكمل يستخدم بالكمية اللازمة لتفاعل واحد فقط، ولا يمكن أن يحدث تحلل كريات الدم الحمراء إلا في وجود المكمل، فعند امتزازه على مركب "الجسم المضاد للمستضد"، فإن تحلل كريات الدم الحمراء في نظام انحلال الدم (المؤشر) سوف يحدث لا يحدث. إذا كان رد فعل تثبيت المتممة سلبيا، لا يتكون مركب "الجسم المضاد للمستضد"، ويظل المكمل حرا، وعندما يضاف النظام الانحلالي، يحدث تحلل كريات الدم الحمراء.

1.4. مجسات الحمض النووي. تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)،
طريقة الإنزيم المناعي (ELISA)، طريقة الأجسام المضادة المتألقة (FFA)

طرق فحص الجينات

شكل التطوير المكثف للبيولوجيا الجزيئية وإنشاء قاعدة منهجية مثالية للبحث الجيني أساس الهندسة الوراثية. في مجال التشخيص، ظهر اتجاه ويتطور بسرعة لتحديد تسلسلات نيوكليوتيدات معينة من DNA وRNA، وهو ما يسمى بفحص الجينات. تعتمد هذه التقنيات على قدرة الأحماض النووية على التهجين وتشكيل هياكل مزدوجة الشريط بسبب تفاعل النيوكليوتيدات التكميلية (AT، GC).

لتحديد تسلسل الحمض النووي (أو RNA) المطلوب، يتم إنشاء ما يسمى بمسبار متعدد النوكليوتيدات بتسلسل أساسي محدد. يتم إدخال علامة خاصة في تركيبته، مما يجعل من الممكن التعرف على تكوين المجمع.

على الرغم من أنه لا يمكن تصنيف فحص الجينات كوسيلة للتحليل الكيميائي المناعي، إلا أن مبدأه الأساسي (التفاعل بين الهياكل التكميلية) يتم تنفيذه بشكل منهجي بنفس طرق طرق التشخيص المناعي. بالإضافة إلى ذلك، فإن طرق فحص الجينات تجعل من الممكن تجديد المعلومات حول العامل المعدي في غياب تعبيره الظاهري (الفيروسات المدمجة في الجينوم، الجينات "الصامتة").

لإجراء تحليل الحمض النووي، يتم تغيير طبيعة العينة من أجل الحصول على هياكل مفردة تتفاعل معها جزيئات مسبار الحمض النووي الريبي (DNA) أو الحمض النووي الريبي (RNA). لتحضير المجسات، يتم استخدام أقسام مختلفة من الحمض النووي (أو الحمض النووي الريبي) المعزولة من مصدر طبيعي (على سبيل المثال، كائن حي دقيق معين)، والتي يتم تقديمها عادة في شكل تسلسلات جينية في البلازميدات الناقلة، أو يتم استخدام أليغنوكليوتيدات مركبة كيميائيًا. في بعض الحالات، يتم استخدام مستحضرات الحمض النووي الجينومي المتحلل إلى أجزاء كمسبار، وأحيانًا يتم استخدام مستحضرات الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وخاصةً الحمض النووي الريبي (RNA) الريبوسومي في كثير من الأحيان. يتم استخدام نفس المؤشرات كتسمية كما هو الحال في أنواع مختلفة من التحليل الكيميائي المناعي: النظائر المشعة، الفلورسينات، المنظار الحيوي (مع مزيد من التطوير بواسطة مركب إنزيم الأفيدين)، إلخ.

يتم تحديد ترتيب التحليل من خلال خصائص المسبار المتاح

حاليًا، يتم استخدام المجموعات التجارية التي تحتوي على جميع المكونات الضرورية بشكل متزايد.

في معظم الحالات، يمكن تقسيم إجراء التحليل إلى المراحل التالية: إعداد العينة (بما في ذلك استخراج الحمض النووي وتمسخه)، وتثبيت العينة على حامل (في أغلب الأحيان مرشح غشاء بوليمر)، والتهجين المسبق، والتهجين نفسه، وغسل المنتجات غير المرتبطة، والكشف عن . في حالة عدم وجود إعداد قياسي للحمض النووي أو مسبار RNA، يتم الحصول عليه أولاً ووضع علامة عليه.

لإعداد عينة، قد يكون من الضروري "تنمية" مادة الاختبار بشكل أولي لتحديد مستعمرات البكتيريا الفردية أو زيادة تركيز الفيروسات في مزرعة الخلية. يتم تنفيذها أيضًا التحليل المباشرعينات من مصل الدم والبول، عناصر على شكلالدم أو الدم الكامل لوجود عامل معدي. لتحرير الأحماض النووية من الهياكل الخلوية، يتم إجراء تحلل الخلايا، وفي بعض الحالات تتم تنقية تحضير الحمض النووي باستخدام الفينول.

يحدث تمسخ الحمض النووي، أي انتقاله إلى شكل مفرد، عند معالجته بالقلويات. يتم بعد ذلك تثبيت عينة الحمض النووي على دعامة، وهي غشاء من النيتروسليلوز أو النايلون، عادة عن طريق الحضانة لمدة 10 دقائق إلى 4 ساعات عند 80 درجة مئوية في الفراغ. علاوة على ذلك، في عملية التهجين المسبق، يتم تعطيل مواقع الارتباط الحرة لتقليل التفاعل غير المحدد للمسبار مع الغشاء. تستغرق عملية التهجين من 2 إلى 20 ساعة، وذلك حسب تركيز الحمض النووي في العينة وتركيز المسبار المستخدم وحجمه.

بعد اكتمال التهجين وغسل المنتجات غير المرتبطة، يتم الكشف عن المجمع المتكون. إذا كان المسبار يحتوي على ملصق مشع، فلإظهار التفاعل، يتم تعريض الغشاء لفيلم فوتوغرافي (تصوير إشعاعي ذاتي). بالنسبة للتسميات الأخرى، يتم استخدام الإجراءات المقابلة.

والأكثر واعدة هو الحصول على مجسات غير مشعة (ما يسمى بالبرد). وعلى نفس الأساس، يجري تطوير تقنية التهجين، مما يجعل من الممكن إثبات وجود العامل الممرض في الاستعدادات المقطعية وثقوب الأنسجة، وهو أمر مهم بشكل خاص في التحليل المرضي (التهجين في الموقع).

كانت الخطوة المهمة في تطوير طرق فحص الجينات هي استخدام تفاعل تضخيم البوليميراز (PCR). يتيح هذا النهج زيادة تركيز تسلسل DNA محدد (معروف مسبقًا) في العينة عن طريق تصنيع نسخ متعددة في المختبر. لتنفيذ التفاعل، تتم إضافة تحضير إنزيم بوليميريز الحمض النووي، وفائض من ديوكسينوكليوتيدات للتوليف وما يسمى بالبادئات إلى عينة الحمض النووي قيد الدراسة - نوعان من أليغنوكليوتيدات بحجم 2025 قاعدة تتوافق مع الأقسام الطرفية من تسلسل الحمض النووي للاهتمام. يجب أن تكون إحدى البادئات نسخة من بداية منطقة القراءة لشريط الحمض النووي المشفر في اتجاه القراءة 53، والثانية يجب أن تكون نسخة من الطرف المقابل للشريط غير المشفر. ثم، مع كل دورة من تفاعل البلمرة، يتضاعف عدد نسخ الحمض النووي.

لتحقيق الارتباط التمهيدي، من الضروري تمسخ الحمض النووي (الذوبان) عند 94 درجة مئوية، يليه جلب الخليط إلى 40-55 درجة مئوية.

لتنفيذ التفاعل، تم تصميم حاضنات العينات الدقيقة القابلة للبرمجة للتبديل بسهولة بين التغيرات في درجة الحرارة المثلى لكل مرحلة من مراحل التفاعل.

رد فعل التضخيم يمكن أن يزيد بشكل كبير من حساسية التحليل أثناء فحص الجينات، وهو أمر مهم بشكل خاص في التركيزات المنخفضة من العامل المعدي.

إحدى المزايا المهمة لفحص الجينات بالتضخيم هي القدرة على دراسة الكميات دون المجهرية من المواد المرضية.

ميزة أخرى لهذه الطريقة، والأكثر أهمية لتحليل المواد المعدية، هي القدرة على تحديد الجينات المخفية (الصامتة). من المؤكد أن الطرق المرتبطة باستخدام فحص الجينات سيتم إدخالها على نطاق أوسع في ممارسة تشخيص الأمراض المعدية لأنها أصبحت أبسط وأرخص.

تعد طرق ELISA وRIF ذات طبيعة نوعية أو شبه كمية إلى حد كبير. عند التركيزات المنخفضة جدًا من المكونات، لا يمكن اكتشاف تكوين مركب الجسم المضاد للمستضد سواءً بالعين المجردة أو باستخدام وسائل بسيطة. يمكن إجراء الإشارة إلى مجمع الجسم المضاد للمستضد في مثل هذه الحالات إذا تم إدخال علامة في أحد المكونات الأولية للمستضد أو الجسم المضاد، والتي يمكن اكتشافها بسهولة بتركيزات مماثلة للتركيز المحدد للحليلة.

يمكن استخدام النظائر المشعة (على سبيل المثال، 125I)، والمواد الفلورية، والإنزيمات كتسميات.

اعتمادًا على الملصق المستخدم، هناك طرق تحليل المناعة الإشعاعية (RIA)، والمناعة الفلورية (FIA)، ومقايسة الامتصاص المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، وما إلى ذلك. السنوات الاخيرةلقد حظيت تقنية ELISA بالاستخدام العملي على نطاق واسع، وذلك بسبب إمكانية استخدامها التحديدات الكمية, حساسية عاليةوخصوصية وأتمتة المحاسبة.

طرق المقايسة المناعية الإنزيمية هي مجموعة من الطرق التي تسمح باكتشاف مجمع الأجسام المضادة للمستضد باستخدام ركيزة يتم تقطيعها بواسطة إنزيم وتنتج لونًا.

يتمثل جوهر الطريقة في الجمع بين مكونات تفاعل الجسم المضاد للمستضد مع ملصق إنزيم مُقاس. يتم تمييز المستضد أو الجسم المضاد الذي يتفاعل بإنزيم. بناءً على تحول الركيزة تحت تأثير الإنزيم، يمكن للمرء الحكم على كمية المكون المتفاعل في تفاعل الجسم المضاد للمستضد. انزيم في في هذه الحالةبمثابة علامة رد الفعل المناعيويسمح لك بمراقبتها بصريًا أو بالأداة.

تعتبر الإنزيمات علامات مريحة للغاية لأن خصائصها التحفيزية تسمح لها بالعمل كمضخمات، حيث يمكن لجزيء إنزيم واحد أن يعزز تكوين أكثر من 1 × 10 جزيئات من منتج التفاعل التحفيزي في الدقيقة. من الضروري اختيار إنزيم يحتفظ بنشاطه التحفيزي لفترة طويلة، ولا يفقده عند الارتباط بمستضد أو جسم مضاد، وله خصوصية عالية فيما يتعلق بالركيزة.

الطرق الرئيسية لإنتاج الأجسام المضادة الموسومة بالإنزيم أو المستضدات والمقارنات هي: الهندسة الكيميائية والمناعية والوراثية. الإنزيمات الأكثر استخدامًا في ELISA هي بيروكسيداز الفجل، الفوسفاتيز القلوي، الجالاكتوزيداز، إلخ.

للكشف عن نشاط الإنزيم في مجمع الجسم المضاد للمستضد بغرض التسجيل البصري والآلي للتفاعل، يتم استخدام ركائز مولدة للضوء، والتي تكتسب محاليلها، عديمة اللون في البداية، لونًا أثناء التفاعل الأنزيمي، وتتناسب شدته مع الكمية من الانزيم. وبالتالي، للكشف عن نشاط بيروكسيداز الفجل في ELISA في المرحلة الصلبة، يتم استخدام حمض 5-أمينوساليسيليك، الذي ينتج لونًا بنيًا كثيفًا، وأورثو فينيلينيديامين، الذي ينتج لونًا برتقاليًا أصفر، كركيزة. للكشف عن نشاط الفوسفاتيز القلوي وβ-جالاتوسيداز، يتم استخدام نيتروفينيل فوسفات ونيتروفينيل جالاكتوزيدات، على التوالي.

يتم تحديد نتيجة التفاعل في تكوين منتج ملون بصريا أو باستخدام مقياس الطيف الضوئي الذي يقيس امتصاص الضوء بطول موجي معين.

هناك العديد من الخيارات لإجراء ELISA. هناك خيارات متجانسة وغير متجانسة.

وفقا لطريقة الإنتاج يتم التمييز بين طرق ELISA التنافسية وغير التنافسية. إذا كان في المرحلة الأولى فقط المركب الذي تم تحليله ومراكز الارتباط المقابلة له (المستضد والأجسام المضادة المحددة) موجودًا في النظام، فإن الطريقة تكون غير تنافسية. إذا كان المركب الذي تم تحليله (المستضد) ونظيره (المستضد المسمى بالإنزيم) موجودين في المرحلة الأولى، ويتنافسان مع بعضهما البعض للارتباط بمراكز الارتباط المحددة (الأجسام المضادة) التي تعاني من نقص المعروض، فإن الطريقة تكون تنافسية. في هذه الحالة، كلما زاد عدد مستضد الاختبار الذي يحتوي عليه المحلول، قل عدد المستضدات المرتبطة.

طريقة الأجسام المضادة الفلورية (MFA) أو التفاعل المناعي (RIF)

طريقة التألق المناعي هي الطريقة المفضلة للكشف السريع والتعرف على الكائنات الحية الدقيقة غير المعروفة في مادة الاختبار.

Ag + AT + إلكتروليت = توهج معقد في الأشعة فوق البنفسجية

مصل الميكروب المسمى بالفلوروكروم

الصبغة المستخدمة غالبًا هي فلوريسئين إيزوثيوسيانات FITC

عند دراسة هذه الطريقة، يتم استخدام المجهر الفلوري.

التدريج RIF

يتم تطبيق 30 ميكرولتر من محلول الأجسام المضادة المسمى FITC على اللطاخة.

ضع الكوب في حجرة رطبة واحتفظ به في درجة حرارة الغرفة لمدة 20-25 دقيقة، أو في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.

اغسل الزجاج في آلة التشغيل ماء الصنبورلمدة دقيقتين، اشطفيه بالماء المقطر وجففيه بالهواء.

يتم وضع قطرة من السائل المتصاعد على اللطاخة المجففة، ثم يتم تغطية اللطاخة بغطاء ساترة ويتم فحصها بالمجهر باستخدام مجهر فلورسنت أو ملحق فلورسنت بالمجهر الضوئي التقليدي.