رد فعل التراص (من اللات. التراص- لصق) - لصق الكريات (البكتيريا، خلايا الدم الحمراء، الخ) بواسطة الأجسام المضادة في وجود الشوارد.
رد فعل التراصيتجلى في شكل رقائق أو رواسب تتكون من جسيمات (على سبيل المثال، البكتيريا) "ملتصقة ببعضها البعض" بواسطة الأجسام المضادة (الشكل 7.37). يستخدم تفاعل التراص من أجل: تحديد العامل الممرض المعزول من المريض؛ تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض. تحديد فصائل الدم.
أرز. 7.37 أ، ب. رد فعل التراص معالغلوبولين المناعي- الأجسام المضادة (أ) ومفتش– الأجسام المضادة (ب)
1. تحديد العامل الممرض المعزول من المريض رد فعل تقريبيالتراص على الزجاج (الشكل 7.38). يتم إضافة معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى قطرة من المصل المتراص (التخفيف 1:20). أشكال راسب ندف.
أرز. 7.38.
تفاعل تراص واسع النطاق مع العامل الممرض المعزول من المريض (الشكل 7.39). يضاف معلق من البكتيريا المعزولة من المريض إلى تخفيفات المصل المتراص.
أرز. 52
2. تحديد الأجسام المضادة في مصل دم المريض
تفاعل التراص التفصيلي مع مصل دم المريض (الشكل 7.39). يتم إضافة التشخيص إلى التخفيفات من مصل المريض.
- التراص مع O-diagnosticum (البكتيريا التي تم قتلها بالحرارة، مع الاحتفاظ بمستضد O) يحدث في شكل تراص دقيق الحبيبات.
- التراص مع H-diagnosticum (البكتيريا التي يقتلها الفورمالديهايد، مع الاحتفاظ بمستضد H السوطي) كبير ويحدث بشكل أسرع.
3. تفاعل التراص لتحديد فصائل الدميتم استخدام تفاعل التراص لتحديد فصائل الدم لإنشاء نظام ABO (الجدول ب) باستخدام تراص كريات الدم الحمراء مع الأجسام المضادة في المصل المناعي ضد مستضدات فصيلة الدم A (I)، B (III). والضابط هو: المصل الذي لا يحتوي على أجسام مضادة، أي. فصيلة الدم AB (IV) ؛ المستضدات الموجودة في خلايا الدم الحمراء للمجموعات A (II)، B (III). لا يحتوي التحكم السلبي على مستضدات، أي يتم استخدام كريات الدم الحمراء من المجموعة O (I).
الجدول 7.6. تحديد فصائل الدم ABO
| نتائج رد الفعل |
مجموعة |
|
|
الانتماء |
||
|
بحثت |
||
|
خلايا الدم الحمراء مع |
المصل (البلازما) |
|
|
معيار |
مع المعيار |
|
|
الأمصال | ||
رد فعل تراص مفصل (را). لتحديد AT في مصل دم المريض، أ تفاعل تراص واسع النطاق (RA). للقيام بذلك، يتم إضافة التشخيص إلى سلسلة من التخفيفات من مصل الدم - تعليق الكائنات الحية الدقيقة المقتولة أو الجزيئات مع Ag الممتص. الحد الأقصى لإعطاء التخفيف التلصيق Ag يسمى عيار المصل.
أنواع تفاعل التراص (را) للكشف عن AT - اختبار قطرة الدم لمرض التولاريميا (مع تشخيص مطبق على قطرة دم وظهور تراصات بيضاء مرئية) واختبار هادلسون لداء البروسيلات (مع تشخيص ملطخ بالبنفسج الجنطياني مطبق على قطرة دم المصل).
تفاعل التراص التقريبي (RA)
للتعرف على الكائنات الحية الدقيقة المعزولة، يتم وضع RA تقريبي على شرائح زجاجية. وللقيام بذلك، تتم إضافة ثقافة العامل الممرض إلى قطرة من المصل المضاد التشخيصي القياسي (المخفف 1:10، 1:20). في نتيجة ايجابيةإجراء رد فعل مفصل مع زيادة التخفيفات من المصل المضاد.
رد فعليعتبر إيجابيا إذا لوحظ التراص في التخفيفات القريبة من عيار المصل التشخيصي.
منظمة الدول الأمريكية. الجسدية O- Agsتتميز بأنها مستقرة للحرارة ويمكنها تحمل الغليان لمدة ساعتين، وعند تفاعلها مع AT، فإنها تشكل كتلًا دقيقة الحبيبات.
تذمر. N-Ag (السوطيات)وهي قابلة للحرارة وتتحلل بسرعة عند 100 درجة مئوية، وكذلك تحت تأثير الإيثانول. في التفاعلات مع المصل المضاد H، بعد ساعتين من الحضانة، تتشكل رقائق كبيرة فضفاضة (تتكون من البكتيريا الملتصقة مع الأسواط).
السادس آربكتيريا التيفوئيد مستقرة نسبيًا للحرارة (تتحمل درجات حرارة تتراوح بين 60-62 درجة مئوية لمدة ساعتين)؛ عندما يتم احتضانها مع مصل Vi المضاد، يتم تشكيل تراص ذو حبيبات دقيقة.
تفاعلات التراص الدموي المباشر
أبسط هذه تفاعلات - التلصيقخلايا الدم الحمراء، أو التراص الدموي، تستخدم لتحديد فصائل الدم في نظام ABO. لتحديد التلصيق(أو عدم وجودها) استخدم الأمصال المضادة القياسية مع الراصات المضادة لـ A وB. يسمى التفاعل مباشرا، حيث أن العناصر التي تتم دراستها هي مكونات طبيعية لخلايا الدم الحمراء.
مشترك مع التراص الدموي المباشرالتراص الفيروسي له آليات. العديد من الفيروسات قادرة على التصاق كريات الدم الحمراء في الطيور والثدييات تلقائيًا، وإضافتها إلى معلق كريات الدم الحمراء تؤدي إلى تكوين مجاميع منها.
رد فعل التراص رد فعل التراص
(RA) - طريقة لتحديد و تحديد الكميات Ag و At، بناءً على قدرتهما على تكوين تكتلات مرئية للعين المجردة. في قسم الأمراض المعدية. للأمراض أو لأغراض أخرى، يتم استخدامه للتعرف على الميكروبات والخلايا غير المعروفة، لتحديد وجود وكمية Ab في الدم والسوائل الأخرى. يعتمد مبدأ التحديد على خصوصية التفاعل بين Ag و Ab ويتكون من إيجاد المعلوم من المجهول. هناك العديد من الخيارات لـ RA: الكمية والنوعي، وأنبوب الاختبار والزجاج، والحجمي والقطيري، والطرق التقليدية، والمتسارعة، والسريعة. لمرحلة RA تحتاج إلى: 1) دم s-ka.وفي البديل الخاص بتحديد نوع (var) البكتيريا، يتم استخدام اختبارات التراص الصناعي، التي يتم إنتاجها عن طريق تحصين الأرانب. وفي البديل مع تحديد فصيلة Ab، يتم أخذ عينة دم من الاختبار. الناس أو الحيوانات. يجب أن يكون المحلول معقمًا وخاليًا من الجزيئات العالقة. تحضير التخفيف الأساسي في محلول ملحي. وينبغي أن يكون أقل من 2-4 مرات من العيار التشخيصي لهذا المرض؛ 2) اي جي.في نسخة التفاعل مع تحديد النوع Ab، يتم استخدام مجموعات التشخيص الصناعي؛ في البديل مع تحديد Ag، يتم إعداد التشخيصات نفسها في شكل تعليق 1-3 مليار في محلول ملحي من اختبار أجار لمدة 18-20 ساعة (أقل في كثير من الأحيان مرق). يتم تعطيل الميكروب عن طريق التسخين في حمام مائي عند 70 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة أو عن طريق الحضانة لمدة 24 ساعة عند 37 درجة مئوية مع الفورمالديهايد (التركيز النهائي 0.2٪)؛ 3) المنحل بالكهرباء في شكل محلول ملحي.تقنية التدريج الأنبوب التسلسلي الحجمي RA لتحديد عيار Ab في s-ki: يتم تحضير عدة صفوف من تخفيفات العمل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki. يعتمد عدد الصفوف على عدد التشخيصات المأخوذة في التجربة؛ ويتم تحديد العدد وعوامل التخفيف بواسطة العيار التشخيصي للمرض المشتبه فيه. يجب أن تحتوي السلسلة على الأقل على تخفيف يتوافق مع عيار Ab التشخيصي، وتخفيفين أدناه وتخفيفين فوقه. على سبيل المثال، إذا كان عيار التشخيص هو 1:100، فعندئذ باستخدام الطريقة الحجمية لتحديد مرحلة التهاب المفاصل الروماتويدي، يجب تحضير التخفيفات التالية: 1:25، 1:50، 1:100، 1:200، 1"400؛ بالتنقيط الطريقة، ليست هناك حاجة للتخفيف الأول (1:25)، ولكن هناك حاجة إلى تخفيف آخر أعلى - 1:800. بحث علميتتم معايرة s-ku ل رد فعل سلبي. يتم تخفيفه على النحو التالي: يُسكب 0.25 مل من المحلول الملحي في جميع أنابيب الاختبار، باستثناء الأنبوب الأول، عندما يتم التفاعل بحجم 0.5 مل، و0.5 مل عندما يتم التفاعل بحجم 1. مل. صب 0.25 (0.5) مل من التخفيف الرئيسي في أنبوبي الاختبار الأول والثاني، من أنبوب الاختبار الثاني، إلى حجم القطع و تربية s-kوزيادة مرتين، يتم نقل 0.25 (0.5) مل إلى الثالث، من الثالث إلى الرابع، وما إلى ذلك. إلى الأخير، من القطع، يتم سكب 0.25 (0.5) مل في كل شيء لتحقيق التوازن بين الأحجام. يتم تنفيذ كل تخفيف باستخدام ماصة منفصلة. إذا تم أخذ العديد من التشخيصات في التجربة، فسيتم إعداد سلسلة التخفيفات الخاصة بكل منها بنفس الطريقة. يتم إضافة التشخيص إلى كل تخفيف لأنبوب الاختبار في حجم يساوي حجم أنبوب الاختبار، ونتيجة لذلك يتم مضاعفة التخفيف في كل أنبوب اختبار. تتوافق التجربة مع التحكم s-ki (0.25 - 0.5 مل من التخفيف الرئيسي لـ s-ki ونفس الكمية من المحلول الملحي) والتحكم Ag (0.25 - 0.5 مل من التشخيص ونفس الكمية من المحلول الملحي). إذا تم استخدام عدة أدوات تشخيصية في التجربة، فسيكون لكل منها سيطرة خاصة به على المستضد. يرج الحامل مع أنابيب الاختبار جيدا ويوضع في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات، ثم يترك في درجة حرارة الغرفة حتى اليوم التالي، وبعد ذلك يتم تسجيل PA على أساس كمية الرواسب ودرجة تصفية السائل. يتم تحديد هذه المؤشرات، اعتمادًا على طبيعة الراصات، بالعين المجردة على خلفية داكنة، في منظار الراصات أو فوق السطح المقعر لمرآة المجهر. تبدأ المحاسبة بالضوابط: يجب أن يكون التحكم C شفافًا، ويجب أن يكون Ag غائمًا بشكل موحد (بعد رج الأنبوب). إذا كانت الضوابط جيدة، حدد وجود ودرجة التراص في جميع أنابيب الاختبار، والتي يتم تحديدها بواسطة الإيجابيات: الرواسب الكبيرة والتطهير الكامل للسائل - 4 إيجابيات؛ رواسب كبيرة وتصفية غير كاملة للسائل - 3 إيجابيات؛ الرواسب الملحوظة والتصفية الملحوظة للسائل هما إيجابيتان. بعد ذلك، يتم تحديد العيار: أعلى تخفيف مع شدة تراص لا تقل عن 2 زائد. بحث بعنوان تتم مقارنة s-ki مع العيار التشخيصي لهذا المرض. إذا تم فحص العيار. s-ki أقل مرتين من القيمة التشخيصية، ويتم تقييم التفاعل على أنه مشكوك فيه؛ إذا كان العيار متساويا التشخيص - كيفإيجابية ضعيفة إذا كان أعلى من 2-4 مرات، فهو يعتبر إيجابيًا، وإذا كان أعلى 8 مرات أو أكثر، فهو يعتبر إيجابيًا بشكل حاد. مع التوزيع الواسع النطاق لـ Ab الأشخاص الأصحاءلتقييم التهاب المفاصل الروماتويدي، يتم استخدام زيادة في عيار Ab. لتحديد نوع Ar في RA التسلسلي، يجب أن يتوافق عدد الصفوف مع الرقم المأخوذ لتحديد الهوية الاختبارات التشخيصية. من التخفيف الرئيسي للاختبار التشخيصي، يتم إعداد سلسلة من التخفيفات المزدوجة المتعاقبة بنفس الطريقة كما في RA لتحديد عيار Ab. تعتمد عوامل التخفيف على عيار اختبار التراص، وفي التجربة من الضروري وجود تخفيف يساوي عيار الاختبار، وكذلك أقل منه بمقدار 2، 4، 6، 8 مرات، على سبيل المثال، إذا كانت عيار الاختبار التشخيصي هو 1 3200، فيجب عليك استخدام التخفيفات 1 3200، 1 1600، 1 800، 1 400، 1 200 ويتم إضافة نفس حجم Ag الذي تم اختباره إلى تخفيفات الاختبار، ونتيجة لذلك، يتم تخفيف اختبار Ag. يزيد الاختبار بمقدار مرتين. يتم إضافة عنصري تحكم للاختبار وAg إلى التجربة. إذا كان في التجربة عدة s-k، فإن كل واحد منهم يحتاج إلى التحكم الخاص به. عند الانتهاء من التفاعل، يتم هز الحامل بقوة ووضعه في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية، تم أخذ النتائج في الاعتبار كما هو موضح أعلاه، وتقييم التفاعل له ميزات، من أجل استخلاص نتيجة حول مدى امتثال الدراسة. عند أخذ Ag في التجربة، يجب أن يتوافق عيار التفاعل مع نصف عيار الاختبار التشخيصي القياسي على الأقل. تعتبر العيارات من 1 4 وما دون بمثابة تفاعل جماعي بالتنقيط مديختلف التدريج لـ RA عن الحجمي حيث يتم تخفيف s-ku في حجم 1 مل، ويستخدم Ag بتركيز أعلى (10 مليار/ مل) ويتم إضافته 1 - 2 قطرات في أنبوب اختبار ويعتبر تخفيف الدواء بعد إضافة Ag دون تغيير، وإلا فإن طريقة التثبيت والتسجيل والتقييم تشبه الطريقة الحجمية
(المصدر: قاموس مصطلحات علم الأحياء الدقيقة)
الدراسات الميكروبيولوجية المناعية
تستخدم الطرق المناعية لحل العديد من المشاكل:
1. تقييم الحالة الجهاز المناعيشخص ( الحالة المناعية) حسب التعريف الكمي و الخصائص الوظيفيةخلايا الجهاز المناعي ومنتجاتها.
2. تحديد تكوين وخصائص الأنسجة البشرية: فصائل الدم، عامل Rh، مستضدات الزرع.
3. تشخيص الأمراض المعدية ومقاومتها من خلال الكشف عن عيارات الأجسام المضادة (التشخيص المصلي) وتحديد المستضدات المسببة للأمراض في الجسم، وتحديد التفاعلات الخلوية لهذه المستضدات.
4. التعرف المصلي على مزارع البكتيريا والفيروسات المعزولة من جسم الإنسان والحيوان.
5. الكشف في جسم الإنسان وفي بيئة خارجيةأي مواد ذات خصائص مستضدية أو ناشبة (هرمونات، إنزيمات، سموم، أدوية، عقاقير، إلخ).
6. تحديد الحالات المرضية المناعية والحساسية وزراعة الأعضاء والتفاعلات المضادة للأورام.
عملية التفاعل بين المستضد والجسم المضاد ردود الفعل المصليةيحدث على مرحلتين:
1) محدد- مرحلة التفاعل التي يحدث فيها مزيج تكميلي من المراكز النشطة للأجسام المضادة (مظلات) وحواتم المستضد. تستمر هذه المرحلة عادةً بضع ثوانٍ أو دقائق؛
2) غير محدد- مرحلة الظهور، تتميز علامات خارجيةتشكيل المجمعات المناعية. يمكن أن تتطور هذه المرحلة من عدة دقائق إلى عدة ساعات.
يحدث التفاعل النوعي الأمثل للأجسام المضادة مع المستضد في محلول متساوي التوتر مع درجة حموضة قريبة من الحياد. يمكن أن يترافق تفاعل الجسم المضاد مع المستضد في النظام المختبري مع حدوث عدة ظواهر
· التلصيق،
· تساقط،
· التحلل.
المظاهر الخارجيةتعتمد التفاعلات على الخواص الفيزيائية والكيميائية للمستضد (حجم الجسيمات، الحالة الفيزيائية)، فئة ونوع الأجسام المضادة (الكاملة وغير الكاملة)، وكذلك الظروف التجريبية (متوسطة الاتساق، تركيز الملح، الرقم الهيدروجيني، درجة الحرارة).
يضمن تعدد المستضدات والأجسام المضادة تكوين مجاميع مرئية للعين المجردة. يحدث هذا وفقًا لنظرية تكوين الشبكة، والتي بموجبها يتم ربط الأجسام المضادة وجزيئات المستضد الأخرى بشكل تسلسلي بمركب المستضد والجسم المضاد الناتج. ونتيجة لذلك، يتم تشكيل هياكل الشبكة، والتي تتحول إلى مجاميع تترسب. تعتمد طبيعة وشدة التفاعل على النسبة الكمية للمستضدات والأجسام المضادة. تحدث التفاعلات الأكثر شدة عندما تكون الكواشف بنسب متساوية.
المتطلبات المسبقةتكوين الشبكة (الشبكات) - وجود أكثر من ثلاثة محددات مستضدية لكل جزيء مستضد ومركزين نشطين لكل جزيء جسم مضاد. جزيئات المستضد هي عقد شعرية، وجزيئات الجسم المضاد هي روابط متصلة. منطقة النسب المثالية (منطقة التكافؤ) لتركيزات المستضد والأجسام المضادة، عندما لا يتم اكتشاف مستضدات حرة أو أجسام مضادة حرة في الطاف بعد تكوين الرواسب.
تتشكل المجاميع التي يمكن أن تترسب عندما تتحد المستضدات مع الأجسام المضادة الكاملة. الأجسام المضادة غير كاملة(أحادية التكافؤ) لا تسبب تكوين هياكل شبكية وتجمعات كبيرة. للكشف عن مثل هذه الأجسام المضادة، استخدم طرق خاصةعلى أساس استخدام مضادات الجلوبيولين (تفاعل كومبس).
تستخدم التفاعلات المصلية، بسبب خصوصيتها وحساسيتها العالية، للكشف عن المستضدات والأجسام المضادة وتحديد كميتها. يتم التعبير عن كمية الكواشف المناعية في التفاعلات بواسطة العيار - الحد الأقصى للتخفيف من المصل أو المستضد الذي لا يزال يتم ملاحظة التفاعل فيه.
تستخدم التفاعلات المصلية في المختبرات الميكروبيولوجية والمناعية لغرضين:
1) للتعرف المصلي على الكائنات الحية الدقيقة والسموم والمستضدات بشكل عام باستخدام جسم مضاد معروف (مصل التشخيص المناعي)،
2) للتشخيص المصلي - تحديد طبيعة الجسم المضاد في مصل دم المريض للأمراض البكتيرية والفيروسية والأمراض المعدية الأخرى في كثير من الأحيان باستخدام مستضد معروف (التشخيص).
لتحديد النوع العام والنوع ونوع المستضد، يلزم إجراء اختبارات مناعية معروفة. الأمصال التشخيصية. يتم الحصول عليها عن طريق الإعطاء المتكرر للحيوانات (الأرانب عادة) بجرعات متزايدة من الكائنات الحية الدقيقة المقتولة أو الحية، ومنتجات تحللها، والسموم المحايدة أو المحلية. بعد دورة معينة من تحصين الحيوانات، يتم إجراء عملية إراقة دماء كبيرة أو نزيف كلي للحيوان. يتم وضع الدم المجمع في وعاء معقم أولاً في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 4 - 6 ساعات لتسريع عملية التخثر، ثم في صندوق ثلج لمدة يوم. يتم امتصاص المصل الشفاف الناتج في وعاء معقم، وتضاف المواد الحافظة، ويتم تحديد عيار الأجسام المضادة، وفحص العقم وسكبه في أمبولات.
يستخدم غير ممتزو ممتزالأمصال التشخيصية. الأمصال غير الممتصة لديها التتر عاليةالأجسام المضادة، ولكنها قادرة على إعطاء ردود فعل جماعية (متقاطعة).
تتميز الأمصال الممتزة بخصوصية صارمة للعمل (تتفاعل فقط مع مستضد متماثل). تسمى الأمصال التي تحتوي على أجسام مضادة لمستضد واحد محدد فقط مستقبل أحادي.
كما أنها تنتج أمصال تحمل علامات الفلوروكروم والإنزيمات والنظائر المشعة، مما يجعل من الممكن اكتشاف حتى آثار المستضد بدرجة عالية من الدقة.
يتم استخدام معلقات البكتيريا الحية أو المقتولة ومنتجات تحللها والسموم والفيروسات كمستضدات (تشخيصات) في التفاعلات المصلية. وفي بعض الحالات، يتم استخدام مستخلصات أو مستضدات معزولة كيميائيًا من الكائنات الحية الدقيقة والأنسجة الحيوانية.
يمكن تقسيم جميع الطرق الميكروبيولوجية المناعية إلى 3 مجموعات:
1) على أساس التفاعل المباشر للمستضد مع الجسم المضاد(ظواهر التراص، هطول الأمطار، التراص الدموي، الشلل، وما إلى ذلك)؛
2) على أساس التفاعل الوسيط للمستضد مع الجسم المضاد(تفاعلات التراص الدموي غير المباشر، التراص، تراص اللاتكس، تكتل الكربون، تراص البنتونيت، التثبيت التكميلي، وما إلى ذلك)؛
3) استخدام الأجسام المضادة المسمى أو المستضدات(طريقة الأجسام المضادة الفلورية، الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم والمقايسة المناعية الإشعاعية وغيرها من الطرق).
تفاعلات التراص
تتضمن هذه التفاعلات مستضدات على شكل جزيئات (خلايا ميكروبية، وخلايا دم حمراء، ومستضدات جسيمية أخرى)، والتي يتم لصقها معًا بواسطة الأجسام المضادة وتترسب.
لإجراء رد فعل تراص(RA) هناك حاجة إلى ثلاثة مكونات: 1) المستضد (الراصات)؛
2) الأجسام المضادة (الراصات)
3) المنحل بالكهرباء (محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر).
تفاعل التراص التقريبي (RA)
يتم وضع لوحة إرشادية أو لوحة RA على شريحة زجاجية في درجة حرارة الغرفة. للقيام بذلك، استخدم ماصة باستور لتطبيق قطرة من المصل عند التخفيف من 1:10 إلى 1:20 وقطرة تحكم من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر بشكل منفصل على الزجاج. يتم إدخال المستعمرات أو الثقافة اليومية للبكتيريا (قطرة من التشخيص) في كل من الحلقات البكتريولوجية وخلطها جيدًا. يتم أخذ ردود الفعل في الاعتبار بصريًا بعد بضع دقائق، وأحيانًا باستخدام عدسة مكبرة (x5). مع RA الإيجابي، يُلاحظ ظهور رقائق كبيرة وصغيرة في قطرة المصل؛ مع RA السلبي، يظل المصل غائمًا بشكل موحد.
رد فعل تراص مفصلمن أجل التعرف على عيار الأجسام المضادة المحددة لدى المريض.
يتم إجراء RA الكامل للتشخيص المصلي في مصل المرضى. يتم تخفيفه أيضًا في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر من 1:50 - 1: 100 إلى 1: 800 أو 1: 1600. نظرًا لأن عيار المصل المنخفض قد يحتوي على راصات طبيعية موجودة في الأشخاص الأصحاء أو المرضى الذين لديهم تشخيص آخر (عيار تشخيصي). كمستضد في هذا التفاعل، يتم استخدام التشخيصات - المعلقات المعروفة، عادة للبكتيريا الميتة.
يُسكب أولاً 1 مل من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في أنابيب التراص. يضاف إلى الأول منهما 1 مل من المصل المخفف 1: 100، وبعد خلطه ينقل 1 مل إلى الثاني، ومن الثاني إلى الثالث، وهكذا. تضاف 1-2 قطرة من المعلق البكتيري الذي يحتوي على 3 مليار جسم ميكروبي في 1 مل إلى التخفيفات الثنائية للأمصال الناتجة (من 1:100 إلى 1:1600 أو أكثر). تُرج الأنابيب وتوضع في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة ساعتين، ثم تُحفظ في درجة حرارة الغرفة لمدة 24 ساعة.
يتم أخذ تفاعل التراص التفصيلي في الاعتبار من خلال تقييم كل أنبوب اختبار بشكل تسلسلي، بدءًا من أنابيب التحكم، مع اهتزاز لطيف. يجب ألا يكون هناك تراص في أنابيب التحكم. يتم تمييز شدة تفاعل التراص بالعلامات التالية: ++++ - تراص كامل (رقائق تراص في سائل شفاف مطلق)؛ +++ - التراص غير الكامل (رقائق في سائل براق قليلاً)؛ ++ - تراص جزئي (رقائق واضحة للعيان، السائل غائم قليلا)؛ + - تراص ضعيف ومشكوك فيه - السائل غائم جدًا، ومن الصعب تمييز الرقائق فيه؛ - - غياب التراص (السائل غائم بشكل موحد).
يعتبر عيار المصل هو التخفيف الأخير، حيث يتم تقييم شدة التراص بما لا يقل عن زائدين (++)
محاضرة رقم 16
قاموس
مباشر -مباشرة المقبل دون أي شيء، دون روابط لاحقة.
بشكل غير مباشر– من خلال خلايا أخرى، وليس بشكل مباشر.
انخفاض ≠ زيادة (نشاط الخلية).
يرفض -لا تقبل، ترفض. يرفض الجسم العضو المزروع.
ردود الفعل المناعية.
التفاعلات المناعية هي تفاعلات تفاعل محدد (ارتباط) لمستضد وجسم مضاد أو مستضد وخلايا لمفاوية تائية حساسة.
تحدث هذه التفاعلات في المختبر (في أنبوب اختبار) وفي الجسم الحي (في كائن حي).
تتضمن هذه التفاعلات المصل (المصل)، ولهذا تسمى مصلية.
يتم استخدام الاستجابات المناعية ل تشخيص الأمراض المعدية.في هذه الحالة، يتم تحديد المكون غير المعروف بواسطة المكون المعروف، والذي يعتمد على خصوصية تفاعل المستضد مع الجسم المضاد. لو الأجسام المضادة المعروفة، إذا تستطيع تحديد (اكتشاف) مستضد غير معروف. لو مستضد معروف، ثم يمكنك استخدامه اكتشاف الأجسام المضادة غير المعروفة.
وهكذا يتم استخدام الاستجابات المناعية:
1) ل التشخيص المصلي(التشخيص المصلي) للأمراض -الكشف في مصل الدم للمرضى عن الأجسام المضادة لعامل مسبب محدد لمرض معدي (مستضد معروف) ؛ إذا كانت الأجسام المضادة لأي عامل ممرض موجودة في مصل الدم لشخص مريض، فهذا العامل الممرض هو الذي تسبب في ذلك عدوى;
2) ل التحديد المصلي (التحديد المصلي) للميكروبات -لتحديد نوع العامل الممرض باستخدام الأمصال التشخيصية المناعية (الأجسام المضادة المعروفة)؛ إذا ربطت الأجسام المضادة مسبب المرض المعزول من شخص مريض، فإن هذا الميكروب مطابق للميكروب الذي تم تحصين الحيوان به يستلممصل التشخيص المناعي .
تحدث التفاعلات المناعية على مرحلتين:
1) مرحلة محددة– ربط المركز النشط للجسم المضاد بالمجموعة المحددة للمستضد مع تكوين مجمعات الجسم المضاد للمستضد ؛ تستمر هذه المرحلة بسرعة، ولكن لا يوجد تأثير واضح؛
2) مرحلة غير محددة- مظهر تأثير مرئيتفاعل المستضد والجسم المضاد - الخسارة مسودة(التراص) أو الغيوم(هطول الأمطار) مما يسمح يرىتعليم مجمعات المستضدات والأجسام المضادةواستخلاص استنتاج حول امتثالالمستضد والجسم المضاد لبعضهما البعض.
وتشمل ردود الفعل المناعية تفاعل التراص (RA)، تفاعل الترسيب (RP)، تفاعل التثبيت المكمل (CFR).
رد فعل التراص- هذا هو لصق وترسيب الخلايا الميكروبية أو غيرها (كرات الدم الحمراء) تحت تأثير الأجسام المضادة في وجود المنحل بالكهرباء. التأثير المرئي للتفاعل (ظاهرة التراص) هو تكوين راسب يسمى تراص.
يستخدم هذا التفاعل ل التشخيص المصليو تحديد الهوية المصلية. يستخدم RA للتشخيص المصلي (الكشف عن الأجسام المضادة في مصل الدم للمرضى) حمى التيفودونظيرة التيفية(رد فعل فيدال)، داء البروسيلات(رد فعل رايت) التوليميا وداء البريميات. يستخدم RA لتحديد الهوية المصلية (تحديد نوع العامل الممرض المعزول من المريض). الالتهابات المعوية، السعال الديكي، الكوليراوإلخ.
عناصرتفاعلات:
1. أ مستضد (راصة) –هذه هي خلايا ميكروبية كاملة (غير مدمرة) أو خلايا أخرى ( جسيمي, مستضد غير قابل للذوبان). المضافات- هذا تعليق على قيد الحياةأو قتلالخلايا الميكروبية أو أي خلايا أخرى. يمكن أن تكون المستضدات غير معروفة أو معروفة. الراصة غير المعروفة هي مزرعة ميكروبية معزولة عن جسم المريض ويجب تحديدها. مستضد معروف - التشخيص- دواء تشخيصي - تعليق الموتىالميكروبات الأنواع المعروفةفي محلول ملحي. هذا التعليق غائم (مبهمة)، لأن الخلايا الميكروبية لا تذوب، بل تبقى سليمة. سيتم استخدام الراصات المعروفة للكشف عن الأجسام المضادة غير المعروفة في مصل الدم للمرضى.
2. جسم مضاد (راصة)- موجود في مصل الدم. يمكن أن تكون الأجسام المضادة أيضًا غير معروفة أو معروفة. الأجسام المضادة غير المعروفة التي سيتم تحديدها موجودة في مصل الدم شخص مريض. تم العثور على الأجسام المضادة المعروفة في الأمصال التشخيصية المناعيةالتي تسمى الأمصال المتراصة. يتم استخدامها لتحديد الهوية المصلية، أي. لتحديد مستضد غير معروف - نوع من الثقافة الميكروبية.
3. بالكهرباء– محلول كلوريد الصوديوم 0.9%.
الحصول على اختبار تشخيصي.
يتم غسل ثقافة نقية من مسببات الأمراض من الأنواع المعروفة التي تنمو على أجار مائل (على سبيل المثال، العامل المسبب لحمى التيفوئيد) مع 3-4 مل من محلول متساوي التوتر، وتوضع في أنبوب معقم، ويتم قتل الميكروبات في بعض الطريقة (على سبيل المثال، عن طريق الغليان ويتم تحديد الكثافة (يجب أن يكون هناك 3 مليار خلية ميكروبية في 1 مل). إذا تم قتل الخلايا الميكروبية درجة حرارة عالية، ثم يحصلون على O-diagnosticum (O-antigen)، ولكن إذا تم علاجه بالفورمالدهيد، فإنهم يحصلون على H-diagnosticum (H-antigen).
أمثلة على التشخيص: تشخيص السالمونيلا، تشخيص داء البروسيلات، تشخيص التوليميا.
تحضير الأمصال المتراصة.
يتم حقن الحيوانات (الأرانب عادة) عن طريق الحقن بالتشخيص الميكروبي بجرعات متزايدة 5-7 مرات على فترات ( تنفيذ فرط المناعة)ومن ثم يتم أخذ مصل دمهم الذي يحتوي على أجسام مضادة للميكروبات التي يتم تحضير التشخيص منها. إذا تم إجراء التحصين باستخدام O-diagnosticum، فسيتم الحصول على الأمصال المتراصة O (التي تحتوي على الأجسام المضادة لـ O)، وإذا تم إجراء التحصين باستخدام H-diagnosticum، فسيتم الحصول على الأمصال المتراصة H.
يمكن أن تكون الأمصال الملتصقة غير ممتصأو الأصلي و ممتز.
الأمصال غير الممتصةتحتوي على أجسام مضادة جماعية للعديد من أنواع الميكروبات ذات الصلة الوثيقة.
الأمصال الممتزةتحتوي على أجسام مضادة لواحد أو أكثر من المستضدات لنوع واحد من الميكروبات. إذا كانت الأمصال تحتوي على أجسام مضادة لمستضد واحد فقط، فإنها تسمى مستقبل أحاديأو أحادي التكافؤ,إذا كان لعدة مستضدات - مجموعةالأمصال الممتزة .
أمثلة على الأمصال المتراصة:مصل السالمونيلا أحادي مستقبلة H-المصل، مجموعة السالمونيلا الممتزة O-مصل، مصل مضاد الكوليرا O-مصل، إلخ..
عيارالمصل التراص - أعلى تخفيف للمصل حيث لا يزال يتم اكتشاف تفاعل تراص مع مستضد (يعتمد العيار على كمية الأجسام المضادة في الدم: كلما زاد عدد الأجسام المضادة، زاد عيار المصل).
طرق تنظيم RA.
1. التقريبي (الصفائحي) RA- يتم تنفيذها على الزجاج. ضع قطرتين من المصل وقطرة واحدة من المحلول متساوي التوتر على شريحة زجاجية. يتم إدخال الثقافة الميكروبية في إحدى قطرات المصل وفي قطرة من المحلول متساوي التوتر في حلقة ويتم خلطها. قطرة من محلول متساوي التوتر مع الجراثيم – السيطرة على المستضد، قطرة أمصال خالية من الجراثيم – السيطرة على الأجسام المضادة، قطرة الأمصال مع الميكروبات – خبرة.إذا كان المصل يحتوي على أجسام مضادة تتوافق مع المستضدات الميكروبية التي تمتزج معها، فسوف ترتبط الأجسام المضادة والمستضدات ببعضها البعض على وجه التحديد وبعد 1-3 دقائق ستظهر رقائق تراصية في قطرة الاختبار. يجب أن تكون مراقبة المستضد غائمة وأن تكون مراقبة الأجسام المضادة واضحة. يتم تسجيل نتائج التفاعل بناءً على مظهر الرقائق المتراصة . إذا سقطت الرقائق، فإن رد الفعل إيجابي، أي. يتوافق المستضد مع الجسم المضاد ويمكن استخدام المستضد لتحديد الجسم المضاد أو العكس. إذا بقيت الغيوم، فإن رد الفعل سلبي.
2. رد فعل تراص مفصل -تتم في أنابيب الاختبار. أولاً، قم بإعداد تخفيفات مضاعفة لمصل الدم لشخص مريض من 1:50 إلى 1:1600. يُسكب 1 مل من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر في 6 أنابيب اختبار. يضاف 1 مل من مصل دم المريض بتخفيف 1:50 إلى أنبوب الاختبار الأول، ويخلط ويتم الحصول على تخفيف 1:100، ثم ينقل 1 مل من تخفيف 1:100 إلى أنبوب الاختبار الثاني ويتم الحصول على تخفيف بنسبة 1:200، الخ. يتم الاحتفاظ بأنبوبين للتحكم في المستضد والمصل. إلى عنصر التحكم في المصل، أضف المصل فقط عند تخفيف بنسبة 1:50، إلى عنصر تحكم المستضد - المستضد فقط. أضف 0.1 مل من المستضد التشخيصي (O- أو H-) إلى جميع أنابيب الاختبار الأخرى ثم ضع جميع أنابيب الاختبار في منظم حرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 18-20 ساعة. يتم تسجيل نتائج التفاعل حسب طبيعة وكمية الراسب (التراص) المتكون ودرجة التعكر. يتم المحاسبة فقط مع النتائج التالية في عناصر التحكم: التحكم في المصل - شفاف، التحكم في المستضد - غائم. الأجسام المضادة O تعطي رواسب دقيقة الحبيبات. الأجسام المضادة H - الحبيبات الخشنة. واستنادا إلى أنبوب الاختبار الأخير الذي لا يزال فيه تفاعل التراص مرئيا، تم تأسيسه عيار التشخيص.
أثناء التشخيص المصليالأمراض، فمن المهم ليس فقط اكتشاف أجسام مضادة محددة لمسبب مرض معين، ولكن أيضًا تحديد كميتها، أي. إنشاء مثل هذا عيار الأجسام المضادة لمتى يمكن أن نتحدث عن وجود مرض يسببه هذا العامل الممرض؟ . ويسمى هذا العيار عيار التشخيص.على سبيل المثال، لتشخيص حمى التيفوئيد، تحتاج إلى تحديد عيار جسم مضاد يبلغ 1:400، ولكن ليس أقل. يعطي نتائج أكثر دقة الكشف عن زيادة في الأجسام المضادة في الأمصال المقترنة.يتم جمع مصل المريض في بداية المرض وبعد 3 إلى 5 أيام أو أكثر. إذا زاد عيار الجسم المضاد 4 مرات على الأقل، فيمكننا التحدث عنه المرض الحالي.
إذا تم إجراء تفاعل تراص تفصيلي لتحديد الهوية المصلية، يتم استخدام الأمصال التشخيصية التراصية، مخففة إلى العيار أو إلى نصف عيارها. يعتبر التهاب المفاصل الروماتويدي إيجابيًا إذا تم اكتشاف التراص عند تخفيف قريب من عيار المصل التشخيصي.
