№ 43 Genetski modifikovane vakcine. Principi dobijanja, primjene.
Genetski modifikovane vakcine su lekovi dobijeni korišćenjem biotehnologije, koja se u suštini svodi na genetsku rekombinaciju.
Prvo se dobija gen koji se mora integrisati u genom primaoca. Mali geni se mogu dobiti hemijskom sintezom. Da bi se to postiglo, dešifruje se broj i redoslijed aminokiselina u proteinskom molekulu tvari, zatim se iz ovih podataka određuje redoslijed nukleotida u genu, nakon čega slijedi kemijska sinteza gena.
Velike strukture koje je prilično teško sintetizirati dobivaju se izolacijom (kloniranjem), ciljanom eliminacijom ovih genetskih formacija korištenjem restrikcijskih enzima.
Ciljni gen dobijen jednom od metoda spaja se sa enzimima na drugi gen, koji se koristi kao vektor za ubacivanje hibridnog gena u ćeliju. Kao vektori mogu poslužiti plazmidi, bakteriofagi, ljudski i životinjski virusi. Ekspresirani gen se ubacuje u bakterijski ili životinjska ćelija, koji počinje sintetizirati prethodno neobičnu supstancu koju kodira eksprimirani gen.
Kao primaoci ekspresiranog gena najčešće se koriste E. coli, B. subtilis, pseudomonade, kvasac, virusi, neki sojevi su u stanju da pređu na sintezu strane supstance i do 50% svojih sintetičkih sposobnosti - ovi sojevi se nazivaju superproizvođači.
Ponekad se genetski modifikovanim vakcinama dodaje adjuvans.
Primjeri takvih vakcina su vakcina protiv hepatitisa B (Engerix), sifilisa, kolere, bruceloze, gripe i bjesnila.
Postoje određene poteškoće u razvoju i primjeni:
- dugo vrijeme genetski modifikovani lekovi tretirani su sa oprezom.
- značajna sredstva se troše na razvoj tehnologije za dobijanje vakcine
- pri dobijanju lijekova ovom metodom postavlja se pitanje istovjetnosti dobivenog materijala s prirodnom tvari.
Povezani i kombinovani preparati vakcine. Prednosti. Vakcinska terapija.
Povezane vakcine su preparati koji uključuju nekoliko različitih antigena i omogućavaju imunizaciju protiv više infekcija istovremeno. Ako lijek sadrži homogene antigene, tada se takva povezana vakcina naziva polivakcina. Ako se povezani lijek sastoji od različitih antigena, onda je preporučljivo nazvati ga kombiniranom vakcinom.
Moguća je i kombinovana imunizacija, kada se više vakcina istovremeno primenjuje na različite delove tela, na primer, protiv velikih boginja (kožno) i kuge (potkožno).
Primjer polivakcine je živa polio vakcina koja sadrži atenuirane sojeve virusa poliomijelitisa tipa I, II, III. Primjer kombinovana vakcina je DTP, koji uključuje inaktiviranu korpuskularnu vakcinu protiv pertusisa, difteriju i tetanusni toksoid.
Kombinovane vakcine se koriste u teškim protivepidemijskim situacijama. Njihovo djelovanje je zasnovano na sposobnosti imunološki sistem reaguju na nekoliko antigena istovremeno.
Genetski inženjering je eksperimentalna nauka koja proučava obrasce in vitro konstrukcije i ponašanja funkcionalno aktivnih rekombinantnih molekula DNK u ćeliji primaocu.
Predmet proučavanja genetski inženjering su geni - segmenti DNK koji kodiraju sintezu određenih proteina.
Princip stvaranja genetskog konstruisane vakcine leži u činjenici da se gen koji nas zanima (odgovoran za sintezu imunološkog proteina virusa) „isiječe“ iz DNK virusa pomoću enzima (restrikcionih enzima) i ubacuje, koristeći enzime (ligaze), u DNK vektora (na primjer, u plazmid E. coli - ovu autonomnu kružnu DNK od 4-6 hiljada parova nukleotida, sposobnu da se razmnožava u ćelijama E. soje). Zatim se ova rekombinantna DNK unosi u ćelije E. coli, u kojoj se rekombinantna DNK umnožava (replicira) i dolazi do ekspresije integrisanog gena, odnosno sinteze odgovarajućeg proteina (kodiranog integrisanim genom virusa).
Bakterijske ćelije E. coli se kultivišu u hranljivom mediju i „proizvode“ imunogeni protein virusa koji se izoluje i nakon odgovarajućeg prečišćavanja koristi kao materijal za vakcinu. Međutim, treba napomenuti da mnogi virusni proteini koji se uspješno sintetiziraju u mikroorganizmima imaju vrlo nisku imunogenu aktivnost. Razlog za to su posebnosti formiranja strukture virusnih proteina. U pravilu su glikozilirani i imaju složenu tercijarnu ili kvartarnu strukturu. Tako se hemaglutinin virusa influence nalazi u virionu u obliku trimera, koji se formira od monomernih polipeptida u životinjskim stanicama. Nije moguće dobiti takvu funkcionalno aktivnu strukturu hemaglutinina in vitro. Imunogenost hemaglutinina u virionu je nekoliko hiljada puta veća od one monomernog polipeptida sintetiziranog u bakterijama.
Prilikom proizvodnje genetski modifikovanih vakcina, pored plazmida, kao vektori se koriste fagi, kvasac i životinjski virusi (virus vakcinije, adenovirusi, bakulovirusi i herpesvirusi).
Najveći efekat je postignut sa virusom vakcinije koji se koristi kao vektor. Ovaj virus ima veliki genom (oko 187 hiljada parova baza). Možete ga ukloniti iz značajno područje(oko 30 hiljada parova nukleotida), koji nije od vitalnog značaja za reprodukciju ovog virusa u ćelijama, a na njegovo mesto ubaciti strane gene virusa protiv kojih se vakcina prima. Rezultirajuća rekombinantna DNK je sposobna da se umnožava u tijelu vakcinisanog i izaziva stvaranje imuniteta ne samo protiv velikih boginja, već i protiv virusa čiji je gen ugrađen u njegov genom. Upotreba virusa vakcinije kao vektora za vakcinaciju ima niz prednosti: sposobnost razmnožavanja u životinjskim ćelijama mnogih vrsta; eksprimirati više gena; induciraju humoralni i ćelijskog imuniteta; termička stabilnost; ekonomična proizvodnja i jednostavnost upotrebe. Ranije utvrđeni nedostaci virusa vakcinije povezani sa reaktogenošću su u velikoj mjeri eliminirani korištenjem genetske manipulacije. Mogućnost uključivanja nekoliko gena koji kodiraju odgovarajuće imunogene omogućavaju simultanu vakcinaciju životinja protiv nekoliko virusnih bolesti. Međutim, mora se imati na umu da kod osoba koje su već imune na virus vakcinije, vakcinacija rekombinantnim virusima ne daje efekta zbog nedostatka njegovog preživljavanja.
IN poslednjih godina primljeno profilaktički lijekovi iz rekombinantnog soja virusa vakcinije koji sadrži gene koji kodiraju površinske glikoproteine virusa gripe, bjesnila, respiratornog sicitisa, Aujeszkyjeve bolesti i infektivnog rinotraheitisa goveda i sl.
Ako pronađete grešku, označite dio teksta i kliknite Ctrl+Enter.
Rekombinantna tehnologija je napravila iskorak u stvaranju fundamentalno novih vakcina. Princip stvaranja genetski modifikovane vakcine sastoji se u tome da se gen koji kodira stvaranje zaštitnog antigena patogena protiv kojeg će biti usmjerena vakcina umetnut u genom živih oslabljenih virusa, bakterija, kvasca ili eukariotskih stanica.
Sami modifikovani mikroorganizmi se koriste kao vakcine. ili zaštitni antigen formiran tokom njihovog uzgoja in vitro. U prvom slučaju, imuni odgovor je usmjeren ne samo protiv proizvoda integriranog gena, već i protiv vektorskog nosača.
Primjer rekombinantne vakcine koja se sastoji od gotovog antigena je vakcina protiv hepatitisa B, a primjer vektorskih vakcina čiji se antigeni proizvode in vivo je vakcina protiv bjesnila. Izvedena je iz vakcine protiv vakcinije i pronađena široka primena u prevenciji bjesnila među divljim životinjama koristeći mamac koji sadrži ovu vakcinu.
Za stvaranje vektorskih živih virusnih vakcina koristi se atenuirani virus koji sadrži DNK, u čiji se genom ubacuje neophodan prethodno klonirani gen. Virus, nosilac vektora, aktivno se razmnožava, a proizvod integriranog gena osigurava stvaranje imuniteta. Vektor može sadržavati nekoliko ugrađenih gena odgovornih za ekspresiju odgovarajućih stranih antigena. Eksperimentalne vektorske vakcine na bazi virusa vakcinije dobijene su od strane vodene boginje, gripa A, hepatitis A i B, malarija, herpes simplex. Nažalost, vakcine su testirane prvenstveno na životinjama, koje su otporne na većinu ovih infekcija.
Rekombinantni proizvod nema uvijek istu strukturu kao prirodni antigen. Imunogenost takvog proizvoda može biti smanjena. Prirodni virusni antigeni u eukariotskim stanicama podliježu glikozilaciji, što povećava imunogenost takvih antigena. U bakterijama glikozilacija izostaje ili se odvija drugačije nego u stanicama viših eukariota. Kod nižih eukariota (gljiva) posttranslacioni procesi zauzimaju srednju poziciju.
Developer genetski modifikovana vakcina mora obezbijediti podatke o stabilnosti sistema ekspresije antigena tokom skladištenja radne banke ćelija. Ukoliko dođe do promjena u sjemenskoj kulturi, koje mogu biti praćene preuređivanjem, podjelom ili umetanjem nukleotida, potrebno je odrediti nukleotidnu sekvencu, proučiti peptidne mape i sekvencu terminalnih aminokiselina genetski modificiranog proizvoda. Upotreba mapiranja restrikcijskih enzima u kombinaciji sa proučavanjem markera kodiranih vektorom (osjetljivost na antibiotike, itd.) može ukazati na pojavu promjena u strukturi vektora.
Principi za stvaranje bakterijskih rekombinantnih vakcina su slični. Važan korak je kloniranje gena i dobivanje mutantnih gena koji kodiraju imunogene, ali ne i toksične oblike antigena. Klonirani su geni za toksine difterije i tetanusa, toksin Pseudomonas aeruginosa, toksine antraksa, kolere, pertusisa i šigeloze. Pokušava se dobiti rekombinantne vakcine protiv gonoreje i meningokokne infekcije.
Kao nosioci bakterijskog vektora koriste se BCG, Vibrio cholerae, Escherichia coli, Salmonella tythimurium. Intestinalna grupa patogena obećava za razvoj enteralnih vakcina. Žive rekombinantne vakcine koje se daju oralno imaju kratak životni vek, ali su sposobne da izazovu trajni imunitet tokom ovog perioda. Moguće je kreirati višekomponentne vakcine za istovremenu prevenciju protiv više dijarejnih infekcija. Bakterijske vektorske vakcine, za razliku od virusnih, mogu se kontrolisati antibioticima. Eksperimentalno su testirane oralne vakcine protiv hepatitisa B i malarije.
U budućnosti se planira korištenje vektora koji sadrže ne samo gene koji kontroliraju sintezu zaštitnih antigena, već i gene koji kodiraju različite medijatore imunološkog odgovora. Dobiveni su rekombinantni BCG sojevi koji luče interferon, interleukine i faktor stimulacije granulocita. Preliminarne studije ukazuju na visoku efikasnost sojeva protiv tuberkuloze i raka Bešika. Prilično je teško dobiti efikasnu vektorsku vakcinu na bazi bakterija zbog nestabilnosti transfekcije genetskog materijala, toksičnosti stranog antigena za bakterije i male količine ekspresiranog antigena.
Vakcinacija se može okarakterisati na različite načine: genocid, istrebljenje populacije, veliki eksperiment na živoj djeci, manipulacija masovnom sviješću. U svakom slučaju, zdrav pogled kroz ogledalo pokazuje da su zdravlje i vakcine nespojive stvari.
RGIV – novi proizvodi u prevenciji zaraznih bolesti. Primjer takve vakcine je vakcina protiv hepatitisa B. Naoružani metodama genetskog inženjeringa, medicinski biolozi imaju direktan pristup genomu. Sada je moguće ubaciti gene, izbrisati ih ili duplicirati.
Na primjer, gen iz jednog organizma može biti umetnut u genom drugog. Takav prijenos genetskih informacija moguć je čak i preko “evolucijske udaljenosti koja razdvaja ljude i bakterije”. Molekul DNK može se izrezati na pojedinačne fragmente pomoću specifičnih enzima i ovi fragmenti se mogu uvesti u druge ćelije.
Postalo je moguće inkorporirati gene drugih organizama u bakterijske ćelije, uključujući gene odgovorne za sintezu proteina. Na ovaj način u savremenim uslovima primaju značajnu količinu interferona, inzulina i drugih bioloških proizvoda. Na sličan način dobijena je i vakcina protiv hepatitisa B - gen virusa hepatitisa ugrađen je u ćeliju kvasca.
Kao i sve novo, a posebno genetski modificirani lijek namijenjen parenteralnoj primjeni (opet, u velikim količinama i tri sata nakon rođenja djeteta!), i ova vakcina zahtijeva dugotrajna posmatranja – odnosno govorimo o istom „velikom -razmjerna ispitivanja... na djeci."
Iz brojnih publikacija proizilazi: „Zapažanja postaju tačnija i vrednija ako se sprovode tokom masovnih kampanja imunizacije. U ovakvim kampanjama veliki broj djece se vakciniše u kratkom vremenskom periodu. Pojava grupe određenih patoloških sindroma u ovom periodu ukazuje, po pravilu, na njihovu uzročnu vezu sa vakcinacijom.” Pojam određenog patološkog sindroma može uključivati kratkotrajnu temperaturu i kašalj, kao i potpunu ili djelomičnu paralizu ili mentalnu retardaciju.
Pored Engerix vakcine protiv hepatitisa B, južnokorejska vakcina protiv hepatitisa, koja se aktivno nameće našoj zemlji, proglašava se „jednako bezbednom i efikasnom“. Genetski modifikovane vakcine su "preventivni" tretman sa mnogo nepoznanica. Naša zemlja nije u mogućnosti provjeriti sigurnost ovih proizvoda zbog nedostatka odgovarajućih eksperimentalnih objekata. Ne možemo kvalitetno kontrolisati kupljene vakcine niti stvoriti uslove za pripremu bezbednih sopstvenih vakcina. Rekombinantno testiranje lijekovi- visokotehnološki eksperiment koji zahtijeva ogromne troškove. Jao, u tom pogledu smo jako daleko od nivoa naprednih laboratorija u svijetu i praktično smo potpuno neusmjereni na kontrolu takvih proizvoda. S tim u vezi, u Rusiji (i Ukrajini) se registruje sve što nije prošlo kliničkim ispitivanjima od stranih proizvođača ovih vakcina, ili su testovi prošli, ali u nedovoljan volumen... Otuda lavinska količina vakcina raznih dobronamjernika, koji „pokušavaju da pomognu Rusiji“ i donose nam ne sutrašnje ili današnje tehnologije, već prekjučerašnje – „u suštini otpad iz njihove moderne proizvodnje, ili one vakcine koje treba proučavati u "velikim eksperimentima na djeci" Češće se to naziva „opservacija velikih razmera“, ali zadatak je jedan – eksperimenti na našoj deci!
Činilo bi se besmislenim i nemoralnim dokazivati opasnost od živinih soli za dojenčad, kada su posljedice njihovog djelovanja na organizam odrasle osobe nadaleko poznate.
Podsjetimo da su živine soli opasnije od same žive. Međutim, domaći DTP vakcina, koji sadrži 100 µg/ml mertiolata (organoživine soli) i 500 µg/ml formalina (najjači mutagen i alergen) koristi se oko 40 godina. Alergena svojstva formaldehida uključuju: angioedem, urtikariju, rinopatiju ( hronično curenje iz nosa), astmatični bronhitis, bronhijalna astma, alergijski gastritis, holecistitis, kolitis, eritem i pukotine na koži, itd. Sve to pedijatri bilježe već više od 40 godina, ali se statistika krije iza željeznih vrata od šire javnosti. Hiljade djece pate decenijama, ali medicinske službenike nije briga.
Nema podataka o dejstvu mertiodijata i formalina, NIKO NIJE PROUČAVAO OVAJ KONGLOMERAT na mlade životinje u smislu trenutnih reakcija i dugoročnih posledica; recimo za tinejdžere. Firme UPOZORAVAJU, stoga, ne snose nikakvu odgovornost za postupke naših vakcinatora i kontrolora! Tako se u našoj zemlji nastavljaju dugogodišnja „velika ispitivanja” nad našom djecom s razvojem različitih patoloških sindroma. Svakim danom sve više nevinih beba (one koje su izbjegle abortus) bacaju se u ovu paklenu mašinu za mljevenje mesa, pridružujući se redovima invalidne djece i njihovih nesretnih roditelja, nesvjesnih pravog uzroka patnje svoje djece. Pažljivo pripremana i vođena „kampanja zastrašivanja stanovništva“ epidemijama difterije, tuberkuloze i gripa s jedne strane i mjerama zabrane prema vrtićima i školama ne ostavljaju šansu roditeljima.
NE MOŽEMO DOZVOLITI DA SAMO FIRME I NISKO KOMPETENTNI VAKCINATORI KORPORATIVNO ODLUČUJU O SUDBINI NAŠE DJECE.
S obzirom da se BCG vakcinacija novorođenčadi ne sprovodi nigde drugde u svetu, aktivnosti koje se provode u Rusiji i Ukrajini su eksperiment, jer „procenjuju efikasnost kombinovane imunizacije novorođenčadi protiv hepatitisa B i protiv tuberkuloze na pozadini masovnosti. imunizacija.” Neprihvatljiv stres za organizam novorođenčadi! Ovaj eksperiment, „velika vakcinacija za otkrivanje patoloških sindroma“, provodi se u državnim razmerama, koja je obezbedila neograničen broj sopstvene dece za takva posmatranja... bez obaveštavanja roditelja o tome! Osim toga, “patološki sindromi” se mogu pojaviti godinu dana kasnije, pet godina ili mnogo kasnije... Postoje dokazi da ova vakcina može izazvati cirozu jetre nakon 15-20 godina.
Koje komponente su uključene u ENGERIX (vakcinu protiv hepatitisa B)?
1. Osnova lijeka je “modificirani” pekarski kvasac, “naširoko korišten u proizvodnji kruha i piva”. Ovdje očito nedostaje riječ “genetski modificirana”, očito zbog činjenice da je ova kombinacija već prilično uplašila stanovništvo na primjeru soje, krompira i kukuruza uvezenih iz inostranstva. Genetski modificirani proizvod kombinuje svojstva sastavnih sastojaka koji, kada se koriste, dovode do nepredvidivih posljedica. Šta su genetski inženjeri sakrili u ćeliji kvasca osim virusa hepatitisa B? Možete dodati gen virusa AIDS-a ili gen bilo koje bolesti raka.
2. Aluminijum hidroksid. Ovdje treba naglasiti da se već dugi niz decenija ne preporučuje (!) upotreba ovog adjuvansa za vakcinaciju djece.
3. Tiomerosal je mertiolat (organoživa so), čije štetno dejstvo na centralni nervni sistem je poznat od davnina i spada u kategoriju pesticida.
4. Polisorbent (nije dešifrovan).
Molekularne vakcine.
AG je prisutan u molekularnom obliku ili u obliku fragmenata svojih molekula koji određuju specifičnost antigenosti, odnosno u obliku epitopa, determinanti.
Antigeni u molekularnom obliku se dobijaju:
a) u procesu biosinteze tokom uzgoja prirodnih kao i rekombinantnih sojeva bakterija i virusa i
b) hemijska sinteza (radno intenzivnija i ima ograničene mogućnosti u poređenju sa biosintezom.
Tipičan primjer molekularni antigeni nastali biosintezom prirodnih sojeva, su toksoidi(tetanus, difterija, botulinum, itd.), dobijeni iz neutralizovanih toksina. U medicinskoj praksi koristi se molekularna vakcina protiv Vira. Hepatitis B, dobijen iz Ag virusa proizvedenog rekombinantnim sojem kvasca.
Genetski modifikovane vakcine. Genetski modifikovane vakcine sadrže patogene Ags dobijene metodama genetskog inženjeringa i uključuju samo visoko imunogene komponente koje doprinose stvaranju zaštitni imunitet
Moguće je nekoliko opcija za stvaranje genetski modifikovanih vakcina.
Uvođenje gena virulencije u avirulentne ili slabo virulentne mikroorganizme.
Uvođenje gena virulencije u nepovezane mikroorganizme sa naknadnom izolacijom Ag i njegovom upotrebom kao imunogenom.
Umjetno uklanjanje gena virulencije i korištenje modificiranih organizama u obliku korpuskularnih vakcina.
Vektorske (rekombinantne) vakcine
Vakcine dobivene metodama genetskog inženjeringa. Suština metode: geni virulentnog mikroorganizma odgovornog za sintezu zaštitnih antigena ubacuju se u genom bezopasnog mikroorganizma (npr. Coli), koji, kada se uzgaja, proizvodi i akumulira odgovarajući antigen.
Rekombinantne vakcine – za proizvodnju ovih vakcina koristi se rekombinantna tehnologija koja integriše genetski materijal mikroorganizma u ćelije kvasca koje proizvode antigen. Nakon kultivacije kvasca, iz njega se izoluje željeni antigen, pročišćava i priprema se vakcina. Primjer takvih vakcina je vakcina protiv hepatitisa B (Euvax B).
Vakcine se uglavnom koriste za aktivnu specifičnu prevenciju, ponekad i za liječenje bolesti.
Dječak Kolya I., 7 godina, postao je hirovit, odbija jesti, ima nemiran san, temperatura 38,5. Drugog dana nakon bolesti pedijatar je prilikom pregleda djeteta otkrio uvećano desno parotidna žlezda. Koža iznad otoka je napeta, ali nije upaljena. Doktor je postavio dijagnozu Parotitis» Navedite karike u lancu epidemije: izvor, mogući načini transferi. Koje laboratorijske dijagnostičke metode treba koristiti za potvrdu dijagnoze? Koje lijekove treba koristiti za prevenciju?
