Aglutinācijas reakcija (no lat. aglutinācija- līmēšana) - asinsķermenīšu (baktērijas, sarkanās asins šūnas utt.) līmēšana ar antivielām elektrolītu klātbūtnē.
Aglutinācijas reakcija izpaužas pārslu vai nogulumu veidā, kas sastāv no asinsķermenīšiem (piemēram, baktērijām), kas “salīmēti kopā” ar antivielām (7.37. att.). Aglutinācijas reakciju izmanto, lai: noteiktu no pacienta izolēto patogēnu; antivielu noteikšana pacienta asins serumā; asins grupu noteikšana.
Rīsi. 7.37 a, b. Aglutinācijas reakcija arIgM-antivielas (a) unIgG- antivielas (b)
1. No pacienta izolētā patogēna noteikšana Aptuvenā reakcija aglutinācija uz stikla (7.38. att.). No pacienta izolētu baktēriju suspensiju pievieno aglutinējošā seruma pilienam (atšķaidījums 1:20). Veidojas flokulējošas nogulsnes.
Rīsi. 7.38.
Plaša aglutinācijas reakcija ar no pacienta izolētu patogēnu (7.39. att.). Aglutinējošā seruma atšķaidījumiem pievieno no pacienta izolētu baktēriju suspensiju.
Rīsi. 52
2. Antivielu noteikšana pacienta asins serumā
Detalizēta aglutinācijas reakcija ar pacienta asins serumu (7.39. att.). Diagnosticum pievieno pacienta seruma atšķaidījumiem.
- Aglutinācija ar O-diagnosticum (baktērijas iznīcina karstuma ietekmē, saglabā O-antigēnu) notiek smalkgraudainas aglutinācijas veidā.
- Aglutinācija ar H-diagnosticum (baktērijas iznīcina formaldehīds, saglabājot flagellar H-antigēnu) ir liela un notiek ātrāk.
3. Aglutinācijas reakcija asins grupu noteikšanai Aglutinācijas reakciju asins grupu noteikšanai izmanto, lai izveidotu ABO sistēmu (b tabula), izmantojot eritrocītu aglutināciju ar imūnseruma antivielām pret asins grupas antigēniem A (I), B (III). Kontrole ir: serums, kas nesatur antivielas, t.i. seruma AB (IV) asins grupa; antigēni, ko satur A (II), B (III) grupas sarkanās asins šūnas. Negatīvā kontrole nesatur antigēnus, t.i., tiek izmantoti O (I) grupas eritrocīti.
7.6. tabula. ABO asinsgrupu noteikšana
| Reakcijas rezultāti |
Grupa |
|
|
piederība |
||
|
pētīta |
||
|
sarkanās asins šūnas ar |
serums (plazma) |
|
|
standarta |
ar standartu |
|
|
serumi | ||
Detalizēta aglutinācijas reakcija (RA). Lai noteiktu AT pacienta asins serumā, a plaša aglutinācijas reakcija (RA). Lai to izdarītu, asins seruma atšķaidījumu sērijai pievieno diagnostiku - nogalinātu mikroorganismu vai daļiņu suspensiju ar sorbētu Ag. Maksimālais atšķaidījums aglutinācija Ag sauc par seruma titru.
Aglutinācijas reakciju veidi (RA) lai noteiktu AT - asins pilienu testu tularēmijai (ar diagnostiku, kas uzklāta uz asins piliena un redzamu bālganu aglutinātu parādīšanos) un Hadlsona testu brucelozei (ar genciānas vijolītes krāsotu diagnostiku, kas uzklāta asins pilienam serums).
Aptuvenā aglutinācijas reakcija (RA)
Lai identificētu izolētos mikroorganismus, uz stikla priekšmetstikliņiem uzliek aptuvenu RA. Lai to izdarītu, standarta diagnostikas antiseruma (atšķaidīts 1:10, 1:20) pilienam pievieno patogēna kultūru. Plkst pozitīvs rezultāts veikt detalizētu reakciju, palielinot antiseruma atšķaidījumus.
Reakcija uzskata par pozitīvu, ja aglutināciju novēro atšķaidījumos, kas ir tuvu diagnostiskā seruma titram.
OAS. Somatiskie O-Ags ir karstumizturīgi un var izturēt vārīšanu 2 stundas.Mijiedarbojoties ar AT, tie veido smalkgraudainus agregātus.
N-Ag. N-Ag (zibens) ir termolabīli un ātri sadalās 100 °C, kā arī etanola ietekmē. Reakcijās ar H-antiserumu pēc 2 stundu inkubācijas veidojas irdenas lielas pārslas (veidojas baktērijām, kas salīp kopā ar flagellas).
Vi-Ar vēdertīfa baktērijas ir relatīvi karstumizturīgas (iztur 60-62 °C temperatūru 2 stundas); Inkubējot ar Vi antiserumu, veidojas smalkgraudains aglutināts.
Tiešas hemaglutinācijas reakcijas
Vienkāršākais no tiem reakcijas - aglutinācija sarkanās asins šūnas jeb hemaglutinācija, ko izmanto asins grupu noteikšanai ABO sistēmā. Lai noteiktu aglutinācija(vai tā trūkums) izmantojiet standarta antiserumus ar anti-A un anti-B aglutinīniem. Reakciju sauc par tiešu, jo pētāmās Ags ir sarkano asins šūnu dabiskas sastāvdaļas.
Kopīgs ar tieša hemaglutinācija vīrusu hemaglutinācijai ir mehānismi. Daudzi vīrusi spēj spontāni aglutinēt putnu un zīdītāju eritrocītus; to pievienošana eritrocītu suspensijai izraisa no tiem agregātu veidošanos.
Aglutinācijas reakcija Aglutinācijas reakcija
(RA) - identifikācijas metode un kvantitatīvā noteikšana Ag un At, pamatojoties uz to spēju veidot ar neapbruņotu aci redzamus aglomerātus. Infekcijas slimību nodaļā. slimībām vai citiem mērķiem izmanto nezināmu mikrobu un šūnu identificēšanai, Ab klātbūtnes un daudzuma noteikšanai asinīs un citos šķidrumos. Noteikšanas princips ir balstīts uz Ag un Ab mijiedarbības specifiku, un tas sastāv no zināmā atrašanas no nezināmā. RA ir daudz iespēju: kvantitatīvā un kvalitatīvā, mēģene un stikls, tilpuma un pilienu, parastās, paātrinātās un ekspresmetodes. RA stadijai jums ir nepieciešams: 1) s-ka asinis. Variantā ar baktēriju veida (var) noteikšanu tiek izmantoti rūpnieciskie aglutinācijas testi, kas iegūti imunizējot trušus. Variantā ar Ab veida noteikšanu no testa tiek ņemts asins paraugs. cilvēkiem vai dzīvniekiem. Šķīdumam jābūt sterilam un bez suspendētām daļiņām. Sagatavo bāzes atšķaidījumu sāls šķīdumā. Tam jābūt 2-4 reizes zemākam par šīs slimības diagnostikas titru; 2) Ag. Reakcijas versijā ar Ab tipa noteikšanu tiek izmantoti rūpnieciskās diagnostikas komplekti; variantā ar Ag noteikšanu diagnostikas gatavo paši 1-3 miljardu suspensijas veidā sāls šķīdumā 18-20 stundu agara (retāk buljona) testa. mikrobs inaktivēts, karsējot ūdens vannā 70°C 1 stundu vai inkubējot 24 stundas 37°C temperatūrā ar formaldehīdu (galīgā koncentrācija 0,2%); 3) elektrolīts sāls šķīduma veidā. Iestudējuma tehnika tilpuma sērijas caurule RA, lai noteiktu Ab titru s-ki: no galvenā s-ki atšķaidījuma sagatavo vairākas darba atšķaidījumu rindas. Rindu skaits ir atkarīgs no eksperimentā ņemto diagnostiku skaita, skaitu un atšķaidīšanas koeficientus nosaka aizdomīgās slimības diagnostiskais titrs. Sērijā jāsatur vismaz atšķaidījums, kas atbilst diagnostikas Ab titram, divus atšķaidījumus zem un divus atšķaidījumus virs tā. piemēram, ja diagnostikas titrs ir 1:100, tad ar tilpuma metodi RA stadijas noteikšanai jāsagatavo šādi atšķaidījumi: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ar pilienu metodi, pirmais atšķaidījums (1:25) nav vajadzīgs, bet nepieciešams vēl viens lielāks atšķaidījums - 1:800. zinātniskie pētījumi s-ku ir titrēts līdz negatīva reakcija. To atšķaida šādi: visās mēģenēs, izņemot 1., ielej 0,25 ml fizioloģiskā šķīduma, ja reakcija notiek 0,5 ml tilpumā, un 0,5 ml, ja reakcija notiek 1 tilpumā. ml. Ielejiet 0,25 (0,5) ml galvenā atšķaidījuma 1. un 2. mēģenē, no 2. mēģenes, izgrieztajā tilpumā un vaislas s-k un palielināts 2 reizes, 0,25 (0,5) ml tiek pārnests uz 3., no 3. uz 4. utt. uz pēdējo, no griezuma visam ielej 0,25 (0,5) ml, lai līdzsvarotu apjomus. Katru atšķaidīšanu veic, izmantojot atsevišķu pipeti. Ja eksperimentā tiek ņemti vairāki diagnostikas materiāli, tad katram no tiem tiek sagatavota sava atšķaidījumu sērija tādā pašā veidā. Katram mēģenes atšķaidījumam tiek pievienots Diagnosticum tilpumā, kas vienāds ar mēģenes tilpumu, kā rezultātā atšķaidījums katrā mēģenē tiek dubultots. Eksperiments atbilst s-ki kontrolei (0,25 - 0,5 ml s-ki galvenā atšķaidījuma un tāds pats daudzums fizioloģiskā šķīduma) un Ag kontrolei (0,25 - 0,5 ml diagnosticum un tāds pats daudzums fizioloģiskā šķīduma). Ja eksperimentā izmanto vairākas diagnostikas, tad katrai ir sava antigēna kontrole. Statīvu ar mēģenēm kārtīgi sakrata un ievieto termostatā 37°C uz 4 stundām, un pēc tam atstāj istabas temperatūrā līdz nākamajai dienai, pēc tam reģistrē PA, pamatojoties uz nosēdumu daudzumu un attīrīšanās pakāpi. šķidrums. Šo rādītāju noteikšana atkarībā no aglutinātu rakstura tiek veikta ar neapbruņotu aci uz tumša fona, aglutinoskopā vai virs mikroskopa spoguļa ieliektās virsmas. Uzskaite sākas ar vadīklām: kontrolei C jābūt caurspīdīgai, Ag jābūt vienmērīgi duļķainam (pēc mēģenes sakratīšanas). Ja kontroles ir labas, noskaidrojiet aglutinācijas esamību un pakāpi visās mēģenēs, kas apzīmētas ar plusiem: lielas nogulsnes un pilnīga šķidruma attīrīšana - 4 plusi; lielas nogulsnes un nepilnīga šķidruma notīrīšana - 3 plusi; pamanāmas nogulsnes un jūtama šķidruma attīrīšanās ir 2 plusi. Pēc tam tiek noteikts titrs: augstākais atšķaidījums ar aglutinācijas intensitāti vismaz 2 plusi. Titru izpēte s-ki tiek salīdzināti ar šīs slimības diagnostisko titru. Ja tiek pārbaudīts titrs. s-ki ir 2 reizes zemāks par diagnostisko vērtību, reakcija tiek novērtēta kā apšaubāma; ja titrs ir vienāds diagnostika - kā vāji pozitīvs; ja tas ir 2-4 reizes lielāks, tas tiek uzskatīts par pozitīvu, ja tas ir 8 vai vairāk reizes lielāks, tas tiek uzskatīts par krasi pozitīvu. Ar plašu izplatību Ab veseliem cilvēkiem Lai novērtētu RA, tiek izmantots Ab titra pieaugums. Lai noteiktu Ar veidu sērijveida RA, rindu skaitam jāatbilst identifikācijai ņemtajam numuram diagnostikas testi. No diagnostikas testa galvenā atšķaidījuma tiek sagatavota virkne secīgu divkāršu atšķaidījumu tādā pašā veidā kā RA, lai noteiktu Ab titru. Atšķaidīšanas koeficienti ir atkarīgi no aglutinācijas testa titra.Eksperimentā ir nepieciešama atšķaidījuma klātbūtne, kas vienāda ar testa titru, kā arī 2, 4, 6, 8 reizes mazāka par to. Piemēram, ja diagnostikas testa titrs ir 1 3200, tad jāizmanto atšķaidījumi 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Testa atšķaidījumiem pievieno tādu pašu daudzumu pārbaudītā Ag, kā rezultātā tiek atšķaidīts tests palielinās 2 reizes.Eksperimentam pievieno 2 kontroles testa un Ag.Ja eksperimentā ir iesaistīti vairāki s-k,tad katram no tiem ir nepieciešama sava kontrole.Reakcijas beigās statīvu enerģiski sakrata un novieto termostatā 37 ° C. Rezultāti tiek ņemti vērā, kā aprakstīts iepriekš.Reakcijas novērtēšanai ir pazīmes.Lai izdarītu secinājumu par pētījuma atbilstību. Eksperimentā ņemts Ag, reakcijas titram jāatbilst vismaz pusei no standarta diagnostikas testa titra.Titri 1 4 un mazāk tiek uzskatīti par grupas reakciju Pilināt md RA stadija atšķiras no tilpuma ar to, ka s-ku atšķaida 1 ml tilpumā, Ag izmanto lielākā koncentrācijā (10 miljardi/ml) un pievieno 1 - 2 pilieni mēģenē Zāļu atšķaidīšana pēc Ag pievienošanas tiek uzskatīta par nemainīgu. Pretējā gadījumā iestatīšanas, reģistrēšanas un novērtēšanas metode ir līdzīga tilpuma metodei
(Avots: Mikrobioloģijas terminu vārdnīca)
IMUNOMIKROBIOLOĢISKIE PĒTĪJUMI
Daudzu problēmu risināšanai tiek izmantotas imunoloģiskās metodes:
1. Stāvokļa novērtējums imūnsistēma persona ( imūnsistēmas stāvoklis) pēc kvantitatīvās definīcijas un funkcionālās īpašības imūnsistēmas šūnas un to produkti.
2. Cilvēka audu sastāva un īpašību noteikšana: asins grupas, Rh faktors, transplantācijas antigēni.
3. Infekcijas slimību diagnostika un rezistence pret tām, nosakot un nosakot antivielu titrus (serodiagnostika), identificējot patogēnu antigēnus organismā un nosakot šūnu reakcijas uz šiem antigēniem.
4. No cilvēku un dzīvnieku ķermeņa izolētu baktēriju un vīrusu kultūru seroīdu identifikācija.
5. Atklāšana cilvēka ķermenī un iekšā ārējā vide jebkuras vielas ar antigēnu vai haptēnu īpašībām (hormoni, fermenti, indes, zāles, zāles utt.).
6. Imunopatoloģisko stāvokļu, alerģiju, transplantācijas un pretvēža reakciju noteikšana.
Antigēna un antivielu mijiedarbības process seroloģiskās reakcijas notiek divās fāzēs:
1) specifisks- mijiedarbības fāze, kurā notiek antivielu (paratopu) aktīvo centru un antigēna epitopu komplementāra kombinācija. Šī fāze parasti ilgst dažas sekundes vai minūtes;
2) nespecifisks- izpausmes fāze, raksturota ārējās pazīmes imūnkompleksu veidošanās. Šī fāze var attīstīties no vairākām minūtēm līdz vairākām stundām.
Antivielu optimālā specifiskā mijiedarbība ar antigēnu notiek izotoniskā šķīdumā ar pH tuvu neitrālam. Antigēna-antivielu reakcija in vitro sistēmā var būt saistīta ar vairāku parādību rašanos
· aglutinācija,
· nokrišņi,
· līze.
Ārējās izpausmes reakcijas ir atkarīgas no antigēna fizikāli ķīmiskajām īpašībām (daļiņu izmēra, fiziskais stāvoklis), antivielu klase un veids (pilnīga un nepilnīga), kā arī eksperimenta apstākļi (vidēja konsistence, sāls koncentrācija, pH, temperatūra).
Antigēnu un antivielu polivalence nodrošina ar neapbruņotu aci redzamu agregātu veidošanos. Tas notiek saskaņā ar tīkla veidošanās teoriju, saskaņā ar kuru iegūtajam antigēna-antivielu kompleksam secīgi tiek pievienotas citas antivielas un antigēnu molekulas. Rezultātā veidojas tīkla struktūras, kas pārvēršas par agregātiem, kas izgulsnējas. Reakcijas raksturs un smagums ir atkarīgs no antigēnu un antivielu kvantitatīvās attiecības. Visintensīvākās reakcijas notiek, ja reaģenti ir līdzvērtīgās proporcijās.
Priekšnoteikums režģa veidošanās (tīkli) - vairāk nekā trīs antigēnu determinantu klātbūtne katrai antigēna molekulai un divi aktīvie centri katrai antivielu molekulai. Antigēna molekulas ir režģa mezgli, un antivielu molekulas ir savienojošās saites. Antigēnu un antivielu koncentrāciju optimālo attiecību (ekvivalences zona) apgabals, kad pēc nogulšņu veidošanās supernatantā netiek konstatēti ne brīvi antigēni, ne brīvas antivielas.
Agregāti, kas var izgulsnēties, veidojas, antigēniem apvienojoties ar pilnām antivielām. Nepilnīgas antivielas(monovalenti) neizraisa tīkla struktūru un lielu agregātu veidošanos. Lai noteiktu šādas antivielas, izmantojiet īpašas metodes pamatojoties uz antiglobulīnu lietošanu (Kumbsa reakcija).
Seroloģiskās reakcijas to augstās specifikas un jutīguma dēļ tiek izmantotas antigēnu un antivielu noteikšanai un kvantitatīvai noteikšanai. Imūnreaģentu daudzumu reakcijās izsaka ar titru - maksimālo seruma vai antigēna atšķaidījumu, pie kura joprojām tiek novērota reakcija.
Seroloģiskās reakcijas mikrobioloģiskajās un imunoloģiskajās laboratorijās tiek izmantotas diviem mērķiem:
1) mikroorganismu, toksīnu, antigēnu seroidentifikācijai kopumā, izmantojot zināmu antivielu (imūndiagnostikas serumu),
2) serodiagnostikai - antivielu rakstura noteikšana pacienta asins serumā pret baktēriju, vīrusu un retāk citām infekcijas slimībām, izmantojot zināmu antigēnu (diagnosticum).
Lai noteiktu antigēna sugas un veidu, ir nepieciešami zināmi imūntesti. diagnostikas serumi. Tos iegūst, atkārtoti ievadot dzīvniekiem (parasti trušiem) pieaugošās devās nogalinātus vai dzīvus mikroorganismus, to sabrukšanas produktus, neitralizētus vai vietējos toksīnus. Pēc noteikta dzīvnieku imunizācijas cikla tiek veikta masīva dzīvnieka asins nolaišana vai pilnīga asiņošana. Asinis, kas savāktas sterilā traukā, vispirms ievieto termostatā 37°C temperatūrā uz 4 - 6 stundām, lai paātrinātu recēšanu, pēc tam uz dienu ledusskapī. Iegūto caurspīdīgo serumu iesūc sterilā traukā, pievieno konservantus, nosaka antivielu titru, pārbauda sterilitāti un ielej ampulās.
Tiek lietoti nav adsorbēts Un adsorbēts diagnostikas serumi. Neadsorbētiem serumiem ir augsti titri antivielas, bet spēj izraisīt grupu (krustu) reakcijas.
Adsorbētajiem serumiem ir raksturīga stingra darbības specifika (tie reaģē tikai ar homologu antigēnu). Tiek saukti serumi, kas satur antivielas tikai pret vienu konkrētu antigēnu monoreceptors.
Tie ražo arī serumus, kas marķēti ar fluorohromiem, fermentiem un radioizotopiem, kas ļauj ar augstu precizitātes pakāpi noteikt pat antigēna pēdas.
Dzīvu vai nogalinātu baktēriju suspensijas, to sadalīšanās produkti, toksīni un vīrusi tiek izmantoti kā antigēni (diagnostikas līdzekļi) seroloģiskās reakcijās. Dažos gadījumos tiek izmantoti ekstrakti vai ķīmiski izolēti antigēni no mikroorganismiem un dzīvnieku audiem.
Visas imūnmikrobioloģiskās metodes var iedalīt 3 grupās:
1) pamatojoties uz tieša antigēna mijiedarbība ar antivielām(aglutinācijas, izgulsnēšanās, hemaglutinācijas, imobilizācijas uc parādības);
2) pamatojoties uz mediēta antigēna mijiedarbība ar antivielu(reakcijas netiešā hemaglutinācija, koagulācija, lateksa aglutinācija, oglekļa aglomerācija, bentonīta aglutinācija, komplementa saistīšanās u.c.);
3) izmantojot marķētas antivielas vai antigēni(fluorescējošu antivielu metode, ar enzīmu saistītās imūnsorbcijas un radioimūnās metodes un citas metodes).
AGLUTINĀCIJAS REAKCIJAS
Šajās reakcijās ir iesaistīti antigēni daļiņu veidā (mikrobu šūnas, sarkanās asins šūnas un citi korpuskulārie antigēni), kuras salīmē kopā ar antivielām un nogulsnējas.
Lai veiktu aglutinācijas reakciju(RA) ir nepieciešami trīs komponenti: 1) antigēns (aglutinogēns);
2) antivielas (aglutinīns)
3) elektrolīts (izotonisks nātrija hlorīda šķīdums).
Aptuvenā aglutinācijas reakcija (RA)
Indikatīvu jeb plāksni RA novieto uz stikla priekšmetstikliņa istabas temperatūrā. Lai to izdarītu, izmantojiet Pasteur pipeti, lai atsevišķi uz stikla uzklātu seruma pilienu atšķaidījumā no 1:10 līdz 1:20 un kontroles pilienu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma. Abās bakterioloģiskajās cilpās ievada kolonijas vai ikdienas baktēriju kultūru (diagnostikas pilienu) un rūpīgi samaisa. Reakcijas tiek ņemtas vērā vizuāli pēc dažām minūtēm, dažreiz izmantojot palielināmo stiklu (x5). Ar pozitīvu RA tiek novērota lielu un mazu pārslu parādīšanās seruma kritumā; ar negatīvu RA serums paliek vienmērīgi duļķains.
Detalizēta aglutinācijas reakcija lai noteiktu specifisko antivielu titru pacientam.
Pilnīga RA serodiagnostikai tiek veikta pacientu serumā. To arī atšķaida izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā no 1:50 līdz 1:100 līdz 1:800 vai 1:1600. Tā kā zemāki seruma titri var saturēt normālus aglutinīnus, kas atrodami veseliem cilvēkiem vai pacientiem ar citu diagnozi (diagnostikas titrs). Kā antigēns šajā reakcijā tiek izmantots diagnostikas līdzeklis - zināmas suspensijas, parasti no nogalinātām baktērijām.
1 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma vispirms ielej aglutinācijas mēģenēs. Pirmajam no tiem pievieno 1 ml seruma, kas atšķaidīts 1:100, un pēc tā samaisīšanas 1 ml pārnes uz otro, no otrā uz trešo utt. Iegūtajiem seruma divkāršajiem atšķaidījumiem (no 1:100 līdz 1:1600 vai vairāk) pievieno 1-2 pilienus baktēriju suspensijas, kas satur 3 miljardus mikrobu ķermeņu 1 ml. Caurules sakrata un ievieto termostatā 37°C uz 2 stundām, pēc tam 24 stundas tur istabas temperatūrā.
Detalizētā aglutinācijas reakcija tiek ņemta vērā, secīgi izvērtējot katru mēģeni, sākot ar kontroles, viegli kratot. Kontroles mēģenēs nedrīkst būt aglutinācijas. Aglutinācijas reakcijas intensitāte ir atzīmēta ar šādām pazīmēm: ++++ - pilnīga aglutinācija (aglutinācijas pārslas absolūti caurspīdīgā šķidrumā); +++ - nepilnīga aglutinācija (pārslas nedaudz opalescējošā šķidrumā); ++ - daļēja aglutinācija (pārslas ir skaidri redzamas, šķidrums ir nedaudz duļķains); + - vāja, apšaubāma aglutinācija - šķidrums ir ļoti duļķains, pārslas tajā ir grūti atšķirt; - - aglutinācijas trūkums (šķidrums ir vienmērīgi duļķains).
Seruma titru uzskata par tā pēdējo atšķaidījumu, kurā aglutinācijas intensitāte tiek novērtēta ne mazāk kā par diviem plusiem (++).
Lekcija Nr.16
Vārdnīca
TIEŠAIS – taisni nākamais bez nekā, bez sekojošām saitēm.
NETIEŠI– caur citām šūnām, nevis tieši.
SAMAZINĀJUMS ≠ PALIELINĀJUMS (šūnu aktivitāte).
NORAIDĪT – nepieņemt, noraidīt. Organisms noraida transplantēto orgānu.
Imūnās reakcijas.
Imūnās reakcijas ir antigēna un antivielas vai antigēna un sensibilizēta T-limfocīta specifiskas mijiedarbības (saistīšanās) reakcijas.
Šīs reakcijas notiek in vitro (mēģenē) un in vivo (dzīvā organismā).
Šīs reakcijas ietver serumu (serumu), tāpēc tās sauc seroloģiskās.
Imūnās atbildes tiek pieradušas pie infekcijas slimību diagnostika.Šajā gadījumā nezināmo komponentu nosaka zināmais komponents, kura pamatā ir antigēna un antivielu mijiedarbības specifika. Ja zināma antiviela, tad tu vari identificēt (atklāt) nezināmu antigēnu. Ja zināms antigēns, tad varat to izmantot atklāt nezināmas antivielas.
Tādējādi tiek izmantotas imūnreakcijas:
1) priekš seroloģiskā diagnostika slimību (serodiagnostika) - antivielu noteikšana slimu cilvēku asins serumā pret konkrētu infekcijas slimības izraisītāju (zināms antigēns); ja slima cilvēka asins serumā ir antivielas pret kādu patogēnu, tad tas ir patogēns, kas to izraisīja infekcija;
2) par mikrobu seroloģiskā identifikācija (seroidentifikācija) noteikt patogēna veidu, izmantojot imūndiagnostikas serumus (zināmas antivielas); ja antivielas saistās ar patogēnu, kas izolēts no slima cilvēka, tad šis mikrobs ir identisks tam, ar kuru dzīvnieks tika imunizēts saņemšana imūndiagnostikas serums .
Imūnās reakcijas notiek 2 fāzēs:
1) specifiska fāze– antivielas aktīvā centra savienojums ar antigēna noteicošo grupu ar antigēna-antivielu kompleksu veidošanos; šī fāze norit ātri, bet nav redzama efekta;
2) nespecifiskā fāze- izskats redzams efekts antigēna un antivielu mijiedarbība - zudums melnraksts(aglutinācija) vai mākoņainība(nokrišņi), kas ļauj skat izglītība antigēnu-antivielu kompleksi un izdarīt secinājumus par atbilstība antigēnu un antivielu viens pret otru.
Imūnās reakcijas ietver aglutinācijas reakcija (RA), izgulsnēšanās reakcija (RP), komplementa saistīšanās reakcija (CFR).
Aglutinācijas reakcija- tā ir mikrobu vai citu šūnu (eritrocītu) līmēšana un izgulsnēšana antivielu ietekmē elektrolīta klātbūtnē. Redzamais reakcijas efekts (aglutinācijas fenomens) ir nogulšņu veidošanās, ko sauc aglutināt.
Šo reakciju izmanto serodiagnoze Un seridentifikācija. RA lieto serodiagnostikai (antivielu noteikšanai pacientu asins serumā) vēdertīfs un paratīfs(Vidāla reakcija), bruceloze(Raita reakcija) tularēmija un leptospiroze. RA izmanto seridentifikācijai (nosakot no pacienta izolētā patogēna veidu), kad zarnu infekcijas, garo klepu, holēru un utt.
Sastāvdaļasreakcijas:
1. A tigēns (aglutinogēns) - tās ir veselas (nav iznīcinātas) mikrobu vai citas šūnas ( korpuskulārs, nešķīstošs antigēns). Aglutinogēni- šī ir apturēšana dzīvs vai nogalināts mikrobu šūnas vai citas šūnas. Antigēni var būt nezināmi vai zināmi. Nezināms aglutinogēns ir no pacienta ķermeņa izolēta mikrobu kultūra, kas ir jānosaka. Zināms antigēns - diagnosticum- diagnostikas zāles - mirušo apturēšana mikrobi zināmas sugas sāls šķīdumā. Šī apturēšana duļķains (necaurspīdīgs), jo mikrobu šūnas nešķīst, bet paliek neskartas. Lai noteiktu nezināmas antivielas pacientu asins serumā, tiks izmantots zināms aglutinogēns.
2. Antivielas (aglutinīns)- atrodams asins serumā. Antivielas var būt arī nezināmas vai zināmas. Nezināmas antivielas, kas jānosaka, atrodas asins serumā slims cilvēks. Zināmas antivielas ir atrodamas imūnās diagnostikas serumi kuras sauc aglutinējošie serumi. Tos izmanto sero-identifikācijai, t.i. lai noteiktu nezināmu antigēnu – mikrobu kultūras veidu.
3. Elektrolīts– 0,9% nātrija hlorīda šķīdums.
Diagnostikas testa iegūšana.
Zināmas sugas patogēna tīrkultūru, kas audzēta uz slīpā agara (piemēram, vēdertīfa izraisītāja) nomazgā ar 3-4 ml izotoniska šķīduma, ievieto sterilā mēģenē, dažos mikrobus iznīcina. veidā (piemēram, vārot un nosaka blīvumu (1 ml jābūt 3 miljardiem mikrobu šūnu).Ja mikrobu šūnas tiek nogalinātas paaugstināta temperatūra, tad viņi iegūst O-diagnosticum (O-antigēnu), bet, ja to apstrādā ar formaldehīdu, tad iegūst H-diagnosticum (H-antigēnu).
Diagnostikas piemēri: diagnostiskā salmonella, diagnostiskā bruceloze, diagnostiskā tularēmija.
Aglutinācijas serumu sagatavošana.
Dzīvniekiem (parasti trušiem) parenterāli injicē mikrobu diagnostikas līdzekļus pieaugošās devās 5–7 reizes ar intervālu ( veikt hiperimunizāciju), un pēc tam tiek ņemts to asins serums, kurā ir antivielas pret mikrobiem, no kuriem tiek sagatavota diagnostika. Ja imunizāciju veic ar O-diagnosticum, tad tiek iegūti O-aglutinējošie serumi (satur O-antivielas), ja ar H-diagnosticum tiek iegūti H-aglutinējošie serumi.
Aglutinējošie serumi var būt neadsorbēts vai dzimtā un adsorbēts.
Neadsorbēti serumi satur grupas antivielas pret vairākām cieši radniecīgām mikrobu sugām.
Adsorbēti serumi satur antivielas pret vienu vai vairākiem viena veida mikrobu antigēniem. Ja serumi satur antivielas tikai pret vienu antigēnu, tos sauc monoreceptors vai monovalents, ja uz vairākiem antigēniem – grupai adsorbēti serumi .
Aglutinējošu serumu piemēri:Salmonellas monoreceptoru H-aglutinējošais serums, Salmonella grupas adsorbēts O-aglutinējošais serums, antiholēras O-aglutinējošais serums u.c..
Titrs aglutinējošais serums - lielākais seruma atšķaidījums, pie kura joprojām tiek konstatēta aglutinācijas reakcija ar antigēnu (titrs ir atkarīgs no antivielu daudzuma asinīs: jo vairāk antivielu, jo augstāks seruma titrs).
RA inscenēšanas metodes.
1. Aptuvenais (lamelārais) RA– veikta uz stikla. Uz stikla priekšmetstikliņa uzklājiet 2 pilienus seruma un 1 pilienu izotoniskā šķīduma. Mikrobu kultūru ievada vienā no seruma pilieniem un izotoniskā šķīduma pilienu cilpā un sajauc. Izotoniskā šķīduma piliens ar mikrobiem – antigēnu kontrole, piliens serumi bez baktērijām – antivielu kontrole, piliens serumi ar mikrobiem – pieredze. Ja serumā ir antivielas, kas atbilst mikrobu antigēniem, kas ar to sajaucas, tad antivielas un antigēni specifiski saistīsies viens ar otru un pēc 1–3 minūtēm testa pilē parādīsies aglutināta pārslas. Antigēna kontrolei jābūt duļķainai, un antivielu kontrolei jābūt skaidrai. Reakcijas rezultāti tiek reģistrēti, pamatojoties uz aglutināta pārslu parādīšanos . Ja pārslas izkrīt, reakcija ir pozitīva, t.i. Antigēns atbilst antivielai, un antigēnu var izmantot, lai noteiktu antivielu vai otrādi. Ja saglabājas duļķainība, reakcija ir negatīva.
2. Detalizēta aglutinācijas reakcija - veic mēģenēs. Vispirms sagatavojiet slima cilvēka asins seruma divkāršus atšķaidījumus no 1:50 līdz 1:1600. 1 ml izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma ielej 6 mēģenēs. Pirmajā mēģenē pievieno 1 ml pacienta asins seruma atšķaidījumā 1:50, samaisa un iegūst atšķaidījumu 1:100, pēc tam 1 ml atšķaidījuma 1:100 pārnes otrajā mēģenē. un iegūst atšķaidījumu 1:200 utt. Antigēna un seruma kontrolei tiek turētas divas mēģenes. Seruma kontrolei pievieno tikai serumu atšķaidījumā 1:50, antigēna kontrolei - tikai antigēnu. Pievienojiet 0,1 ml antigēna - diagnosticum (O- vai H-) visām pārējām mēģenēm un novietojiet visas mēģenes termostatā 37°C uz 18-20 stundām. Reakcijas rezultātus reģistrē atkarībā no veidošanās veida, nogulšņu (aglutināta) daudzuma un duļķainības pakāpes. Uzskaite tiek veikta tikai ar šādiem rezultātiem kontrolēs: seruma kontrole - caurspīdīga, antigēna kontrole - duļķaina. O-antivielas rada smalki graudainas nogulsnes. H-antivielas – rupji graudaini. Pamatojoties uz pēdējo mēģeni, kurā joprojām ir redzama aglutinācijas reakcija, tā tiek noteikta diagnostikas titrs.
Serodiagnozes laikā slimībām, ir svarīgi ne tikai noteikt specifiskas antivielas pret konkrētu patogēnu, bet arī noteikt to daudzumu, t.i. noteikt šādu antivielu titru pret Kad mēs varam runāt par slimības klātbūtni, ko izraisa šis patogēns? . Šo titru sauc par diagnostikas titru. Piemēram, lai diagnosticētu vēdertīfu, jums ir jānosaka antivielu titrs 1:400, bet ne mazāks. Sniedz vēl precīzākus rezultātus antivielu palielināšanās noteikšana pārī savienotos serumos. Pacienta serumu savāc slimības sākumā un pēc 3 līdz 5 vai vairāk dienām. Ja antivielu titrs palielinās vismaz 4 reizes, mēs varam runāt par pašreizējā slimība.
Ja seridentifikācijai tiek veikta detalizēta aglutinācijas reakcija, tad tiek izmantoti aglutinācijas diagnostikas serumi, kas atšķaidīti līdz titram vai pusei no tā. RA tiek uzskatīta par pozitīvu, ja aglutinācija tiek konstatēta atšķaidījumā, kas ir tuvu diagnostikas seruma titram.
