Kumbs reaktsiyasi to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita. Yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik kasalligini aniqlash uchun Coombs testi

Coombs testi - bu usul laboratoriya tadqiqotlari, gemagglyutinatsiyaga ta'sir qilish orqali amalga oshiriladi. U immunoglobulinlar va ferment elementlariga antikorlarning sezgirligiga, shuningdek, C3 yoki Lg bilan qoplangan eritrotsitlarni aglutinatsiya qilish qobiliyatiga asoslanadi.

To'g'ridan-to'g'ri Coombs tashxisi

Hujayralarning tashqarisida o'rnatilgan antikorlarni yoki komplement komponentlarini aniqlash uchun ishlatiladi. To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi quyidagicha amalga oshiriladi.

Bunday namunadan foydalanish

To'g'ridan-to'g'ri Coombs diagnostikasi ba'zi hollarda qo'llaniladi, masalan:

• transfüzyon ta'siri;
• otoimmün gemoliz;
• dorivor gemolitik anemiya.

Bilvosita Coombs testi

Ushbu tashxis qon zardobidagi hujayralarga antikorlarni aniqlash imkonini beradi, bu qoida tariqasida 0-toifa donor qizil qon hujayralari bilan inkubatsiya qilinadi va keyin to'g'ridan-to'g'ri test o'tkaziladi. Murojaat qiling bilvosita tashxis Kumbs quyidagi hollarda:

Tahlil qilishga qanday tayyorgarlik ko'rish kerak

Imtihonga tayyorgarlik ko'rishning ba'zi qoidalari mavjud.

1. Agar bemor yangi tug'ilgan chaqaloq bo'lsa, ota-onalar test yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik kasalligini aniqlashga yordam berishini bilishlari kerak.
2. Agar bemorda gemolitik anemiyaga shubha bo'lsa, unga tahlil qilish unga himoya buzilishlari, dori-darmonlar yoki boshqa omillar sabab bo'lganligini aniqlashga imkon berishini tushuntirish kerak.
3. Coombs testi, to'g'ridan-to'g'ri va bilvosita, ovqatlanish yoki dietaga hech qanday cheklovlar qo'ymaydi.
4. Bemorga tekshiruv venadan qon olishni talab qilishini, shuningdek, venipunktura qachon amalga oshirilishini aytib berish kerak.
5. Bundan tashqari, ehtimollik haqida ogohlantirilishi kerak noqulaylik bandajni qo'lga qo'llash davrida va protseduraning o'zi.
6. Namuna natijasiga ta'sir qilishi mumkin bo'lgan dorilarni qabul qilishni to'xtatish kerak.

Ushbu dorilarga quyidagilar kiradi:

• "Streptomitsin";
• "Metildopa";
• "Prokainamid";
• sulfanilamidlar;
• "Melphalan";
• "Kinidin";
• "Rifampin";
• "Izoniazid";
• sefalosporinlar;
• "Hidralazin";
• "Xlorpromazin";
• "Levodopa";
• "Tetratsiklin";
• "Difenilgidantoin";
• "Ethosuximide";
• "Penitsillin";
• mefenamik kislota.

Qon namunasi ertalab och qoringa amalga oshiriladi.

Tadbir qanday o'tkaziladi

Kumbs testi quyidagi tartibda amalga oshiriladi:

1. Voyaga etgan bemorda diagnostika o'tkazishda venipunkturadan keyin qon EDTA (etilendiamintetraatsetat) bilan naychalarga olinadi.
2. Yangi tug'ilgan chaqaloqning qoni kindik ichakchasidagi EDTA moddasi bo'lgan stakanga olinadi.
3. Teshilish joyi qon to'xtaguncha paxta sumkasi bilan bosiladi.
4. Agar venepunktur joyida ko'karishlar paydo bo'lsa, iliq kompresslar buyuriladi.
5. Qon to'planganidan keyin bemorga dori-darmonlarni qabul qilishga qaytishga ruxsat beriladi.
6. Yangi tug'ilgan chaqaloqning ota-onalariga anemiya dinamikasini kuzatish uchun ikkilamchi tahlil talab qilinishi mumkinligi haqida xabardor qilish kerak.

Kumbs testining afzalliklari

Bunday tadqiqotlar bir qator afzalliklarga ega, xususan:

Tahlilning kamchiliklari

Ijobiy Coombs testi juda ko'p mehnat talab qiladigan tekshirish usuli bo'lib, bajarishning xarakterli aniqligini talab qiladi. Uni qo'llashda siz ma'lum qiyinchiliklarga duch kelishingiz mumkin, ayniqsa zaif ijobiy ta'sirlarni talqin qilish bilan bog'liq.

Kumb testlarini ishlab chiqarishda noto'g'ri salbiy yoki zaif ijobiy reaktsiyalar hujayralarni qoniqarsiz faol yuvish, antiglobulin reagentining sarum qoldiqlari bilan zaiflashishi, shuningdek, antiglobulin singishi mumkin bo'lgan yog'siz yuzalar bilan bog'lanish oqibatlari bo'lishi mumkinligi aniqlandi. tuzatiladi va shu bilan uning samaradorligini yo'qotadi.

Coombs testining yana bir kamchiligi bor - antiglobulin reagentining past barqarorligi, uni olish va saqlash. individual xususiyatlar, bu xuddi shu tarzda antiglobulin sarumining gemagglyutinatsiyaga ta'sirini raqamli baholashni qiyinlashtiradi.

Tekshiruv vaqtida aniqlanishi mumkin bo'lgan kasalliklar

Coombs diagnostikasi ma'lum turdagi kasalliklarni aniqlash imkonini beradi, masalan:

• yangi tug'ilgan chaqaloqning gemolitik buzilishi;
• turli xil transfüzyon reaktsiyalari;
• otoimmün gemoliz;
• dori-darmonli gemolitik anemiya.

Bugungi kunda Coombs testi kattalar va yangi tug'ilgan chaqaloqlar uchun juda mashhur qon test tizimi hisoblanadi. Bu turli xil kasalliklarni aniqlashga imkon beradi.

Antikorlar, eritrotsitlar yuzasida joylashgan bo'lib, statik yoki erkin holatda bo'lishi mumkin qon plazmasi. Antikorlarning holatiga qarab, to'g'ridan-to'g'ri yoki bilvosita Kumbs reaktsiyasi amalga oshiriladi. Agar antikorlar qizil qon hujayralari yuzasida o'rnatilganligiga ishonish uchun asos bo'lsa, to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi o'tkaziladi. Bunday holda, test bir bosqichda amalga oshiriladi - qo'shish antiglobulin sarum. Agar qizil qon hujayralari yuzasida to'liq bo'lmagan antikorlar mavjud bo'lsa, aglutinatsiya qizil qon hujayralari

Bilvosita reaktsiya

Bilvosita Kumbs reaktsiyasi 2 bosqichda sodir bo'ladi. Avval siz sun'iy ravishda amalga oshirishingiz kerak sensibilizatsiya qizil qon hujayralari Buning uchun qizil qon tanachalari va tekshirilayotgan qon zardobi inkubatsiya qilinadi, bu esa qizil qon tanachalari yuzasida antikorlarning biriktirilishiga olib keladi. Shundan so'ng Coombs testining ikkinchi bosqichi - antiglobulin sarum qo'shilishi amalga oshiriladi.

Yog'ingarchilik reaktsiyasi - RP (lotincha praecipilo dan cho'kma) - eruvchan molekulyar antigen kompleksining antikorlar bilan bulutlilik shaklida hosil bo'lishi va cho'kishi. cho'kma. Antigenlar va antikorlarni ekvivalent miqdorda aralashtirish natijasida hosil bo'ladi, ulardan birining ortishi immun kompleksining shakllanish darajasini pasaytiradi. Cho'kma reaktsiyasi probirkalarda (halqali cho'kma reaktsiyasi), jellarda, ozuqa muhitida va boshqalarda amalga oshiriladi. Cho'kma reaktsiyasining navlari yarim suyuq agar yoki agaroz jelida, ikki tomonlama immunodiffuzion. Ouchterloniya, radiap immunodiffuzioni, immunoepektroforez va boshq.

Halqali yog'ingarchilik reaktsiyasi. Reaktsiya tor cho'kma naychalarida amalga oshiriladi: eruvchan antijen immun zardobiga qatlamlanadi. Antigen va antikorlarning optimal nisbati bilan bu ikki eritmaning chegarasida shaffof bo'lmagan qatlam hosil bo'ladi. cho'kma halqasi. Reaksiyada antijen sifatida qaynatilgan va filtrlangan to‘qima ekstrakti ishlatilsa, bu reaksiya birinchi termopresipitatsiya reaksiyasi (kuydirgi haptenini aniqlash reaksiyasi) deb ataladi.
Ouchterlony qo'sh immunodiffuziya reaktsiyasi. Reaksiyani o'rnatish uchun shisha plastinka ustiga eritilgan agar jelining yupqa qatlami quyiladi va qattiqlashgandan so'ng unda quduqlar kesiladi. Antigenlar va immun zardoblar bir-biriga qarab tarqaladigan gelning quduqlariga alohida joylashtiriladi. Uchrashuv nuqtasida, ekvivalent nisbatda, ular oq chiziq shaklida cho'kma hosil qiladi. Ko'p komponentli tizimlarda antijenler va antikorlar bilan quduqlar o'rtasida cho'kmaning bir nechta chizig'i paydo bo'ladi; bir xil AGlarda cho'kma chiziqlari birlashadi; bir xil bo'lmagan AGlarda ular kesishadi.
Radial immunodiffuziya reaktsiyasi. Eritilgan agar jeli bilan immun zardobi stakanga teng ravishda quyiladi. Jelda qattiqlashgandan so'ng, quduqlar hosil bo'ladi, ularga antigen turli xil suyultirishlarga joylashtiriladi. Antigen jelga tarqalib, antitellar bilan quduqlar atrofida halqali yog'ingarchilik zonalarini hosil qiladi. Cho'kma halqasining diametri antigen konsentratsiyasiga mutanosibdir. Reaktsiya qon zardobidagi immunoglobulinlarni aniqlash uchun ishlatiladi turli sinflar, komplement tizimining tarkibiy qismlari va boshqalar.
Immunoelektroforez- elektroforez va immunopresipitatsiya usulining kombinatsiyasi: antigenlar aralashmasi gelning quduqlariga kiritiladi va elektroforez yordamida gelda ajratiladi, so'ngra immunoserum elektroforez zonalariga parallel ravishda truba ichiga qo'shiladi, ularning antikorlari tarqaladi. gel va antigen bilan "uchrashuv" joyida yog'ingarchilik chiziqlarini hosil qiladi.
Flokulyatsiya reaktsiyasi(Ramon bo'yicha) (lotincha f1oecus - jun yormalari) - toksin - antitoksin yoki toksoid - antitoksin reaktsiyasi paytida probirkada opalessensiya yoki flokulyant massa (immunoprecipitatsiya) paydo bo'lishi. Antitoksik sarum yoki toksoidning faolligini aniqlash uchun ishlatiladi.

HLA yozish- insonning asosiy gistokompozitsiya kompleksini o'rganish - HLA kompleksi. Ushbu shakllanish 6-xromosomadagi genlar hududini o'z ichiga oladi, ular turli xil immunitet reaktsiyalarida ishtirok etadigan HLA antijenlarini kodlaydi.

uchun vazifalar HLA yozish juda boshqacha bo'lishi mumkin - biologik identifikatsiya (HLA turi ota-ona genlari bilan birga meros bo'lib o'tadi), moyillikni aniqlash turli kasalliklar, organ transplantatsiyasi uchun donorlarni tanlash - bu donor va qabul qiluvchi to'qimalarning HLA tiplash natijalarini taqqoslashni o'z ichiga oladi. HLA tiplashdan foydalanib, bepushtlik holatlarini tashxislash uchun gisto-moslashuvchanlik antijenlari nuqtai nazaridan turmush o'rtoqlar qanchalik o'xshash yoki turlicha ekanligi aniqlanadi.

HLA yozishni taklif qiladi HLA polimorfizmini tahlil qilish va ikki usul bilan amalga oshiriladi - serologik va molekulyar genetik. HLA tiplashning klassik serologik usuli mikrolimfotsitotoksik testga asoslangan va molekulyar usulda PCR (polimeraza zanjiri reaktsiyasi) qo'llaniladi.

Serologik HLA yozish ajratilgan hujayra populyatsiyalarida amalga oshiriladi. Asosiy gistofotsitlar kompleksi antijenlari asosan limfotsitlar tomonidan olib boriladi. Shuning uchun I sinf antigenlarining asosiy tashuvchisi sifatida T limfotsitlar suspenziyasi, HLA II sinf antijenlarini aniqlash uchun esa B limfotsitlarining suspenziyasi qo'llaniladi. To'liq qondan kerakli hujayra populyatsiyalarini ajratib olish uchun santrifugalash yoki immunomagnit ajratish qo'llaniladi. Birinchi usul noto'g'ri ijobiy ma'lumotlarga olib kelishi mumkin, deb ishoniladi, chunki bu ba'zi hujayralarning o'limiga olib keladi. Ikkinchi usul aniqroq deb tan olingan - hujayralarning 95% dan ortig'i hayotiy bo'lib qoladi.

Ammo limfotsitotoksik testni o'tkazish uchun asos HLA yozish HLA I va II sinf antijenlarining turli xil allel variantlariga antikorlarni o'z ichiga olgan o'ziga xos sarumdir. Serologik test qaysi sarumlarning limfotsitlar bilan reaksiyaga kirishishini va qaysi biri reaksiyaga kirishmasligini tekshirish orqali HLA turini aniqlashi mumkin.

Agar hujayralar va sarum o'rtasida reaksiya yuzaga kelsa, natijada hujayra yuzasida antigen-antikor kompleksi hosil bo'ladi. Komplementni o'z ichiga olgan eritma qo'shilgandan so'ng, hujayra parchalanishi va o'limi sodir bo'ladi. Serologik HLA tiplash testi ijobiy (qizil floresans) va salbiy (yashil floresans) reaktsiyalarni baholash uchun floresan mikroskopiya yoki o'lik hujayralar yadrolarini bo'yash uchun faza-kontrast mikroskopiya yordamida baholanadi. HLA tiplash natijasi reaksiyaga kirgan sarumlar va antigenlarning oʻzaro reaksiyaga kirishuvchi guruhlari oʻziga xosligini hamda sitotoksiklik reaksiyasining intensivligini hisobga olgan holda olinadi.

Serologik usulning kamchiliklari HLA yozish o'zaro reaktsiyalarning mavjudligi, zaif antikor yaqinligi yoki HLA antigenlarining past ifodasi, bir qator HLA genlarida protein mahsulotlarining yo'qligi.

Zamonaviyroq, molekulyar usullar HLA yozish ular allaqachon standartlashtirilgan sintetik namunalardan foydalanadilar, ular leykotsitlar yuzasida antijenler bilan emas, balki DNK bilan reaksiyaga kirishadilar va namunada qaysi antijenler mavjudligini bevosita ko'rsatadilar. Molekulyar usullar tirik leykotsitlarni talab qilmaydi; har qanday inson hujayrasi o'rganish mumkin va bir necha mikrolitr qon ishlash uchun etarli yoki siz o'zingizni og'iz bo'shlig'i shilliq qavatidan qirib tashlash bilan cheklashingiz mumkin.

Molekulyar genetik HLA yozish PCR usulidan foydalanadi, uning birinchi bosqichi sof genomik DNKni (to'liq qondan, leykotsitlar suspenziyasidan, to'qimalardan) olishdir.

Keyin DNK namunasi nusxalanadi - ma'lum bir HLA lokusuga xos bo'lgan primerlar (qisqa bir zanjirli DNK) yordamida in vitro kuchaytiriladi. Har bir primer juftining uchlari ma'lum bir allelga mos keladigan noyob ketma-ketlikni qat'iy ravishda to'ldirishi kerak, aks holda kuchaytirish sodir bo'lmaydi.

PCRdan so'ng, takroriy nusxalash paytida ko'p miqdordagi DNK bo'laklari olinadi, ularni vizual ravishda baholash mumkin. Buning uchun reaksiya aralashmalari elektroliz yoki gibridlanishga duchor bo'ladi va maxsus kuchaytirish sodir bo'lganligi dastur yoki jadval yordamida aniqlanadi. HLA tiplash natijasi gen va allel darajalarida keng qamrovli hisobot shaklida taqdim etiladi. Amaldagi namunalarni standartlashtirish tufayli molekulyar HLA yozish aniqrog'i serologik. Bundan tashqari, u ko'proq ma'lumot beradi (ko'proq yangi DNK allellari) va boshqalar yuqori daraja uning tafsiloti, chunki u nafaqat antijenlarni, balki hujayrada qaysi antigen mavjudligini aniqlaydigan allellarni ham aniqlash imkonini beradi.

Immun lizis reaktsiyasi. Reaktsiya o'ziga xos antikorlarning hujayralar, shu jumladan eritrotsitlar va bakteriyalar bilan immun komplekslarini hosil qilish qobiliyatiga asoslanadi, bu klassik yo'l bo'ylab komplement tizimining faollashishiga va hujayra lizisiga olib keladi. Immun lizis reaksiyalaridan gemoliz reaksiyasi ko'p qo'llaniladi va bakterioliz reaksiyasi kam qo'llaniladi (asosan vabo va vaboga o'xshash vibrionlarni farqlashda).

Gemoliz reaktsiyasi. Komplement ishtirokida antikorlar bilan reaktsiya ta'sirida qizil qon hujayralarining bulutli suspenziyasi gemoglobinning chiqishi tufayli yorqin qizil shaffof suyuqlik - "lak qon" ga aylanadi. Diagnostik komplementni aniqlash reaktsiyasini (FFR) o'rnatishda gemoliz reaktsiyasi indikator sifatida ishlatiladi: erkin komplement mavjudligi yoki yo'qligi (fiksatsiyasi) ni tekshirish uchun.

Jeldagi mahalliy gemoliz reaktsiyasi(Erne reaksiyasi) gemoliz reaksiyasining variantlaridan biridir. Bu sizga antikor hosil qiluvchi hujayralar sonini aniqlash imkonini beradi. Antikorlarni - gemolizinlarni chiqaradigan hujayralar soni eritrotsitlar, o'rganilayotgan va to'ldiruvchi limfoid to'qimalarning hujayralari suspenziyasi bo'lgan agar jelida paydo bo'ladigan gemoliz plitalari soni bilan belgilanadi.

Immunofluoresans usuli

(RIF, immunofloressensiya reaktsiyasi) - ftoroxrom bilan konjugatsiyalangan Abs (Ags) yordamida o'ziga xos Ags (Abs) ni aniqlash usuli. U yuqori sezuvchanlik va o'ziga xoslikka ega. Infektsiyalarning ekspress diagnostikasi uchun ishlatiladi. kasalliklar (tadqiqot materialida patogenni aniqlash), shuningdek, Ab va sirt retseptorlari va leykotsitlar markerlarini (immunofenotiplash) va boshqa hujayralarni aniqlash uchun. Toʻgʻridan-toʻgʻri I. m. patologik materialdan yoki ftorxrom bilan konjugatsiyalangan o'ziga xos Absni o'z ichiga olgan mikrobial qobiqdan to'qimalarning bir qismini yoki smearni qayta ishlashdan iborat; preparat bog'lanmagan qorin bo'shlig'idan ozod qilish uchun yuviladi va floresan mikroskop ostida tekshiriladi. Ijobiy holatlarda ob'ektning atrofida porlayotgan immun kompleksi paydo bo'ladi. Nonspesifik luminesansni istisno qilish uchun nazorat qilish kerak. Da bilvosita. Ular. birinchi bosqichda to'qima bo'lagi yoki smear lyuminestsent bo'lmagan o'ziga xos vosita bilan, ikkinchisida - birinchi bosqichda ishlatilgan hayvonning -globulinlariga qarshi lyuminestsent vosita bilan ishlov beriladi. Ijobiy holatda Ar, At unga va Atga qarshi At (sendvich usuli) dan iborat yorug'lik majmuasi hosil bo'ladi. Hujayralarni fenotiplashda lyuminestsent mikroskopdan tashqari RIF ham hisobga olinadi. lazerli hujayralarni saralovchi .

Oqim sitometriyasi- hujayra, uning organellalari va unda sodir bo'ladigan jarayonlar parametrlarini optik o'lchash usuli.

Texnika lazer nuridan yorug'likning tarqalishini hujayra suyuqlik oqimida o'tayotganda aniqlashni o'z ichiga oladi va yorug'lik dispersiyasi darajasi hujayraning o'lchami va tuzilishi haqida tasavvurga ega bo'lishga imkon beradi. Bundan tashqari, tahlil hujayraning bir qismi bo'lgan (avtofloresans) yoki oqim sitometriyasidan oldin namunaga qo'shilgan kimyoviy birikmalarning floresans darajasini hisobga oladi.

Flüoresan monoklonal antikorlar yoki floresan bo'yoqlar bilan oldindan etiketlangan hujayra suspenziyasi oqim xujayrasi orqali o'tadigan suyuqlik oqimiga kiradi. Shartlar shunday tanlanganki, hujayralar birin-ketin so'zda tutilgan. reaktivda jetning gidrodinamik fokuslanishi. Ayni paytda hujayra lazer nurini kesib o'tadi, detektorlar quyidagilarni qayd qiladi:

yorug'likning kichik burchaklarda tarqalishi (1 ° dan 10 ° gacha) ( bu xususiyat hujayra hajmini aniqlash uchun ishlatiladi).

yorug'likning 90 ° burchak ostida tarqalishi (yadro / sitoplazma nisbati, shuningdek, hujayralarning heterojenligi va granularligi haqida hukm qilish imkonini beradi).

bir nechta floresan kanallari orqali floresans intensivligi (2 dan 18-20 gacha) - hujayra suspenziyasining subpopulyatsiya tarkibini aniqlash imkonini beradi va hokazo.

Coombs testi

To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi - bu antiglobulin testi (to'liq ikki valentli antikorlarni aniqlash imkonini beruvchi jelda aglutinatsiya), bu qizil qon hujayralari yuzasida IgG sinfidagi antikorlarni va komplementning C3 komponentini aniqlaydi. Odatda, to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi bilan aniqlangan antikorlar yaxshi tasdiqlangan antijen bilan bog'liq bo'lmagan keng o'ziga xoslikka ega. To'g'ridan-to'g'ri Kumbs testining ijobiy natijasi bemorda gemolitik anemiya mavjudligini aniq ko'rsatadi, ammo to'g'ridan-to'g'ri antiglobulin testi ijobiy bo'lgan barcha bemorlar bu kasallikdan aziyat chekmaydi. Bemorlarning taxminan 10 foizida qizil qon hujayralari membranasidagi antikorlar yoki komplement komponentlarini to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi bilan aniqlash mumkin emas (sinov salbiy), ammo shunga qaramay, ular otoimmün gemolitik anemiyadan aziyat chekmoqda. Bunday hollarda antikorlarning o'ziga xosligini aniqlash uchun ularning elutsiyasi bilan testlar qo'llaniladi. To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi, faqat komplement uchun ijobiy, odatda IgM tipidagi sovuq antikorlarga ishora qiladi. Ushbu holatda IgM antikorlari qachon qizil qon hujayralarida mavjud emas bazal harorat jismlar. Biroq, IgM antikorlari komplementni faol ravishda mahkamlashi va komplement qizil qon tanachalarida qolishi sababli, otoimmun gemolitik anemiyaning bu shakli (sovuq aggutin kasalligi) bilan Kumbs testi faqat komplement uchun ijobiy bo'ladi.

To'g'ridan-to'g'ri Coombs testi issiq antikorlar tufayli kelib chiqqan otoimmün gemolitik anemiyada, otoimmün dori-darmonli anemiyada (metildopani qabul qilganda, bemorlarning 20% ​​gacha) ijobiydir. ijobiy reaktsiya), gemolitik anemiyaning dori-adsorbsion turi, gemolitik anemiyaning immunokompleks turi (sinov faqat C3 uchun ijobiy), sovuq antikorlar keltirib chiqaradigan otoimmun gemolitik anemiya bilan - sovuq aglutinin kasalligi (test faqat C3 uchun ijobiy). Paroksismal sovuq gemoglobinuriyada bevosita Kumbs testi salbiy hisoblanadi.
IN o'tkir davr gemolitik inqiroz paytida ko'p miqdordagi antikorlar qayd etilgan qizil qon hujayralarining yo'q qilinishi, shuningdek antikorlarning etarli emasligi bilan bog'liq kasalliklar. surunkali kurs kasallik, salbiy to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi kuzatilishi mumkin.

:

• Laboratoriya qon testlarining sifatini ta'minlashning muhim sharti - materialni och qoringa, ertalab (12:00 dan oldin) olish.
• Sinovdan 12 soat oldin siz spirtli ichimliklar, chekish, ovqatlanish va jismoniy faoliyatni cheklashdan qochishingiz kerak.
• Ertalab qon tekshiruvi paytida siz suv ichishingiz mumkin.
• Dori-darmonlarni qabul qilishdan saqlaning; Agar dori-darmonlarni qabul qilishni to'xtatishning iloji bo'lmasa, siz laboratoriyaga xabar berishingiz kerak.
• Har qanday tibbiy diagnostika muolajalarini amalga oshirishdan oldin materialni olish tavsiya etiladi.
• Ayollarda gormonlar darajasini baholashda kunni hisobga olish kerak hayz davri Muayyan gormonlarni aniqlash uchun eng yaxshi vaqt qachon? Ushbu ma'lumotni shifokoringizdan olishingiz mumkin.

Indeks	Xarakterli
Analizator va test tizimi	Jel kartalari; DiaMed AG (Shveytsariya)
Malumot qiymatlari	Salbiy natija / Ijobiy natija
Interferentsiya qiluvchi omillar. Dorilar
Quyidagi dori-darmonlarni qabul qilishda ijobiy test mumkin: asetaminofen, salitsil kislotasi, aminopirin, antigistaminlar, karbromal, sefalosporinlar, xlorpromazin, xlorpropamid, sisplatin, klonidin, dipiron, etosuksimid, fenfluramin, fuadin, gidralazin, gidroxlorotiyazid, ibuprofen, insulin, izoniazid, levodopa, mefemeldotil kislotasi, mefemeldotil, megitatil , nomifensin, penitsilamin, penitsillinlar, fenatsetin, fenilbutazon, probenetsid, prokainamid, xinidin, xinin, rifampin, streptomitsin, sulfanilamidlar, sulfoniluriya hosilalari, tetratsiklin, triamteren, trimellitik angidrid
Foydalanish uchun ko'rsatmalar
Immun gemolitik anemiya diagnostikasi, gemolitik kasallik yangi tug'ilgan chaqaloqlar, dori vositalaridan kelib chiqqan immun gemolitik anemiya, gemolitik transfüzyon reaktsiyalari
Natijalarni talqin qilish
Odatda, to'g'ridan-to'g'ri Coombs testi salbiy hisoblanadi. Ijobiy test Coombs da: otoimmün gemolitik anemiya; yangi tug'ilgan chaqaloqlarning gemolitik kasalligi; dori-darmonli immun gemolitik anemiya; gemolitik transfüzyon reaktsiyalari

Kumbs reaktsiyasi - samarali usul inson qonida eritrotsitlar antijeni va anti-eritrotsit antikorlarini aniqlash bilvosita reaktsiya aglutinatsiya. Sinovning asosi - eritrotsitlar antijenlarini terish uchun G sinfidagi immunoglobulinlar (IgG) asosidagi o'ziga xos monoklonal reagentlardan foydalanish, so'ngra ikkinchi bosqichda Coombs antiglobulin sarumini (AGS) qo'llash.

AGS inson immunoglobulinlari G va monoklonal antikorlar bilan immunizatsiya qilingan laboratoriya hayvonlarining qonidan zardobni inson zardobining C3D to'ldiruvchisi bo'lgan tarkibiy qismlardan biriga aralashtirish orqali ishlab chiqariladi. AGS maxsus antikorlar bilan sezgir bo'lgan qizil qon hujayralarining aglutinatsiyasiga olib keladi. AGS ta'sirida qizil qon hujayralarida antikorlar bo'lmasa, ijobiy reaktsiya paydo bo'lmaydi.

Bilvosita Kumbs reaktsiyasi quyidagilarning mavjudligini aniqlashga imkon beradi:

• IgG reagentlari tomonidan aniqlangan eritrotsitlar antijenleri ("to'liq bo'lmagan" antikorlar, masalan, monoklonal reagentlar anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• IgG sinfining eritrotsitlarga qarshi antikorlari.

Bilvosita antiglobulin testi: qizil qon hujayralari antijenlarini aniqlash

Anti-D IgG koliklon misolida bilvosita Kumbs reaksiyasi usulini taqdim etamiz.

1. Toza probirkaga belgi qo'ying: tekshirilayotgan shaxsning ismini ko'rsating.
2. Probirkaga 2 tomchi (taxminan 0,1 ml) anti-D IgG zoliklon qo'shing.
3. Oldindan fiziologik eritma bilan yuvilgan tahlil qilingan eritrotsitlarning 5% suspenziyasidan 2 tomchi qo'shing. Sinov namunalarini zoliklon bilan aralashtiring.
4. Aralashmani suv hammomida yoki termostatda 37 ° C da 30 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
5. Probirkaga Paster pipetkasi yordamida 5 - 10 ml fiziologik eritma soling.
6. Naychani 1200 g markazdan qochma tezlashuv bilan 18-25°C da bir daqiqaga santrifüj qiling.
7. Tuzli eritmani olib tashlang.
8. Yana 2-3 marta santrifüj yordamida qizil qon hujayralarini yuvish tartibini takrorlang.
9. Qon hujayralari cho'kindisiga 2 tomchi antiglobulin sarum qo'shing va aralashtiring.
10. Naychani 18 - 25 ° S haroratda bir daqiqa davomida 1200 g markazdan qochiruvchi tezlashtirish bilan santrifüj qiling.
11. Dispenser yoki Paster pipetkasidan foydalanib, 3-5 tomchi fiziologik eritma qo'shing.
12. Cho'kmani qayta to'xtating va aglutinatsiyani vizual tarzda baholang. Fonda probirkaning pastki qismida aniq aglyutinatlar aniq yechim eritrotsitlar antijenini aniqlashni ko'rsatadi. Qon hujayralarining shaffof bo'lmagan suspenziyasi antigen yo'qligini ko'rsatadi.

Kumbs testi: izoimmunga qarshi eritrotsitlar antikorlarini skrining qilish

Tadqiqot donor va qabul qiluvchining barcha qizil qon hujayralari antijenlari uchun individual muvofiqlik testining bir qismi sifatida amalga oshiriladi. haqida xulosa to'liq muvofiqlik donor eritrotsitlari bo'lgan qabul qiluvchi sarumlar tahlilning barcha bosqichlarida gemoliz va / yoki aglutinatsiyaning yo'qligi asosida ishlab chiqariladi. Sinovning har qanday bosqichida gemoliz va/yoki aglutinatsiya belgilari qon namunalarining mos kelmasligini ko'rsatadi.

AB0 tizimi yordamida muvofiqlikni baholash, "sovuq" antikorlarni aniqlash

1. Donor qon namunasini tayyorlang:
   • avtomatik dispenser yordamida probirkaga 0,2 ml qon qo'shing;
   • Qizil qon hujayralarini 5,0 ml sho'r suvda 3 marta yuving;
   • Pelletni 3 dan 4 ml gacha past ionli kuchli LISS eritmasiga soling.
2. Ikkinchi toza naychani belgilang: qabul qiluvchining ismini va donorning ismini ko'rsating.
3. Avtomatik dispenserdan foydalanib, 0,1 ml qabul qiluvchining sarumini etiketli naychaga soling.
4. LISS eritmasiga 2 tomchi 5% li qizil qon tanachalari suspenziyasini qo'shing.
5. Aralashmani 1200 g markazdan qochma tezlashuv bilan 18 - 25 ° C haroratda 15 - 20 soniya davomida darhol santrifüj qiling.
6. Probirkani muloyimlik bilan silkitib, cho'kindini pastdan ajrating. Agglyutinatlar mavjudligini baholang. Gemoliz va/yoki aglutinatlar mavjudligi quyidagilarni anglatadi:
   • AB0 tizimiga muvofiq nomuvofiqlik;
   • bemorning zardobida AB0 antijenlariga xos bo'lmagan IgM yoki IgA sinfidagi "sovuq" antikorlarning mavjudligi.

"Issiq" antikorlarni aniqlash

1. Agar gemoliz va/yoki aglutinatlar bo'lmasa, trubkani 37 °C da 10-15 daqiqa davomida inkubatsiya qiling.
2. Naychani xona haroratida 1200 g 15-20 soniya davomida santrifüj qiling.
3. Naychani silkitib, supernatantda gemoliz va/yoki aglyutinatlar mavjudligini tekshiring. Ijobiy natija bemorning zardobida donor eritrotsitlar antijenlariga qarshi "iliq" IgM antikorlarini aniqlashni ko'rsatadi.

Coombs testida IgG antikorlarini aniqlash

1. Agar tadqiqotning oldingi bosqichida natija manfiy bo‘lsa, Paster pipetkasi yordamida probirkaga 5 ml 0,9% li NaCl eritmasidan qo‘shing.
2. Naychani 1200 g da 15 - 20 soniya davomida 18 - 25 ° C havo haroratida santrifüj qiling. Supernatantni ehtiyotkorlik bilan tashlash uchun Paster pipetkasidan foydalaning.
3. Qizil qon hujayralarini yuvishni yana 2-3 marta takrorlang.
4. Probirkaga 1 - 2 tomchi antiglobulin zardobi qo'shing. To'liq aralashtirishni amalga oshiring.
5. Naychani 1200 g da 15-20 soniya davomida santrifüj qiling.
6. Ehtiyotkorlik bilan qizil qon tanachalari cho'kmasini parchalab tashlang va reaktsiya natijasini ingl. Agglyutinatsiyani aniqlash bemorning qon zardobida donorning eritrotsit antijenlariga qarshi IgG antikorlarining mavjudligini anglatadi.

Gemolitik anemiya, o'z qizil qon hujayralariga qarshi qaratilgan otoimmün organlar tomonidan kelib chiqqan, aniq tushunilmagan. Biroq, ba'zi omillar (masalan, virus, g'ayritabiiy oqsil) qizil qon hujayralarini shunday o'zgartiradiki, tana ularni "begona narsa" sifatida qabul qiladi va antikorlar yordamida ular bilan kurashadi. Boshqa bir nazariyaga ko'ra, qizil qon tanachalariga qarshi qaratilgan antikorlar ba'zi kasalliklarda g'ayritabiiy plazma oqsili tanalarini shakllantirish jarayonida deyarli tasodifan paydo bo'ladi. Bunday oqsil tanalari, xuddi "tasodifiy" kabi, tashxis qo'yish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan reaktsiyalarni berishi mumkin (masalan, virusli pnevmoniya, ma'lumki, ijobiy Vasserman reaktsiyasini, ijobiy Pol-Bunnel reaktsiyasini va sovuq aglutinatsiya reaktsiyasini beradi) .

Ikkita bor otoantikorlarning asosiy turlari gemolitik anemiya uchun, ya'ni: issiq antikorlar (37 ° C da reaksiyaga kirishadi) va sovuq antikorlar (harorat nolga yaqinlashganda ularning reaktivligi ortadi). Issiq antikorlar sovuq antikorlarga qaraganda tez-tez uchraydi. Dacie, issiq gemolizinlar sovuqlarga qaraganda 2 marta tez-tez sodir bo'lishini aniqladi. Gemolizinlar va aglyutininlar bir-biridan tubdan farq qiladigan antikorlar emas: ular faqat ta'sir qilish tabiati bilan farqlanadi. Agglyutininlar qizil qon hujayralarini aglutinatsiya qiladi va gemolizinlar ularni gemolizning murakkab jarayoniga (komplement!) sezgir qiladi. Eritrositlarga biriktirilgan otoantikorlar eritrotsit-globin kompleksini hosil qiladi. Ushbu kompleks Coombs antiglobin testi yordamida aniqlanadi.

Coombs testi Kumb zardobi bilan amalga oshiriladi, uni tayyorlash uchun quyon odam zardobi bilan sensibilizatsiya qilinadi, unga qarshi quyon zardobida antikorlar hosil bo'ladi. Bunday sensibilizatsiyalangan sarum inson eritrotsitlariga ta'sir qilganda, eritrotsitlar retseptorlari blokirovka qiluvchi antikorlar bilan ishg'ol qilingan bo'lsa, ularning aglutinatsiyasi sodir bo'ladi. Ushbu blokirovka qiluvchi antikorlar inson zardobidan olinganligi sababli, ular inson plazmasiga sezgir bo'lgan va presipitinlarni o'z ichiga olgan quyon zardobi bilan aglutinatsiyalanadi. Bu reaksiya Kumbs testi deb ataladi; otoimmün organlar (Lo tit) tufayli gemolitik anemiya uchun u deyarli o'ziga xosdir (batafsil ma'lumot uchun, Maierga qarang).

Umuman olganda, gemolitik anemiya uchun eritrotsitlarning birlamchi buzilishi bilan Coombs testi salbiy, orttirilganlari bilan esa ijobiy. Biroq, bu qoidadan ba'zi istisnolar mavjud: noto'g'ri-musbat Kumbs testi konstitutsiyaviy gemolitik anemiya inqirozi paytida va zaif daraja- shuningdek, ba'zida splenektomiyadan keyin, revmatik artrit, sarkoidoz, tez-tez qon quyishdan keyin va tizimli qizil yuguruk bilan. Tabiiyki, orttirilgan gemolitik anemiyada otoimmun jismlar hosil bo'lmaganda, bu salbiy.

Gemolitik anemiya Otoimmün organlar tomonidan qo'zg'atilgan kasalliklarni quyidagilarga bo'lish mumkin:
a) o'tkir, subakut va surunkali shakllar, shuningdek yoqilgan
b) noma'lum etiologiyali idiopatik va c) simptomatik [virusli pnevmoniya (faqat sovuq aglyutininlar), surunkali limfatik leykemiya, retikulosarkoma, limfosarkoma, tizimli qizil yuguruk (asosan issiq, kamroq sovuq aglyutininlar), sifilisli (sovuq) xodimlar bilan)).
v) simptomatik [virusli pnevmoniya (faqat sovuq agglyutininlar), surunkali limfatik leykemiya, retikulosarkoma, limfosarkoma, tizimli qizil yuguruk (asosan, issiq, kamroq sovuq aglyutininlar), sifiliz (sovuq agglyutininlar), tuxumdonlar o'smalari (maglyutininlar) va o'smalar).

Gemolitik anemiya klinikasi, otoimmün organlar ta'sirida rivojlanadi, juda xilma-xildir va shuning uchun ularning umumiy xususiyatlarini chizish qiyin. klinik rasm. Barcha yoshdagi va ikkala jinsdagi odamlar bir xil darajada ta'sir qiladi. Shunga qaramay, idyopatik shakllar ayollarda ko'proq kuzatiladi (Sacks va Workman).

Idiopatik shaklning klinik ko'rinishi kasallikning og'irligiga qarab o'zgaradi. IN surunkali holatlar Boshlanish asta-sekin, kasallik ko'p yillar davomida tez-tez kuchayishi bilan davom etadi. Anemiyaning og'irligi gemoliz darajasiga qarab o'zgaradi. Gemoglobinning 10% gacha pasayishi kuzatiladi, boshqa hollarda gemoglobin uzoq vaqt davomida 50-60% darajasida qoladi. Retikulotsitozning intensivligi va teri va sarumning ikterik ranglanishi gemoliz darajasiga mos keladi. Siydikda bilirubin juda kam uchraydi, chunki u buyraklar orqali o'tmaydi, ammo gemoglobinuriya kuzatiladi. Surunkali holatlarda taloq ko'pincha kattalashadi va hatto juda muhim hajmga yetishi mumkin, ammo boshqa hollarda u hali ham sezilishi mumkin. Jigar kamdan-kam hollarda kattalashmaydi.

Ko'p hollarda qonda yilda makrositoz kuzatiladi o'tkir bosqichlar mikrotsitlar ham ko'p, normoblastoz va polixromaziya kamdan-kam hollarda bo'lmaydi, leykotsitoz 30 000 ga etishi mumkin, trombotsitlar normal. Biroq, ba'zi hollarda, og'ir trombotsitopeniya mavjud. Evans bu holatlarni trombotsitlarga qarshi antikorlarning bir vaqtning o'zida mavjudligi bilan izohlaydi, shuning uchun ham gemolitik anemiya, ham otoimmün organlarning ta'siridan trombotsitopeniya - Evans sindromi mavjud. Osmotik qarshilik biroz kamayadi, lekin konstitutsiyaviy globulyar hujayrali anemiyadagi kabi bir xil darajada va doimiy emas. 6 soatdan keyin issiqlikka chidamlilik testi (Hegglin-Maier) ham engil gemoliz (o'z kuzatuvi) berishi mumkin, ammo Marchiafava anemiyasiga qaraganda kamroq darajada. Gemosiderin siydikda ham uchraydi (o'z kuzatuvi).