Passiv aglutinatsiya reaktsiyalari. Bilvosita aglutinatsiya reaksiyalari. Bilvosita yoki passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (IRHA, RPHA). Teskari RNGA. Passiv gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (PHA).
Bular reaktsiyalar chaqiriladi bilvosita (passiv), chunki ular turli korpuskulyar zarrachalar yuzasida sun'iy ravishda so'rilgan Ag (yoki AT) dan foydalanadilar.
Bilvosita yoki passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RNGA, RPGA) eng sezgir serologik reaksiyalardan biridir. Bu AT ning turli qizil qon hujayralarida fiksatsiyalangan Ag bilan o'zaro ta'sir qilish qobiliyatiga asoslanadi, keyinchalik ular aglyutinatsiyalanadi. Diagnostikaning barqarorligi uchun qizil qon tanachalari rasmiylashtiriladi.
Teskari RNGA qon zardobida Agni aniqlash uchun ishlatiladi; Buning uchun eritrotsitlarga Ag emas, balki AT fiksatsiya qilinadi. Ushbu turdagi reaktsiyalar yuqumli kasalliklarni tashxislash, homiladorlikni aniqlash, aniqlash uchun keng qo'llaniladi yuqori sezuvchanlik dori-darmonlarga va boshqalarga.
Tormoz reaktsiyasi passiv gemagglyutinatsiya (RTPGA) - yanada rivojlantirish RNGA; ma'lum ma'noda uning o'ziga xosligini nazorat qiladi. Undan farqli o'laroq RNGA, uchta komponentni o'z ichiga oladi; Ag, AT va Ag (AT) eritrotsitlarda adsorbsiyalanadi. Dastlab, Ag AT (standart antiserum) bilan reaksiyaga kirishadi, keyin aralashmaga bir xil Ag (yoki AT) bilan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar qo'shiladi. Agar Ag ning AT bilan o'zaro ta'sirida tizimda erkin AT (yoki Ag) qolmasa, eritrotsit diagnostikumining aglutinatsiyasi kuzatilmaydi.
Bu qizil qon hujayralari yoki neytral foydalanadi sintetik materiallar(masalan, lateks zarralari), ularning yuzasida antijenler (bakterial, virusli, to'qima) yoki antikorlar so'riladi. Ularning aglutinatsiyasi tegishli sarumlar yoki antijenler qo'shilganda sodir bo'ladi. Antigenlar bilan sezgir bo'lgan qizil qon hujayralari antigenik eritrotsit diagnostikum deb ataladi va antikorlarni aniqlash va titrlash uchun ishlatiladi. Antikorlar bilan sezgir bo'lgan eritrotsitlar. immunoglobulin eritrotsit diagnostikumlari deb ataladi va antigenlarni aniqlash uchun ishlatiladi.
Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi bakteriyalar keltirib chiqaradigan kasalliklarni aniqlash uchun ishlatiladi ( tif isitmasi va paratif isitmasi, dizenteriya, brutsellyoz, vabo, vabo va boshqalar), protozoa (bezgak) va viruslar (gripp, adenovirus infektsiyalari, virusli gepatit B, qizamiq, Shomil orqali yuqadigan ensefalit, Qrim gemorragik isitmasi va boshqalar), shuningdek, ma'lum gormonlarni aniqlash uchun bemorning yuqori sezuvchanligini aniqlang. dorilar va penitsillin va insulin kabi gormonlar.
Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (RPHA). Passiv gemagglyutinatsiya testi sezgir usuldir serologik diagnostika va erta va retrospektiv diagnostika uchun, shuningdek, emlangan odamlarning immunopogik holatini aniqlash uchun ishlatiladi. Tulyaremiya bilan og'rigan bemorlarda antikorlar odatda kasallikning 1 yoki 2-haftasi oxirida aniqlanadi; 1-1,5 oydan keyin RPHA titrlariga etadi. maksimal ishlash(1: 100000-1: 20000, kamdan-kam hollarda yuqori), shundan keyin ular kamayadi va uzoq vaqt davomida 1: 100-1: 200 darajasida qoladi.
Emlangan odamlarda antikorlar ham doimiy ravishda aniqlanadi, ammo past titrlarda, emlashdan 1-1,5 oy o'tgach, 1:2000-1:5000 dan oshmaydi va bir necha yil davomida 1:20-1:80 past darajada qoladi.
RPHA ni aniqlash uchun antijen tulyaremiya eritrotsit diagnostikum (antigenik) hisoblanadi. Preparat suyuq va quruq shaklda mavjud bo'lgan tulyaremiya antijeni bilan sensibilizatsiyalangan qo'y qizil qon tanachalaridir. Suyuq preparat - 10% konsentratsiyali formaldegid eritmasida qizil qon hujayralarining 10% suspenziyasi. Quruq liyofillangan preparat - konservantsiz eritrotsitlarning vakuumda quritilgan 10% suspenziyasi. Ishlatishdan oldin u yorliqdagi ko'rsatmalarga muvofiq suyultiriladi. Polistirol plitalaridagi reaktsiyani o'rnatish uchun ikkala dori ham 2,5% konsentratsiyada va mikrotomiyalarda reaktsiyani o'rnatishda - 0,5% konsentratsiyada qo'llaniladi.
RPGA ni o'rnatish texnikasi. Sinov sarumlari fiziologik eritma bilan 1:5 (1:10) bilan suyultiriladi va 30 daqiqa davomida 56 ° C da isitiladi. Shundan so'ng, qo'y eritrotsitlariga heterojen antitelolarni olib tashlash uchun zardoblarga formalinlashtirilgan qo'y eritrotsitlarining 50% suspenziyasi bilan ishlov beriladi. Buning uchun 1 ml sarumga 2 tomchi (0,05 ml) miqdorida qizil qon tanachalarini qo'shing va chayqatish orqali yaxshilab aralashtiring. Sarum eritrotsitlar to'liq joylashguncha qoldiriladi yoki xona haroratida bir soatdan keyin santrifüj qilinadi, shundan so'ng u tekshirishga tayyor bo'ladi.
Suyultiruvchi suyuqlik polistirol plastinka ustidagi bir qator quduqlarga 0,5 ml hajmda quyiladi. Sarumlarni dastlabki o'rganish vaqtida ularni plastinkaning qisqa qatoriga (6-quduq) reaktsiyani o'rnatish orqali tekshirish tavsiya etiladi. Agar antikorlar qisqa ketma-ketlikda aniqlansa, sarumlar suyultirishning uzoq seriyasida (12 quduq) qayta tekshiriladi. Suyultiruvchi suyuqlikni to'kib tashlangandan so'ng, har bir qatorning birinchi qudug'iga (qisqa yoki uzun) 0,5 ml sinov sarumini 1:5 nisbatda suyultiring. Keyin bir xil hajmdagi sarum ikki marta suyultirish bilan titrlanadi. Shunday qilib, sarum suyultirishlari qisqa seriyalarda 1:10 dan 1:320 gacha, uzoq seriyalarda esa 1:10 dan 1:20480 gacha olinadi. Sarum titrlangandan so'ng, har bir quduqqa bir tomchi (0,05 ml) sezgir eritrotsitlarning 2,5% li ish suspenziyasi qo'shiladi. Plitalarning tarkibi bir hil suspenziya olinmaguncha yaxshilab chayqatiladi. Plitalar xona haroratida statsionar stol yuzasida qoldiriladi. Reaksiyani dastlabki qayd etish 2-3 soatdan keyin amalga oshiriladi, titrni yakuniy aniqlash quduqlarda qizil qon hujayralarining to'liq cho'kishidan keyin amalga oshiriladi. Reaksiya uchun quyidagi nazorat vositalari ko'zda tutilgan: 1) 0,5 ml hajmda 1:10 nisbatda suyultirilgan sinov zardobi + 1 tomchi 2,5% li sezgir bo'lmagan eritrotsitlar suspenziyasi; 2) 0,5 ml hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik + 1 tomchi sezgir bo'lmagan eritrotsitlarning 2,5% suspenziyasi; 3) 0,5 ml hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik + sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarning 2,5% suspenziyasidan 1 tomchi. Barcha nazorat aniq salbiy reaktsiya berishi kerak.
RPGA ni hisobga olish va baholash. Reaksiya tomonidan baholanadi quyidagi diagramma:
1) keskin ijobiy reaktsiya(++++) - qizil qon tanachalari teshikning tubiga tekis qatlamda "soyabon" shaklida tushadi, ular ko'pincha qirralarning erib ketgan eriydi;
2) ijobiy reaktsiya (+++) - qizil qon hujayralari quduq tubining kamida 2/3 qismini qoplaydi;
3) zaif musbat reaksiya (++) - aglyutinat kichik va quduqning eng markazida joylashgan;
4) shubhali reaktsiya (+) - quduqning eng markazida eritrotsitlar cho'kmasi atrofida aglyutinatning alohida donalari mavjud;
5) salbiy (-) - teshikning pastki qismida qizil qon hujayralari "tugma" yoki silliq, keskin aniqlangan qirralari bo'lgan kichik halqa shaklida joylashadi.
Sarum titri juda aniq reaktsiya bergan (kamida uchta plyus) sarumning oxirgi suyultirilishi asosida hisobga olinadi. 1:100 yoki undan yuqori suyultirish diagnostik titr hisoblanadi, ammo, xuddi RA holatida bo'lgani kabi, uning oshishini kuzatish kerak.
Tulyaremiya uchun RPGA juda o'ziga xosdir va ba'zilarini aniqlaydi o'zaro reaktsiyalar faqat brutsellyoz zardoblari bilan. Differensial diagnostika Gomologik antigen bilan sezilarli darajada yuqori bo'lgan RPGA dagi titrlarning balandligi bilan mumkin.
Mikro hajmlarda RPHA ni o'rnatish texnikasi. RPGA 25 mkl va 50 mkl hajmdagi materialni titrlash imkonini beruvchi Takachi tipidagi mikrotitrator (yoki mikropipetli dumaloq tubli mikroplastinkalar) yordamida mikro hajmlarda amalga oshirilishi mumkin. Reaksiya texnikasi va barcha operatsiyalar ketma-ketligi polistirol plitalarini o'rganish bilan bir xil. Ammo shuni yodda tutish kerakki, mikrometodning sezgirligi odatda makrometodnikidan bir marta suyultirish (ya'ni 2 marta) past bo'ladi.
Reaksiyani mikrotitratorda o'rnatish uchun har bir quduqqa tomizuvchi pipetka yordamida 50 mkl hajmdagi suyultiruvchi suyuqlik qo'shiladi. Keyin boshi 50 mkl bo'lgan titratorlar yordamida sinov sarumi boshni botirib yig'iladi. Suyuqlik titrator boshini to'ldirganligiga ishonch hosil qiling. Sarum bilan titrator birinchi quduqqa o'tkaziladi va uni ushlab turadi vertikal holat, bir nechta qiling aylanish harakatlari borish va qaytish sayohati. Keyin titrator keyingi quduqqa o'tkaziladi va manipulyatsiya takrorlanadi. Titrlash bir vaqtning o'zida bir necha qatorda amalga oshirilishi mumkin. Butun seriya titrlangandan so'ng titrator distillangan suv bilan (2 porsiyani o'zgartirib) aylanma harakatlar bilan yuviladi, suv tampon yordamida boshidan chiqariladi va yondiruvchi olovda yondiriladi.
Titrlashdan keyin quduqlarga 25 mkl eritrotsit diagnostik suyuqlik qo'shing. RPHA diagnostikumining kontsentratsiyasi mikrotomiyalarda 0,5% bo'lishi kerak (ya'ni, qizil qon hujayralarining 2,5% suspenziyasi qo'shimcha ravishda 5 marta suyultiriladi). Qizil qon hujayralarini qo'shgandan so'ng, plitalar bir hil suspenziya olinmaguncha biroz chayqalishi kerak. Natijalar 1-1,5 soat ichida qayd etilishi mumkin, bu mikrotitrda RPGA ning muhim afzalligi hisoblanadi. Bunga qo'shimcha ravishda, ushbu texnikada barcha reaksiya moddalari va sinov sarumlarining kichik miqdori talab qilinadi.
Reaktsiya quyidagi sxema bo'yicha hisobga olinadi:
1) "+" - to'liq gemagglyutinatsiya, bunda qizil qon hujayralari quduq tubiga tekis qatlamda "soyabon" shaklida tushib, tubining kamida 2/3 qismini egallaydi;
2) "+-" - qisman gemagglyutinatsiya, bunda qizil qon tanachalari kichik o'lchamdagi bo'sh halqa shaklida pastga tushadi;
3) "-" - gemagglyutinatsiyaning yo'qligi, qizil qon tanachalari silliq qirrali kichik tugma yoki halqa shaklida pastga tushganda.
RPHAda olingan ijobiy natijaning o'ziga xosligi uch komponentli reaktsiya - passiv gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (PHA) yordamida tekshirilishi mumkin.
RTPGA o'rnatish texnikasi. Ushbu reaktsiya RPGA ijobiy natijasining o'ziga xosligini shubhali yoki alohida epidemiologik qiziqish uyg'otganda tasdiqlash uchun ishlatiladi. Reaksiya mexanizmi o'ldirilgan tulyaremiya bakteriyalarining suspenziyasi sinov zardobiga qo'shilganda gemagglyutinatsiyaning o'ziga xos inhibisyonidir. Reaksiyada uchta komponent o'zaro ta'sir qiladi: sinov zardobi, o'ziga xos tulyaremiya antijeni va antigen eritrotsit diagnostikum RTPHA odatda 7-8 quduq qatoriga joylashtiriladi. RTPGA bilan parallel ravishda takroriy RPGA ni o'rnatish tavsiya etiladi. Ikki qator quduqlarga 0,25 ml suyultiruvchi suyuqlik quyiladi, so'ngra 0,25 ml hajmdagi sinov zardobi ikkala qatorning birinchi quduqlariga qo'shiladi va titrlash amalga oshiriladi.Ikki qator bir xil zardob suyultirishlari olinadi. Ikkinchi qatorning barcha quduqlariga 0,25 ml suyultiruvchi suyuqlik, birinchi qator quduqlariga 0,25 ml tulyaremiya bakteriyasi suspenziyasi qo'shing. Tularemiya diagnosticum qo'llaniladi (1 ml da 25 milliard tulyaremiya bakteriyasi mavjud), ilgari 50 marta suyultirilgan. Ushbu suspenziya 1 ml da 500 million bakteriya yoki 0,25 ml hajmda 125 million bakteriyani o'z ichiga oladi. Antigen qo'shilgandan so'ng, plastinka xona haroratida 1 soat davomida qoldiriladi, shundan so'ng ikkala qatorning barcha quduqlariga bir tomchi (0,05 ml) eritrotsit diagnostikum qo'shiladi, plastinka chayqatiladi va tekis stol yuzasida qoldiriladi. Buxgalteriya hisobi 2-3 soatdan keyin amalga oshiriladi.
RTPGA ni hisobga olish va baholash. Agar sinov zardobida o'ziga xos tulyaremiyaga qarshi antikorlar mavjud bo'lsa, ular qo'shilgan antigen bilan neytrallanadi va birinchi qator quduqlarida gemagglyutinatsiya sodir bo'lmaydi yoki yuqori sarum titrida gemagglyutinatsiya kamroq (2-4) sonida kuzatiladi. quduqlar RPHA bilan qatorga qaraganda. Bunday holda, natijalarning o'ziga xosligi tasdiqlandi. Ikkala qatorda gemagglyutinatsiya qayd etilsa, ya'ni. Agar RTPGA va RPGA natijalari mos kelsa, bu test zardobida tulyaremiyaga qarshi antikorlarning yo'qligini ko'rsatadi. Bunday holda, RPGA ning asosiy natijasi nonspesifik deb hisoblanadi.
RTHG ni mikrotomiyalarda bosqichma-bosqich qo'yish texnikasi. RTPGA, xuddi RPGA kabi, Takachi tipidagi mikrotiter yordamida mikro hajmlarda bajarilishi mumkin. Buning uchun 0,25 mkl suyultiruvchi suyuqlikni har birida 7-8 teshikdan iborat ikki qatorli mikroplastinkalar quduqlariga soling. Keyin titrator yordamida tekshiriluvchi zardobdan 0,25 mkl qo‘shiladi va ikkala qatorda titrlanadi. Shundan so'ng birinchi qatordagi har bir quduqqa 25 mkl tulyaremiya antijeni (kontsentratsiyasi 1 ml da 500 million tulyaremiya bakteriyasi) qo'shiladi, ikkinchi qatorga esa 25 mkl suyultiruvchi suyuqlik qo'shiladi. Plitalar xona haroratida 1 soatga qoldiriladi, shundan so'ng ikkala qatorning barcha quduqlariga 25 mkl antigenik zritrositik diagnostik (0,5% konsentratsiya) qo'shiladi. Natijalarni hisobga olish va baholash makro hajmlardagi reaktsiyalarga o'xshash tarzda amalga oshiriladi.
Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi) antijenler yoki antikorlarni aniqlash va aniqlash usuli, ular ishtirokida yuzaga keladigan, yuzasida tegishli o'ziga xos yoki antijenler ilgari adsorbsiyalangan qizil qon hujayralarining aglutinatsiyasi fenomeniga asoslangan.
1. Kichik tibbiy ensiklopediya. - M.: Tibbiy ensiklopediya. 1991-96 yillar 2. Birinchi tibbiy yordam. - M.: Buyuk rus entsiklopediyasi. 1994 yil 3. Ensiklopedik lug'at tibbiy atamalar. - M.: Sovet ensiklopediyasi. - 1982-1984 yillar.
Boshqa lug'atlarda "bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi" nima ekanligini ko'ring:
bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi- RNGA Laboratoriya sinovi eritrotsitlar diagnostikasi yordamida. [Vaktsinologiya va immunizatsiya bo'yicha asosiy atamalarning inglizcha-ruscha lug'ati. Jahon sog'liqni saqlash tashkiloti, 2009] Mavzular vaksinologiya, immunizatsiya Sinonimlar RNGA EN... ... Texnik tarjimon uchun qo'llanma
- (RNHA; passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasining sinonimi) antijenler yoki antikorlarni aniqlash va identifikatsiyalash usuli, ular ishtirokida yuzaga keladigan, ular yuzasida ilgari adsorbsiyalangan eritrotsitlarning aglutinatsiyasi fenomeniga asoslangan... .. . Katta tibbiy lug'at
- (RPHA) qarang Bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi... Katta tibbiy lug'at
Ushbu sahifa lug'atdir. # A... Vikipediya
Veterinariya entsiklopedik lug'atida qabul qilingan asosiy qisqartmalar- a., aa, artena, arteriae aa ana (teng) SSSR Tibbiyot fanlari akademiyasi SSSR Tibbiyot fanlari akademiyasi SSSR Fanlar akademiyasi SSSR Fanlar akademiyasi Bac. Bacillus Bact. Bakteriya BSSR Belorussiya SSR c., asrlar. asr, asrlar v., vv. vena, venae VASKHNIL Butunittifoq Lenin ordeni va... ...
Bu atamaning boshqa maʼnolari ham bor, qarang: Oʻlat. Yirtqich hayvonlarning distemperi (Kare kasalligi) o'tkir yoki subakut yuqumli virusli kasallik, isitma, shilliq qavatlarning kataral yallig'lanishi, terining shikastlanishi, markaziy ... ... Vikipediya bilan namoyon bo'ladi.
- (renes) siydik hosil qilish funktsiyasi orqali organizmning kimyoviy gomeostazini tartibga soluvchi juft ajratuvchi va endokrin organ. ANATOMIK FIZIOLOGIK ESKIYA Buyraklar retroperitoneal bo'shliqda (Retroperitoneal bo'shliq) ... ... joylashgan. Tibbiy ensiklopediya
I (trixinelloz; sinonimi: trixinoz, "bo'rtiq") nematodalar guruhidan isitma, miyalji, yuzning shishishi bilan tavsiflangan gelmintozlar, teri toshmasi, qon eozinofiliyasi va og'ir holatlarda jarohatlar ichki organlar va markaziy ...... Tibbiy ensiklopediya
- (nematodozlar) yumaloq qurtlar nematodlar keltirib chiqaradigan gelmintozlar Nematoda sinfi. Boshqa gelmintozlar qatorida N. mavjud eng yuqori qiymat odam patologiyasida ularning ko'pchiligi geogelmintozlar (qarang Gelmintozlar ); ularning tuxumlari yoki lichinkalarining rivojlanishi ... ... Tibbiy ensiklopediya
yuqumli epididimit- Guruch. 1. Yuqumli epididimitli qo'yda chap moyakning kattalashishi. Guruch. 1. Yuqumli epididimitli qo'yda chap moyakning kattalashishi. qo'ylarning yuqumli epididimiti (Epididymitis infectiosa arietum), surunkali yuqumli... ... Veterinariya ensiklopedik lug'ati
Qarang: bilvosita gemagglyutinatsiya reaktsiyasi... Katta tibbiy lug'at
Reaktsiya beriladi:
1) polisaxaridlarni, oqsillarni, bakterial ekstraktlarni va boshqa yuqori dispersli moddalarni, rikketsiyalarni va viruslarni aniqlash uchun, ularning an'anaviy RAlarda aglutininlar bilan komplekslari ko'rinmaydi;
2) bemorlarning qon zardobida ushbu yuqori dispersli moddalar va kichik mikroorganizmlarga antikorlarni aniqlash.
Bilvosita yoki passiv aglutinatsiya deganda antikorlarning inert zarrachalar (lateks, tsellyuloza, polistirol, bariy oksidi va boshqalar yoki qo'y qizil qon tanachalari, I(0)-inson qon guruhi) ustida oldindan adsorbsiyalangan antijenler bilan o'zaro ta'siri tushuniladi.
Passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasida (RPHA), qizil qon hujayralari. Antigen yuklangan qizil qon hujayralari bu antigenga xos antikorlar mavjudligida bir-biriga yopishadi va cho'kadi. Antigen-sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar RPGA da antikorlarni aniqlash (serodiagnoz) uchun eritrotsit diagnostikum sifatida ishlatiladi. Agar qizil qon hujayralari antikorlar bilan to'ldirilgan bo'lsa (eritrotsit antikor diagnostikum), u antijenlarni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin.
Guruch. 3. RPGA sxemasi: antigen (3) bilan yuklangan qizil qon tanachalari (1) o'ziga xos antikorlar (4) bilan bog'langan.
Sahnalashtirish. Polistirol plitalari quduqlarida sarumning ketma-ket suyultirilishi tayyorlanadi. Oxirgi quduqqa 0,5 ml aniq ijobiy sarum va oxirgi quduqqa 0,5 ml fiziologik eritma (nazorat) qo'shing. Keyin barcha quduqlarga 0,1 ml suyultirilgan eritrotsit diagnostikum qo'shiladi, chayqatiladi va 2 soat davomida termostatga joylashtiriladi.
Buxgalteriya hisobi. IN ijobiy holat eritrotsitlar teshikning pastki qismida katlanmış yoki qirrali (teskari soyabon) bo'lgan tekis qatlamli hujayralar shaklida joylashadi, salbiyda - tugma yoki halqa shaklida joylashadi.
4-rasm. RNGA (RPGA) uchun buxgalteriya hisobi.
Botulinum toksinini aniqlash uchun o'tkazilgan rentgen tekshiruvi natijalarini hisobga olish.
Botulizm qo‘zg‘atuvchisi Clostridium botulinum yettita serovarning (A, B, C, D, E, F, G) toksinlarini hosil qiladi, ammo A, B, E serovarlari ko‘proq uchraydi.Barcha toksinlar antigen xossalari bilan farqlanadi va mumkin. turiga xos sarumlar yordamida reaksiyalarda farqlanishi mumkin. Shu maqsadda bemorning zardobi bilan passiv (bilvosita) gemagglyutinatsiya reaktsiyasi o'tkazilishi mumkin, unda toksin mavjudligi taxmin qilinadi va A, B, E tipidagi antitoksik anti-botulinum zardoblarining antikorlari bilan yuklangan qizil qon hujayralari normal. sarum nazorat vazifasini bajaradi.
Guruch. 3. RNGA bayonoti va natijasi.
Buxgalteriya hisobi. Ijobiy holatda, qizil qon tanachalari teshikning pastki qismida katlanmış yoki qirrali (teskari soyabon) bo'lgan hujayralar qatlami shaklida joylashadi; salbiy holatda ular tugma yoki halqa shaklida joylashadilar. .
Xulosa: bemorning qon zardobida E tipidagi botulinum toksini aniqlandi.
Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (HRT).
Guruch. 8. Gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaksiyasi (HAI) (sxema).
Reaksiya printsipi AT ning turli viruslarni bog'lash va ularni zararsizlantirish qobiliyatiga asoslangan bo'lib, qizil qon tanachalarini aglutinatsiya qilishni mumkin emas. Vizual ravishda, bu ta'sir gemagglyutinatsiyani "inhibe qilish" da o'zini namoyon qiladi. RTGA virusli infektsiyalarni diagnostika qilishda o'ziga xos antigemagglutininlarni aniqlash va turli viruslarni ularning gemagglyutininlari orqali aniqlash uchun ishlatiladi, bu Ag xususiyatlarini namoyon qiladi.
Viruslarni tiplash RTGA reaktsiyasida turga xos sarumlar to'plami bilan amalga oshiriladi. Reaktsiya natijalari gemagglyutinatsiyaning yo'qligi bilan hisobga olinadi. H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 va boshqalar antigenlari bo'lgan A tipidagi virus subtiplari RTGAda homolog turga xos sarumlar to'plami bilan farqlanishi mumkin.
Guruch. 9. Gripp virusini yozish uchun RTGA natijalari
Afsona: - gemagglyutinatsiyani inhibe qilish (tugma); - gemagglyutinatsiya (soyabon).
Xulosa: O'rganilayotgan materialda H3N2 antijeni bilan A tipidagi gripp virusi mavjud
Bilvosita (passiv) gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (IRHA) qizil qon hujayralari, agar ularning yuzasida eriydigan antigen adsorbsiyalangan bo'lsa, adsorbsiyalangan antigenga antikorlar bilan o'zaro ta'sirlashganda aglutinatsiya qilish qobiliyatiga ega bo'lishiga asoslanadi. RNGA diagrammasi rasmda ko'rsatilgan. 34. RNGA bir qator infektsiyalarni tashxislashda keng qo'llaniladi.
Guruch. 34. Passiv gemagglyutinatsiya reaksiyasi (RPHA) sxemasi. A - eritrotsit diagnostikumini olish: B - RPGA: 1 - eritrotsit: 2 - o'rganilayotgan antigen; 3 - eritrotsitlar diagnostikasi; 4 - o'rganilayotgan antigenga antikor: 5 - aglutinat
Reaktsiyani o'rnatish. Sinov zardobi 30 daqiqa davomida 56 ° C da isitiladi, ketma-ket 1:10 - 1:1280 nisbatda suyultiriladi va 0,25 ml dan probirkalar yoki quduqlarga quyiladi, bu erda 2 tomchi eritrotsit diagnostikum (ularga antigen adsorbsiyalangan eritrotsitlar) tomiziladi. ) keyin qo'shiladi.
Nazorat: ma'lum immun zardobi bilan eritrotsit diagnostikum suspenziyasi; diagnostikni normal sarum bilan to'xtatib turish; sinov sarum bilan oddiy qizil qon hujayralari suspenziyasi. Birinchi nazoratda aglyutinatsiya sodir bo'lishi kerak, ikkinchi va uchinchisida u sodir bo'lmasligi kerak.
RIGA-dan foydalanib, agar ma'lum antikorlar qizil qon hujayralariga adsorbsiyalangan bo'lsa, noma'lum antigenni aniqlashingiz mumkin.
Gemagglyutinatsiya reaksiyasini Takachi mikrotitrator yordamida 0,025 ml hajmda (mikrometod) bajarish mumkin.
1. U nimani bildiradi? ijobiy natija Qizil qon hujayralari va virus mavjudligi uchun tekshirilayotgan material o'rtasidagi RHA?
2. Qizil qon hujayralariga virus va unga mos keladigan sarum qo'shilsa, ularning aglutinatsiyasi sodir bo'ladimi? Bu hodisani ochib beruvchi reaksiya qanday nomlanadi?
Mashq qilish
RIGA natijasini hisobga oling va ro'yxatdan o'tkazing.
Yog'ingarchilik reaktsiyasi
Cho'kma reaktsiyasida elektrolitlar ishtirokida eriydigan antigen (lizat, ekstrakt, hapten) va o'ziga xos antikordan iborat o'ziga xos immun kompleks cho'kadi.
Bu reaksiya natijasida hosil bo'lgan loyqa halqa yoki cho'kma cho'kma deyiladi. Bu reaksiya aglutinatsiya reaksiyasidan asosan antigen zarrachalarining kattaligi bilan farq qiladi.
Yog'ingarchilik reaktsiyasi odatda bir qator infektsiyalarni tashxislashda antigenni aniqlash uchun ishlatiladi ( kuydirgi, meningit va boshqalar); sud tibbiyotida - qon, sperma va boshqalar turlarini aniqlash; sanitariya-gigiyena tadqiqotlarida - mahsulotlarning qalbakilashtirilganligini aniqlashda; uning yordami bilan hayvonlar va o'simliklarning filogenetik munosabatlari aniqlanadi. Reaktsiya uchun sizga kerak bo'ladi:
1. Antikorlar (presipitinlar) - bilan immun zardob yuqori titr antikorlar (1:100000 dan kam bo'lmagan). Cho'kma zardobining titri u reaksiyaga kirishadigan antigenning eng yuqori suyultirilganligi bilan belgilanadi. Sarum odatda suyultirilmagan yoki 1:5 - 1:10 suyultirilgan holda ishlatiladi.
2. Antigen - oqsil yoki lipoid polisaxarid tabiatning erigan moddalari (to'liq antigenlar va haptenlar).
3. Izotonik eritma.
Cho'kma reaktsiyasini o'tkazishning asosiy usullari: halqali cho'kma reaktsiyasi va agarda (gel) cho'kma reaktsiyasi.
Diqqat! Cho'kma reaktsiyasida ishtirok etadigan barcha komponentlar to'liq shaffof bo'lishi kerak.
Halqali yog'ingarchilik reaktsiyasi. Pasteur pipetkasidan foydalanib, 0,2-0,3 ml (5-6 tomchi) zardobni cho'kma trubkasiga qo'shing (zardob nay devorlariga tushmasligi kerak). Xuddi shu hajmdagi antijen zardobga ehtiyotkorlik bilan qatlamlanadi, uni ingichka Paster pipetkasi bilan probirka devori bo'ylab quyiladi. Probirka qiya holatda saqlanadi. To'g'ri qatlamlanganda, sarum va antijen o'rtasida aniq chegara bo'lishi kerak. Suyuqlikni aralashtirmaslik uchun ehtiyotkorlik bilan probirkani stendga joylashtiring. Agar reaktsiya ijobiy bo'lsa, antigen va antikor interfeysida bulutli "halqa" hosil bo'ladi - cho'kma (48-rasmga qarang).
Reaksiya bir qator nazorat vositalari bilan birga keladi (18-jadval). Probirkaga reaksiya tarkibiy qismlarini kiritish ketma-ketligi juda muhimdir. Sarumni antigenga (nazoratda - izotonik eritmada) qatlamlay olmaysiz, chunki zardobning nisbiy zichligi kattaroq bo'lib, u probirka tubiga cho'kib ketadi va suyuqliklar orasidagi chegara aniqlanmaydi.
Jadval 18. Halqali cho'kma reaktsiyasini o'rnatish sxemasi
Eslatma. + "uzuk" mavjudligi; - "uzuk" ning yo'qligi.
Natijalar 5-30 daqiqadan so'ng, ba'zi hollarda bir soatdan keyin, har doimgidek, nazoratdan boshlanadi. 2-probirkadagi “halqa” immun zardobining kirib borish qobiliyatini bildiradi o'ziga xos reaktsiya mos keladigan antijen bilan. 3-5 probirkada "halqalar" bo'lmasligi kerak - bir-biriga mos keladigan antikorlar va antijenler yo'q. 1-naychadagi "halqa" - ijobiy reaktsiya natijasi - sinov antijeni olingan immun zardobga mos kelishini ko'rsatadi, "halqa" (faqat 2-naychadagi "halqa") yo'qligi ularning nomuvofiqligini ko'rsatadi - salbiy. reaktsiya natijasi.
Agarda (gel) cho'kma reaktsiyasi. Reaksiyaning o'ziga xos xususiyati shundaki, antigen va antikorning o'zaro ta'siri zich muhitda, ya'ni jelda sodir bo'ladi. Olingan cho'kma muhit qalinligida loyqa chiziq hosil qiladi. Tarmoqning yo'qligi reaktsiya komponentlari o'rtasidagi nomuvofiqlikni ko'rsatadi. Bu reaktsiya biotibbiyot tadqiqotlarida, xususan, difteriya qo'zg'atuvchisida toksin hosil bo'lishini o'rganishda keng qo'llaniladi.
Nazorat savollari
1. Agglyutinatsiya va cho’kma reaksiyalarining asosiy farqi nimada?
2. Nima uchun bulutli ingredientlarni yog'ingarchilik reaksiyasida qo'llash mumkin emas?
Mashq qilish
1. Halqali cho'kma reaktsiyasini o'rnating va natijani eskiz qiling.
2. Agarda cho'kma reaktsiyasida antigenning antikor bilan o'zaro ta'sirini o'rganing, natijani chizing (o'qituvchingizdan stakan oling).
Lizis reaktsiyasi (immun sitolizi)
Immun lizis - bu antikorlar ta'sirida hujayralarning erishi qachon majburiy ishtirok etish to'ldiruvchi. Reaktsiya uchun sizga kerak bo'ladi:
1. Antigen - mikroblar, qizil qon tanachalari yoki boshqa hujayralar.
2. Antikor (lizin) - immun zardobi, kamroq tez-tez bemor sarum. Bakteriolitik sarumda bakteriyalar lizisida ishtirok etadigan antikorlar mavjud; gemolitik - qizil qon hujayralarining parchalanishiga yordam beruvchi gemolizinlar; spiroxetalar lizis uchun spiroxetolizinlar, hujayralar - itolizinlar va boshqalar kerak.
3. To‘ldiruvchi. Sarumda eng ko'p to'ldiruvchi gvineya cho'chqalari. Ushbu sarum (bir nechta hayvonlarning aralashmasi) odatda qo'shimcha sifatida ishlatiladi. Yangi (mahalliy) to'ldiruvchi beqaror va isitish, silkitish yoki saqlash orqali osonlikcha yo'q qilinadi, shuning uchun uni olinganidan keyin ikki kundan ortiq bo'lmagan holda ishlatish mumkin. Komplementni saqlab qolish uchun unga 2% qo'shiladi borik kislotasi va 3% natriy sulfat. Ushbu qo'shimchani 4 ° C haroratda ikki haftagacha saqlash mumkin. Ko'pincha quruq qo'shimcha ishlatiladi. Ishlatishdan oldin u izotonik eritmada asl hajmgacha eritiladi (yorliqda ko'rsatilgan).
4. Izotonik eritma.
Gemoliz reaktsiyasi(19-jadval). Reaktsiya uchun sizga kerak bo'ladi:
1. Antigen - 0,3 ml eritrotsit cho'kmasi va 9,7 ml izotonik eritma tezligida yuvilgan qo'y eritrotsitlarining 3% suspenziyasi.
2. Antikor - qo'y eritrotsitlariga qarshi gemolitik sarum (gemolizin); odatda ishlab chiqarishda tayyorlanadi, liyofillangan va yorliqda ko'rsatilgan titr.
Gemolizin titri qon zardobining eng yuqori suyultirilishi bo'lib, unda komplement ishtirokida qizil qon tanachalarining 3% suspenziyasining to'liq gemolizi sodir bo'ladi. Gemoliz reaktsiyasi uchun gemolizin uch titrda olinadi, ya'ni titrdan oldingidan 3 barobar kamroq suyultiriladi. Masalan, sarum titri 1:1200 bo'lgan sarum 1:400 nisbatda suyultiriladi (0,1 ml sarum * va 39,9 ml izotonik eritma). Ortiqcha gemolizin kerak, chunki uning bir qismi boshqa reaktsiya komponentlari tomonidan so'rilishi mumkin.
* (Siz 0,1 ml dan kam sarumni qabul qilmasligingiz kerak - o'lchovning aniqligi buziladi.)
3. Komplement 1:10 nisbatda suyultiriladi (0,2 ml komplement va 1,8 ml izotonik eritma).
4. Izotonik eritma.
19-jadval. Gemoliz reaksiyasi sxemasi
Natijalarni hisobga olish. Agar reaksiya to'g'ri bajarilsa, 1-probirkada gemoliz sodir bo'ladi - uning tarkibi shaffof bo'ladi. Boshqaruvda suyuqlik loyqa bo'lib qoladi: 2-naychada gemoliz sodir bo'lishi uchun komplement etarli emas, 3-naychada gemolizin yo'q, 4-naychada gemolizin ham, komplement ham yo'q, 5-naychada antigen mavjud. antikorga mos kelmasligi,
Zarur bo'lganda gemolitik sarum quyidagi sxema bo'yicha titrlanadi (20-jadval).
Titrlashdan oldin sarumning 1:100 (0,1 ml zardob va 9,9 ml izotonik eritma) miqdorida dastlabki suyultirilishini tayyorlang. zarur suyultirish, Masalan:
Jadvalda ko'rsatilganidek, bu suyultirishlardan titrlash probirkalariga 0,5 ml sarum qo'shing. 20.
20-jadval. Gemolitik sarum (gemolizin) uchun titrlash sxemasi.
Jadvalda keltirilgan misolda. 20, gemolitik sarum titri 1:1200.
Yangi gemolitik sarumdan foydalanganda, unda mavjud bo'lgan qo'shimchani yo'q qilish uchun uni faolsizlantirish kerak. Buning uchun suv hammomida yoki termostatli inaktivatorda 56 ° C da 30 daqiqa davomida isitiladi. Oxirgi usul yaxshiroqdir: zardobni haddan tashqari qizib ketish ehtimolini, ya'ni uning denatüratsiyasini yo'q qiladi. Denaturatsiyalangan sarumlar sinov uchun yaroqsiz.
Bakterioliz reaktsiyasi. Bu reaksiyada komplement bakteriyalarni mos (gomologik) sarum ishtirokida lizislaydi. Reaktsiya sxemasi asosan gemoliz reaktsiyasi sxemasiga o'xshaydi. Farqi shundaki, ikki soatlik inkubatsiyadan so‘ng barcha probirkalar lizislangan yoki yo‘qligini aniqlash uchun tajribaga olingan mikroorganizm uchun qulay muhiti bo‘lgan Petri idishlariga ekiladi. Agar tajriba to'g'ri o'tkazilsa, 2-5 probirkadan (nazorat) kulturalar mo'l-ko'l o'sishni ko'rsatishi kerak. 1-probirkadan (tajribadan) emlashda o'sishning etishmasligi yoki zaif o'sishi mikroblarning o'limini, ya'ni ularning antikorga gomologik ekanligini ko'rsatadi.
Diqqat! Bakterioliz reaksiyasi aseptik sharoitda amalga oshirilishi kerak.
Nazorat savollari
1. Natriy xloridning izotonik eritmasi o'rniga distillangan suv ishlatilsa, qizil qon tanachalari bilan nima sodir bo'ladi? Ushbu hodisaning asosi nima?
2. Komplement bo'lmaganda eritrotsitlar gomologik immun zardob bilan o'zaro ta'sirlashganda qanday reaksiya sodir bo'ladi?
Mashq qilish
Gemoliz reaktsiyasini o'rnating. Natijani yozib oling va chizing.
Tegishli ma'lumotlar.
