Agglyutinatsiya reaktsiyasi (latdan. aglutinatsiya- yelimlash) - elektrolitlar ishtirokida tanachalarni (bakteriyalar, qizil qon tanachalari va boshqalar) antikorlar bilan yopishtirish.
Agglyutinatsiya reaktsiyasi antikorlar bilan "yopishgan" tanachalardan (masalan, bakteriyalar) iborat bo'laklar yoki cho'kindi shaklida o'zini namoyon qiladi (7.37-rasm). Agglyutinatsiya reaksiyasidan: bemordan ajratilgan patogenni aniqlash; bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash; qon guruhlarini aniqlash.
Guruch. 7.37 a, b. bilan aglutinatsiya reaksiyasiIgM-antikorlar (a) vaIgG- antikorlar (b)
1. Bemordan ajratilgan patogenni aniqlash Taxminiy reaktsiya shisha ustida aglutinatsiya (7.38-rasm). Bemordan ajratilgan bakteriyalar suspenziyasi bir tomchi aglutinatsiya qiluvchi sarumga qo'shiladi (1:20 suyultirish). Flokulyant cho'kma hosil bo'ladi.
Guruch. 7.38.
Bemordan ajratilgan patogen bilan keng aglutinatsiya reaktsiyasi (7.39-rasm). Bemordan ajratilgan bakteriyalar suspenziyasi aglutinatsiya qiluvchi sarumning suyultirilishiga qo'shiladi.
Guruch. 52
2. Bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash
Bemorning qon zardobi bilan batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi (7.39-rasm). Diagnosticum bemorning sarumini suyultirishga qo'shiladi.
- O-diagnosticum bilan aglyutinatsiya (issiqlik ta'sirida nobud bo'lgan, O-antigenini saqlaydigan bakteriyalar) mayda donador aglyutinatsiya shaklida sodir bo'ladi.
- H-diagnosticum bilan aglutinatsiya (formaldegid tomonidan o'ldirilgan, flagellar H-antigenini ushlab turadigan bakteriyalar) katta va tezroq sodir bo'ladi.
3. Qon guruhlarini aniqlash uchun aglyutinatsiya reaksiyasi Qon guruhlarini aniqlash uchun aglutinatsiya reaktsiyasi A (I), B (III) qon guruhi antigenlariga qarshi immun zardob antikorlari bilan eritrotsitlarning aglutinatsiyasidan foydalangan holda ABO tizimini (b jadvali) o'rnatish uchun ishlatiladi. Nazorat: antikorlarni o'z ichiga olmaydigan sarum, ya'ni. sarum AB (IV) qon guruhi; A (II), B (III) guruhlari qizil qon hujayralarida mavjud bo'lgan antijenler. Salbiy nazoratda antijenler mavjud emas, ya'ni O (I) guruhi eritrotsitlari ishlatiladi.
7.6-jadval. ABO qon guruhlarini aniqlash
| Reaktsiya natijalari |
Guruh |
|
|
tegishli |
||
|
tadqiq qilingan |
||
|
qizil qon hujayralari bilan |
sarum (plazma) |
|
|
standart |
standart bilan |
|
|
sarumlar | ||
Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi (RA). Bemorning qon zardobida AT ni aniqlash uchun a keng aglutinatsiya reaktsiyasi (RA). Buning uchun qon zardobini bir qator suyultirishga diagnostik qo'shiladi - o'ldirilgan mikroorganizmlar suspenziyasi yoki sorblangan Ag bilan zarrachalar. Maksimal suyultirish aglutinatsiya Ag sarum titri deb ataladi.
Agglyutinatsiya reaksiyasining turlari (RA) ATni aniqlash uchun - tulyaremiya uchun qon tomchisi testi (bir tomchi qonga qo'llaniladigan diagnostik va ko'rinadigan oq rangli aglyutinatlar paydo bo'lishi bilan) va brutsellyoz uchun Xaddleson testi (bir tomchi qonga qo'llaniladigan gentian binafsha rang bilan bo'yalgan diagnostik bilan). sarum).
Taxminiy aglutinatsiya reaktsiyasi (RA)
Izolyatsiya qilingan mikroorganizmlarni aniqlash uchun shisha slaydlarga taxminiy RA qo'yiladi. Buning uchun bir tomchi standart diagnostik antiserumga (1:10, 1:20 suyultirilgan) patogen madaniyat qo'shiladi. Da ijobiy natija antiserumning ko'payishi bilan batafsil reaktsiyani amalga oshiring.
Reaktsiya diagnostik sarum titriga yaqin suyultirishlarda aglyutinatsiya kuzatilsa, ijobiy hisoblanadi.
OAS. Somatik O-Aglar issiqqa chidamli va 2 soat qaynashga chidaydi.AT bilan oʻzaro taʼsirlashganda mayda donador agregatlar hosil qiladi.
N-Ag. N-Ag (flagellates) termolabildir va 100 ° C da, shuningdek, etanol ta'sirida tezda buziladi. H-antiserum bilan reaksiyalarda, 2 soatlik inkubatsiyadan so'ng, bo'shashgan katta yoriqlar hosil bo'ladi (bakteriyalarning flagella bilan yopishishi natijasida hosil bo'ladi).
Vi-Ar tif bakteriyasi nisbatan issiqlikka chidamli (2 soat davomida 60-62 ° S haroratga bardosh beradi); Vi antiserum bilan inkubatsiya qilinganda nozik taneli aglutinat hosil bo'ladi.
To'g'ridan-to'g'ri gemagglyutinatsiya reaktsiyalari
Bularning eng oddiylari reaktsiyalar - aglutinatsiya qizil qon hujayralari yoki gemagglyutinatsiya, ABO tizimidagi qon guruhlarini aniqlash uchun ishlatiladi. Aniqlash uchun aglutinatsiya(yoki ularning etishmasligi) anti-A va anti-B aglutininlari bilan standart antiserumlardan foydalaning. Reaktsiya to'g'ridan-to'g'ri deb ataladi, chunki o'rganilayotgan Aglar qizil qon hujayralarining tabiiy tarkibiy qismlaridir.
bilan umumiy bevosita gemagglyutinatsiya virusli gemagglyutinatsiya mexanizmlariga ega. Ko'pgina viruslar qushlar va sutemizuvchilarning eritrotsitlarini o'z-o'zidan agglyutinatsiya qilish qobiliyatiga ega, ularning eritrotsitlar suspenziyasiga qo'shilishi ulardan agregatlar hosil bo'lishiga olib keladi.
Agglyutinatsiya reaktsiyasi Agglyutinatsiya reaktsiyasi
(RA) - aniqlash usuli va miqdoriy aniqlash Ag va At, yalang'och ko'z bilan ko'rinadigan aglomeratlar hosil qilish qobiliyatiga asoslangan. Yuqumli kasalliklar bo'limida. kasalliklar yoki boshqa maqsadlarda noma'lum mikroblar va hujayralarni aniqlash, qon va boshqa suyuqliklarda Ab ning mavjudligi va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi. Aniqlash printsipi Ag va Ab o'rtasidagi o'zaro ta'sirning o'ziga xosligiga asoslanadi va noma'lumdan ma'lumni topishdan iborat. RA uchun ko'plab variantlar mavjud: miqdoriy va sifat, probirka va shisha, volumetrik va tomchi, an'anaviy, tezlashtirilgan va ekspress usullar. RA bosqichiga o'tish uchun sizga kerak: 1) s-ka qon. Bakteriyalarning turini (var) aniqlash variantida quyonlarni immunizatsiya qilish orqali ishlab chiqarilgan sanoat agglyutinatsiya testlari qo'llaniladi. Ab turini aniqlaydigan variantda testdan qon namunasi olinadi. odamlar yoki hayvonlar. Eritma steril bo'lishi va to'xtatilgan zarralardan xoli bo'lishi kerak. Tuzli eritmada asosiy suyultirishni tayyorlang. Ushbu kasallik uchun diagnostik titrdan 2-4 barobar past bo'lishi kerak; 2) Ag. Ab tipini aniqlash bilan reaktsiya versiyasida sanoat diagnostika to'plamlari qo'llaniladi; Ag ni aniqlaydigan variantda diagnostiklar o'zlari 18-20 soatlik agar (kamroq bulyon) testining sho'r eritmasida 1-3 milliard suspenziya shaklida tayyorlanadi. suv hammomida 70 ° C haroratda 1 soat qizdirilganda yoki formaldegid bilan 37 ° C da 24 soat davomida inkubatsiya qilingan mikrob (yakuniy konsentratsiya 0,2%); 3) sho'r eritma shaklida elektrolitlar. Sahnalashtirish texnikasi volumetrik seriyali quvur s-kidagi Ab titrini aniqlash uchun RA: s-ki asosiy suyultirishdan bir necha qator ishchi suyultirishlar tayyorlanadi. Qatorlar soni eksperimentda olingan diagnostiklar soniga bog'liq; soni va suyultirish omillari shubhali kasallikning diagnostik titri bilan belgilanadi. Seriya kamida diagnostik Ab titriga mos keladigan suyultirishni, quyida ikkita suyultirishni va undan yuqori bo'lgan ikkita suyultirishni o'z ichiga olishi kerak. Masalan, agar diagnostik titr 1:100 bo'lsa, u holda RAni bosqichma-bosqich aniqlashning volumetrik usuli bilan quyidagi suyultirishlarni tayyorlash kerak: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; tomchilatib yuborish bilan usulda birinchi suyultirish (1:25) kerak emas, lekin yana bir yuqori suyultirish kerak - 1:800. ilmiy tadqiqot s-ku ga titrlanadi salbiy reaktsiya. U quyidagicha suyultiriladi: reaksiya 0,5 ml hajmda olib borilganda 1-chi probirkadan tashqari barcha probirkalarga 0,25 ml, reaksiya 1 hajmda olib borilganda 0,5 ml quyiladi. ml. 1 va 2 probirkalarga 0,25 (0,5) ml asosiy suyultirish, 2-probirkadan kesilgan hajmga va naslchilik s-k va 2 marta ko'paydi, 0,25 (0,5) ml 3-ga, 3-dan 4-ga va boshqalarga o'tkaziladi. oxirigacha, kesilganidan 0,25 (0,5) ml hajmlarni muvozanatlash uchun hamma narsaga quyiladi. Har bir suyultirish alohida pipetka yordamida amalga oshiriladi. Agar bir nechta diagnostika tajribaga olinsa, ularning har biri uchun xuddi shu tarzda o'ziga xos suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Probirkaning har bir suyultirilishiga probirka hajmiga teng hajmda diagnosticum qo‘shiladi, buning natijasida har bir probirkadagi suyultirish ikki barobar ortadi. Tajriba s-ki nazoratiga (0,25 - 0,5 ml s-ki asosiy suyultirilishi va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) va Ag nazoratiga (0,25 - 0,5 ml diagnostik va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) mos keladi. Agar eksperimentda bir nechta diagnostika qo'llanilsa, unda har birining o'z antigen nazorati mavjud. Probirkalar solingan stend yaxshilab chayqatiladi va 37°C da 4 soat davomida termostatga joylashtiriladi, so‘ngra xona haroratida keyingi kungacha qoldiriladi, shundan so‘ng cho‘kma miqdori va tozalanish darajasiga qarab PA qayd etiladi. suyuqlik. Bu ko'rsatkichlarni aniqlash, aglutinatlarning tabiatiga qarab, qorong'u fonda, aglutinoskopda yoki mikroskop oynasining botiq yuzasida yalang'och ko'z bilan amalga oshiriladi. Buxgalteriya hisobi nazoratdan boshlanadi: nazorat C shaffof bo'lishi kerak, Ag bir xil bulutli bo'lishi kerak (naychani silkitgandan keyin). Agar nazorat yaxshi bo'lsa, barcha probirkalarda aglutinatsiya mavjudligi va darajasini belgilang, ular plyuslar bilan belgilanadi: katta cho'kindi va suyuqlikni to'liq tozalash - 4 ta plyus; katta cho'kindi va suyuqlikning to'liq tozalanmaganligi - 3 ta ortiqcha; sezilarli cho'kindi va suyuqlikning sezilarli tozalanishi 2 ta ortiqcha. Shundan so'ng, titr aniqlanadi: aglutinatsiya intensivligi kamida 2 plyus bo'lgan eng yuqori suyultirish. Titr tadqiqoti s-ki ushbu kasallikning diagnostik titri bilan taqqoslanadi. Agar titr tekshirilsa. s-ki diagnostik qiymatdan 2 barobar past, reaktsiya shubhali deb baholanadi; titri teng bo'lsa diagnostika - qanday qilib zaif ijobiy; 2-4 baravar yuqori bo'lsa ijobiy, 8 va undan ko'p bo'lsa keskin ijobiy hisoblanadi. Ab ning keng tarqalishi bilan sog'lom odamlar RAni baholash uchun Ab titrining ortishi qo'llaniladi. Seriyali RAda Ar turini aniqlash uchun qatorlar soni identifikatsiya uchun olingan raqamga mos kelishi kerak. diagnostik testlar. Diagnostik testning asosiy suyultirilishidan Ab titrini aniqlash uchun RA dagi kabi ketma-ket ikki marta suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Suyultirish omillari aglyutinatsiya qiluvchi testning titriga bog'liq.Tajribada sinov titriga teng bo'lgan suyultirishning mavjudligi, shuningdek undan 2, 4, 6, 8 marta past bo'lishi kerak.Masalan, agar diagnostik testning titri 1 3200 bo'lsa, unda siz 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 suyultirishlardan foydalanishingiz kerak. Sinov suyultirishlariga bir xil hajmdagi sinovdan o'tgan Ag qo'shiladi, natijada suyultiriladi. sinov 2 marta ortadi.Tajribaga 2 ta nazorat va Ag qo'shiladi.Agar tajribada bir necha s-k ishtirok etsa, ularning har biri o'z nazoratiga muhtoj.Reaksiya tugagach, stend kuchli chayqatiladi va joylashtiriladi. 37 ° C da termostatda Natijalar yuqorida ta'riflanganidek hisobga olinadi.Reaksiyani baholash xususiyatlariga ega.Tadqiqning muvofiqligi haqida xulosa chiqarish uchun. Tajribaga olingan Ag reaksiya titri standart diagnostik test titrining kamida yarmiga to'g'ri kelishi kerak.1 4 va undan past titrlar guruh reaktsiyasi sifatida qabul qilinadi. Drip md RA ning bosqichlari volumetrikdan farq qiladi, chunki s-ku 1 ml hajmda suyultiriladi, Ag yuqori konsentratsiyada (10 mlrd/ml) ishlatiladi va unga 1 qo'shiladi. - 2 probirkaga tomchilar Ag qo‘shgandan keyin preparatni suyultirish o‘zgarmagan hisoblanadi.Aks holda belgilash, qayd etish va baholash usuli hajmiy usulga o‘xshaydi.
(Manba: Mikrobiologiya atamalari lug'ati)
IMMUNOMIKROBIOLOGIK TADQIQOTLAR
Ko'pgina muammolarni hal qilish uchun immunologik usullar qo'llaniladi:
1. Vaziyatni baholash immun tizimi odam ( immunitet holati) miqdoriy va ta'rifi bo'yicha funktsional xususiyatlar immun tizimining hujayralari va ularning mahsulotlari.
2. Inson to'qimalarining tarkibi va xususiyatlarini aniqlash: qon guruhlari, Rh omil, transplantatsiya antijenleri.
3. Yuqumli kasalliklar diagnostikasi va antitelo titrlarini aniqlash va o'rnatish (serodiagnoz), organizmdagi qo'zg'atuvchining antigenlarini aniqlash va bu antigenlarga hujayra reaktsiyalarini aniqlash.
4. Odam va hayvonlar organizmidan ajratilgan bakteriya va viruslar madaniyatini seroid identifikatsiyalash.
5. Inson tanasida va ichida aniqlash tashqi muhit antijenik yoki hapten xususiyatlarga ega bo'lgan har qanday moddalar (gormonlar, fermentlar, zaharlar, dorilar, dorilar va boshqalar).
6. Immunopatologik holatlar, allergiya, transplantatsiya va antitumor reaktsiyalarini aniqlash.
Antigen va antikor o'rtasidagi o'zaro ta'sir jarayoni serologik reaktsiyalar ikki bosqichda sodir bo'ladi:
1) xos- antikorlarning faol markazlari (paratoplar) va antigen epitoplarining bir-birini to'ldiruvchi kombinatsiyasi yuzaga keladigan o'zaro ta'sir bosqichi. Odatda bu bosqich bir necha soniya yoki daqiqa davom etadi;
2) nonspesifik- namoyon bo'lish bosqichi, xarakterlanadi tashqi belgilar immun komplekslarni shakllantirish. Bu bosqich bir necha daqiqadan bir necha soatgacha rivojlanishi mumkin.
Antikorlarning antigen bilan optimal o'ziga xos o'zaro ta'siri neytralga yaqin pH bilan izotonik eritmada sodir bo'ladi. In vitro tizimidagi antigen-antikor reaktsiyasi bir nechta hodisalarning paydo bo'lishi bilan birga bo'lishi mumkin.
· aglutinatsiya,
· yog'ingarchilik,
· liziz.
Tashqi ko'rinishlar reaktsiyalar antigenning fizik-kimyoviy xususiyatlariga bog'liq (zarrachalar hajmi, jismoniy holat), antikorlarning sinfi va turi (to'liq va to'liq bo'lmagan), shuningdek eksperimental shartlar (o'rtacha mustahkamlik, tuz konsentratsiyasi, pH, harorat).
Antigenlar va antikorlarning polivalentligi yalang'och ko'zga ko'rinadigan agregatlarning shakllanishini ta'minlaydi. Bu tarmoq hosil bo'lish nazariyasiga muvofiq sodir bo'ladi, unga ko'ra boshqa antikor va antigen molekulalari hosil bo'lgan antigen-antikor kompleksiga ketma-ket biriktiriladi. Natijada, cho'kma hosil qiluvchi agregatlarga aylanadigan tarmoq tuzilmalari hosil bo'ladi. Reaksiyaning tabiati va zo'ravonligi antijenler va antikorlarning miqdoriy nisbatiga bog'liq. Eng qizg'in reaktsiyalar reagentlar ekvivalent nisbatda bo'lganda sodir bo'ladi.
Old shart panjara hosil bo'lishi (tarmoqlar) - har bir antigen molekulasi uchun uchtadan ortiq antijenik determinantlarning va har bir antikor molekulasi uchun ikkita faol markazning mavjudligi. Antigen molekulalari panjara tugunlari, antikor molekulalari esa bog'lovchi bo'g'inlardir. Cho'kma hosil bo'lgandan so'ng supernatantda erkin antigenlar ham, erkin antikorlar ham aniqlanmasa, antigen va antikor kontsentratsiyasining optimal nisbatlari (ekvivalent zonasi) hududi.
Antigenlar to'liq antikorlar bilan birlashganda cho'kishi mumkin bo'lgan agregatlar hosil bo'ladi. To'liq bo'lmagan antikorlar(monovalent) tarmoq tuzilmalari va yirik agregatlarning shakllanishiga olib kelmaydi. Bunday antikorlarni aniqlash uchun foydalaning maxsus usullar antiglobulinlardan foydalanishga asoslangan (Coombs reaktsiyasi).
Serologik reaksiyalar o‘zining yuqori o‘ziga xosligi va sezuvchanligi tufayli antigen va antitellarni aniqlash va miqdorini aniqlashda qo‘llaniladi. Reaksiyalardagi immunoreagentlar miqdori titr bilan ifodalanadi - bunda reaksiya hali ham kuzatilayotgan sarum yoki antigenning maksimal suyultirilishi.
Mikrobiologik va immunologik laboratoriyalarda serologik reaktsiyalar ikki maqsadda qo'llaniladi:
1) ma'lum antikor (immun diagnostik sarum) yordamida mikroorganizmlarni, toksinlarni, umuman antijenlarni seroidifikatsiya qilish uchun;
2) serodiagnoz uchun - ma'lum antijen (diagnostik) yordamida bakterial, virusli va kamroq tez-tez boshqa yuqumli kasalliklar uchun bemorning qon zardobidagi antikorlarning tabiatini aniqlash.
Antigenning umumiy turini, turini va turini aniqlash uchun ma'lum immun testlari talab qilinadi. diagnostik sarum. Ular hayvonlarga (odatda quyonlarga) o'ldirilgan yoki tirik mikroorganizmlar, ularning parchalanish mahsulotlari, neytrallangan yoki mahalliy toksinlar dozasini oshirib yuborish orqali olinadi. Hayvonlarni immunizatsiya qilishning ma'lum bir tsiklidan so'ng, hayvonning ommaviy qon ketishi yoki to'liq qon ketishi amalga oshiriladi. Steril idishga yig‘ilgan qon ivish jarayonini tezlashtirish uchun dastlab 37°C haroratdagi termostatga 4-6 soat, so‘ngra bir sutka davomida muz qutisiga joylashtiriladi. Olingan shaffof sarum steril idishga so'riladi, konservantlar qo'shiladi, antikor titri aniqlanadi, sterilligi tekshiriladi va ampulalarga quyiladi.
Ishlatiladi adsorbsiyalanmagan Va adsorbsiyalangan diagnostik sarum. Adsorbsiyalanmagan sarumlar mavjud yuqori titrlar antikorlar, lekin guruh (o'zaro) reaktsiyalar berishga qodir.
Adsorbsiyalangan sarumlar ta'sirning qat'iy o'ziga xosligi bilan tavsiflanadi (ular faqat gomologik antigen bilan reaksiyaga kirishadi). Faqat bitta o'ziga xos antijenga antikorlarni o'z ichiga olgan sarumlar deyiladi monoretseptor.
Ular, shuningdek, ftorxromlar, fermentlar va radioizotoplar bilan etiketlangan sarumlarni ishlab chiqaradilar, bu esa hatto antigen izlarini ham yuqori aniqlik bilan aniqlash imkonini beradi.
Serologik reaksiyalarda antigen (diagnostik) sifatida tirik yoki o‘ldirilgan bakteriyalar suspenziyalari, ularning parchalanish mahsulotlari, toksinlar va viruslar qo‘llaniladi. Ba'zi hollarda mikroorganizmlar va hayvonlar to'qimalaridan olingan ekstraktlar yoki kimyoviy jihatdan ajratilgan antijenler ishlatiladi.
Barcha immunomikrobiologik usullarni 3 guruhga bo'lish mumkin:
1) asoslangan antigenning antikor bilan bevosita o'zaro ta'siri(aglyutinatsiya, cho'kma, gemagglyutinatsiya, immobilizatsiya va boshqalar hodisalari);
2) asoslangan antigenning antikor bilan vositachilik bilan o'zaro ta'siri(reaksiyalar bilvosita gemagglyutinatsiya, koagglyutinatsiya, lateks agglyutinatsiyasi, uglerod aglomeratsiyasi, bentonit aglyutinatsiyasi, komplement fiksatsiyasi va boshqalar);
3) foydalanish etiketli antikorlar yoki antijenler(lyuminestsent antikor usuli, fermentga bog'liq immunosorbent va radioimmunoassay va boshqa usullar).
AGLUTINATSIYA REAKSIYALARI
Bu reaksiyalar zarrachalar (mikrobial hujayralar, qizil qon tanachalari va boshqa korpuskulyar antijenler) ko'rinishidagi antijenlarni o'z ichiga oladi, ular antikorlar va cho'kmalar bilan bir-biriga yopishadi.
Agglyutinatsiya reaktsiyasini amalga oshirish uchun(RA) uchta komponent kerak: 1) antigen (aglutinogen);
2) antikor (aglutinin)
3) elektrolit (natriy xloridning izotonik eritmasi).
Taxminiy aglutinatsiya reaktsiyasi (RA)
Indikativ yoki plastinka, RA xona haroratida shisha slaydga joylashtiriladi. Buning uchun Pasteur pipetkasi yordamida 1:10 dan 1:20 gacha suyultirilgan zardob tomchisini va izotonik natriy xlorid eritmasining nazorat tomchisini alohida stakanga surting. Koloniyalar yoki bakteriyalarning kundalik madaniyati (bir tomchi diagnosticum) ikkala bakteriologik halqaga kiritiladi va yaxshilab aralashtiriladi. Reaksiyalar vizual ravishda bir necha daqiqadan so'ng hisobga olinadi, ba'zida kattalashtiruvchi oyna (x5) ishlatiladi. Ijobiy RA bilan sarum tushishida katta va kichik yoriqlar paydo bo'lishi qayd etiladi; salbiy RA bilan sarum bir xil bulutli bo'lib qoladi.
Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi bemordagi o'ziga xos antikorlarning titrini aniqlash uchun.
Bemorlarning qon zardobida serodiagnoz uchun to'liq RA o'tkaziladi. Bundan tashqari, 1:50 - 1:100 dan 1:800 yoki 1:1600 gacha bo'lgan izotonik natriy xlorid eritmasida suyultiriladi. Pastroq sarum titrlarida sog'lom odamlarda yoki boshqa tashxis (diagnostik titr) bo'lgan bemorlarda topilgan normal aglutininlarni o'z ichiga olishi mumkin. Ushbu reaktsiyada antijen sifatida diagnostiklar qo'llaniladi - ma'lum suspenziyalar, odatda o'ldirilgan bakteriyalar.
1 ml natriy xloridning izotonik eritmasi avval aglyutinatsiya naychalariga quyiladi. Ulardan birinchisiga 1:100 nisbatda suyultirilgan 1 ml zardob qo'shiladi va aralashtirgandan so'ng ikkinchisiga 1 ml, ikkinchisidan uchinchisiga va hokazo. Olingan zardobning ikki marta suyultirilishiga (1:100 dan 1:1600 gacha yoki undan ko'p) 1 ml tarkibida 3 milliard mikrob tanasi bo'lgan bakterial suspenziyadan 1-2 tomchi qo'shiladi. Naychalar chayqatiladi va 2 soat davomida 37 ° C haroratda termostatga joylashtiriladi, so'ngra xona haroratida 24 soat davomida saqlanadi.
Batafsil aglyutinatsiya reaksiyasi har bir probirkani navbatma-navbat, nazorat probirkalaridan boshlab, yumshoq silkitib baholash orqali hisobga olinadi. Nazorat naychalarida aglutinatsiya bo'lmasligi kerak. Agglyutinatsiya reaktsiyasining intensivligi quyidagi belgilar bilan belgilanadi: ++++ - to'liq agglyutinatsiya (mutlaq shaffof suyuqlikdagi aglyutinatsiyali yoriqlar); +++ - to'liq bo'lmagan agglyutinatsiya (bir oz opalescent suyuqlikdagi yoriqlar); ++ - qisman aglyutinatsiya (yoriqlar aniq ko'rinadi, suyuqlik biroz bulutli); + - zaif, shubhali aglutinatsiya - suyuqlik juda bulutli, undagi yoriqlarni ajratish qiyin; - - aglutinatsiyaning yo'qligi (suyuqlik bir xil bulutli).
Sarum titri uning oxirgi suyultirilishi sifatida qabul qilinadi, bunda aglutinatsiya intensivligi kamida ikki plyus (++) sifatida baholanadi.
16-sonli ma’ruza
Lug'at
DIREKT - hech narsasiz, keyingi havolalarsiz to'g'ridan-to'g'ri keyingi.
BILOVVIT YO'LDA– bevosita emas, boshqa hujayralar orqali.
KASARISH ≠ OSHISH (hujayra faolligi).
RAD ET - qabul qilmaslik, rad etish. Tana transplantatsiya qilingan organni rad etadi.
Immunitet reaktsiyalari.
Immun reaktsiyalari - bu antigen va antikor yoki antigen va sensibilizatsiyalangan T-limfotsitning o'ziga xos o'zaro ta'siri (bog'lanishi).
Bu reaktsiyalar in vitro (probirkada) va in vivo (tirik organizmda) sodir bo'ladi.
Bu reaktsiyalar sarum (zardob) bilan bog'liq, shuning uchun ular deyiladi serologik.
Immunitet reaktsiyalari uchun ishlatiladi yuqumli kasalliklar diagnostikasi. Bunday holda, noma'lum komponent antigenning antikor bilan o'zaro ta'sirining o'ziga xosligiga asoslangan ma'lum komponent bilan belgilanadi. Agar ma'lum antikor, keyin mumkin noma'lum antigenni aniqlash (kashf qilish).. Agar ma'lum antijen, keyin siz undan foydalanishingiz mumkin noma'lum antikorlarni aniqlang.
Shunday qilib, immun reaktsiyalar qo'llaniladi:
1) uchun serologik diagnostika kasalliklar (serodiagnozi) - kasal odamlarning qon zardobida yuqumli kasallikning o'ziga xos qo'zg'atuvchisiga (ma'lum antijen) antikorlarni aniqlash; agar bemorning qon zardobida biron bir qo'zg'atuvchiga antikorlar mavjud bo'lsa, demak, bu patogen sabab bo'lgan. infektsiya;
2) uchun mikroblarning serologik identifikatsiyasi (seroidifikatsiyasi) - immun diagnostik sarumlar (ma'lum antikorlar) yordamida patogen turini aniqlash; agar antikorlar kasal odamdan ajratilgan patogenni bog'lasa, bu mikrob hayvon immunizatsiya qilingan mikrob bilan bir xil bo'ladi. qabul qilish immun diagnostik sarum .
Immunitet reaktsiyalari 2 bosqichda sodir bo'ladi:
1) o'ziga xos bosqich– antigen-antikor komplekslarini hosil qilish bilan antikor faol markazining antigenning determinant guruhi bilan bog‘lanishi; bu bosqich tez davom etadi, ammo ko'rinadigan ta'sir yo'q;
2) nonspesifik faza- tashqi ko'rinish ko'rinadigan effekt antigen va antikorning o'zaro ta'siri - yo'qotish qoralama(aglyutinatsiya) yoki bulutlilik(yomg'ir), bu imkon beradi qarang ta'lim antigen-antikor komplekslari va haqida xulosa chiqaring muvofiqlik bir-biriga antigen va antikor.
Immunitet reaktsiyalariga kiradi aglutinatsiya reaktsiyasi (RA), cho'kma reaktsiyasi (RP), komplement fiksatsiya reaktsiyasi (CFR).
Agglyutinatsiya reaktsiyasi- bu elektrolitlar ishtirokida antikorlar ta'sirida mikrobial yoki boshqa hujayralarni (eritrotsitlarni) yopishtirish va cho'ktirish. Reaksiyaning ko'rinadigan ta'siri (aglyutinatsiya hodisasi) deb nomlangan cho'kma hosil bo'lishidir. aglutinat.
Bu reaktsiya uchun ishlatiladi serodiagnoz Va seroidizatsiya. RA serodiagnoz (bemorlarning qon zardobida antikorlarni aniqlash) uchun ishlatiladi. tif isitmasi va paratif(Vidal reaktsiya), brutsellyoz(Raytning reaktsiyasi), tulyaremiya va leptospiroz. RA qachon seroididentifikatsiya (bemordan ajratilgan patogen turini aniqlash) uchun ishlatiladi ichak infektsiyalari, ko'k yo'tal, vabo va boshq.
Komponentlarreaktsiyalar:
1. A ntigen (aglyutinogen) - bu butun (yo'q qilinmagan) mikrob yoki boshqa hujayralar ( korpuskulyar, erimaydigan antigen). Agglyutinogenlar- bu to'xtatib turish tirik yoki o'ldirilgan mikrob hujayralari yoki boshqa hujayralar. Antijenler noma'lum yoki ma'lum bo'lishi mumkin. Noma'lum aglutinogen - bu aniqlanishi kerak bo'lgan bemorning tanasidan ajratilgan mikrobial madaniyat. Ma'lum antigen - diagnostika- diagnostik dori; o'liklarni to'xtatib turish mikroblar ma'lum turlar tuz eritmasida. Bu suspenziya bulutli (shaffof), chunki mikrob hujayralari erimaydi, lekin buzilmagan holda qoladi. Bemorlarning qon zardobida noma'lum antikorlarni aniqlash uchun ma'lum aglutinogen ishlatiladi.
2. Antikor (aglutinin)- qon zardobida topilgan. Antikorlar noma'lum yoki ma'lum bo'lishi mumkin. Aniqlanishi kerak bo'lgan noma'lum antikorlar qon zardobida kasal odam. Ma'lum antikorlar mavjud immun diagnostik sarum deb ataladi aglutinatsiya qiluvchi sarum. Ular sero-identifikatsiya qilish uchun ishlatiladi, ya'ni. noma'lum antigenni aniqlash - mikrobial madaniyatning bir turi.
3. Elektrolit- 0,9% natriy xlorid eritmasi.
Diagnostik testni olish.
Qiyshiq agarda o'stirilgan ma'lum turdagi patogenning sof kulturasi (masalan, tif isitmasi qo'zg'atuvchisi) 3-4 ml izotonik eritma bilan yuviladi, steril naychaga solinadi, mikroblar ba'zilarida nobud bo'ladi. yo'l bilan (masalan, qaynatish va zichlik aniqlanadi (1 ml da 3 milliard mikrob hujayrasi bo'lishi kerak). Agar mikrob hujayralari nobud bo'lsa. yuqori harorat, keyin ular O-diagnosticum (O-antigen) oladi, lekin formaldegid bilan davolash bo'lsa, ular H-diagnosticum (H-antigen) oladi.
Diagnostikaga misollar: salmonella diagnosticum, brutsellyoz diagnosticum, tulyaremiya diagnostikum.
Agglyutinatsiya qiluvchi sarumlarni tayyorlash.
Hayvonlarga (odatda quyonlarga) 5-7 marta ortib borayotgan dozalarda mikrobial diagnostiklar parenteral yuboriladi. giperimmunizatsiya qilish), so'ngra ularning qon zardobi olinadi, unda diagnostikum tayyorlanadigan mikroblarga antikorlar mavjud. Agar immunizatsiya O-diagnosticum bilan amalga oshirilsa, u holda O-aglyutinatsiya qiluvchi zardoblar (tarkibida O-antikorlari mavjud), agar H-diagnostikum bilan H-aglutinatsiya qiluvchi zardoblar olinadi.
Agglyutinatsiya qiluvchi sarum bo'lishi mumkin so'rilmagan yoki mahalliy va adsorbsiyalangan.
Adsorbsiyalanmagan sarumlar mikroblarning bir nechta yaqin turlarga guruh antikorlarini o'z ichiga oladi.
Adsorbsiyalangan sarumlar bir turdagi mikrobning bir yoki bir nechta antijenlariga antikorlarni o'z ichiga oladi. Agar zardobda faqat bitta antijenga antikorlar bo'lsa, ular deyiladi monoretseptor yoki bir valentli, bir nechta antijenlarga nisbatan - guruh adsorbsiyalangan sarumlar .
Agglyutinatsiya qiluvchi sarumlarga misollar:Salmonella monoretseptor H-aglutinatsiya qiluvchi zardob, salmonellalar guruhi adsorbsiyalangan O-aglyutinatsiya qiluvchi zardob, antikolera O-aglyutinatsiya qiluvchi zardob va boshqalar..
Titr agglyutinatsiya qiluvchi sarum - antigen bilan aglutinatsiya reaktsiyasi hali ham aniqlangan sarumning eng yuqori suyultirilishi (titr qondagi antikorlar miqdoriga bog'liq: antikorlar qancha ko'p bo'lsa, sarum titri shunchalik yuqori bo'ladi).
RA ni aniqlash usullari.
1. Taxminiy (lamellar) RA- shisha ustida amalga oshiriladi. Shisha slaydga 2 tomchi sarum va 1 tomchi izotonik eritma qo'llang. Mikrob kulturasi zardob tomchilaridan biriga va izotonik eritmaning bir tomchisiga halqa shaklida kiritiladi va aralashtiriladi. Bir tomchi izotonik eritma mikroblar bilan – antigen nazorati, tomchi mikrobsiz sarumlar – antikor nazorati, tomchi mikroblar bilan sarumlar – tajriba. Agar zardobda u bilan aralashadigan mikrobial antigenlarga mos keladigan antikorlar mavjud bo'lsa, u holda antikorlar va antijenler bir-biri bilan maxsus bog'lanadi va 1-3 daqiqadan so'ng test tomchisida aglutinat parchalari paydo bo'ladi. Antigen nazorati loyqa bo'lishi kerak va antikor nazorati aniq bo'lishi kerak. Reaksiya natijalari aglyutinat parchalari paydo bo'lishiga qarab qayd etiladi . Agar yoriqlar tushib qolsa, reaktsiya ijobiy bo'ladi, ya'ni. Antigen antikorga mos keladi va antijen antikorni aniqlash uchun ishlatilishi mumkin yoki aksincha. Agar bulutlilik saqlanib qolsa, reaktsiya salbiy bo'ladi.
2. Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi - probirkalarda amalga oshiriladi. Birinchidan, bemorning qon zardobini 1:50 dan 1:1600 gacha bo'lgan 2 marta suyultirish tayyorlang. 6 ta probirkaga 1 ml natriy xloridning izotonik eritmasi quyiladi. Birinchi probirkaga 1 ml bemor qon zardobidan 1:50 nisbatda suyultirilgan qon zardobi qo‘shiladi, aralashtiriladi va 1:100 nisbatda suyultiriladi, so‘ngra ikkinchi probirkaga 1 ml 1:100 nisbatda suyultirilgan eritma quyiladi. va 1:200 nisbatda suyultirish olinadi va hokazo. Antigen va sarum nazorati uchun ikkita naycha saqlanadi. Sarum nazoratiga faqat 1:50 suyultirilgan sarum, antigen nazoratiga - faqat antigen qo'shiladi. Boshqa barcha probirkalarga 0,1 ml antigen - diagnosticum (O- yoki H-) qo'shing va barcha probirkalarni 18-20 soat davomida 37°C da termostatga soling. Reaksiya natijalari tabiati, hosil bo'lgan cho'kma (aglyutinat) miqdori va loyqalik darajasiga ko'ra qayd etiladi. Buxgalteriya hisobi faqat nazoratlarda quyidagi natijalar bilan amalga oshiriladi: sarum nazorati - shaffof, antigen nazorati - bulutli. O-antikorlari nozik taneli cho'kma beradi. H-antikorlari - qo'pol taneli. Agglyutinatsiya reaktsiyasi hali ham ko'rinadigan oxirgi probirkaga asoslanib, u o'rnatiladi diagnostik titr.
Serodiagnoz paytida kasalliklar, nafaqat ma'lum bir patogenga o'ziga xos antikorlarni aniqlash, balki ularning miqdorini aniqlash ham muhimdir, ya'ni. ga bunday antikor titrini o'rnating Ushbu patogen sabab bo'lgan kasallikning mavjudligi haqida qachon gapirish mumkin? . Bu titr diagnostik titr deb ataladi. Misol uchun, tif isitmasi tashxisini qo'yish uchun siz 1:400 antikor titrini aniqlashingiz kerak, lekin kam emas. Bundan ham aniqroq natijalar beradi juftlashgan sarumlarda antikorlarning ko'payishini aniqlash. Bemorning zardobi kasallikning boshlanishida va 3 dan 5 kungacha va undan ko'p kundan keyin yig'iladi. Agar antikor titri kamida 4 marta oshsa, demak, bu haqda gapirish mumkin hozirgi kasallik.
Agar seroididentifikatsiya qilish uchun batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi o'tkazilsa, u holda aglutinatsiya qiluvchi diagnostik sarumlar qo'llaniladi, ular titrga yoki ularning titrining yarmigacha suyultiriladi. Diagnostik sarum titriga yaqin suyultirishda aglyutinatsiya aniqlansa, RA ijobiy hisoblanadi.
