Coombs reaksiyası birbaşa və dolayıdır. Yenidoğanın hemolitik xəstəliyinin diaqnozu üçün Coombs testi

Coombs testi bir üsuldur laboratoriya tədqiqatı, hemaqlütinasiyaya təsir etməklə əmələ gəlir. O, antikorların immunoqlobulinlərə və ferment elementlərinə qarşı həssaslığına, həmçinin C3 və ya Lg ilə örtülmüş eritrositləri aglütinasiya etmək qabiliyyətinə əsaslanır.

Birbaşa Coombs diaqnozu

Hüceyrələrin kənarında quraşdırılmış antikorları və ya tamamlayıcı komponentləri aşkar etmək üçün istifadə olunur. Birbaşa Coombs testi aşağıdakı kimi aparılır.

Belə bir nümunənin istifadəsi

Birbaşa Coombs diaqnozu müəyyən hallarda istifadə olunur, məsələn:

• transfuziya təsiri;
• otoimmün hemoliz;
• dərman hemolitik anemiya.

Dolayı Coombs testi

Bu diaqnoz, bir qayda olaraq, 0 tipli donor qırmızı qan hüceyrələri ilə inkubasiya edilən serumdakı hüceyrələrə antikorları aşkar etməyə imkan verir və sonra birbaşa test aparılır. Müraciət edin dolayı diaqnoz Aşağıdakı hallarda Coombs:

Təhlil üçün necə hazırlaşmaq olar

İmtahana hazırlaşmağın bəzi qaydaları var.

1. Xəstə yeni doğulmuşdursa, valideynlər bilməlidirlər ki, test yenidoğanın hemolitik xəstəliyini aşkar etməyə kömək edəcəkdir.
2. Xəstədə hemolitik anemiya şübhəsi varsa, ona izah edilməlidir ki, analiz ona qoruyucu pozğunluqlar, dərmanlar və ya digər amillərdən qaynaqlandığını öyrənməyə imkan verəcəkdir.
3. Coombs testi, birbaşa və dolayı, qidalanma və ya pəhrizlə bağlı heç bir məhdudiyyət qoymur.
4. Xəstəyə müayinənin venadan qan götürülməsini tələb edəcəyini bildirmək, həmçinin venipunkturun nə vaxt aparılacağını ona söyləmək lazımdır.
5. Siz də ehtimal barədə xəbərdarlıq edilməlidir diskomfort bandajın qola və prosedurun özünə tətbiqi dövründə.
6. Nümunə nəticəsinə təsir edə biləcək dərmanlar dayandırılmalıdır.

Bu dərmanlara aşağıdakılar daxildir:

• "Streptomisin";
• "Metildopa";
• "Prokainamid";
• sulfanilamidlər;
• "Melphalan";
• "Quinidin";
• "Rifampin";
• "İzoniazid";
• sefalosporinlər;
• "Hydralazine";
• "Xlorpromazin";
• "Levodopa";
• "Tetrasiklin";
• "Difenilhidantoin";
• "Ethosuximide";
• "Penisilin";
• mefenamik turşu.

Qan nümunəsi səhər boş bir mədədə aparılır.

Tədbir necə keçirilir

Coombs testi aşağıdakı ardıcıllıqla aparılır:

1. Yetkin bir xəstədə diaqnostika apararkən, venipunkturdan sonra qan EDTA (etilendiamintetraasetat) olan borulara alınır.
2. Yenidoğulmuşun qanı göbək bağından EDTA olan bir şüşəyə çəkilir.
3. Punksiya sahəsi qanaxma dayanana qədər pambıq çubuqla sıxılır.
4. Venpunktur yerində qançır görünsə, isti kompreslər təyin olunur.
5. Qan toplandıqdan sonra xəstəyə dərman qəbul etməyə qayıtmağa icazə verilir.
6. Yenidoğanın valideynlərinə məlumat vermək lazımdır ki, anemiyanın dinamikasını izləmək üçün ikincil analiz tələb oluna bilər.

Coombs testinin üstünlükləri

Belə tədqiqatın bəzi üstünlükləri var, yəni:

Təhlilin mənfi cəhətləri

Müsbət Coombs testi, xarakterik icra dəqiqliyini tələb edən kifayət qədər əmək tələb edən bir müayinə üsuludur. Onu istifadə edərkən, xüsusilə zəif müsbət təsirlərin təfsiri ilə bağlı müəyyən çətinliklərlə qarşılaşa bilərsiniz.

Müəyyən edilmişdir ki, Coombs testlərinin istehsalı zamanı səhv mənfi və ya zəif müsbət reaksiyalar hüceyrənin qeyri-qənaətbəxş aktiv yuyulmasının, antiglobulin reagentinin serum qalıqları ilə zəiflədilməsinin, həmçinin antiglobulinin təsir göstərə biləcəyi yağsız səthlərlə əlaqənin nəticəsi ola bilər. sabitləşir və bununla da öz effektivliyini itirir.

Coombs testinin başqa bir çatışmazlığı var - antiglobulin reagentinin aşağı sabitliyi, alınması və saxlanması. fərdi xüsusiyyətlər, bu da antiqlobulin zərdabının hemaqlütinasiyaya təsirini ədədi olaraq qiymətləndirməyi çətinləşdirir.

Tədqiqat zamanı aşkar edilə bilən xəstəliklər

Coombs diaqnostikası bəzi xəstəlikləri aşkar etməyə imkan verir, məsələn:

• yenidoğanın hemolitik pozğunluğu;
• müxtəlif transfuziya reaksiyaları;
• otoimmün hemoliz;
• narkotik səbəb olan hemolitik anemiya.

Bu gün Coombs testi həm böyüklər, həm də yeni doğulmuş uşaqlar üçün kifayət qədər məşhur qan testi sistemi hesab olunur. Bu, müxtəlif xəstəlikləri müəyyən etməyə imkan verir.

Antikorlar, eritrositlərin səthində yerləşir, statik və ya sərbəst vəziyyətdə ola bilər qan plazması. Antikorların vəziyyətindən asılı olaraq birbaşa və ya dolayı Coombs reaksiyası aparılır. Antikorların qırmızı qan hüceyrələrinin səthində sabitləndiyinə inanmaq üçün bir səbəb varsa, birbaşa Coombs testi aparılır. Bu halda, test bir mərhələdə baş verir - əlavə antiglobulin serumu. Qırmızı qan hüceyrələrinin səthində natamam antikorlar varsa, aglütinasiya qırmızı qan hüceyrələri

Dolayı reaksiya

Dolayı Coombs reaksiyası 2 mərhələdə baş verir. Əvvəlcə süni şəkildə həyata keçirməlisiniz sensitizasiya qırmızı qan hüceyrələri Bunun üçün qırmızı qan hüceyrələri və yoxlanılan qan serumu inkubasiya edilir ki, bu da qırmızı qan hüceyrələrinin səthində antikorların fiksasiyasına səbəb olur. Bundan sonra Coombs testinin ikinci mərhələsi aparılır - antiglobulin serumunun əlavə edilməsi.

Yağış reaksiyası - RP (latınca praecipilo-dan çöküntü) adlı buludluluq şəklində antikorlarla həll olunan molekulyar antigen kompleksinin əmələ gəlməsi və çökməsidir. çöküntü. Antigenləri və antikorları ekvivalent miqdarda qarışdırmaqla əmələ gəlir, onlardan birinin artıqlığı immun kompleksinin formalaşma səviyyəsini azaldır. Çökmə reaksiyası sınaq borularında (halqanın çökmə reaksiyası), gellərdə, qida mühitində və s. həyata keçirilir. Yarımmaye agar və ya agaroz geldə çökmə reaksiyasının növləri, ikiqat immunodiffuziya ilə. Ouchterloniya, radiap immunodiffuziya, immunoepektroforez və s.

Halqanın çökmə reaksiyası. Reaksiya dar çöküntü borularında aparılır: immun serumun üzərinə həll olunan antigen qatlanır. Antigen və antikorların optimal nisbəti ilə bu iki məhlulun sərhədində qeyri-şəffaf bir təbəqə əmələ gəlir. çöküntü halqası. Reaksiyada antigen kimi qaynadılmış və süzülmüş toxuma ekstraktlarından istifadə edilirsə, onda bu reaksiya birinci termopresipitasiya reaksiyası adlanır (qarayaq hapteninin aşkar edildiyi reaksiya).
Ouchterlony ikiqat immunodiffuziya reaksiyası. Reaksiyanı qurmaq üçün şüşə boşqabın üzərinə nazik bir təbəqə ərinmiş agar geli tökülür və bərkidikdən sonra içindən quyular kəsilir. Antigenlər və immun zərdablar ayrı-ayrılıqda bir-birinə doğru yayılan gelin quyularına yerləşdirilir. Görüş nöqtəsində, ekvivalent nisbətdə, ağ zolaq şəklində bir çöküntü əmələ gətirirlər. Çoxkomponentli sistemlərdə antigenlər və antikorlar olan quyular arasında bir neçə çöküntü xətti görünür; eyni AG-lərdə çöküntü xətləri birləşir; eyni olmayan AG-lərdə kəsişir.
Radial immunodiffuziya reaksiyası.Ərinmiş agar geli olan immun serum bərabər şəkildə şüşə üzərinə tökülür. Geldə bərkidikdən sonra antigenin müxtəlif seyreltmələrdə yerləşdirildiyi quyular hazırlanır. Antigen gelə diffuziya edərək, antikorlarla quyuların ətrafında halqalı çökmə zonaları əmələ gətirir. Yağış halqasının diametri antigen konsentrasiyasına mütənasibdir. Reaksiya qan serumunda immunoqlobulinləri təyin etmək üçün istifadə olunur müxtəlif siniflər, komplement sisteminin komponentləri və s.
İmmunoelektroforez- elektroforez və immunopresipitasiya metodunun kombinasiyası: antigenlərin qarışığı gelin quyularına daxil edilir və elektroforezdən istifadə edərək geldə ayrılır, sonra immunoserum elektroforez zonalarına paralel olaraq yivə əlavə edilir, antikorları yayılır. gel və antigenlə "görüş" yerində çökmə xətləri əmələ gətirir.
Flokulyasiya reaksiyası(Ramona görə) (latınca f1oecus - yun lopa) - toksin - antitoksin və ya toksoid - antitoksin reaksiyası zamanı sınaq borusunda opalescence və ya flokulyant kütlənin (immunoprecipitation) görünüşü. Antitoksik serum və ya toksoidin fəaliyyətini təyin etmək üçün istifadə olunur.

HLA yazmaq- insanın əsas histouyğunluq kompleksinin öyrənilməsi - HLA kompleksi. Bu formalaşmaya müxtəlif immun reaksiyalarda iştirak edən HLA antigenlərini kodlayan 6-cı xromosomda genlər bölgəsi daxildir.

üçün tapşırıqlar HLA yazmaqçox fərqli ola bilər - bioloji identifikasiya (HLA növü valideyn genləri ilə birlikdə miras alınır), meylin müəyyən edilməsi müxtəlif xəstəliklər, orqan transplantasiyası üçün donorların seçilməsi - bu, donor və alıcı toxumaların HLA tipləşdirilməsinin nəticələrinin müqayisəsini nəzərdə tutur. HLA tipindən istifadə edərək sonsuzluq hallarının diaqnozu üçün ərlərin histouyğunluq antigenləri baxımından nə qədər oxşar və ya fərqli olduqları müəyyən edilir.

HLA yazmağı təklif edir HLA polimorfizminin təhlili və iki üsulla həyata keçirilir - seroloji və molekulyar genetik. HLA tiplənməsinin klassik seroloji üsulu mikrolimfositotoksik testə əsaslanır və molekulyar metodda PCR (polimeraza zəncirvari reaksiya) istifadə olunur.

Seroloji HLA yazmaq təcrid olunmuş hüceyrə populyasiyaları üzərində aparılır. Əsas histouyğunluq kompleksi antigenləri əsasən limfositlər tərəfindən aparılır. Buna görə də, I sinif antigenlərinin əsas daşıyıcıları kimi T limfositlərinin suspenziyasından, HLA II sinif antigenlərini təyin etmək üçün isə B limfositlərinin suspenziyasından istifadə olunur. Tələb olunan hüceyrə populyasiyalarını tam qandan təcrid etmək üçün ya sentrifuqa, ya da immunomaqnit ayırma istifadə olunur. Birinci metodun yanlış müsbət məlumatlara səbəb ola biləcəyinə inanılır, çünki bu, bəzi hüceyrələrin ölümü ilə nəticələnir. İkinci üsul daha spesifik olaraq tanınır - hüceyrələrin 95% -dən çoxu canlı olaraq qalır.

Lakin lenfositotoksik testin aparılması üçün əsasdır HLA yazmaq HLA sinif I və II antigenlərinin müxtəlif allel variantlarına qarşı antikorları ehtiva edən spesifik serumdur. Seroloji test hansı serumların limfositlərlə reaksiya verdiyini və hansının reaksiya vermədiyini araşdıraraq HLA növünü təyin edə bilər.

Hüceyrələrlə zərdab arasında reaksiya baş verərsə, nəticədə hüceyrənin səthində antigen-antikor kompleksi əmələ gəlir. Komplement ehtiva edən bir məhlul əlavə edildikdən sonra hüceyrə lizisi və ölümü baş verir. Seroloji HLA tipləşdirmə testi müsbət (qırmızı flüoresan) və mənfi (yaşıl flüoresan) reaksiyaları qiymətləndirmək üçün flüoresan mikroskopiya və ya ölü hüceyrələrin nüvələrini ləkələmək üçün faza-kontrast mikroskopiyadan istifadə etməklə qiymətləndirilir. HLA tipləşdirilməsinin nəticəsi reaksiyaya girən sera və antigenlərin çarpaz reaksiyaya girən qruplarının spesifikliyi və sitotoksiklik reaksiyasının intensivliyi nəzərə alınmaqla əldə edilir.

Serolojinin çatışmazlıqları HLA yazmaqçarpaz reaksiyaların olması, zəif antikor yaxınlığı və ya HLA antigenlərinin aşağı ifadəsi, bir sıra HLA genlərində protein məhsullarının olmamasıdır.

Daha müasir, molekulyar üsullar HLA yazmaq onlar leykositlərin səthindəki antigenlərlə deyil, DNT ilə reaksiya verən və nümunədə hansı antigenlərin olduğunu birbaşa göstərən artıq standartlaşdırılmış sintetik nümunələrdən istifadə edirlər. Molekulyar üsullar canlı leykositlərə ehtiyac duymur; hər hansı insan hüceyrəsi tədqiq edilə bilər və işləmək üçün bir neçə mikrolitr qan kifayətdir və ya özünüzü ağız mukozasından qırıntı ilə məhdudlaşdıra bilərsiniz.

Molekulyar genetik HLA yazmaq PCR metodundan istifadə edir, onun ilk addımı təmiz genomik DNT (tam qandan, leykosit suspenziyasından, toxumalardan) əldə etməkdir.

Daha sonra DNT nümunəsi kopyalanır - spesifik HLA lokusuna xas olan primerlərdən (qısa tək zəncirli DNT) istifadə etməklə in vitro gücləndirilir. Hər bir primer cütünün ucları xüsusi bir allele uyğun gələn unikal ardıcıllıqla ciddi şəkildə tamamlayıcı olmalıdır, əks halda gücləndirmə baş verməyəcəkdir.

PCR-dən sonra təkrar kopyalama zamanı vizual olaraq qiymətləndirilə bilən çoxlu sayda DNT fraqmentləri əldə edilir. Bunun üçün reaksiya qarışıqları elektroliz və ya hibridləşməyə məruz qalır və xüsusi gücləndirmənin baş verib-verməməsi proqram və ya cədvəldən istifadə etməklə müəyyən edilir. HLA tipləşdirilməsinin nəticəsi gen və allel səviyyələrində hərtərəfli hesabat şəklində təqdim olunur. İstifadə edilən nümunələrin standartlaşdırılmasına görə, molekulyar HLA yazmaq daha doğrusu seroloji. Bundan əlavə, daha çox məlumat (daha çox yeni DNT allelləri) və s yüksək səviyyə onun təfərrüatları, çünki bu, yalnız antigenləri deyil, həm də hüceyrədə hansı antigenin olduğunu təyin edən allellərin özlərini müəyyən etməyə imkan verir.

İmmun lizis reaksiyası. Reaksiya spesifik anticisimlərin hüceyrələrlə, o cümlədən eritrositlərlə və bakteriyalarla immun komplekslər yaratmaq qabiliyyətinə əsaslanır ki, bu da klassik yol boyunca komplement sisteminin aktivləşməsinə və hüceyrə lizisinə gətirib çıxarır. İmmun lizis reaksiyalarından ən çox hemoliz reaksiyasından, bakterioliz reaksiyasından isə nadir hallarda istifadə olunur (əsasən vəba və vəbayabənzər vibrionların differensasiyası zamanı).

Hemoliz reaksiyası. Komplementin iştirakı ilə antikorlarla reaksiyanın təsiri altında qırmızı qan hüceyrələrinin buludlu bir süspansiyonu hemoglobinin sərbəst buraxılması səbəbindən parlaq qırmızı şəffaf mayeyə - "lak qanına" çevrilir. Diaqnostik tamamlayıcı fiksasiya reaksiyası (FFR) qurarkən, hemoliz reaksiyası bir göstərici kimi istifadə olunur: sərbəst komplemanın varlığını və ya olmamasını (fiksasiyasını) yoxlamaq üçün.

Geldə yerli hemoliz reaksiyası(Erne reaksiyası) hemoliz reaksiyasının variantlarından biridir. Antikor əmələ gətirən hüceyrələrin sayını təyin etməyə imkan verir. Antikor ifraz edən hüceyrələrin sayı - hemolizinlər - eritrositlər, tədqiq olunan və tamamlayan limfoid toxumasının hüceyrələrinin süspansiyonu olan agar gelində görünən hemoliz lövhələrinin sayı ilə müəyyən edilir.

İmmunofluoressensiya üsulu

(RIF, immunofluoressensiya reaksiyası) flüoroxroma birləşmiş Abs (Ags) istifadə edərək xüsusi Ags (Abs) aşkar etmək üçün bir üsuldur. Yüksək həssaslığa və spesifikliyə malikdir. İnfeksiyaların ekspress diaqnostikası üçün istifadə olunur. xəstəliklər (tədqiqat materialında patogenin identifikasiyası), həmçinin Ab və səth reseptorlarının və leykositlərin markerlərinin (immunofenotiplənməsi) və digər hüceyrələrin təyini üçün. Birbaşa I. m. patoloji materialdan və ya flüoroxromla konyuqasiya olunmuş spesifik Abs ehtiva edən mikrob qabığından toxumanın bir hissəsinin və ya yaxmasının işlənməsindən ibarətdir; preparat bağlanmamış abs-dən azad etmək üçün yuyulur və flüoresan mikroskop altında araşdırılır. Müsbət hallarda, obyektin periferiyası ətrafında parlaq bir immun kompleksi görünür. Qeyri-spesifik lüminessensiyanı istisna etmək üçün nəzarət lazımdır. At dolayı. Onlar. birinci mərhələdə toxuma kəsiyi və ya yaxması qeyri-flüoresan spesifik agentlə, ikinci mərhələdə - birinci mərhələdə istifadə olunan heyvanın -qlobulinlərinə qarşı luminescent agentlə müalicə olunur. Müsbət halda, Ar, At ona və At qarşı Atdan (sendviç üsulu) ibarət işıqlı kompleks əmələ gəlir. Hüceyrələrin fenotiplənməsi zamanı flüoresan mikroskopla yanaşı RIF də nəzərə alınır. lazer hüceyrə çeşidləyicisi .

Axın sitometriyası- hüceyrənin, onun orqanoidlərinin və onda baş verən proseslərin parametrlərinin optik ölçülməsi üsulu.

Texnika, hüceyrə maye axınında keçərkən lazer şüasından işığın səpilməsini aşkar etməyi əhatə edir və işığın dispersiya dərəcəsi hüceyrənin ölçüsü və quruluşu haqqında fikir əldə etməyə imkan verir. Bundan əlavə, analiz hüceyrənin bir hissəsi olan (avtoflüoressensiya) və ya axın sitometriyasından əvvəl nümunəyə əlavə olunan kimyəvi birləşmələrin flüoresans səviyyəsini nəzərə alır.

Flüoresan monoklonal antikorlar və ya flüoresan boyalarla əvvəlcədən etiketlənmiş hüceyrə süspansiyonu axın hüceyrəsindən keçən maye axınına daxil olur. Şərtlər, sözdə görə hüceyrələr bir-birinin ardınca düzüləcək şəkildə seçilir. jetdə reaktivin hidrodinamik fokuslanması. Hüceyrə lazer şüasını keçdiyi anda detektorlar qeyd edir:

kiçik açılarda işığın səpilməsi (1°-dən 10°-ə qədər) ( bu xüsusiyyət hüceyrə ölçüsünü təyin etmək üçün istifadə olunur).

90° bucaq altında işığın səpilməsi (nüvə/sitoplazma nisbətini, həmçinin hüceyrələrin heterojenliyini və dənəvərliyini mühakimə etməyə imkan verir).

bir neçə flüoresan kanalı vasitəsilə flüoresan intensivliyi (2-dən 18-20-yə qədər) - hüceyrə suspenziyasının subpopulyasiya tərkibini təyin etməyə imkan verir və s.

Coombs testi

Birbaşa Coombs testi qırmızı qan hüceyrələrinin səthində IgG sinfi antikorları və komplementin C3 komponentini aşkar edən antiglobulin testidir (tam iki valentli antikorları aşkar etməyə imkan verən geldə aglütinasiya). Tipik olaraq, birbaşa Coombs testi ilə aşkar edilən antikorlar yaxşı qurulmuş bir antigenlə əlaqəli olmayan geniş bir spesifikliyə malikdir. Müsbət birbaşa Coombs testi xəstədə hemolitik anemiya olduğunu açıq şəkildə göstərir, baxmayaraq ki, birbaşa antiqlobulin testi müsbət olan xəstələrin hamısı bu xəstəlikdən əziyyət çəkmir. Xəstələrin təxminən 10% -ində qırmızı qan hüceyrə membranındakı antikorlar və ya komplement komponentləri birbaşa Coombs testi ilə müəyyən edilə bilməz (test mənfidir), lakin buna baxmayaraq, onlar otoimmün hemolitik anemiyadan əziyyət çəkirlər. Belə hallarda antikorların spesifikliyini aydınlaşdırmaq üçün onların elüsyonu ilə testlər istifadə olunur. Yalnız tamamlayıcı üçün müsbət olan birbaşa Coombs testi adətən IgM tipli soyuq anticisimlərə aiddir. Bu halda IgM antikorları qırmızı qan hüceyrələrində olmadığı zaman bazal temperatur orqanlar. Bununla birlikdə, IgM antikorlarının komplemanı aktiv şəkildə fiksasiya etməsi və tamamlayıcının qırmızı qan hüceyrələrində qalması səbəbindən, otoimmün hemolitik anemiyanın bu forması (soyuq aqqutinin xəstəliyi) ilə Coombs testi yalnız komplement üçün müsbət olacaqdır.

Birbaşa Coombs testi isti antikorların səbəb olduğu otoimmün hemolitik anemiyada, otoimmün dərman səbəb olduğu anemiyada müsbətdir (metildopa qəbul edərkən xəstələrin 20% -ə qədər müsbət reaksiya), hemolitik anemiyanın dərman-adsorbsiya növü, hemolitik anemiyanın immunokompleks növü (sınaq yalnız C3 üçün müsbətdir), soyuq anticisimlərin səbəb olduğu otoimmün hemolitik anemiya ilə - soyuq aqqlütinin xəstəliyi (test yalnız C3 üçün müsbətdir). Paroksismal soyuq hemoglobinuriyada birbaşa Kumbs testi mənfi olur.
IN kəskin dövr hemolitik böhran zamanı çoxlu sayda antikorların qeydə alındığı qırmızı qan hüceyrələrinin məhv edilməsi, habelə antikorların qeyri-kafi olması səbəbindən xəstəliklər xroniki kurs xəstəlik, mənfi birbaşa Coombs testi müşahidə edilə bilər.

:

• Laboratoriya qan testlərinin keyfiyyətini təmin etmək üçün vacib şərt, materialın boş bir mədədə, səhər (saat 12: 00-dan əvvəl) qəbuludur.
• Testdən 12 saat əvvəl spirtli içki içməkdən, siqaretdən, yeməkdən və fiziki fəaliyyəti məhdudlaşdırmaqdan çəkinməlisiniz.
• Qan testinin səhəri su içə bilərsiniz.
• Dərman qəbul etməkdən çəkinin; Dərman qəbulunu dayandırmaq mümkün deyilsə, laboratoriyaya məlumat verməlisiniz.
• Hər hansı bir tibbi diaqnostik proseduru yerinə yetirməzdən əvvəl materialı götürmək məsləhətdir.
• Qadınlarda hormon səviyyəsini qiymətləndirərkən, günü nəzərə almaq vacibdir menstrual dövrü Müəyyən hormonları təyin etmək üçün ən yaxşı vaxt nə vaxtdır? Bu məlumatı həkiminizdən ala bilərsiniz.

indeks	Xarakterik
Analizator və test sistemi	gel kartları; DiaMed AG (İsveçrə)
İstinad dəyərləri	Mənfi nəticə / Müsbət nəticə
Müdaxilə edən amillər. Dərmanlar
Aşağıdakı dərmanları qəbul edərkən müsbət bir test mümkündür: asetaminofen, salisilik turşu, aminopirin, antihistaminiklər, karbromal, sefalosporinlər, xlorpromazin, xlorpropamid, sisplatin, klonidin, dipiron, etosuksimid, fenfluramin, fuadin, hidralazin, hidroklorotiyazid, ibuprofen, insulin, izoniazid, levodopa, mefemeltxamid, levodopa, mefemelthamadin , nomifensin, penisilamin, penisilinlər, fenasetin, fenilbutazon, probenesid, prokainamid, quinidin, xinin, rifampin, streptomisin, sulfanilamidlər, sulfonilüre törəmələri, tetrasiklin, triamteren, trimellitik anhidrid
İstifadəyə göstərişlər
İmmun hemolitik anemiyanın diaqnozu, hemolitik xəstəlik yenidoğulmuşlar, dərmanla əlaqəli immun hemolitik anemiya, hemolitik transfuziya reaksiyaları
Nəticələrin təfsiri
Normalda birbaşa Coombs testi mənfi olur. Müsbət test Coombs ünvanında: otoimmün hemolitik anemiya; yenidoğulmuşların hemolitik xəstəliyi; dərmana bağlı immun hemolitik anemiya; hemolitik transfuziya reaksiyaları

Coombs reaksiyası - təsirli üsul insan qanında eritrosit antigenlərinin və anti-eritrosit anticisimlərinin aşkarlanması dolayı reaksiya aglütinasiya. Testin əsasını eritrosit antigenlərinin yazılması üçün sinif G immunoqlobulinlərinə (IgG) əsaslanan spesifik monoklonal reagentlərin istifadəsi, sonra ikinci mərhələdə Coombs antiglobulin serumunun (AGS) istifadəsi təşkil edir.

AGS insan zərdabının C3D tamamlayıcı komponentlərindən birinə insan immunoqlobulinləri G və monoklonal antikorlarla immunlaşdırılmış laboratoriya heyvanlarının qanından zərdabın qarışdırılması yolu ilə istehsal olunur. AGS spesifik antikorlarla həssaslaşan qırmızı qan hüceyrələrinin aglütinasiyasına səbəb olur. AGS-nin təsiri altında qırmızı qan hüceyrələrində antikorlar olmadıqda, müsbət reaksiya baş vermir.

Dolayı Coombs reaksiyası aşağıdakıların mövcudluğunu müəyyən etməyə imkan verir:

• IgG reagentləri tərəfindən aşkar edilmiş eritrosit antigenləri ("natamam" antikorlar, məsələn, monoklonal reagentlər anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• IgG sinifinin anti-eritrosit antikorları.

Dolayı antiglobulin testi: qırmızı qan hüceyrələrinin antigenlərinin aşkarlanması

Anti-D IgG koliklon nümunəsindən istifadə edərək dolayı Coombs reaksiyasının metodunu təqdim edirik.

1. Təmiz sınaq borusunu etiketləyin: yoxlanılan şəxsin adını göstərin.
2. Sınaq borusuna 2 damcı (təxminən 0,1 ml) anti-D IgG zoliklon əlavə edin.
3. Əvvəllər fizioloji məhlul ilə yuyulmuş analiz edilmiş eritrositlərin 5% suspenziyasından 2 damcı əlavə edin. Test nümunələrini zoliklonla qarışdırın.
4. Qarışığı su banyosunda və ya termostatda 37 °C temperaturda 30 dəqiqə inkubasiya edin.
5. Pasteur pipetindən istifadə edərək sınaq borusuna 5 - 10 ml şoran məhlulu əlavə edin.
6. Borunu 1200 g mərkəzdənqaçma sürəti ilə 18 - 25 ° C-də bir dəqiqə santrifüj edin.
7. Şoran həllini çıxarın.
8. Daha 2-3 dəfə sentrifuqadan istifadə edərək qırmızı qan hüceyrələrinin yuyulması prosedurunu təkrarlayın.
9. Qan hüceyrəsi çöküntüsünün üzərinə 2 damcı antiqlobulin serumu əlavə edin və qarışdırın.
10. Borunu 18 - 25 ° C temperaturda bir dəqiqə 1200 q mərkəzdənqaçma sürəti ilə santrifüj edin.
11. Dispenser və ya Pasteur pipetindən istifadə edərək 3-5 damcı salin məhlulu əlavə edin.
12. Çöküntünü yenidən dayandırın və aglütinasiyanı vizual olaraq qiymətləndirin. Sınaq borusunun altındakı fonda aydın aglutinatlar aydın həll eritrosit antigeninin aşkar edilməsini göstərir. Qan hüceyrələrinin qeyri-şəffaf süspansiyonu antigenin olmadığını göstərir.

Coombs testi: izoimmun anti-eritrosit anticisimləri üçün skrininq

Tədqiqat donor və alıcının bütün qırmızı qan hüceyrələrinin antigenləri üçün fərdi uyğunluq testinin bir hissəsi kimi həyata keçirilir. Haqqında nəticə tam uyğunluq analizin bütün mərhələlərində hemoliz və/və ya aglütinasiyanın olmaması əsasında donor eritrositləri olan resipient seraları istehsal olunur. Testin istənilən mərhələsində hemoliz və/və ya aglütinasiya əlamətləri qan nümunələrinin uyğunsuzluğunu göstərir.

AB0 sistemindən istifadə edərək uyğunluğun qiymətləndirilməsi, "soyuq" antikorların aşkarlanması

1. Donor qan nümunəsi hazırlayın:
   • avtomatik dispenserdən istifadə edərək sınaq borusuna 0,2 ml qan əlavə edin;
   • Qırmızı qan hüceyrələrini 5,0 ml salin ilə 3 dəfə yuyun;
   • Qranulları 3-4 mL aşağı ionlu LISS məhlulunda yenidən dayandırın.
2. İkinci təmiz borunu etiketləyin: alıcının adını və donorun adını göstərin.
3. Avtomatik dispenserdən istifadə edərək, 0,1 ml alıcının serumunu etiketli boruya əlavə edin.
4. LISS məhluluna 2 damcı 5% qırmızı qan hüceyrəsi süspansiyonu əlavə edin.
5. Dərhal qarışığı 1200 q mərkəzdənqaçma sürəti ilə 18 - 25 ° C temperaturda 15 - 20 saniyə santrifüj edin.
6. Sınaq borusunu yumşaq silkələməklə, çöküntünü dibindən ayırın. Aqqlütinatların mövcudluğunu qiymətləndirin. Hemoliz və/və ya aglütinatların olması aşağıdakıları bildirir:
   • AB0 sisteminə görə uyğunsuzluq;
   • xəstənin serumunda AB0 antigenlərinə xas olmayan IgM və ya IgA sinifinin "soyuq" antikorlarının olması.

"İsti" antikorların aşkarlanması

1. Hemoliz və/yaxud aglütinatlar yoxdursa, borunu 37 °C-də 10-15 dəqiqə inkubasiya edin.
2. Borunu otaq temperaturunda 1200 q-da 15-20 saniyə santrifüj edin.
3. Borunu silkələyin və supernatantda hemoliz və/və ya aglütinatların olub olmadığını yoxlayın. Müsbət nəticə xəstənin serumunda donor eritrosit antigenlərinə qarşı "isti" IgM antikorlarının aşkar edilməsini göstərir.

Coombs testində IgG antikorlarının aşkarlanması

1. Tədqiqatın əvvəlki mərhələsində nəticə mənfi olarsa, Pasteur pipetindən istifadə edərək sınaq borusuna 5 ml 0,9% NaCl məhlulu əlavə edin.
2. Borunu 1200 q-da 18 - 25 °C hava temperaturunda 15 - 20 saniyə santrifüj edin. Supernatantı diqqətlə atmaq üçün Pasteur pipetindən istifadə edin.
3. Qırmızı qan hüceyrələrinin yuyulmasını 2-3 dəfə təkrarlayın.
4. Sınaq borusuna 1-2 damcı antiqlobulin serumu əlavə edin. Hərtərəfli qarışdırma həyata keçirin.
5. Borunu 1200 q-da 15-20 saniyə santrifüj edin.
6. Qırmızı qan hüceyrəsi çöküntüsünü diqqətlə parçalayın və reaksiya nəticəsini vizual olaraq qiymətləndirin. Aqqlütinasiyanın aşkarlanması xəstənin qan serumunda donorun eritrosit antigenlərinə qarşı IgG antikorlarının olması deməkdir.

Hemolitik anemiyaÖz qırmızı qan hüceyrələrinə qarşı yönəlmiş otoimmün orqanların səbəb olduğu, dəqiq başa düşülməmişdir. Bununla belə, bəzi amillərin (məsələn, virus, anormal zülal) qırmızı qan hüceyrələrini elə dəyişdirdiyi güman edilir ki, orqanizm onları “yad bir şey” kimi qəbul edir və antikorların köməyi ilə onlarla mübarizə aparır. Başqa bir nəzəriyyəyə görə, qırmızı qan hüceyrələrinə qarşı yönəldilmiş antikorlar bəzi xəstəliklərdə anormal plazma protein cisimlərinin formalaşması zamanı demək olar ki, təsadüfən yaranır. Bu cür zülal cisimləri, "təsadüfi" kimi, diaqnoz qoymaq üçün istifadə edilə bilən reaksiyalar verə bilər (məsələn, viral pnevmoniya, məlum olduğu kimi, müsbət Wasserman reaksiyası, müsbət Paul-Bunnel reaksiyası və soyuq aglütinasiya reaksiyası verir) .

İki var otoantikorların əsas növləri hemolitik anemiya üçün, yəni: isti antikorlar (37°C-də reaksiya verir) və soyuq antikorlar (temperatur sıfıra yaxınlaşdıqca reaktivliyi artır). İsti antikorlar soyuq antikorlardan daha çox yayılmışdır. Dacie müəyyən etdi ki, isti hemolizinlər soyuq olanlardan 2 dəfə daha tez-tez baş verir. Hemolizinlər və aqqlütininlər əsaslı şəkildə fərqli antikorlar deyillər: onlar yalnız hərəkətlərinin təbiətinə görə fərqlənirlər. Aqqlütininlər qırmızı qan hüceyrələrini aglütinləşdirir və hemolizinlər onları hemolizin mürəkkəb prosesinə (tamamlayıcı!) daha həssas edir. Eritrositlərə yapışan otoantikorlar eritrosit-qlobin kompleksi əmələ gətirir. Bu kompleks Coombs antiglobin testindən istifadə edərək aşkar edilir.

Coombs testi Kumbs serumu ilə aparılır, onun hazırlanması üçün dovşan insan serumu ilə sensibilizasiya edilir, buna qarşı dovşan zərdabında antikorlar əmələ gəlir. Belə bir sensibilizasiya edilmiş zərdab insan eritrositlərinə təsir etdikdə, eritrosit reseptorlarını bloklayan antikorlarla işğal edərsə, onların aglütinasiyası baş verir. Bu bloklayıcı antikorlar insan zərdabından əldə edildiyi üçün insan plazmasına həssaslaşdırılmış və tərkibində presipitinlər olan dovşan zərdabı ilə aglütinasiya olunur. Bu reaksiya Coombs testi adlanır; otoimmün orqanlar (Lo tit) səbəbiylə hemolitik anemiya üçün demək olar ki, spesifikdir (ətraflı məlumat üçün bax Maier).

Ümumiyyətlə hemolitik anemiyalar üçün eritrositlərin ilkin pozğunluğu ilə Coombs testi mənfi, qazanılmış testlər isə müsbətdir. Bununla belə, bu qayda üçün bəzi istisnalar var: konstitusiya hemolitik anemiya böhranları zamanı yalan-müsbət Kumbs testi aşkar edilmişdir. zəif dərəcə- həmçinin bəzən splenektomiyadan sonra, revmatik artrit, sarkoidoz, tez-tez qan köçürmələri və sistemik lupus eritematosus ilə. Təbii ki, autoimmun cisimlərin əmələ gəlməsi olmadan qazanılmış hemolitik anemiyada mənfi olur.

Hemolitik anemiya otoimmün orqanların səbəb olduğu aşağıdakılara bölünə bilər:
a) kəskin, yarımkəskin və xroniki formalar, həmçinin üzərində
b) naməlum etiologiyalı idiopatik və c) simptomatik [viral pnevmoniya (yalnız soyuq aqqlütininlər), xroniki limfatik leykemiya, retikulosarkoma, limfosarkoma, sistemik lupus eritematoz (əsasən isti, daha az soyuq aqqlütininlər), sifilis (soyuqdəymə), işçilərlə)).
c) simptomatik [viral pnevmoniya (yalnız soyuq aqqlütininlər), xroniki limfatik lösemi, retikulosarkoma, limfosarkoma, sistemik lupus eritematosus (əsasən isti, daha az soyuq aqqlütininlər), sifilis (soyuq aqqlütininlər), yumurtalıq şişləri (yumurtalıq şişləri).

Hemolitik anemiya klinikası, otoimmün orqanların təsiri altında inkişaf edən, çox müxtəlifdir və buna görə də onların ümumi təsvirini çəkmək çətin ki, mümkün deyil. klinik şəkil. Bütün yaş və hər iki cinsdən olan insanlar eyni dərəcədə təsirlənir. Yenə də idiopatik formalar qadınlarda daha çox müşahidə edilir (Çantalar və İşçi).

İdiopatik formanın klinik mənzərəsi xəstəliyin şiddətindən asılı olaraq dəyişir. IN xroniki hallar Başlanğıc tədricən baş verir, xəstəlik tez-tez kəskinləşmələrlə uzun illər davam edir. Anemiyanın şiddəti hemoliz dərəcəsindən asılı olaraq dəyişir. Hemoqlobinin 10%-ə qədər düşməsi müşahidə edilir, digər hallarda isə hemoglobin uzun müddət 50-60% səviyyəsində qalır. Retikulositozun intensivliyi və dərinin və serumun ikterik rənglənməsi hemoliz dərəcəsinə uyğundur. Bilirubin sidikdə çox nadir hallarda olur, çünki böyrəklərdən keçmir, lakin hemoglobinuriya müşahidə olunur. Xroniki hallarda, dalaq tez-tez böyüyür və hətta çox əhəmiyyətli bir ölçüyə çata bilər, lakin digər hallarda hələ də hiss edilə bilər. Qaraciyər nadir hallarda genişlənmir.

Əksər hallarda qanda da makrositoz müşahidə olunur kəskin mərhələlərçoxlu mikrositlər də var, normoblastoz və polixromaziya nadir hallarda yoxdur, leykositoz 30.000-ə çata bilər, trombositlər normaldır. Bəzi hallarda isə ağır trombositopeniya var. Evans bu halları trombositlərə qarşı antikorların eyni vaxtda olması ilə izah edir, belə ki, həm hemolitik anemiya, həm də otoimmün orqanların təsiri nəticəsində trombositopeniya - Evans sindromu var. Osmotik müqavimət bir qədər azalır, lakin konstitusiya qlobulyar hüceyrə anemiyasında olduğu kimi eyni dərəcədə və daimi deyil. 6 saatdan sonra istilik müqavimət testi (Hegglin-Maier) də yüngül hemoliz (öz müşahidəsi) verə bilər, lakin Marchiafava anemiyasına nisbətən daha az dərəcədə. Hemosiderin sidikdə də olur (öz müşahidəsi).