Passiv aglütinasiya reaksiyaları. Dolayı aglütinasiya reaksiyaları. Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (IRHA, RPHA). Əks RNGA. Passiv hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası (PHA).
Bunlar reaksiyalar adlandırılır dolayı (passiv), çünki onlar müxtəlif korpuskulyar hissəciklərin səthində süni şəkildə sorulan Ag (və ya AT) istifadə edirlər.
Dolayı və ya passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (RNGA, RPGA) ən həssas seroloji reaksiyalardan biridir. Bu, AT-nin müxtəlif qırmızı qan hüceyrələrində sabitlənmiş Ag ilə qarşılıqlı əlaqə qurma qabiliyyətinə əsaslanır və sonra aglütinasiya olunur. Diaqnostiklərin daha çox sabitliyi üçün qırmızı qan hüceyrələri formallaşdırılır.
Əks RNGA qan serumunda Ag-ni aşkar etmək üçün istifadə olunur; Bunun üçün eritrositlərə Ag deyil, AT fiksasiya olunur. Bu tip reaksiyalar yoluxucu xəstəliklərin diaqnozu, hamiləliyin təyin edilməsi, aşkarlanması üçün geniş istifadə olunur həddindən artıq həssaslıq dərmanlara və s.
Əyləc reaksiyası passiv hemaqlütinasiya (RTPGA) - gələcək inkişaf RNGA; müəyyən mənada onun spesifikliyinə nəzarət edir. Fərqli RNGA, üç komponentdən ibarətdir; Ag, AT və Ag (AT) eritrositlərə adsorbsiya edilir. Əvvəlcə Ag AT (standart antiserum) ilə reaksiya verir, sonra eyni Ag (və ya AT) ilə sensibilizasiya edilmiş eritrositlər qarışığa əlavə edilir. Əgər Ag-nin AT ilə qarşılıqlı təsiri zamanı sistemdə sərbəst AT (və ya Ag) qalmırsa, eritrosit diaqnostikumunun aglütinasiyası müşahidə olunmur.
Qırmızı qan hüceyrələri və ya neytral istifadə edir sintetik materiallar(məsələn, lateks hissəcikləri), onların səthində antigenlər (bakterial, viral, toxuma) və ya antikorlar sorulur. Onların aglütinasiyası müvafiq sera və ya antigenlər əlavə edildikdə baş verir. Antigenlərlə həssaslaşdırılan qırmızı qan hüceyrələri antigenik eritrosit diaqnostikum adlanır və antikorları aşkar etmək və titr etmək üçün istifadə olunur. Eritrositlər antikorlarla həssaslaşır. immunoqlobulin eritrosit diaqnostikləri adlanır və antigenləri müəyyən etmək üçün istifadə olunur.
Pasif hemaqlütinasiya reaksiyası bakteriyaların yaratdığı xəstəliklərin diaqnostikasında istifadə olunur ( tifo qızdırması və paratif qızdırması, dizenteriya, brusellyoz, taun, vəba və s.), protozoa (malyariya) və viruslar (qrip, adenovirus infeksiyaları, viral hepatit B, qızılca, gənə ensefaliti, Krım hemorragik qızdırması və s.), həmçinin müəyyən hormonları təyin etmək üçün xəstənin artan həssaslığını müəyyənləşdirin. dərmanlar və penisilin və insulin kimi hormonlar.
Passiv hemaqlütinasiya reaksiyası (RPHA). Passiv hemaqlütinasiya testi həssas bir üsuldur seroloji diaqnostika həm erkən, həm də retrospektiv diaqnostika, həmçinin peyvənd olunmuş insanların immunopoqik vəziyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur. Tulyaremiyalı xəstələrdə antikorlar adətən xəstəliyin 1-ci və ya 2-ci həftəsinin sonunda aşkar edilir, 1-1,5 aydan sonra RPHA titrləri çatır. maksimum performans(1:100000-1:20000, nadir hallarda yüksək), bundan sonra onlar azalır və uzun müddət 1:100-1:200 səviyyəsində qalır.
Peyvənd edilmiş insanlarda antikorlar da daim aşkar edilir, lakin daha aşağı titrlərdə, peyvənddən 1-1,5 ay sonra 1:2000-1:5000-dən çox deyil və 1:20-1:80 aşağı səviyyədə bir neçə il qalır.
RPHA-nın təyini üçün antigen tularemiya eritrosit diaqnostikasıdır (antigenik). Dərman maye və quru formada mövcud olan tulyaremiya antigeni ilə sensibilizasiya edilmiş formalinləşdirilmiş qoyun qırmızı qan hüceyrələridir. Maye preparatı - 10% konsentrasiyalı formaldehid həllində qırmızı qan hüceyrələrinin 10% suspenziyası. Quru liyofilləşdirilmiş preparat konservantsız qırmızı qan hüceyrələrinin vakuumda qurudulmuş 10% suspenziyasıdır. İstifadədən əvvəl etiketdəki göstərişlərə uyğun olaraq seyreltilir. Polistirol plitələrində reaksiya qurmaq üçün hər iki dərman 2,5% konsentrasiyada, mikrohəcmlərdə reaksiya qurarkən - 0,5% konsentrasiyada istifadə olunur.
RPGA qurmaq üçün texnika. Test serumları 1:5 (1:10) nisbətində fizioloji məhlul ilə seyreltilir və 30 dəqiqə ərzində 56 dərəcə C-də qızdırılır. Bundan sonra qoyun eritrositlərinə qarşı heterojen anticisimləri çıxarmaq üçün zərdablar formalinləşdirilmiş qoyun eritrositlərinin 50% suspenziyası ilə müalicə olunur. Bunu etmək üçün, 1 ml seruma 2 damcı (0,05 ml) nisbətində qırmızı qan hüceyrələri əlavə edin və çalxalayaraq yaxşıca qarışdırın. Serum eritrositlər tam çökənə qədər saxlanılır və ya otaq temperaturunda bir saat sonra sentrifuqa edilir, bundan sonra müayinə üçün hazır olur.
Seyreltmə mayesi 0,5 ml həcmdə polistirol plitə üzərində bir sıra quyulara tökülür. Serumların ilkin tədqiqi zamanı onların reaksiyasını lövhənin qısa cərgəsində (6 quyu) qurmaqla sınaqdan keçirmək məqsədəuyğundur. Qısa seriyada antikorlar aşkar edilərsə, serumlar uzun sıra seyreltmələrdə (12 quyu) yenidən yoxlanılır. Seyreltmə mayesini tökdükdən sonra hər cərgənin birinci quyusuna (qısa və ya uzun) 1:5 nisbətində seyreltilmiş 0,5 ml test serumu əlavə edin. Sonra eyni həcmdə serum ikiqat seyreltmə ilə titrlənir. Beləliklə, serum seyreltmələri qısa seriyalarda 1:10-dan 1:320-ə qədər, uzun seriyalarda isə 1:10-dan 1:20480-ə qədər əldə edilir. Serum titrə edildikdən sonra hər bir quyuya bir damcı (0,05 ml) həssaslaşdırılmış eritrositlərin 2,5%-li işləyən suspenziyası əlavə edilir. Plitələrin məzmunu homojen bir süspansiyon alınana qədər hərtərəfli sarsılır. Plitələr stasionar masa səthində otaq temperaturunda qalır. Reaksiyanın ilkin qeydi 2-3 saatdan sonra aparılır, titrin son təyini quyularda qırmızı qan hüceyrələrinin tam çökməsindən sonra aparılır. Reaksiya üçün aşağıdakı nəzarət vasitələri nəzərdə tutulmuşdur: 1) 0,5 ml həcmdə 1:10 nisbətində seyreltilmiş sınaq serumu + həssaslaşdırılmamış eritrositlərin 2,5% suspenziyasından 1 damcı; 2) 0,5 ml həcmdə seyreltmə mayesi + həssaslaşdırılmamış eritrositlərin 2,5% suspenziyasının 1 damcısı; 3) 0,5 ml həcmdə seyreltmə mayesi + sensibilizasiya edilmiş eritrositlərin 2,5% suspenziyasının 1 damcısı. Bütün nəzarətlər açıq şəkildə mənfi reaksiya verməlidir.
RPGA-nın uçotu və qiymətləndirilməsi. Reaksiya ilə qiymətləndirilir aşağıdakı diaqram:
1) kəskin müsbət reaksiya(++++) - qırmızı qan hüceyrələri çuxurun dibinə tez-tez kənarlarının skaloped əriməsi olan "çətir" şəklində bərabər bir təbəqədə düşür;
2) müsbət reaksiya (+++) - qırmızı qan hüceyrələri quyunun dibinin ən azı 2/3 hissəsini əhatə edir;
3) zəif müsbət reaksiya (++) - aglütinat kiçikdir və quyunun tam mərkəzində yerləşir;
4) şübhəli reaksiya (+) - quyunun tam mərkəzində eritrositlərin çöküntüsünün ətrafında aglutinatın fərdi dənələri var;
5) mənfi (-) - çuxurun dibində qırmızı qan hüceyrələri "düymə" və ya hamar, kəskin şəkildə müəyyən edilmiş kənarları olan kiçik bir üzük şəklində yerləşirlər.
Serum titri, çox aydın reaksiya verən (ən azı üç müsbət) serumun son seyreltilməsi əsasında nəzərə alınır. 1:100 və ya daha yüksək seyreltmə diaqnostik titr hesab olunur, lakin RA vəziyyətində olduğu kimi, onun artmasına nəzarət etmək lazımdır.
Tulyaremiya üçün RPGA olduqca spesifikdir və bəzilərini aşkar edir çarpaz reaksiyalar yalnız brusellyoz serumları ilə. Diferensial diaqnoz RPGA-da homoloji antigenlə əhəmiyyətli dərəcədə yüksək olan titrlərin hündürlüyü ilə mümkündür.
Mikrohəcmlərdə RPHA-nın qurulması texnikası. RPGA 25 μl və 50 μl həcmdə materialın titrlənməsinə imkan verən Takachi tipli mikrotitratordan (və ya mikropipetləri olan yuvarlaq dibli mikroplitələrdən) istifadə edərək mikrohəcmlərdə həyata keçirilə bilər. Reaksiya texnikası və bütün əməliyyatların ardıcıllığı polistirol plitələrində təhsil alarkən olduğu kimidir. Bununla belə, nəzərə almaq lazımdır ki, mikrometodun həssaslığı adətən makrometoddan bir qatılma (yəni 2 dəfə) aşağıdır.
Reaksiyanı mikrotitratorda qurmaq üçün damcı pipetkasından istifadə edərək hər bir quyuya 50 μl həcmdə seyreltmə mayesi əlavə edilir. Sonra 50 μl başlıqlı titratorlardan istifadə edərək, başı ora batıraraq sınaq serumu toplanır. Mayenin titrator başlığını doldurduğundan əmin olun. Serumlu titrator birinci quyuya köçürülür və onu içəridə saxlayır şaquli mövqe, bir neçə edin fırlanma hərəkətləri gediş-gəliş. Sonra titrator növbəti quyuya köçürülür və manipulyasiya təkrarlanır. Titrləmə eyni vaxtda bir neçə cərgədə aparıla bilər. Bütün seriya titrləndikdən sonra titrator fırlanan hərəkətlərlə distillə edilmiş su ilə yuyulur (2 porsiya dəyişdirilir), su tampon istifadə edərək başdan çıxarılır və ocaq alovunda yandırılır.
Titrləmədən sonra quyulara 25 μl eritrosit diaqnostik maye əlavə edin. Mikrohəcmlərdə RPHA üçün diaqnostik konsentrasiyası 0,5% olmalıdır (yəni, qırmızı qan hüceyrələrinin 2,5% suspenziyası əlavə olaraq 5 dəfə seyreltilir). Qırmızı qan hüceyrələrini əlavə etdikdən sonra, homojen bir süspansiyon əldə olunana qədər plitələr bir qədər sarsılmalıdır. Nəticələr 1-1,5 saat ərzində qeydə alına bilər ki, bu da mikrotitrdə RPGA-nın əhəmiyyətli üstünlüyüdür. Bundan əlavə, bu texnika az miqdarda bütün reaksiya inqrediyentlərini və test serumlarını tələb edir.
Reaksiya aşağıdakı sxemə uyğun olaraq nəzərə alınır:
1) "+" - qırmızı qan hüceyrələrinin quyunun ən azı 2/3 hissəsini tutan "çətir" şəklində bərabər bir təbəqədə quyunun dibinə düşdüyü tam hemaqlütinasiya;
2) "+-" - qırmızı qan hüceyrələrinin kiçik ölçülü boş bir halqa şəklində dibinə düşdüyü qismən hemaqlütinasiya;
3) “-” – qırmızı qan hüceyrələrinin hamar kənarı olan kiçik düymə və ya üzük şəklində dibinə düşməsi zamanı hemaqlütinasiyanın olmaması.
RPHA-da əldə edilən müsbət nəticənin spesifikliyi üç komponentli reaksiyadan - passiv hemaqlütinasiya inhibe reaksiyasından (PHA) istifadə edilərək yoxlanıla bilər.
RTPGA qurmaq üçün texnika. Bu reaksiya, şübhə doğuran və ya xüsusi epidemioloji maraq doğuran müsbət RPGA nəticəsinin spesifikliyini təsdiqləmək üçün istifadə olunur. Reaksiya mexanizmi, test zərdabına öldürülmüş tulyaremiya bakteriyalarının suspenziyası əlavə edildikdə, hemaqlütinasiyanın spesifik inhibəsidir. Üç komponent reaksiya qarşılıqlı: test serum, xüsusi tularemia antigen və antigenic eritrosit diaqnostikum RTPHA adətən 7-8 quyu bir sıra yerləşdirilir. RTPGA ilə paralel olaraq təkrar RPGA quraşdırmaq məsləhətdir. İki sıra quyuya 0,25 ml seyreltmə mayesi tökülür, sonra hər iki cərgənin birinci quyularına 0,25 ml həcmdə sınaq zərdabı əlavə edilir və titrləmə aparılır.İki eyni sıra zərdab seyreltmələri alınır. İkinci cərgənin bütün quyularına 0,25 ml durulaşdırıcı maye, birinci sıranın quyularına isə 0,25 ml tulyaremiya bakteriyasının suspenziyası əlavə edilir. Tularemia diagnosticum istifadə olunur (1 ml-də 25 milyard tulyaremiya bakteriyası ehtiva edir), əvvəllər 50 dəfə seyreltilir. Bu suspenziya 1 ml-də 500 milyon və ya 0,25 ml həcmdə 125 milyon bakteriya ehtiva edir. Antigen əlavə edildikdən sonra boşqab otaq temperaturunda 1 saat saxlanılır, bundan sonra hər iki cərgənin bütün quyularına bir damcı (0,05 ml) eritrosit diaqnostikum əlavə edilir, boşqab silkələnir və düz stolun səthində qalır. Mühasibat uçotu 2-3 saatdan sonra aparılır.
RTPGA-nın uçotu və qiymətləndirilməsi. Əgər test zərdabında spesifik tulyaremiyaya qarşı anticisimlər varsa, onlar əlavə edilmiş antigenlə neytrallaşdırılır və birinci cərgədə hemaqlütinasiya baş verməyəcək və ya yüksək serum titri ilə daha az (2-4) sayda hemaqlütinasiya müşahidə olunacaq. quyuları RPHA ilə cərgə ilə müqayisədə. Bu halda, nəticələrin spesifikliyi təsdiqləndi. Hər iki cərgədə hemaqlütinasiya qeyd edilərsə, yəni. RTPGA və RPGA nəticələri üst-üstə düşürsə, bu, test zərdabında tulyaremiyaya qarşı anticisimlərin olmadığını göstərir. Bu halda RPGA-nın ilkin nəticəsi qeyri-spesifik hesab olunur.
Mikrohəcmlərdə RTHG-nin səhnələşdirilməsi texnikası. RTPGA, RPGA kimi, Takachi tipli mikrotitrdən istifadə edərək mikrohəcmlərdə həyata keçirilə bilər. Bunun üçün hər biri 7-8 quyudan ibarət iki cərgədə mikroplitələrin quyularına 0,25 μl seyreltici maye əlavə edin. Sonra titratordan istifadə edərək 0,25 μl test zərdabından əlavə edilir və hər iki cərgədə titrlənir. Bundan sonra birinci cərgədə hər quyuya 25 μl tulyaremiya antigeni (konsentrasiyası 1 ml-də 500 milyon tulyaremiya bakteriyasıdır), ikinci cərgəyə isə 25 μl seyreltmə mayesi əlavə edilir. Plitələr otaq temperaturunda 1 saat saxlanılır, bundan sonra hər iki cərgənin bütün quyularına 25 μl antigenik zritrositik diaqnostikum (0,5% konsentrasiya) əlavə edilir. Nəticələrin uçotu və qiymətləndirilməsi makrohəcmlərdəki reaksiyalara bənzər şəkildə aparılır.
passiv hemaqlütinasiya reaksiyası) səthində müvafiq spesifik və ya antigenlər əvvəllər adsorbsiya edilmiş qırmızı qan hüceyrələrinin iştirakı ilə baş verən aglütinasiya fenomeninə əsaslanan antigenləri və ya antikorları aşkar etmək və müəyyən etmək üsulu.
1. Kiçik tibb ensiklopediyası. - M.: Tibbi ensiklopediya. 1991-96 2. Birinci səhiyyə. - M.: Böyük Rus Ensiklopediyası. 1994 3. Ensiklopedik lüğət tibbi terminlər. - M.: Sovet ensiklopediyası. - 1982-1984-cü illər.
Digər lüğətlərdə "Dolaylı hemaqlütinasiya reaksiyasının" nə olduğuna baxın:
dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası- RNGA Laboratoriya testi eritrosit diaqnostikasından istifadə etməklə. [Vaksinologiya və immunizasiyada əsas terminlərin ingiliscə-rusca lüğəti. Ümumdünya Səhiyyə Təşkilatı, 2009] Mövzular vaksinologiya, immunizasiya Sinonimlər RNGA EN... ... Texniki Tərcüməçi Bələdçisi
- (RNHA; passiv hemaqlütinasiya reaksiyasının sinonimi) antigenlərin və ya anticisimlərin aşkarlanması və identifikasiyası üsulu, onların iştirakı ilə baş verən, səthində əvvəllər adsorbsiya edilmiş eritrositlərin aglütinasiyası fenomeninə əsaslanaraq... .. . Böyük tibbi lüğət
- (RPHA) bax Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyası... Böyük tibbi lüğət
Bu səhifə lüğətdir. # A... Vikipediya
Baytarlıq Ensiklopedik Lüğətində qəbul edilmiş əsas abbreviaturalar- a., aa, artena, arteriae aa ana (bərabər) SSRİ Tibb Elmləri Akademiyası SSRİ Tibb Elmləri Akademiyası SSRİ Elmlər Akademiyası SSRİ Elmlər Akademiyası Bac. Bacillus Bact. Bakteriya BSSR Belorus SSR c., əsrlər. əsr, əsrlər v., vv. vena, venae VASKHNIL Ümumittifaq Lenin ordeni və... ...
Bu terminin başqa mənaları da var, bax Taun. Ətyeyənlərin xəstəliyi (Kare xəstəliyi) kəskin və ya yarımkəskin yoluxucu viral xəstəlik, qızdırma, selikli qişaların kataral iltihabı, dəri lezyonları, mərkəzi ... ... Wikipedia
- (renes) sidik əmələ gəlməsi funksiyası vasitəsilə orqanizmin kimyəvi homeostazını tənzimləyən qoşalaşmış ifrazat və endokrin orqan. ANATOMİK FİZİOLOJİK ESKETİ Böyrəklər retroperitoneal boşluqda (Retroperitoneal boşluq)... ... Tibbi ensiklopediya
I (trixinelloz; sinonimi: trixinoz, “şişmiş”) nematodlar qrupundan olan helmintozlar, qızdırma, mialji, üz şişməsi, dəri səpgiləri, qan eozinofiliyası və ağır hallarda lezyonlar daxili orqanlar və mərkəzi...... Tibbi ensiklopediya
- (nematodozlar) nematodların yuvarlaq qurdlarının yaratdığı helmintozlar Nematoda sinfi. Digər helmintozlar arasında N. var ən yüksək dəyər insan patologiyasında onların əksəriyyəti geohelmintozdur (bax: Helmintozlar); yumurtalarının və ya sürfələrinin inkişafı...... Tibbi ensiklopediya
yoluxucu epididimit- Düyü. 1. Yoluxucu epididimitli qoyunda sol xayanın böyüməsi. düyü. 1. Yoluxucu epididimitli qoyunda sol xayanın böyüməsi. qoyunların yoluxucu epididimiti (Epididymitis infectiosa arietum), xroniki yoluxucu... ... Baytarlıq ensiklopedik lüğəti
Dolayı hemaqlütinasiya reaksiyasına baxın... Böyük tibbi lüğət
Reaksiya verilir:
1) polisaxaridlərin, zülalların, bakterial ekstraktların və digər yüksək dispersli maddələrin, rikketsiyaların və virusların, aqqlütininlərlə kompleksləri şərti RA-larda görünməyən virusların aşkar edilməsi üçün;
2) xəstələrin seralarında bu yüksək dispersli maddələrə və kiçik mikroorqanizmlərə qarşı anticisimləri aşkar etmək.
Dolayı və ya passiv aglütinasiya dedikdə, antitellərin inert hissəciklər (lateks, sellüloza, polistirol, barium oksidi və s. və ya qoyun qırmızı qan hüceyrələri, I(0)-insan qan qrupu) üzərində əvvəlcədən adsorbsiya edilmiş antigenlərlə qarşılıqlı əlaqədə olması reaksiyası başa düşülür.
Passiv hemaqlütinasiya reaksiyasında (RPHA), qırmızı qan hüceyrələri. Antigenlə yüklənmiş qırmızı qan hüceyrələri bu antigenə qarşı xüsusi antikorların iştirakı ilə bir-birinə yapışır və çökür. Antigen-həssaslaşdırılmış eritrositlər RPGA-da anticisimlərin aşkarlanması (serodiaqnoz) üçün eritrosit diaqnostikumu kimi istifadə olunur. Qırmızı qan hüceyrələri antikorlarla yüklənirsə (eritrosit antikor diagnosticum), antigenləri aşkar etmək üçün istifadə edilə bilər.
düyü. 3. RPGA sxemi: antigen (3) ilə yüklənmiş qırmızı qan hüceyrələri (1), xüsusi antikorlarla bağlanır (4).
Səhnələşdirmə. Polistirol plitələrin quyularında serumun bir sıra ardıcıl seyreltmələri hazırlanır. Sondan əvvəlki quyuya 0,5 ml aşkar müsbət serum və sonuncu quyuya 0,5 ml fizioloji məhlul (nəzarət) əlavə edin. Sonra bütün quyulara 0,1 ml seyreltilmiş eritrosit diaqnostikumu əlavə edilir, çalxalanır və 2 saat ərzində termostata qoyulur.
Mühasibat uçotu. IN müsbət hal eritrositlər çuxurun dibində qatlanmış və ya əyilmiş kənarı (ters çevrilmiş çətir) olan hüceyrələrin bərabər təbəqəsi şəklində, mənfidə - düymə və ya üzük şəklində yerləşirlər.
Şəkil 4. RNGA (RPGA) üçün mühasibat uçotu.
Botulinum toksinini aşkar etmək üçün aparılan rentgen testinin nəticələrinin uçotu.
Botulizmin törədicisi Clostridium botulinum yeddi serovardan (A, B, C, D, E, F, G) toksinlər əmələ gətirir, lakin A, B və E serovarları daha çox yayılmışdır.Bütün toksinlər antigen xassələri ilə fərqlənir və ola bilər. tip spesifik seralardan istifadə etməklə reaksiyalarda fərqləndirilə bilər. Bu məqsədlə pasiv (dolayı) hemaqlütinasiya reaksiyası xəstənin zərdabında həyata keçirilə bilər ki, bunda toksinin olması ehtimal edilir və A, B, E tipli antitoksik anti-botulinum serumlarının anticisimləri ilə yüklənmiş qırmızı qan hüceyrələri normaldır. serum nəzarət kimi xidmət edir.
düyü. 3. RNGA-nın bəyanatı və nəticəsi.
Mühasibat uçotu. Müsbət bir vəziyyətdə qırmızı qan hüceyrələri çuxurun dibində qatlanmış və ya əyilmiş kənarı (ters çevrilmiş çətir) olan hüceyrə təbəqəsi şəklində yerləşir; mənfi bir vəziyyətdə, bir düymə və ya üzük şəklində yerləşirlər. .
Nəticə: Xəstənin zərdabında tip E botulinum toksini aşkar edilmişdir.
Hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası (HRT).
düyü. 8. Hemaqlütinasiya inhibə reaksiyası (HAI) (sxem).
Reaksiya prinsipi AT-nin müxtəlif virusları bağlamaq və onları zərərsizləşdirmək qabiliyyətinə əsaslanır, bu da qırmızı qan hüceyrələrini aglütinasiya etməyi qeyri-mümkün edir. Vizual olaraq, bu təsir hemaglütinasiyanın "inhibisyonunda" özünü göstərir. RTGA virus infeksiyalarının diaqnostikasında spesifik antihemaqlütininləri müəyyən etmək və müxtəlif virusları Ag-nin xüsusiyyətlərini nümayiş etdirən hemaqlütininləri ilə müəyyən etmək üçün istifadə olunur.
Virusların yazılması RTGA reaksiyasında tipə xas sera dəsti ilə həyata keçirilir. Reaksiya nəticələri hemaglütinasiyanın olmaması ilə nəzərə alınır. H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 və başqaları antigenləri olan A tipli virus alt tipləri homoloji tip spesifik sera dəsti ilə RTGA-da fərqləndirilə bilər.
düyü. 9. Qrip virusunun yazılması üçün RTGA nəticələri
Əfsanə: - hemaqlütinasiyanın inhibəsi (düymə); - hemaqlütinasiya (çətir).
Nəticələr: Tədqiq olunan materialda H3N2 antigeni ilə A tipli qrip virusu var
Dolayı (passiv) hemaqlütinasiya reaksiyası (IRHA) ona əsaslanır ki, qırmızı qan hüceyrələri, əgər həll olunan antigen onların səthində adsorbsiya olunarsa, adsorbsiya edilmiş antigenə qarşı anticisimlərlə qarşılıqlı əlaqədə olduqda aglütinasiya qabiliyyəti əldə edirlər. RNGA diaqramı Şəkildə göstərilmişdir. 34. RNGA bir sıra infeksiyaların diaqnostikasında geniş istifadə olunur.
düyü. 34. Passiv hemaqlütinasiya reaksiyasının (RPHA) sxemi. A - eritrosit diaqnostikumunun əldə edilməsi: B - RPGA: 1 - eritrosit: 2 - tədqiq olunan antigen; 3 - eritrosit diaqnostikası; 4 - tədqiq olunan antigenə qarşı antikor: 5 - aglütinat
Reaksiya qurmaq. Test zərdabı 30 dəqiqə 56 ° C-də qızdırılır, ardıcıl olaraq 1:10 - 1:1280 nisbətində seyreltilir və 0,25 ml-də sınaq borularına və ya quyulara tökülür, burada 2 damcı eritrosit diaqnostikası (onlarda adsorbsiya edilmiş antigen olan eritrositlər) ) sonra əlavə olunur.
Nəzarət vasitələri: məlum immun serumu olan eritrosit diaqnostikumunun süspansiyonu; normal serum ilə diaqnostikumun dayandırılması; test serumu ilə normal qırmızı qan hüceyrələrinin dayandırılması. Birinci nəzarətdə aglütinasiya baş verməli, ikinci və üçüncüdə baş verməməlidir.
RIGA istifadə edərək, məlum antikorlar qırmızı qan hüceyrələrinə adsorbsiya olunarsa, naməlum antigeni aşkar edə bilərsiniz.
Hemaqlütinasiya reaksiyası Takachi mikrotitratorundan istifadə etməklə 0,025 ml həcmdə (mikrometod) aparıla bilər.
1. Bu nəyi göstərir? müsbət nəticə Qırmızı qan hüceyrələri ilə virusun varlığı üçün yoxlanılan material arasında RHA?
2. Qırmızı qan hüceyrələrinə virus və ona uyğun zərdab əlavə edilərsə, onların aglütinasiyası baş verəcəkmi? Bu hadisəni aşkar edən reaksiyanın adı nədir?
Məşq edin
Nəzərə alın və nəticəni RIGA-da qeyd edin.
Yağış reaksiyası
Çöküntü reaksiyasında həll olunan antigendən (lizat, ekstrakt, hapten) və elektrolitlərin iştirakı ilə spesifik antikordan ibarət olan spesifik immun kompleks çökdürülür.
Bu reaksiya nəticəsində əmələ gələn buludlu halqa və ya çöküntü çöküntü adlanır. Bu reaksiya əsasən antigen hissəciklərinin ölçüsünə görə aqlütinasiya reaksiyasından fərqlənir.
Yağış reaksiyası adətən bir sıra infeksiyaların diaqnostikasında antigeni təyin etmək üçün istifadə olunur ( qarayara, meningit və s.); məhkəmə tibbində - qan, sperma və s. növlərini müəyyən etmək; sanitar-gigiyenik tədqiqatlarda - məhsulların saxtalaşdırılması aşkar edildikdə; onun köməyi ilə heyvan və bitkilərin filogenetik əlaqəsi müəyyən edilir. Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Antikorlar (presipitinlər) - ilə immun serum yüksək titr antikorlar (1:100000-dən aşağı olmayan). Çöküntü zərdabının titri onun reaksiya verdiyi antigenin ən yüksək seyreltilməsi ilə müəyyən edilir. Serum adətən seyreltilmədən və ya 1:5 - 1:10 seyreltmə şəklində istifadə olunur.
2. Antigen - zülal və ya lipoid polisaxarid təbiətli həll olunmuş maddələr (tam antigenlər və haptenlər).
3. İzotonik məhlul.
Çöküntü reaksiyasının aparılmasının əsas üsulları bunlardır: halqalı çökmə reaksiyası və agarda (gel) çökmə reaksiyası.
Diqqət! Yağış reaksiyasında iştirak edən bütün komponentlər tamamilə şəffaf olmalıdır.
Halqanın çökmə reaksiyası. Pasteur pipetindən istifadə edərək, 0,2-0,3 ml (5-6 damcı) zərdab yağıntı borusuna əlavə edin (serum borunun divarlarına düşməməlidir). Eyni həcmdə olan antigen diqqətlə zərdabın üzərinə qatlanır, onu nazik Pasteur pipeti ilə sınaq borusunun divarı boyunca tökür. Sınaq borusu maili vəziyyətdə saxlanılır. Düzgün qatlandıqda, serum və antigen arasında aydın bir sərhəd olmalıdır. Diqqətlə, mayeni qarışdırmamaq üçün sınaq borusunu stenddə yerləşdirin. Reaksiya müsbət olarsa, antigen və antikorun interfeysində buludlu bir "halqa" meydana gəlir - bir çöküntü (bax. Şəkil 48).
Reaksiya bir sıra nəzarət vasitələri ilə müşayiət olunur (Cədvəl 18). Test borusuna reaksiya inqrediyentlərinin əlavə edilməsi ardıcıllığı çox vacibdir. Serumu antigenə qatlaya bilməzsiniz (nəzarətdə - izotonik məhlulda), zərdabın nisbi sıxlığı daha böyük olduğundan, o, sınaq borusunun dibinə çökəcək və mayelər arasındakı sərhəd açılmayacaq.
Cədvəl 18. Halqanın çökmə reaksiyasının qurulması sxemi
Qeyd. + "üzük" olması; - "üzük" olmaması.
Nəticələr həmişə nəzarətdən başlayaraq 5-30 dəqiqədən sonra, bəzi hallarda bir saatdan sonra qeydə alınır. 2-ci sınaq borusundakı "halqa" immun serumun daxil olmaq qabiliyyətini göstərir spesifik reaksiya müvafiq antigenlə. 3-5 sınaq borusunda "üzüklər" olmamalıdır - bir-birinə uyğun gələn antikorlar və antigenlər yoxdur. 1-ci borudakı "halqa" - müsbət reaksiya nəticəsi - test antigeninin qəbul edilmiş immun zərdabına uyğun olduğunu, "halqanın" olmaması (yalnız 2-ci boruda "halqa") onların uyğunsuzluğunu göstərir - mənfi reaksiya nəticəsi.
Agarda (gel) çökmə reaksiyası. Reaksiyanın özəlliyi ondadır ki, antigen və antikorun qarşılıqlı təsiri sıx bir mühitdə, yəni geldə baş verir. Nəticədə yaranan çöküntü mühitin qalınlığında bulanıq bir zolaq verir. Bir bandın olmaması reaksiya komponentləri arasında uyğunsuzluğu göstərir. Bu reaksiya biotibbi tədqiqatlarda, xüsusən də difteriya törədicisində toksin əmələ gəlməsinin öyrənilməsində geniş istifadə olunur.
Nəzarət sualları
1. Aqqlütinasiya və çökmə reaksiyalarının əsas fərqi nədir?
2. Nə üçün buludlu inqrediyentlərdən yağış reaksiyasında istifadə etmək olmaz?
Məşq edin
1. Halqanın çökmə reaksiyasını qurun və nəticənin eskizini çəkin.
2. Aqarda çökmə reaksiyasında antigenin anticisimlə qarşılıqlı təsirinin xarakterini öyrənin, nəticənin eskizini çəkin (müəlliminizdən bir fincan alın).
Lizis reaksiyası (immun sitolizi)
İmmun lizis zaman antikorların təsiri altında hüceyrələrin əriməsidir məcburi iştirak tamamlayır. Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Antigen - mikroblar, qırmızı qan hüceyrələri və ya digər hüceyrələr.
2. Antikor (lizin) - immun serum, daha az tez-tez xəstə serumu. Bakteriolitik serumda bakteriyaların parçalanmasında iştirak edən antikorlar var; hemolitik - qırmızı qan hüceyrələrinin parçalanmasını təşviq edən hemolizinlər; spiroketlərin parçalanması üçün spiroxetolizinlər, hüceyrələr - itolizinlər və s.
3. Tamamlayıcı. Ən çox serumda tamamlayır qvineya donuzları. Bu serum (bir neçə heyvanın qarışığı) adətən tamamlayıcı kimi istifadə olunur. Təzə (doğma) tamamlayıcı qeyri-sabitdir və qızdırmaq, silkələmək və ya saxlama zamanı asanlıqla məhv edilir, buna görə də alındıqdan sonra iki gündən çox olmayaraq istifadə edilə bilər. Komplementi qorumaq üçün ona 2% əlavə edilir Bor turşusu və 3% natrium sulfat. Bu əlavə 4°C-də iki həftəyə qədər saxlanıla bilər. Quru tamamlayıcı ən çox istifadə olunur. İstifadədən əvvəl izotonik məhlulda orijinal həcmə qədər həll edilir (etiketdə göstərilmişdir).
4. İzotonik məhlul.
Hemoliz reaksiyası(Cədvəl 19). Reaksiya üçün sizə lazımdır:
1. Antigen - 0,3 ml eritrosit çöküntüsü və 9,7 ml izotonik məhlul nisbətində yuyulmuş qoyun eritrositlərinin 3% suspenziyası.
2. Antikor - qoyun eritrositlərinə qarşı hemolitik serum (hemolizin); adətən istehsalda hazırlanır, liofilizasiya edilir və etiketdə göstərilən titrə malikdir.
Hemolizin titri, komplementin iştirakı ilə qırmızı qan hüceyrələrinin 3% suspenziyasının tam hemolizinin baş verdiyi zərdabın ən yüksək qatılmasıdır. Hemoliz reaksiyası üçün hemolizin üçqat titrdə alınır, yəni titrdən əvvəlkindən 3 dəfə az seyreltilir. Məsələn, 1:1200 serum titri ilə serum 1:400 nisbətində seyreltilir (0,1 ml serum * və 39,9 ml izotonik məhlul). Həddindən artıq hemolizin lazımdır, çünki onun bir hissəsi digər reaksiya komponentləri tərəfindən adsorbsiya edilə bilər.
* (0,1 ml-dən az serum qəbul etməməlisiniz - ölçmənin dəqiqliyi əziyyət çəkəcəkdir.)
3. Komplement 1:10 nisbətində seyreltilir (0,2 ml komplement və 1,8 ml izotonik məhlul).
4. İzotonik məhlul.
Cədvəl 19. Hemoliz reaksiyasının sxemi
Nəticələrin uçotu. Əgər reaksiya düzgün aparılarsa, 1-ci sınaq borusunda hemoliz baş verəcək - onun tərkibi şəffaf olacaq. Nəzarətdə maye buludlu qalır: 2-ci boruda hemolizin baş verməsi üçün kifayət qədər komplement yoxdur, 3-cü boruda hemolizin yoxdur, 4-cü boruda nə hemolizin, nə də komplement, 5-ci boruda antigen var. antikorla uyğun gəlmir,
Lazım gələrsə, hemolitik zərdab aşağıdakı sxemə uyğun olaraq titrlənir (cədvəl 20).
Titrləmədən əvvəl 1:100 (0,1 ml zərdab və 9,9 ml izotonik məhlul) ilkin zərdab seyreltməsi hazırlayın. zəruri seyreltmələr, Misal üçün:
Bu seyreltmələrdən Cədvəldə göstərildiyi kimi titrləmə sınaq borularına 0,5 ml zərdab əlavə edin. 20.
Cədvəl 20. Hemolitik serum (hemolizin) üçün titrasiya sxemi
Cədvəldə verilmiş nümunədə. 20, hemolitik serumun titri 1:1200-dür.
Təzə hemolitik zərdab istifadə edərkən, tərkibində olan tamamlayıcını məhv etmək üçün onu təsirsiz hala gətirmək lazımdır. Bunu etmək üçün su banyosunda və ya termostatlı inaktivatorda 56 ° C-də 30 dəqiqə qızdırılır. Sonuncu üsul daha yaxşıdır: zərdabın həddindən artıq istiləşməsi, yəni onun denatürasiyası ehtimalını aradan qaldırır. Denatürləşdirilmiş sera test üçün yararsızdır.
Bakterioliz reaksiyası. Bu reaksiyada komplement uyğun (homoloji) zərdabın iştirakı ilə bakteriyaları parçalayır. Reaksiya sxemi mahiyyətcə hemoliz reaksiyasının sxeminə bənzəyir. Fərq ondadır ki, iki saatlıq inkubasiyadan sonra bütün sınaq boruları lizinq olub-olmadığını öyrənmək üçün təcrübəyə götürülmüş mikroorqanizm üçün əlverişli mühitlə Petri qablarına səpilir. Təcrübə düzgün aparılarsa, 2-5 sınaq borusundan (nəzarətdən) alınan kulturalar bol artım göstərməlidir. 1-ci sınaq borusundan (təcrübədən) inokulyasiyada böyümənin olmaması və ya zəif böyüməsi mikrobların ölümünü, yəni onların antikorla homolog olduğunu göstərir.
Diqqət! Bakterioliz reaksiyası aseptik şəraitdə aparılmalıdır.
Nəzarət sualları
1. İzotonik natrium xlorid məhlulu əvəzinə distillə edilmiş su istifadə edilərsə, qırmızı qan hüceyrələrinə nə olacaq? Bu fenomenin əsası nədir?
2. Komplement olmadıqda eritrositlər homoloji immun zərdab ilə qarşılıqlı əlaqədə olduqda hansı reaksiya baş verəcək?
Məşq edin
Hemoliz reaksiyasını qurun. Nəticəni qeyd edin və eskiz edin.
Əlaqədar məlumat.
