Реакция на аглутинация (от лат. аглутинация- залепване) - залепване на корпускули (бактерии, червени кръвни клетки и др.) от антитела в присъствието на електролити.
Реакция на аглутинациясе проявява под формата на люспи или утайка, състояща се от корпускули (например бактерии), „слепени заедно“ от антитела (фиг. 7.37). Реакцията на аглутинация се използва за: определяне на патогена, изолиран от пациента; определяне на антитела в кръвния серум на пациента; определяне на кръвни групи.
Ориз. 7.37 а, б. Реакция на аглутинация сIgM-антитела (а) иIgG-антитела (б)
1. Определяне на патогена, изолиран от пациента Приблизителна реакцияаглутинация върху стъкло (фиг. 7.38). Към капка аглутиниращ серум (разреждане 1:20) се добавя суспензия от бактерии, изолирани от пациента. Образува се флокулираща утайка.
Ориз. 7.38.
Обширна реакция на аглутинация с патоген, изолиран от пациент (фиг. 7.39). Към разрежданията на аглутиниращия серум се добавя суспензия от бактерии, изолирани от пациента.
Ориз. 52
2. Определяне на антитела в кръвния серум на пациента
Подробна реакция на аглутинация с кръвния серум на пациента (фиг. 7.39). Diagnosticum се добавя към разрежданията на серума на пациента.
- Аглутинацията с O-diagnosticum (бактерии, убити от топлина, задържащи O-антиген) протича под формата на финозърнеста аглутинация.
- Аглутинацията с H-diagnosticum (бактерии, убити от формалдехид, запазващи флагеларния H-антиген) е голяма и протича по-бързо.
3. Реакция на аглутинация за определяне на кръвни групиРеакцията на аглутинация за определяне на кръвни групи се използва за установяване на системата ABO (Таблица b), като се използва аглутинация на еритроцити с имунни серумни антитела срещу антигени на кръвна група A (I), B (III). Контролът е: серум, който не съдържа антитела, т.е. серум AB (IV) кръвна група; антигени, съдържащи се в червените кръвни клетки от групи A (II), B (III). Отрицателната контрола не съдържа антигени, т.е. използват се еритроцити от група О (I).
Таблица 7.6. Определяне на ABO кръвни групи
| Резултати от реакцията |
Група |
|
|
принадлежност |
||
|
изследвани |
||
|
червени кръвни клетки с |
серум (плазма) |
|
|
стандартен |
със стандарт |
|
|
серуми | ||
Подробна реакция на аглутинация (RA). За определяне на AT в кръвния серум на пациента, a екстензивна реакция на аглутинация (RA). За да направите това, към серия от разреждания на кръвен серум се добавя диагностикум - суспензия от убити микроорганизми или частици със сорбиран Ag. Максималното разреждане дава аглутинация Ag се нарича серумен титър.
Видове реакции на аглутинация (RA) за откриване на АТ - кръвен капков тест за туларемия (с диагностикум, приложен към капка кръв и поява на видими белезникави аглутинати) и тест на Хъдълсън за бруцелоза (с диагностикум, оцветен с тинтява виолет, приложен към капка кръв серум).
Приблизителна реакция на аглутинация (RA)
За идентифициране на изолираните микроорганизми, приблизителна RA се поставя върху предметни стъкла. За да направите това, към капка стандартен диагностичен антисерум (разреден 1:10, 1:20) се добавя патогенна култура. При положителен резултатизвършете подробна реакция с нарастващи разреждания на антисерума.
реакциясе счита за положителен, ако се наблюдава аглутинация в разреждания, близки до титъра на диагностичния серум.
OAS. Соматични O-Agsса топлоустойчиви и издържат на кипене в продължение на 2 ч. При взаимодействие с АТ образуват дребнозърнести агрегати.
N-Ag. N-Ag (флагелати)са термолабилни и бързо се разграждат при 100 °C, както и под въздействието на етанол. При реакции с H-антисерум, след 2 часа инкубация, се образуват рехави големи люспи (образувани от бактерии, залепнали заедно с флагели).
Ви-Артифоидната бактерия е относително устойчива на топлина (издържа на температури от 60-62 °C за 2 часа); При инкубиране с Vi антисерум се образува финозърнест аглутинат.
Реакции на директна хемаглутинация
Най-простият от тях реакции - аглутинациячервени кръвни клетки или хемаглутинация, използвани за определяне на кръвни групи в системата ABO. За определяне аглутинация(или липса на такъв) използвайте стандартни антисеруми с анти-А и анти-В аглутинини. Реакцията се нарича директна, тъй като изследваните Ag са естествени компоненти на червените кръвни клетки.
Среща се с директна хемаглутинациявирусната хемаглутинация има механизми. Много вируси са способни спонтанно да аглутинират еритроцитите на птици и бозайници; добавянето им към суспензия от еритроцити предизвиква образуването на агрегати от тях.
Реакция на аглутинация Реакция на аглутинация
(RA) - метод за идентифициране и количествено определяне Ag и At, въз основа на способността им да образуват агломерати, видими с просто око. В отделението по инфекциозни болести. заболявания или за други цели се използва за идентифициране на неизвестни микроби и клетки, за определяне на наличието и количеството на Ab в кръвта и други течности. Принципът на определяне се основава на спецификата на взаимодействието между Ag и Ab и се състои в намирането на известното от неизвестното. Има много възможности за RA: количествени и качествени, епруветка и стъкло, обемни и капкови, конвенционални, ускорени и експресни методи. За стадий на RA ви трябва: 1) с-ка кръв.Във варианта с определяне на вида (var) на бактериите се използват индустриални аглутиниращи тестове, получени чрез имунизиране на зайци. При варианта с определяне на вида на Ab се взема кръвна проба от изследването. хора или животни. Разтворът трябва да бъде стерилен и без суспендирани частици. Пригответе основното разреждане във физиологичен разтвор. Той трябва да бъде 2-4 пъти по-нисък от диагностичния титър за това заболяване; 2) Ag.Във версията на реакцията с определяне на типа Ab се използват индустриални диагностични комплекти; във варианта с определяне на Ag, диагностикумите се приготвят сами под формата на 1-3 милиарда суспензия във физиологичен разтвор на 18-20-часов агар (по-рядко бульон) тест. микроб, инактивиран чрез нагряване във водна баня при 70°C за 1 час или чрез 24-часова инкубация при 37°C с формалдехид (крайна концентрация 0,2%); 3) електролит под формата на физиологичен разтвор.Техника на постановката обемна серийна тръба RA за определяне на титъра на Ab в s-ki: няколко реда работни разреждания се приготвят от основното разреждане на s-ki. Броят на редовете зависи от броя на диагностикумите, взети в експеримента; броят и факторите на разреждане се определят от диагностичния титър на предполагаемото заболяване. Серията трябва да съдържа най-малко разреждане, съответстващо на диагностичния титър на Ab, две разреждания под и две разреждания над него. например, ако диагностичният титър е 1:100, тогава с обемния метод за стадиране на РА трябва да се приготвят следните разреждания: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; с капковото метод, първото разреждане (1:25) не е необходимо, но е необходимо друго по-високо разреждане - 1:800. научно изследване s-ku се титрира до отрицателна реакция. Разрежда се, както следва: 0,25 ml физиологичен разтвор се излива във всички епруветки, с изключение на първата, когато реакцията се провежда в обем от 0,5 ml, и 0,5 ml, когато реакцията се провежда в обем от 1 мл. Изсипете 0,25 (0,5) ml от основното разреждане в 1-ва и 2-ра епруветки, от 2-ра епруветка в нарязания обем и развъдна с-ки се увеличава 2 пъти, 0,25 (0,5) ml се прехвърля на 3-ти, от 3-ти на 4-ти и т.н. до последно, от разфасовката във всичко се налива 0,25 (0,5) мл за балансиране на обемите. Всяко разреждане се извършва с отделна пипета. Ако в експеримента се вземат няколко диагностикума, тогава за всеки от тях се приготвя собствена серия от разреждания по същия начин. Към всяко разреждане на епруветката се добавя диагностикум в обем, равен на обема на епруветката, в резултат на което разреждането във всяка епруветка се удвоява. Експериментът съответства на s-ki контрол (0,25 - 0,5 ml от основното разреждане на s-ki и същото количество физиологичен разтвор) и Ag контрол (0,25 - 0,5 ml диагностикум и същото количество физиологичен разтвор). Ако в експеримента се използват няколко диагностикума, тогава всеки има свой собствен антигенен контрол. Стелажът с епруветките се разклаща добре и се поставя в термостат при 37°C за 4 часа, след което се оставя на стайна температура до следващия ден, след което се записва PA въз основа на количеството на утайката и степента на избистряне на течността. Определянето на тези показатели, в зависимост от естеството на аглутинатите, се извършва с невъоръжено око на тъмен фон, в аглутиноскоп или върху вдлъбната повърхност на огледало на микроскоп. Отчитането започва с контроли: контрола C трябва да е прозрачна, Ag трябва да е равномерно мътна (след разклащане на епруветката). При добри контроли се установява наличието и степента на аглутинация във всички епруветки, които са обозначени с плюсове: голяма утайка и пълно избистряне на течността - 4 плюса; голяма утайка и непълно изчистване на течността - 3 плюса; забележима утайка и забележимо избистряне на течността са 2 плюса. След това се определя титърът: най-високото разреждане с интензитет на аглутинация най-малко 2 плюса. Титърно изследване s-ki се сравняват с диагностичния титър за това заболяване. Ако се изследва титърът. s-ki е 2 пъти по-нисък от диагностичната стойност, реакцията се оценява като съмнителна; ако титърът е равен диагностика - какслабо положителен; ако е 2-4 пъти по-висока, се счита за положителна, ако е 8 или повече пъти по-висока, се счита за рязко положителна. С широкото разпространение на Ab здрави хораЗа оценка на RA се използва повишаване на титъра на Ab. За да се определи вида на Ar в серийния RA, броят на редовете трябва да съответства на броя, взет за идентификация диагностични тестове. От основното разреждане на диагностичния тест се приготвят серия от последователни двукратни разреждания по същия начин, както при RA, за да се определи титърът на Ab. Коефициентите на разреждане зависят от титъра на аглутиниращия тест.В експеримента е необходимо наличието на разреждане, равно на титъра на теста, както и 2,4,6,8 пъти по-ниско от него.Например, ако титърът на диагностичния тест е 1 3200, тогава трябва да използвате разреждания 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Същият обем тествано Ag се добавя към разрежданията на теста, в резултат на това разреждането на тестът се увеличава 2 пъти.Към опита се добавят 2 контроли от тест и Ag.Ако в опита участват няколко s-k,то всеки от тях се нуждае от своя контрола.След завършване на реакцията стойката се разклаща енергично и се поставя в термостат при 37 ° C. Резултатите се вземат предвид, както е описано по-горе. Оценката на реакцията има характеристики. За да се направи заключение за съответствието на изследването. Ag, взет в експеримента, титърът на реакцията трябва да съответства на поне половината от титъра на стандартния диагностичен тест.Титри от 1 4 и по-ниски се считат за групова реакция Капково м.дстадирането на РА се различава от обемното по това, че s-ku се разрежда в обем от 1 ml, Ag се използва в по-висока концентрация (10 милиарда/ml) и се добавя 1 - 2 капки в епруветка Разреждането на лекарството след добавяне на Ag се счита за непроменено.В противен случай методът на настройка, запис и оценка е подобен на обемния метод
(Източник: Речник на термините по микробиология)
ИМУНОМИКРОБИОЛОГИЧНИ ИЗСЛЕДВАНИЯ
Имунологичните методи се използват за решаване на много проблеми:
1. Оценка на състоянието имунна системачовек ( имунен статус) по дефиниция на количествени и функционални характеристикиклетки на имунната система и техните продукти.
2. Определяне на състава и характеристиките на човешките тъкани: кръвни групи, Rh фактор, трансплантационни антигени.
3. Диагностика на инфекциозни заболявания и резистентност към тях чрез откриване и установяване на титри на антитела (серодиагностика), идентифициране на патогенни антигени в организма и определяне на клетъчните реакции към тези антигени.
4. Сероидна идентификация на култури от бактерии и вируси, изолирани от тялото на хора и животни.
5. Откриване в човешкото тяло и в външна средавсякакви вещества с антигенни или хаптенни свойства (хормони, ензими, отрови, лекарства, лекарства и др.).
6. Идентифициране на имунопатологични състояния, алергии, трансплантационни и противотуморни реакции.
Процесът на взаимодействие между антиген и антитяло серологични реакциипротича в две фази:
1) специфичен- фазата на взаимодействие, в която възниква допълнителна комбинация от активните центрове на антитела (паратопи) и антигенни епитопи. Обикновено тази фаза продължава няколко секунди или минути;
2) неспецифични- фаза на проявление, характеризирана външни признациобразуване на имунни комплекси. Тази фаза може да продължи от няколко минути до няколко часа.
Оптималното специфично взаимодействие на антителата с антигена се осъществява в изотоничен разтвор с рН, близко до неутрално. Реакцията антиген-антитяло в система in vitro може да бъде придружена от появата на няколко явления
· аглутинация,
· валежи,
· лизис.
Външни проявиреакциите зависят от физикохимичните свойства на антигена (размер на частиците, физическо състояние), клас и тип антитела (пълни и непълни), както и експериментални условия (средна консистенция, концентрация на сол, pH, температура).
Поливалентността на антигените и антителата осигурява образуването на агрегати, видими с просто око. Това се случва в съответствие с теорията за образуване на мрежа, според която други антитяло и антигенни молекули са последователно прикрепени към получения комплекс антиген-антитяло. В резултат на това се образуват мрежести структури, които се превръщат в агрегати, които се утаяват. Характерът и тежестта на реакцията зависят от количественото съотношение на антигени и антитела. Най-интензивните реакции протичат, когато реагентите са в еквивалентни пропорции.
Предпоставкаобразуване на решетка (мрежи) - наличието на повече от три антигенни детерминанти за всяка антигенна молекула и два активни центъра за всяка молекула на антитяло. Молекулите на антигена са възли на решетката, а молекулите на антителата са свързващи връзки. Областта на оптимални съотношения (зона на еквивалентност) на концентрациите на антиген и антитяло, когато нито свободни антигени, нито свободни антитела се откриват в супернатантата след образуване на утайка.
Агрегати, които могат да се утаят, се образуват, когато антигените се комбинират с пълните антитела. Непълни антитела(едновалентни) не предизвикват образуването на мрежести структури и големи агрегати. За да откриете такива антитела, използвайте специални методивъз основа на използването на антиглобулини (реакция на Кумбс).
Серологичните реакции, поради тяхната висока специфичност и чувствителност, се използват за откриване и количествено определяне на антигени и антитела. Количеството имунореагенти в реакциите се изразява чрез титър - максималното разреждане на серум или антиген, при което все още се наблюдава реакция.
Серологичните реакции в микробиологичните и имунологичните лаборатории се използват за две цели:
1) за сероидидентификация на микроорганизми, токсини, антигени като цяло с помощта на известно антитяло (имунен диагностичен серум),
2) за серодиагностика - определяне на естеството на антитялото в кръвния серум на пациента за бактериални, вирусни и по-рядко други инфекциозни заболявания, като се използва известен антиген (диагностикум).
За определяне на родовия, вида и вида на антигена са необходими известни имунни тестове. диагностични серуми. Получават се чрез многократно прилагане на животни (обикновено зайци) във все по-големи дози от убити или живи микроорганизми, техните разпадни продукти, неутрализирани или естествени токсини. След определен цикъл на имунизация на животните се извършва масивно кръвопускане или тотално обезкървяване на животното. Кръвта, събрана в стерилен контейнер, първо се поставя в термостат при температура 37°C за 4 - 6 часа за ускоряване на съсирването, след това в ледена кутия за един ден. Полученият прозрачен серум се изсмуква в стерилен контейнер, добавят се консерванти, определя се титърът на антителата, проверява се за стерилност и се излива в ампули.
Са използвани неадсорбираниИ адсорбирандиагностични серуми. Неадсорбираните серуми имат високи титриантитела, но са способни да предизвикват групови (кръстосани) реакции.
Адсорбираните серуми се характеризират със строга специфичност на действие (реагират само с хомоложен антиген). Наричат серуми, съдържащи антитела само към един специфичен антиген монорецептор.
Те също така произвеждат серуми, маркирани с флуорохроми, ензими и радиоизотопи, които правят възможно откриването дори на следи от антигена с висока степен на точност.
Като антигени (диагностикуми) в серологичните реакции се използват суспензии от живи или убити бактерии, продукти от тяхното разпадане, токсини и вируси. В някои случаи се използват екстракти или химически изолирани антигени от микроорганизми и животински тъкани.
Всички имуномикробиологични методи могат да бъдат разделени на 3 групи:
1) въз основа на директно взаимодействие на антиген с антитяло(феномени на аглутинация, утаяване, хемаглутинация, обездвижване и др.);
2) въз основа на медиирано взаимодействие на антиген с антитяло(реакции индиректна хемаглутинация, коаглутинация, латексна аглутинация, въглеродна агломерация, бентонитна аглутинация, фиксация на комплемента и др.);
3) използване маркирани антитела или антигени(метод на флуоресцентни антитела, ензимно-свързан имуносорбентен и радиоимуноанализ и други методи).
АГЛУТИНАЦИОННИ РЕАКЦИИ
Тези реакции включват антигени под формата на частици (микробни клетки, червени кръвни клетки и други корпускулни антигени), които са залепени заедно с антитела и се утаяват.
За извършване на реакция на аглутинация(RA) са необходими три компонента: 1) антиген (аглутиноген);
2) антитяло (аглутинин)
3) електролит (изотоничен разтвор на натриев хлорид).
Приблизителна реакция на аглутинация (RA)
Индикативна или плака RA се поставя върху предметно стъкло при стайна температура. За да направите това, използвайте пипета на Пастьор, за да нанесете отделно капка серум в разреждане от 1:10 до 1:20 и контролна капка изотоничен разтвор на натриев хлорид върху стъклото. Колониите или ежедневната бактериална култура (капка диагностикум) се въвеждат в двете бактериологични бримки и се смесват добре. Реакциите се отчитат визуално след няколко минути, понякога с помощта на лупа (x5). При положителен RA се отбелязва появата на големи и малки люспи в серумната капка; при отрицателен RA серумът остава равномерно мътен.
Подробна реакция на аглутинацияза да се определи титърът на специфични антитела при пациент.
Пълен RA за серодиагностика се прави в серума на пациентите. Също така се разрежда в изотоничен разтвор на натриев хлорид от 1:50 - 1:100 до 1:800 или 1: 1600. Тъй като по-ниските серумни титри могат да съдържат нормални аглутинини, открити при здрави хора или пациенти с друга диагноза (диагностичен титър). Като антиген в тази реакция се използват диагностикуми - известни суспензии, обикновено от убити бактерии.
1 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид първо се излива в аглутинационни епруветки. Към първия от тях се добавя 1 ml серум, разреден в съотношение 1:100, а след смесването му се прехвърля 1 ml към втория, от втория към третия и т.н. Към получените двукратни разреждания на серума (от 1:100 до 1:1600 или повече) се добавят 1-2 капки бактериална суспензия, съдържаща 3 милиарда микробни тела в 1 ml. Епруветките се разклащат и се поставят в термостат при 37°С за 2 часа, след което се държат при стайна температура за 24 часа.
Подробната реакция на аглутинация се взема предвид, като всяка епруветка се оценява последователно, като се започне от контролните, с леко разклащане. В контролните епруветки не трябва да има аглутинация. Интензивността на реакцията на аглутинация се отбелязва със следните знаци: ++++ - пълна аглутинация (аглутинирани люспи в абсолютно прозрачна течност); +++ - непълна аглутинация (люспи в леко опалесцираща течност); ++ - частична аглутинация (люспите са ясно видими, течността е леко мътна); + - слаба, съмнителна аглутинация - течността е много мътна, люспите в нея се различават трудно; - - липса на аглутинация (течността е равномерно мътна).
Серумният титър се приема като последното му разреждане, при което интензитетът на аглутинация се оценява като не по-малко от два плюса (++)
Лекция No16
Речник
ДИРЕКТЕН -направо следващ без нищо, без последващи връзки.
КОСВЕНО– през други клетки, не директно.
НАМАЛЯВАНЕ ≠ ПОВИШАВАНЕ (клетъчна активност).
ОТХВЪРЛЯНЕ –не приемам, отхвърлям. Тялото отхвърля трансплантирания орган.
Имунни реакции.
Имунните реакции са реакции на специфично взаимодействие (свързване) на антиген и антитяло или антиген и сенсибилизиран Т-лимфоцит.
Тези реакции протичат in vitro (в епруветка) и in vivo (в жив организъм).
Тези реакции включват серум (серум), поради което се наричат серологични.
Имунните отговори са свикнали да диагностика на инфекциозни заболявания.В този случай неизвестният компонент се определя от известния компонент, който се основава на спецификата на взаимодействието на антигена с антитялото. Ако известно антитяло, тогава можете идентифициране (откриване) на неизвестен антиген. Ако известен антиген, тогава можете да го използвате откриване на неизвестни антитела.
По този начин се използват имунни реакции:
1) за серологична диагностика(серодиагностика) на заболявания -откриване в кръвния серум на болни хора на антитела срещу специфичен причинител на инфекциозно заболяване (известен антиген); ако антитела към който и да е патоген присъстват в кръвния серум на болен човек, тогава този патоген е причинил това инфекция;
2) за серологична идентификация (сероидидентификация) на микроби -за определяне на вида на патогена с помощта на имунни диагностични серуми (известни антитела); ако антителата се свързват с патоген, изолиран от болен човек, тогава този микроб е идентичен с този, с който животното е имунизирано получаванеимунен диагностичен серум .
Имунните реакции протичат в 2 фази:
1) специфична фаза– свързване на активния център на антитялото с детерминантната група на антигена с образуването на комплекси антиген-антитяло; тази фаза протича бързо, но няма видим ефект;
2) неспецифична фаза- външен вид видим ефектвзаимодействие на антиген и антитяло – загуба чернова(аглутинация) или облачност(валежи), което позволява вижобразование комплекси антиген-антитялои направете заключение за съответствиеантиген и антитяло един към друг.
Имунните реакции включват реакция на аглутинация (RA), реакция на утаяване (RP), реакция на свързване на комплемента (CFR).
Реакция на аглутинация- това е слепване и утаяване на микробни или други клетки (еритроцити) под въздействието на антитела в присъствието на електролит. Видимият ефект от реакцията (явлението аглутинация) е образуването на утайка, т.нар. аглутинирам.
Тази реакция се използва за серодиагностикаИ сероидидентификация. RA се използва за серодиагностика (откриване на антитела в кръвния серум на пациенти) Коремен тифи паратиф(Реакция на Видал), бруцелоза(реакцията на Райт), туларемия и лептоспироза. RA се използва за сероидидентификация (определяне на вида на патогена, изолиран от пациент), когато чревни инфекции, магарешка кашлица, холераи т.н.
Компонентиреакции:
1. А антиген (аглутиноген) –това са цели (неунищожени) микробни или други клетки ( корпускуларен, неразтворим антиген). Аглутиногени- това е окачване живили убитмикробни клетки или всякакви други клетки. Антигените могат да бъдат или неизвестни, или известни. Неизвестен аглутиноген е микробна култура, изолирана от тялото на пациента, която трябва да бъде определена. Известен антиген - диагностикум– диагностично лекарство – спиране на мъртвитемикроби известни видовевъв физиологичен разтвор. Това окачване мътен (непрозрачен), защото микробните клетки не се разтварят, а остават непокътнати. Известен аглутиноген ще се използва за откриване на неизвестни антитела в кръвния серум на пациентите.
2. Антитяло (аглутинин)- открити в кръвния серум. Антителата също могат да бъдат или неизвестни, или известни. Неизвестни антитела, които трябва да бъдат определени, са в кръвния серум болен човек. Известни антитела се откриват в имунни диагностични серумикоито се наричат аглутиниращи серуми. Те се използват за сероидентификация, т.е. за определяне на неизвестен антиген - вид микробна култура.
3. Електролит– 0,9% разтвор на натриев хлорид.
Получаване на диагностичен тест.
Чиста култура на патоген от известен вид, отгледан върху наклонен агар (например, причинителят на коремен тиф) се измива с 3-4 ml изотоничен разтвор, поставен в стерилна епруветка, микробите се убиват в някои начин (например чрез кипене и се определя плътността (трябва да има 3 милиарда микробни клетки в 1 ml). Ако микробните клетки са убити висока температура, тогава получават О-диагностикум (О-антиген), но ако се третира с формалдехид, тогава получават Н-диагностикум (Н-антиген).
Примери за диагностика: диагностикум на салмонела, диагностикум на бруцелоза, диагностикум на туларемия.
Приготвяне на аглутиниращи серуми.
Животните (обикновено зайци) се инжектират парентерално с микробни диагностикуми в увеличаващи се дози 5-7 пъти на интервали ( извършват хиперимунизация), след което им се взема кръвен серум, който съдържа антитела срещу микробите, от които е приготвен диагностикумът. Ако имунизацията се извършва с O-diagnosticum, тогава се получават O-аглутиниращи серуми (съдържащи O-антитела), ако с H-diagnosticum се получават H-аглутиниращи серуми.
Аглутиниращите серуми могат да бъдат неадсорбиранили роден и адсорбиран.
Неадсорбирани серумисъдържат групови антитела срещу няколко тясно свързани вида микроби.
Адсорбирани серумисъдържат антитела срещу един или повече антигени на един вид микроби. Ако серумите съдържат антитела само към един антиген, те се наричат монорецепторили едновалентен,ако към няколко антигена – групаадсорбирани серуми .
Примери за аглутиниращи серуми:H-аглутиниращ серум с монорецептор на Salmonella, О-аглутиниращ серум с група Salmonella, О-аглутиниращ серум против холера и др..
Титъраглутиниращ серум - най-високото разреждане на серума, при което все още се открива реакция на аглутинация с антиген (титърът зависи от количеството антитела в кръвта: колкото повече антитела, толкова по-висок е серумният титър).
Методи за стадиране на РА.
1. Приблизителна (ламеларна) RA– изпълнени върху стъкло. Нанесете 2 капки серум и 1 капка изотоничен разтвор върху предметно стъкло. Микробна култура се добавя в цикъл в една от капките серум и в капка изотоничен разтвор и се смесва. Капка изотоничен разтвор с микроби – антигенен контрол, капка безмикробни серуми – контрол на антителата, капка серуми с микроби – опит.Ако серумът съдържа антитела, съответстващи на микробни антигени, които се смесват с него, тогава антителата и антигените ще се свържат специфично едно с друго и след 1-3 минути в тестовата капка ще се появят аглутиниращи люспи. Контролата на антигена трябва да е мътна, а контролата на антителата трябва да е бистра. Резултатите от реакцията се записват въз основа на появата на аглутинирани люспи . Ако изпаднат люспи, реакцията е положителна, т.е. Антигенът съответства на антитяло и антигенът може да се използва за определяне на антитялото или обратното. Ако облачността остане, реакцията е отрицателна.
2. Подробна реакция на аглутинация -извършва се в епруветки. Първо, пригответе 2-кратни разреждания на кръвния серум на болен човек от 1:50 до 1:1600. В 6 епруветки се налива по 1 ml изотоничен разтвор на натриев хлорид. 1 ml от кръвния серум на пациента в разреждане 1:50 се добавя към първата епруветка, смесва се и се получава разреждане 1:100, след което 1 ml от разреждане 1:100 се прехвърля във втората епруветка и се получава разреждане 1:200 и т.н. Две епруветки се съхраняват за контрол на антигена и серума. Към контролния серум добавете само серум в разреждане 1:50, към контролния антиген - само антигена. Добавете 0,1 ml антиген - диагностикум (O- или H-) към всички останали епруветки и поставете всички епруветки в термостат при 37°C за 18-20 часа. Резултатите от реакцията се записват според естеството, количеството на образуваната утайка (аглутинат) и степента на помътняване. Отчитането се извършва само при следните резултати в контролите: контрол на серум - прозрачен, контрол на антиген - мътен. О-антителата дават финозърнеста утайка. H-антитела – едрозърнести. Въз основа на последната епруветка, в която все още се вижда реакцията на аглутинация, се установява диагностичен титър.
По време на серодиагностиказаболявания, е важно не само да се открият специфични антитела към определен патоген, но и да се идентифицира тяхното количество, т.е. установяване на такъв титър на антитела къмКога можем да говорим за наличието на заболяване, причинено от този патоген? . Този титър се нарича диагностичен титър.Например, за да диагностицирате коремен тиф, трябва да идентифицирате титър на антитела от 1: 400, но не по-малко. Дава още по-точни резултати откриване на увеличение на антитела в сдвоени серуми.Серумът на пациента се взема в началото на заболяването и след 3 до 5 или повече дни. Ако титърът на антителата се увеличи поне 4 пъти, следователно, можем да говорим за текущо заболяване.
Ако се извършва подробна реакция на аглутинация за сероидидентификация, тогава се използват аглутиниращи диагностични серуми, разредени до титъра или до половината от техния титър. RA се счита за положителен, ако се открие аглутинация при разреждане, близко до титъра на диагностичния серум.
