Какво включва серологичният кръвен тест? Серологична диагностика - методи за анализ на инфекции

Диагнозата е най-важната стъпка в лечението на всяко заболяване. В зависимост от правилната диагноза не само успешно лечение, но и възможността да се предотврати развитието на усложнения и съпътстващи патологии. Какво е серологично изследване? Това е методът диагностичен анализбиологична проба на пациента за наличие на антитела и антигени. Тестът ви позволява да идентифицирате десетки заболявания, фазата на заболяването и да наблюдавате лечението.

Защо е предписано изследването?

Този вид медицински изследванияшироко използвани в различни области на медицината. Реакцията на фиксиране на комплемента или CFR е насочена към идентифициране на специфични клетки в кръвния серум, антитела, които тялото произвежда за борба с инфекциите и вирусите.

Изосерологичното изследване е насочено към определяне на кръвната група на пациента, Rh фактор и други кръвни параметри.

• Серологичните кръвни тестове се използват в гинекологията за откриване на болести, предавани по полов път. Серологичното титруване се използва и за цялостно изследване на бъдещи майки (токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). При регистрация на бременни жени това е задължително изследване.
• В педиатрията серологичните тестове се използват за потвърждаване на диагнозата "детски" заболявания (варицела, рубеола, морбили и др.), Ако симптомите не са изразени и не е възможно да се определи заболяването въз основа на клинични показания.
• Серологичните тестове позволяват на венеролозите бързо и точно да поставят диагноза. При подобни симптомии оплаквания, кръвен тест може да открие антитела срещу сифилис, лямблиоза, уреплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания.
• Гастроенеролозите, хепатолозите и специалистите по инфекциозни заболявания използват серологични кръвни тестове за диагностициране на вирусен хепатит.
• Съмнение за някакво инфекциозно или вирусно заболяванеможе да възникне от терапевт. За потвърждение се използват серологични реакции към специфични антитела в организма. Извършва се анализ за енцефалит, бруцелоза, магарешка кашлица, вирус на денга, вирус на имунна недостатъчност, алергии и др.
• Серологична диагностикаиграе за хоспитализация важна роля. Този диагностичен метод може да покаже в какъв стадий на развитие е заболяването и дали е необходима незабавна хоспитализация или е достатъчно амбулаторно лечение.

Като биологичен материал за изследване може да се използва проба от слюнка и изпражнения, но най-често се използва венозна кръв на пациента. Тестовете за серологични тестове трябва да се вземат от кубиталната вена в лабораторни условия. Преди да направите теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар и да се подготвите.

Подготовка за анализ

Този тип изследвания се извършват както в общински, така и в търговски институции. По-добре е да направите избор в полза на лабораторията, която разполага с най-модерното оборудване и има само положителни отзиви за работата си. За заети пациенти лабораторията може да предостави услуги за вземане на кръв за RBC у дома.

В този случай пациентът не трябва да губи време по пътя и опашките се елиминират.

Подготовката за вземане на венозна кръв включва няколко стъпки: Общи правила. Преди теста не трябва да ядете храна, тоест тестът се приема на празен стомах. Когато дарявате кръв, трябва да сте в състояние на спокойствие и да не се тревожите. Преди процедурата не трябва да се подлагате на други процедури (рентгенография, ултразвуково изследванеи т.н.). Няколко седмици преди вземането на кръв срещата се отменя в съгласие с лекуващия лекар. лекарства. Някои препоръки зависят от заболяването, за което се извършва изследването. Например, когато тествате за хепатит, 2 дни преди теста, изключете от диетата Вредни хрании алкохол.

Реакция на флуоресценция

Един от видовете серологични реакции е флуоресценцията или RIF. Този метод на изследване се извършва с помощта на реагент, който подчертава желаните антитела в кръвния серум. За извършване на директна серологична реакция или PIF специфичните антитела се маркират с флуоресцентно вещество. Това е най-бързият вид изследване, което се извършва на един етап.

Друг метод, наречен индиректен или RNIF, се извършва на 2 етапа. При първия специфичните клетки (антитела) нямат флуоресцентни етикети, а при втория се използват подходящо маркирани антитела за откриване на комплекса антиген-антитяло. Светещата реакция се появява само след контакт със специфично антитяло. Резултатът от манипулациите се оценява от специално устройство, което оценява интензитета на радиацията, а също така определя формата и размера на изследваните обекти. Инфекциозният агент се определя с 90-95% сигурност в зависимост от вида и стадия на заболяването.

Свързан имуносорбентен анализ

За изследванията ELISA серологичните реакции се провеждат с помощта на уникални стабилни реагенти. Белязаните вещества са прикрепени към специфичен (желан) тип антитяло. В резултат на това серологията осигурява качествена или количествена оценка от кръвната проба на пациента. Ако субстратът няма ясно изразени маркери, резултатът се счита за отрицателен. В случай на качествено изследване положителен резултатпоказват само наличието на антитела в биологична проба.

Серодиагностиката с количествено определяне на клетките на антителата дава по-пълна картина. Въз основа на сбора от открити клетки лекарят може да каже дали заболяването е налице начална фаза, остра или е обостряне на хроничната форма на заболяването. При поставяне на диагнозата се вземат предвид клиничната картина и оплакванията на пациента.

Характеристики на изследването

При изследване за бруцелоза кръвният серум се следи за самозадържане без антиген. Това ви позволява да увеличите надеждността на теста. Резултатът от теста за бруцелоза може да бъде положителен, отрицателен или неизразен, т.е. съмнителен. Ако се получат съмнителни резултати, се препоръчва повторно вземане на кръвни проби. Бруцелозата се диагностицира и въз основа на резултатите от кръвни култури, изследвания на костен мозък и цереброспинална течност.

Предимства и недостатъци на серологията

Диагностиката с помощта на серологични методи се използва широко в съвременна медицина. Този тест е особено подходящ при идентифициране на вирусни и инфекциозни заболявания. Същият тип тестове се използват при географски скрининг и здравни проучвания за предотвратяване на епидемиологични огнища.

Серологичните тестове имат редица предимства.

• Всеки тип серологичен тест има висока надеждност.
• Серологичните тестове се извършват доста бързо. Резултатът от RSC е известен до 24 часа и можете да го получите по интернет, без да излизате от дома си. IN специални случаиПри болнично лечение изследването се извършва в рамките на няколко часа.
• RSC ви позволява да наблюдавате развитието на заболяването и да наблюдавате ефективността на лечението.
• Серологичните методи за изследване са евтини и достъпни за пациентите.

Серологичните тестове също имат някои недостатъци. За да може изследването да предостави най-надеждната информация, кръвният тест трябва да се извърши, като се вземе предвид инкубационният период на заболяването.

Херпес симплекс тип 1 и 2 може да се определи само 2 седмици след инфекцията, а тестването за вируса на имунната недостатъчност се извършва 1, 3 и 6 месеца след контакт с пациента.

Надеждността на изследването може да бъде повлияна от човешки фактори. Ако пациентът пренебрегне правилата за подготовка за изследването или лаборантът направи грешка при обработката на кръвната проба, може да се получи фалшив или съмнителен резултат. Тази ситуация се среща в приблизително 5% от случаите. Като правило, лекуващият лекар, въз основа на клинични показания, лесно изчислява грешката на RSC.

Серологичното изследване на кръвта е модерно и надежден начинидентифициране на такива опасни заболяваниякато ХИВ, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и др. Този раздел от медицината е насочен към изследване на човешка кръвна плазма и нейните имунологични свойства. Серологичният метод е широко използван, а цената на изследването в частни лаборатории е сравнително ниска. За извършване на анализа се използва модерно оборудване, което минимизира влиянието на човешкия фактор върху резултатите от изследването.

Във връзка с

Какво показва серологичният кръвен тест? Диагностични мерки- Това е най-важният етап от лечението на всяко заболяване. Успехът на лечението зависи не само от предписаните лекарства, но и до голяма степен от това колко правилно е поставена диагнозата.

В допълнение, диагнозата помага за предотвратяване на усложнения и придружаващи заболявания. С помощта на серологичен тест на кръвта на пациента се открива наличието на антитела и антигени. Проучването помага да се открият много заболявания, да се определи тяхната фаза и да се следи напредъкът на лечението.

Какво е серология?

Серологията е клон на имунологията, който изучава реакциите на антигени към антитела. Този раздел на медицината се занимава с изследване на кръвната плазма и нейните имунологични характеристики.

Днес серологичният кръвен тест за антитела е надежден начин за откриване на човешки имунодефицитен вирус, хепатит, бруцелоза, полово предавани болести и други животозастрашаващи заболявания. Нека да разберем в какви случаи се предписва.

Показания за употреба

Необходим е серологичен кръвен тест за идентифициране на причинителя на заболяването, ако е трудно да се постави диагноза.

За да се извърши тази реакция, антигените на патогените се въвеждат в плазмата и след това протичащият процес се изследва от лаборант. Или извършват обратната реакция: в заразената кръв се инжектират антитела, за да се определи специфичната идентичност на патогена.

Обхват на приложение

Това изследване се използва в различни отрасли на медицината. Тази реакция идентифицира специфични клетки и антитела, произведени от тялото за борба с инфекциите и вирусите.

В допълнение, кръвната група на човек се определя чрез серологичен метод.

Подобен серологичен кръвен тест се използва в гинекологията за диагностициране на полово предавани болести. Този метод се използва и за изчерпателни проучваниябременни жени (откриване на токсоплазмоза, ХИВ, сифилис и др.). Преминаването на този тест е задължително при регистрация в предродилна клиника.

При деца се използва серологична реакция за потвърждаване на диагнозата на така наречените „детски“ заболявания (варицела, морбили, рубеола и др.), Ако симптомите нямат изразени прояви и е невъзможно да се идентифицира заболяването чрез анализ на клинични показания .

Откриване на полово предавани болести

За венеролозите това изследване е наистина незаменимо и ви позволява да поставите диагноза много точно.

При замъглена клинична картина, серологичен кръвен тест за сифилис, лямблиоза, уреаплазмоза, хламидия, херпес и други заболявания може бързо да открие наличието на антитела.

Вирусни и инфекциозни заболявания

Серологичният анализ се използва активно от гастроентеролози, хепатолози и специалисти по инфекциозни заболявания за диагностициране на вирусен хепатит.

Дешифрирането на серологичен кръвен тест позволява да се определи стадият на заболяването и да се отговори на въпроса колко е необходима хоспитализация. този момент. Как да се подготвим правилно?

Подготовка за теста

Серологичните кръвни тестове се правят както в обществени, така и в търговски клиники. Предпочитание трябва да се даде на лаборатория с модерно оборудване и квалифициран персонал.

Биологичните проби за изследване могат да бъдат слюнка и изпражнения, но в повечето случаи се използва венозна кръв на пациента. Кръв за серологичен тест се взема от кубиталната вена в лаборатория. Преди да вземете теста, трябва да се консултирате с Вашия лекар относно подготовката за тази процедура.

За да се подготвите за серологичен тест, трябва да следвате няколко прости правила.

Дарява се кръв на спокойно състояниепреди хранене, тоест на празен стомах. Преди това не трябва да се подлагате на други изследвания, като рентгенови лъчи, ултразвук и др.

Необходимо е да се избягва приема на антибактериални и някои други лекарства няколко седмици преди кръводаряване. Определени препоръки в този случай зависят от заболяването, за което се прави изследването. Например, тестът за хепатит включва елиминиране на мазни храни и алкохол 48 часа преди процедурата.

Реакция на флуоресценция

Сред видовете серологични реакции има флуоресцентна реакция. Тази техника използва реагент, който осветява антителата в кръвния серум.

Създаването на директна серологична реакция включва маркиране на специфични антитела с флуоресцентно вещество. Тази реакция е най-бързата и се извършва на един етап.

Друг вариант за провеждане на такъв анализ се нарича индиректен или RNIF. Провежда се на два етапа. В първия етап антителата не се маркират с флуоресцентни етикети, а във втория се използват подходящо белязани антитела за идентифициране на антигени и антитела. Сиянието се появява само след свързване със специфично антитяло.

Какво показва серологичният кръвен тест? Резултатът от цялата процедура се оценява от специално устройство, което анализира силата на излъчването и разкрива формата и размера на обекта, който се изследва. Причинителите на инфекциозните заболявания се откриват с резултат, чиято достоверност е 90-95%, в зависимост от вида и стадия на патологията.

Свързан имуносорбентен анализ

Тези типове серологично изследване използват уникални, стабилни реагенти. Маркираните вещества изглежда се придържат към желаните антитела. В резултат на това получаваме качествен или количествен резултат.

Ако не се открият изразени маркери, резултатът ще се счита за отрицателен. Ако по време на качествено изследване се открие наличие на антитела в биологични проби, резултатът от теста се счита за положителен. При количествено определянеклетъчният анализ дава по-точен резултат.

Анализирайки показателите на анализа (например сумата от открити клетки), специалистът определя дали заболяването е в начален стадий, в остър стадий, или е ескалирал хронична формапатология. За да постави диагноза, лекарят взема предвид не само данните от серологично изследване, но и клинична картиназаболявания.

Характеристики на този тест

Извършването на този анализ не винаги е в състояние да осигури 100% увереност, че определено заболяване е открито. Случва се резултатите да са двусмислени и да са необходими други процедури.

Например, по време на тест за бруцелоза, кръвният серум се контролира за самозадържане без антиген. Това значително повишава надеждността на тестването. Тестът за бруцелоза може да бъде положителен или отрицателен и може също да предизвика съмнения.

Ако получите съмнителни резултати, които нямат недвусмислено тълкуване, препоръчително е да направите теста отново. В допълнение, бруцелозата може да бъде открита чрез кръвни култури, изследване Костен мозъки цереброспинална течност.

Предимства на серологичен кръвен тест

Диагностичните техники, използващи серологични реакции, се използват широко в съвременния свят медицинска практика. Това се прави особено често при определяне на вирусни и инфекциозни патологии.

Същите тестове се използват при извършване на географски скрининг и медицински прегледза да се предотврати епидемиологичното разпространение на инфекцията.

Предимствата на метода включват:

• Високо ниво на увереност.
• Бърза реакция и резултати. Резултатите от RSC са известни до 24 часа. В специална ситуация, в болнична обстановка, анализът ще бъде готов след няколко часа.
• Проследяване на развитието на заболяването и ефективността на терапията.
• Ниска цена и достъпност за пациентите.

Недостатъци на метода

Въпреки това, серологичните изследвания също имат своите недостатъци.

Те включват факта, че анализът трябва да вземе предвид инкубационен периодзаболявания, за да се получи по-достоверна картина.

Например определението херпес симплекспървият или вторият тип е възможен само след 14 дни от момента на заразяването. Анализът за наличие на вируса на имунната недостатъчност се извършва 30 дни, 90 дни и шест месеца след контакт със заразен човек.

Разбира се, надеждността на резултатите може да бъде повлияна и от човешкия фактор: пренебрегване на правилата за подготовка за вземане на кръв или грешка, допусната от лабораторния асистент при провеждане на реакцията.

Според статистиката в 5% от случаите може да се получи грешен резултат. Опитен лекарПри преглед на пациент, след като е проучил клиничната картина, в повечето случаи той може да изчисли допуснатата грешка.

Серологични изследвания (тестове)— лабораторни методи за изследване, базирани на откриване на антитела или антигени в биологичен материалтърпелив. Най-често за анализ се използва кръв, по-рядко - урина, слюнка, гноен секрет или тъканни проби, взети по време на биопсия.

Област на приложение

• Определяне на кръвна група.
• Идентифициране на специфични туморни протеини - туморни маркери (например при съмнение за рак на яйчниците, простатната жлеза, Пикочен мехур, стомах и др.).
• Диагностика на вирусни, бактериални, гъбични, протозойни инфекции (ХИВ, сифилис, токсоплазмоза, хламидия, рубеола, херпес, хелминтози, енцефалит, пренасян от кърлежии т.н.).
• Определяне на хормони, ензими и лекарства, съдържащи се в изследвания биоматериал в малки концентрации (по-малко от 10-10 g / l).

Същността на метода е серологични тестове

Серологичните тестове се различават по използваната техника, но всички те са резултат от взаимодействието на антигени (чужди съединения) със съответните антитела. Проучването се състои от две последователни фази. Първата фаза се характеризира с взаимодействие между антигени и антитела с образуването на имунни комплекси ( положителна реакция). Във втората фаза се появяват външни признаци, потвърждавайки наличието на същите тези комплекси (в зависимост от вида на реакцията, това може да бъде мътност на тестовия разтвор, промяна в цвета му, загуба на люспи и др.). Липсата на видими физически явления се счита за отрицателен резултат от теста.

Подготовка за серологични изследвания

Зависи от вида на изследването. За характеристиките на доставката специфичен анализтрябва да кажа медицински специалистпри записване за процедурата.

Можете да направите необходимия серологичен тест в клиника Spectra. Поръчваме анализи от най-добрите лаборатории в столицата, работещи по европейски стандарти, което гарантира бързи и надеждни резултати. Нашите лекари ще ви помогнат да дешифрирате заключението и да дадете препоръки за по-нататъшна диагностика.

Тестът на Васерман (RW) е най-популярният имунологичен тест, използван за диагностициране на сифилис от откриването му през 1906 г. RW принадлежи към групата на реакциите на фиксиране на комплемента (FFR) и се основава на способността на кръвния серум на пациент със сифилис да образува комплекс със съответните антигени. Съвременните RSC методи, използвани за диагностициране на сифилис, се различават значително по своите антигени от класическата реакция на Васерман, но терминът „реакция на Васерман“ традиционно се запазва за тях.

Антителата, произведени от имунната система, се появяват в кръвта на заразения човек. Причинителят на заболяването Treponema pallidum съдържа антигена кардиолипин, който предизвиква производството на антитела, открити чрез RW. Положителната реакция на Васерман показва наличието на такива антитела в кръвта на човек и въз основа на това се прави заключение за наличието на заболяването.

Реакцията на хемолиза е индикатор за резултата от изследването в RSC. Реакцията включва два компонента: овчи червени кръвни клетки и хемолитичен серум. Хемолитичният серум се получава чрез имунизиране на заек с овчи червени кръвни клетки. Инактивира се за 30 минути при температура 56°C. Резултатите от RSC се оценяват в зависимост от наличието или отсъствието на хемолиза в епруветките. Наличието на хемолиза се обяснява с факта, че ако в тестовия серум няма сифилитични антитела, тогава реакцията антиген-антитяло не възниква и целият комплемент отива към реакцията на овчи еритроцит-хемолизин. И ако има специфични антитела, комплементът се изразходва напълно за реакцията антиген-антитяло и не настъпва хемолиза.

Всички съставки за реакцията на Васерман се вземат в същия обем - 0,5 или 0,25 ml. За силна фиксация на комплемента върху специфичен комплекс, смес от тест серум, антиген и комплемент се поставя в термостат при температура 37 ° за 45-60 минути. (фаза I реакция), след което се добавя хемолитична система, състояща се от овчи еритроцити и хемолитичен серум (фаза II реакция). След това епруветките отново се поставят в термостат за 30-60 минути до настъпване на хемолиза в контролата, при която антигенът се заменя с физиологичен разтвор, а вместо тест серум се добавя физиологичен разтвор. Антигените за реакцията на Васерман се произвеждат в готов вид, като се посочва титърът и методът на разреждане.

Максималната положителност на реакцията на Васерман обикновено се обозначава с броя на кръстовете: ++++ (силно положителна реакция) - показва пълно забавяне на хемолизата; +++ (положителна реакция) - съответства на значително забавяне на хемолизата, ++ (слабо положителна реакция) - доказателство за частично забавяне на хемолизата, + (съмнителна реакция) - съответства на леко забавяне на хемолизата. Отрицателният RW се характеризира с пълна хемолиза във всички епруветки.

Въпреки това, понякога са възможни фалшиви положителни резултати - това се дължи на факта, че кардиолипинът също се съдържа в определени количества в клетките човешкото тяло. Човешката имунна система не създава антитела срещу „собствения“ кардиолипин, но има изключения от това правило, поради което положителна реакция на Васерман възниква при напълно здрав човек. Особено често това се наблюдава след тежки вирусни и други заболявания - пневмония, малария, чернодробни и кръвни заболявания, по време на бременност, т.е. в моменти на силно отслабване на имунната система.

Ако лекар подозира, че пациентът има фалшив положителен резултат за реакцията на Васерман, той може да му предпише серия от допълнителни изследвания, които обикновено се използват при диагностицирането на болести, предавани по полов път.

Заболявания и случаи, при които лекарят може да предпише кръвен тест за RW

Провеждане на процедурата за вземане на кръвен тест за RW

Кръвта за RW се дарява само на празен стомах. Последното хранене трябва да бъде не по-късно от 6 часа преди изследването. Медицински работниксяда пациента или го поставя на дивана и взема 8-10 ml кръв от кубиталната вена.

Ако трябва да се направи анализ на бебе, пробата се взема от черепната или югуларната вена.

Подготовка за кръвен тест за RW

Трябва да спрете да пиете алкохол 1-2 дни преди теста. Също така не се препоръчва да се ядат мазни храни - те могат да изкривят резултатите. По време на подготовката за анализа трябва да се въздържате от приема на дигиталисови лекарства.

Противопоказания

Резултатът от анализа ще бъде грешен, ако:

• лицето е болно от инфекциозно заболяване или току-що се е възстановило от него,
• в жена период на менструация,
• бременна през последните седмици преди раждането,
• първите 10 дни след раждането,
• първите 10 дни от живота на бебето.

При първичен сифилис реакцията на Васерман става положителна на 6-8 седмица от заболяването (в 90% от случаите) и се отбелязва следната динамика:

• през първите 15-17 дни след инфекцията реакцията при повечето пациенти обикновено е отрицателна;
• на 5-6-та седмица на заболяването при приблизително 1/4 от пациентите реакцията става положителна;
• на 7-8-та седмица на заболяването, RW става положителен в мнозинството.

При вторичен сифилис RW винаги е положителен. Заедно с др серологични реакции(RPGA, ELISA, RIF) позволява не само да се открие наличието на патогена, но и да се установи приблизителният период на инфекция.

С развитието на сифилитична инфекция през 4-та седмица от заболяването, след началото на първичния сифилом, реакцията на Васерман преминава от отрицателна към положителна, оставайки така както във вторичния пресен, така и във вторичния рецидивиращ период на сифилис. В латентния вторичен период и без лечение RW може да стане отрицателен, така че когато настъпи клиничен рецидив на сифилис, той отново да стане положителен. Следователно, в латентния период на сифилис, отрицателната реакция на Васерман не показва неговото отсъствие или излекуване, а служи само като благоприятен прогностичен симптом.

При активни лезии на третичния период на сифилис положителният RW се среща при приблизително 3/4 от случаите на заболяването. Когато активните прояви на третичния период на сифилис изчезнат, той често се превръща в отрицателен. В този случай отрицателната реакция на Васерман при пациенти не означава, че нямат сифилитична инфекция.

При ранен вроден сифилис RW е положителен в почти всички случаи и е ценен метод за верификация на заболяването. При късен вроден сифилис неговите резултати съответстват на тези, получени в третичния период на придобития сифилис.

Изследването на реакцията на Васерман в кръвта на пациенти със сифилис, подложени на лечение, е от голямо практическо значение. При някои пациенти, въпреки енергичната антисифилитична терапия, реакцията на Васерман не се превръща в отрицателна - това е така нареченият серорезистентен сифилис. IN в такъв случайНяма смисъл да се провежда безкрайна антисифилитична терапия, постигайки прехода на положителен RW към отрицателен.

От горното следва, че отрицателната реакция на Васерман не винаги е признак за липса на сифилитична инфекция в организма.

Положителна реакция на Васерман е възможна при хора с редица други заболявания и състояния, които не са свързани със сифилис:

Всичко по-горе показва, че положителният резултат от реакцията на Васерман все още не е безусловно доказателство за наличието на сифилитична инфекция.

Възстановяване след тестване

След вземане на кръвен тест лекарите препоръчват правилното и балансирана диета, както и колкото се може повече течност. Можете да си позволите топъл чай и шоколад. Ще бъде полезно да се въздържате от физическа дейности в никакъв случай не пийте алкохол.

Норми

Обикновено трябва да се наблюдава хемолиза в кръвта - това се счита отрицателна реакцияза сифилис (реакцията на Васерман е отрицателна). При липса на хемолиза се оценява степента на реакцията, която зависи от стадия на заболяването (маркирани със знаци "+"). В същото време трябва да знаете, че 3-5% имат абсолютно здрави хорареакцията може да е фалшиво положителна. В същото време, през първите 15-17 дни след инфекцията, реакцията при болни хора може да бъде фалшиво отрицателна.

Реакцията на свързване на комплемента (FFR) се провежда в две фази: в първата фаза антигенът се комбинира с тестовия серум, в който се предполага наличието на антитела, добавя се комплемент и се инкубира в термостат за 30 минути.

Втора фаза: добавете хемолитична система (овчи червени кръвни клетки + хемолитичен серум). След инкубация в термостат за 30 минути, резултатът се взема предвид.

При положителен RSC, серумните антитела, комбинирайки се с антигена, образуват имунен комплекс, който прикрепя комплемента, и няма да настъпи хемолиза. Ако реакцията е отрицателна (няма антитела в тестовия серум), комплементът ще остане свободен и ще настъпи хемолиза.

RSC се използва за серологична диагностика на сифилис, гонорея, тиф и други заболявания.

Имунните реакции, използващи маркирани антигени и антитела, се основават на факта, че една от съставките, участващи в реакцията (антигени или антитела), се комбинира с някакъв вид етикет, който може лесно да бъде открит. Като етикети се използват флуорохроми (RIF), ензими (ELISA), радиоизотопи (RIA) и електронно-плътни съединения (IEM).

Свързан имуносорбентен анализ(ELISA), подобно на други имунни реакции, се използва: 1) за откриване на неизвестен антиген с помощта на известни антитела или 2) за откриване на антитела в кръвния серум с помощта на известен антиген. Особеността на реакцията е, че известна реакционна съставка се комбинира с ензим (например пероксидаза). Наличието на ензима се определя с помощта на субстрат, който се оцветява, когато ензимът действа. Най-широко използваният е твърдофазният ELISA.

1) Откриване на антиген. Първият етап е адсорбцията на специфични антитела върху твърдата фаза, която се използва като повърхности от полистирен или поливинилхлорид на ямките на пластмасови панели. Вторият етап е добавянето на тестовия материал, в който се предполага наличието на антиген. Антигенът се свързва с антитела. След това ямките се измиват. Третият етап е добавянето на специфичен серум, съдържащ антитела срещу даден антиген, белязани с ензим. Маркираните антитела се прикрепват към антигени и излишъкът се отстранява чрез промиване. По този начин, ако тестовият материал съдържа антигени, върху повърхността на твърдата фаза се образува комплекс антитяло-антиген-антитяло, белязан с ензим. За откриване на ензима се добавя субстрат. За пероксидазата субстратът е ортофенилендиамин, смесен с H 2 O 2 в буферен разтвор. Под действието на ензима се образуват продукти с кафяв цвят.

2) Откриване на антитела. Първият етап е адсорбцията на специфични антигени по стените на ямките. Обикновено в търговските системи за тестване антигените вече са адсорбирани на повърхността на ямките. Вторият етап е добавянето на тест серум. При наличие на антитела се образува комплекс антиген-антитяло. Третият етап - след промиване в ямките се добавят антиглобулинови антитела (антитела срещу човешки глобулини), маркирани с ензим. Резултатите от реакцията се оценяват, както е описано по-горе.

Очевидно положителните и очевидно отрицателните проби, които се предлагат в търговските системи, се използват като контроли.

ELISA се използва за диагностициране на много инфекциозни заболявания, по-специално ХИВ инфекция, вирусен хепатит.

Имуноблотингът е вид ELISA (комбинация от електрофореза и ELISA). Биополимерите, като антигените на човешкия имунодефицитен вирус, се разделят с помощта на гел електрофореза. След това отделените молекули се пренасят върху повърхността на нитроцелулозата в същия ред, в който са били в гела. Процесът на прехвърляне се нарича петно, а полученият отпечатък е петно. Този отпечатък се влияе от тестовия серум. След това се добавя античовешки глобулинов серум, белязан с пероксидаза, след това субстратът, който под действието на ензима придобива кафяв цвят. Кафяви ивици се образуват на места, където антителата са се комбинирали с антигени. Методът ви позволява да откривате антитела към отделни вирусни антигени.

Радиоимуноанализ (RIA). Методът ви позволява да определите количеството антиген в тестовата проба. Първо към имунния серум се добавя материал, за който се предполага, че съдържа антиген, след което се добавя известен антиген, маркиран с радиоизотоп, например I 125. В резултат на това откриваемият (небелязан) и известен белязан антиген се свързва с ограничено количество антитела. Тъй като белязаният антиген се добавя в определена доза, е възможно да се определи коя част от него е свързана с антителата и коя част е останала свободна поради конкуренция с небелязания антиген и е била отстранена. Количеството белязан антиген, свързан с антителата, се определя с помощта на брояч. Тя е обратно пропорционална на количеството открит антиген.

Имуноелектронна микроскопия (IEM). Антиген, например грипен вирус, е прикрепен към специфичен антисерум, белязан с електронно плътно вещество. Металосъдържащи протеини (феритин, хемоцианин) или колоидно злато се използват като етикети. При микроскопия в електронен микроскопТе правят снимки, на които се виждат грипни вириони с прикрепени към тях тъмни точки - молекули на белязани антитела.

Контролни въпроси

Придобит имунитет, неговата разлика от наследствен (специфичен, вроден). Видове придобит имунитет.

Задача.Детето на семейството Валери се разболя от дифтерия. три години. Други членове на семейството не са се разболявали, а майката е имала дифтерия в детството, а бащата е ваксиниран с дифтериен токсоид. По-голяма сестраНаташа, на пет години, не беше ваксинирана с дифтериен токсоид по едно време поради медицински противопоказания, така че трябваше да се подложи на спешна профилактика с помощта на антидифтериен антитоксичен серум. По-малък брат, Виталий, три месеца, не е боледувал, въпреки че не е ваксиниран с нищо. В къщата има котка и куче, не са болни. За всеки член на семейството и за животни посочете типа имунитет, който ги е предпазил от заболяване.

Какво е антиген? Какви вещества могат да бъдат антигени? Пълноценни антигени и хаптени, как се различават един от друг? Структура на антигена. Как се нарича частта от молекулата на антигена, която определя неговата специфичност? Назовете антигените, които познавате. Какво представляват автоантигените? Антигенна структура на микробна клетка. Флагеларни и соматични антигени; локализация, буквено означение, химическа природа, връзка с температурата, начин на получаване, практическо приложение. Анатоксин, неговите свойства, приложение, производство. Каква тъкан изгражда имунната система на тялото? Посочете централната и периферни органи имунна системачовек. Опишете процеса на формиране на хуморален и клетъчен имунен отговор. Посочете клетките, които улавят и усвояват антигена; клетки, които взаимодействат, за да се образуват хуморален имунитет, клетъчен имунитет; клетки, които се трансформират и стават плазмени клетки, които произвеждат антитела; клетки, които стимулират този процес; клетки, които потискат имунния отговор; клетки, които убиват туморни клетки, и заразени с вируси клетки. Какво представляват антителата? Как да получите имунен серум? Как да получите серум, който да неутрализира тетаничния токсин? Срещу какви антигени се образуват антитоксини, аглутинини и хемолизини? Какви антитела се образуват при въвеждане на дифтериен токсоид в тялото? дифтерийни бактерии? Химическа природа и структура на антителата. Какво е активното място на имуноглобулина? Избройте класовете имуноглобулини и техните свойства. Посочете класа имуноглобулини, които могат да проникнат през плацентата. Към кой клас принадлежат? секреторни имуноглобулини? Динамика на натрупване на антитела. Как се различава вторичният имунен отговор от първичния? Как в практическа медицинасе използват знания за динамиката на имунния отговор? Какво представляват имунните реакции, какъв е техният механизъм, фази на реакцията. В кои 2 посоки се използват имунните реакции? Избройте имунните реакции.

Задача.Заменете липсващите думи с „анатоксин“ или „антитоксин“: _________ е антиген, _________ е антитяло, __________ създава, когато се въведе в тялото активен имунитет, __________ създава пасивен имунитет при въвеждане в тялото, __________ се получава чрез имунизиране на животни, ___________ се получава от токсин при излагане на формалин и топлина, ___________ неутрализира токсините, __________ предизвиква образуването на антитела в тялото.

Реакция на аглутинация: какво е аглутинация, какво е антиген, какво е антитяло; методи за настройка, какви контроли се задават и защо; как трябва да изглеждат контролите. Аглутиниращи серуми, какво съдържат, как се получават, за какво се използват; Какъв е титърът на аглутиниращия серум? Индиректна (пасивна) реакция на хемаглутинация: какво служи като антиген в тази реакция, как се получава, механизмът на реакцията. Какво представлява еритроцитният диагностикум? Какво представлява еритроцитният диагностикум с антитела? Реакции на утаяване: какво е утаяване, какво служи като антиген; Как да получите утаяващ серум? Какъв е титърът на преципитиращия серумен? Методи на настройка, практическо приложение.

Реакция на свързване на комплемента (CFR): принцип на CFR; какво се образува, когато имунният серум взаимодейства със специфичен антиген; какво се случва с комплемента, ако той присъства по време на това взаимодействие? Каква е съдбата на комплемента, ако няма специфичен афинитет между антигена и антителата? Ако крайният резултат от RSC е хемолиза, това означава ли положителен или отрицателен резултат? Методика за създаване на RSC. Защо тест серумът трябва да бъде инактивиран? Хемолитичен серум: какво съдържа, как се получава, какъв е титърът и как се определя? Допълнение: химическа природа, връзка с висока температура, къде се съдържа? Как комплементът може да бъде унищожен? Какво на практика се използва като допълнение?

Задача.Петно от кръв е открито по дрехите на обвинения в убийство. По каква реакция може да се определи дали е човешка кръв; какво в тази реакция ще бъде антиген и какво ще бъдат антитела; Какъв диагностичен препарат трябва да има в лабораторията за тази реакция, как се приготвя?

Задача.Как да използвате реакцията на утаяване, за да определите дали проба от месо, доставена за анализ, е голяма говедаили конско месо; какви диагностични лекарства са необходими?

Реакция на утаяване в агар гел, методи на формулиране, практическо приложение.