नैदानिक ​​एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया संपूर्ण माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं के साथ एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) की विशिष्ट बातचीत पर आधारित होती है। इस अंतःक्रिया के परिणामस्वरूप, समूहित कण बनते हैं जो अवक्षेपित (एग्लूटिनेट) होते हैं। बैक्टीरिया, प्रोटोजोआ, कवक, यीस्ट, रिकेट्सिया, एरिथ्रोसाइट्स और अन्य कोशिकाएं, जीवित और मृत दोनों, एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में भाग ले सकती हैं। प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है: पहला एंटीजन और एंटीबॉडी का एक विशिष्ट संयोजन है, दूसरा गैर-विशिष्ट है, यानी एक दृश्यमान एग्लूटीनेट का गठन। एग्लूटीनेट का अवक्षेपण सोडियम क्लोराइड जैसे इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में होता है। एग्लूटिनेट में सूक्ष्मजीव जीवित रहते हैं, लेकिन अपनी गतिशीलता खो देते हैं।

संक्रामक रोगों के सीरोलॉजिकल निदान और पृथक रोगाणुओं की एंटीजेनिक संरचना के निर्धारण के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। किसी रोगी या वाहक के शरीर से पृथक रोगज़नक़ की एंटीजेनिक संरचना निर्धारित करने के लिए, विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग किया जाता है, जो कुछ सूक्ष्मजीवों के साथ जानवरों (खरगोश, गधा, भेड़) को प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया जाता है। सूक्ष्म जीव की पहचान कांच पर अधिशोषित या मोनोरिसेप्टर सीरा के साथ या विशिष्ट एग्लूटिनेटिंग सीरा के साथ टेस्ट ट्यूब में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में की जाती है। अधिशोषित सीरा में केवल किसी दिए गए सूक्ष्म जीव के लिए विशिष्ट एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, और मोनोरिसेप्टर सीरा में रोगज़नक़ के केवल एक विशिष्ट एंटीजन के लिए एंटीबॉडी होते हैं।

प्रजाति सीरा में एक विशेष सूक्ष्म जीव के सभी एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी होते हैं।

क्या पृथक सूक्ष्मजीव संस्कृति का संबंध है यह प्रजातिसीरम एम्पुल के लेबल पर इंगित एंटीबॉडी टिटर के लिए एक ज्ञात सीरम के साथ एग्लूटिनेशन द्वारा निर्धारित किया जाता है। सीरम के एंटीबॉडी टिटर को इसका अंतिम तनुकरण माना जाता है, जिसमें जानवरों को प्रतिरक्षित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले रोगाणुओं की संस्कृति का एकत्रीकरण अभी भी देखा जाता है। ग्लास एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में आमतौर पर अधिशोषित और मोनोरिसेप्टर सीरा का उपयोग बिना पतला किए किया जाता है।

रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी की उपस्थिति का निर्धारण करते समय, इसे 1:50 से 1:800 या अधिक के तनुकरण से शुरू करके आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल से पतला किया जाता है। प्रत्येक तनुकरण में जीवित या मारे गए रोगाणुओं का एक निलंबन जोड़ा जाता है। गर्मी या फॉर्मेल्डिहाइड से मारे गए रोगाणुओं वाली तैयारी को डायग्नोस्टिकम कहा जाता है। सूक्ष्मजीव संस्कृतियों को गर्म करके प्राप्त डायग्नोस्टिकम में केवल दैहिक एंटीजन होते हैं। केवल फॉर्मेल्डिहाइड का उपयोग करते समय, रोगाणु अपने फ्लैगेलर एंटीजन को बरकरार रखते हैं।

रोगी के रक्त में एंटीबॉडी की उपस्थिति में, प्रतिक्रिया में लिया गया नैदानिक ​​परीक्षण एक साथ चिपक जाता है और दो परीक्षण ट्यूबों पर एक अवक्षेप (एग्लूटीनेट) बन जाता है। इस मामले में, एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के परिणाम सकारात्मक माने जाते हैं। नियंत्रण ट्यूब में, जिसमें आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान और डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, रोगाणुओं का निलंबन सजातीय (नकारात्मक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया) होना चाहिए।

लेप्टोस्पायरोसिस जैसी कुछ बीमारियों में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के परिणामों को केवल माइक्रोस्कोप (माइक्रोएग्लूटीनेशन) के अंधेरे क्षेत्र में सूक्ष्मदर्शी रूप से ध्यान में रखा जाता है। किसी बीमारी का सीरोलॉजिकल निदान करने के लिए, इसे ध्यान में रखें निदान रोग. यह आमतौर पर 1:100 या 1:200 के सीरम तनुकरण से मेल खाता है।

टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया), टुलारेमिया, आदि के मामलों में एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग करके रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाया जा सकता है।
कैस्टेलानी की प्रतिक्रिया. कुछ के लिए संक्रामक रोगया समूह एंटीजन युक्त सूक्ष्मजीवों के साथ टीकाकरण, रक्त सीरम में, किसी दिए गए प्रकार के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी के अलावा, समूह एंटीबॉडी भी दिखाई देते हैं। इस मामले में, परिणामी सीरा द्वारा संबंधित जीवाणु प्रजातियों को एकत्रित किया जाएगा।

कैस्टेलानी ने प्रतिरक्षा सीरा से समूह एंटीबॉडी के सोखने के लिए एक विधि प्रस्तावित की, जो संबंधित प्रजातियों के सूक्ष्मजीवों की मदद से उनके निष्कासन पर आधारित है, जिनमें समूह एंटीजन होते हैं लेकिन विशिष्ट एंटीबॉडी की कमी होती है। सीरम में जोड़े गए ऐसे सूक्ष्मजीवों की एक संस्कृति गैर-विशिष्ट समूह एंटीबॉडी को सोख लेती है, और सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स को हटाने के बाद, सीरम में केवल विशिष्ट इम्युनोग्लोबुलिन ही रह जाते हैं। कैस्टेलानी विधि के अनुसार संसाधित सेरा का उपयोग एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया में अत्यधिक विशिष्ट के रूप में किया जा सकता है।

एग्लूटिनेशन उनके साथ विशिष्ट एटी की बातचीत के परिणामस्वरूप बैक्टीरिया का चिपकना है। आरए को पूरा करने के लिए, तीन घटकों की आवश्यकता होती है: 1) एजी (एग्लूटीनोजेन); 2) एटी (एग्लूटीनिन); 3) इलेक्ट्रोलाइट समाधान (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान)। केवल कणिका प्रतिजन (बैक्टीरिया, लाल रक्त कोशिकाएं, प्रतिजन-भारित लेटेक्स कण) एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में भाग लेते हैं।

कांच पर एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया। एक पिपेट का उपयोग करके एक बूंद को ग्रीस-मुक्त ग्लास स्लाइड पर रखें। डायग्नोस्टिक सीरम(सीरम डाइल्यूशन 1:10 - 1:20)। बैक्टीरियोलॉजिकल लूप का उपयोग करके, अध्ययन के तहत सूक्ष्मजीव की एक शुद्ध संस्कृति को तिरछी अगर की सतह से लिया जाता है, सीरम की एक बूंद में स्थानांतरित किया जाता है और मिश्रित किया जाता है। प्रतिक्रिया के परिणाम को 3-5 मिनट के बाद नग्न आंखों से देखा जाता है। यदि प्रतिक्रिया सकारात्मक है, तो सीरम की एक बूंद में गुच्छे (बड़े या छोटे) की उपस्थिति नोट की जाती है, जो स्लाइड को हिलाने पर एक अंधेरे पृष्ठभूमि के खिलाफ स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। नकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, तरल समान रूप से बादल बना रहता है।

टेस्ट ट्यूब में एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया। परीक्षण ट्यूबों की एक पंक्ति में 1 मिलीलीटर शारीरिक घोल मिलाया जाता है। परीक्षण किए जा रहे रक्त सीरम की समान मात्रा पहली टेस्ट ट्यूब में डाली जाती है। सीरम का क्रमिक दो गुना तनुकरण (सीरम अनुमापन) तैयार किया जाता है, जिसके बाद प्रत्येक टेस्ट ट्यूब में निष्क्रिय बैक्टीरिया (डायग्नोस्टिकम) के निलंबन की 2 बूंदें डाली जाती हैं। ट्यूबों को 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है। प्रतिक्रिया छोटे-छोटे गुच्छों के निर्माण के साथ आगे बढ़ती है, जो नग्न आंखों के लिए अदृश्य होते हैं, इसलिए परिणाम एक विशेष उपकरण - एक एग्लूटीनोस्कोप में मामूली आवर्धन के तहत दर्ज किए जाते हैं। एग्लूटिनेशन की तीव्रता को "चार प्लस" प्रणाली के अनुसार ध्यान में रखा जाता है: पूर्ण एग्लूटिनेशन - 4+, आंशिक एग्लूटिनेशन - 3+ या 2+, संदिग्ध परिणाम - +। अंतिम तनुकरण जिसमें 2+ का एग्लूटिनेशन देखा जाता है, उसे परीक्षण सीरम में एंटीबॉडी टिटर के रूप में लिया जाता है।

टाइफाइड और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट प्रतिक्रिया), और टाइफस (वीगल प्रतिक्रिया) के प्रेरक एजेंटों के प्रति एंटीबॉडी के अनुमापांक को निर्धारित करने के लिए टेस्ट ट्यूब में एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (एक व्यापक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया) की जाती है।

एग्लूटिनेशन (लैटिन एग्लूटिनैटियो से - ग्लूइंग) इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में विशिष्ट एंटीबॉडी के अणुओं के साथ एंटीजन-असर कॉर्पस्क्यूलर कणों (संपूर्ण कोशिकाओं, लेटेक्स कण इत्यादि) का ग्लूइंग (कनेक्शन) है, जो फ्लेक्स या तलछट के गठन में समाप्त होता है (एग्लूटिनेट) नग्न आंखों को दिखाई देता है। तलछट की प्रकृति एंटीजन की प्रकृति पर निर्भर करती है: फ़्लैगेलेटेड बैक्टीरिया एक मोटे फ़्लोकुलेंट तलछट का उत्पादन करते हैं, फ़्लैगेलेटेड और नॉनकैप्सुलर बैक्टीरिया एक महीन दाने वाले तलछट का उत्पादन करते हैं, और कैप्सुलर बैक्टीरिया एक रेशेदार तलछट का उत्पादन करते हैं। प्रत्यक्ष एग्लूटिनेशन के बीच एक अंतर किया जाता है, जिसमें बैक्टीरिया या किसी अन्य कोशिका के स्वयं के एंटीजन, जैसे एरिथ्रोसाइट्स, सीधे विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ बातचीत में भाग लेते हैं; और अप्रत्यक्ष, या निष्क्रिय, जिसमें जीवाणु कोशिकाएं या एरिथ्रोसाइट्स, या लेटेक्स कण स्वयं के नहीं, बल्कि उनके लिए विशिष्ट एंटीबॉडी (या एंटीजन) की पहचान करने के लिए उन पर सोखे गए विदेशी एंटीजन (या एंटीबॉडी) के वाहक होते हैं। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में मुख्य रूप से आईजीजी और आईजीएम वर्गों से संबंधित एंटीबॉडी शामिल होते हैं। यह दो चरणों में होता है: पहला, एंटीजन के निर्धारक के साथ एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र की एक विशिष्ट बातचीत होती है, यह चरण इलेक्ट्रोलाइट्स की अनुपस्थिति में हो सकता है और इसके साथ नहीं होता है दृश्यमान परिवर्तनप्रतिक्रिया प्रणाली. दूसरे चरण के लिए - एग्लूटीनेट का निर्माण - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति आवश्यक है, जो कम करते हैं बिजली का आवेशएंटीजन + एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनाते हैं और उनके चिपकने की प्रक्रिया को तेज करते हैं। यह चरण एग्लूटीनेट के निर्माण के साथ समाप्त होता है।

एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं या तो कांच या चिकने कार्डबोर्ड प्लेटों पर या बाँझ एग्लूटिनेशन ट्यूबों में की जाती हैं। कांच पर एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (प्रत्यक्ष और निष्क्रिय) आमतौर पर उपयोग की जाती हैं त्वरित विधिरोगी के सीरम में विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाना (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस के साथ) या रोगज़नक़ की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए। बाद के मामले में, अच्छी तरह से शुद्ध (सोख लिया गया) डायग्नोस्टिक सीरा जिसमें केवल मोनोरिसेप्टर एंटीबॉडी या विभिन्न एंटीजन के लिए उनका एक सेट होता है, आमतौर पर उपयोग किया जाता है। कांच पर एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया का निस्संदेह लाभ इसके कार्यान्वयन की सादगी और यह तथ्य है कि इसमें कई मिनट या सेकंड भी लगते हैं, क्योंकि दोनों घटकों का उपयोग केंद्रित रूप में किया जाता है। हालाँकि, इसका केवल गुणात्मक मूल्य है और यह टेस्ट ट्यूब की तुलना में कम संवेदनशील है। टेस्ट ट्यूबों में एक व्यापक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया अधिक सटीक परिणाम देती है, क्योंकि यह आपको सीरम में एंटीबॉडी की मात्रात्मक सामग्री निर्धारित करने (इसके टिटर को स्थापित करने) की अनुमति देती है और यदि आवश्यक हो, तो एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि के तथ्य को दर्ज करें, जिसका नैदानिक ​​​​मूल्य है . प्रतिक्रिया स्थापित करने के लिए, 0.85% NaCl समाधान के साथ एक निश्चित तरीके से पतला सीरम और एक मानक डायग्नोस्टिकम (या परीक्षण संस्कृति) के निलंबन की एक समान मात्रा (आमतौर पर 0.5 मिलीलीटर) जिसमें 1 मिलीलीटर में 1 बिलियन बैक्टीरिया होते हैं, को इसमें जोड़ा जाता है। एग्लूटीनेशन ट्यूब. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के परिणाम पहले 37 डिग्री सेल्सियस पर ट्यूबों के ऊष्मायन के 2 घंटे बाद और अंत में 20-24 घंटों के बाद दो मानदंडों के अनुसार दर्ज किए जाते हैं: अवक्षेप की उपस्थिति और आकार और सतह पर तैरने वाले तरल की पारदर्शिता की डिग्री। मूल्यांकन फोर-क्रॉस प्रणाली के अनुसार किया जाता है। प्रतिक्रिया आवश्यक रूप से सीरम और एंटीजन नियंत्रण के साथ होती है। ऐसे मामलों में जहां रोगज़नक़ की सीरोलॉजिकल पहचान के लिए एक टेस्ट ट्यूब में एक विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया की जाती है, तो इसका नैदानिक ​​​​मूल्य होता है यदि प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है जब डायग्नोस्टिक सीरम को इसके टिटर के कम से कम आधे तक पतला किया जाता है।

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि समजात एंटीजन और एंटीबॉडी के समाधानों को मिलाते समय, एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की दृश्य अभिव्यक्तियाँ हमेशा नहीं देखी जाती हैं। दोनों प्रतिक्रिया घटकों के कुछ इष्टतम अनुपात पर ही अवक्षेप बनता है। इन सीमाओं के बाहर, एंटीजन या एंटीबॉडी की महत्वपूर्ण अधिकता के साथ, कोई प्रतिक्रिया नहीं देखी जाती है। इस घटना को "प्रोज़ोन घटना" कहा जाता है। यह एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया और अवक्षेपण प्रतिक्रिया दोनों में देखा जाता है। प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं में प्रोज़ोन की उपस्थिति को इस तथ्य से समझाया गया है कि उनमें शामिल एंटीजन, एक नियम के रूप में, बहुनिर्धारक हैं, और अणु आईजीजी एंटीबॉडीजदो सक्रिय केंद्र हैं। एंटीबॉडी की अधिकता के साथ, प्रत्येक एंटीजन कण की सतह एंटीबॉडी अणुओं से ढकी होती है ताकि कोई मुक्त निर्धारक समूह न बचे, इसलिए एंटीबॉडी का दूसरा, अनबाउंड सक्रिय केंद्र किसी अन्य एंटीजन कण के साथ बातचीत नहीं कर सकता है और उन्हें एक दूसरे से बांध नहीं सकता है। एंटीजन की अधिकता होने पर दृश्यमान एग्लूटीनेट या अवक्षेप का निर्माण भी दब जाता है, जब एंटीबॉडी का एक भी मुक्त सक्रिय केंद्र नहीं रहता है, और इसलिए एंटीजन + एंटीबॉडी + एंटीजन कॉम्प्लेक्स अब बढ़ नहीं सकते हैं।

त्वरित एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाओं के लिए विकल्प। प्रतिक्रिया निष्क्रिय रक्तगुल्मऔर इसके वेरिएंट

क्लासिक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया में कॉर्पसकुलर एंटीजन का उपयोग शामिल होता है। हालाँकि, घुलनशील एंटीजन भी शामिल हो सकते हैं। इसे संभव बनाने के लिए, ऐसे एंटीजन को प्रतिरक्षात्मक रूप से निष्क्रिय कणों पर अधिशोषित किया जाता है। लेटेक्स या बेंटोनाइट के कणों को वाहक के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन वर्तमान में पशु या मानव एरिथ्रोसाइट्स का सबसे अधिक उपयोग किया जाता है, उन्हें टैनिन, फॉर्मेलिन या बेंज़िडाइन के समाधान के साथ इलाज करके उनके सोखने के गुणों में सुधार किया जाता है। लाल रक्त कोशिकाएं जिन्होंने स्वयं पर एक एंटीजन को अधिशोषित कर लिया है, उन्हें इस एंटीजन द्वारा संवेदीकृत कहा जाता है, और प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाजिसमें वे भाग लेते हैं वह एक अप्रत्यक्ष या निष्क्रिय हेमग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आईआरएचए, या आरपीएचए) है, क्योंकि लाल रक्त कोशिकाएं इसमें निष्क्रिय रूप से भाग लेती हैं।

आरपीजीए को विशेष पॉलीस्टायरीन प्लेटों में रखा जाता है जिसमें एक अर्धगोलाकार तल वाला छेद होता है। इसका उपयोग करते समय सीरोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्सइन कुओं में, परीक्षण सीरम के दो गुना तनुकरण को शारीरिक समाधान में तैयार किया जाता है, और फिर इसमें नैदानिक ​​​​एजेंट के रूप में संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन जोड़ा जाता है। चार-क्रॉस प्रणाली का उपयोग करके 37 डिग्री सेल्सियस पर 2 घंटे के ऊष्मायन के बाद परिणाम दर्ज किए जाते हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, एकत्रित लाल रक्त कोशिकाएं छेद के निचले हिस्से में बस जाती हैं और इसे उल्टे छतरी के रूप में समान रूप से ढक देती हैं। पर नकारात्मक प्रतिक्रियालाल रक्त कोशिकाएं भी जम जाती हैं, तरल पारदर्शी हो जाता है, तलछट छेद के केंद्र में एक छोटी "डिस्क" की तरह दिखती है। आरपीएचए में सीरम टिटर को इसका अंतिम तनुकरण माना जाता है, जो अभी भी "डिस्क" की उपस्थिति के महत्वपूर्ण संकेतों के बिना स्पष्ट रक्तगुल्म देता है।

आरपीजीए का उपयोग परीक्षण सामग्री में सीधे अज्ञात बैक्टीरिया, वायरस, विषाक्त पदार्थों का पता लगाने के लिए बैक्टीरियोलॉजिकल डायग्नोस्टिक्स की एक त्वरित विधि के रूप में भी किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, प्लेग रोगजनकों, स्टेफिलोकोकल एंटरोटॉक्सिन इत्यादि। आरपीजीए के इस संस्करण के साथ, एरिथ्रोसाइट्स जो उनके लिए जाने जाते हैं विशिष्टता का उपयोग प्रतिक्रिया एंटीबॉडी के एक ज्ञात घटक के रूप में किया जाता है - एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम। यदि परीक्षण सामग्री में पर्याप्त मात्रा में ज्ञात एंटीजन है, तो आरपीजीए सकारात्मक होगा।

आरपीएचए का उपयोग करने के विकल्प हैं: एंटीजन न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन (आरएनएजी), एंटीबॉडी न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन (आरएनएबी), पैसिव हेमग्लूटीनेशन इनहिबिशन रिएक्शन (पीएचए)। इन प्रतिक्रियाओं के लिए, एंटीजन और एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिक्स का उपयोग किया जाता है। दो पारस्परिक रूप से नियंत्रित यूनिडायरेक्शनल प्रतिक्रियाओं का एक साथ उपयोग किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, एक एंटीजन डायग्नोस्टिकम के साथ आरपीएचए और एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के साथ आरएनएजी।

एंटीबॉडी न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन (आरएनएबी) में वांछित एंटीजन युक्त एक सस्पेंशन को एक विशिष्ट प्रतिरक्षा सीरम के साथ मिलाया जाता है जिसमें उचित मात्रा में ज्ञात एंटीबॉडी होते हैं और दो घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। इसके बाद, एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है। मिश्रण को हिलाया जाता है और कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है। परिणामों को 3-4 घंटों के बाद और अंततः 18-24 घंटों के बाद ध्यान में रखा जाता है यदि परीक्षण सामग्री में एंटीजन होता है, तो यह एंटीबॉडी को बांध देगा (उन्हें निष्क्रिय कर देगा), और इसलिए हेमग्लूटीनेशन नहीं होगा।

एंटीजन न्यूट्रलाइजेशन रिएक्शन (आरएनएजी) उसी सिद्धांत का उपयोग करके किया जाता है। केवल इस मामले में परीक्षण सामग्री में एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। ऐसी परीक्षण सामग्री में जोड़ा गया एक विशिष्ट एंटीजन इसमें मौजूद एंटीबॉडी से बंध जाएगा, यानी, एंटीबॉडी द्वारा एंटीजन को बेअसर कर दिया जाएगा, और इसलिए एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ने पर हेमग्लूटीनेशन नहीं होगा।

जमाव प्रतिक्रिया. यह निष्क्रिय के विकल्पों में से एक है, यानी, एंटीबॉडी-वाहक कोशिकाओं द्वारा मध्यस्थता वाले ग्लास पर त्वरित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया। यह प्रतिक्रिया एक अद्वितीय गुण पर आधारित है स्टाफीलोकोकस ऑरीअस, जिसकी कोशिका भित्ति में प्रोटीन ए होता है, आईजीजी और आईजीएम के एफसी टुकड़ों से बंध जाता है। इस मामले में, एंटीबॉडी के सक्रिय केंद्र मुक्त रहते हैं और एंटीजन के विशिष्ट निर्धारकों के साथ बातचीत कर सकते हैं। उचित एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील स्टेफिलोकोसी के 2% निलंबन की एक बूंद को एक ग्लास स्लाइड पर लगाया जाता है, और अध्ययन किए जा रहे बैक्टीरिया के निलंबन की एक बूंद डाली जाती है। यदि एंटीजन एंटीबॉडी से मेल खाता है, तो एंटीबॉडी से भरे स्टेफिलोकोसी का स्पष्ट समूहन 30-60 सेकंड के भीतर होता है।

लेटेक्स एग्लूटिनेशन रिएक्शन (एलएआर)। इस निदान प्रणाली में एंटीबॉडी के वाहक छोटे मानक लेटेक्स कण हैं। प्रतिक्रिया कांच पर कुओं में माइक्रोमेथोड का उपयोग करके की जाती है। पीएएच के सफल स्टेजिंग के लिए मुख्य शर्त सिस्टम घटकों के मात्रात्मक अनुपात का कड़ाई से पालन करना है: एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील लेटेक्स तैयारी के 10 μl को परीक्षण सामग्री के 50 μl में जोड़ा जाता है। पीएएच की विशिष्टता को वाणिज्यिक परीक्षण प्रणालियों में निहित तीन नियंत्रण परीक्षणों का उपयोग करके नियंत्रित किया जाता है: ज्ञात सकारात्मक प्रतिक्रिया, परीक्षण सामग्री के साथ पीएएच-असंवेदनशील (एंटीबॉडी नहीं ले जाने वाले) लेटेक्स के लिए लेटेक्स निलंबन की स्पष्ट रूप से नकारात्मक प्रतिक्रिया और गुणवत्ता नियंत्रण। हमारे देश में, विभिन्न कण व्यास (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 माइक्रोमीटर) वाले पॉलीस्टाइरीन मोनोडिस्पर्स लेटेक्स का उपयोग विशिष्ट एंटीबॉडी के वाहक के रूप में किया जाता है। एलएजी का उपयोग परीक्षण सामग्री में सूक्ष्मजीवों या उनके एंटीजन का तेजी से पता लगाने के लिए किया जाता है।

एंटीजन का इम्यूनोमैग्नेटिक पता लगाना। कांच पर त्वरित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के विकल्पों में से एक विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ लेपित सुपरमैग्नेटिक पॉलिमर कणों के उपयोग से जुड़ा है। ऐसा एक कण सूक्ष्मजीवों की 107-108 कोशिकाओं को बांधता है, जिसके कारण संवेदनशीलता होती है यह विधि 5 सीएफयू/एमएल तक पहुंचता है। सीपीआर के साथ संयोजन में सूक्ष्मजीवों की इम्यूनोमैग्नेटिक पहचान का उपयोग किया जा सकता है।

समग्र रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (एएचए)। आपको रोगियों के रक्त में स्वतंत्र रूप से परिसंचारी एंटीजन (एंटीजेनेमिया) और एंटीबॉडी से जुड़े एंटीजन - परिसंचारी प्रतिरक्षा परिसरों (सीआईसी) दोनों का तुरंत पता लगाने की अनुमति देता है। RAHA के लिए, उपयुक्त एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग किया जाता है। रोगी के रक्त सीरम, जिसमें एंटीजन होते हैं, को संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स, जिन पर एंटीबॉडीज तय होते हैं, को जोड़ने से एरिथ्रोसाइट्स और प्रतिरक्षा परिसरों का ग्लूइंग (एग्लूटिनेशन) होता है।

एंटीग्लोबुलिन कूम्ब्स परीक्षण (आर. कूम्ब्स प्रतिक्रिया)। पूर्ण (द्विसंयोजक) एंटीबॉडी प्रत्यक्ष और निष्क्रिय एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाओं का उपयोग करके निर्धारित की जाती हैं। इन तरीकों से अपूर्ण (मोनोवैलेंट, अवरोधक) एंटीबॉडी का पता नहीं लगाया जाता है, क्योंकि, जब वे एंटीजन के साथ जुड़ते हैं, तो वे इसे अवरुद्ध कर देते हैं, लेकिन एंटीजन के बड़े समूह में एकत्रीकरण का कारण नहीं बन सकते हैं। अपूर्ण (अवरुद्ध) एंटीबॉडी वे हैं जिनमें केवल एक सक्रिय केंद्र कार्य करता है; दूसरा सक्रिय केंद्र किसी अज्ञात कारण से काम नहीं करता है। अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, एक विशेष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है (चित्र 72)। प्रतिक्रिया में शामिल हैं: रोगी का सीरम, जिसमें अपूर्ण एंटीबॉडी निर्धारित होते हैं, कॉर्पस्कुलर एंटीजन-डायग्नोस्टिकम, एंटीग्लोबुलिन सीरम जिसमें मानव ग्लोब्युलिन के एंटीबॉडी होते हैं। प्रतिक्रिया दो चरणों में होती है:

अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की परस्पर क्रिया। कोई दृश्य अभिव्यक्तियाँ नहीं हैं। पहला चरण रोगी के बचे हुए सीरम से एंटीजन को धोकर पूरा किया जाता है।

एंटीजन पर अधिशोषित अपूर्ण एंटीबॉडी के साथ मानव ग्लोब्युलिन के साथ एक जानवर के टीकाकरण के परिणामस्वरूप प्राप्त एंटीग्लोबुलिन सीरम की परस्पर क्रिया। इस तथ्य के कारण कि एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी द्विसंयोजक हैं, वे अलग-अलग एजी + कॉम्प्लेक्स के दो मोनोवैलेंट एंटीबॉडी को बांधते हैं अपूर्ण एंटीबॉडी, जो उनके चिपकने और दृश्य तलछट की उपस्थिति की ओर जाता है।

एग्लूटिनेशन एक इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान) की उपस्थिति में एंटीबॉडी के प्रभाव में रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं का चिपकना और अवक्षेपण है।चिपके जीवाणुओं (कोशिकाओं) के समूह को एग्लूटीनेट कहा जाता है। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित घटकों की आवश्यकता होती है:

1. एंटीबॉडीज (एग्लूटीनिन) जो किसी बीमार या प्रतिरक्षा जानवर के सीरम में पाए जाते हैं।

2. एंटीजन - जीवित या मारे गए रोगाणुओं, लाल रक्त कोशिकाओं या अन्य कोशिकाओं का निलंबन।

3. आइसोटोनिक (0.9%) सोडियम क्लोराइड घोल।

सेरोडायग्नोसिस के लिए एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है टाइफाइड ज्वरऔर पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट और हेडलसन प्रतिक्रिया), टुलारेमिया, आदि। एंटीबॉडी रोगी का सीरम है, और एंटीजन एक ज्ञात सूक्ष्म जीव है। रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की पहचान करते समय, उनके निलंबन का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है, और एक ज्ञात प्रतिरक्षा सीरम का उपयोग एंटीबॉडी के रूप में किया जाता है। निदान के लिए इस प्रतिक्रिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है आंतों में संक्रमण, काली खांसी, आदि।

आरए के मंचन के लिए तरीके

कांच पर अनुमानित आरए

तैनात आरए

(वॉल्यूम विधि)

जमाव प्रतिक्रिया

कांच पर खुला आरए (सीरोपहचान)

कांच पर एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया।विशिष्ट (सोखने योग्य) सीरम की दो बूंदें और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद वसा रहित ग्लास स्लाइड पर लगाई जाती है। गैर-अवशोषित सीरम को 1:5 - 1:100 के अनुपात में पहले से पतला किया जाता है। बूंदों को गिलास पर लगाना चाहिए ताकि उनके बीच दूरी बनी रहे। कल्चर को एक लूप या पिपेट के साथ कांच पर अच्छी तरह से पीस लिया जाता है, और फिर आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद और सीरम की बूंदों में से एक में मिलाया जाता है, प्रत्येक में तब तक हिलाया जाता है जब तक कि एक सजातीय निलंबन नहीं बन जाता। बिना कल्चर के सीरम की एक बूंद सीरम नियंत्रण है।

ध्यान!आप कल्चर को सीरम से आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद में स्थानांतरित नहीं कर सकते हैं, जो एंटीजन नियंत्रण के रूप में कार्य करता है। प्रतिक्रिया कमरे के तापमान पर 1-3 मिनट तक होती है। यदि सीरम नियंत्रण पारदर्शी रहता है, तो एंटीजन नियंत्रण में एक समान मैलापन देखा जाता है, और एग्लूटीनेट फ्लेक्स उस बूंद में दिखाई देते हैं जहां संस्कृति को एक स्पष्ट तरल की पृष्ठभूमि के खिलाफ सीरम के साथ मिलाया जाता है, प्रतिक्रिया परिणाम सकारात्मक माना जाता है।

डायग्नोस्टिक फिजियोलॉजिकल

सीरम + कल्चर सॉल्यूशन + कल्चर

विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (वॉल्यूम विधि)।सीरियल, अक्सर दो गुना, सीरम का पतलापन तैयार किया जाता है। विधि को वॉल्यूमेट्रिक कहा जाता है। रक्त सीरम में एंटीबॉडी टिटर निर्धारित करने के लिए, 6 ट्यूब लें। पहली परखनली में मूल सीरम तनुकरण 1:50 का 1 मिलीलीटर डालें और एक स्नातक पिपेट का उपयोग करके सभी 6 परखनलियों में 1 मिलीलीटर खारा घोल डालें। पहली टेस्ट ट्यूब 2 मिलीलीटर की मात्रा के साथ 1:100 का सीरम तनुकरण प्राप्त करेगी। पहली टेस्ट ट्यूब से 1 मिलीलीटर को दूसरी टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित करें, जहां तनुकरण 1:200 हो जाता है। तो पहले 5 टेस्ट ट्यूब (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) में सीरम के क्रमिक तनुकरण की एक श्रृंखला बनाएं। पांचवीं परखनली से 1 मिलीलीटर कीटाणुनाशक घोल में डालें। सभी 6 टेस्ट ट्यूबों में डायग्नोस्टिकम की 2 बूंदें मिलाएं। छठी ट्यूब एक कल्चर नियंत्रण है, क्योंकि इसमें केवल खारा समाधान और डायग्नोस्टिकम होता है।

संस्कृति के सहज समूहन को बाहर करने के लिए ऐसा नियंत्रण आवश्यक है। ट्यूबों को हिलाया जाता है और 2 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर थर्मोस्टेट में रखा जाता है, और फिर कमरे के तापमान पर एक दिन के लिए छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के परिणाम दर्ज किए जाते हैं। जीवन के पहले महीनों में बच्चों के सीरा के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया करते समय, एंटीबॉडी गठन की कार्यात्मक हीनता के कारण, कम एंटीबॉडी टाइटर्स की पहचान करना आवश्यक होता है, जिसे सीरम को पतला करते समय ध्यान में रखा जाता है। प्रारंभिक सीरम तनुकरण 1:25 है। पहली परखनली में 1:50 का तनुकरण प्राप्त होता है, फिर 1:100 आदि।

पर सकारात्मक परिणामपरीक्षण ट्यूबों में प्रतिक्रियाएं, अनाज या गुच्छे के रूप में चिपचिपी कोशिकाएं एक स्पष्ट तरल की पृष्ठभूमि के खिलाफ दिखाई देती हैं।एग्लूटीनेट धीरे-धीरे "छाता" के रूप में नीचे बैठ जाता है, और तलछट के ऊपर का तरल साफ हो जाता है। एंटीजन नियंत्रण समान रूप से अशांत है।

तलछट की प्रकृति के आधार पर, बारीक और मोटे दानेदार (परतदार) एग्लूटीनेशन को प्रतिष्ठित किया जाता है। ओ-सेरा के साथ काम करने पर बारीक दाने वाला एग्लूटिनेशन प्राप्त होता है। मोटे दाने वाले - जब गतिशील रोगाणु फ्लैगेलर एच-सेरा के साथ परस्पर क्रिया करते हैं। यह बारीक कणों की तुलना में तेजी से होता है, और परिणामी तलछट बहुत ढीली होती है और आसानी से टूट जाती है।

प्रतिक्रिया की तीव्रता इस प्रकार व्यक्त की गई है:

सभी कोशिकाएँ व्यवस्थित हो गई हैं, परखनली में तरल पूरी तरह से पारदर्शी है। प्रतिक्रिया का परिणाम अत्यंत सकारात्मक है;

तलछट कम होती है, तरल पदार्थ पूरी तरह साफ नहीं होता है। प्रतिक्रिया का परिणाम सकारात्मक है;

तलछट और भी कम है, तरल बादलयुक्त है। प्रतिक्रिया का परिणाम संदिग्ध है;

परखनली के तल पर हल्की सी तलछट है, तरल बादलयुक्त है। संदिग्ध प्रतिक्रिया परिणाम;

कोई तलछट नहीं है, तरल समान रूप से धुंधला है, जैसा कि एंटीजन नियंत्रण में होता है। नकारात्मक प्रतिक्रिया परिणाम

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया

(आरए)-पहचानने की एक विधि और मात्रा का ठहरावएजी और एट, नग्न आंखों को दिखाई देने वाले समूह बनाने की उनकी क्षमता के आधार पर। संक्रामक रोग विभाग में. बीमारियों या अन्य प्रयोजनों के लिए अज्ञात रोगाणुओं और कोशिकाओं की पहचान करने, रक्त और अन्य तरल पदार्थों में एब की उपस्थिति और मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। निर्धारण सिद्धांत एजी और एब के बीच बातचीत की विशिष्टता पर आधारित है और इसमें अज्ञात से ज्ञात का पता लगाना शामिल है। आरए के लिए कई विकल्प हैं: मात्रात्मक और गुणात्मक, टेस्ट ट्यूब और ग्लास, वॉल्यूमेट्रिक और ड्रॉपलेट, पारंपरिक, त्वरित और एक्सप्रेस विधियां। आरए को चरणबद्ध करने के लिए आपको चाहिए: 1) एस-का खून.बैक्टीरिया के प्रकार (var) को निर्धारित करने के संस्करण में, खरगोशों के टीकाकरण द्वारा उत्पादित औद्योगिक एग्लूटीनेटिंग परीक्षणों का उपयोग किया जाता है। एबी के प्रकार के निर्धारण वाले संस्करण में, परीक्षण से रक्त का नमूना लिया जाता है। लोग या जानवर. समाधान निष्फल और निलंबित कणों से मुक्त होना चाहिए। खारे घोल में मूल तनुकरण तैयार करें। यह इस रोग के निदान अनुमापांक से 2-4 गुना कम होना चाहिए; 2) एजी.एब प्रकार के निर्धारण के साथ प्रतिक्रिया के संस्करण में, औद्योगिक निदान किट का उपयोग किया जाता है; एजी के निर्धारण के साथ संस्करण में, डायग्नोस्टिकम को 18-20 घंटे के अगर (कम अक्सर शोरबा) परीक्षण के खारा समाधान में 1-3 बिलियन निलंबन के रूप में स्वयं तैयार किया जाता है। 1 घंटे के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में गर्म करने या फॉर्मेल्डिहाइड (अंतिम एकाग्रता 0.2%) के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे ऊष्मायन द्वारा निष्क्रिय किए गए सूक्ष्मजीव; 3) खारे घोल के रूप में इलेक्ट्रोलाइट।मंचन तकनीक वॉल्यूमेट्रिक सीरियल ट्यूबएस-की में एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए: एस-की के मुख्य तनुकरण से कार्यशील तनुकरण की कई पंक्तियाँ तैयार की जाती हैं। पंक्तियों की संख्या प्रयोग में लिए गए डायग्नोस्टिकम की संख्या पर निर्भर करती है; संख्या और कमजोर पड़ने वाले कारक संदिग्ध बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर द्वारा निर्धारित किए जाते हैं। श्रृंखला में कम से कम डायग्नोस्टिक एब टिटर के अनुरूप एक तनुकरण होना चाहिए, नीचे दो तनुकरण और इसके ऊपर दो तनुकरण होना चाहिए। उदाहरण के लिए, यदि डायग्नोस्टिक टिटर 1:100 है, तो आरए स्टेजिंग की वॉल्यूमेट्रिक विधि के साथ निम्नलिखित तनुकरण तैयार किया जाना चाहिए: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ड्रिप के साथ विधि, पहला तनुकरण (1:25) आवश्यक नहीं है, लेकिन एक और उच्च तनुकरण की आवश्यकता है - 1:800 बी। वैज्ञानिक अनुसंधानएस-कू को नकारात्मक प्रतिक्रिया का शीर्षक दिया गया है। इसे इस प्रकार पतला किया जाता है: पहले टेस्ट ट्यूब को छोड़कर, सभी टेस्ट ट्यूबों में 0.25 मिलीलीटर खारा घोल डाला जाता है, जब प्रतिक्रिया 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में की जाती है, और 0.5 मिलीलीटर जब प्रतिक्रिया 1 की मात्रा में की जाती है। एमएल. मुख्य तनुकरण का 0.25 (0.5) मिलीलीटर पहली और दूसरी परखनली में, दूसरी परखनली से, कटे हुए आयतन में डालें और प्रजनन एस-केऔर 2 गुना बढ़ाकर, 0.25 (0.5) मिली को तीसरे में स्थानांतरित किया जाता है, तीसरे से चौथे में, आदि। आखिरी तक, मात्रा को संतुलित करने के लिए कट से 0.25 (0.5) मिली हर चीज में डाला जाता है। प्रत्येक तनुकरण एक अलग पिपेट का उपयोग करके किया जाता है। यदि कई डायग्नोस्टिकम को प्रयोग में लिया जाता है, तो उनमें से प्रत्येक के लिए तनुकरण की अपनी श्रृंखला उसी तरह तैयार की जाती है। डायग्नोस्टिकम को टेस्ट ट्यूब के प्रत्येक तनुकरण में परखनली के आयतन के बराबर मात्रा में मिलाया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्येक परखनली में तनुकरण दोगुना हो जाता है। प्रयोग एस-की नियंत्रण (एस-की के मुख्य तनुकरण का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) और एजी नियंत्रण (डायग्नोस्टिकम का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) से मेल खाता है। यदि प्रयोग में कई डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है, तो प्रत्येक का अपना एंटीजन नियंत्रण होता है। टेस्ट ट्यूब वाले रैक को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है, और फिर अगले दिन तक कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद पीए को तलछट की मात्रा और सफाई की डिग्री के आधार पर दर्ज किया जाता है। तरल. इन संकेतकों का निर्धारण, एग्लूटीनेट्स की प्रकृति के आधार पर, एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर, एग्लूटीनोस्कोप में या माइक्रोस्कोप दर्पण की अवतल सतह पर नग्न आंखों से किया जाता है। लेखांकन नियंत्रण से शुरू होता है: नियंत्रण सी पारदर्शी होना चाहिए, एजी समान रूप से बादलदार होना चाहिए (ट्यूब को हिलाने के बाद)। यदि नियंत्रण अच्छे हैं, तो सभी परीक्षण ट्यूबों में एग्लूटीनेशन की उपस्थिति और डिग्री स्थापित करें, जो प्लस द्वारा निर्दिष्ट हैं: बड़ी तलछट और तरल की पूर्ण सफाई - 4 प्लस; बड़ी तलछट और तरल की अधूरी सफाई - 3 प्लस; ध्यान देने योग्य तलछट और तरल पदार्थ का ध्यान देने योग्य समाशोधन 2 फायदे हैं। इसके बाद, अनुमापांक निर्धारित किया जाता है: कम से कम 2 प्लस की एग्लूटीनेशन तीव्रता के साथ उच्चतम तनुकरण। अनुमापांक अनुसंधान एस-की की तुलना इस बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर से की जाती है। यदि अनुमापांक की जांच की जाती है। एस-की नैदानिक ​​​​मूल्य से 2 गुना कम है, प्रतिक्रिया को संदिग्ध माना जाता है; यदि अनुमापांक बराबर है निदान - कैसेकमजोर रूप से सकारात्मक; यदि यह 2-4 गुना अधिक है, तो इसे सकारात्मक माना जाता है; यदि यह 8 या अधिक गुना अधिक है, तो इसे तीव्र सकारात्मक माना जाता है। एब के व्यापक वितरण के साथ स्वस्थ लोगआरए का आकलन करने के लिए, एब टिटर में वृद्धि का उपयोग किया जाता है। सीरियल आरए में एआर के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, पंक्तियों की संख्या पहचान के लिए ली गई संख्या के अनुरूप होनी चाहिए नैदानिक ​​परीक्षण. डायग्नोस्टिक परीक्षण के मुख्य तनुकरण से, एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए की तरह ही क्रमिक दो गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। तनुकरण कारक एग्लूटीनेटिंग परीक्षण के अनुमापांक पर निर्भर करते हैं। प्रयोग में, परीक्षण के अनुमापांक के बराबर तनुकरण की उपस्थिति आवश्यक है, साथ ही इससे 2, 4, 6, 8 गुना कम है। उदाहरण के लिए, यदि नैदानिक ​​परीक्षण का अनुमापांक 1 3200 है, तो आपको तनुकरण 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 का उपयोग करना चाहिए। परीक्षण के तनुकरण में परीक्षण किए गए एजी की समान मात्रा जोड़ी जाती है, जिसके परिणामस्वरूप, तनुकरण होता है। परीक्षण 2 गुना बढ़ जाता है। परीक्षण और एजी के 2 नियंत्रण प्रयोग में जोड़े जाते हैं, यदि प्रयोग में कई एस-के शामिल हैं, तो प्रतिक्रिया के पूरा होने पर उनमें से प्रत्येक को अपने स्वयं के नियंत्रण की आवश्यकता होती है, स्टैंड को जोर से हिलाया जाता है और रखा जाता है 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में। अध्ययन के अनुपालन के बारे में निष्कर्ष निकालने के लिए प्रतिक्रिया के मूल्यांकन में विशेषताओं को ध्यान में रखा जाता है। प्रयोग में लिए गए एजी, प्रतिक्रिया के अनुमापांक को मानक नैदानिक ​​परीक्षण के कम से कम आधे अनुमापांक के अनुरूप होना चाहिए 1 4 और उससे नीचे के अनुमापांक को एक समूह प्रतिक्रिया माना जाता है ड्रिप एम.डीआरए का स्टेजिंग वॉल्यूमेट्रिक से भिन्न होता है जिसमें एस-कू को 1 मिलीलीटर की मात्रा में पतला किया जाता है, एजी का उपयोग उच्च सांद्रता (10 अरब/एमएल) में किया जाता है और इसे 1 जोड़ा जाता है - 2 एजी मिलाने के बाद दवा को परखनली में डालना अपरिवर्तित माना जाता है, अन्यथा सेटिंग, रिकॉर्डिंग और मूल्यांकन की विधि वॉल्यूमेट्रिक विधि के समान होती है

(स्रोत: माइक्रोबायोलॉजी शर्तों का शब्दकोश)

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (अक्षांश से. agglutinatio- ग्लूइंग) - इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी द्वारा कणिकाओं (बैक्टीरिया, लाल रक्त कोशिकाओं, आदि) का ग्लूइंग।

एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियास्वयं को कणों या तलछट के रूप में प्रकट करता है जिसमें कणिकाएं (उदाहरण के लिए, बैक्टीरिया) एंटीबॉडी द्वारा "एक साथ चिपकी हुई" होती हैं (चित्र 7.37)। एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग निम्न के लिए किया जाता है: रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण करना; रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण; रक्त समूह का निर्धारण.

चावल। 7.37 ए, बी. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया के साथआईजीएम-एंटीबॉडीज (ए) औरआईजीजी-एंटीबॉडीज (बी)

1. रोगी से पृथक रोगज़नक़ का निर्धारण अनुमानित प्रतिक्रियाकांच पर एग्लूटिनेशन (चित्र 7.38)। रोगी से पृथक बैक्टीरिया का एक निलंबन एग्लूटीनेटिंग सीरम (1:20 कमजोर पड़ने) की एक बूंद में जोड़ा जाता है। एक फ़्लोकुलेंट अवक्षेप बनता है।

चावल। 7.38.

एक रोगी से पृथक रोगज़नक़ के साथ एक व्यापक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (चित्र 7.39)। रोगी से पृथक बैक्टीरिया का एक निलंबन एग्लूटीनेटिंग सीरम के तनुकरण में जोड़ा जाता है।

चावल। 52

2. रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का निर्धारण
रोगी के रक्त सीरम के साथ विस्तृत एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (चित्र 7.39)। डायग्नोस्टिकम को रोगी के सीरम के तनुकरण में मिलाया जाता है।
- ओ-डायग्नोस्टिकम (गर्मी से मारे गए बैक्टीरिया, ओ-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन बारीक दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होता है।
- एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन बड़ा होता है और तेजी से होता है।
3. रक्त समूहों के निर्धारण के लिए एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियारक्त समूहों को निर्धारित करने के लिए एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग रक्त समूह एंटीजन ए (आई), बी (III) के खिलाफ प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी के साथ एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का उपयोग करके एबीओ सिस्टम (तालिका बी) स्थापित करने के लिए किया जाता है। नियंत्रण है: सीरम जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, यानी। सीरम एबी (IV) रक्त समूह; समूह ए (II), बी (III) की लाल रक्त कोशिकाओं में निहित एंटीजन। नकारात्मक नियंत्रण में एंटीजन नहीं होते हैं, अर्थात, समूह O (I) एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग किया जाता है।

तालिका 7.6. ABO रक्त समूह का निर्धारण

प्रतिक्रिया परिणाम		समूह
		संबंधित नहीं
		शोध खून
लाल रक्त कोशिकाओं के साथ	सीरम (प्लाज्मा)
मानक	मानक के साथ
सीरम