एक एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए) एक इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी के प्रभाव में रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं का आसंजन और अवक्षेपण है। परिणामी अवक्षेप को एग्लूटिनेट कहा जाता है।
आरए का उपयोग किया जाता है:
1. रोगी के रक्त सीरम (सेरोडायग्नोसिस) में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए।
2. एक रोगी (सीरोटाइपिंग) से पृथक रोगजनक सूक्ष्मजीवों की शुद्ध संस्कृति के प्रकार और सेरोवर का निर्धारण करना।
एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया का उपयोग रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है, उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार (विडाल प्रतिक्रिया), ब्रुसेलोसिस (राइट, हेडल्सन प्रतिक्रिया), टुलारेमिया, लेप्टोस्पायरोसिस और अन्य। संक्रामक रोग, साथ ही रोगी से पृथक रोगज़नक़ (आंतों में संक्रमण, काली खांसी, आदि) का निर्धारण करने के लिए। आरए का उपयोग रक्त समूह, आरएच कारक आदि निर्धारित करने के लिए किया जाता है।
प्रतिक्रिया के लिए निम्नलिखित घटकों की आवश्यकता होती है:
1. एंटीजन (एग्लूटीनोजेन) कणिकायुक्त होना चाहिए, अर्थात यह जीवित या मारे गए सूक्ष्मजीवों (डायग्नोस्टिक्स एम), एरिथ्रोसाइट्स या अन्य कोशिकाओं का निलंबन है। आमतौर पर, अगर तिरछी सतह पर उगाए गए सूक्ष्मजीवों की दैनिक संस्कृति का उपयोग किया जाता है। संस्कृति को 3 - 4 मिलीलीटर आइसोटोनिक समाधान से धोया जाता है, एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित किया जाता है, और घनत्व निर्धारित किया जाता है। निलंबन सजातीय होना चाहिए और प्रति 1 मिलीलीटर में 3 बिलियन माइक्रोबियल कोशिकाएं होनी चाहिए। मारे गए रोगाणुओं के निलंबन का उपयोग - डायग्नोस्टिकम - काम को सुविधाजनक बनाता है (उत्पादन में तैयार)।
2. एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) रोगी के सीरम (सेरोडायग्नोसिस के दौरान) या एग्लूटीनेटिंग सीरम (सीरोटाइपिंग के दौरान) में पाए जाते हैं। एग्लूटीनेटिंग सीरा खरगोशों को मारे गए जीवाणुओं से प्रतिरक्षित करके प्राप्त किया जाता है।
एग्लूटिनेटिंग टिटरसीरम को इसका उच्चतम तनुकरण कहा जाता है, जिसमें यह कुछ प्रायोगिक स्थितियों के तहत संबंधित एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया करता है।
एग्लूटिनेटिंग सीरा देशी (गैर-अवशोषित) और अधिशोषित हो सकता है। छोटे तनुकरण में देशी सीरा न केवल उन सूक्ष्मजीवों के प्रकार के साथ परस्पर क्रिया करता है जिनके साथ पशु को सीरम प्राप्त करने के लिए प्रतिरक्षित किया गया था, बल्कि संबंधित प्रकार के सूक्ष्मजीवों के साथ भी, क्योंकि उनमें समूह एंटीबॉडी (सूक्ष्मजीवों के लिए एंटीबॉडी जिनमें सामान्य एंटीजन होते हैं) होते हैं। देशी सीरा का उपयोग विस्तृत एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया (सेरोडायग्नोसिस के लिए) के लिए किया जाता है, जो न केवल प्रतिक्रिया की उपस्थिति को ध्यान में रखता है, बल्कि एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि की गतिशीलता को भी ध्यान में रखता है।
यदि समूह एंटीबॉडी को समूह एंटीजन वाले संबंधित बैक्टीरिया के साथ बातचीत करके मूल सीरम से निकाला (अवशोषित) किया जाता है, तो अधिशोषित सीरा प्राप्त होता है। अधिशोषित सीरा मोनोरिसेप्टर (या प्रकार-विशिष्ट) हो सकता है, जिसमें केवल एक एंटीजन रिसेप्टर के प्रति एंटीबॉडी होते हैं, पॉलीवलेंट सीरा कई अधिशोषित या गैर-अवशोषित सीरा के मिश्रण से बना होता है। ग्लास एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के लिए अधिशोषित सीरा का उपयोग किया जाता है।
जब जानवरों को एच-एंटीजन के साथ गतिशील बैक्टीरिया से प्रतिरक्षित किया जाता है, तो एच-एंटीबॉडी युक्त एच-एग्लूटीनेटिंग सीरा प्राप्त होता है (उदाहरण के लिए, साल्मोनेला मोनोरिसेप्टर एच-एग्लूटीनेटिंग सीरम)। ओ-एंटीजन के साथ टीकाकरण से, ओ-एंटीबॉडी युक्त ओ-एग्लूटीनेटिंग सीरा प्राप्त किया जाता है (उदाहरण के लिए, साल्मोनेला समूह अधिशोषित ओ-एग्लूटीनेटिंग सीरम, एंटीकोलेरा ओ-एग्लूटीनेटिंग सीरम)। एच- और ओ-एंटीजन के साथ टीकाकरण से, एच- और ओ-एंटीजन के साथ सीरा प्राप्त होता है।
इसके अलावा, ओ-एग्लूटीनिन एक महीन दाने वाला एग्लूटीनेट उत्पन्न करता है, और एच-एग्लूटीनिन एक मोटे दाने वाली तलछट का उत्पादन करता है।
3. इलेक्ट्रोलाइट - आइसोटोनिक NaCl समाधान (आसुत जल में तैयार 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान)।
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया करने की दो मुख्य विधियाँ हैं: कांच पर एक प्रतिक्रिया (कभी-कभी संकेतक या प्लेट प्रतिक्रिया भी कहा जाता है) और एक विस्तृत प्रतिक्रिया (टेस्ट ट्यूब में)
कांच पर एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया स्थापित करना। वसा रहित ग्लास स्लाइड पर सीरम की दो बूंदें और आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लगाई जाती है। डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम को एक तनुकरण में लिया जाता है, जो इसके अनुमापांक के आधार पर 1:10, 1:25, 1:50 या 1:100 होता है। अध्ययन के तहत सूक्ष्मजीव की संस्कृति को एक लूप का उपयोग करके सीरम की एक बूंद और आइसोटोनिक समाधान की एक बूंद में जोड़ा जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। सूक्ष्मजीवों के साथ सोडियम क्लोराइड की एक बूंद एंटीजन नियंत्रण है, सूक्ष्मजीवों के बिना सीरम की एक बूंद सीरम नियंत्रण है। आप कल्चर को सीरम वाली एक बूंद से NaCl वाली एक बूंद में स्थानांतरित नहीं कर सकते। प्रतिक्रिया कमरे के तापमान पर 1-3 मिनट तक होती है। यदि सीरम नियंत्रण स्पष्ट रहता है, एंटीजन नियंत्रण में एक समान मैलापन देखा जाता है, और एग्लूटीनेट फ्लेक्स उस बूंद में दिखाई देते हैं जहां संस्कृति सीरम के साथ मिश्रित होती है, तो परिणाम सकारात्मक माना जाता है। यदि सीरम और एंटीजन के साथ बूंद में एक समान मैलापन है, तो यह एक नकारात्मक परिणाम है। गहरे रंग की पृष्ठभूमि पर प्रतिक्रिया अधिक स्पष्ट रूप से दिखाई देती है।
सीरम
1. प्रतिजन नियंत्रण
2. सीरम नियंत्रण
13.1. एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रियाएं और उनके अनुप्रयोग
जब कोई एंटीजन डाला जाता है तो शरीर में एंटीबॉडीज बन जाती हैं। एंटीबॉडीज उस एंटीजन के पूरक हैं जो उनके संश्लेषण का कारण बना और उससे बंधने में सक्षम हैं। एंटीजन का एंटीबॉडी से बंधन दो चरणों में होता है। पहला चरण विशिष्ट है, जिसमें एंटीबॉडी के फैब टुकड़े के सक्रिय केंद्र में एंटीजेनिक निर्धारक का तेजी से बंधन होता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि बंधन वैन डेर वाल्स बलों, हाइड्रोजन और हाइड्रोफोबिक इंटरैक्शन के कारण होता है। बंधन की ताकत एंटीबॉडी की सक्रिय साइट और एंटीजन के एपिटोप के बीच स्थानिक पत्राचार की डिग्री से निर्धारित होती है। विशिष्ट चरण के बाद, एक धीमा चरण शुरू होता है - गैर-विशिष्ट, जो एक दृश्य भौतिक घटना द्वारा प्रकट होता है (उदाहरण के लिए, एग्लूटिनेशन के दौरान गुच्छे का निर्माण, आदि)।
प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं एंटीबॉडी और एंटीजन के बीच की बातचीत हैं, और ये प्रतिक्रियाएं विशिष्ट होती हैं और होती हैं उच्च संवेदनशील. इनका व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है मेडिकल अभ्यास करना. प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं की मदद से निम्नलिखित समस्याओं का समाधान किया जा सकता है:
ज्ञात एंटीजन (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम) द्वारा अज्ञात एंटीबॉडी का निर्धारण। यह कार्य तब होता है जब रोगी के रक्त सीरम (सेरोडायग्नोसिस) में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी निर्धारित करना आवश्यक होता है। एंटीबॉडी ढूँढने से आप निदान की पुष्टि कर सकते हैं;
ज्ञात एंटीबॉडी (नैदानिक सीरम) का उपयोग करके अज्ञात एंटीजन का निर्धारण। यह अध्ययन रोगी की सामग्री (सीरोटाइपिंग) से पृथक रोगज़नक़ संस्कृति की पहचान करते समय, साथ ही पता लगाते समय किया जाता है
रक्त और अन्य में रोगाणुओं और उनके विषाक्त पदार्थों के एंटीजन जैविक तरल पदार्थ. प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाएं कई प्रकार की होती हैं, जो स्टेजिंग की तकनीक और रिकॉर्ड किए गए प्रभाव में भिन्न होती हैं। ये एग्लूटिनेशन प्रतिक्रियाएं (आरए), अवक्षेपण प्रतिक्रियाएं (आरपी), पूरक (आरएससी) से जुड़ी प्रतिक्रियाएं, लेबल किए गए घटकों (आरआईएफ, एलिसा, आरआईए) का उपयोग करने वाली प्रतिक्रियाएं हैं।
13.2. एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया
एग्लूटिनेशन रिएक्शन (आरए) है प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाइलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की बातचीत, और एंटीजन एक कणिका अवस्था में है (एरिथ्रोसाइट्स, बैक्टीरिया, अधिशोषित एंटीजन के साथ लेटेक्स कण)। एग्लूटिनेशन के दौरान, कणिका प्रतिजन एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपक जाते हैं, जो एक फ्लोकुलेंट अवक्षेप के गठन से प्रकट होता है। गुच्छे का निर्माण इस तथ्य के कारण होता है कि एंटीबॉडी के दो सक्रिय केंद्र होते हैं, और एंटीजन बहुसंयोजक होते हैं, अर्थात। कई एंटीजेनिक निर्धारक हैं। आरए का उपयोग रोगी की सामग्री से पृथक रोगज़नक़ की पहचान करने के लिए किया जाता है, साथ ही रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, ब्रुसेलोसिस के लिए राइट और हेडलसन प्रतिक्रियाएं, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार के लिए विडाल प्रतिक्रिया)।
आरए का निदान करने का सबसे सरल तरीका कांच पर प्रतिक्रिया है; यह एक अनुमानित आरए है, जिसका उपयोग रोगी से पृथक रोगज़नक़ को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। जब एक प्रतिक्रिया स्थापित हो जाती है, तो डायग्नोस्टिक एग्लूटिनेटिंग सीरम को एक ग्लास स्लाइड पर (1:10 या 1:20 के तनुकरण पर) लगाया जाता है, फिर रोगी से एक कल्चर जोड़ा जाता है। यदि बूंद में फ्लोकुलेंट तलछट दिखाई दे तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है। पास में एक नियंत्रण रखा गया है: सीरम के बजाय, सोडियम क्लोराइड समाधान की एक बूंद लगाई जाती है। यदि डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग सीरम 1 को अधिशोषित नहीं किया जाता है, तो इसे पतला कर दिया जाता है (टाइटर तक - वह पतलापन जिससे एग्लूटिनेशन होना चाहिए), यानी। टेस्ट ट्यूब में वृद्धि के साथ विस्तारित आरए डालें
1 अनसोर्बड एग्लूटीनेटिंग सीरम उन संबंधित बैक्टीरिया को एग्लूटीनेट कर सकता है जिनमें सामान्य (क्रॉस-रिएक्टिंग) एंटीजन होते हैं। इसलिए वे उपयोग करते हैंअधिशोषित एग्लूटीनेटिंग सीरा, जिसमें से क्रॉस-रिएक्टिंग एंटीबॉडीज को संबंधित बैक्टीरिया द्वारा सोखकर हटा दिया गया है। ऐसे सीरा एंटीबॉडीज़ को बनाए रखते हैं जो केवल किसी दिए गए जीवाणु के लिए विशिष्ट होते हैं।
एग्लूटीनेटिंग सीरम का पतलापन, जिसमें रोगी से पृथक रोगज़नक़ के निलंबन की 2-3 बूंदें मिलाई जाती हैं। एग्लूटीनेशन को तलछट की मात्रा और टेस्ट ट्यूब में तरल के साफ होने की डिग्री के आधार पर ध्यान में रखा जाता है। प्रतिक्रिया को सकारात्मक माना जाता है यदि एग्लूटिनेशन डायग्नोस्टिक सीरम के टिटर के करीब कमजोर पड़ने पर देखा जाता है। प्रतिक्रिया नियंत्रण के साथ होती है: आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान के साथ पतला सीरम पारदर्शी होना चाहिए, उसी समाधान में रोगाणुओं का निलंबन तलछट के बिना समान रूप से बादलदार होना चाहिए।
रोगी के रक्त सीरम में रोगज़नक़ के प्रति एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए, पूर्ण पैमाने पर आरए का उपयोग किया जाता है। इसे स्थापित करते समय, रोगी के रक्त सीरम को टेस्ट ट्यूब में पतला किया जाता है और टेस्ट ट्यूब में समान मात्रा में डायग्नोस्टिकम सस्पेंशन (मारे गए रोगाणुओं का निलंबन) जोड़ा जाता है। ऊष्मायन के बाद, उच्चतम सीरम तनुकरण जिस पर एग्लूटिनेशन हुआ, निर्धारित किया जाता है, अर्थात। एक अवक्षेप (सीरम टिटर) बन गया है। इस मामले में, ओ-डायग्नोस्टिकम (गर्मी से मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोस्टेबल ओ-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया बारीक दाने वाले एग्लूटिनेशन के रूप में होती है। एच-डायग्नोस्टिकम (फॉर्मेल्डिहाइड द्वारा मारे गए बैक्टीरिया, थर्मोलैबाइल फ्लैगेलर एच-एंटीजन को बनाए रखते हुए) के साथ एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया मोटे होती है और तेजी से आगे बढ़ती है।
अप्रत्यक्ष (निष्क्रिय) रक्तगुल्म प्रतिक्रिया(आरएनजीए या आरपीजीए) आरए का एक प्रकार है। यह विधि अत्यधिक संवेदनशील है. आरएनजीए की मदद से, दो समस्याओं को हल किया जा सकता है: रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए, जिसमें एक एंटीजेनिक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स है जिस पर ज्ञात एंटीजन सोख लिए जाते हैं; परीक्षण सामग्री में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करें। इस मामले में, प्रतिक्रिया को कभी-कभी रिवर्स इनडायरेक्ट हेमग्लूटीनेशन रिएक्शन (RONHA) कहा जाता है। प्रक्रिया के दौरान, एक एंटीबॉडी एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम (उनकी सतह पर अवशोषित एंटीबॉडी वाले एरिथ्रोसाइट्स) को परीक्षण सामग्री में जोड़ा जाता है। इस प्रतिक्रिया में, लाल रक्त कोशिकाएं वाहक के रूप में कार्य करती हैं और प्रतिरक्षा समुच्चय के निर्माण में निष्क्रिय रूप से शामिल होती हैं। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, निष्क्रिय रूप से चिपकी हुई लाल रक्त कोशिकाएं छेद के निचले हिस्से को स्कैलप्ड किनारों ("छाता") के साथ एक समान परत में ढक देती हैं; एग्लूटिनेशन की अनुपस्थिति में, लाल रक्त कोशिकाएं छिद्र के केंद्रीय अवकाश में जमा हो जाती हैं, जिससे तेजी से परिभाषित किनारों के साथ एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनता है।
जमाव प्रतिक्रियाइसका उपयोग रोगज़नक़ कोशिकाओं (एंटीजन) को निर्धारित करने के लिए अधिशोषित एंटीबॉडी का उपयोग करके किया जाता है स्टाफीलोकोकस ऑरीअस,प्रोटीन ए युक्त। प्रोटीन ए इम्युनोग्लोबुलिन के एफसी टुकड़े के लिए आकर्षण रखता है। इसके लिए धन्यवाद, एंटीबॉडी एफसी टुकड़े के माध्यम से अप्रत्यक्ष रूप से स्टेफिलोकोकस से बंधते हैं, और फैब टुकड़े बाहर की ओर उन्मुख होते हैं और रोगियों से पृथक संबंधित रोगाणुओं के साथ बातचीत करने में सक्षम होते हैं। इस मामले में, गुच्छे बनते हैं।
रक्तगुल्म निषेध प्रतिक्रिया (HAI)निदान में उपयोग किया जाता है विषाणु संक्रमण, और केवल हेमग्लूटिनेटिंग वायरस के कारण होने वाले संक्रमण। इन वायरस की सतह पर एक प्रोटीन होता है - हेमाग्लगुटिनिन, जो वायरस में लाल रक्त कोशिकाओं को जोड़ने पर हेमग्लगुटिनेशन प्रतिक्रिया (एचआरए) के लिए जिम्मेदार होता है। आरटीजीए में वायरल एंटीजन को एंटीबॉडी के साथ अवरुद्ध करना शामिल है, जिसके परिणामस्वरूप वायरस लाल रक्त कोशिकाओं को एकत्रित करने की अपनी क्षमता खो देते हैं।
कॉम्ब्स प्रतिक्रिया -अपूर्ण एंटीबॉडी के निर्धारण के लिए आरए। ब्रुसेलोसिस जैसे कुछ संक्रामक रोगों में, रोगज़नक़ के प्रति अपूर्ण एंटीबॉडी रोगी के रक्त सीरम में फैलती हैं। अपूर्ण एंटीबॉडीइन्हें ब्लॉकिंग एंटीबॉडीज कहा जाता है क्योंकि इनमें पूर्ण विकसित एंटीबॉडीज की तरह एक एंटीजन-बाइंडिंग साइट होती है, दो नहीं। इसलिए, जब एक एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है, तो अपूर्ण एंटीबॉडी एंटीजन से जुड़ते हैं, लेकिन उन्हें एक साथ चिपकाते नहीं हैं। प्रतिक्रिया प्रकट करने के लिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम (मानव इम्युनोग्लोबुलिन के लिए एंटीबॉडी) जोड़ा जाता है, जिससे प्रतिक्रिया के पहले चरण में गठित प्रतिरक्षा परिसरों (एंटीजेनिक डायग्नोस्टिकम + अपूर्ण एंटीबॉडी) का समूहन हो जाएगा।
अप्रत्यक्ष कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग इंट्रावास्कुलर हेमोलिसिस वाले रोगियों में किया जाता है। इनमें से कुछ रोगियों में, अपूर्ण मोनोवैलेंट एंटी-रीसस एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है। वे विशेष रूप से आरएच पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत करते हैं, लेकिन उनके एग्लूटिनेशन का कारण नहीं बनते हैं। इसलिए, एंटीग्लोबुलिन सीरम को एंटी-आरएच एंटीबॉडी + आरएच-पॉजिटिव एरिथ्रोसाइट्स की प्रणाली में जोड़ा जाता है, जो एरिथ्रोसाइट्स के एग्लूटिनेशन का कारण बनता है। कॉम्ब्स परीक्षण का उपयोग निदान के लिए किया जाता है पैथोलॉजिकल स्थितियाँ, प्रतिरक्षा मूल के एरिथ्रोसाइट्स के इंट्रावास्कुलर लसीका से जुड़ा हुआ है, उदाहरण के लिए, आरएच संघर्ष के कारण नवजात शिशुओं की हेमोलिटिक बीमारी।
रक्त समूह निर्धारित करने के लिए आरएरक्त समूह एंटीजन ए (II), बी (III) के लिए प्रतिरक्षा सीरम एंटीबॉडी द्वारा एरिथ्रोसाइट्स के समूहन पर आधारित है। नियंत्रण सीरम है जिसमें एंटीबॉडी नहीं होते हैं, यानी। सीरम AB(IV) रक्त समूह, और समूह A(P) और B(III) के एरिथ्रोसाइट एंटीजन। समूह 0(I) लाल रक्त कोशिकाओं का उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में किया जाता है क्योंकि उनमें एंटीजन नहीं होते हैं।
आरएच कारक निर्धारित करने के लिए, एंटी-आरएच सीरा का उपयोग किया जाता है (कम से कम दो अलग-अलग श्रृंखलाएं)। यदि अध्ययन के तहत एरिथ्रोसाइट्स की झिल्ली पर एक आरएच एंटीजन है, तो इन कोशिकाओं का समूहन होता है।
13.3. शीघ्र प्रतिक्रिया
आरपी इलेक्ट्रोलाइट्स की उपस्थिति में एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की बातचीत की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, और एंटीजन घुलनशील अवस्था में होता है। वर्षा के दौरान, घुलनशील एंटीजन एंटीबॉडी द्वारा अवक्षेपित होते हैं, जो वर्षा बैंड के रूप में बादल के रूप में प्रकट होता है। जब दोनों अभिकर्मकों को समान अनुपात में मिलाया जाता है तो दृश्य अवक्षेप का निर्माण देखा जाता है। उनमें से एक की अधिकता अवक्षेपित प्रतिरक्षा परिसरों की संख्या को कम कर देती है। अवक्षेपण प्रतिक्रिया करने के विभिन्न तरीके हैं।
वलय अवक्षेपण प्रतिक्रियाछोटे व्यास वाली अवक्षेपण नलिकाओं में रखा जाता है। प्रतिरक्षा सीरम को टेस्ट ट्यूब में जोड़ा जाता है और घुलनशील एंटीजन को सावधानीपूर्वक स्तरित किया जाता है। यदि परिणाम सकारात्मक है, तो दो समाधानों के इंटरफेस पर एक दूधिया वलय बनता है। रिंग अवक्षेपण प्रतिक्रिया, जिसका उपयोग अंगों और ऊतकों में एंटीजन की उपस्थिति निर्धारित करने के लिए किया जाता है, जिसके अर्क को उबाला और फ़िल्टर किया जाता है, को थर्मोप्रेसिपिटेशन प्रतिक्रिया (थर्मोस्टेबल एंथ्रेक्स एंटीजन निर्धारित करने के लिए एस्कोली प्रतिक्रिया) कहा जाता है।
ऑचटरलोनी डबल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।यह प्रतिक्रिया अगर जेल में की जाती है। समान मोटाई की जेल की एक परत में, कुओं को एक दूसरे से एक निश्चित दूरी पर काटा जाता है और क्रमशः एंटीजन और प्रतिरक्षा सीरम से भर दिया जाता है। इसके बाद, एंटीजन और एंटीबॉडी जेल में फैल जाते हैं, एक-दूसरे से मिलते हैं और प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हैं, जो जेल में अवक्षेपित हो जाते हैं और सटीक रेखाओं के रूप में दिखाई देने लगते हैं।
पोषण। इस प्रतिक्रिया का उपयोग अज्ञात एंटीजन या एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए किया जा सकता है, और विभिन्न एंटीजन के बीच समानता का परीक्षण करने के लिए भी किया जा सकता है: यदि एंटीजन समान हैं, तो अवक्षेपण रेखाएं विलीन हो जाती हैं, यदि एंटीजन समान नहीं हैं, तो अवक्षेपण रेखाएं एक दूसरे को काटती हैं, यदि एंटीजन आंशिक रूप से हैं समान, एक स्पर बनता है।
रेडियल इम्युनोडिफ्यूजन प्रतिक्रिया।पिघले हुए अगर जेल में एंटीबॉडीज़ मिलाई जाती हैं और जेल को कांच पर एक समान परत में लगाया जाता है। जेल में कुओं को काट दिया जाता है और विभिन्न सांद्रता के एंटीजन समाधानों की एक मानक मात्रा उनमें जोड़ दी जाती है। ऊष्मायन के दौरान, एंटीजन कुएं से रेडियल रूप से फैलते हैं और, एंटीबॉडी से मिलकर, एक अवक्षेपण वलय बनाते हैं। जब तक कुएं में अतिरिक्त एंटीजन रहता है, अवक्षेपण वलय के व्यास में धीरे-धीरे वृद्धि होती रहती है। इस विधि का उपयोग परीक्षण समाधान में एंटीजन या एंटीबॉडी निर्धारित करने के लिए किया जाता है (उदाहरण के लिए, रक्त सीरम में विभिन्न वर्गों के इम्युनोग्लोबुलिन की एकाग्रता निर्धारित करने के लिए)।
इम्यूनोइलेक्ट्रोफोरेसिस।एंटीजन मिश्रण को पहले इलेक्ट्रोफोरेटिक रूप से अलग किया जाता है, फिर अवक्षेपित एंटीसीरम को प्रोटीन आंदोलन की दिशा में चलने वाले खांचे में जोड़ा जाता है। एंटीजन और एंटीबॉडी एक दूसरे की ओर जेल में फैल जाते हैं; परस्पर क्रिया करते हुए, वे धनुषाकार अवक्षेपण रेखाएँ बनाते हैं।
फ़्लोक्यूलेशन प्रतिक्रिया(रेमन के अनुसार) - एक प्रकार की अवक्षेपण प्रतिक्रिया जिसका उपयोग एंटीटॉक्सिक सीरम या टॉक्सोइड की गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। प्रतिक्रिया परीक्षण ट्यूबों में की जाती है। एक परखनली में जहां टॉक्सोइड और एंटीटॉक्सिन एक समान अनुपात में होते हैं, वहां मैलापन देखा जाता है।
13.4. पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया
एंटीबॉडीज, संबंधित एंटीजन के साथ बातचीत करके, अतिरिक्त पूरक (प्रथम प्रणाली) को बांधते हैं। पूरक निर्धारण का एक संकेतक हेमोलिटिक सीरम के साथ संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स है, यानी। लाल रक्त कोशिकाओं के प्रति एंटीबॉडी (दूसरी प्रणाली)। यदि पूरक पहली प्रणाली में तय नहीं है, अर्थात। यदि एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया नहीं होती है, तो संवेदनशील लाल रक्त कोशिकाएं पूरी तरह से नष्ट हो जाती हैं (नकारात्मक प्रतिक्रिया)। जब संवेदीकृत एरिथ्रोसाइट्स को जोड़ने के बाद पहली प्रणाली के प्रतिरक्षा परिसरों द्वारा पूरक तय किया जाता है, तो हेमोलिसिस होता है
अनुपस्थित (सकारात्मक प्रतिक्रिया)। पूरक निर्धारण प्रतिक्रिया का उपयोग संक्रामक रोगों (गोनोरिया, सिफलिस, इन्फ्लूएंजा, आदि) के निदान के लिए किया जाता है।
13.5. निराकरण प्रतिक्रिया
रोगाणुओं और उनके विषाक्त पदार्थों का मानव शरीर के अंगों और ऊतकों पर हानिकारक प्रभाव पड़ता है। एंटीबॉडीज़ इन हानिकारक एजेंटों से जुड़ने और उन्हें अवरुद्ध करने में सक्षम हैं, यानी। बेअसर करना. डायग्नोस्टिक न्यूट्रलाइजेशन प्रतिक्रिया एंटीबॉडी की इस विशेषता पर आधारित है। यह जानवरों में या संवेदनशील परीक्षण वस्तुओं (सेल कल्चर, भ्रूण) में एक एंटीजन-एंटीबॉडी मिश्रण पेश करके किया जाता है। उदाहरण के लिए, किसी रोगी की सामग्री में विषाक्त पदार्थों का पता लगाने के लिए, पहले समूह के जानवरों को रोगी की सामग्री का इंजेक्शन लगाया जाता है। दूसरे समूह के जानवरों को समान सामग्री के साथ इंजेक्शन लगाया जाता है, उचित एंटीसेरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। सामग्री में विष होने पर समूह 1 के जानवर मर जाते हैं। जानवरों का दूसरा समूह जीवित रहता है; विष का हानिकारक प्रभाव स्वयं प्रकट नहीं होता है, क्योंकि यह निष्प्रभावी हो जाता है।
13.6. लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन का उपयोग करके प्रतिक्रियाएं
13.6.1. इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया (आरआईएफ, कून्स विधि)
इस पद्धति का उपयोग एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक्स के लिए किया जाता है। इसका उपयोग माइक्रोबियल एंटीजन और एंटीबॉडी दोनों का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।
प्रत्यक्ष आरआईएफ विधि- एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की परस्पर क्रिया की एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया, और एंटीबॉडी को फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किया जाता है - एक पदार्थ जो एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश के संपर्क में आने पर एक निश्चित तरंग दैर्ध्य के प्रकाश क्वांटा का उत्सर्जन करने में सक्षम होता है। इस पद्धति की ख़ासियत गैर-विशिष्ट ल्यूमिनसेंस का पता लगाने से बचने के लिए अप्रयुक्त घटकों को हटाने की आवश्यकता है। ऐसा करने के लिए, अप्रयुक्त एंटीबॉडी को धो लें। परिणामों का मूल्यांकन एक प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया जाता है। इस तरह के ल्यूमिनसेंट सीरम से उपचारित स्मीयर में बैक्टीरिया कोशिका की परिधि के साथ एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर चमकते हैं।
अप्रत्यक्ष आरआईएफ विधिपिछले वाले की तुलना में अधिक बार उपयोग किया जाता है। यह प्रतिक्रिया दो चरणों में सम्पन्न होती है। पहले चरण में, एंटीजन परस्पर क्रिया करते हैं
प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण करते हुए, संबंधित एंटीबॉडी के साथ बातचीत करते हैं। सभी घटक जिन्होंने प्रतिक्रिया नहीं की है (अर्थात, प्रतिरक्षा परिसरों का हिस्सा नहीं हैं) को धोकर हटा दिया जाना चाहिए। दूसरे चरण में, फ्लोरोक्रोमाइज्ड एंटीग्लोबुलिन सीरम का उपयोग करके परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स का पता लगाया जाता है। नतीजतन, फ़्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए सूक्ष्म जीव + रोगाणुरोधी खरगोश एंटीबॉडी + खरगोश इम्युनोग्लोबुलिन के एंटीबॉडी का एक परिसर बनता है। परिणामों का मूल्यांकन एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके किया जाता है।
13.6.2. एंजाइम इम्यूनोपरख विधि या परख
एलिसा - सबसे आम आधुनिक पद्धति, वायरल, बैक्टीरियल, प्रोटोजोअल संक्रमण के निदान के लिए उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से एचआईवी संक्रमण के निदान के लिए, वायरल हेपेटाइटिसऔर आदि।
बहुत सारे एलिसा संशोधन हैं। ठोस-चरण गैर-प्रतिस्पर्धी एलिसा का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। यह 96-अच्छी तरह से पॉलीस्टीरीन प्लेटों (ठोस चरण) में किया जाता है। प्रतिक्रिया करते समय, प्रत्येक चरण में अप्रतिक्रिया न किए गए घटकों को धोना आवश्यक है। एंटीबॉडी का निर्धारण करते समय, परीक्षण रक्त सीरम को उन कुओं में जोड़ा जाता है जिन पर एंटीजन को अवशोषित किया जाता है, फिर एंटीग्लोबुलिन सीरम को एक एंजाइम के साथ लेबल किया जाता है। प्रतिक्रिया एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़कर की जाती है। एक एंजाइम की उपस्थिति में, सब्सट्रेट बदलता है, और एंजाइम-सब्सट्रेट कॉम्प्लेक्स का चयन किया जाता है ताकि प्रतिक्रिया में बनने वाला उत्पाद रंगीन हो। इस प्रकार, सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ, घोल के रंग में परिवर्तन देखा जाता है। एंटीजन निर्धारित करने के लिए, ठोस चरण वाहक को एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील बनाया जाता है, फिर एंटीजन में परीक्षण सामग्री (एंटीजन) और एंजाइम-लेबल सीरम को क्रमिक रूप से जोड़ा जाता है। प्रतिक्रिया होने के लिए, एंजाइम के लिए एक सब्सट्रेट जोड़ा जाता है। घोल के रंग में परिवर्तन सकारात्मक प्रतिक्रिया के साथ होता है।
13.6.3. immunoblotting
यह विधि इलेक्ट्रोफोरेसिस और एलिसा के संयोजन पर आधारित है। इम्युनोब्लॉटिंग (अंग्रेजी से ब्लॉटिंग) करते समय। दाग- स्पॉट) एंटीजन के एक जटिल मिश्रण को पहले पॉलीएक्रिलामाइड जेल में वैद्युतकणसंचलन के अधीन किया जाता है। परिणामी भिन्नात्मक विरोधी-
जीन पेप्टाइड्स को नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली में स्थानांतरित किया जाता है। फिर धब्बों को एक विशिष्ट एंटीजन के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी के साथ इलाज किया जाता है, अर्थात। एलिसा ब्लॉट करें। इम्यूनोब्लॉटिंग का उपयोग एचआईवी जैसे संक्रमण के निदान में किया जाता है।
13.6.4. प्रतिरक्षा इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी
विधि में माइक्रोस्कोपी शामिल है इलेक्ट्रॉन सूक्ष्मदर्शीवायरस (आमतौर पर अन्य सूक्ष्म जीव), इलेक्ट्रॉन-ऑप्टिकली सघन तैयारी के साथ लेबल किए गए उचित प्रतिरक्षा सीरम के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है, उदाहरण के लिए फेरिटिन, एक लौह युक्त प्रोटीन।
13.7. फ़्लो साइटॉमेट्री
लेजर साइटोफ्लोरोमेट्री के आधार पर रक्त कोशिकाओं को विभेदित किया जाता है। ऐसा करने के लिए, वांछित कोशिकाओं को सीडी एंटीजन के लिए फ्लोरोसेंट मोनोक्लोनल एंटीबॉडी से रंग दिया जाता है। रक्त के नमूने को लेबल किए गए एंटीबॉडी से उपचारित करने के बाद, एक पतली ट्यूब के माध्यम से पारित किया जाता है और एक लेजर बीम को इसके माध्यम से पारित किया जाता है, जो फ्लोरोक्रोम को चमकने के लिए उत्तेजित करता है। प्रतिदीप्ति तीव्रता कोशिका सतह पर एंटीजन के घनत्व से संबंधित होती है और इसे फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब का उपयोग करके मात्रात्मक रूप से मापा जा सकता है। प्राप्त परिणाम हिस्टोग्राम में परिवर्तित हो जाते हैं।
फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग निर्धारित करने के लिए किया जाता है प्रतिरक्षा स्थिति(लिम्फोसाइटों की मुख्य आबादी की सामग्री, इंट्रासेल्युलर और बाह्यकोशिकीय साइटोकिन्स की सामग्री, एनके कोशिकाओं की कार्यात्मक गतिविधि, फागोसाइटोसिस गतिविधि, आदि)।
इम्यूनोमाइक्रोबायोलॉजिकल अध्ययन
कई समस्याओं को हल करने के लिए इम्यूनोलॉजिकल तरीकों का उपयोग किया जाता है:
1. स्थिति का आकलन प्रतिरक्षा तंत्रमात्रात्मक निर्धारण द्वारा व्यक्ति (प्रतिरक्षा स्थिति) और कार्यात्मक विशेषताएँप्रतिरक्षा प्रणाली की कोशिकाएं और उनके उत्पाद।
2. मानव ऊतकों की संरचना और विशेषताओं का निर्धारण: रक्त समूह, आरएच कारक, प्रत्यारोपण एंटीजन।
3. एंटीबॉडी टाइटर्स (सेरोडायग्नोसिस) का पता लगाने और स्थापित करने, शरीर में रोगज़नक़ एंटीजन की पहचान करने और इन एंटीजन के लिए सेलुलर प्रतिक्रियाओं का निर्धारण करके संक्रामक रोगों और उनके प्रतिरोध का निदान।
4. मनुष्यों और जानवरों के शरीर से पृथक बैक्टीरिया और वायरस की संस्कृतियों की सेरॉइड पहचान।
5. मानव शरीर और अंदर का पता लगाना बाहरी वातावरणएंटीजेनिक या हैप्टेन गुणों वाला कोई भी पदार्थ (हार्मोन, एंजाइम, जहर, दवाएं, दवाएं, आदि)।
6. इम्युनोपैथोलॉजिकल स्थितियों, एलर्जी, प्रत्यारोपण और एंटीट्यूमर प्रतिक्रियाओं की पहचान।
एंटीजन और एंटीबॉडी के बीच परस्पर क्रिया की प्रक्रिया सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएंदो चरणों में होता है:
1) विशिष्ट- इंटरेक्शन चरण जिसमें एंटीबॉडी (पैराटोप्स) और एंटीजन एपिटोप्स के सक्रिय केंद्रों का एक पूरक संयोजन होता है। आमतौर पर यह चरण कुछ सेकंड या मिनट तक चलता है;
2) अविशिष्ट- अभिव्यक्ति चरण, विशेषता बाहरी संकेतप्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण. यह चरण कई मिनटों से लेकर कई घंटों तक विकसित हो सकता है।
एंटीजन के साथ एंटीबॉडी की इष्टतम विशिष्ट बातचीत एक आइसोटोनिक समाधान में होती है जिसका पीएच तटस्थ के करीब होता है। इन विट्रो प्रणाली में एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया कई घटनाओं की घटना के साथ हो सकती है
· समूहन,
· वर्षण,
· लसीका.
बाहरी अभिव्यक्तियाँप्रतिक्रियाएँ एंटीजन के भौतिक-रासायनिक गुणों (कण आकार, भौतिक राज्य), एंटीबॉडी का वर्ग और प्रकार (पूर्ण और अपूर्ण), साथ ही प्रयोगात्मक स्थितियां (मध्यम स्थिरता, नमक एकाग्रता, पीएच, तापमान)।
एंटीजन और एंटीबॉडी की बहुसंयोजकता नग्न आंखों को दिखाई देने वाले समुच्चय के गठन को सुनिश्चित करती है। यह नेटवर्क निर्माण के सिद्धांत के अनुसार होता है, जिसके अनुसार अन्य एंटीबॉडी और एंटीजन अणु क्रमिक रूप से परिणामी एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से जुड़े होते हैं। परिणामस्वरूप, नेटवर्क संरचनाएं बनती हैं, जो अवक्षेपित समुच्चय में बदल जाती हैं। प्रतिक्रिया की प्रकृति और गंभीरता एंटीजन और एंटीबॉडी के मात्रात्मक अनुपात पर निर्भर करती है। सबसे तीव्र प्रतिक्रियाएँ तब होती हैं जब अभिकर्मक समान अनुपात में होते हैं।
शर्तजाली गठन (नेटवर्क) - प्रत्येक एंटीजन अणु के लिए तीन से अधिक एंटीजेनिक निर्धारक और प्रत्येक एंटीबॉडी अणु के लिए दो सक्रिय केंद्रों की उपस्थिति। एंटीजन अणु जाली नोड हैं, और एंटीबॉडी अणु कनेक्टिंग लिंक हैं। एंटीजन और एंटीबॉडी सांद्रता के इष्टतम अनुपात (समतुल्यता क्षेत्र) का क्षेत्र, जब तलछट गठन के बाद सतह पर तैरनेवाला में न तो मुक्त एंटीजन और न ही मुक्त एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है।
अवक्षेपित होने वाले समुच्चय तब बनते हैं जब एंटीजन पूर्ण एंटीबॉडी के साथ संयोजित होते हैं। अपूर्ण एंटीबॉडी (मोनोवैलेंट) नेटवर्क संरचनाओं और बड़े समुच्चय के निर्माण का कारण नहीं बनते हैं। ऐसे एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उपयोग करें विशेष विधियाँएंटीग्लोबुलिन (कूम्ब्स प्रतिक्रिया) के उपयोग पर आधारित।
सीरोलॉजिकल परीक्षण, उनकी उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता के कारण, का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है मात्रा का ठहरावएंटीजन और एंटीबॉडी. प्रतिक्रियाओं में इम्युनोरिएजेंट की मात्रा टिटर द्वारा व्यक्त की जाती है - सीरम या एंटीजन का अधिकतम तनुकरण जिस पर प्रतिक्रिया अभी भी देखी जाती है।
सूक्ष्मजीवविज्ञानी और प्रतिरक्षाविज्ञानी प्रयोगशालाओं में सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का उपयोग दो उद्देश्यों के लिए किया जाता है:
1) एक ज्ञात एंटीबॉडी (प्रतिरक्षा निदान सीरम) का उपयोग करके सामान्य रूप से सूक्ष्मजीवों, विषाक्त पदार्थों, एंटीजन की सीरोपहचान के लिए,
2) सेरोडायग्नोसिस के लिए - एक ज्ञात एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) का उपयोग करके बैक्टीरिया, वायरल और कम अक्सर अन्य संक्रामक रोगों के लिए रोगी के रक्त सीरम में एंटीबॉडी की प्रकृति का निर्धारण करना।
एंटीजन के सामान्य, प्रजाति और प्रकार को निर्धारित करने के लिए, ज्ञात प्रतिरक्षा निदान सीरा की आवश्यकता होती है। वे मारे गए या जीवित सूक्ष्मजीवों, उनके क्षय उत्पादों, बेअसर या देशी विषाक्त पदार्थों की बढ़ती खुराक में जानवरों (आमतौर पर खरगोशों) को बार-बार प्रशासन द्वारा प्राप्त किए जाते हैं। पशुओं के टीकाकरण के एक निश्चित चक्र के बाद, पशु का बड़े पैमाने पर रक्तपात या पूर्ण रक्तस्राव किया जाता है। एक बाँझ कंटेनर में एकत्र किए गए रक्त को पहले थक्का जमने के लिए 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 4 - 6 घंटे के लिए थर्मोस्टेट में रखा जाता है, फिर एक दिन के लिए आइसबॉक्स में रखा जाता है। परिणामी पारदर्शी सीरम को एक बाँझ कंटेनर में चूसा जाता है, संरक्षक जोड़े जाते हैं, एंटीबॉडी टिटर निर्धारित किया जाता है, बाँझपन की जाँच की जाती है और ampoules में डाला जाता है।
उपयोग किया जाता है गैर adsorbedऔर अधिशोषितडायग्नोस्टिक सीरा. अनअवशोषित सीरम में होता है उच्च अनुमापांकएंटीबॉडी, लेकिन समूह (क्रॉस) प्रतिक्रिया देने में सक्षम हैं।
अधिशोषित सीरा को क्रिया की सख्त विशिष्टता की विशेषता होती है (वे केवल एक समजात प्रतिजन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं)। केवल एक विशिष्ट एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी युक्त सीरा कहलाते हैं मोनोरिसेप्टर.
वे फ़्लोरोक्रोम, एंजाइम और रेडियोआइसोटोप लेबल वाले सीरम का भी उत्पादन करते हैं, जो उच्च स्तर की सटीकता के साथ एंटीजन के निशान का भी पता लगाना संभव बनाता है।
जीवित या मारे गए जीवाणुओं के निलंबन, उनके टूटने वाले उत्पादों, विषाक्त पदार्थों और वायरस का उपयोग सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं में एंटीजन (डायग्नोस्टिकम) के रूप में किया जाता है। कुछ मामलों में, सूक्ष्मजीवों और जानवरों के ऊतकों से अर्क या रासायनिक रूप से पृथक एंटीजन का उपयोग किया जाता है।
सभी इम्यूनोमाइक्रोबायोलॉजिकल तरीकों को 3 समूहों में विभाजित किया जा सकता है:
1) पर आधारित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन का सीधा संपर्क(एग्लूटिनेशन, अवक्षेपण, रक्तगुल्म, स्थिरीकरण, आदि की घटना);
2) पर आधारित एंटीबॉडी के साथ एंटीजन की मध्यस्थ अंतःक्रिया(प्रतिक्रियाएँ अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म, जमाव, लेटेक्स एग्लूटिनेशन, कार्बन एग्लोमरेशन, बेंटोनाइट एग्लूटिनेशन, पूरक निर्धारण, आदि);
3) उपयोग करना लेबल किए गए एंटीबॉडी या एंटीजन(फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी विधि, एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट और रेडियोइम्यूनोएसेज़ और अन्य तरीके)।
समूहन प्रतिक्रियाएं
इन प्रतिक्रियाओं में कणों के रूप में एंटीजन (माइक्रोबियल कोशिकाएं, लाल रक्त कोशिकाएं और अन्य कणिका एंटीजन) शामिल होते हैं, जो एंटीबॉडी द्वारा एक साथ चिपक जाते हैं और अवक्षेपित हो जाते हैं।
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया करने के लिए(आरए) तीन घटकों की आवश्यकता है: 1) एंटीजन (एग्लूटीनोजेन);
2) एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन)
3) इलेक्ट्रोलाइट (आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान)।
अनुमानित एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया (आरए)
एक संकेतक, या प्लेट, आरए को कमरे के तापमान पर एक ग्लास स्लाइड पर रखा जाता है। ऐसा करने के लिए, ग्लास पर 1:10 से 1:20 के तनुकरण पर सीरम की एक बूंद और अलग से आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान की एक नियंत्रण बूंद लगाने के लिए पाश्चर पिपेट का उपयोग करें। कालोनियों या बैक्टीरिया की दैनिक संस्कृति (डायग्नोस्टिकम की एक बूंद) को दोनों बैक्टीरियोलॉजिकल लूप में पेश किया जाता है और अच्छी तरह मिलाया जाता है। प्रतिक्रियाओं को कुछ मिनटों के बाद दृष्टिगत रूप से ध्यान में रखा जाता है, कभी-कभी एक आवर्धक लेंस (x5) का उपयोग करके। सकारात्मक आरए के साथ, सीरम ड्रॉप में बड़े और छोटे गुच्छे की उपस्थिति देखी जाती है; नकारात्मक आरए के साथ, सीरम समान रूप से धुंधला रहता है।
विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रियाकिसी रोगी में विशिष्ट एंटीबॉडी के अनुमापांक की पहचान करने के लिए।
सेरोडायग्नोसिस के लिए पूर्ण विकसित आरए रोगियों के सीरम में बनाया जाता है। इसे 1:50 - 1:100 से 1:800 या 1:1600 तक आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल में भी पतला किया जाता है। चूंकि निचले सीरम टाइटर्स में सामान्य एग्लूटीनिन पाया जा सकता है। स्वस्थ लोगया किसी अन्य निदान (डायग्नोस्टिक टिटर) वाले मरीज़। इस प्रतिक्रिया में एंटीजन के रूप में, डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है - ज्ञात निलंबन, आमतौर पर मारे गए बैक्टीरिया के।
आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल का 1 मिलीलीटर पहले एग्लूटिनेशन ट्यूबों में डाला जाता है। उनमें से पहले में 1:100 पतला सीरम का 1 मिलीलीटर जोड़ा जाता है, और इसे मिलाने के बाद, 1 मिलीलीटर दूसरे में, दूसरे से तीसरे में स्थानांतरित किया जाता है, आदि। 1 मिलीलीटर में 3 बिलियन माइक्रोबियल निकायों वाले जीवाणु निलंबन की 1-2 बूंदों को सेरा के परिणामी दो गुना तनुकरण (1:100 से 1:1600 या अधिक) में जोड़ा जाता है। ट्यूबों को हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37°C पर 2 घंटे के लिए रखा जाता है, फिर 24 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर रखा जाता है।
विस्तृत एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया को प्रत्येक टेस्ट ट्यूब का क्रमिक रूप से मूल्यांकन करके, नियंत्रण वाले से शुरू करके, हल्के झटकों के साथ ध्यान में रखा जाता है। नियंत्रण ट्यूबों में कोई एग्लूटीनेशन नहीं होना चाहिए। एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की तीव्रता को निम्नलिखित संकेतों से चिह्नित किया जाता है: ++++ - पूर्ण एग्लूटिनेशन (एक पूर्ण पारदर्शी तरल में एग्लूटिनेट फ्लेक्स); +++ - अधूरा एग्लूटीनेशन (थोड़ा ओपलेसेंट तरल में गुच्छे); ++ - आंशिक एग्लूटिनेशन (गुच्छे स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं, तरल थोड़ा बादलदार है); + - कमजोर, संदिग्ध एग्लूटिनेशन - तरल बहुत बादलदार है, इसमें मौजूद गुच्छे को अलग करना मुश्किल है; - - एग्लूटीनेशन का अभाव (तरल समान रूप से बादलदार होता है)।
सीरम टिटर को इसका अंतिम तनुकरण माना जाता है, जिसमें एग्लूटिनेशन की तीव्रता का आकलन दो प्लस (++) से कम नहीं होता है।
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया
(आरए) नग्न आंखों को दिखाई देने वाले एग्लोमेरेट्स बनाने की उनकी क्षमता के आधार पर, एजी और एबी की पहचान और मात्रा निर्धारित करने की एक विधि है। संक्रामक रोग विभाग में. बीमारियों या अन्य प्रयोजनों के लिए अज्ञात रोगाणुओं और कोशिकाओं की पहचान करने, रक्त और अन्य तरल पदार्थों में एब की उपस्थिति और मात्रा निर्धारित करने के लिए उपयोग किया जाता है। निर्धारण सिद्धांत एजी और एबी के बीच बातचीत की विशिष्टता पर आधारित है और इसमें अज्ञात से ज्ञात की खोज करना शामिल है। आरए के लिए कई विकल्प हैं: मात्रात्मक और गुणात्मक, टेस्ट ट्यूब और ग्लास, वॉल्यूमेट्रिक और ड्रॉपलेट, पारंपरिक, त्वरित और एक्सप्रेस विधियां। आरए को चरणबद्ध करने के लिए आपको चाहिए: 1) एस-का खून.बैक्टीरिया के प्रकार (var) को निर्धारित करने के संस्करण में, खरगोशों के टीकाकरण द्वारा उत्पादित औद्योगिक एग्लूटीनेटिंग परीक्षणों का उपयोग किया जाता है। एबी के प्रकार के निर्धारण वाले संस्करण में, परीक्षण से रक्त का नमूना लिया जाता है। लोग या जानवर. समाधान निष्फल और निलंबित कणों से मुक्त होना चाहिए। खारे घोल में मूल तनुकरण तैयार करें। यह इस रोग के निदान अनुमापांक से 2-4 गुना कम होना चाहिए; 2) एजी.एब प्रकार के निर्धारण के साथ प्रतिक्रिया के संस्करण में, औद्योगिक निदान किट का उपयोग किया जाता है; एजी के निर्धारण के साथ संस्करण में, डायग्नोस्टिकम को 18-20 घंटे के अगर (कम अक्सर शोरबा) परीक्षण के खारा समाधान में 1-3 बिलियन निलंबन के रूप में स्वयं तैयार किया जाता है। 1 घंटे के लिए 70 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में गर्म करने या फॉर्मेल्डिहाइड (अंतिम एकाग्रता 0.2%) के साथ 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे ऊष्मायन द्वारा निष्क्रिय किए गए सूक्ष्मजीव; 3) खारे घोल के रूप में इलेक्ट्रोलाइट।मंचन तकनीक वॉल्यूमेट्रिक सीरियल ट्यूबएस-की में एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए: एस-की के मुख्य तनुकरण से कार्यशील तनुकरण की कई पंक्तियाँ तैयार की जाती हैं। पंक्तियों की संख्या प्रयोग में लिए गए डायग्नोस्टिकम की संख्या पर निर्भर करती है; संख्या और कमजोर पड़ने वाले कारक संदिग्ध बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर द्वारा निर्धारित किए जाते हैं। श्रृंखला में कम से कम डायग्नोस्टिक एब टिटर के अनुरूप एक तनुकरण होना चाहिए, नीचे दो तनुकरण और इसके ऊपर दो तनुकरण होना चाहिए। उदाहरण के लिए, यदि डायग्नोस्टिक टिटर 1:100 है, तो आरए स्टेजिंग की वॉल्यूमेट्रिक विधि के साथ निम्नलिखित तनुकरण तैयार किया जाना चाहिए: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; ड्रिप के साथ विधि, पहला तनुकरण (1:25) आवश्यक नहीं है, लेकिन एक और उच्च तनुकरण की आवश्यकता है - 1:800 बी। वैज्ञानिक अनुसंधानएस-कू को शीर्षक दिया गया है नकारात्मक प्रतिक्रिया. इसे इस प्रकार पतला किया जाता है: पहले टेस्ट ट्यूब को छोड़कर, सभी टेस्ट ट्यूबों में 0.25 मिलीलीटर खारा घोल डाला जाता है, जब प्रतिक्रिया 0.5 मिलीलीटर की मात्रा में की जाती है, और 0.5 मिलीलीटर जब प्रतिक्रिया 1 की मात्रा में की जाती है। एमएल. मुख्य तनुकरण का 0.25 (0.5) मिलीलीटर पहली और दूसरी परखनली में, दूसरी परखनली से, कटे हुए आयतन में डालें और प्रजनन एस-केऔर 2 गुना बढ़ाकर, 0.25 (0.5) मिली को तीसरे में स्थानांतरित किया जाता है, तीसरे से चौथे में, आदि। आखिरी तक, मात्रा को संतुलित करने के लिए कट से 0.25 (0.5) मिली हर चीज में डाला जाता है। प्रत्येक तनुकरण एक अलग पिपेट का उपयोग करके किया जाता है। यदि कई डायग्नोस्टिकम को प्रयोग में लिया जाता है, तो उनमें से प्रत्येक के लिए तनुकरण की अपनी श्रृंखला उसी तरह तैयार की जाती है। डायग्नोस्टिकम को टेस्ट ट्यूब के प्रत्येक तनुकरण में परखनली के आयतन के बराबर मात्रा में मिलाया जाता है, जिसके परिणामस्वरूप प्रत्येक परखनली में तनुकरण दोगुना हो जाता है। प्रयोग एस-की नियंत्रण (एस-की के मुख्य तनुकरण का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) और एजी नियंत्रण (डायग्नोस्टिकम का 0.25 - 0.5 मिली और खारा घोल की समान मात्रा) से मेल खाता है। यदि प्रयोग में कई डायग्नोस्टिकम का उपयोग किया जाता है, तो प्रत्येक का अपना एंटीजन नियंत्रण होता है। टेस्ट ट्यूब वाले रैक को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 4 घंटे के लिए रखा जाता है, और फिर अगले दिन तक कमरे के तापमान पर छोड़ दिया जाता है, जिसके बाद पीए को तलछट की मात्रा और सफाई की डिग्री के आधार पर दर्ज किया जाता है। तरल. इन संकेतकों का निर्धारण, एग्लूटीनेट्स की प्रकृति के आधार पर, एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर, एग्लूटीनोस्कोप में या माइक्रोस्कोप दर्पण की अवतल सतह पर नग्न आंखों से किया जाता है। लेखांकन नियंत्रण से शुरू होता है: नियंत्रण सी पारदर्शी होना चाहिए, एजी समान रूप से बादलदार होना चाहिए (ट्यूब को हिलाने के बाद)। यदि नियंत्रण अच्छे हैं, तो सभी परीक्षण ट्यूबों में एग्लूटीनेशन की उपस्थिति और डिग्री स्थापित करें, जो प्लस द्वारा निर्दिष्ट हैं: बड़ी तलछट और तरल की पूर्ण सफाई - 4 प्लस; बड़ी तलछट और तरल की अधूरी सफाई - 3 प्लस; ध्यान देने योग्य तलछट और तरल पदार्थ का ध्यान देने योग्य समाशोधन 2 फायदे हैं। इसके बाद, अनुमापांक निर्धारित किया जाता है: कम से कम 2 प्लस की एग्लूटीनेशन तीव्रता के साथ उच्चतम तनुकरण। अनुमापांक अनुसंधान एस-की की तुलना इस बीमारी के डायग्नोस्टिक टिटर से की जाती है। यदि अनुमापांक की जांच की जाती है। एस-की नैदानिक मूल्य से 2 गुना कम है, प्रतिक्रिया को संदिग्ध माना जाता है; यदि अनुमापांक बराबर है निदान - कैसेकमजोर रूप से सकारात्मक; यदि यह 2-4 गुना अधिक है, तो इसे सकारात्मक माना जाता है; यदि यह 8 या अधिक गुना अधिक है, तो इसे तीव्र सकारात्मक माना जाता है। जब स्वस्थ लोगों में एबी व्यापक होता है, तो आरए का आकलन करने के लिए एबी टिटर में वृद्धि का उपयोग किया जाता है। सीरियल आरए में एआर के प्रकार को निर्धारित करने के लिए, पंक्तियों की संख्या पहचान के लिए ली गई संख्या के अनुरूप होनी चाहिए नैदानिक परीक्षण. डायग्नोस्टिक परीक्षण के मुख्य तनुकरण से, एब टिटर निर्धारित करने के लिए आरए की तरह ही क्रमिक दो गुना तनुकरण की एक श्रृंखला तैयार की जाती है। तनुकरण कारक एग्लूटीनेटिंग परीक्षण के अनुमापांक पर निर्भर करते हैं। प्रयोग में, परीक्षण के अनुमापांक के बराबर तनुकरण की उपस्थिति आवश्यक है, साथ ही इससे 2, 4, 6, 8 गुना कम है। उदाहरण के लिए, यदि नैदानिक परीक्षण का अनुमापांक 1 3200 है, तो आपको तनुकरण 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 का उपयोग करना चाहिए। परीक्षण के तनुकरण में परीक्षण किए गए एजी की समान मात्रा जोड़ी जाती है, जिसके परिणामस्वरूप, तनुकरण होता है। परीक्षण 2 गुना बढ़ जाता है। परीक्षण और एजी के 2 नियंत्रण प्रयोग में जोड़े जाते हैं, यदि प्रयोग में कई एस-के शामिल हैं, तो प्रतिक्रिया के पूरा होने पर उनमें से प्रत्येक को अपने स्वयं के नियंत्रण की आवश्यकता होती है, स्टैंड को जोर से हिलाया जाता है और रखा जाता है 37 डिग्री सेल्सियस पर थर्मोस्टेट में। अध्ययन के अनुपालन के बारे में निष्कर्ष निकालने के लिए प्रतिक्रिया के मूल्यांकन में विशेषताओं को ध्यान में रखा जाता है। प्रयोग में लिए गए एजी, प्रतिक्रिया के अनुमापांक को मानक नैदानिक परीक्षण के कम से कम आधे अनुमापांक के अनुरूप होना चाहिए 1 4 और उससे नीचे के अनुमापांक को एक समूह प्रतिक्रिया माना जाता है ड्रिप एम.डीआरए का स्टेजिंग वॉल्यूमेट्रिक से भिन्न होता है जिसमें एस-कू को 1 मिलीलीटर की मात्रा में पतला किया जाता है, एजी का उपयोग उच्च सांद्रता (10 अरब/एमएल) में किया जाता है और इसे 1 जोड़ा जाता है - 2 एजी मिलाने के बाद दवा को परखनली में डालना अपरिवर्तित माना जाता है, अन्यथा, सूत्रीकरण, रिकॉर्डिंग और मूल्यांकन की विधि वॉल्यूमेट्रिक विधि के समान है
(स्रोत: माइक्रोबायोलॉजी शर्तों का शब्दकोश)
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया.
एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया एक इलेक्ट्रोलाइट की उपस्थिति में एंटीबॉडी के प्रभाव में माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाओं (एरिथ्रोसाइट्स) का चिपकना और अवक्षेपण है। प्रतिक्रिया का दृश्य प्रभाव (एग्लूटिनेशन घटना) एग्लूटिनेट नामक अवक्षेप का निर्माण होता है।
इस प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है सेरोडायग्नोसिसऔर सीरोपहचान. आरए का उपयोग सेरोडायग्नोसिस (रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाना) के लिए किया जाता है। टाइफाइड ज्वरऔर पैराटाइफाइड(विडाल प्रतिक्रिया), ब्रूसिलोसिस(राइट की प्रतिक्रिया) तुलारेमिया और लेप्टोस्पायरोसिस. आरए का उपयोग सीरोआइडेंटिफिकेशन (रोगी से पृथक रोगज़नक़ के प्रकार का निर्धारण) के लिए किया जाता है आंतों में संक्रमण, काली खांसी, हैजाऔर आदि।
अवयवप्रतिक्रियाएँ:
1. ए एन्टिजेन (एग्लूटीनोजेन) –ये संपूर्ण (नष्ट नहीं) माइक्रोबियल या अन्य कोशिकाएं हैं ( आणविका, अघुलनशील प्रतिजन). एग्लूटीनोजेन्स- यह एक निलंबन है जीवितया मारे गएमाइक्रोबियल कोशिकाएँ या कोई अन्य कोशिकाएँ। एंटीजन या तो अज्ञात या ज्ञात हो सकते हैं। एक अज्ञात एग्लूटीनोजेन रोगी के शरीर से अलग किया गया एक माइक्रोबियल कल्चर है जिसे निर्धारित करने की आवश्यकता है। ज्ञात प्रतिजन - डायग्नोस्टिकम– निदान औषधि – मृतकों का निलंबनरोगाणुओं ज्ञात प्रजातियाँखारे घोल में. यह निलंबन बादल छाए रहेंगे (अपारदर्शी), क्योंकि माइक्रोबियल कोशिकाएं घुलती नहीं हैं, बल्कि बरकरार रहती हैं। रोगियों के रक्त सीरम में अज्ञात एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक ज्ञात एग्लूटीनोजेन का उपयोग किया जाएगा।
2. एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन)- रक्त सीरम में पाया जाता है। एंटीबॉडीज़ अज्ञात या ज्ञात भी हो सकती हैं। निर्धारित किए जाने वाले अज्ञात एंटीबॉडी रक्त सीरम में हैं बीमार आदमी. ज्ञात एंटीबॉडीज पाए जाते हैं प्रतिरक्षा डायग्नोस्टिक सीरा जिन्हें कहा जाता है एकत्रित सीरा. इनका उपयोग सीरो-पहचान के लिए किया जाता है, अर्थात। एक अज्ञात एंटीजन का निर्धारण करने के लिए - एक प्रकार का माइक्रोबियल कल्चर।
3. इलेक्ट्रोलाइट- 0.9% सोडियम क्लोराइड घोल।
आरए के मंचन के लिए तरीके.
1. अनुमानित (लैमेलर) आरए- कांच पर किया गया। एक ग्लास स्लाइड पर सीरम की 2 बूंदें और आइसोटोनिक घोल की 1 बूंद लगाएं। एक माइक्रोबियल कल्चर को सीरम की एक बूंद में और एक लूप में आइसोटोनिक घोल की एक बूंद में डाला जाता है और मिलाया जाता है। आइसोटोनिक घोल की एक बूंद कीटाणुओं के साथ – प्रतिजन नियंत्रण, एक बूंद रोगाणु मुक्त सीरम – एंटीबॉडी नियंत्रण, एक बूंद रोगाणुओं के साथ सीरम – अनुभव।यदि सीरम में माइक्रोबियल एंटीजन के अनुरूप एंटीबॉडी होते हैं जो इसके साथ मिश्रित होते हैं, तो एंटीबॉडी और एंटीजन विशेष रूप से एक-दूसरे से बंध जाएंगे और 1-3 मिनट के बाद एग्लूटीनेट फ्लेक्स परीक्षण ड्रॉप में दिखाई देंगे। एंटीजन नियंत्रण धुंधला होना चाहिए और एंटीबॉडी नियंत्रण स्पष्ट होना चाहिए। प्रतिक्रिया के परिणाम एग्लूटीनेट फ्लेक्स की उपस्थिति के आधार पर दर्ज किए जाते हैं . यदि गुच्छे बाहर गिरते हैं, तो प्रतिक्रिया सकारात्मक होती है, अर्थात। एक एंटीजन एक एंटीबॉडी से मेल खाता है और एंटीजन का उपयोग एंटीबॉडी को निर्धारित करने के लिए किया जा सकता है या इसके विपरीत। यदि बादल छाए रहें तो प्रतिक्रिया नकारात्मक होती है।
2. विस्तृत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया -परीक्षण ट्यूबों में किया गया। सबसे पहले, 1:50 से 1:1600 तक बीमार व्यक्ति के रक्त सीरम का 2 गुना पतलाकरण तैयार करें। 1 मिली आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड घोल को 6 टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है। 1:50 के तनुकरण पर रोगी के रक्त सीरम का 1 मिलीलीटर पहली टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है, मिश्रित किया जाता है और 1:100 का तनुकरण प्राप्त किया जाता है, फिर 1:100 के तनुकरण का 1 मिलीलीटर दूसरे परखनली में स्थानांतरित किया जाता है। और 1:200 का तनुकरण प्राप्त होता है, आदि। एंटीजन और सीरम नियंत्रण के लिए दो ट्यूब रखी गई हैं। सीरम नियंत्रण में 1:50 के तनुकरण पर केवल सीरम जोड़ें, एंटीजन नियंत्रण में - केवल एंटीजन। अन्य सभी टेस्ट ट्यूबों में 0.1 मिली एंटीजन - डायग्नोस्टिकम (O- या H-) मिलाएं और सभी टेस्ट ट्यूबों को 18-20 घंटों के लिए 37°C पर थर्मोस्टेट में रखें। प्रतिक्रिया के परिणाम प्रकृति, बनने वाले अवक्षेप (एग्लूटीनेट) की मात्रा और मैलापन की डिग्री के अनुसार दर्ज किए जाते हैं। लेखांकन केवल नियंत्रण में निम्नलिखित परिणामों के साथ किया जाता है: सीरम नियंत्रण - पारदर्शी, एंटीजन नियंत्रण - बादल। O-एंटीबॉडीज़ एक बारीक कण वाला अवक्षेप देते हैं। एच-एंटीबॉडीज़ - मोटे दाने वाले। अंतिम टेस्ट ट्यूब के आधार पर जिसमें एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया अभी भी दिखाई दे रही है, यह स्थापित किया गया है डायग्नोस्टिक टिटर.
रोगों का सेरोडायग्नोसिस करते समय, न केवल किसी विशेष रोगज़नक़ के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाना महत्वपूर्ण है, बल्कि उनकी मात्रा की पहचान करना भी महत्वपूर्ण है, अर्थात। ऐसा एंटीबॉडी टिटर स्थापित करें जब हम इस रोगज़नक़ के कारण होने वाली बीमारी की उपस्थिति के बारे में बात कर सकें। इस अनुमापांक को डायग्नोस्टिक अनुमापांक कहा जाता है। उदाहरण के लिए, टाइफाइड बुखार का निदान करने के लिए, आपको 1:400 के एंटीबॉडी टिटर की पहचान करने की आवश्यकता है, लेकिन इससे कम नहीं। युग्मित सीरा में एंटीबॉडी में वृद्धि का पता लगाने से और भी सटीक परिणाम प्राप्त होते हैं, रोग की शुरुआत में और 3-5 या अधिक दिनों के बाद रोगी का सीरम एकत्र किया जाता है। यदि एंटीबॉडी टिटर कम से कम 4 गुना बढ़ जाता है, तो हम वर्तमान बीमारी के बारे में बात कर सकते हैं।
