Rumah Pulpitis Reaksi aglutinasi diagnostik. Reaksi aglutinasi

Pulpitis

Reaksi aglutinasi diagnostik. Reaksi aglutinasi

Reaksi aglutinasi didasarkan pada interaksi spesifik antibodi (aglutinin) dengan seluruh mikroba atau sel lain. Akibat interaksi tersebut terbentuklah partikel-partikel aglomerat yang mengendap (aglutinasi). Bakteri, protozoa, jamur, ragi, rickettsia, eritrosit dan sel lain, baik hidup maupun mati, dapat berpartisipasi dalam reaksi aglutinasi. Reaksi terjadi dalam dua fase: yang pertama adalah kombinasi spesifik antigen dan antibodi, yang kedua adalah non-spesifik, yaitu pembentukan aglutinat yang terlihat. Pengendapan aglutinat terjadi dengan adanya elektrolit, seperti natrium klorida. Mikroorganisme dalam aglutinasi tetap hidup, namun kehilangan mobilitasnya.

Reaksi aglutinasi banyak digunakan untuk diagnosis serologis penyakit menular dan penentuan struktur antigenik mikroba yang diisolasi. Untuk mengetahui struktur antigenik suatu patogen yang diisolasi dari tubuh pasien atau pembawa, digunakan serum imun spesifik yang diperoleh dengan mengimunisasi hewan (kelinci, keledai, domba) dengan mikroorganisme tertentu. Identifikasi mikroba dilakukan melalui reaksi aglutinasi pada kaca dengan serum teradsorpsi atau monoreseptor atau dalam tabung reaksi dengan serum aglutinasi spesifik. Serum yang teradsorpsi hanya mengandung antibodi terhadap antigen spesifik mikroba tertentu, dan serum monoreseptor hanya mengandung antibodi terhadap satu antigen spesifik patogen.

Serum spesies mengandung antibodi terhadap semua antigen mikroba tertentu.

Apakah kultur mikroorganisme yang diisolasi itu milik spesies ini ditentukan dengan aglutinasi dengan serum yang diketahui terhadap titer antibodi yang tertera pada label ampul serum. Titer antibodi serum dianggap sebagai pengenceran terakhir, di mana aglutinasi kultur mikroba yang digunakan untuk mengimunisasi hewan masih diamati. Serum teradsorpsi dan monoreseptor biasanya digunakan murni dalam reaksi aglutinasi gelas.

Saat menentukan adanya antibodi dalam serum darah pasien, serum diencerkan dengan larutan natrium klorida isotonik mulai dari pengenceran 1:50 hingga 1:800 atau lebih. Suspensi mikroba hidup atau mati ditambahkan ke setiap pengenceran. Sediaan yang mengandung mikroba yang dibunuh oleh panas atau formaldehida disebut diagnostikum. Diagnosticum yang diperoleh dengan memanaskan kultur mikroorganisme hanya mengandung antigen somatik. Ketika hanya formaldehida yang digunakan, mikroba mempertahankan antigen flagellarnya.

Jika terdapat antibodi dalam darah pasien, diagnostik yang diambil dalam reaksi akan saling menempel dan endapan (aglutinasi) terbentuk pada dua tabung reaksi. Dalam hal ini, hasil reaksi aglutinasi dianggap positif. Dalam tabung kontrol yang ditambahkan larutan natrium klorida isotonik dan diagnostikum, suspensi mikroba harus homogen (reaksi aglutinasi negatif).

Hasil reaksi aglutinasi pada beberapa penyakit, seperti leptospirosis, hanya diperhitungkan secara mikroskopis dalam bidang pandang gelap mikroskop (mikroaglutinasi). Untuk membuat diagnosis serologis suatu penyakit, pertimbangkan penyakit diagnostik. Biasanya setara dengan pengenceran serum 1:100 atau 1:200.

Antibodi dalam serum darah pasien dapat dideteksi menggunakan reaksi aglutinasi pada kasus demam tifoid dan demam paratifoid (reaksi Vidal), brucellosis (reaksi Wright), tularemia, dll.
Reaksi Castellani. Untuk beberapa penyakit menular atau imunisasi dengan mikroorganisme yang mengandung antigen golongan, dalam serum darah, selain antibodi spesifik jenis tertentu, juga muncul antibodi golongan. Dalam hal ini, spesies bakteri terkait akan diaglutinasi oleh serum yang dihasilkan.

Castellani mengusulkan metode adsorpsi antibodi kelompok dari serum imun, berdasarkan penghilangannya dengan bantuan mikroorganisme dari spesies terkait yang memiliki antigen kelompok tetapi tidak memiliki antigen spesifik. Kultur mikroorganisme tersebut yang ditambahkan ke dalam serum akan mengadsorpsi antibodi dari kelompok nonspesifik, dan setelah penghilangan kompleks antigen-antibodi melalui sentrifugasi, hanya imunoglobulin spesifik yang tersisa di dalam serum. Sera yang diproses menurut metode Castellani dapat digunakan dalam reaksi aglutinasi yang sangat spesifik.

Aglutinasi adalah perekatan bakteri sebagai akibat interaksi AT tertentu dengan mereka. Untuk melaksanakan RA diperlukan tiga komponen: 1) AG (aglutinogen); 2) AT (aglutinin); 3) larutan elektrolit (larutan natrium klorida isotonik). Hanya antigen sel (bakteri, sel darah merah, partikel lateks yang mengandung antigen) yang mengambil bagian dalam reaksi aglutinasi.

Reaksi aglutinasi pada kaca. Teteskan pada kaca objek bebas minyak dengan menggunakan pipet. serum diagnostik(pengenceran serum 1:10 - 1:20). Dengan menggunakan loop bakteriologis, kultur murni mikroorganisme yang diteliti diambil dari permukaan agar-agar miring, dipindahkan ke setetes serum dan dicampur. Hasil reaksi diperhitungkan dengan mata telanjang setelah 3-5 menit. Jika reaksi positif, munculnya serpihan (besar atau kecil) terlihat pada setetes serum, terlihat jelas dengan latar belakang gelap saat slide diguncang. Jika terjadi reaksi negatif, cairan tetap keruh secara merata.

Reaksi aglutinasi dalam tabung reaksi. 1 ml larutan fisiologis ditambahkan ke deretan tabung reaksi. Serum darah yang diuji dengan volume yang sama ditambahkan ke tabung reaksi pertama. Pengenceran serum dua kali lipat secara berurutan disiapkan (titrasi serum), setelah itu 2 tetes suspensi bakteri yang tidak aktif (diagnosticum) ditambahkan ke setiap tabung reaksi. Tabung ditempatkan dalam termostat pada suhu 37 °C selama 2 jam. Reaksi berlangsung dengan pembentukan serpihan kecil, tidak terlihat dengan mata telanjang, sehingga hasilnya dicatat dengan sedikit perbesaran dalam alat khusus - aglutinoskop. Intensitas aglutinasi diperhitungkan menurut sistem "empat plus": aglutinasi lengkap - 4+, aglutinasi parsial - 3+ atau 2+, hasil yang dipertanyakan - +. Pengenceran terakhir di mana aglutinasi 2+ diamati diambil sebagai titer antibodi dalam serum uji.

Reaksi aglutinasi dalam tabung reaksi (reaksi aglutinasi ekstensif) dilakukan untuk mengetahui titer antibodi terhadap patogen demam tifoid dan paratifoid (reaksi Vidal), brucellosis (reaksi Wright), dan tifus (reaksi Weigl).

Aglutinasi (dari bahasa Latin aglutinatio - perekatan) adalah perekatan (sambungan) partikel sel darah pembawa antigen (sel utuh, partikel lateks, dll.) dengan molekul antibodi spesifik dengan adanya elektrolit, yang berakhir dengan pembentukan serpihan atau sedimen. (mengaglutinasi) terlihat dengan mata telanjang. Sifat sedimen bergantung pada sifat antigen: bakteri berflagel menghasilkan sedimen flokulan kasar, bakteri berflagel dan nonkapsular menghasilkan sedimen berbutir halus, dan bakteri berkapsul menghasilkan sedimen berserabut. Perbedaan dibuat antara aglutinasi langsung, di mana antigen bakteri atau sel lain, misalnya eritrosit, secara langsung berpartisipasi dalam interaksi dengan antibodi spesifik; dan tidak langsung, atau pasif, di mana sel bakteri atau eritrosit, atau partikel lateks tidak membawa dirinya sendiri, tetapi pembawa antigen (atau antibodi) asing yang diserap di dalamnya untuk mengidentifikasi antibodi (atau antigen) yang spesifik terhadap bakteri tersebut. Reaksi aglutinasi terutama melibatkan antibodi yang termasuk dalam kelas IgG dan IgM. Ini terjadi dalam dua fase: pertama, interaksi spesifik dari pusat aktif antibodi dengan determinan antigen terjadi; tahap ini dapat terjadi tanpa adanya elektrolit dan tidak disertai perubahan yang terlihat sistem bereaksi. Untuk tahap kedua - pembentukan aglutinat - diperlukan adanya elektrolit yang tereduksi muatan listrik kompleks antigen + antibodi dan mempercepat proses perekatannya. Fase ini diakhiri dengan pembentukan aglutinat.

Reaksi aglutinasi dilakukan pada pelat kaca atau karton halus, atau dalam tabung aglutinasi steril. Reaksi aglutinasi (langsung dan pasif) pada kaca biasanya digunakan sebagai metode dipercepat deteksi antibodi spesifik dalam serum pasien (misalnya, dengan brucellosis) atau untuk identifikasi serologis patogen. Dalam kasus terakhir, serum diagnostik yang dimurnikan dengan baik (diadsorpsi) biasanya hanya mengandung antibodi monoreseptor atau satu set antibodi terhadap berbagai antigen. Keuntungan yang tidak diragukan lagi dari reaksi aglutinasi pada kaca adalah kesederhanaan pelaksanaannya dan fakta bahwa reaksi ini memakan waktu beberapa menit atau bahkan detik, karena kedua komponen digunakan dalam bentuk pekat. Namun, ini hanya memiliki nilai kualitatif dan kurang sensitif dibandingkan tabung reaksi. Reaksi aglutinasi ekstensif dalam tabung reaksi memberikan hasil yang lebih akurat, karena memungkinkan Anda menentukan kandungan kuantitatif antibodi dalam serum (menetapkan titernya) dan, jika perlu, mencatat fakta peningkatan titer antibodi, yang memiliki nilai diagnostik. . Untuk mengatur reaksi, serum yang diencerkan dengan cara tertentu dengan larutan NaCl 0,85% dan suspensi diagnostik standar (atau kultur uji) dengan volume yang sama (biasanya 0,5 ml) yang mengandung 1 miliar bakteri dalam 1 ml ditambahkan ke dalamnya. tabung aglutinasi. Hasil reaksi aglutinasi dicatat pertama kali setelah 2 jam inkubasi tabung pada suhu 37 °C dan terakhir setelah 20-24 jam berdasarkan dua kriteria: keberadaan dan ukuran endapan serta derajat transparansi cairan supernatan. Penilaian dilakukan menurut sistem empat silang. Reaksinya tentu disertai dengan kontrol serum dan antigen. Dalam kasus di mana reaksi aglutinasi terperinci dalam tabung reaksi dilakukan untuk identifikasi serologis patogen, reaksi tersebut memiliki nilai diagnostik jika reaksi dinilai positif ketika serum diagnostik diencerkan hingga setidaknya setengah titernya.

Harus diingat bahwa ketika mencampurkan larutan antigen dan antibodi homolog, manifestasi reaksi aglutinasi yang terlihat tidak selalu diamati. Endapan hanya terbentuk pada perbandingan optimal tertentu dari kedua komponen reaksi. Di luar batas ini, dengan kelebihan antigen atau antibodi yang signifikan, tidak ada reaksi yang diamati. Fenomena ini disebut “fenomena prozon”. Hal ini diamati baik dalam reaksi aglutinasi maupun dalam reaksi pengendapan. Munculnya prozon dalam reaksi imun dijelaskan oleh fakta bahwa antigen yang terlibat di dalamnya, pada umumnya, bersifat polideterminan, dan molekulnya antibodi IgG memiliki dua pusat aktif. Dengan kelebihan antibodi, permukaan setiap partikel antigen ditutupi dengan molekul antibodi sehingga tidak ada lagi gugus determinan bebas yang tersisa, sehingga pusat aktif antibodi kedua yang tidak terikat tidak dapat berinteraksi dengan partikel antigen lain dan mengikatnya satu sama lain. Pembentukan aglutinat atau endapan yang terlihat juga terhambat ketika terdapat kelebihan antigen, ketika tidak ada satu pun pusat antibodi aktif bebas yang tersisa, sehingga kompleks antigen + antibodi + antigen tidak dapat lagi membesar.

Pilihan untuk reaksi aglutinasi yang dipercepat. Reaksi hemaglutinasi pasif dan variannya

Reaksi aglutinasi klasik melibatkan penggunaan antigen sel darah. Namun, antigen terlarut juga mungkin terlibat. Untuk memungkinkan hal ini, antigen tersebut diadsorpsi pada partikel yang inert secara imunologis. Partikel lateks atau bentonit dapat digunakan sebagai pembawa, tetapi saat ini eritrosit hewan atau manusia paling sering digunakan, meningkatkan sifat penyerapnya dengan mengolahnya dengan larutan tanin, formalin, atau benzidin. Sel darah merah yang telah mengadsorpsi antigen pada dirinya sendiri disebut peka terhadap antigen ini, dan reaksi imun di mana mereka berpartisipasi adalah reaksi hemaglutinasi tidak langsung atau pasif (IRHA, atau RPHA), karena sel darah merah berpartisipasi di dalamnya secara pasif.

RPGA ditempatkan di pelat polistiren khusus dengan lubang di bagian bawah berbentuk setengah bola. Saat menggunakannya untuk diagnostik serologis Dalam sumur ini, pengenceran dua kali lipat serum uji disiapkan dalam larutan fisiologis, dan kemudian suspensi eritrosit peka ditambahkan ke dalamnya sebagai agen diagnostik. Hasilnya dicatat setelah 2 jam inkubasi pada suhu 37°C menggunakan sistem empat silang. Dengan reaksi positif, sel darah merah yang diaglutinasi mengendap di dasar lubang dan menutupinya secara merata dalam bentuk payung terbalik. Pada reaksi negatif sel darah merah pun mengendap, cairan menjadi bening, endapannya tampak seperti “cakram” kecil di tengah lubang. Titer serum pada RPHA dianggap sebagai pengenceran terakhirnya, yang masih memberikan hemaglutinasi yang nyata tanpa tanda-tanda signifikan adanya “cakram”.

RPGA juga dapat digunakan sebagai metode percepatan diagnostik bakteriologis untuk mendeteksi secara langsung bakteri, virus, racun yang tidak diketahui pada bahan uji, misalnya patogen wabah, enterotoksin stafilokokus, dll. Dengan versi RPGA ini, eritrosit yang telah teradsorpsi dikenal karena kandungannya. spesifisitas digunakan sebagai komponen reaksi yang diketahui antibodi - antibodi eritrosit diagnostikum. Jika bahan uji mengandung antigen yang diketahui dalam jumlah yang cukup, RPGA akan positif.

Pilihan penggunaan RPHA adalah: reaksi netralisasi antigen (RNAg), reaksi netralisasi antibodi (RNAb), reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (PHA). Untuk reaksi ini, diagnostik antigen dan antibodi eritrosit digunakan. Dua reaksi searah yang saling mengontrol dapat digunakan secara bersamaan, misalnya RPHA dengan diagnostik antigen dan RNAg dengan diagnostik antibodi eritrosit.

Reaksi netralisasi antibodi (RNAb) terdiri dari pencampuran suspensi yang mengandung antigen yang diinginkan dengan serum imun spesifik yang mengandung antibodi yang diketahui dalam volume yang sesuai dan diinkubasi pada suhu 37 °C selama dua jam. Setelah itu, diagnostik eritrosit antigenik ditambahkan. Campuran dikocok dan dibiarkan pada suhu kamar. Hasilnya diperhitungkan setelah 3-4 jam dan terakhir setelah 18-24 jam, jika bahan uji mengandung antigen maka akan mengikat antibodi (menetralisirnya), sehingga tidak terjadi hemaglutinasi.

Reaksi netralisasi antigen (RNAg) dilakukan dengan menggunakan prinsip yang sama. Hanya dalam kasus ini antibodi terdeteksi pada bahan uji. Antigen spesifik yang ditambahkan pada bahan uji tersebut akan berikatan dengan antibodi yang terkandung di dalamnya, yaitu akan terjadi netralisasi antigen oleh antibodi, sehingga hemaglutinasi tidak akan terjadi bila antibodi eritrosit diagnostikum ditambahkan.

Reaksi koaglutinasi. Ini adalah salah satu varian dari reaksi pasif, yaitu reaksi aglutinasi yang dipercepat pada kaca yang dimediasi oleh sel pembawa antibodi. Reaksi ini didasarkan pada sifat unik Stafilokokus aureus, yang mengandung protein A di dinding selnya, berikatan dengan fragmen Fc IgG dan IgM. Dalam hal ini, pusat antibodi aktif tetap bebas dan dapat berinteraksi dengan faktor penentu antigen tertentu. Setetes suspensi stafilokokus 2%, yang disensitisasi dengan antibodi yang sesuai, diteteskan pada kaca objek, dan setetes suspensi bakteri yang diteliti ditambahkan. Jika antigen cocok dengan antibodi, aglutinasi yang jelas dari stafilokokus yang mengandung antibodi terjadi dalam waktu 30-60 detik.

Reaksi aglutinasi lateks (LAR). Pembawa antibodi dalam sistem diagnostik ini adalah partikel lateks standar kecil. Reaksi dilakukan dengan menggunakan metode mikro dalam sumur pada kaca. Kondisi utama untuk keberhasilan pementasan PAH adalah kepatuhan yang ketat terhadap rasio kuantitatif komponen sistem: 10 μl sediaan lateks yang disensitisasi dengan antibodi ditambahkan ke 50 μl bahan uji. Spesifisitas PAH dikontrol menggunakan tiga uji kontrol yang terdapat dalam sistem pengujian komersial: diketahui reaksi positif, jelas reaksi negatif dan kontrol kualitas suspensi lateks untuk lateks yang tidak peka terhadap PAH (tidak membawa antibodi) dengan bahan uji. Di negara kita, lateks polistiren monodispersi dengan diameter partikel berbeda (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 mikron) digunakan sebagai pembawa antibodi spesifik. LAG digunakan untuk deteksi cepat mikroorganisme atau antigennya dalam bahan uji.

Deteksi antigen secara imunomagnetik. Salah satu pilihan untuk mempercepat reaksi aglutinasi pada kaca dikaitkan dengan penggunaan partikel polimer supermagnetik yang dilapisi dengan antibodi spesifik. Salah satu partikel tersebut mengikat hingga 107-108 sel mikroorganisme, karena sensitivitasnya metode ini mencapai 5 CFU/ml. Deteksi imunomagnetik mikroorganisme dapat digunakan dalam kombinasi dengan CPR.

Reaksi hemaglutinasi agregat (AHA). Memungkinkan Anda dengan cepat mendeteksi dalam darah pasien baik antigen yang bersirkulasi bebas (antigenemia) maupun antigen yang terkait dengan antibodi - kompleks imun yang bersirkulasi (CIC). Untuk RAHA, sel darah merah yang disensitisasi dengan antibodi yang sesuai digunakan. Penambahan serum darah pasien, yang mengandung antigen, ke eritrosit peka tempat antibodi difiksasi, menyebabkan perekatan (aglutinasi) eritrosit dan kompleks imun.

Tes Antiglobulin Coombs (reaksi R. Coombs). Antibodi penuh (divalen) ditentukan menggunakan reaksi aglutinasi langsung dan pasif. Antibodi yang tidak lengkap (monovalen, pemblokiran) tidak terdeteksi dengan metode ini, karena ketika bergabung dengan antigen, antibodi tersebut memblokirnya, tetapi tidak dapat menyebabkan agregasi antigen menjadi konglomerat besar. Antibodi yang tidak lengkap (pemblokiran) adalah antibodi yang hanya memiliki satu pusat aktif yang berfungsi; pusat aktif kedua tidak berfungsi karena alasan yang tidak diketahui. Untuk mendeteksi antibodi yang tidak lengkap, reaksi Coombs khusus digunakan (Gbr. 72). Reaksinya meliputi: serum pasien, di mana antibodi yang tidak lengkap ditentukan, antigen-diagnosticum sel darah, serum antiglobulin yang mengandung antibodi terhadap globulin manusia. Reaksi terjadi dalam dua tahap:

Interaksi antigen dengan antibodi tidak lengkap. Tidak ada manifestasi yang terlihat. Tahap pertama diselesaikan dengan mencuci antigen dari sisa serum pasien.

Interaksi serum antiglobulin diperoleh sebagai hasil imunisasi hewan dengan globulin manusia dengan antibodi tidak lengkap yang teradsorpsi pada antigen. Karena antibodi antiglobulin bersifat bivalen, antibodi tersebut mengikat dua antibodi monovalen dari kompleks AG+ yang terpisah antibodi yang tidak lengkap, yang menyebabkan perekatannya dan munculnya sedimen yang terlihat.

Aglutinasi adalah perekatan dan pengendapan mikroba atau sel lain di bawah pengaruh antibodi dengan adanya elektrolit (larutan natrium klorida isotonik). Kelompok bakteri (sel) yang direkatkan disebut aglutinasi. Komponen-komponen berikut diperlukan untuk reaksi aglutinasi:

1. Antibodi (aglutinin) yang terdapat pada serum hewan yang sakit atau kebal.

2. Antigen - suspensi mikroba hidup atau mati, sel darah merah atau sel lainnya.

3. Larutan natrium klorida isotonik (0,9%).

Uji aglutinasi untuk serodiagnosis digunakan untuk demam tifoid dan demam paratifoid (reaksi Vidal), brucellosis (reaksi Wright dan Heddleson), tularemia, dll. Antibodinya adalah serum pasien, dan antigennya adalah mikroba yang diketahui. Saat mengidentifikasi mikroba atau sel lain, suspensinya digunakan sebagai antigen, dan serum imun yang diketahui digunakan sebagai antibodi. Reaksi ini banyak digunakan untuk diagnosis infeksi usus, batuk rejan, dll.

Metode pementasan RA

Perkiraan RA pada kaca

RA yang dikerahkan

(metode volume)

Reaksi koaglutinasi

RA yang terbuka pada kaca (seroidentifikasi)

Reaksi aglutinasi pada kaca. Dua tetes serum spesifik (teradsorpsi) dan setetes larutan natrium klorida isotonik diteteskan pada kaca objek bebas lemak. Serum yang tidak terserap telah diencerkan sebelumnya dengan perbandingan 1:5 - 1:100. Tetesan harus dioleskan pada kaca sehingga ada jarak di antara keduanya. Kultur ditumbuk seluruhnya di atas kaca dengan loop atau pipet, dan kemudian ditambahkan ke setetes larutan natrium klorida isotonik dan ke salah satu tetes serum, diaduk masing-masing sampai terbentuk suspensi yang homogen. Setetes serum tanpa kultur merupakan kontrol serum.

Perhatian! Anda tidak dapat memindahkan kultur dari serum ke setetes larutan natrium klorida isotonik, yang berfungsi sebagai kontrol antigen. Reaksi berlangsung pada suhu kamar selama 1-3 menit. Jika kontrol serum tetap transparan, kekeruhan seragam diamati pada kontrol antigen, dan serpihan aglutinat muncul di tetesan tempat kultur dicampur dengan serum dengan latar belakang cairan bening, maka hasil reaksi dianggap positif.

Fisiologis Diagnostik

serum + larutan kultur + kultur

Reaksi aglutinasi terperinci (metode volume). Serial, paling sering dua kali lipat, pengenceran serum disiapkan. Metode ini disebut volumetrik. Untuk mengetahui titer antibodi dalam serum darah, diambil 6 tabung. Tuang 1 ml serum asli pengenceran 1:50 ke dalam tabung reaksi pertama dan tambahkan 1 ml larutan garam ke dalam keenam tabung reaksi menggunakan pipet ukur. Tabung reaksi pertama akan menghasilkan pengenceran serum 1:100 dengan volume 2 ml. Pindahkan 1 ml dari tabung reaksi pertama ke tabung reaksi kedua, hingga pengencerannya menjadi 1:200. Jadi buatlah serangkaian pengenceran serum secara serial pada 5 tabung reaksi pertama (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Dari tabung reaksi kelima, tuangkan 1 ml ke dalam larutan desinfektan. Tambahkan 2 tetes diagnostikum ke dalam 6 tabung reaksi. Tabung keenam merupakan kontrol kultur, karena hanya berisi larutan garam dan diagnostikum.

Kontrol semacam itu diperlukan untuk mengecualikan aglutinasi spontan pada kultur. Tabung dikocok dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 2 jam, kemudian didiamkan selama sehari pada suhu kamar, setelah itu dicatat hasil reaksi aglutinasinya. Saat melakukan reaksi aglutinasi dengan serum anak-anak di bulan-bulan pertama kehidupan, karena inferioritas fungsional pembentukan antibodi, perlu untuk mengidentifikasi titer antibodi yang lebih rendah, yang diperhitungkan saat mengencerkan serum. Pengenceran serum awal adalah 1:25. Pada tabung reaksi pertama diperoleh pengenceran 1:50, kemudian 1:100, dst.

Pada hasil positif reaksi dalam tabung reaksi, sel-sel lengket berbentuk butiran atau serpihan terlihat dengan latar belakang cairan bening. Aglutinat secara bertahap mengendap di dasar dalam bentuk “payung”, dan cairan di atas sedimen menjadi jernih. Kontrol antigennya keruh secara seragam.

Berdasarkan sifat sedimennya, aglutinasi berbutir halus dan berbutir kasar (bersisik) dibedakan. Aglutinasi berbutir halus diperoleh saat bekerja dengan O-sera. Berbutir kasar - ketika mikroba motil berinteraksi dengan serum H flagela. Ini terjadi lebih cepat daripada butiran halus, dan sedimen yang dihasilkan sangat gembur dan mudah pecah.

Intensitas reaksi dinyatakan sebagai berikut:

Semua sel telah mengendap, cairan dalam tabung reaksi benar-benar transparan. Hasil reaksinya sangat positif;

Ada lebih sedikit sedimen, tidak ada pembersihan cairan secara menyeluruh. Hasil reaksinya positif;

Sedimennya lebih sedikit lagi, cairannya lebih keruh. Hasil reaksinya diragukan;

Terdapat sedikit endapan di dasar tabung reaksi, cairannya keruh. Hasil reaksi yang dipertanyakan;

Tidak ada sedimen, cairan keruh seragam, seperti pada kontrol antigen. Hasil reaksi negatif

Reaksi aglutinasi Reaksi aglutinasi

(RA) - metode mengidentifikasi dan hitungan Ag dan At, berdasarkan kemampuannya membentuk aglomerat yang terlihat dengan mata telanjang. Di departemen penyakit menular. penyakit atau untuk tujuan lain digunakan untuk mengidentifikasi mikroba dan sel yang tidak diketahui, untuk menentukan keberadaan dan jumlah Ab dalam darah dan cairan lainnya. Prinsip penentuan didasarkan pada kekhususan interaksi antara Ag dan Ab dan terdiri dari mencari yang diketahui dari yang tidak diketahui. Ada banyak pilihan untuk RA: kuantitatif dan kualitatif, metode tabung reaksi dan kaca, volumetrik dan tetesan, konvensional, dipercepat dan cepat. Untuk mementaskan RA, Anda memerlukan: 1) s-ka darah. Pada varian penentuan jenis (var) bakteri, digunakan uji aglutinasi industri yang dilakukan dengan mengimunisasi kelinci. Pada varian dengan penentuan tipe Ab, sampel darah diambil dari tes tersebut. manusia atau hewan. Solusinya harus steril dan bebas dari partikel tersuspensi. Siapkan pengenceran dasar dalam larutan garam. Ini harus 2-4 kali lebih rendah dari titer diagnostik penyakit ini; 2) Agustus. Dalam versi reaksi dengan penentuan tipe Ab, kit diagnostik industri digunakan; dalam varian dengan penentuan Ag, diagnostik dibuat sendiri dalam bentuk suspensi 1-3 miliar dalam larutan garam uji agar-agar (lebih jarang kaldu) selama 18-20 jam. mikroba diinaktivasi dengan pemanasan dalam penangas air pada suhu 70°C selama 1 jam atau dengan inkubasi 24 jam pada suhu 37°C dengan formaldehida (konsentrasi akhir 0,2%); 3) elektrolit dalam bentuk larutan garam. Teknik pementasan tabung serial volumetrik RA untuk menentukan titer Ab pada s-ki: beberapa baris pengenceran kerja dibuat dari pengenceran utama s-ki. Jumlah baris tergantung pada jumlah diagnostik yang dimasukkan ke dalam percobaan; jumlah dan faktor pengenceran ditentukan oleh titer diagnostik penyakit yang dicurigai. Seri tersebut paling sedikit harus mengandung pengenceran yang sesuai dengan titer Ab diagnostik, dua pengenceran di bawah dan dua pengenceran di atasnya. misalnya, jika titer diagnostik adalah 1:100, maka dengan metode volumetrik penentuan stadium RA pengenceran berikut harus disiapkan: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; dengan infus metode ini, pengenceran pertama (1:25) tidak diperlukan, tetapi diperlukan pengenceran lain yang lebih tinggi - 1:800. penelitian ilmiah s-ku dititrasi sampai reaksi negatif. Pengencerannya dilakukan sebagai berikut: 0,25 ml larutan garam dituangkan ke dalam semua tabung reaksi, kecuali tabung pertama, bila reaksi dilakukan dalam volume 0,5 ml, dan 0,5 ml bila reaksi dilakukan dalam volume 1. ml. Tuang 0,25 (0,5) ml pengenceran utama ke dalam tabung reaksi ke-1 dan ke-2, dari tabung reaksi ke-2, ke dalam volume potongan dan pembiakan sk dan ditingkatkan 2 kali lipat, 0,25 (0,5) ml dipindahkan ke tanggal 3, dari tanggal 3 ke tanggal 4, dst. yang terakhir, dari potongan, 0,25 (0,5) ml dituangkan ke dalam semuanya untuk menyeimbangkan volume. Setiap pengenceran dilakukan dengan menggunakan pipet terpisah. Jika beberapa diagnostik diambil dalam percobaan, maka untuk masing-masing diagnostik, rangkaian pengencerannya sendiri disiapkan dengan cara yang sama. Diagnosticum ditambahkan ke setiap pengenceran tabung reaksi dalam volume yang sama dengan volume tabung reaksi, sehingga pengenceran dalam setiap tabung reaksi menjadi dua kali lipat. Percobaan ini sesuai dengan kontrol s-ki (0,25 - 0,5 ml pengenceran utama s-ki dan jumlah larutan garam yang sama) dan kontrol Ag (0,25 - 0,5 ml diagnostikum dan jumlah larutan garam yang sama). Jika beberapa diagnostikum digunakan dalam percobaan, maka masing-masing diagnostik memiliki kontrol antigennya sendiri. Rak yang berisi tabung reaksi dikocok dengan baik dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 4 jam, kemudian dibiarkan pada suhu kamar sampai keesokan harinya, setelah itu PA dicatat berdasarkan jumlah sedimen dan derajat pembersihan. cairan. Penentuan indikator-indikator ini, tergantung pada sifat aglutinat, dilakukan dengan mata telanjang pada latar belakang gelap, dalam aglutinoskop atau pada permukaan cekung cermin mikroskop. Penghitungan dimulai dengan kontrol: kontrol C harus transparan, Ag harus berawan merata (setelah mengocok tabung). Jika kontrolnya bagus, tentukan keberadaan dan derajat aglutinasi di semua tabung reaksi, yang ditandai dengan nilai plus: sedimen besar dan cairan jernih sepenuhnya - 4 nilai plus; sedimen besar dan pembersihan cairan tidak lengkap - 3 plus; sedimen yang terlihat dan pembersihan cairan yang nyata adalah 2 kelebihan. Setelah itu ditentukan titernya: pengenceran tertinggi dengan intensitas aglutinasi minimal 2 plus. Penelitian judul s-ki dibandingkan dengan titer diagnostik penyakit ini. Jika titernya diperiksa. s-ki 2 kali lebih rendah dari nilai diagnostik, reaksinya dinilai meragukan; jika titernya sama diagnostik - bagaimana positif lemah; jika 2-4 kali lebih tinggi maka dianggap positif; jika 8 kali atau lebih tinggi dianggap positif tajam. Dengan tersebar luasnya Ab orang sehat Untuk menilai RA digunakan peningkatan titer Ab. Untuk menentukan jenis Ar pada serial RA, jumlah baris harus sesuai dengan nomor yang diambil untuk identifikasi tes diagnostik. Dari pengenceran utama uji diagnostik, serangkaian pengenceran dua kali lipat berturut-turut dibuat dengan cara yang sama seperti pada RA untuk menentukan titer Ab. Faktor pengenceran bergantung pada titer uji aglutinasi. Dalam percobaan, diperlukan pengenceran yang sama dengan titer uji, serta 2, 4, 6, 8 kali lebih rendah dari itu. Misalnya, jika titer uji diagnostik adalah 1 3200, maka sebaiknya menggunakan pengenceran 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Volume Ag yang diuji sama ditambahkan ke pengenceran uji, sehingga terjadi pengenceran uji diagnostik. pengujian meningkat 2 kali lipat. 2 kontrol pengujian dan Ag ditambahkan ke dalam percobaan. Jika dalam percobaan beberapa s-k terlibat, maka masing-masing memerlukan kontrolnya sendiri. Setelah reaksi selesai, dudukan diguncang kuat-kuat dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C. Hasilnya diperhitungkan seperti dijelaskan di atas. Evaluasi reaksi memiliki ciri-ciri. Untuk menarik kesimpulan tentang kepatuhan penelitian. Ag yang dimasukkan ke dalam percobaan, titer reaksi harus sesuai dengan setidaknya setengah titer uji diagnostik standar.Titer 1 4 dan di bawahnya dianggap sebagai reaksi kelompok Tetes md pementasan RA berbeda dengan volumetrik karena s-ku diencerkan dalam volume 1 ml, Ag digunakan dalam konsentrasi yang lebih tinggi (10 miliar/ml) dan ditambahkan 1 - 2 diteteskan ke dalam tabung reaksi Pengenceran obat setelah penambahan Ag dianggap tidak berubah, jika tidak, metode pengaturan, pencatatan dan evaluasi serupa dengan metode volumetrik

(Sumber : Kamus Istilah Mikrobiologi)

Reaksi aglutinasi (dari lat. aglutinasi- perekatan) - perekatan sel darah (bakteri, sel darah merah, dll.) dengan antibodi dengan adanya elektrolit.

Reaksi aglutinasi memanifestasikan dirinya dalam bentuk serpihan atau sedimen yang terdiri dari sel-sel (misalnya, bakteri) yang “direkatkan” oleh antibodi (Gbr. 7.37). Reaksi aglutinasi digunakan untuk: menentukan patogen yang diisolasi dari pasien; penentuan antibodi dalam serum darah pasien; penentuan golongan darah.

Beras. 7.37a,b. Reaksi aglutinasi denganIgM-antibodi (a) danIgG-antibodi (b)

1. Penentuan patogen yang diisolasi dari pasien Perkiraan reaksi aglutinasi pada kaca (Gbr. 7.38). Suspensi bakteri yang diisolasi dari pasien ditambahkan ke setetes serum aglutinasi (pengenceran 1:20). Endapan flokulan terbentuk.

Beras. 7.38.

Reaksi aglutinasi ekstensif dengan patogen yang diisolasi dari pasien (Gbr. 7.39). Suspensi bakteri yang diisolasi dari pasien ditambahkan ke pengenceran serum aglutinasi.

Beras. 52

2. Penentuan antibodi dalam serum darah pasien
Reaksi aglutinasi terperinci dengan serum darah pasien (Gbr. 7.39). Diagnosticum ditambahkan ke pengenceran serum pasien.
- Aglutinasi dengan O-diagnosticum (bakteri dibunuh oleh panas, mempertahankan antigen O) terjadi dalam bentuk aglutinasi berbutir halus.
- Aglutinasi dengan H-diagnosticum (bakteri yang dibunuh oleh formaldehida, mempertahankan antigen H flagellar) berukuran besar dan terjadi lebih cepat.
3. Reaksi aglutinasi untuk menentukan golongan darah Reaksi aglutinasi untuk menentukan golongan darah digunakan untuk membentuk sistem ABO (Tabel b) dengan menggunakan aglutinasi eritrosit dengan antibodi serum imun terhadap antigen golongan darah A (I), B (III). Kontrolnya adalah: serum yang tidak mengandung antibodi, mis. golongan darah serum AB (IV); antigen yang terkandung dalam sel darah merah golongan A (II), B (III). Kontrol negatif tidak mengandung antigen, yaitu menggunakan eritrosit golongan O (I).

Tabel 7.6. Penentuan golongan darah ABO