– tes antiglobulin yang bertujuan untuk mengidentifikasi antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap dalam darah Rh-negatif terhadap faktor Rh - protein spesifik yang terletak di permukaan eritrosit darah Rh-positif. Ada dua jenis tes ini: langsung - deteksi antibodi pada permukaan sel darah merah, tidak langsung - deteksi antibodi dalam serum darah. Pengujian langsung dilakukan dalam diagnosis dan pemantauan pengobatan penyakit darah: anemia hemolitik, penyakit hemolitik bayi baru lahir dan lain-lain. Tes tidak langsung dilakukan untuk menilai kesesuaian darah donor dan penerima selama transfusi, serta untuk mengetahui adanya dan risiko konflik Rh saat merencanakan dan mengelola kehamilan. Bahan uji Coombs adalah darah vena, penelitian dilakukan dengan menggunakan metode berdasarkan reaksi aglutinasi. Biasanya, kedua tes memberikan hasil negatif. Analisis selesai dalam satu hari.
Tes Coombs – uji klinis Darah Rh-negatif, bertujuan untuk mendeteksi antibodi terhadap faktor Rh. Tes ini digunakan untuk mengidentifikasi risiko berkembangnya konflik Rh dan reaksi hemolitik. Pada setiap orang, permukaan sel darah merah mengandung seperangkat antigen atau aglutinogen tertentu - senyawa yang sifatnya berbeda, ada atau tidaknya digunakan untuk menentukan golongan darah dan faktor Rh. Antigen ada banyak jenisnya, diantaranya praktek medis Aglutinogen A dan B, yang menentukan golongan darah, dan aglutinogen D, faktor Rh, adalah yang paling penting secara praktis. Dengan faktor Rh positif, antigen D terdeteksi pada membran luar eritrosit, tetapi dengan faktor Rh negatif, antigen D tidak terdeteksi.
Tes Coombs, juga disebut tes antiglobulin, bertujuan untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit yang tidak lengkap terhadap sistem faktor Rh dalam darah. Antibodi terhadap faktor Rh adalah imunoglobulin spesifik yang diproduksi dalam darah Rh-negatif ketika sel darah merah dengan aglutinogen D masuk ke dalamnya.Hal ini dapat terjadi ketika darah janin dan wanita hamil tercampur, selama transfusi darah dilakukan tanpa darah sebelumnya. mengetik. Tes Coombs ada dalam dua versi - langsung dan tidak langsung. Saat melakukan tes Coombs langsung, antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah terdeteksi. Penelitian ini digunakan untuk mengetahui penyebab reaksi hemolitik. Tes Coombs tidak langsung bertujuan untuk mendeteksi antibodi anti-eritrosit dalam plasma darah. Hal ini diperlukan untuk menentukan kesesuaian darah antara donor dan penerima atau ibu dan janin, dan membantu mencegah berkembangnya konflik Rh dan hemolisis sel darah merah selanjutnya.
Darah untuk kedua versi tes Coombs diambil dari vena. Analisis dilakukan dengan aglutinasi menggunakan serum antiglobulin. Hasil penelitian digunakan dalam hematologi untuk mengidentifikasi penyebab reaksi hemolitik, dalam pembedahan dan resusitasi saat melakukan transfusi darah, dalam bidang kebidanan dan ginekologi saat memantau kehamilan pada wanita dengan darah Rh-negatif.
Indikasi
Tes Coombs langsung, yang mendeteksi antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah, diresepkan untuk reaksi hemolitik (penghancuran sel darah merah) dari berbagai asal. Penelitian ini diindikasikan untuk anemia hemolitik autoimun primer, anemia hemolitik pasca transfusi, penyakit hemolitik pada bayi baru lahir, hemolisis eritrosit yang disebabkan oleh autoimun, tumor atau penyakit menular, serta resepsi obat, misalnya quinidine, metildopa, procainamide. Tes Coombs tidak langsung, yang menentukan antibodi dalam plasma darah, digunakan untuk mencegah perkembangan konflik Rh. Ini diindikasikan untuk pasien dalam persiapan untuk transfusi darah, serta untuk wanita hamil dengan faktor Rh negatif, asalkan calon ayah dari anak tersebut memiliki faktor Rh positif.
Untuk menentukan kompatibilitas Rh, tes Coombs tidak diresepkan untuk pasien dengan darah Rh-positif. Dalam kasus ini, antigen sudah terdapat pada permukaan sel darah merah, produksi antibodi tidak dapat dipicu oleh transfusi darah atau masuknya darah janin ke dalam aliran darah ibu hamil. Selain itu, penelitian ini tidak diindikasikan untuk wanita hamil jika kedua orang tuanya memiliki faktor Rh negatif - sifat resesif yang diturunkan. Anak dari pasangan seperti itu selalu memiliki darah Rh-negatif, konflik imunologis dengan ibu tidak mungkin terjadi. Dalam patologi hemolitik, tes antiglobulin tidak digunakan untuk memantau keberhasilan terapi, karena hasilnya tidak mencerminkan aktivitas proses penghancuran sel darah merah.
Keterbatasan uji Coombs adalah rumitnya prosedur penelitian - untuk mendapatkan hasil yang dapat diandalkan, perlu mematuhi kondisi suhu dan waktu, aturan untuk persiapan reagen dan biomaterial. Kelebihan tes Coombs antara lain sensitivitas tinggi. Pada anemia hemolitik, hasil tes ini tetap positif, meskipun kadar hemoglobin, bilirubin, dan retikulosit sudah normal.
Persiapan analisis dan pengumpulan bahan
Bahan yang digunakan untuk melakukan tes Coombs adalah darah vena. Tidak ada persyaratan khusus untuk waktu prosedur pengambilan sampel darah dan persiapan pasien. Seperti halnya penelitian lainnya, dianjurkan untuk istirahat setelah makan setidaknya selama 4 jam, dan berhenti merokok dalam 30 menit terakhir. aktivitas fisik, hindari stres emosional. Sebaiknya diskusikan terlebih dahulu dengan dokter Anda tentang perlunya berhenti minum obat - beberapa obat dapat merusak hasil tes Coombs. Darah diambil dengan menggunakan jarum suntik dari vena cubiti, atau lebih jarang dari vena di punggung tangan. Dalam beberapa jam, bahan tersebut dikirim ke laboratorium.
Saat melakukan tes Coombs langsung, serum antiglobulin ditambahkan ke serum darah pasien. Setelah beberapa waktu, campuran diperiksa untuk mengetahui adanya aglutinat - mereka terbentuk jika ada antibodi pada sel darah merah. Jika hasilnya positif, ditentukan titer aglutinasinya. Tes Coombs tidak langsung terdiri dari beberapa langkah. Pertama, antibodi yang ada dalam serum difiksasi pada sel darah merah yang disuntikkan selama inkubasi. Kemudian serum antiglobulin ditambahkan ke sampel, setelah beberapa waktu keberadaan dan titer aglutinat ditentukan. Periode analisis adalah 1 hari.
Hasil biasa
Biasanya hasil tes Coombs langsung negatif (-). Artinya, tidak ada antibodi yang terkait dengan sel darah merah di dalam darah, dan tidak dapat menyebabkan hemolisis. Hasil biasa tes tidak langsung Coombs juga negatif (-), yaitu tidak ada antibodi terhadap faktor Rh dalam plasma darah. Saat mempersiapkan transfusi darah bagi penerima, ini berarti kesesuaian dengan darah donor, saat memantau kehamilan, ini berarti tidak adanya sensitisasi Rh pada ibu, risiko rendah terjadinya konflik imunologis. Faktor fisiologis, seperti kebiasaan makan atau aktivitas fisik, tidak dapat mempengaruhi hasil tes. Oleh karena itu, jika hasilnya positif, perlu berkonsultasi dengan dokter.
Nilai diagnostik dari analisis
Hasil tes Coombs yang positif dinyatakan secara kualitatif, dari (+) hingga (++++), atau secara kuantitatif, dengan titer dari 1:16 hingga 1:256. Penentuan konsentrasi antibodi pada sel darah merah dan serum darah dilakukan pada kedua jenis sampel. Jika tes Coombs langsung positif, antibodi terdeteksi pada membran luar sel darah merah, yang menyebabkan kerusakan sel darah tersebut. Penyebabnya mungkin transfusi darah tanpa pengecekan sebelumnya - reaksi hemolitik pasca transfusi, serta eritroblastosis pada bayi baru lahir, reaksi hemolitik akibat penggunaan obat-obatan, anemia hemolitik autoimun primer atau sekunder. Kerusakan sekunder sel darah merah dapat disebabkan oleh lupus eritematosus sistemik, sindrom Evans, makroglobulinemia Waldenström, hemoglobinuria dingin paroksismal, leukemia limfositik kronis, limfoma, mononukleosis menular, sifilis, pneumonia mikoplasma.
Hasil positif dari tes Coombs tidak langsung menunjukkan adanya antibodi terhadap faktor Rh dalam plasma. Dalam prakteknya, ini berarti telah terjadi sensitisasi Rh, dan ada kemungkinan berkembangnya konflik Rh setelah infus darah donor selama kehamilan. Untuk mencegah komplikasi kehamilan, wanita dengan hasil tes Coombs positif dimasukkan ke dalam register khusus.
Pengobatan kelainan
Tes Coombs mengacu pada studi isoserologis. Hasilnya memungkinkan untuk mengidentifikasi reaksi hemolitik, serta menentukan kompatibilitas darah donor dan penerima, ibu dan janin, untuk mencegah berkembangnya konflik Rh. Jika hasil tesnya positif, maka Anda perlu mencari nasihat dari dokter Anda - dokter kandungan-ginekologi, ahli hematologi, ahli bedah.
Tes Coombs adalah sebuah metode penelitian laboratorium, dibuat dengan mempengaruhi hemaglutinasi. Hal ini didasarkan pada kerentanan antibodi terhadap imunoglobulin dan elemen enzim, serta kemampuannya untuk mengaglutinasi eritrosit yang dilapisi C3 atau Lg.
Diagnosis Coombs langsung
Digunakan untuk mendeteksi antibodi atau komponen pelengkap yang dipasang di bagian luar sel. Tes Coombs langsung dilakukan sebagai berikut.
Penggunaan sampel seperti itu
Diagnosis Coombs langsung digunakan pada kasus tertentu, seperti:
- efek transfusi;
- hemolisis autoimun;
- anemia hemolitik akibat obat.
Tes Coombs tidak langsung
Diagnosis ini memungkinkan untuk mendeteksi antibodi terhadap sel dalam serum, yang biasanya diinkubasi dengan sel darah merah donor tipe 0, dan kemudian tes langsung dilakukan. Menerapkan diagnosis tidak langsung Coombs dalam kasus berikut:
Bagaimana mempersiapkan analisis
Ada beberapa aturan untuk mempersiapkan ujian.
- Jika pasiennya adalah bayi baru lahir, orang tua perlu menyadari bahwa tes ini akan membantu mendiagnosis penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
- Jika pasien dicurigai menderita anemia hemolitik, ia harus dijelaskan bahwa analisis tersebut akan memungkinkannya mengetahui apakah hal itu disebabkan oleh gangguan pelindung, obat-obatan, atau faktor lain.
- Tes Coombs, langsung dan tidak langsung, tidak membatasi nutrisi atau pola makan.
- Penting untuk memberi tahu pasien bahwa pemeriksaan akan memerlukan pengambilan darah dari vena, dan juga memberi tahu dia kapan tepatnya pungsi vena akan dilakukan.
- Anda juga harus diperingatkan tentang kemungkinan tersebut tidak nyaman selama periode penerapan perban pada lengan dan prosedur itu sendiri.
- Obat-obatan yang dapat mempengaruhi hasil sampel harus dihentikan.
Obat-obatan ini meliputi:
- "Streptomisin";
- "Metildopa";
- "Prokainamid";
- sulfonamid;
- "Melphalan";
- "quinidin";
- "Rifampisin";
- Isoniazid;
- sefalosporin;
- "Hidralazin";
- "Klorpromazin";
- "Levodopa";
- "Tetrasiklin";
- "Difenilhidantoin";
- "Etosuximid";
- "Penisilin";
- asam mefenamat.
Pengambilan sampel darah dilakukan pada pagi hari dalam keadaan perut kosong.
Bagaimana acara tersebut diadakan
Tes Coombs dilakukan dengan urutan sebagai berikut:
- Saat melakukan diagnosis pada pasien dewasa, setelah pungsi vena, darah dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan EDTA (ethylenediaminetetraacetate).
- Darah bayi baru lahir diambil dari tali pusat ke dalam gelas kimia berisi EDTA.
- Daerah tusukan ditekan dengan kapas sampai pendarahan berhenti.
- Jika memar muncul di lokasi tusukan vena, kompres hangat akan diberikan.
- Setelah pengambilan darah, pasien diperbolehkan kembali minum obat.
- Orang tua bayi baru lahir perlu diberitahukan bahwa analisis sekunder mungkin diperlukan untuk memantau dinamika anemia.
Keuntungan dari tes Coombs
Penelitian tersebut mempunyai beberapa keunggulan, yaitu:
Kekurangan analisis
Tes Coombs positif adalah metode pemeriksaan yang agak memakan waktu dan memerlukan akurasi pelaksanaan yang khas. Saat menggunakannya, Anda mungkin mengalami kesulitan tertentu, terutama terkait dengan interpretasi efek positif lemah.
Telah ditetapkan bahwa itu salah negatif atau lemah reaksi positif selama produksi sampel Coombs dapat disebabkan oleh pencucian sel aktif yang tidak memuaskan, melemahnya reagen antiglobulin oleh residu serum, serta hubungan dengan bagian luar non-lemak tempat antiglobulin dapat menempel, sehingga kehilangan efektivitasnya.
Tes Coombs memiliki kelemahan lain - rendahnya stabilitas reagen antiglobulin, perolehan dan penyimpanannya karakteristik individu, yang juga mempersulit penilaian numerik efek serum antiglobulin terhadap hemaglutinasi.
Penyakit yang dapat dideteksi selama pemeriksaan
Diagnostik Coombs memungkinkan untuk mendeteksi jenis penyakit tertentu, seperti:
- malaise hemolitik pada bayi baru lahir;
- berbagai reaksi transfusi;
- hemolisis autoimun;
- anemia hemolitik akibat obat.
Saat ini, tes Coombs dianggap sebagai sistem tes darah yang cukup populer baik untuk orang dewasa maupun bayi baru lahir. Itu memungkinkan untuk mengidentifikasi banyak penyakit berbeda.
Teteskan 1 tetes besar serum O(I), A(II), B(III) ke piring atau kaca objek menggunakan pipet (berbeda!). Setelah mencatat waktunya, gunakan batang kaca yang bersih atau sudut kaca objek yang bersih untuk mencampurkan tetes serum dengan tetes darah. Penentuan dilakukan selama 5 menit, sambil mengocok pelat, kemudian ditambahkan 1 tetes larutan garam ke dalam setiap campuran tetes dan evaluasi hasilnya. Sebaiknya serum hadir dalam 2 seri yang berbeda. Hasil golongan darah harus cocok di kedua lot serum.
Evaluasi hasil isohemaglutinasi:
jika ketiga serum memberikan reaksi negatif, yaitu campuran berwarna merah muda seragam - ini golongan darah O(I);
Jika reaksi negatif hanya serum golongan A(II) yang memberi, dan serum O(I) dan B(III) memberikan reaksi positif, yaitu muncul butiran - ini golongan darah A(II);
serum golongan B(II) memberikan reaksi negatif, dan serum golongan O(I) dan A(II) memberikan reaksi positif - ini golongan darah B(III).
isohemaglutinasi. Jika reaksinya positif, butiran merah kecil sel darah merah berperekat muncul dalam campuran. Biji-bijian bergabung menjadi biji-bijian yang lebih besar, dan yang terakhir menjadi serpihan. Serumnya hampir berubah warna;
jika reaksinya negatif, warna campuran tetap seragam selama 5 menit warna merah jambu dan tidak ada biji-bijian yang ditemukan;
Saat bekerja dengan 3 serum golongan O(I), A(II), B(III), 4 kombinasi reaksi dimungkinkan:
ketiga serum tersebut memberikan reaksi positif - darah yang diuji adalah golongan AB(IV). Dalam hal ini, penelitian dilakukan dengan serum kelompok AB(IV).
Catatan! Tetesan darah yang diuji sebaiknya 5-10 kali lebih kecil dari tetes serum.
Kesalahan isohemaglutinasi.
Kegagalan melakukan aglutinasi pada tempat yang seharusnya dan adanya aglutinasi pada tempat yang tidak seharusnya. Hal ini mungkin disebabkan oleh titer serum yang lemah ditambah aglutinasi sel darah merah yang buruk.
Adanya aglutinasi yang seharusnya tidak ada- Ini adalah pseudoaglutinasi, ketika tumpukan sel darah merah membentuk “kolom koin”. Mengguncang piring atau menambahkan garam akan menghancurkannya.
Panaglutinasi, ketika serum menyatukan semua sel darah merah, termasuk yang bergolongan darah sendiri. Pada menit ke 5, tanda-tanda aglutinasi hilang.
Ada juga yang disebut panaglutinasi dingin, ketika sel darah merah saling menempel karena suhu udara dalam ruangan yang rendah (di bawah 15°C).
Dalam semua kasus ini, reaksi berulang dilakukan atau menggunakan sel darah merah standar.
Penentuan darah Rh
Untuk menentukan status Rh, yaitu untuk mendeteksi ada tidaknya antigen sistem Rh dalam darah manusia, digunakan serum (reagen) anti-Rh standar, yang spesifisitasnya bervariasi, yaitu mengandung antibodi terhadap berbagai antigen sistem ini. Untuk menentukan antigen Rh 0 (D), paling sering digunakan serum anti-Rhesus dengan penambahan larutan gelatin 10%, atau digunakan reagen anti-Rhesus standar yang disiapkan terlebih dahulu dengan larutan poliglusin 33%. Untuk memperoleh hasil penelitian yang lebih akurat, serta untuk mengidentifikasi antigen sistem serologi lain, digunakan uji Coombs (juga sangat sensitif dalam menentukan kompatibilitas darah yang ditransfusikan). Untuk penelitian, digunakan darah asli atau darah yang dibuat dengan bahan pengawet tertentu. Dalam hal ini, darah harus dicuci dari bahan pengawet dengan larutan natrium klorida isotonik sepuluh kali lipat. Saat menentukan status Rh- Rh 0 (D) harus digunakan dua sampel serum atau reagen anti-Rhesus dari dua seri yang berbeda dan sekaligus sel darah merah standar yang diperoleh dari darah Rh-positif (Rh+) dan Rh-negatif (Rh -) individu harus digunakan untuk kontrol. Saat menentukan isoantigen lain, sel darah merah kontrol yang mengandung atau kekurangan antigen yang menjadi sasaran antibodi dalam serum standar harus digunakan dengan tepat.
Aglutinin panas parsial adalah jenis antibodi paling umum yang dapat menyebabkan perkembangan anemia hemolitik autoimun. Antibodi ini milik IgG, jarang milik IgM, IgA.
UJI COOMBS
Tes Coombs: pendahuluan. Tes Coombs adalah metode diagnostik laboratorium berdasarkan reaksi hemaglutinasi.
Metode utama untuk mendiagnosis anemia hemolitik autoimun adalah tes Coombs. Hal ini didasarkan pada kemampuan antibodi spesifik terhadap imunoglobulin (terutama IgG) atau komponen komplemen (terutama S3) untuk mengaglutinasi eritrosit yang dilapisi IgG atau S3.
Pengikatan IgG dan C3b ke eritrosit diamati pada anemia hemolitik autoimun dan anemia hemolitik imun akibat obat. Tes Coombs langsung. Tes Coombs langsung digunakan untuk mendeteksi antibodi atau komponen komplemen yang menempel pada permukaan sel darah merah. Hal ini dilakukan sebagai berikut:
Untuk memperoleh antibodi terhadap imunoglobulin manusia (serum antiglobulin) atau komplemen (serum antikomplementer), hewan diimunisasi dengan serum manusia, imunoglobulin atau komplemen manusia. Serum yang diperoleh dari hewan dimurnikan dari antibodi terhadap protein lain.
Sel darah merah pasien dicuci dengan garam untuk menghilangkan serum sepenuhnya, yang menetralkan antibodi terhadap imunoglobulin dan komplemen serta dapat menyebabkan hasil negatif palsu.
Jika antibodi atau komponen komplemen menempel pada permukaan sel darah merah, penambahan antiglobulin atau serum antikomplemen menyebabkan aglutinasi sel darah merah.
Tes Coombs langsung digunakan dalam kasus berikut:
Hemolisis autoimun.
Penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
Anemia hemolitik imun yang diinduksi obat.
Reaksi transfusi hemolitik. Tes Coombs tidak langsung. Tes Coombs tidak langsung mendeteksi antibodi terhadap sel darah merah dalam serum. Untuk melakukan ini, serum pasien diinkubasi dengan sel darah merah donor kelompok 0, dan kemudian dilakukan tes Coombs langsung.
Tes Coombs tidak langsung digunakan dalam kasus berikut:
Penentuan kompatibilitas individu darah donor dan penerima.
Deteksi aloantibodi, termasuk antibodi yang menyebabkan reaksi transfusi hemolitik.
Penentuan antigen permukaan eritrosit dalam genetika medis dan kedokteran forensik.
Konfirmasi kembar identik selama transplantasi sumsum tulang.
Untuk melakukan tes biologis, darah mulai ditransfusikan secepat mungkin (sebaiknya melalui aliran sungai). Setelah 25 ml darah ditransfusikan, tabung sistem dijepit dengan penjepit. Kemudian ada jeda selama 3 menit yang memantau kondisi penerima. Untuk melakukan tes biologis, 25 ml darah disuntikkan tiga kali. Pada akhir pengujian (setelah transfusi 75 ml darah pertama dalam dosis fraksional 25 ml dengan interval 3 menit), sistem disesuaikan dengan kecepatan transfusi yang diperlukan. Saat mentransfusikan lebih dari satu botol darah ke pasien, jarum dari vena harus dicabut. Dalam hal ini, jarum dikeluarkan dari tabung reaksi botol yang darahnya telah habis dan dimasukkan ke dalam botol berikutnya. Tabung sistem (karet atau plastik) saat ini dijepit dengan penjepit. Jika selama transfusi darah perlu diberikan obat lain secara intravena kepada penerima, hal ini dilakukan dengan menusuk tabung karet sistem. Tusukan pada tabung plastik tidak dapat diterima, karena tidak akan jatuh. Setelah setiap transfusi darah, pasien harus dipantau untuk mengidentifikasi dan menghilangkannya tepat waktu kemungkinan komplikasi, termasuk reaksi alergi. 2 jam setelah transfusi darah berakhir, suhu tubuh harus diukur. Jika meningkat maka pengukuran harus diulang setiap jam selama 4 jam berikutnya. Yang tak kalah penting adalah pemantauan urinasi dan komposisi urin, yang memungkinkan untuk mengetahui adanya reaksi toksik pasca transfusi. Timbulnya oliguria dan anuria setelah transfusi darah, adanya sel darah dan protein dalam urin merupakan indikasi langsung berkembangnya hemolisis pasca transfusi.
REAKSI KOMBES(R.R.A. Coombs, ahli imunologi Inggris, lahir pada tahun 1921; sinonim: Tes Coombs, tes antiglobulin) - reaksi imunologis untuk mendeteksi antibodi yang tidak lengkap terhadap auto- dan isoantigen eritrosit.
Reaksi ini dikembangkan pada tahun 1908 oleh S. Moreschi, tetapi diterima aplikasi yang luas hanya sejak tahun 1945 setelah Coombs mendemonstrasikan perannya dalam menentukan kompatibilitas selama transfusi darah, konflik Rh, diagnosis kondisi autoalergi dan autoimun, dll.
Reaksi Coombs didasarkan pada penggunaan obat yang disiapkan khusus - serum antiglobulin. Dengan adanya serum antiglobulin, sel darah merah yang mengandung antibodi tidak lengkap akan menggumpal. Sel darah merah yang tidak mengandung antibodi pada permukaannya tetap tidak diaglutinasi.
K.r. banyak digunakan untuk: a) menetapkan keadaan isosensitisasi, yaitu mendeteksi isoantibodi yang terjadi selama transfusi darah berulang (lihat Transfusi darah) atau kehamilan (lihat Kehamilan); b) melakukan uji kompatibilitas selama transfusi darah; c) penentuan jenis faktor Rh pada eritrosit (lihat); d) deteksi antibodi autoimun pada sel darah merah pasien dengan anemia hemolitik didapat (lihat) dan penyakit autoalergi lainnya (lihat), serta pada beberapa infeksi yang terjadi dengan komponen alergi; e) deteksi antibodi isoimun yang menempel pada eritrosit anak-anak yang menderita penyakit hemolitik pada bayi baru lahir (lihat). K.r. juga digunakan dalam penelitian forensik dan antropologi.
Bahan utama pementasan K. r. adalah serum atau plasma sitrat dan sel darah merah pasien. Ada dua varian K.r.: tidak langsung dan langsung. Dengan K. r. Serum pasien diperiksa dan antibodi yang bersirkulasi bebas ditentukan. Dengan langsung K. r. memeriksa sel darah merah untuk mengetahui adanya antibodi yang menempel pada sel tersebut elemen berbentuk darah.
Serum antiglobulin untuk K. r. diperoleh melalui laboratorium imunisasi. hewan (kelinci, kambing, domba, dll.) dengan globulin yang diisolasi dari serum manusia melalui fraksinasi dengan etanol, amonium sulfat atau filtrasi gel pada Sephadex. Saat memperoleh serum antiglobulin, perlu untuk menghilangkan antibodi heteroaglutinasi yang dihasilkan dari imunisasi hewan dengan globulin manusia. Hal ini dicapai dengan adsorpsi serum imun dengan campuran eritrosit dari penderita kelompok yang berbeda darah atau mengencerkannya dengan larutan natrium klorida isotonik. Dalam kasus terakhir, titer hetero-aglutinin harus rendah (1:16 - 1:32), sehingga serum antiglobulin, setelah pengenceran, mempertahankan aktivitas yang baik di K. r.
Reaksi Coombs tidak langsung
Reaksi Coombs tidak langsung dilakukan dalam dua tahap. Tahap pertama dilakukan dalam tabung reaksi kecil berukuran 4 X 0,5 cm yang dirancang khusus untuk itu, pada setiap tabung reaksi ditambahkan satu tetes hingga tiga tetes serum (utuh, 1: 2, dst), yang di dalamnya terdapat: antibodi diduga merupakan endapan eritrosit dengan komposisi antigenik yang diketahui. Isi tabung reaksi dicampur dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37° selama 1 jam. Kemudian sel darah merah dicuci tiga kali dengan larutan natrium klorida isotonik. Tahap kedua terdiri dari pembuatan suspensi 5% eritrosit yang telah dicuci dan menggabungkan satu tetes eritrosit dengan satu tetes serum antiglobulin pada piring putih (porselen) dengan permukaan yang dibasahi. Hasilnya diperhitungkan hingga 10 menit. Pengecualian hasil positif palsu dihasilkan dengan melakukan studi kontrol. Penggunaan larutan natrium klorida isotonik sebagai pengganti serum antiglobulin tidak boleh disertai dengan aglutinasi sel darah merah. Melakukan K. r. terhadap eritrosit dengan fenotip isoantigen yang diketahui memungkinkan seseorang untuk menetapkan spesifisitas antibodi. Misalnya studi serum pasien dengan sel darah merah 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fya; 0(I), De, Kk, Fya; 0(I), cDE, Kk, Fya; 0(I), cde, kk, Fya menunjukkan hasil positif dengan sampel darah pada kasus 1 dan 4; sampel darah lainnya (kasus 2, 3, 5) menunjukkan hasil negatif. Serum tersebut mengandung antibodi anti-E. Dengan bantuan K. r. antibodi yang tidak lengkap terhadap antigen dapat dideteksi: C, D, E, c, e; k, k; Fiya, Fib; Lea, Leb; Jka, Jkb, dll (lihat Golongan Darah).
Reaksi Coombs langsung
Reaksi Coombs langsung dalam tekniknya sesuai dengan tahap kedua K.R tidak langsung: sel darah merah pasien (suspensi 5%), dicuci tiga kali dengan larutan natrium klorida isotonik, dikombinasikan dengan serum antiglobulin. Langsung K.r. dilakukan bila ada alasan untuk meyakini bahwa sel darah merah pasien yang diteliti telah disensitisasi dengan antibodi in vivo. Garis lurus positif K. r. berfungsi sebagai tanda diagnostik penyakit hemolitik pada bayi baru lahir, yang disebabkan oleh sensitisasi tubuh wanita terhadap antigen janin dan penetrasi antibodi melalui plasenta ke dalam tubuh anak, serta anemia hemolitik didapat.
Di belakang tahun terakhir K.r. membaik secara signifikan. Dengan bantuannya, dimungkinkan tidak hanya untuk memastikan keberadaan antibodi pada sel darah merah, tetapi juga untuk menetapkan kelas imunoglobulin (lihat). Untuk melakukan ini, gunakan serum untuk melawan kelas imunoglobulin tertentu: IgG, IgM, IgA. Antibodi isoimun terhadap antigen Rhesus, antigen Kell, antigen Duffy dan antigen lainnya, serta antibodi autoimun hangat, biasanya diklasifikasikan sebagai IgG. Antibodi autoimun dingin, serta antibodi isoimun terhadap Le dan beberapa antigen lainnya, biasanya milik IgM. Hanya antibodi autoimun langka yang bersifat IgA (lihat Autoantibodi).
Bibliografi: Dygin V.P.Penyakit autoimun di klinik penyakit dalam, L., 1970, bibliogr. ; Kassirsky I. A. dan Alekseev G. A. Hematologi klinis, M., 1970; Kosyakov P. N. Isoantigen dan isoantibodi manusia dalam kesehatan dan penyakit, M., 1974, bibliogr.; Boivin P.e. A. Les anemies hemolitik, hal. 93, P., 1971, daftar pustaka; Aspek Klinis Imunologi, ed. oleh P.G.H. Geli a. o., Oxford, 1975; Coombs R.R.A., Mourant A.E.a. Ras R. R. Isosensitisasi sel darah merah in-vivo pada bayi dengan penyakit hemolitik, Lancet, v. 1, hal. 264, 1946.
Tes Coombs adalah analisis klinis tes darah, yang dilakukan untuk mendeteksi apakah darah mengandung antibodi tertentu yang mungkin tidak aman. Antibodi ini menempel pada sel darah merah dan dapat menyerang sistem imun, serta menyebabkan kerugian dengan cara lain. Dalam terminologi kedokteran, penelitian ini disebut juga dengan tes antiglobulin (AGT).
Jenis sampel Coombs
Ada dua jenis tes Coombs - langsung dan tidak langsung.
Tes Coombs langsung, juga dikenal sebagai direct (DAT), mendeteksi auto-antibodi yang menempel pada permukaan sel darah merah. Antibodi ini terkadang diproduksi di dalam tubuh karena penyakit tertentu atau saat mengonsumsi obat tertentu, seperti procainamide, methyldopa, atau quinidine.
Antibodi ini berbahaya karena terkadang menyebabkan anemia dengan cara menghancurkan sel darah merah.
Tes ini terkadang diperintahkan untuk mendiagnosis penyebab penyakit kuning atau anemia.
Biasanya, reaksi Coombs negatif.
Positif untuk:
- penyakit hemolitik pada bayi baru lahir;
- hemolisis autoimun;
- reaksi transfusi hemolitik;
- anemia hemolitik imun yang diinduksi obat.
Tes Coombs tidak langsung, juga dikenal sebagai , digunakan untuk mendeteksi antibodi terhadap sel darah merah yang ditemukan dalam serum darah (serum adalah cairan darah berwarna kuning bening yang tersisa setelah sel darah merah dan koagulan dihilangkan).
Tes Coombs tidak langsung digunakan selama transfusi darah untuk menentukan apakah darah donor cocok dengan darah penerima. Ini disebut tes kompatibilitas dan membantu mencegah reaksi merugikan terhadap darah donor. Analisis ini juga dianjurkan untuk wanita hamil. Beberapa wanita memiliki antibodi IgG, yang dapat melewati plasenta ke dalam darah janin dan membahayakan bayi baru lahir, sehingga menyebabkan penyakit hemolitik yang dikenal sebagai anemia hemolitik.
Prosedur
Darah diambil dengan menggunakan spuit dari vena, biasanya dengan sisi belakang telapak tangan atau di lekukan siku. Sebelum ini, tempat tusukan didesinfeksi secara menyeluruh, dan setelah melakukan tes darah, kain kasa atau kapas bersih dioleskan.
Darah yang dihasilkan dimurnikan di laboratorium dan sel darah merah dipisahkan. Sampel kemudian diuji secara berurutan menggunakan berbagai serum dan reagen Coombs yang dikontraskan. Jika tidak terjadi aglutinasi (penggumpalan sel darah merah), berarti hasilnya positif.
Namun jika hasil tesnya negatif, berarti ada antibodi di dalam darah yang bekerja melawan sel darah merah. Ini mungkin mengindikasikan berbagai penyakit, seperti anemia (baik alami maupun akibat minum obat), sifilis, atau infeksi mikoplasma. Setelah menerima hasilnya, dokter yang merawat akan meresepkan pengobatan yang tepat.
Video
