Reaksi aglutinasi pasif. Reaksi aglutinasi tidak langsung. Reaksi hemaglutinasi tidak langsung atau pasif (IRHA, RPHA). Membalikkan RNGA. Reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (PHA).
Ini reaksi disebut tidak langsung (pasif), karena mereka menggunakan Ag (atau AT) yang diserap secara artifisial pada permukaan berbagai partikel sel darah.
Reaksi hemaglutinasi tidak langsung atau pasif (RNGA, RPGA) adalah salah satu reaksi serologis yang paling sensitif. Hal ini didasarkan pada kemampuan AT untuk berinteraksi dengan Ag yang terfiksasi pada berbagai sel darah merah, yang kemudian menggumpal. Untuk stabilitas diagnostik yang lebih baik, sel darah merah diformalkan.
Membalikkan RNGA digunakan untuk mendeteksi Ag dalam serum darah; Untuk tujuan ini, bukan Ag, tetapi AT yang difiksasi pada eritrosit. Reaksi jenis ini banyak digunakan untuk mendiagnosis penyakit menular, menentukan kehamilan, dan mendeteksi hipersensitivitas untuk obat-obatan, dll.
Respon pengereman hemaglutinasi pasif (RTPGA) - pengembangan lebih lanjut RNGA; dalam arti tertentu mengontrol kekhususannya. Berbeda dengan RNGA, mencakup tiga komponen; Ag, AT dan Ag (AT) teradsorpsi pada eritrosit. Awalnya Ag bereaksi dengan AT (antiserum standar), kemudian eritrosit yang disensitisasi dengan Ag (atau AT) yang sama ditambahkan ke dalam campuran. Jika, ketika Ag berinteraksi dengan AT, tidak ada AT (atau Ag) bebas yang tersisa dalam sistem, maka aglutinasi diagnostik eritrosit tidak diamati.
Menggunakan sel darah merah atau netral bahan sintetis(misalnya, partikel lateks), pada permukaannya antigen (bakteri, virus, jaringan) atau antibodi diserap. Aglutinasinya terjadi ketika serum atau antigen yang sesuai ditambahkan. Sel darah merah yang disensitisasi dengan antigen disebut diagnostik eritrosit antigenik dan digunakan untuk mendeteksi dan mentitrasi antibodi. Eritrosit peka terhadap antibodi. disebut diagnostik imunoglobulin eritrosit dan digunakan untuk mengidentifikasi antigen.
Reaksi hemaglutinasi pasif digunakan untuk mendiagnosis penyakit yang disebabkan oleh bakteri ( demam tifoid dan demam paratifoid, disentri, brucellosis, wabah penyakit, kolera, dll), protozoa (malaria) dan virus (influenza, infeksi adenovirus, virus hepatitis B, campak, ensefalitis yang ditularkan melalui kutu, Demam berdarah Krimea, dll.), serta untuk menentukan hormon tertentu, mengidentifikasi peningkatan sensitivitas pasien terhadap obat dan hormon seperti penisilin dan insulin.
Reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA). Tes hemaglutinasi pasif adalah metode yang sensitif diagnostik serologis dan digunakan untuk diagnosis dini dan retrospektif, serta untuk menentukan keadaan imunopogic orang yang divaksinasi. Pada pasien dengan tularemia, antibodi biasanya terdeteksi pada akhir minggu pertama atau kedua penyakit; setelah 1-1,5 bulan, titer RPHA mencapai penampilan maksimal(1:100000-1:20000, jarang lebih tinggi), setelah itu turun dan tetap pada level 1:100-1:200 untuk waktu yang lama.
Pada orang yang divaksinasi, antibodi juga terus terdeteksi, namun pada titer yang lebih rendah, tidak melebihi 1:2000-1:5000 1-1,5 bulan setelah vaksinasi, dan tetap selama beberapa tahun pada tingkat yang rendah 1:20-1:80.
Antigen untuk menentukan stadium RPHA adalah tularemia eritrosit diagnostikum (antigenik). Obat tersebut berupa sel darah merah domba yang diformalkan, disensitisasi dengan antigen tularemia, tersedia dalam bentuk cair dan kering. Sediaan cair - suspensi 10% sel darah merah dalam larutan formaldehida dengan konsentrasi 10%. Sediaan kering terliofilisasi adalah suspensi 10% sel darah merah yang dikeringkan secara vakum tanpa bahan pengawet. Sebelum digunakan, diencerkan sesuai petunjuk pada label. Untuk mengatur reaksi dalam pelat polistiren, kedua obat digunakan pada konsentrasi 2,5%, dan ketika mengatur reaksi dalam mikrovolume - pada konsentrasi 0,5%.
Teknik untuk menyiapkan RPGA. Serum uji diencerkan dengan larutan fisiologis 1:5 (1:10) dan dipanaskan pada suhu 56 derajat C selama 30 menit. Setelah itu, untuk menghilangkan antibodi heterogen terhadap eritrosit domba, serum diolah dengan suspensi 50% eritrosit domba yang diformalkan. Untuk melakukan ini, tambahkan sel darah merah dengan kecepatan 2 tetes (0,05 ml) per 1 ml serum dan aduk rata dengan cara dikocok. Serum dibiarkan sampai eritrosit benar-benar mengendap, atau disentrifugasi setelah satu jam pada suhu kamar, setelah itu siap untuk diperiksa.
Cairan pengenceran dituangkan dalam volume 0,5 ml ke dalam deretan sumur di atas pelat polistiren. Selama studi pendahuluan serum, disarankan untuk mengujinya dengan mengatur reaksi pada baris pendek pelat (6 lubang). Jika antibodi terdeteksi dalam rangkaian pendek, serum diuji ulang dalam rangkaian pengenceran yang panjang (12 sumur). Setelah cairan pengenceran tumpah, tambahkan 0,5 ml serum uji dengan pengenceran 1:5 ke lubang pertama setiap baris (pendek atau panjang). Kemudian serum dengan volume yang sama dititrasi dengan pengenceran dua kali lipat. Jadi, pengenceran serum diperoleh dalam seri pendek dari 1:10 hingga 1:320, dan dalam seri panjang dari 1:10 hingga 1:20480. Setelah titrasi serum, satu tetes (0,05 ml) suspensi 2,5% eritrosit tersensitisasi yang berfungsi ditambahkan ke setiap sumur. Isi pelat dikocok hingga diperoleh suspensi yang homogen. Pelat dibiarkan pada suhu kamar di atas permukaan meja yang tidak bergerak. Pencatatan awal reaksi dilakukan setelah 2-3 jam, penentuan akhir titer dilakukan setelah sel darah merah benar-benar mengendap di dalam lubang. Kontrol berikut disediakan untuk reaksi: 1) serum uji yang diencerkan 1:10 dalam volume 0,5 ml + 1 tetes suspensi 2,5% eritrosit yang tidak peka; 2) pengenceran cairan dalam volume 0,5 ml + 1 tetes suspensi 2,5% eritrosit yang tidak peka; 3) pengenceran cairan dalam volume 0,5 ml + 1 tetes suspensi 2,5% eritrosit peka. Semua kontrol harus memberikan reaksi yang jelas negatif.
Akuntansi dan penilaian RPGA. Reaksinya dinilai dengan diagram berikut:
1) dengan tajam reaksi positif(++++) - sel darah merah jatuh ke dasar lubang dalam lapisan rata dalam bentuk "payung", yang sering kali memiliki pinggiran yang bergerigi;
2) reaksi positif (+++) - sel darah merah menutupi setidaknya 2/3 dasar sumur;
3) reaksi positif lemah (++) - aglutinatnya kecil dan terletak di tengah-tengah sumur;
4) reaksi yang meragukan (+) - di sekitar sedimen eritrosit di tengah-tengah sumur terdapat butiran aglutinat individu;
5) negatif (-) - di dasar lubang, sel darah merah mengendap dalam bentuk "kancing" atau cincin kecil dengan tepi halus dan berbatas tajam.
Titer serum diperhitungkan berdasarkan pengenceran serum terakhir, yang memberikan reaksi yang sangat jelas (minimal tiga plus). Pengenceran 1:100 atau lebih tinggi dianggap sebagai titer diagnostik; namun, seperti halnya RA, peningkatannya perlu dipantau.
RPGA untuk tularemia cukup spesifik dan dapat mendeteksi beberapa hal reaksi silang hanya dengan serum brucellosis. Perbedaan diagnosa dimungkinkan oleh tingginya titer dalam RPGA, yang secara signifikan lebih tinggi pada antigen homolog.
Teknik untuk menyiapkan RPHA dalam mikrovolume. RPGA dapat dilakukan dalam volume mikro menggunakan mikrotitrator tipe Takachi (atau pelat mikro dengan dasar bulat dengan mikropipet), yang memungkinkan titrasi bahan dalam volume 25 μl dan 50 μl. Teknik reaksi dan urutan semua operasi sama seperti saat mempelajari pelat polistiren. Namun, harus diingat bahwa sensitivitas metode mikro biasanya satu pengenceran (yaitu 2 kali) lebih rendah dibandingkan dengan metode makro.
Untuk mengatur reaksi dalam mikrotitrator, cairan pengenceran dalam volume 50 μl ditambahkan ke setiap sumur menggunakan pipet penetes. Kemudian menggunakan titrator dengan kepala 50 μl, serum uji dikumpulkan dengan cara merendam kepala di dalamnya. Pastikan cairan telah memenuhi kepala titrator. Tirator dengan serum dipindahkan ke sumur pertama dan menahannya posisi vertikal, lakukan beberapa gerakan rotasi perjalanan pulang pergi. Kemudian titrator dipindahkan ke sumur berikutnya dan manipulasi diulangi. Titrasi dapat dilakukan secara bersamaan dalam beberapa baris. Setelah seluruh rangkaian dititrasi, titrator dicuci dengan aquades (diganti 2 porsi) dengan gerakan memutar, air dikeluarkan dari kepala menggunakan kapas dan dibakar di atas api kompor.
Setelah titrasi, tambahkan 25 μl cairan diagnostik eritrosit ke dalam sumur. Konsentrasi diagnostik RPHA dalam mikrovolume harus 0,5% (yaitu, suspensi sel darah merah 2,5% juga diencerkan 5 kali). Setelah menambahkan sel darah merah, pelat harus dikocok sedikit sampai diperoleh suspensi yang homogen. Hasilnya dapat dicatat dalam waktu 1-1,5 jam, yang merupakan keunggulan signifikan RPGA dalam mikrotiter. Selain itu, teknik ini memerlukan sejumlah kecil seluruh bahan reaksi dan serum uji.
Reaksinya diperhitungkan menurut skema berikut:
1) “+” – hemaglutinasi lengkap, di mana sel darah merah jatuh ke dasar sumur dalam lapisan rata dalam bentuk “payung”, menempati setidaknya 2/3 bagian bawah;
2) "+-" - hemaglutinasi parsial, di mana sel darah merah turun ke bawah dalam bentuk cincin longgar berukuran kecil;
3) “-“ – tidak adanya hemaglutinasi, ketika sel darah merah turun ke bawah dalam bentuk kancing atau cincin kecil dengan tepi halus.
Spesifisitas hasil positif yang diperoleh pada RPHA dapat diuji menggunakan reaksi tiga komponen - reaksi penghambatan hemaglutinasi pasif (PHA).
Teknik untuk mengatur RTPGA. Reaksi ini digunakan untuk mengkonfirmasi kekhususan hasil RPGA positif ketika diragukan atau merupakan kepentingan epidemiologi tertentu. Mekanisme reaksinya adalah penghambatan spesifik hemaglutinasi ketika suspensi bakteri tularemia yang terbunuh ditambahkan ke dalam serum uji. Tiga komponen berinteraksi dalam reaksi: serum uji, antigen tularemia spesifik, dan diagnostik eritrosit antigenik RTPHA biasanya ditempatkan dalam deretan 7-8 sumur. Disarankan untuk menginstal RPGA berulang secara paralel dengan RTPGA. 0,25 ml cairan pengencer dituangkan ke dalam dua baris sumur, kemudian serum uji sebanyak 0,25 ml ditambahkan ke sumur pertama dari kedua baris dan dilakukan titrasi.Diperoleh dua baris pengenceran serum yang identik. Tambahkan 0,25 ml cairan pengencer ke seluruh sumur baris kedua, dan 0,25 ml suspensi bakteri tularemia ke dalam sumur baris pertama. Digunakan Tularemia diagnostikum (mengandung 25 miliar bakteri tularemia dalam 1 ml), sebelumnya diencerkan 50 kali. Suspensi ini mengandung 500 juta bakteri dalam 1 ml atau 125 juta dalam volume 0,25 ml. Setelah menambahkan antigen, pelat dibiarkan selama 1 jam pada suhu kamar, setelah itu ditambahkan satu tetes (0,05 ml) diagnostik eritrosit ke semua lubang di kedua baris, pelat dikocok dan dibiarkan di atas permukaan meja datar. Akuntansi dilakukan setelah 2-3 jam.
Akuntansi dan penilaian RTPGA. Jika serum uji mengandung antibodi tularemia spesifik, antibodi tersebut dinetralkan oleh antigen yang ditambahkan dan hemaglutinasi tidak akan terjadi pada baris pertama sumur, atau, dengan titer serum yang tinggi, hemaglutinasi akan diamati dalam jumlah yang lebih kecil (2-4). sumur daripada berturut-turut dengan RPHA. Dalam hal ini, kekhususan hasil telah dikonfirmasi. Jika hemaglutinasi dicatat di kedua baris, mis. Jika hasil RTPGA dan RPGA sama, hal ini menunjukkan tidak adanya antibodi tularemia dalam serum uji. Dalam hal ini, hasil utama RPGA dianggap tidak spesifik.
Teknik pementasan RTHG dalam mikrovolume. RTPGA, seperti RPGA, dapat dilakukan dalam mikrovolume menggunakan mikrotiter tipe Takachi. Untuk melakukan ini, tambahkan 0,25 μl cairan pengencer ke dalam lubang pelat mikro dalam dua baris yang masing-masing terdiri dari 7-8 lubang. Kemudian, dengan menggunakan titrator, 0,25 μl serum uji ditambahkan dan dititrasi pada kedua baris. Setelah itu, 25 μl antigen tularemia (konsentrasinya adalah 500 juta bakteri tularemia dalam 1 ml) ditambahkan ke setiap sumur di baris pertama, dan 25 μl cairan pengencer ditambahkan ke baris kedua. Pelat dibiarkan selama 1 jam pada suhu kamar, setelah itu 25 μl antigenic zritrocytic diagnostikum (konsentrasi 0,5%) ditambahkan ke semua sumur di kedua baris. Penghitungan dan evaluasi hasil dilakukan dengan cara yang sama seperti reaksi dalam volume makro.
Reaksi hemaglutinasi pasif) suatu metode untuk mendeteksi dan mengidentifikasi antigen atau antibodi, berdasarkan fenomena aglutinasi sel darah merah yang terjadi di hadapannya, pada permukaan yang sebelumnya telah diadsorpsi spesifik atau antigen yang sesuai.
1. Ensiklopedia kedokteran kecil. - M.: Ensiklopedia kedokteran. 1991-96 2. Pertama kesehatan. - M.: Ensiklopedia Besar Rusia. 1994 3. Kamus Ensiklopedis istilah medis. - M.: Ensiklopedia Soviet. - 1982-1984.
Lihat apa itu “Reaksi hemaglutinasi tidak langsung” di kamus lain:
reaksi hemaglutinasi tidak langsung- RNGA Tes laboratorium menggunakan diagnostik eritrosit. [Glosarium Inggris-Rusia tentang istilah-istilah dasar dalam vaksinologi dan imunisasi. Organisasi Kesehatan Dunia, 2009] Topik vaksinologi, imunisasi Sinonim RNGA EN... ... Panduan Penerjemah Teknis
- (RNHA; sinonim untuk reaksi hemaglutinasi pasif) suatu metode untuk mendeteksi dan mengidentifikasi antigen atau antibodi, berdasarkan fenomena aglutinasi eritrosit yang terjadi di hadapannya, pada permukaan yang sebelumnya teradsorpsi... .. . Kamus kedokteran besar
- (RPHA) lihat Reaksi hemaglutinasi tidak langsung... Kamus kedokteran besar
Halaman ini adalah glosarium. # A... Wikipedia
Singkatan dasar yang diadopsi dalam Kamus Ensiklopedia Kedokteran Hewan- a., aa, artena, arteriae aa ana (sama) Akademi Ilmu Kedokteran Uni Soviet Akademi Ilmu Kedokteran Uni Soviet Akademi Ilmu Pengetahuan Uni Soviet Akademi Ilmu Pengetahuan Bac. Bakteri Bacillus. Bakteri BSSR SSR Byelorusia c., berabad-abad. abad, abad v., vv. vena, venae VASKHNIL Ordo Seluruh Serikat Lenin dan... ...
Istilah ini memiliki arti lain, lihat Wabah. Distemper pada karnivora (penyakit Kare) menular akut atau subakut penyakit virus, dimanifestasikan oleh demam, radang selaput lendir hidung, lesi kulit, pusat ... ... Wikipedia
- (renes) organ ekskresi dan endokrin berpasangan yang mengatur homeostasis kimiawi tubuh melalui fungsi pembentukan urin. SKETSA FISIOLOGI ANATOMI Ginjal terletak pada ruang retroperitoneal (Ruang retroperitoneal) pada... ... Ensiklopedia kedokteran
I (trichinellosis; sinonim: trichinosis, “bengkak”) helminthiasis dari kelompok nematoda, ditandai dengan demam, mialgia, pembengkakan wajah, ruam kulit, eosinofilia darah, dan dalam kasus yang parah, lesi organ dalam dan pusat... ... Ensiklopedia kedokteran
- (nematodosis) kecacingan yang disebabkan oleh nematoda cacing gelang kelas Nematoda. Di antara penyakit kecacingan lainnya, N. punya nilai tertinggi dalam patologi manusia, kebanyakan adalah geohelminthiasis (lihat Helminthiasis); perkembangan telur atau larvanya... ... Ensiklopedia kedokteran
epididimitis menular- Beras. 1. Pembesaran testis kiri pada domba yang menderita epididimitis menular. Beras. 1. Pembesaran testis kiri pada domba yang menderita epididimitis menular. epididimitis menular pada domba (Epididymitis infectiosa arietum), infeksi kronis... ... Kamus ensiklopedis kedokteran hewan
Lihat Reaksi hemaglutinasi tidak langsung... Kamus kedokteran besar
Reaksinya diberikan:
1) untuk mendeteksi polisakarida, protein, ekstrak bakteri dan zat lain yang sangat tersebar, rickettsia dan virus, yang kompleksnya dengan aglutinin tidak dapat dilihat pada RA konvensional,
2) untuk mendeteksi antibodi dalam serum pasien terhadap zat yang sangat tersebar dan mikroorganisme kecil.
Aglutinasi tidak langsung, atau pasif, dipahami sebagai reaksi di mana antibodi berinteraksi dengan antigen yang telah teradsorpsi sebelumnya pada partikel inert (lateks, selulosa, polistiren, barium oksida, dll. atau sel darah merah domba, I(0)-golongan darah manusia)
Dalam reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA), sel darah merah. Sel darah merah yang mengandung antigen saling menempel di hadapan antibodi spesifik terhadap antigen ini dan mengendap. Eritrosit yang peka terhadap antigen digunakan dalam RPGA sebagai diagnostik eritrosit untuk mendeteksi antibodi (serodiagnosis). Jika sel darah merah mengandung antibodi (diagnostik antibodi eritrosit), sel tersebut dapat digunakan untuk mendeteksi antigen.
Beras. 3. Skema RPGA: sel darah merah (1), diisi dengan antigen (3), diikat oleh antibodi spesifik (4).
Memanggungkan. Serangkaian pengenceran serum secara serial disiapkan di dalam sumur pelat polistiren. Tambahkan 0,5 ml serum yang jelas-jelas positif ke sumur kedua dari belakang dan 0,5 ml larutan fisiologis (kontrol) ke sumur terakhir. Kemudian 0,1 ml diagnostik eritrosit encer ditambahkan ke semua sumur, dikocok dan ditempatkan dalam termostat selama 2 jam.
Akuntansi. DI DALAM kasus positif eritrosit mengendap di dasar lubang berupa lapisan sel rata dengan tepi terlipat atau bergerigi (payung terbalik), sebaliknya mengendap dalam bentuk kancing atau cincin.
Gambar.4. Akuntansi RNGA (RPGA).
Memperhitungkan hasil tes x-ray yang dilakukan untuk mendeteksi toksin botulinum.
Agen penyebab botulisme, Clostridium botulinum, menghasilkan racun dari tujuh serovar (A, B, C, D, E, F, G), tetapi serovar A, B, dan E lebih umum.Semua racun berbeda dalam sifat antigeniknya dan dapat dibedakan dalam reaksi menggunakan serum tipe spesifik. Untuk tujuan ini, reaksi hemaglutinasi pasif (tidak langsung) dapat dilakukan dengan serum pasien, yang mengasumsikan adanya toksin, dan sel darah merah yang diisi dengan antibodi serum antibotulinum antitoksik tipe A, B, E. Normal serum berfungsi sebagai kontrol.
Beras. 3. Pernyataan dan hasil RNGA.
Akuntansi. Pada kasus positif, sel darah merah mengendap di dasar lubang berupa lapisan sel rata dengan tepi terlipat atau bergerigi (payung terbalik); pada kasus negatif, mengendap dalam bentuk kancing atau cincin. .
Kesimpulan: Toksin botulinum tipe E terdeteksi pada serum pasien.
Reaksi penghambatan hemaglutinasi (HRT).
Beras. 8. Reaksi penghambatan hemaglutinasi (HAI) (skema).
Prinsip reaksinya didasarkan pada kemampuan AT untuk mengikat berbagai virus dan menetralisirnya, sehingga tidak mungkin terjadi aglutinasi sel darah merah. Secara visual, efek ini memanifestasikan dirinya dalam “penghambatan” hemaglutinasi. RTGA digunakan dalam diagnosis infeksi virus untuk mengidentifikasi antihemagglutinin spesifik dan mengidentifikasi berbagai virus berdasarkan hemagglutininnya, yang menunjukkan sifat Ag.
Pengetikan virus dilakukan dalam reaksi RTGA dengan sekumpulan serum tipe tertentu. Hasil reaksi diperhitungkan dengan tidak adanya hemaglutinasi. Subtipe virus tipe A dengan antigen H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 dan lain-lain dapat dibedakan dalam RTGA dengan sekumpulan serum spesifik tipe homolog
Beras. 9. Hasil RTGA untuk pengetikan virus influenza
Legenda: - penghambatan hemaglutinasi (tombol); - hemaglutinasi (payung).
Kesimpulan: Materi yang diteliti mengandung virus influenza tipe A dengan antigen H3N2
Reaksi hemaglutinasi tidak langsung (pasif) (IRHA) didasarkan pada fakta bahwa sel darah merah, jika antigen terlarut teradsorpsi pada permukaannya, memperoleh kemampuan untuk mengaglutinasi ketika berinteraksi dengan antibodi terhadap antigen yang teradsorpsi. Diagram RNGA ditunjukkan pada Gambar. 34. RNGA banyak digunakan dalam diagnosis sejumlah infeksi.
Beras. 34. Skema reaksi hemaglutinasi pasif (RPHA). A - memperoleh diagnostik eritrosit: B - RPGA: 1 - eritrosit: 2 - antigen yang sedang dipelajari; 3 - diagnostik eritrosit; 4 - antibodi terhadap antigen yang diteliti: 5 - menggumpal
Menyiapkan reaksi. Serum uji dipanaskan selama 30 menit pada suhu 56° C, diencerkan secara berurutan dengan perbandingan 1:10 - 1:1280 dan dituangkan ke dalam 0,25 ml ke dalam tabung reaksi atau sumur, di mana 2 tetes eritrosit diagnostikum (eritrosit dengan antigen teradsorpsi di atasnya) ) kemudian ditambahkan.
Kontrol: suspensi diagnostik eritrosit dengan serum imun yang diketahui; penangguhan diagnostikum dengan serum normal; suspensi sel darah merah normal dengan serum uji. Pada kontrol pertama seharusnya terjadi aglutinasi, pada kontrol kedua dan ketiga tidak terjadi.
Dengan menggunakan RIGA, Anda dapat mendeteksi antigen yang tidak diketahui jika antibodi yang diketahui diserap ke dalam sel darah merah.
Reaksi hemaglutinasi dapat dilakukan dalam volume 0,025 ml (metode mikro) menggunakan mikrotitrator Takachi.
1. Apa yang ditunjukkannya? hasil positif RHA antara sel darah merah dan bahan yang diuji keberadaan virusnya?
2. Akankah aglutinasi sel darah merah terjadi jika virus dan serum yang sesuai ditambahkan ke dalamnya? Apa nama reaksi yang mengungkap fenomena tersebut?
Latihan
Memperhitungkan dan mendaftarkan hasil RIGA.
Reaksi presipitasi
Dalam reaksi presipitasi, kompleks imun spesifik diendapkan, terdiri dari antigen terlarut (lisat, ekstrak, hapten) dan antibodi spesifik dengan adanya elektrolit.
Cincin atau endapan keruh yang terbentuk akibat reaksi ini disebut endapan. Reaksi ini berbeda terutama dari reaksi aglutinasi dalam ukuran partikel antigen.
Reaksi pengendapan biasanya digunakan untuk menentukan antigen dalam diagnosis sejumlah infeksi ( antraks, meningitis, dll.); dalam kedokteran forensik - untuk menentukan jenis darah, sperma, dll.; dalam penelitian sanitasi dan higienis - saat melakukan pemalsuan produk; dengan bantuannya, hubungan filogenetik hewan dan tumbuhan ditentukan. Untuk reaksi yang Anda butuhkan:
1. Antibodi (presipitin) - serum imun dengan titer tinggi antibodi (tidak lebih rendah dari 1:100000). Titer serum pengendap ditentukan oleh pengenceran tertinggi antigen yang bereaksi. Serum biasanya digunakan tanpa dilarutkan atau dalam pengenceran 1:5 - 1:10.
2. Antigen - zat terlarut yang bersifat protein atau polisakarida lipoid (antigen lengkap dan hapten).
3. Larutan isotonik.
Metode utama untuk melakukan reaksi pengendapan adalah: reaksi pengendapan cincin dan reaksi pengendapan dalam agar (gel).
Perhatian! Semua komponen yang terlibat dalam reaksi pengendapan harus benar-benar transparan.
Reaksi pengendapan cincin. Dengan menggunakan pipet Pasteur, tambahkan 0,2-0,3 ml (5-6 tetes) serum ke dalam tabung pengendap (serum tidak boleh mengenai dinding tabung). Antigen dalam volume yang sama dilapiskan dengan hati-hati ke dalam serum, dituangkan dengan pipet Pasteur tipis di sepanjang dinding tabung reaksi. Tabung reaksi disimpan dalam posisi miring. Jika dilapisi dengan benar, harus ada batas yang jelas antara serum dan antigen. Dengan hati-hati, agar cairan tidak tercampur, letakkan tabung reaksi pada dudukannya. Jika reaksinya positif, “cincin” keruh terbentuk pada antarmuka antigen dan antibodi - endapan (lihat Gambar 48).
Reaksi tersebut disertai dengan sejumlah kontrol (Tabel 18). Urutan penambahan bahan reaksi ke dalam tabung reaksi sangatlah penting. Anda tidak dapat melapisi serum pada antigen (dalam kontrol - pada larutan isotonik), karena kepadatan relatif serum lebih besar, serum akan tenggelam ke dasar tabung reaksi, dan batas antara cairan tidak akan terlihat.
Tabel 18. Skema pengaturan reaksi pengendapan cincin
Catatan. + adanya “cincin”; - tidak adanya "cincin".
Hasilnya dicatat setelah 5-30 menit, dalam beberapa kasus setelah satu jam, seperti biasa dimulai dengan kontrol. “Cincin” pada tabung reaksi ke-2 menunjukkan kemampuan serum imun untuk masuk reaksi spesifik dengan antigen yang sesuai. Seharusnya tidak ada “cincin” di 3-5 tabung reaksi - tidak ada antibodi dan antigen yang berhubungan satu sama lain. Sebuah "cincin" pada tabung pertama - hasil reaksi positif - menunjukkan bahwa antigen yang diuji sesuai dengan serum imun yang diambil, tidak adanya "cincin" ("cincin" hanya pada tabung ke-2) menunjukkan ketidakkonsistenannya - negatif hasil reaksi.
Reaksi pengendapan dalam agar (gel). Keunikan reaksinya adalah interaksi antigen dan antibodi terjadi dalam media padat, yaitu dalam gel. Endapan yang dihasilkan memberikan garis keruh pada ketebalan medium. Tidak adanya pita menunjukkan adanya ketidaksesuaian antar komponen reaksi. Reaksi ini banyak digunakan dalam penelitian biomedis, khususnya dalam studi pembentukan toksin pada agen penyebab difteri.
Pertanyaan kontrol
1. Apa perbedaan utama antara reaksi aglutinasi dan presipitasi?
2. Mengapa bahan yang keruh tidak dapat digunakan dalam reaksi pengendapan?
Latihan
1. Siapkan reaksi pengendapan cincin dan buat sketsa hasilnya.
2. Pelajari sifat interaksi antigen dengan antibodi pada reaksi pengendapan pada agar, buat sketsa hasilnya (dapatkan cangkir dari gurumu).
Reaksi lisis (sitolisis imun)
Lisis imun adalah pembubaran sel di bawah pengaruh antibodi ketika partisipasi wajib melengkapi. Untuk reaksi yang Anda butuhkan:
1. Antigen - mikroba, sel darah merah atau sel lainnya.
2. Antibodi (lisin) - serum imun, lebih jarang serum pasien. Serum bakteriolitik mengandung antibodi yang terlibat dalam lisis bakteri; hemolitik - hemolisin yang mendorong lisis sel darah merah; untuk lisis spirochetes, diperlukan spirochetolysin, sel - itolysin, dll.
3. Pelengkap. Pelengkap terbanyak dalam serum marmut. Serum ini (campuran beberapa hewan) biasanya digunakan sebagai pelengkap. Pelengkap segar (asli) tidak stabil dan mudah rusak karena pemanasan, pengocokan, atau penyimpanan, sehingga dapat digunakan tidak lebih dari dua hari setelah diterima. Untuk mengawetkan komplemen, 2% ditambahkan ke dalamnya asam borat dan 3% natrium sulfat. Pelengkap ini dapat disimpan pada suhu 4°C hingga dua minggu. Pelengkap kering paling sering digunakan. Sebelum digunakan, dilarutkan dalam larutan isotonik hingga volume aslinya (ditunjukkan pada label).
4. Larutan isotonik.
Reaksi hemolisis(Tabel 19). Untuk reaksi yang Anda butuhkan:
1. Antigen - suspensi 3% eritrosit domba yang dicuci dengan takaran 0,3 ml sedimen eritrosit dan 9,7 ml larutan isotonik.
2. Antibodi - serum hemolitik (hemolysin) terhadap eritrosit domba; biasanya disiapkan dalam produksi, diliofilisasi dan titernya tertera pada label.
Titer hemolisin adalah pengenceran serum tertinggi di mana hemolisis lengkap dari suspensi 3% sel darah merah terjadi dengan adanya komplemen. Untuk reaksi hemolisis, hemolisin diambil dalam titer tiga kali lipat, yaitu diencerkan 3 kali lebih sedikit dibandingkan sebelum titer. Misalnya, dengan titer serum 1:1200, serum diencerkan 1:400 (0,1 ml serum* dan 39,9 ml larutan isotonik). Hemolisin yang berlebihan diperlukan karena sebagian dapat diadsorpsi oleh komponen reaksi lainnya.
* (Anda tidak boleh mengonsumsi kurang dari 0,1 ml serum - keakuratan pengukuran akan menurun.)
3. Komplemen diencerkan 1:10 (0,2 ml komplemen dan 1,8 ml larutan isotonik).
4. Larutan isotonik.
Tabel 19. Skema reaksi hemolisis
Akuntansi untuk hasil. Jika reaksi dilakukan dengan benar, hemolisis akan terjadi pada tabung reaksi pertama - isinya menjadi transparan. Pada kontrol, cairan tetap keruh: pada tabung ke-2 tidak terdapat komplemen yang cukup untuk terjadinya hemolisis, pada tabung ke-3 tidak terdapat hemolisin, pada tabung ke-4 tidak terdapat hemolisin maupun komplemen, pada tabung ke-5 antigen tidak ada. tidak cocok dengan antibodinya,
Jika perlu, serum hemolitik dititrasi sesuai skema berikut (Tabel 20).
Sebelum titrasi, siapkan pengenceran serum awal 1:100 (0,1 ml serum dan 9,9 ml larutan isotonik), dari mana pengenceran yang diperlukan, Misalnya:
Dari pengenceran tersebut, tambahkan 0,5 ml serum ke dalam tabung reaksi titrasi, seperti ditunjukkan pada Tabel. 20.
Tabel 20. Skema titrasi serum hemolitik (hemolisin)
Dalam contoh yang diberikan dalam tabel. 20, titer serum hemolitik adalah 1:1200.
Bila menggunakan serum hemolitik segar, serum tersebut harus dinonaktifkan untuk menghancurkan komplemen yang ada di dalamnya. Untuk melakukan ini, dipanaskan selama 30 menit pada suhu 56 ° C dalam penangas air atau dalam inaktivator dengan termostat. Metode terakhir lebih baik: ini menghilangkan kemungkinan panas berlebih pada whey, yaitu denaturasinya. Serum yang terdenaturasi tidak cocok untuk pengujian.
Reaksi bakteriolisis. Dalam reaksi ini, komplemen melisiskan bakteri dengan adanya serum yang sesuai (homolog). Skema reaksi pada dasarnya mirip dengan skema reaksi hemolisis. Perbedaannya adalah setelah inkubasi dua jam, semua tabung reaksi dimasukkan ke dalam cawan Petri dengan media yang sesuai untuk mikroorganisme yang dibawa ke dalam percobaan untuk mengetahui apakah mikroorganisme tersebut mengalami lisis. Jika percobaan dilakukan dengan benar, kultur dari 2-5 tabung reaksi (kontrol) akan menunjukkan pertumbuhan yang melimpah. Kurangnya pertumbuhan atau lemahnya pertumbuhan inokulasi dari tabung reaksi pertama (percobaan) menunjukkan kematian mikroba, yaitu homolog dengan antibodi.
Perhatian! Reaksi bakteriolisis harus dilakukan dalam kondisi aseptik.
Pertanyaan kontrol
1. Apa yang akan terjadi pada sel darah merah jika air suling digunakan sebagai pengganti larutan natrium klorida isotonik? Apa dasar dari fenomena ini?
2. Reaksi apa yang terjadi jika eritrosit berinteraksi dengan serum imun homolog tanpa adanya komplemen?
Latihan
Atur reaksi hemolisis. Catat dan buat sketsa hasilnya.
Informasi terkait.
