Reaksi aglutinasi (dari lat. aglutinasi- perekatan) - perekatan sel darah (bakteri, sel darah merah, dll.) dengan antibodi dengan adanya elektrolit.
Reaksi aglutinasi memanifestasikan dirinya dalam bentuk serpihan atau sedimen yang terdiri dari sel-sel (misalnya, bakteri) yang “direkatkan” oleh antibodi (Gbr. 7.37). Reaksi aglutinasi digunakan untuk: menentukan patogen yang diisolasi dari pasien; penentuan antibodi dalam serum darah pasien; penentuan golongan darah.
Beras. 7.37a,b. Reaksi aglutinasi denganIgM-antibodi (a) danIgG-antibodi (b)
1. Penentuan patogen yang diisolasi dari pasien Perkiraan reaksi aglutinasi pada kaca (Gbr. 7.38). Suspensi bakteri yang diisolasi dari pasien ditambahkan ke setetes serum aglutinasi (pengenceran 1:20). Endapan flokulan terbentuk.
Beras. 7.38.
Reaksi aglutinasi ekstensif dengan patogen yang diisolasi dari pasien (Gbr. 7.39). Suspensi bakteri yang diisolasi dari pasien ditambahkan ke pengenceran serum aglutinasi.
Beras. 52
2. Penentuan antibodi dalam serum darah pasien
Reaksi aglutinasi terperinci dengan serum darah pasien (Gbr. 7.39). Diagnosticum ditambahkan ke pengenceran serum pasien.
- Aglutinasi dengan O-diagnosticum (bakteri dibunuh oleh panas, mempertahankan antigen O) terjadi dalam bentuk aglutinasi berbutir halus.
- Aglutinasi dengan H-diagnosticum (bakteri yang dibunuh oleh formaldehida, mempertahankan antigen H flagellar) berukuran besar dan terjadi lebih cepat.
3. Reaksi aglutinasi untuk menentukan golongan darah Reaksi aglutinasi untuk menentukan golongan darah digunakan untuk membentuk sistem ABO (Tabel b) dengan menggunakan aglutinasi eritrosit dengan antibodi serum imun terhadap antigen golongan darah A (I), B (III). Kontrolnya adalah: serum yang tidak mengandung antibodi, mis. golongan darah serum AB (IV); antigen yang terkandung dalam sel darah merah golongan A (II), B (III). Kontrol negatif tidak mengandung antigen, yaitu menggunakan eritrosit golongan O (I).
Tabel 7.6. Penentuan golongan darah ABO
| Hasil reaksi |
Kelompok |
|
|
termasuk |
||
|
diteliti |
||
|
sel darah merah dengan |
serum (plasma) |
|
|
standar |
dengan standar |
|
|
serum | ||
Reaksi aglutinasi terperinci (RA). Untuk menentukan AT dalam serum darah pasien, a reaksi aglutinasi ekstensif (RA). Untuk melakukan ini, diagnostikum ditambahkan ke serangkaian pengenceran serum darah - suspensi mikroorganisme atau partikel yang terbunuh dengan Ag yang diserap. Pemberian pengenceran yang maksimal aglutinasi Ag disebut titer serum.
Jenis reaksi aglutinasi (RA) untuk mendeteksi AT - tes tetes darah untuk tularemia (dengan diagnostik diterapkan pada setetes darah dan munculnya aglutinasi keputihan yang terlihat) dan tes Huddleson untuk brucellosis (dengan diagnostikum diwarnai dengan gentian violet diterapkan pada setetes darah serum).
Perkiraan reaksi aglutinasi (RA)
Untuk mengidentifikasi mikroorganisme yang diisolasi, perkiraan RA ditempatkan pada slide kaca. Untuk melakukan ini, kultur patogen ditambahkan ke setetes antiserum diagnostik standar (diencerkan 1:10, 1:20). Pada hasil positif melakukan reaksi rinci dengan meningkatkan pengenceran antiserum.
Reaksi dianggap positif jika aglutinasi diamati dalam pengenceran mendekati titer serum diagnostik.
OAS. O-Ags somatik stabil terhadap panas dan tahan perebusan selama 2 jam, bila berinteraksi dengan AT membentuk agregat berbutir halus.
Mengomel. N-Ag (flagellata) bersifat termolabil dan cepat terdegradasi pada suhu 100 °C, serta di bawah pengaruh etanol. Dalam reaksi dengan H-antiserum, setelah 2 jam inkubasi, terbentuk serpihan besar yang lepas (dibentuk oleh bakteri yang menempel pada flagela).
Vi-Ar bakteri tifoid relatif stabil terhadap panas (tahan suhu 60-62 °C selama 2 jam); Ketika diinkubasi dengan antiserum Vi, terbentuk aglutinat berbutir halus.
Reaksi hemaglutinasi langsung
Yang paling sederhana reaksi - aglutinasi sel darah merah, atau hemaglutinasi, digunakan untuk menentukan golongan darah dalam sistem ABO. Untuk menentukan aglutinasi(atau kekurangannya) gunakan antisera standar dengan aglutinin anti-A dan anti-B. Reaksi tersebut disebut langsung, karena Ags yang diteliti merupakan komponen alami sel darah merah.
Umum dengan hemaglutinasi langsung hemaglutinasi virus memiliki mekanisme. Banyak virus yang mampu mengaglutinasi eritrosit burung dan mamalia secara spontan; penambahannya pada suspensi eritrosit menyebabkan pembentukan agregat dari virus tersebut.
Reaksi aglutinasi Reaksi aglutinasi
(RA) - metode mengidentifikasi dan hitungan Ag dan At, berdasarkan kemampuannya membentuk aglomerat yang terlihat dengan mata telanjang. Di departemen penyakit menular. penyakit atau untuk tujuan lain digunakan untuk mengidentifikasi mikroba dan sel yang tidak diketahui, untuk menentukan keberadaan dan jumlah Ab dalam darah dan cairan lainnya. Prinsip penentuan didasarkan pada kekhususan interaksi antara Ag dan Ab dan terdiri dari mencari yang diketahui dari yang tidak diketahui. Ada banyak pilihan untuk RA: kuantitatif dan kualitatif, metode tabung reaksi dan kaca, volumetrik dan tetesan, konvensional, dipercepat dan cepat. Untuk mementaskan RA, Anda memerlukan: 1) s-ka darah. Pada varian penentuan jenis (var) bakteri, digunakan uji aglutinasi industri yang dilakukan dengan mengimunisasi kelinci. Pada varian dengan penentuan tipe Ab, sampel darah diambil dari tes tersebut. manusia atau hewan. Solusinya harus steril dan bebas dari partikel tersuspensi. Siapkan pengenceran dasar dalam larutan garam. Ini harus 2-4 kali lebih rendah dari titer diagnostik penyakit ini; 2) Agustus. Dalam versi reaksi dengan penentuan tipe Ab, kit diagnostik industri digunakan; dalam varian dengan penentuan Ag, diagnostik dibuat sendiri dalam bentuk suspensi 1-3 miliar dalam larutan garam uji agar-agar (lebih jarang kaldu) selama 18-20 jam. mikroba diinaktivasi dengan pemanasan dalam penangas air pada suhu 70°C selama 1 jam atau dengan inkubasi 24 jam pada suhu 37°C dengan formaldehida (konsentrasi akhir 0,2%); 3) elektrolit dalam bentuk larutan garam. Teknik pementasan tabung serial volumetrik RA untuk menentukan titer Ab pada s-ki: beberapa baris pengenceran kerja dibuat dari pengenceran utama s-ki. Jumlah baris tergantung pada jumlah diagnostik yang dimasukkan ke dalam percobaan; jumlah dan faktor pengenceran ditentukan oleh titer diagnostik penyakit yang dicurigai. Seri tersebut paling sedikit harus mengandung pengenceran yang sesuai dengan titer Ab diagnostik, dua pengenceran di bawah dan dua pengenceran di atasnya. misalnya, jika titer diagnostik adalah 1:100, maka dengan metode volumetrik penentuan stadium RA pengenceran berikut harus disiapkan: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; dengan infus metode ini, pengenceran pertama (1:25) tidak diperlukan, tetapi diperlukan pengenceran lain yang lebih tinggi - 1:800. penelitian ilmiah s-ku dititrasi menjadi reaksi negatif. Pengencerannya dilakukan sebagai berikut: 0,25 ml larutan garam dituangkan ke dalam semua tabung reaksi, kecuali tabung pertama, bila reaksi dilakukan dalam volume 0,5 ml, dan 0,5 ml bila reaksi dilakukan dalam volume 1. ml. Tuang 0,25 (0,5) ml pengenceran utama ke dalam tabung reaksi ke-1 dan ke-2, dari tabung reaksi ke-2, ke dalam volume potongan dan pembiakan sk dan ditingkatkan 2 kali lipat, 0,25 (0,5) ml dipindahkan ke tanggal 3, dari tanggal 3 ke tanggal 4, dst. yang terakhir, dari potongan, 0,25 (0,5) ml dituangkan ke dalam semuanya untuk menyeimbangkan volume. Setiap pengenceran dilakukan dengan menggunakan pipet terpisah. Jika beberapa diagnostik diambil dalam percobaan, maka untuk masing-masing diagnostik, rangkaian pengencerannya sendiri disiapkan dengan cara yang sama. Diagnosticum ditambahkan ke setiap pengenceran tabung reaksi dalam volume yang sama dengan volume tabung reaksi, sehingga pengenceran dalam setiap tabung reaksi menjadi dua kali lipat. Percobaan ini sesuai dengan kontrol s-ki (0,25 - 0,5 ml pengenceran utama s-ki dan jumlah larutan garam yang sama) dan kontrol Ag (0,25 - 0,5 ml diagnostikum dan jumlah larutan garam yang sama). Jika beberapa diagnostikum digunakan dalam percobaan, maka masing-masing diagnostik memiliki kontrol antigennya sendiri. Rak yang berisi tabung reaksi dikocok dengan baik dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 4 jam, kemudian dibiarkan pada suhu kamar sampai keesokan harinya, setelah itu PA dicatat berdasarkan jumlah sedimen dan derajat pembersihan. cairan. Penentuan indikator-indikator ini, tergantung pada sifat aglutinat, dilakukan dengan mata telanjang pada latar belakang gelap, dalam aglutinoskop atau pada permukaan cekung cermin mikroskop. Penghitungan dimulai dengan kontrol: kontrol C harus transparan, Ag harus berawan merata (setelah mengocok tabung). Jika kontrolnya bagus, tentukan keberadaan dan derajat aglutinasi di semua tabung reaksi, yang ditandai dengan nilai plus: sedimen besar dan cairan jernih sepenuhnya - 4 nilai plus; sedimen besar dan pembersihan cairan tidak lengkap - 3 plus; sedimen yang terlihat dan pembersihan cairan yang nyata adalah 2 kelebihan. Setelah itu ditentukan titernya: pengenceran tertinggi dengan intensitas aglutinasi minimal 2 plus. Penelitian judul s-ki dibandingkan dengan titer diagnostik penyakit ini. Jika titernya diperiksa. s-ki 2 kali lebih rendah dari nilai diagnostik, reaksinya dinilai meragukan; jika titernya sama diagnostik - bagaimana positif lemah; jika 2-4 kali lebih tinggi maka dianggap positif; jika 8 kali atau lebih tinggi dianggap positif tajam. Dengan tersebar luasnya Ab orang sehat Untuk menilai RA digunakan peningkatan titer Ab. Untuk menentukan jenis Ar pada serial RA, jumlah baris harus sesuai dengan nomor yang diambil untuk identifikasi tes diagnostik. Dari pengenceran utama uji diagnostik, serangkaian pengenceran dua kali lipat berturut-turut dibuat dengan cara yang sama seperti pada RA untuk menentukan titer Ab. Faktor pengenceran bergantung pada titer uji aglutinasi. Dalam percobaan, diperlukan pengenceran yang sama dengan titer uji, serta 2, 4, 6, 8 kali lebih rendah dari itu. Misalnya, jika titer uji diagnostik adalah 1 3200, maka sebaiknya menggunakan pengenceran 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Volume Ag yang diuji sama ditambahkan ke pengenceran uji, sehingga terjadi pengenceran uji diagnostik. pengujian meningkat 2 kali lipat. 2 kontrol pengujian dan Ag ditambahkan ke dalam percobaan. Jika dalam percobaan beberapa s-k terlibat, maka masing-masing memerlukan kontrolnya sendiri. Setelah reaksi selesai, dudukan diguncang kuat-kuat dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C. Hasilnya diperhitungkan seperti dijelaskan di atas. Evaluasi reaksi memiliki ciri-ciri. Untuk menarik kesimpulan tentang kepatuhan penelitian. Ag yang dimasukkan ke dalam percobaan, titer reaksi harus sesuai dengan setidaknya setengah titer uji diagnostik standar.Titer 1 4 dan di bawahnya dianggap sebagai reaksi kelompok Tetes md pementasan RA berbeda dengan volumetrik karena s-ku diencerkan dalam volume 1 ml, Ag digunakan dalam konsentrasi yang lebih tinggi (10 miliar/ml) dan ditambahkan 1 - 2 diteteskan ke dalam tabung reaksi Pengenceran obat setelah penambahan Ag dianggap tidak berubah, jika tidak, metode pengaturan, pencatatan dan evaluasi serupa dengan metode volumetrik
(Sumber : Kamus Istilah Mikrobiologi)
STUDI IMUNOMIKROBIOLOGIS
Metode imunologi digunakan untuk memecahkan banyak masalah:
1. Penilaian kondisi sistem imun orang ( status kekebalan) menurut definisi kuantitatif dan karakteristik fungsional sel sistem imun dan produknya.
2. Penentuan komposisi dan karakteristik jaringan manusia: golongan darah, faktor Rh, antigen transplantasi.
3. Diagnosis penyakit menular dan resistensi terhadapnya dengan mendeteksi dan menetapkan titer antibodi (serodiagnosis), mengidentifikasi antigen patogen dalam tubuh, dan menentukan reaksi seluler terhadap antigen tersebut.
4. Identifikasi seroid kultur bakteri dan virus yang diisolasi dari tubuh manusia dan hewan.
5. Deteksi pada tubuh manusia dan dalam lingkungan luar zat apa pun yang memiliki sifat antigenik atau hapten (hormon, enzim, racun, obat-obatan, obat-obatan, dll.).
6. Identifikasi kondisi imunopatologi, alergi, transplantasi dan reaksi antitumor.
Proses interaksi antara antigen dan antibodi reaksi serologis terjadi dalam dua fase:
1) spesifik- fase interaksi di mana terjadi kombinasi komplementer dari pusat aktif antibodi (paratop) dan epitop antigen. Biasanya fase ini berlangsung beberapa detik atau menit;
2) tidak spesifik- fase manifestasi, ditandai tanda-tanda eksternal pembentukan kompleks imun. Fase ini dapat berkembang dari beberapa menit hingga beberapa jam.
Interaksi spesifik optimal antibodi dengan antigen terjadi pada larutan isotonik dengan pH mendekati netral. Reaksi antigen-antibodi dalam sistem in vitro dapat disertai dengan terjadinya beberapa fenomena
· aglutinasi,
· curah hujan,
· lisis.
Manifestasi eksternal reaksi tergantung pada sifat fisikokimia antigen (ukuran partikel, keadaan fisik), kelas dan jenis antibodi (lengkap dan tidak lengkap), serta kondisi percobaan (konsistensi sedang, konsentrasi garam, pH, suhu).
Polivalensi antigen dan antibodi memastikan pembentukan agregat yang terlihat dengan mata telanjang. Hal ini terjadi sesuai dengan teori pembentukan jaringan, yang menyatakan bahwa molekul antibodi dan antigen lain secara berurutan melekat pada kompleks antigen-antibodi yang dihasilkan. Akibatnya, struktur jaringan terbentuk, yang berubah menjadi agregat yang mengendap. Sifat dan tingkat keparahan reaksi bergantung pada rasio kuantitatif antigen dan antibodi. Reaksi paling intens terjadi ketika reagen berada dalam proporsi yang setara.
Prasyarat pembentukan kisi (jaringan) - adanya lebih dari tiga determinan antigenik untuk setiap molekul antigen dan dua pusat aktif untuk setiap molekul antibodi. Molekul antigen adalah simpul kisi, dan molekul antibodi adalah penghubung. Wilayah rasio optimal (zona ekivalen) konsentrasi antigen dan antibodi, ketika antigen bebas maupun antibodi bebas tidak terdeteksi dalam supernatan setelah pembentukan sedimen.
Agregat yang dapat mengendap terbentuk ketika antigen bergabung dengan antibodi lengkap. Antibodi yang tidak lengkap(monovalen) tidak menyebabkan terbentuknya struktur jaringan dan agregat besar. Untuk mendeteksi antibodi tersebut, gunakan metode khusus berdasarkan penggunaan antiglobulin (reaksi Coombs).
Reaksi serologis, karena spesifisitas dan sensitivitasnya yang tinggi, digunakan untuk mendeteksi dan mengukur antigen dan antibodi. Jumlah imunoreagen dalam reaksi dinyatakan dengan titer - pengenceran maksimum serum atau antigen di mana reaksi masih diamati.
Reaksi serologis di laboratorium mikrobiologi dan imunologi digunakan untuk dua tujuan:
1) untuk seroidentifikasi mikroorganisme, toksin, antigen secara umum menggunakan antibodi yang diketahui (serum diagnostik imun),
2) untuk serodiagnosis - menentukan sifat antibodi dalam serum darah pasien terhadap bakteri, virus, dan lebih jarang penyakit menular lainnya dengan menggunakan antigen yang diketahui (diagnosticum).
Untuk menentukan generik, spesies dan jenis antigen, diperlukan tes imun yang diketahui. serum diagnostik. Mereka diperoleh dengan pemberian berulang pada hewan (biasanya kelinci) dengan peningkatan dosis mikroorganisme mati atau hidup, produk pembusukannya, racun yang dinetralkan atau asli. Setelah siklus imunisasi hewan tertentu, dilakukan pertumpahan darah besar-besaran atau pendarahan total pada hewan. Darah yang dikumpulkan dalam wadah steril terlebih dahulu dimasukkan ke dalam termostat pada suhu 37°C selama 4 - 6 jam untuk mempercepat pembekuan, kemudian dimasukkan ke dalam lemari es selama sehari. Serum transparan yang dihasilkan disedot ke dalam wadah steril, ditambahkan bahan pengawet, ditentukan titer antibodi, diperiksa sterilitasnya dan dituangkan ke dalam ampul.
Digunakan tidak terserap Dan teradsorpsi serum diagnostik. Serum yang tidak teradsorpsi memiliki titer tinggi antibodi, tetapi mampu memberikan reaksi kelompok (silang).
Serum yang teradsorpsi dicirikan oleh spesifisitas tindakan yang ketat (hanya bereaksi dengan antigen homolog). Serum yang mengandung antibodi terhadap satu antigen tertentu disebut monoreseptor.
Mereka juga memproduksi serum berlabel fluorokrom, enzim, dan radioisotop, yang memungkinkan untuk mendeteksi jejak antigen dengan tingkat akurasi yang tinggi.
Suspensi bakteri hidup atau mati, produk pemecahannya, racun, dan virus digunakan sebagai antigen (diagnosticums) dalam reaksi serologis. Dalam beberapa kasus, ekstrak atau antigen yang diisolasi secara kimia dari mikroorganisme dan jaringan hewan digunakan.
Semua metode imunomimikrobiologi dapat dibagi menjadi 3 kelompok:
1) berdasarkan interaksi langsung antigen dengan antibodi(fenomena aglutinasi, presipitasi, hemaglutinasi, imobilisasi, dll);
2) berdasarkan interaksi yang dimediasi antigen dengan antibodi(reaksi hemaglutinasi tidak langsung, koaglutinasi, aglutinasi lateks, aglomerasi karbon, aglutinasi bentonit, fiksasi komplemen, dll.);
3) menggunakan diberi label antibodi atau antigen(metode antibodi fluoresen, imunosorben terkait-enzim dan radioimunoassay dan metode lainnya).
REAKSI AGLUTINASI
Reaksi ini melibatkan antigen dalam bentuk partikel (sel mikroba, sel darah merah dan antigen sel darah lainnya), yang direkatkan oleh antibodi dan mengendap.
Untuk melakukan reaksi aglutinasi(RA) dibutuhkan tiga komponen: 1) antigen (aglutinogen);
2) antibodi (aglutinin)
3) elektrolit (larutan natrium klorida isotonik).
Perkiraan reaksi aglutinasi (RA)
Indikatif, atau pelat, RA ditempatkan pada kaca objek pada suhu kamar. Untuk melakukannya, gunakan pipet Pasteur untuk mengoleskan setetes serum dengan pengenceran 1:10 hingga 1:20 dan setetes kontrol larutan natrium klorida isotonik secara terpisah ke dalam gelas. Koloni atau kultur bakteri harian (setetes diagnostikum) dimasukkan ke dalam loop bakteriologis dan dicampur secara menyeluruh. Reaksi diperhitungkan secara visual setelah beberapa menit, terkadang menggunakan kaca pembesar (x5). Dengan RA positif, munculnya serpihan besar dan kecil pada tetesan serum dicatat, dengan RA negatif, serum tetap keruh secara merata.
Reaksi aglutinasi terperinci untuk mengidentifikasi titer antibodi spesifik pada pasien.
RA lengkap untuk serodiagnosis dibuat dalam serum pasien. Ini juga diencerkan dalam larutan natrium klorida isotonik dari 1:50 - 1:100 hingga 1:800 atau 1:1600. Karena titer serum yang lebih rendah mungkin mengandung aglutinin normal yang ditemukan pada orang sehat atau pasien dengan diagnosis lain (titer diagnostik). Sebagai antigen dalam reaksi ini, diagnostikum digunakan - suspensi yang diketahui, biasanya dari bakteri yang dibunuh.
1 ml larutan natrium klorida isotonik terlebih dahulu dituangkan ke dalam tabung aglutinasi. 1 ml serum yang diencerkan 1:100 ditambahkan ke yang pertama, dan setelah tercampur, 1 ml dipindahkan ke yang kedua, dari yang kedua ke yang ketiga, dan seterusnya. 1-2 tetes suspensi bakteri yang mengandung 3 miliar badan mikroba dalam 1 ml ditambahkan ke dalam pengenceran serum dua kali lipat yang dihasilkan (dari 1:100 hingga 1:1600 atau lebih). Tabung dikocok dan ditempatkan dalam termostat pada suhu 37°C selama 2 jam, kemudian disimpan pada suhu kamar selama 24 jam.
Reaksi aglutinasi rinci diperhitungkan dengan mengevaluasi setiap tabung reaksi secara berurutan, dimulai dengan tabung kontrol, dengan pengocokan perlahan. Seharusnya tidak ada aglutinasi dalam tabung kontrol. Intensitas reaksi aglutinasi ditandai dengan tanda-tanda berikut: ++++ - aglutinasi lengkap (mengaglutinasi serpihan dalam cairan transparan mutlak); +++ - aglutinasi tidak lengkap (serpihan dalam cairan agak opalescent); ++ - aglutinasi parsial (serpihan terlihat jelas, cairan agak keruh); + - aglutinasi lemah dan meragukan - cairan sangat keruh, serpihan di dalamnya sulit dibedakan; - - tidak adanya aglutinasi (cairannya keruh merata).
Titer serum dianggap sebagai pengenceran terakhir, di mana intensitas aglutinasi dinilai tidak kurang dari dua plus (++)
Kuliah nomor 16
Kamus
LANGSUNG - langsung berikutnya tanpa apa pun, tanpa tautan selanjutnya.
SECARA TIDAK LANGSUNG– melalui sel lain, tidak secara langsung.
PENURUNAN ≠ PENINGKATAN (aktivitas sel).
MENOLAK - tidak menerima, menolak. Tubuh menolak organ yang ditransplantasikan.
Reaksi imun.
Reaksi imun adalah reaksi interaksi spesifik (pengikatan) antigen dan antibodi atau antigen dan limfosit T yang tersensitisasi.
Reaksi-reaksi ini terjadi secara in vitro (dalam tabung reaksi) dan in vivo (dalam organisme hidup).
Reaksi-reaksi ini melibatkan serum (serum), itulah sebabnya disebut serologis.
Respon imun sudah terbiasa diagnosis penyakit menular. Dalam hal ini, komponen yang tidak diketahui ditentukan oleh komponen yang diketahui, yang didasarkan pada kekhususan interaksi antigen dengan antibodi. Jika antibodi yang diketahui, maka kamu bisa mengidentifikasi (menemukan) antigen yang tidak diketahui. Jika antigen yang diketahui, maka Anda dapat menggunakannya mendeteksi antibodi yang tidak diketahui.
Jadi, reaksi imun digunakan:
1) untuk diagnostik serologis(serodiagnosis) penyakit - deteksi antibodi dalam serum darah orang sakit terhadap agen penyebab spesifik penyakit menular (antigen yang diketahui); jika antibodi terhadap patogen apa pun terdapat dalam serum darah orang yang sakit, maka patogen inilah yang menyebabkannya infeksi;
2) untuk identifikasi serologis (seroidentifikasi) mikroba - untuk menentukan jenis patogen menggunakan serum diagnostik imun (antibodi yang diketahui); jika antibodi mengikat patogen yang diisolasi dari orang sakit, maka mikroba tersebut identik dengan mikroba yang diimunisasi hewan tersebut menerima serum diagnostik imun .
Reaksi imun terjadi dalam 2 fase:
1) fase tertentu– hubungan pusat aktif antibodi dengan kelompok determinan antigen dengan pembentukan kompleks antigen-antibodi; fase ini berlangsung cepat, tetapi tidak ada efek yang terlihat;
2) fase nonspesifik- penampilan efek yang terlihat interaksi antigen dan antibodi - kerugian draf(aglutinasi) atau keadaan mendung(curah hujan), yang memungkinkan melihat pendidikan kompleks antigen-antibodi dan menarik kesimpulan tentang kepatuhan antigen dan antibodi satu sama lain.
Reaksi imun antara lain reaksi aglutinasi (RA), reaksi pengendapan (RP), reaksi fiksasi komplemen (CFR).
Reaksi aglutinasi- ini adalah perekatan dan pengendapan mikroba atau sel lain (eritrosit) di bawah pengaruh antibodi dengan adanya elektrolit. Akibat reaksi yang terlihat (fenomena aglutinasi) adalah terbentuknya endapan yang disebut menggumpalkan.
Reaksi ini digunakan untuk serodiagnosis Dan seroidentifikasi. RA digunakan untuk serodiagnosis (deteksi antibodi dalam serum darah pasien) demam tifoid dan paratifoid(Reaksi Vidal), brucellosis(Reaksi Wright), tularemia dan leptospirosis. RA digunakan untuk seroidentifikasi (menentukan jenis patogen yang diisolasi dari pasien) ketika infeksi usus, batuk rejan, kolera dan sebagainya.
Komponenreaksi:
1.A antigen (aglutinogen) – ini adalah mikroba atau sel lain yang utuh (tidak hancur) ( sel darah, antigen yang tidak larut). Aglutinogen- ini adalah suspensi hidup atau terbunuh sel mikroba atau sel lainnya. Antigen bisa tidak diketahui atau diketahui. Aglutinogen yang tidak diketahui adalah kultur mikroba yang diisolasi dari tubuh pasien yang perlu ditentukan. Antigen yang diketahui - diagnostikum– obat diagnostik - penangguhan orang mati mikroba spesies yang diketahui dalam larutan garam. Penangguhan ini berawan (buram), Karena sel mikroba tidak larut, tetapi tetap utuh. Aglutinogen yang diketahui akan digunakan untuk mendeteksi antibodi yang tidak diketahui dalam serum darah pasien.
2. Antibodi (aglutinin)- Ditemukan dalam serum darah. Antibodi juga bisa tidak diketahui atau diketahui. Antibodi yang tidak diketahui untuk ditentukan ada dalam serum darah orang sakit. Antibodi yang diketahui ditemukan di serum diagnostik imun yang disebut serum yang menggumpal. Mereka digunakan untuk identifikasi sero, mis. untuk menentukan antigen yang tidak diketahui - sejenis kultur mikroba.
3. Elektrolit– larutan natrium klorida 0,9%.
Mendapatkan tes diagnostik.
Kultur murni dari patogen dari spesies yang diketahui yang ditanam pada agar miring (misalnya, agen penyebab demam tifoid) dicuci dengan 3-4 ml larutan isotonik, ditempatkan dalam tabung steril, mikroba dibunuh di beberapa tempat. cara (misalnya dengan merebus dan menentukan kepadatannya (harus ada 3 miliar sel mikroba dalam 1 ml). Jika sel mikroba dibunuh suhu tinggi, maka diperoleh O-diagnosticum (antigen O), tetapi jika diolah dengan formaldehida maka diperoleh H-diagnosticum (antigen H).
Contoh diagnostik: salmonella diagnostikum, brucellosis diagnostikum, tularemia diagnostikum.
Persiapan serum aglutinasi.
Hewan (biasanya kelinci) disuntik secara parenteral dengan diagnostik mikroba dalam dosis yang ditingkatkan 5–7 kali dengan interval ( melakukan hiperimunisasi), dan kemudian serum darahnya diambil, yang mengandung antibodi terhadap mikroba yang menjadi bahan pembuatan diagnostikum. Jika imunisasi dilakukan dengan O-diagnosticum maka diperoleh serum O-aglutinasi (mengandung antibodi O), jika dengan H-diagnosticum diperoleh serum H-aglutinasi.
Serum yang mengaglutinasi bisa tidak teradsorpsi atau asli dan teradsorpsi.
Serum yang tidak terserap mengandung antibodi kelompok terhadap beberapa spesies mikroba yang berkerabat dekat.
Serum yang teradsorpsi mengandung antibodi terhadap satu atau lebih antigen dari satu jenis mikroba. Jika serum mengandung antibodi terhadap satu antigen saja, disebut monoreseptor atau monovalen, jika ke beberapa antigen – kelompok serum yang teradsorpsi .
Contoh serum aglutinasi:Serum pengaglutinasi H monoreseptor Salmonella, serum pengaglutinasi O teradsorpsi kelompok Salmonella, serum pengaglutinasi O antikolera, dll..
titer serum aglutinasi - pengenceran serum tertinggi di mana reaksi aglutinasi dengan antigen masih terdeteksi (titernya tergantung pada jumlah antibodi dalam darah: semakin banyak antibodi, semakin tinggi titer serum).
Metode pementasan RA.
1. Perkiraan (lamelar) RA– dilakukan di atas kaca. Teteskan 2 tetes serum dan 1 tetes larutan isotonik pada kaca objek. Kultur mikroba dimasukkan ke dalam salah satu tetes serum dan ke dalam setetes larutan isotonik dalam satu lingkaran dan dicampur. Setetes larutan isotonik dengan kuman – pengendalian antigen, setetes serum bebas kuman – pengendalian antibodi, setetes serum dengan mikroba – pengalaman. Jika serum mengandung antibodi yang sesuai dengan antigen mikroba yang bercampur dengannya, maka antibodi dan antigen tersebut akan berikatan secara spesifik satu sama lain dan setelah 1-3 menit akan muncul serpihan aglutinasi pada tetesan uji. Kontrol antigen harus keruh dan kontrol antibodi harus jelas. Hasil reaksi dicatat berdasarkan penampakan serpihan aglutinasi . Jika serpihannya rontok, reaksinya positif, yaitu. Antigen berhubungan dengan antibodi dan antigen dapat digunakan untuk menentukan antibodi atau sebaliknya. Jika kekeruhan tetap ada, reaksinya negatif.
2. Reaksi aglutinasi terperinci - dilakukan dalam tabung reaksi. Pertama, siapkan pengenceran 2 kali lipat serum darah orang sakit dari 1:50 hingga 1:1600. 1 ml larutan natrium klorida isotonik dituangkan ke dalam 6 tabung reaksi. 1 ml serum darah pasien dengan pengenceran 1:50 dimasukkan ke dalam tabung reaksi pertama, dicampur hingga diperoleh pengenceran 1:100, kemudian 1 ml pengenceran 1:100 dipindahkan ke tabung reaksi kedua. dan diperoleh pengenceran 1:200, dst. Dua tabung disimpan untuk kontrol antigen dan serum. Untuk kontrol serum tambahkan hanya serum dengan pengenceran 1:50, ke kontrol antigen - hanya antigen. Tambahkan 0,1 ml antigen - diagnostikum (O- atau H-) ke semua tabung reaksi lainnya dan letakkan semua tabung reaksi dalam termostat pada suhu 37°C selama 18-20 jam. Hasil reaksi dicatat menurut sifat, jumlah endapan (aglutinat) yang terbentuk dan derajat kekeruhan. Penghitungan dilakukan hanya dengan hasil kontrol sebagai berikut: kontrol serum - transparan, kontrol antigen - keruh. Antibodi O memberikan endapan berbutir halus. Antibodi H – berbutir kasar. Berdasarkan tabung reaksi terakhir yang masih terlihat reaksi aglutinasinya, ditetapkan titer diagnostik.
Selama serodiagnosis penyakit, penting tidak hanya untuk mendeteksi antibodi spesifik terhadap patogen tertentu, tetapi juga untuk mengidentifikasi jumlahnya, mis. membentuk titer antibodi seperti itu Kapan kita bisa membicarakan keberadaan penyakit yang disebabkan oleh patogen ini? . Titer ini disebut titer diagnostik. Misalnya, untuk mendiagnosis demam tifoid, Anda perlu mengidentifikasi titer antibodi 1:400, namun tidak kurang. Memberikan hasil yang lebih akurat deteksi peningkatan antibodi dalam serum berpasangan. Serum pasien dikumpulkan pada awal penyakit dan setelah 3 sampai 5 hari atau lebih. Oleh karena itu, jika titer antibodi meningkat setidaknya 4 kali lipat, kita dapat membicarakannya penyakit saat ini.
Jika reaksi aglutinasi terperinci dilakukan untuk seroidentifikasi, maka serum diagnostik aglutinasi digunakan, diencerkan hingga titer atau setengah titernya. RA dianggap positif jika aglutinasi terdeteksi pada pengenceran yang mendekati titer serum diagnostik.
