Rumah Bau dari mulut Reaksi Coombs bersifat langsung dan tidak langsung. Tes Coombs untuk mendiagnosis penyakit hemolitik pada bayi baru lahir

Bau dari mulut

Reaksi Coombs bersifat langsung dan tidak langsung. Tes Coombs untuk mendiagnosis penyakit hemolitik pada bayi baru lahir

Tes Coombs adalah sebuah metode penelitian laboratorium, dibuat dengan mempengaruhi hemaglutinasi. Hal ini didasarkan pada kerentanan antibodi terhadap imunoglobulin dan elemen enzim, serta kemampuannya untuk mengaglutinasi eritrosit yang dilapisi C3 atau Lg.

Diagnosis Coombs langsung

Digunakan untuk mendeteksi antibodi atau komponen pelengkap yang dipasang di bagian luar sel. Tes Coombs langsung dilakukan sebagai berikut.

Penggunaan sampel seperti itu

Diagnosis Coombs langsung digunakan pada kasus tertentu, seperti:

efek transfusi;
hemolisis autoimun;
obat anemia hemolitik.

Tes Coombs tidak langsung

Diagnosis ini memungkinkan untuk mendeteksi antibodi terhadap sel dalam serum, yang biasanya diinkubasi dengan sel darah merah donor tipe 0, dan kemudian tes langsung dilakukan. Menerapkan diagnosis tidak langsung Coombs dalam kasus berikut:

Bagaimana mempersiapkan analisis

Ada beberapa aturan untuk mempersiapkan ujian.

Jika pasiennya adalah bayi baru lahir, orang tua perlu menyadari bahwa tes ini akan membantu mendiagnosis penyakit hemolitik pada bayi baru lahir.
Jika pasien dicurigai menderita anemia hemolitik, ia harus dijelaskan bahwa analisis tersebut akan memungkinkannya mengetahui apakah hal itu disebabkan oleh gangguan pelindung, obat-obatan, atau faktor lain.
Tes Coombs, langsung dan tidak langsung, tidak membatasi nutrisi atau pola makan.
Penting untuk memberi tahu pasien bahwa pemeriksaan akan memerlukan pengambilan darah dari vena, dan juga memberi tahu dia kapan tepatnya pungsi vena akan dilakukan.
Anda juga harus diperingatkan tentang kemungkinan tersebut tidak nyaman selama periode penerapan perban pada lengan dan prosedur itu sendiri.
Obat-obatan yang dapat mempengaruhi hasil sampel harus dihentikan.

Obat-obatan ini meliputi:

"Streptomisin";
"Metildopa";
"Prokainamid";
sulfonamid;
"Melphalan";
"quinidin";
"Rifampisin";
Isoniazid;
sefalosporin;
"Hidralazin";
"Klorpromazin";
"Levodopa";
"Tetrasiklin";
"Difenilhidantoin";
"Etosuximid";
"Penisilin";
asam mefenamat.

Pengambilan sampel darah dilakukan pada pagi hari dalam keadaan perut kosong.

Bagaimana acara tersebut diadakan

Tes Coombs dilakukan dengan urutan sebagai berikut:

Saat melakukan diagnosis pada pasien dewasa, setelah pungsi vena, darah dimasukkan ke dalam tabung reaksi dengan EDTA (ethylenediaminetetraacetate).
Darah bayi baru lahir diambil dari tali pusat ke dalam gelas kimia berisi EDTA.
Daerah tusukan ditekan dengan kapas sampai pendarahan berhenti.
Jika memar muncul di lokasi tusukan vena, kompres hangat akan diberikan.
Setelah pengambilan darah, pasien diperbolehkan kembali minum obat.
Orang tua bayi baru lahir perlu diberitahukan bahwa analisis sekunder mungkin diperlukan untuk memantau dinamika anemia.

Keuntungan dari tes Coombs

Penelitian tersebut mempunyai beberapa keunggulan, yaitu:

Kekurangan analisis

Tes Coombs positif adalah metode pemeriksaan yang agak memakan waktu dan memerlukan akurasi pelaksanaan yang khas. Saat menggunakannya, Anda mungkin mengalami kesulitan tertentu, terutama terkait dengan interpretasi efek positif lemah.

Telah ditetapkan bahwa reaksi negatif atau positif lemah yang salah selama produksi tes Coombs dapat disebabkan oleh pencucian sel aktif yang tidak memuaskan, melemahnya reagen antiglobulin oleh residu serum, serta hubungan dengan permukaan non-lemak di mana antiglobulin dapat. melekat, sehingga kehilangan efektivitasnya.

Tes Coombs memiliki kelemahan lain - rendahnya stabilitas reagen antiglobulin, perolehan dan penyimpanannya karakteristik individu, yang juga mempersulit penilaian numerik efek serum antiglobulin terhadap hemaglutinasi.

Penyakit yang dapat dideteksi selama penelitian

Diagnostik Coombs memungkinkan untuk mendeteksi jenis penyakit tertentu, seperti:

malaise hemolitik pada bayi baru lahir;
berbagai reaksi transfusi;
hemolisis autoimun;
anemia hemolitik akibat obat.

Saat ini, tes Coombs dianggap sebagai sistem tes darah yang cukup populer baik untuk orang dewasa maupun bayi baru lahir. Itu memungkinkan untuk mengidentifikasi banyak penyakit berbeda.

Antibodi, terletak di permukaan eritrosit, dapat dalam keadaan statis atau bebas plasma darah. Tergantung pada keadaan antibodi, reaksi Coombs langsung atau tidak langsung dilakukan. Jika ada alasan untuk meyakini bahwa antibodi menempel pada permukaan sel darah merah, tes Coombs langsung dilakukan. Dalam hal ini, pengujian dilakukan dalam satu tahap - penambahan serum antiglobulin. Jika antibodi yang tidak lengkap terdapat pada permukaan sel darah merah, aglutinasi sel darah merah

Reaksi tidak langsung

Reaksi Coombs tidak langsung terjadi dalam 2 tahap. Pertama, Anda perlu menerapkannya secara artifisial sensitisasi sel darah merah Untuk melakukan ini, sel darah merah dan serum darah yang diuji diinkubasi, yang menyebabkan antibodi menempel pada permukaan sel darah merah. Setelah itu dilakukan uji Coombs tahap kedua - penambahan serum antiglobulin.

Reaksi presipitasi - RP (dari bahasa Latin praecipilo to precipitate) adalah pembentukan dan pengendapan kompleks antigen molekuler yang larut dengan antibodi dalam bentuk kekeruhan yang disebut mengendapkan. Ini terbentuk dengan mencampurkan antigen dan antibodi dalam jumlah yang setara; kelebihan salah satunya mengurangi tingkat pembentukan kompleks imun. Reaksi pengendapan dilakukan dalam tabung reaksi (reaksi pengendapan cincin), dalam gel, media nutrisi, dll. Variasi reaksi pengendapan dalam agar semi cair atau gel agarosa, imunodiffusi ganda dengan Ouchterlony, imunodifusi radiap, imunoepektroforesis dan sebagainya.

Reaksi pengendapan cincin. Reaksi dilakukan dalam tabung presipitasi sempit: antigen terlarut dilapiskan pada serum imun. Dengan rasio antigen dan antibodi yang optimal, lapisan buram terbentuk di perbatasan kedua larutan ini. cincin endapan. Jika ekstrak jaringan yang direbus dan disaring digunakan sebagai antigen dalam reaksi, maka reaksi ini disebut reaksi termopresipitasi pertama (reaksi yang mendeteksi hapten antraks).
Reaksi imunodiffusi ganda Ouchterlony. Untuk mengatur reaksi, lapisan tipis gel agar-agar yang meleleh dituangkan ke piring kaca dan, setelah mengeras, dibuat lubang di dalamnya. Antigen dan serum imun ditempatkan secara terpisah ke dalam lubang gel, yang berdifusi satu sama lain. Pada titik pertemuan dengan perbandingan yang sama membentuk endapan berupa garis putih. Dalam sistem multikomponen, beberapa garis endapan muncul di antara lubang antigen dan antibodi; di AG yang identik, garis endapan bergabung; di AG non-identik mereka berpotongan.
Reaksi imunodifusi radial. Serum imun dengan gel agar cair dituangkan secara merata ke dalam gelas. Setelah pemadatan dalam gel, lubang dibuat di mana antigen ditempatkan dalam berbagai pengenceran. Antigen, berdifusi ke dalam gel, membentuk zona pengendapan cincin di sekitar lubang dengan antibodi. Diameter cincin presipitasi sebanding dengan konsentrasi antigen. Reaksi tersebut digunakan untuk menentukan imunoglobulin dalam serum darah berbagai kelas, komponen sistem komplemen, dll.
Imunoelektroforesis- kombinasi metode elektroforesis dan imunopresipitasi: campuran antigen dimasukkan ke dalam lubang gel dan dipisahkan dalam gel menggunakan elektroforesis, kemudian imunoserum ditambahkan ke dalam alur yang sejajar dengan zona elektroforesis, antibodi yang berdifusi ke dalam gel dan membentuk garis pengendapan di tempat “pertemuan” dengan antigen.
Reaksi flokulasi(menurut Ramon) (dari bahasa Latin f1oecus - serpihan wol) - munculnya opalescence atau massa flokulan (imunopresipitasi) dalam tabung reaksi selama reaksi toksin - antitoksin atau toksoid - antitoksin. Digunakan untuk mengetahui aktivitas serum antitoksik atau toksoid.

pengetikan HLA- studi tentang kompleks histokompatibilitas utama manusia - kompleks HLA. Formasi ini mencakup wilayah gen pada kromosom 6 yang mengkode antigen HLA yang terlibat dalam berbagai respon imun.

Tugas untuk pengetikan HLA bisa sangat berbeda - identifikasi biologis (tipe HLA diwariskan bersama dengan gen orang tua), penentuan kecenderungan berbagai penyakit, pemilihan donor untuk transplantasi organ - ini melibatkan perbandingan hasil pengetikan HLA jaringan donor dan penerima. Dengan menggunakan pengetikan HLA, ditentukan kemiripan atau perbedaan pasangan dalam hal antigen histokompatibilitas untuk mendiagnosis kasus infertilitas.

Saran pengetikan HLA Analisis polimorfisme HLA dan dilakukan dengan dua metode - genetik serologis dan molekuler. Metode serologis klasik pengetikan HLA didasarkan pada uji mikrolimfositotoksik, dan metode molekuler menggunakan PCR (reaksi berantai polimerase).

Serologis pengetikan HLA dilakukan pada populasi sel yang terisolasi. Antigen kompleks histokompatibilitas utama dibawa terutama oleh limfosit. Oleh karena itu, suspensi limfosit T digunakan sebagai pembawa utama antigen kelas I, dan suspensi limfosit B digunakan untuk menentukan antigen HLA kelas II. Untuk mengisolasi populasi sel yang diperlukan dari darah utuh, digunakan sentrifugasi atau pemisahan imunomagnetik. Metode pertama diyakini dapat menghasilkan data positif palsu karena menyebabkan kematian beberapa sel. Metode kedua dianggap lebih spesifik - lebih dari 95% sel tetap dapat hidup.

Namun dasar untuk melakukan tes limfositotoksik pengetikan HLA adalah serum spesifik yang mengandung antibodi terhadap berbagai varian alelik antigen HLA kelas I dan II. Uji serologis dapat menentukan tipe HLA dengan memeriksa serum mana yang bereaksi dengan limfosit dan mana yang tidak.

Jika terjadi reaksi antara sel dengan serum, akibatnya adalah terbentuknya kompleks antigen-antibodi pada permukaan sel. Setelah menambahkan larutan yang mengandung komplemen, terjadi lisis dan kematian sel. Tes pengetikan HLA serologis dinilai menggunakan mikroskop fluoresensi untuk mengevaluasi reaksi positif (fluoresensi merah) dan negatif (fluoresensi hijau), atau mikroskop fase kontras untuk menodai inti sel mati. Hasil pengetikan HLA diperoleh dengan mempertimbangkan spesifisitas serum yang bereaksi dan kelompok antigen yang bereaksi silang, serta intensitas reaksi sitotoksisitas.

Kekurangan serologis pengetikan HLA adalah adanya reaksi silang, afinitas antibodi yang lemah atau rendahnya ekspresi antigen HLA, tidak adanya produk protein pada sejumlah gen HLA.

Metode molekuler yang lebih modern pengetikan HLA mereka menggunakan sampel sintetik yang sudah terstandarisasi yang tidak bereaksi dengan antigen pada permukaan leukosit, tetapi dengan DNA dan secara langsung menunjukkan antigen mana yang ada dalam sampel. Metode molekuler tidak memerlukan leukosit hidup; sel manusia dapat dipelajari, dan beberapa mikroliter darah sudah cukup untuk bekerja, atau Anda dapat membatasi diri pada mengikis mukosa mulut.

Genetika molekuler pengetikan HLA menggunakan metode PCR yang langkah pertamanya adalah memperoleh DNA genom murni (dari darah utuh, suspensi leukosit, jaringan).

Sampel DNA tersebut kemudian disalin – diamplifikasi secara in vitro menggunakan primer (DNA beruntai tunggal pendek) yang spesifik pada lokus HLA tertentu. Ujung setiap pasangan primer harus saling melengkapi dengan urutan unik yang sesuai dengan alel tertentu, jika tidak, amplifikasi tidak akan terjadi.

Setelah PCR, penyalinan berulang kali menghasilkan sejumlah besar fragmen DNA, yang dapat dinilai secara visual. Untuk melakukan ini, campuran reaksi dikenai elektrolisis atau hibridisasi, dan apakah amplifikasi spesifik telah terjadi ditentukan menggunakan program atau tabel. Hasil pengetikan HLA disajikan dalam bentuk laporan komprehensif pada tingkat gen dan alelik. Karena standarisasi sampel yang digunakan, molekuler pengetikan HLA lebih tepatnya serologis. Selain itu, ia memberikan lebih banyak informasi (lebih banyak alel DNA baru) dan banyak lagi level tinggi perinciannya, karena memungkinkan untuk mengidentifikasi tidak hanya antigen, tetapi juga alel itu sendiri, yang menentukan antigen mana yang ada pada sel.

Reaksi lisis imun. Reaksi ini didasarkan pada kemampuan antibodi spesifik untuk membentuk kompleks imun dengan sel, termasuk eritrosit dan bakteri, yang mengarah pada aktivasi sistem komplemen sepanjang jalur klasik dan lisis sel. Dari reaksi lisis imun, reaksi hemolisis paling sering digunakan dan reaksi bakteriolisis jarang digunakan (terutama dalam diferensiasi kolera dan vibrio mirip kolera).

Reaksi hemolisis. Di bawah pengaruh reaksi dengan antibodi dengan adanya komplemen, suspensi sel darah merah yang keruh berubah menjadi cairan transparan berwarna merah cerah - “darah pernis” karena pelepasan hemoglobin. Saat menyiapkan reaksi fiksasi komplemen diagnostik (FFR), reaksi hemolisis digunakan sebagai indikator: untuk menguji ada tidaknya (fiksasi) komplemen bebas.

Reaksi hemolisis lokal pada gel(Reaksi Erne) merupakan salah satu varian dari reaksi hemolisis. Ini memungkinkan Anda untuk menentukan jumlah sel pembentuk antibodi. Jumlah sel yang mensekresi antibodi - hemolisin - ditentukan oleh jumlah plak hemolisis yang muncul dalam gel agar yang mengandung eritrosit, suspensi sel jaringan limfoid yang diteliti dan komplemen.

Metode imunofluoresensi

(RIF, reaksi imunofluoresensi) adalah metode untuk mendeteksi Ags (Abs) tertentu menggunakan Abs (Ags) yang terkonjugasi ke fluorokrom. Ini memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang tinggi. Digunakan untuk diagnosis cepat infeksi. penyakit (identifikasi patogen pada bahan penelitian), serta untuk penentuan reseptor Ab dan permukaan serta penanda leukosit (immunophenotyping) dan sel lainnya. Langsung I.m. terdiri dari pemrosesan bagian jaringan atau apusan dari bahan patologis atau kerak mikroba yang mengandung Abs spesifik yang terkonjugasi dengan fluorokrom; sediaan dicuci untuk membebaskannya dari Abs yang tidak terikat dan diperiksa di bawah mikroskop fluoresensi. Dalam kasus positif, kompleks imun yang bersinar muncul di sekitar pinggiran objek. Kontrol diperlukan untuk mengecualikan pendaran nonspesifik. Pada tidak langsung. Mereka. pada tahap pertama, bagian jaringan atau apusan diobati dengan bahan spesifik non-fluoresen, pada tahap kedua - dengan bahan luminescent terhadap -globulin hewan yang digunakan pada tahap pertama. Dalam kasus positif, terbentuk kompleks bercahaya yang terdiri dari Ar, At to it dan At melawan At (metode sandwich). Selain mikroskop fluoresen, RIF digunakan untuk memperhitungkan fenotip sel. penyortir sel laser .

Aliran sitometri- metode pengukuran optik parameter sel, organelnya, dan proses yang terjadi di dalamnya.

Teknik ini melibatkan pendeteksian hamburan cahaya dari sinar laser saat sel melewatinya dalam aliran cairan, dan tingkat dispersi cahaya memungkinkan seseorang memperoleh gambaran tentang ukuran dan struktur sel. Selain itu, analisis juga memperhitungkan tingkat fluoresensi senyawa kimia yang merupakan bagian dari sel (autofluoresensi) atau ditambahkan ke sampel sebelum flow cytometry.

Suspensi sel, yang diberi label sebelumnya dengan antibodi monoklonal fluoresen atau pewarna fluoresen, memasuki aliran fluida melewati sel aliran. Kondisi dipilih sedemikian rupa sehingga sel-sel berbaris satu demi satu karena apa yang disebut. pemfokusan hidrodinamik jet di jet. Pada saat sel melintasi sinar laser, detektor mencatat:

hamburan cahaya pada sudut kecil (dari 1° hingga 10°) ( karakteristik ini digunakan untuk menentukan ukuran sel).

hamburan cahaya pada sudut 90° (memungkinkan kita menilai rasio inti/sitoplasma, serta heterogenitas dan granularitas sel).

intensitas fluoresensi melalui beberapa saluran fluoresensi (dari 2 hingga 18-20) - memungkinkan Anda menentukan komposisi subpopulasi suspensi sel, dll.

Tes Coombs

Tes Coombs langsung adalah tes antiglobulin (aglutinasi dalam gel yang memungkinkan deteksi antibodi divalen lengkap), yang mendeteksi antibodi kelas IgG dan komponen komplemen C3 pada permukaan sel darah merah. Biasanya, antibodi yang dideteksi dengan tes Coombs langsung memiliki spesifisitas luas yang tidak berhubungan dengan antigen yang sudah ada. Tes Coombs direk yang positif jelas menunjukkan bahwa pasien menderita anemia hemolitik, meskipun tidak semua pasien dengan tes antiglobulin direk positif menderita penyakit ini. Pada sekitar 10% pasien, antibodi atau komponen pelengkap pada membran sel darah merah tidak dapat ditentukan dengan tes Coombs langsung (tesnya negatif), namun mereka menderita anemia hemolitik autoimun. Untuk memperjelas spesifisitas antibodi dalam kasus tersebut, tes dengan elusinya digunakan. Tes Coombs langsung, positif hanya untuk komplemen, biasanya mengacu pada antibodi dingin tipe IgM. Pada kasus ini antibodi IgM tidak terdapat pada sel darah merah ketika suhu dasar tubuh. Namun, karena antibodi IgM secara aktif memperbaiki komplemen, dan komplemen tetap berada pada sel darah merah, dengan bentuk anemia hemolitik autoimun (penyakit aggutinin dingin), tes Coombs hanya akan positif untuk komplemen.

Tes Coombs langsung positif pada anemia hemolitik autoimun yang disebabkan oleh antibodi hangat, anemia akibat obat autoimun (saat menggunakan metildopa, hingga 20% pasien mengalami reaksi positif), jenis anemia hemolitik adsorpsi obat, jenis anemia hemolitik imunokompleks (tes positif hanya untuk C3), dengan anemia hemolitik autoimun yang disebabkan oleh antibodi dingin - penyakit aglutinin dingin (tes positif hanya untuk C3). Pada hemoglobinuria dingin paroksismal, tes Coombs langsung negatif.
DI DALAM periode akut penyakit yang disebabkan oleh penghancuran sel darah merah, di mana sejumlah besar antibodi tercatat, selama krisis hemolitik, serta ketika jumlah antibodi tidak mencukupi selama perjalanan kronis penyakit, tes Coombs langsung negatif dapat diamati.

:

Syarat penting untuk menjamin mutu pemeriksaan darah laboratorium adalah pengambilan bahan pada waktu perut kosong, pada pagi hari (sebelum pukul 12.00).
12 jam sebelum tes, sebaiknya hindari minum alkohol, merokok, makan, dan membatasi aktivitas fisik.
Pada pagi hari tes darah, Anda bisa minum air putih.
Hindari minum obat; Jika tidak memungkinkan untuk berhenti minum obat, Anda harus memberi tahu laboratorium.
Dianjurkan untuk mengambil bahan tersebut sebelum melakukan prosedur diagnostik medis apa pun.
Saat menilai kadar hormon pada wanita, penting untuk mempertimbangkan hari tersebut siklus menstruasi kapan waktu paling optimal untuk menentukan hormon tertentu? Anda dapat memperoleh informasi ini dari dokter Anda.

Indeks	Ciri
Penganalisis dan sistem pengujian	kartu gel; DiaMed AG (Swiss)
Nilai referensi	Hasil negatif / Hasil positif
Faktor yang mengganggu. Obat
Tes positif mungkin terjadi jika mengonsumsi obat berikut: asetaminofen, asam salisilat, aminopirin, antihistamin, karbromal, sefalosporin, klorpromazin, klorpropamid, cisplatin, clonidine, dipyrone, ethosuximide, fenfluramine, fuadin, hidralazin, hidroklorotiazid, ibuprofen, insulin, isoniazid, levodopa, asam mefenamat, melphalan, metadon, metildopa, metilsergida, nomifensine, penisilamin, kami, phenacetin, phenylbutazone, probenesid, procainamide, quinidine, quinine, rifampisin, streptomisin, sulfonamid, turunan sulfonilurea, tetrasiklin, triamterene, trimellitic anhydride
Indikasi untuk digunakan
Diagnosis anemia hemolitik imun, penyakit hemolitik bayi baru lahir, anemia hemolitik imun akibat obat, reaksi transfusi hemolitik
Interpretasi hasil
Biasanya, tes Coombs langsung negatif. Tes positif Berkumpul di: anemia hemolitik autoimun; penyakit hemolitik pada bayi baru lahir; anemia hemolitik imun akibat obat; reaksi transfusi hemolitik

Reaksi Coombs - metode yang efektif deteksi antigen eritrosit dan antibodi anti-eritrosit dalam darah manusia reaksi tidak langsung aglutinasi. Dasar pengujiannya adalah penggunaan reagen monoklonal spesifik berdasarkan imunoglobulin (IgG) kelas G untuk mengetik antigen eritrosit, dilanjutkan dengan penggunaan serum antiglobulin Coombs (AGS) pada tahap kedua.

AGS diproduksi dengan mencampurkan serum dari darah hewan laboratorium yang diimunisasi dengan imunoglobulin G manusia dan antibodi monoklonal ke salah satu komponen - komplemen C3D serum manusia. AGS menyebabkan aglutinasi sel darah merah yang peka terhadap antibodi spesifik. Dengan tidak adanya antibodi pada sel darah merah di bawah pengaruh AGS, reaksi positif tidak terjadi.

Reaksi Coombs tidak langsung memungkinkan Anda menentukan keberadaan:

antigen eritrosit dideteksi dengan reagen IgG (antibodi “tidak lengkap”, misalnya reagen monoklonal anti-D, anti-F Ya, anti-F Y b);
antibodi anti eritrosit golongan IgG.

Tes antiglobulin tidak langsung: deteksi antigen sel darah merah

Kami menyajikan metode reaksi Coombs tidak langsung menggunakan contoh koliklon anti-D IgG.

Beri label pada tabung reaksi yang bersih: sebutkan nama orang yang diuji.
Tambahkan 2 tetes (kurang lebih 0,1 ml) zoliclone anti-D IgG ke dalam tabung reaksi.
Tambahkan 2 tetes suspensi 5% dari eritrosit yang dianalisis, yang sebelumnya dicuci dengan larutan fisiologis. Campurkan sampel uji dengan zoliclon.
Inkubasi campuran dalam penangas air atau termostat pada suhu 37°C selama 30 menit.
Tambahkan 5 – 10 ml larutan garam ke dalam tabung reaksi menggunakan pipet Pasteur.
Sentrifugasi tabung dengan percepatan sentrifugal 1200 g pada suhu 18 – 25°C selama satu menit.
Hapus larutan garam.
Ulangi prosedur pencucian sel darah merah dengan menggunakan sentrifugasi 2 - 3 kali lagi.
Tambahkan 2 tetes serum antiglobulin ke sedimen sel darah dan aduk.
Sentrifugasi tabung dengan percepatan sentrifugal 1200 g selama satu menit pada suhu 18 – 25°C.
Dengan menggunakan dispenser atau pipet Pasteur, tambahkan 3 hingga 5 tetes larutan garam.
Suspensikan kembali sedimen dan nilai aglutinasi secara visual. Aglutinasi yang diucapkan di bagian bawah tabung reaksi dengan latar belakang solusi yang jelas menunjukkan deteksi antigen eritrosit. Suspensi sel darah yang buram menunjukkan tidak adanya antigen.

Tes Coombs: skrining antibodi anti-eritrosit isoimun

Penelitian ini dilakukan sebagai bagian dari uji kompatibilitas individu untuk semua antigen sel darah merah donor dan penerima. Kesimpulan tentang kompatibilitas penuh serum penerima dengan eritrosit donor diproduksi berdasarkan tidak adanya hemolisis dan/atau aglutinasi pada semua tahap analisis. Tanda-tanda hemolisis dan/atau aglutinasi pada setiap tahap pengujian menunjukkan ketidakcocokan sampel darah.

Penilaian kompatibilitas menggunakan sistem AB0, deteksi antibodi “dingin”.

Siapkan sampel darah donor:
- tambahkan 0,2 ml darah ke dalam tabung reaksi menggunakan dispenser otomatis;
- Cuci sel darah merah dalam 5,0 ml saline sebanyak 3 kali;
- resuspensikan pelet dalam 3 sampai 4 mL larutan LISS berkekuatan ionik rendah.
Beri label pada tabung bersih kedua: sebutkan nama penerima dan nama pemberi.
Dengan menggunakan dispenser otomatis, tambahkan 0,1 ml serum penerima ke dalam tabung berlabel.
Tambahkan 2 tetes suspensi sel darah merah 5% dalam larutan LISS.
Campuran segera disentrifugasi dengan percepatan sentrifugal 1200 g pada suhu 18 – 25°C selama 15 – 20 detik.
Dengan mengocok tabung reaksi secara perlahan, pisahkan endapan dari dasar. Kaji keberadaan aglutinat. Adanya hemolisis dan/atau aglutinasi berarti:
- ketidakcocokan menurut sistem AB0;
- adanya antibodi "dingin" dari kelas IgM atau IgA dalam serum pasien, tidak spesifik terhadap antigen AB0.

Deteksi antibodi “hangat”.

Jika tidak terjadi hemolisis dan/atau aglutinasi, inkubasi tabung selama 10 - 15 menit pada suhu 37 °C.
Sentrifugasi tabung pada 1200 g selama 15 - 20 detik pada suhu kamar.
Kocok tabung dan periksa hemolisis dan/atau aglutinasi dalam supernatan. Hasil positif menunjukkan terdeteksinya antibodi IgM “hangat” terhadap antigen eritrosit donor dalam serum pasien.

Deteksi antibodi IgG pada tes Coombs

Apabila pada pemeriksaan tahap sebelumnya hasilnya negatif, tambahkan 5 ml larutan NaCl 0,9% ke dalam tabung reaksi dengan menggunakan pipet Pasteur.
Sentrifugasi tabung pada 1200 g selama 15 - 20 detik pada suhu udara 18 - 25 °C. Gunakan pipet Pasteur untuk membuang supernatan dengan hati-hati.
Ulangi pencucian sel darah merah 2 - 3 kali lagi.
Tambahkan 1 - 2 tetes serum antiglobulin ke dalam tabung reaksi. Lakukan pencampuran menyeluruh.
Sentrifugasi tabung pada 1200 g selama 15 - 20 detik.
Hancurkan sedimen eritrosit dengan hati-hati dan nilai hasil reaksi secara visual. Deteksi aglutinasi berarti adanya antibodi IgG dalam serum pasien terhadap antigen eritrosit donor.

Anemia hemolitik, yang disebabkan oleh tubuh autoimun yang ditujukan terhadap sel darah merahnya sendiri, belum dipahami secara pasti. Namun, diasumsikan bahwa beberapa faktor (misalnya, virus, protein abnormal) mengubah sel darah merah sedemikian rupa sehingga tubuh menganggapnya “sebagai sesuatu yang asing” dan melawannya dengan bantuan antibodi. Menurut teori lain, antibodi yang ditujukan terhadap sel darah merah muncul hampir secara tidak sengaja selama pembentukan badan protein plasma abnormal pada beberapa penyakit. Badan protein seperti itu, sama “secara acak”, dapat memberikan reaksi yang dapat digunakan untuk membuat diagnosis (misalnya, pneumonia virus, seperti diketahui, memberikan reaksi Wasserman positif, reaksi Paul-Bunnel positif, dan reaksi aglutinasi dingin) .

Ada dua jenis utama autoantibodi untuk anemia hemolitik, yaitu: antibodi hangat (bereaksi pada suhu 37°C) dan antibodi dingin (reaktivitasnya meningkat ketika suhu mendekati nol). Antibodi hangat lebih umum terjadi dibandingkan antibodi dingin. Dacie menemukan bahwa hemolisin hangat terjadi 2 kali lebih sering dibandingkan hemolisin dingin. Hemolisin dan aglutinin pada dasarnya bukanlah antibodi yang berbeda: keduanya hanya berbeda dalam sifat kerjanya. Aglutinin mengaglutinasi sel darah merah, dan hemolisin membuatnya lebih rentan terhadap proses hemolisis yang kompleks (komplemen!). Autoantibodi, yang menempel pada eritrosit, membentuk kompleks eritrosit-globin. Kompleks ini dideteksi menggunakan tes antiglobin Coombs.

Tes Coombs dilakukan dengan serum Coombs, untuk persiapannya kelinci disensitisasi dengan serum manusia, yang dengannya antibodi terbentuk dalam serum kelinci. Ketika serum yang peka tersebut bekerja pada eritrosit manusia, aglutinasinya terjadi ketika reseptor eritrosit ditempati oleh antibodi penghambat. Karena antibodi penghambat ini berasal dari serum manusia, antibodi tersebut beraglutinasi dengan serum kelinci yang peka terhadap plasma manusia dan mengandung presipitin. Reaksi ini disebut uji Coombs; untuk anemia hemolitik akibat badan autoimun (Lo tit) hampir spesifik (untuk lebih jelasnya lihat Maier).

Secara umum untuk anemia hemolitik dengan kelainan primer eritrosit, tes Coombs negatif, dan dengan kelainan didapat, tes positif. Namun, ada beberapa pengecualian terhadap peraturan ini: tes Coombs positif palsu ditemukan selama krisis anemia hemolitik konstitusional, dan pada derajat lemah- juga kadang-kadang setelah splenektomi, dengan artritis rematik, sarkoidosis, setelah seringnya transfusi darah dan dengan lupus eritematosus sistemik. Secara alami, pada anemia hemolitik didapat tanpa pembentukan badan autoimun, hasilnya negatif.

Anemia hemolitik disebabkan oleh tubuh autoimun dapat dibagi menjadi:
a) akut, subakut dan bentuk kronis, serta seterusnya
b) idiopatik dengan etiologi yang tidak diketahui dan c) gejala [pneumonia virus (hanya aglutinin dingin), leukemia limfatik kronis, retikulosarcoma, limfosarkoma, lupus eritematosus sistemik (terutama aglutinin hangat, lebih jarang aglutinin dingin), sifilis (aglutinin dingin), tumor ovarium (Miescher dengan karyawan)).
c) gejala [pneumonia virus (hanya aglutinin dingin), leukemia limfatik kronis, retikulosarcoma, limfosarkoma, lupus eritematosus sistemik (terutama aglutinin hangat, lebih jarang aglutinin dingin), sifilis (aglutinin dingin), tumor ovarium (Miescher dan rekan kerja)).

Klinik anemia hemolitik, yang berkembang di bawah pengaruh tubuh autoimun, sangat beragam, dan oleh karena itu hampir tidak mungkin untuk menggambarkan kesamaannya Gambaran klinis. Orang-orang dari segala usia dan jenis kelamin sama-sama terkena dampaknya. Namun, bentuk idiopatik tampaknya lebih sering diamati pada wanita (Sacks dan Workman).

Gambaran klinis bentuk idiopatik bervariasi tergantung pada tingkat keparahan penyakitnya. DI DALAM kasus kronis Onsetnya bertahap, penyakit ini berlangsung selama bertahun-tahun dengan seringnya eksaserbasi. Tingkat keparahan anemia bervariasi tergantung pada derajat hemolisis. Penurunan hemoglobin hingga 10% diamati; dalam kasus lain, hemoglobin tetap pada 50-60% untuk waktu yang lama. Intensitas retikulositosis dan warna ikterik pada kulit dan serum berhubungan dengan derajat hemolisis. Bilirubin sangat jarang ditemukan dalam urin, karena tidak melewati ginjal, tetapi hemoglobinuria diamati. Pada kasus kronis, limpa seringkali membesar bahkan bisa mencapai ukuran yang sangat signifikan, namun pada kasus lain masih bisa dirasakan. Hati jarang tidak membesar.

Dalam darah dalam banyak kasus makrositosis diamati, di tahapan akut mikrositnya juga banyak, normoblastosis dan polikromasia jarang ada, leukositosis bisa mencapai 30.000, trombosit normal. Namun dalam beberapa kasus, terjadi trombositopenia parah. Evans menjelaskan kasus-kasus ini dengan adanya antibodi terhadap trombosit secara simultan, sehingga terjadi anemia hemolitik dan trombositopenia akibat kerja tubuh autoimun - sindrom Evans. Resistensi osmotik sedikit berkurang, namun tidak pada tingkat yang sama dan tidak permanen seperti pada anemia sel globular konstitusional. Tes ketahanan panas (Hegglin-Maier) setelah 6 jam juga dapat memberikan sedikit hemolisis (pengamatan sendiri), tetapi pada tingkat yang lebih rendah dibandingkan anemia Marchiafava. Hemosiderin juga ditemukan dalam urin (pengamatan sendiri).