واکنش های آگلوتیناسیون غیرفعال واکنش های آگلوتیناسیون غیر مستقیم واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیرفعال (IRHA، RPHA). RNGA معکوس. واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیرفعال (PHA).
اینها واکنش هانامیده می شوند غیر مستقیم (منفعلاز آنجایی که از Ag (یا AT) جذب مصنوعی روی سطح ذرات مختلف بدن استفاده می کنند.
واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیرفعال (RNGA, RPGA) یکی از حساس ترین واکنش های سرولوژیکی است. این بر اساس توانایی AT برای تعامل با Ag ثابت شده بر روی گلبول های قرمز مختلف است که سپس آگلوتینه می شوند. برای ثبات بیشتر تشخیص، گلبول های قرمز فرمالینیز می شوند.
RNGA معکوسبرای تشخیص Ag در سرم خون استفاده می شود. برای این منظور نه Ag، بلکه AT روی گلبول های قرمز ثابت می شود. واکنش های این نوع به طور گسترده ای برای تشخیص بیماری های عفونی، ایجاد بارداری، تشخیص استفاده می شود حساسیت بیش از حدبه داروها و غیره
پاسخ ترمز هماگلوتیناسیون غیرفعال (RTPGA) - پیشرفتهای بعدی RNGA; به یک معنا ویژگی آن را کنترل می کند. بر خلاف RNGA، شامل سه جزء است. Ag، AT و Ag (AT) روی گلبول های قرمز جذب می شوند. ابتدا Ag با AT (آنتی سرم استاندارد) واکنش می دهد، سپس گلبول های قرمز حساس شده با همان Ag (یا AT) به مخلوط اضافه می شوند. اگر در طول تعامل Ag با AT، هیچ AT (یا Ag) آزاد در سیستم باقی نماند، آگلوتیناسیون تشخیصی گلبول قرمز مشاهده نمی شود.
از گلبول های قرمز یا خنثی استفاده می کند مواد مصنوعی(به عنوان مثال، ذرات لاتکس)، که در سطح آن آنتی ژن ها (باکتری، ویروسی، بافتی) یا آنتی بادی ها جذب می شوند. آگلوتیناسیون آنها زمانی اتفاق می افتد که سرم یا آنتی ژن های مناسب اضافه شود. گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن ها آنتی ژنی گلبول های قرمز تشخیصی نامیده می شوند و برای شناسایی و تیتراسیون آنتی بادی ها استفاده می شوند. گلبول های قرمز با آنتی بادی ها حساس شده اند. ایمونوگلوبولین های اریتروسیتی تشخیصی نامیده می شوند و برای شناسایی آنتی ژن ها استفاده می شوند.
واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال برای تشخیص بیماری های ناشی از باکتری ها استفاده می شود. تب حصبهو تب پاراتیفوئید، اسهال خونی، بروسلوز، طاعون، وبا و غیره)، تک یاخته ها (مالاریا) و ویروس ها (آنفولانزا، عفونت های آدنوویروسی, هپاتیت ویروسیب، سرخک، آنسفالیت ناشی از کنه، تب خونریزی دهنده کریمه و غیره) و همچنین برای تعیین برخی هورمون ها، افزایش حساسیت بیمار را شناسایی می کند. داروهاو هورمون هایی مانند پنی سیلین و انسولین.
واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA). تست هماگلوتیناسیون غیرفعال یک روش حساس است تشخیص سرولوژیکیو برای تشخیص زودرس و گذشته نگر و همچنین برای تعیین وضعیت ایمونوپوژیک افراد واکسینه شده استفاده می شود. در بیماران مبتلا به تولارمی، آنتی بادی ها معمولاً در پایان هفته اول یا دوم بیماری، پس از 1-1.5 ماه، به تیتر RPHA می رسد حداکثر عملکرد(1:100000-1:20000، به ندرت بیشتر)، پس از آن کاهش یافته و برای مدت طولانی در سطح 1:100-1:200 باقی می مانند.
در افراد واکسینه شده، آنتی بادی ها نیز به طور مداوم شناسایی می شوند، اما در تیترهای پایین تر، 1-1.5 ماه پس از واکسیناسیون از 1:2000-1:5000 تجاوز نمی کنند و برای چندین سال در سطح پایین 1:20-1:80 باقی می مانند.
آنتی ژن برای مرحله بندی RPHA تولارمی اریتروسیت تشخیصی (آنتی ژنیک) است. این دارو گلبول قرمز گوسفندی است که با آنتی ژن تولارمی حساس شده و به صورت مایع و خشک موجود است. آماده سازی مایع - یک سوسپانسیون 10٪ از گلبول های قرمز خون در محلول فرمالدئید با غلظت 10٪. آماده سازی لیوفیلیزه خشک یک سوسپانسیون 10 درصدی گلبول های قرمز بدون مواد نگهدارنده در خلاء خشک شده است. قبل از استفاده، طبق دستورالعمل روی برچسب رقیق می شود. برای تنظیم واکنش در صفحات پلی استایرن، هر دو دارو در غلظت 2.5٪ و هنگام تنظیم واکنش در ریزحجم - در غلظت 0.5٪ استفاده می شود.
تکنیک راه اندازی RPGA. سرم های آزمایش با محلول فیزیولوژیکی 1:5 (1:10) رقیق شده و در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه حرارت داده می شود. پس از این، به منظور حذف آنتی بادی های ناهمگن به گلبول های قرمز گوسفند، سرم ها با یک سوسپانسیون 50٪ از گلبول های قرمز فرمالین شده گوسفند درمان می شوند. برای این کار، گلبول های قرمز خون را به میزان 2 قطره (0.05 میلی لیتر) در هر 1 میلی لیتر سرم اضافه کنید و با تکان دادن کاملاً مخلوط کنید. سرم تا زمانی که گلبول های قرمز به طور کامل ته نشین شوند باقی می ماند یا پس از یک ساعت در دمای اتاق سانتریفیوژ می شود و پس از آن برای بررسی آماده می شود.
مایع رقیق کننده به حجم 0.5 میلی لیتر در یک ردیف چاهک روی صفحه پلی استایرن ریخته می شود. در طول مطالعه اولیه سرم ها، توصیه می شود آنها را با تنظیم واکنش در یک ردیف کوتاه از صفحه (6 چاهک) آزمایش کنید. اگر آنتی بادی ها در یک سری کوتاه شناسایی شوند، سرم ها در یک سری رقت های طولانی (12 چاهک) مجددا آزمایش می شوند. پس از ریختن مایع رقیق کننده، 0.5 میلی لیتر سرم آزمایش را با رقت 1:5 به اولین چاهک هر ردیف (کوتاه یا بلند) اضافه کنید. سپس همان حجم های سرم با رقت های دو برابر تیتر می شود. بنابراین رقت های سرم در سری کوتاه از 1:10 تا 1:320 و در سری طولانی از 1:10 تا 1:20480 بدست می آید. پس از تیتراسیون سرم، یک قطره (0.05 میلی لیتر) از یک سوسپانسیون 2.5 درصد از گلبول های قرمز حساس به هر چاه اضافه می شود. محتویات صفحات کاملاً تکان داده می شود تا یک سوسپانسیون همگن به دست آید. صفحات در دمای اتاق روی سطح میز ثابت قرار می گیرند. ثبت اولیه واکنش پس از 2-3 ساعت انجام می شود، تعیین نهایی تیتر پس از رسوب کامل گلبول های قرمز خون در چاه ها انجام می شود. کنترل های زیر برای واکنش ارائه شده است: 1) سرم آزمایشی رقیق شده 1:10 در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از یک سوسپانسیون 2.5٪ از گلبول های قرمز غیر حساس. 2) مایع رقیق سازی در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از یک سوسپانسیون 2.5٪ از گلبول های قرمز غیر حساس. 3) مایع رقیق سازی در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از سوسپانسیون 2.5٪ گلبول های قرمز حساس. همه کنترل ها باید به وضوح واکنش منفی نشان دهند.
حسابداری و ارزیابی RPGA. واکنش توسط ارزیابی می شود نمودار زیر:
1) به شدت واکنش مثبت(++++) - گلبول های قرمز خون در یک لایه یکنواخت به شکل یک "چتر" به پایین سوراخ می افتند که اغلب لبه ها را ذوب می کند.
2) واکنش مثبت (+++) - گلبول های قرمز حداقل 2/3 از کف چاه را پوشش می دهند.
3) واکنش ضعیف مثبت (++) - آگلوتینات کوچک است و در مرکز چاه قرار دارد.
4) واکنش مشکوک (+) - در اطراف رسوب گلبول های قرمز در مرکز چاه دانه های جداگانه آگلوتینات وجود دارد.
5) منفی (-) - در انتهای سوراخ، گلبول های قرمز خون به شکل یک "دکمه" یا یک حلقه کوچک با لبه های صاف و واضح مشخص می شوند.
تیتر سرم بر اساس آخرین رقت سرم در نظر گرفته می شود که واکنش بسیار واضحی (حداقل سه مثبت) داد. رقت 1:100 یا بالاتر به عنوان یک تیتر تشخیصی در نظر گرفته می شود، اما، همانطور که در مورد RA، نظارت بر افزایش آن ضروری است.
RPGA برای تولارمی کاملاً خاص است و برخی را تشخیص می دهد واکنش های متقابلفقط با سرم های بروسلوز. تشخیص های افتراقیبا ارتفاع تیترها در RPGA امکان پذیر است که با آنتی ژن همولوگ به طور قابل توجهی بالاتر است.
تکنیک تنظیم RPHA در ریزحجم. RPGA را می توان با استفاده از میکروتیتراتور نوع تاکاچی (یا میکروپلیت های ته گرد با میکروپیپت ها) در ریز حجم ها انجام داد که امکان تیتراسیون مواد را در حجم های 25 میکرولیتر و 50 میکرولیتر فراهم می کند. تکنیک واکنش و توالی تمام عملیات مانند هنگام مطالعه در صفحات پلی استایرن است. با این حال، باید در نظر داشت که حساسیت میکرو متد معمولاً یک رقت (یعنی 2 برابر) کمتر از حساسیت روش ماکرو است.
برای تنظیم واکنش در میکروتیتراتور، یک مایع رقیق کننده به حجم 50 میکرولیتر با استفاده از یک پیپت قطره چکان به هر چاه اضافه می شود. سپس با استفاده از تیتراتورهایی با سر 50 میکرولیتر، سرم آزمایش با فرو بردن سر در آن جمع آوری می شود. مطمئن شوید که مایع سر تیتراتور را پر کرده است. تیتراتور با سرم به اولین چاه منتقل می شود و آن را در داخل نگه می دارد موقعیت عمودی، چندین انجام دهید حرکات چرخشیرفت و برگشت. سپس تیتراتور به چاه بعدی منتقل می شود و دستکاری تکرار می شود. تیتراسیون را می توان به طور همزمان در چندین ردیف انجام داد. پس از تیتراسیون کل سری، تیتراتور با آب مقطر شسته می شود (تغییر 2 قسمت) با حرکات چرخشی، آب با استفاده از سواب از سر خارج می شود و روی شعله مشعل می سوزد.
پس از تیتراسیون، 25 میکرولیتر مایع تشخیصی گلبول قرمز را به چاهک ها اضافه کنید. غلظت تشخیصی برای RPHA در ریزحجم ها باید 0.5٪ باشد (یعنی سوسپانسیون 2.5٪ گلبول های قرمز علاوه بر این 5 بار رقیق می شود). پس از افزودن گلبول های قرمز، صفحات باید کمی تکان داده شوند تا یک سوسپانسیون همگن به دست آید. نتایج را می توان در عرض 1-1.5 ساعت ثبت کرد که مزیت قابل توجه RPGA در میکروتیتر است. علاوه بر این، این تکنیک به مقادیر کمی از تمام اجزای واکنش و سرم های آزمایشی نیاز دارد.
واکنش طبق طرح زیر در نظر گرفته می شود:
1) "+" - هماگلوتیناسیون کامل، که در آن گلبول های قرمز خون به شکل یک "چتر" به ته چاه می افتند و حداقل 2/3 از کف را اشغال می کنند.
2) "+-" - هماگلوتیناسیون جزئی، که در آن گلبول های قرمز خون به شکل یک حلقه شل با اندازه کوچک به پایین سقوط می کنند.
3) "-" - عدم وجود هماگلوتیناسیون، هنگامی که گلبول های قرمز به شکل یک دکمه یا حلقه کوچک با لبه صاف به پایین می افتند.
ویژگی یک نتیجه مثبت به دست آمده در RPHA را می توان با استفاده از یک واکنش سه جزئی - واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیرفعال (PHA) آزمایش کرد.
تکنیک راه اندازی RTPGA. این واکنش برای تایید اختصاصی بودن یک نتیجه مثبت RPGA در مواقعی که مشکوک است یا مورد توجه اپیدمیولوژیک خاصی است استفاده می شود. مکانیسم واکنش شامل مهار اختصاصی هماگلوتیناسیون زمانی است که سوسپانسیون باکتری کشته شده تولارمی به سرم آزمایش اضافه شود. سه جزء در واکنش تعامل دارند: سرم آزمایش، آنتی ژن اختصاصی تولارمی و آنتی ژنی گلبول قرمز تشخیصی RTPHA معمولاً در یک ردیف 7-8 چاهک قرار می گیرد. توصیه می شود یک RPGA مکرر را به موازات RTPGA نصب کنید. 0.25 میلی لیتر مایع رقیق کننده در دو ردیف چاهک ریخته می شود، سپس سرم آزمایش در حجم 0.25 میلی لیتر به اولین چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود و دو ردیف رقت های سرمی یکسان به دست می آید. به تمام چاهک های ردیف دوم 0.25 میلی لیتر مایع رقیق کننده و به چاه های ردیف اول 0.25 میلی لیتر سوسپانسیون باکتری تولارمی اضافه کنید. Tularemia diagnosticum (حاوی 25 میلیارد باکتری تولارمی در 1 میلی لیتر) استفاده می شود که قبلاً 50 بار رقیق شده است. این سوسپانسیون حاوی 500 میلیون باکتری در 1 میلی لیتر یا 125 میلیون در حجم 0.25 میلی لیتر است. پس از افزودن آنتی ژن، پلیت به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرد، پس از آن یک قطره (0.05 میلی لیتر) از گلبول های قرمز تشخیصی به تمام چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود، پلیت تکان داده می شود و روی سطح میز صاف قرار می گیرد. حسابداری بعد از 2-3 ساعت انجام می شود.
حسابداری و ارزیابی RTPGA. اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های خاص تولارمی باشد، با آنتی ژن اضافه شده خنثی می شود و هماگلوتیناسیون در ردیف اول چاهک ها رخ نمی دهد یا با تیتر سرم بالا، هماگلوتیناسیون در تعداد کمتر (2-4) مشاهده می شود. چاه نسبت به ردیف با RPHA. در این مورد، ویژگی نتایج تایید شد. اگر هماگلوتیناسیون در هر دو ردیف مشخص شود، یعنی. اگر نتایج RTPGA و RPGA منطبق باشند، این نشان دهنده عدم وجود آنتی بادی های تولارمی در سرم آزمایش است. در این مورد، نتیجه اولیه RPGA غیر اختصاصی در نظر گرفته می شود.
تکنیک مرحله بندی RTHG در میکرو حجم. RTPGA، مانند RPGA، می تواند در حجم های کوچک با استفاده از میکروتیتر نوع تاکاچی انجام شود. برای انجام این کار، 0.25 میکرولیتر مایع رقیق کننده را در چاهک های میکروپلیت در دو ردیف 7-8 چاهک اضافه کنید. سپس با استفاده از تیتراتور 0.25 میکرولیتر از سرم آزمایش اضافه شده و در هر دو ردیف تیتر می شود. پس از این، 25 میکرولیتر آنتی ژن تولارمی (که غلظت آن 500 میلیون باکتری تولارمی در 1 میلی لیتر است) به هر چاهک در ردیف اول و 25 میکرولیتر مایع رقیق کننده به ردیف دوم اضافه می شود. پلیت ها به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرند و پس از آن 25 میکرولیتر آنتی ژن zritrocytic diagnosticum (غلظت 0.5٪) به همه چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود. حسابداری و ارزیابی نتایج مشابه واکنش ها در حجم های بزرگ انجام می شود.
واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال) روشی برای تشخیص و شناسایی آنتی ژن ها یا آنتی بادی ها، بر اساس پدیده آگلوتیناسیون گلبول های قرمز که در حضور آنها رخ می دهد، که قبلاً آنتی ژن های خاص یا مربوطه در سطح آن جذب شده است.
1. دایره المعارف پزشکی کوچک. - م.: دایره المعارف پزشکی. 1991-96 2. اول مراقبت های بهداشتی. - M.: دایره المعارف بزرگ روسیه. 1994 3. فرهنگ لغت دایره المعارفی اصطلاحات پزشکی. - م.: دایره المعارف شوروی. - 1982-1984.
ببینید "واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم" در فرهنگ های دیگر چیست:
واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم- RNGA تست آزمایشگاهیبا استفاده از تشخیص گلبول های قرمز واژه نامه انگلیسی-روسی اصطلاحات اساسی در واکسینولوژی و ایمن سازی. سازمان بهداشت جهانی، 2009] موضوعات واکسینولوژی، ایمن سازی مترادف RNGA EN... ... راهنمای مترجم فنی
- (RNHA؛ مترادف واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال) روشی برای تشخیص و شناسایی آنتی ژن ها یا آنتی بادی ها، بر اساس پدیده آگلوتیناسیون گلبول های قرمز که در حضور آنها روی می دهد، که قبلاً در سطح آن جذب شده اند... .. . فرهنگ لغت بزرگ پزشکی
- (RPHA) به واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم مراجعه کنید... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی
این صفحه یک واژه نامه است. # الف... ویکی پدیا
اختصارات اساسی که در فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی پذیرفته شده است- a., aa, artena, arteriae aa ana (به طور مساوی) آکادمی علوم پزشکی اتحاد جماهیر شوروی اتحاد جماهیر شوروی آکادمی علوم پزشکی اتحاد جماهیر شوروی اتحاد جماهیر شوروی آکادمی علوم اتحاد جماهیر شوروی سابق. باسیلوس باکت. باکتری BSSR بلاروس SSR قرن، قرن. قرن، قرنها v.، vv. vena, venae VASKHNIL فرمان همه اتحادیه لنین و... ...
این اصطلاح معانی دیگری دارد، به طاعون مراجعه کنید. دیستمپر گوشتخواران (بیماری کاره) مسری حاد یا تحت حاد بیماری ویروسی، با تب، التهاب کاتارال غشاهای مخاطی، ضایعات پوستی، مرکزی ... ... ویکی پدیا
- (renes) اندام دفعی و غدد درون ریز جفتی که هموستاز شیمیایی بدن را از طریق عملکرد تشکیل ادرار تنظیم می کند. طرح فیزیولوژی آناتومیک کلیه ها در فضای خلفی صفاقی (فضای خلف صفاقی) در... ... دایره المعارف پزشکی
I (تریکینلوز؛ مترادف: تریچینوز، "پف کرده") کرمی از گروه نماتدها که با تب، میالژی، تورم صورت، مشخص می شود. بثورات پوستیائوزینوفیلی خون و در موارد شدید ضایعات اعضای داخلیو مرکزی...... دایره المعارف پزشکی
- (نماتدوزها) کرم های کرمی ناشی از کرم های گرد نماتد کلاس نماتدا. در میان سایر کرم های کرمی، N. دارند بالاترین ارزشدر آسیب شناسی انسانی، بیشتر آنها ژئوهلمینتیازیس هستند (به هلمینتیازیس مراجعه کنید). رشد تخمها یا لاروهای آنها... ... دایره المعارف پزشکی
اپیدیدیمیت عفونی- برنج. 1. بزرگ شدن بیضه چپ در گوسفند مبتلا به اپیدیدیمیت عفونی. برنج. 1. بزرگ شدن بیضه چپ در گوسفند مبتلا به اپیدیدیمیت عفونی. اپیدیدیمیت عفونی گوسفند (Epididymitis infectiosa arietum)، عفونی مزمن... ... فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی
واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم را ببینید... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی
واکنش داده شده است:
1) برای تشخیص پلی ساکاریدها، پروتئین‌ها، عصاره‌های باکتریایی و سایر مواد بسیار پراکنده، ریکتزیا و ویروس‌ها که کمپلکس‌هایی از آنها با آگلوتینین‌ها در RAهای معمولی دیده نمی‌شود.
2) برای شناسایی آنتی بادی در سرم بیماران به این مواد بسیار پراکنده و میکروارگانیسم های کوچک.
آگلوتیناسیون غیرمستقیم یا غیرفعال به عنوان واکنشی درک می شود که در آن آنتی بادی ها با آنتی ژن های از پیش جذب شده روی ذرات بی اثر (لاتکس، سلولز، پلی استایرن، اکسید باریم و غیره یا گلبول های قرمز گوسفند، I (0) - گروه خونی انسان) تعامل می کنند.
در واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA)، سلول های قرمز خون. گلبول های قرمز حاوی آنتی ژن در حضور آنتی بادی های خاص این آنتی ژن به هم می چسبند و رسوب می کنند. گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن در RPGA به عنوان یک تشخیص گلبول قرمز برای تشخیص آنتی بادی ها (سرودیاگنوز) استفاده می شود. اگر گلبول های قرمز با آنتی بادی ها (آنتی بادی گلبول قرمز تشخیصی) بارگیری شوند، می توان از آن برای شناسایی آنتی ژن ها استفاده کرد.
برنج. 3. طرح RPGA: گلبول های قرمز خون (1)، بارگذاری شده با آنتی ژن (3)، توسط آنتی بادی های خاص متصل می شوند (4).
صحنه سازی. یک سری رقت های سریالی سرم در چاهک های پلی استایرن تهیه می شود. 0.5 میلی لیتر سرم آشکارا مثبت را به چاه ماقبل آخر و 0.5 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی (شاهد) را به آخرین چاه اضافه کنید. سپس 0.1 میلی لیتر گلبول قرمز تشخیصی رقیق شده به تمام چاهک ها اضافه می شود، تکان داده می شود و به مدت 2 ساعت در ترموستات قرار می گیرد.
حسابداری. که در مورد مثبتگلبول های قرمز در انتهای سوراخ به شکل یک لایه یکنواخت از سلول ها با لبه تا شده یا دندانه دار (چتر معکوس) مستقر می شوند، در منفی - آنها به شکل یک دکمه یا حلقه مستقر می شوند.
شکل 4. حسابداری RNGA (RPGA).
حسابداری برای نتایج آزمایش اشعه ایکس انجام شده برای تشخیص سم بوتولینوم.
عامل ایجاد کننده بوتولیسم - کلستریدیوم بوتولینوم سمومی از هفت سرووار (A, B, C, D, E, F, G) تولید می کند اما سرووارهای A, B, E بیشتر از همه از نظر خواص آنتی ژنی متفاوت هستند و می توان آنها را متمایز کرد در واکنش‌ها با استفاده از سرم‌های نوع خاص. برای این منظور می توان واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (غیر مستقیم) را با سرم بیمار انجام داد که در آن وجود سم فرض می شود و گلبول های قرمز با آنتی بادی های سرم های ضد بوتولینوم آنتی سمی انواع A، B، E بارگذاری می شوند. سرم به عنوان یک کنترل عمل می کند.
برنج. 3. بیانیه و نتیجه RNGA.
حسابداری. در حالت مثبت، گلبول های قرمز به شکل یک لایه یکنواخت از سلول ها با لبه تا شده یا دندانه دار (چتر معکوس) در قسمت پایین سوراخ قرار می گیرند .
نتیجه‌گیری: سم بوتولینوم نوع E در سرم بیمار شناسایی شد.
واکنش مهار هماگلوتیناسیون (HART).
برنج. 8. واکنش مهار هماگلوتیناسیون (HAI) (طرح).
اصل واکنش بر اساس توانایی AT برای اتصال ویروس‌های مختلف و خنثی کردن آنها است و باعث می‌شود که گلبول‌های قرمز لخته شوند. از نظر بصری، این اثر در "مهار" هماگلوتیناسیون آشکار می شود. RTGA در تشخیص عفونت‌های ویروسی برای شناسایی آنتی‌هماگلوتینین‌های خاص و شناسایی ویروس‌های مختلف توسط هماگلوتینین‌هایشان استفاده می‌شود که خواص Ag را نشان می‌دهند.
تایپ ویروس در یک واکنش RTGA با مجموعه ای از سرم های نوع خاص انجام می شود. نتایج واکنش با عدم وجود هماگلوتیناسیون در نظر گرفته می شود. زیرگروه های ویروس نوع A با آنتی ژن های H0N1، H1N1، H2N2، H3N2 و سایرین را می توان در RTGA با مجموعه ای از سرم های نوع خاص همولوگ افتراق داد.
برنج. 9. نتایج RTGA برای تایپ ویروس آنفلوانزا
افسانه: - مهار هماگلوتیناسیون (دکمه)؛ - هماگلوتیناسیون (چتر).
نتیجه گیری: مواد مورد مطالعه حاوی ویروس آنفولانزا نوع A با آنتی ژن H3N2 است
واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم (غیرفعال) (IRHA) مبتنی بر این واقعیت است که گلبول های قرمز، اگر آنتی ژن محلول روی سطح آنها جذب شود، در هنگام تعامل با آنتی بادی های آنتی ژن جذب شده، توانایی آگلوتیناسیون را به دست می آورند. نمودار RNGA در شکل نشان داده شده است. 34. RNGA به طور گسترده در تشخیص تعدادی از عفونت ها استفاده می شود.
برنج. 34. طرح واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA). الف - به دست آوردن یک تشخیص گلبول قرمز: B - RPGA: 1 - گلبول قرمز: 2 - آنتی ژن در حال مطالعه. 3 - erythrocyte diagnosticum; 4- آنتی بادی آنتی ژن مورد مطالعه: 5- آگلوتینه
تنظیم یک واکنش سرم آزمایش به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتی گراد حرارت داده می شود، به طور متوالی به نسبت 1:10 - 1:1280 رقیق می شود و در 0.25 میلی لیتر در لوله های آزمایش یا چاه ها ریخته می شود، جایی که 2 قطره گلبول های قرمز تشخیصی (گلبول های قرمز با آنتی ژن جذب شده بر روی آنها) ) سپس اضافه می شوند.
کنترل: تعلیق گلبول های قرمز تشخیصی با سرم ایمنی شناخته شده. تعلیق تشخیص با سرم طبیعی؛ تعلیق گلبول های قرمز طبیعی با سرم آزمایش. در کنترل اول باید آگلوتیناسیون اتفاق بیفتد، در کنترل دوم و سوم نباید اتفاق بیفتد.
با استفاده از RIGA، اگر آنتی‌بادی‌های شناخته شده روی گلبول‌های قرمز جذب شوند، می‌توانید آنتی ژن ناشناخته را شناسایی کنید.
واکنش هماگلوتیناسیون را می توان در حجم 0.025 میلی لیتر (میکرو روش) با استفاده از میکروتیتراتور تاکاچی انجام داد.
1. نشان دهنده چیست؟ نتیجه مثبت RHA بین گلبول های قرمز و ماده ای که برای وجود ویروس آزمایش می شود؟
2. اگر ویروس و سرم مربوط به آن به گلبول های قرمز اضافه شود، آگلوتیناسیون رخ می دهد؟ نام واکنشی که این پدیده را آشکار می کند چیست؟
ورزش
نتیجه RIGA را در نظر بگیرید و ثبت کنید.
واکنش بارش
در واکنش رسوب، یک کمپلکس ایمنی خاص، متشکل از یک آنتی ژن محلول (لیز، عصاره، هاپتن) و یک آنتی بادی خاص در حضور الکترولیت ها رسوب می کند.
حلقه ابری یا رسوبی که در نتیجه این واکنش ایجاد می شود، رسوب نامیده می شود. این واکنش عمدتاً از نظر اندازه ذرات آنتی ژن با واکنش آگلوتیناسیون متفاوت است.
واکنش بارش معمولاً برای تعیین آنتی ژن در تشخیص تعدادی از عفونت ها استفاده می شود. سیاه زخم، مننژیت و غیره)؛ در پزشکی قانونی - برای تعیین گونه های خون، اسپرم و غیره؛ در مطالعات بهداشتی و بهداشتی - هنگام ایجاد جعل محصولات؛ با کمک آن، رابطه فیلوژنتیکی حیوانات و گیاهان مشخص می شود. برای واکنش شما نیاز دارید:
1. آنتی بادی ها (رسپیتین ها) - سرم ایمنی با تیتر بالاآنتی بادی (نه کمتر از 1:100000). تیتر سرم رسوب دهنده با بالاترین رقت آنتی ژنی که با آن واکنش نشان می دهد تعیین می شود. سرم معمولاً رقیق نشده یا در رقت 1:5 - 1:10 استفاده می شود.
2. آنتی ژن - مواد محلول پروتئین یا پلی ساکارید لیپویدی طبیعت (آنتی ژن ها و هاپتن های کامل).
3. محلول ایزوتونیک.
روشهای اصلی برای انجام واکنش رسوبی عبارتند از: واکنش رسوب حلقه ای و واکنش رسوب در آگار (ژل).
توجه! تمام اجزای دخیل در واکنش بارش باید کاملا شفاف باشند.
واکنش بارش حلقه ای. با استفاده از پیپت پاستور، 0.2-0.3 میلی لیتر (5-6 قطره) سرم را به لوله رسوب اضافه کنید (سرم نباید روی دیواره های لوله قرار گیرد). آنتی ژن در همان حجم به دقت روی سرم قرار می گیرد و آن را با یک پیپت نازک پاستور در امتداد دیواره لوله آزمایش می ریزد. لوله آزمایش در یک موقعیت شیبدار نگه داشته می شود. هنگامی که به درستی لایه بندی شود، باید مرز مشخصی بین سرم و آنتی ژن وجود داشته باشد. با احتیاط برای اینکه مایع مخلوط نشود، لوله آزمایش را در پایه قرار دهید. اگر واکنش مثبت باشد، یک "حلقه" کدر در سطح مشترک آنتی ژن و آنتی بادی تشکیل می شود - یک رسوب (به شکل 48 مراجعه کنید).
واکنش با تعدادی کنترل همراه است (جدول 18). ترتیب افزودن مواد تشکیل دهنده واکنش به لوله آزمایش بسیار مهم است. شما نمی توانید سرم را روی آنتی ژن قرار دهید (در کنترل - روی محلول ایزوتونیک)، از آنجایی که چگالی نسبی سرم بیشتر است، به انتهای لوله آزمایش فرو می رود و مرز بین مایعات آشکار نمی شود.
جدول 18. طرحی برای تنظیم واکنش بارش حلقه
توجه داشته باشید. + وجود "حلقه"؛ - عدم وجود "حلقه".
نتایج پس از 5-30 دقیقه، در برخی موارد پس از یک ساعت، مانند همیشه با شروع با کنترل ثبت می شود. "حلقه" در لوله آزمایش 2 نشان دهنده توانایی سرم ایمنی برای ورود به آن است واکنش خاصبا آنتی ژن مربوطه در 3-5 لوله آزمایش نباید "حلقه" وجود داشته باشد - هیچ آنتی بادی و آنتی ژنی مطابق با یکدیگر وجود ندارد. یک "حلقه" در لوله 1 - یک نتیجه واکنش مثبت - نشان می دهد که آنتی ژن آزمایش با سرم ایمنی گرفته شده مطابقت دارد ، عدم وجود "حلقه" (حلقه فقط در لوله دوم) نشان دهنده ناسازگاری آنها است - منفی است. نتیجه واکنش
واکنش رسوب در آگار (ژل). ویژگی واکنش این است که تعامل آنتی ژن و آنتی بادی در یک محیط متراکم، یعنی در یک ژل رخ می دهد. رسوب به دست آمده یک رگه کدورت در ضخامت محیط ایجاد می کند. عدم وجود نوار نشان دهنده اختلاف بین اجزای واکنش است. این واکنش به طور گسترده در تحقیقات زیست پزشکی، به ویژه در مطالعه تشکیل سم در عامل ایجاد کننده دیفتری استفاده می شود.
کنترل سوالات
1. تفاوت اصلی بین واکنش های آگلوتیناسیون و رسوب چیست؟
2. چرا نمی توان از مواد کدر در واکنش بارش استفاده کرد؟
ورزش
1. واکنش بارش حلقه را تنظیم کنید و نتیجه را ترسیم کنید.
2. ماهیت برهمکنش آنتی ژن با آنتی بادی در واکنش رسوب در آگار را مطالعه کنید، نتیجه را ترسیم کنید (یک فنجان از معلم خود بگیرید).
واکنش لیز (سیتولیز ایمنی)
لیز ایمنی عبارت است از انحلال سلول ها تحت تأثیر آنتی بادی ها زمانی که مشارکت اجباریمتمم. برای واکنش شما نیاز دارید:
1. آنتی ژن - میکروب ها، گلبول های قرمز یا سایر سلول ها.
2. آنتی بادی (لیزین) - سرم ایمنی، کمتر سرم بیمار. سرم باکتریولیتیک حاوی آنتی بادی هایی است که در لیز باکتری ها نقش دارند. همولیتیک - همولیزین هایی که لیز گلبول های قرمز را افزایش می دهند. برای لیز اسپیروکت ها، اسپیروکتولیزین ها، سلول ها - ایتولیزین ها و غیره مورد نیاز هستند.
3. مکمل. بیشترین مکمل در سرم خوک گینه. این سرم (مخلوطی از چندین حیوان) معمولاً به عنوان مکمل استفاده می شود. مکمل تازه (بومی) ناپایدار است و به راحتی با حرارت دادن، تکان دادن یا ذخیره سازی از بین می رود، بنابراین نمی توان آن را بیش از دو روز پس از دریافت استفاده کرد. برای حفظ مکمل، 2 درصد به آن اضافه می شود اسید بوریکو 3 درصد سولفات سدیم. این مکمل را می توان تا دو هفته در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری کرد. مکمل خشک اغلب استفاده می شود. قبل از استفاده، آن را در محلول ایزوتونیک به حجم اصلی (که روی برچسب نشان داده شده است) حل می کنند.
4. محلول ایزوتونیک.
واکنش همولیز(جدول 19). برای واکنش شما نیاز دارید:
1. آنتی ژن - 3% سوسپانسیون گلبول های قرمز شسته شده گوسفند به میزان 0.3 میلی لیتر رسوب گلبول قرمز و 9.7 میلی لیتر محلول ایزوتونیک.
2. آنتی بادی - سرم همولیتیک (همولیزین) علیه گلبول های قرمز گوسفند. معمولاً در مرحله تولید تهیه می شود، لیوفیلیز می شود و تیتر آن روی برچسب مشخص می شود.
تیتر همولیزین بالاترین رقت سرم است که در آن همولیز کامل سوسپانسیون 3 درصدی گلبول های قرمز در حضور مکمل اتفاق می افتد. برای واکنش همولیز، همولیزین در تیتر سه گانه گرفته می شود، یعنی 3 برابر کمتر از قبل از تیتر رقیق می شود. به عنوان مثال، با تیتر سرم 1:1200، سرم 1:400 (0.1 میلی لیتر سرم * و 39.9 میلی لیتر محلول ایزوتونیک) رقیق می شود. همولیزین اضافی لازم است، زیرا مقداری از آن می تواند توسط سایر اجزای واکنش جذب شود.
* (شما نباید کمتر از 0.1 میلی لیتر سرم مصرف کنید - دقت اندازه گیری آسیب می بیند.)
3. کمپلمان 1:10 رقیق می شود (0.2 میلی لیتر مکمل و 1.8 میلی لیتر محلول ایزوتونیک).
4. محلول ایزوتونیک.
جدول 19. طرح واکنش همولیز
حسابداری برای نتایج اگر واکنش به درستی انجام شود، همولیز در اولین لوله آزمایش رخ می دهد - محتویات آن شفاف می شود. در گروه کنترل، مایع کدر می ماند: در لوله دوم مکمل کافی برای همولیز وجود ندارد، در لوله سوم همولیزین وجود ندارد، در لوله چهارم نه همولیزین وجود دارد و نه مکمل، در لوله 5 آنتی ژن وجود ندارد. با آنتی بادی مطابقت ندارد،
در صورت لزوم، سرم همولیتیک طبق طرح زیر تیتر می شود (جدول 20).
قبل از تیتراسیون، یک رقت اولیه سرم 1:100 (0.1 میلی لیتر سرم و 9.9 میلی لیتر محلول ایزوتونیک) تهیه کنید. رقت های لازم، مثلا:
از این رقت ها، همانطور که در جدول نشان داده شده است، 0.5 میلی لیتر سرم را به لوله های آزمایش تیتراسیون اضافه کنید. 20.
جدول 20. طرح تیتراسیون برای سرم همولیتیک (همولیزین)
در مثال ارائه شده در جدول 20، تیتر سرم همولیتیک 1:1200 است.
هنگام استفاده از سرم همولیتیک تازه، باید آن را غیرفعال کرد تا مکمل موجود در آن از بین برود. برای انجام این کار، به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد در یک حمام آب یا در یک غیرفعال کننده با ترموستات گرم می شود. روش دوم بهتر است: امکان گرم شدن بیش از حد آب پنیر، یعنی دناتوره شدن آن را از بین می برد. سرم های دناتوره شده برای آزمایش نامناسب هستند.
واکنش باکتریولیز. در این واکنش، مکمل در حضور سرم مناسب (همولوگ) باکتری ها را لیز می کند. طرح واکنش اساساً شبیه طرح واکنش همولیز است. تفاوت در این است که پس از انکوباسیون دو ساعته، تمام لوله‌های آزمایش روی ظروف پتری با محیطی مناسب برای میکروارگانیسم‌های وارد شده در آزمایش کاشته می‌شوند تا مشخص شود که آیا لیز شده است یا خیر. اگر آزمایش به درستی انجام شود، کشت از 2-5 لوله آزمایش (شاهد) باید رشد فراوانی را نشان دهد. عدم رشد یا رشد ضعیف در تلقیح از لوله آزمایش 1 (آزمایش) نشان دهنده مرگ میکروب ها است، یعنی همولوگ بودن آنها با آنتی بادی.
توجه! واکنش باکتریولیز باید در شرایط آسپتیک انجام شود.
کنترل سوالات
1. اگر به جای محلول ایزوتونیک سدیم کلرید از آب مقطر استفاده شود، چه اتفاقی برای گلبول های قرمز می افتد؟ اساس این پدیده چیست؟
2. وقتی گلبول های قرمز با سرم ایمنی همولوگ در غیاب کمپلمان برهم کنش می کنند چه واکنشی رخ خواهد داد؟
ورزش
واکنش همولیز را تنظیم کنید. نتیجه را ضبط و ترسیم کنید.
اطلاعات مربوطه.
