Ագլյուտինացիոն ռեակցիա՝ հակառեզուսի հակամարմինները որոշելու համար ( անուղղակի արձագանքԿումբս)դիմելներանոթային հեմոլիզով հիվանդների մոտ. Այս հիվանդներից մի քանիսի մոտ հայտնաբերվում են հակառեզուսի հակամարմիններ, որոնք թերի են և միավալենտ։ Նրանք հատուկ փոխազդում են Rh-դրական էրիթրոցիտների հետ, բայց չեն առաջացնում դրանց ագլյուտինացիա: Նման թերի հակամարմինների առկայությունը որոշվում է անուղղակի Coombs թեստով։ Դրա համար հակագլոբուլինային շիճուկ (մարդու իմունոգոլոբուլինների դեմ հակամարմիններ) ավելացվում է հակառեզուսային հակամարմինների + Rh-դրական էրիթրոցիտների համակարգին, որն առաջացնում է էրիթրոցիտների ագլյուտինացիա։ Կումբսի ռեակցիայի միջոցով ախտորոշվում են իմունային ծագման էրիթրոցիտների ներանոթային լիզի հետ կապված պաթոլոգիական պայմաններ, օրինակ՝ նորածնի հեմոլիտիկ հիվանդություն. Rh-դրական պտղի էրիթրոցիտները միավորվում են արյան մեջ շրջանառվող Rh գործոնի թերի հակամարմինների հետ, որոնք ունեն. անցել է պլասենցայով Rh-բացասական մորից:
Մեխանիզմ. Թերի (միավալենտ) հակամարմինները հայտնաբերելու դժվարությունը պայմանավորված է նրանով, որ այս հակամարմինները, երբ կապվում են կոնկրետ անտիգենի էպիտոպներին, ցանցային կառուցվածք չեն կազմում, և հակագենների և հակամարմինների միջև ռեակցիան չի հայտնաբերվում նաև ագլյուտինացիայի, տեղումների միջոցով: կամ այլ թեստեր: Ձևավորված հակագեն-հակամարմին բարդույթները բացահայտելու համար անհրաժեշտ է օգտագործել լրացուցիչ թեստային համակարգեր։ Թերի հակամարմինները հայտնաբերելու համար, օրինակ հղի կնոջ արյան շիճուկում էրիթրոցիտների Rh հակագենին, ռեակցիան իրականացվում է երկու փուլով. 37 ° C ջերմաստիճանում մեկ ժամվա ընթացքում; 2) նապաստակի հակամարդկային հակագլոբուլինային շիճուկ (նախապես տիտրացված աշխատանքային նոսրացման մեջ) ավելացվում է առաջին փուլից հետո մանրակրկիտ լվացված էրիթրոցիտներին։ 37 °C-ում 30 րոպե ինկուբացիայից հետո արդյունքները գնահատվում են հեմագլյուտինացիայի առկայությամբ (դրական ռեակցիա): Անհրաժեշտ է վերահսկել ռեակցիայի բաղադրիչները. 2) նորմալ շիճուկով + հակագլոբուլինային շիճուկով բուժված էրիթրոցիտներ. 3) Rh-բացասական էրիթրոցիտներ, որոնք վերաբերվում են թեստային շիճուկ + հակագլոբուլինային շիճուկ.
50. Պասիվ հեմագլյուտինացման ռեակցիա. Մեխանիզմ. Բաղադրիչներ. Դիմում.
Անուղղակի (պասիվ) հեմագլյուտինացման ռեակցիա(RNGA, RPGA)հիմնված է էրիթրոցիտների (կամ լատեքսի) օգտագործման վրա՝ դրանց մակերեսին ներծծված անտիգենների կամ հակամարմինների հետ, որոնց փոխազդեցությունը հիվանդների արյան շիճուկի համապատասխան հակամարմինների կամ անտիգենների հետ հանգեցնում է նրան, որ էրիթրոցիտները կպչում են և ընկնում դեպի հատակը։ փորձանոթ կամ բջիջ՝ փաթաթված նստվածքի տեսքով:
Բաղադրիչներ. RNGA-ի կատարման համար կարող են օգտագործվել ոչխարների, ձիերի, նապաստակների, հավերի, մկների, մարդկանց և այլոց էրիթրոցիտները, որոնք պահվում են հետագա օգտագործման համար՝ մշակելով դրանք ֆորմալդեհիդով կամ գլյուտարալդեհիդով: Էրիտրոցիտների կլանման կարողությունը մեծանում է, երբ դրանք մշակվում են տաննի կամ քրոմի քլորիդի լուծույթներով:
RNGA-ի անտիգենները կարող են ծառայել որպես միկրոօրգանիզմների պոլիսախարիդային անտիգեններ, բակտերիալ պատվաստանյութերի քաղվածքներ, վիրուսների և ռիկեցիաների անտիգեններ, ինչպես նաև այլ նյութեր:
Արյան կարմիր բջիջները, որոնք զգայուն են հիպերտոնիայի պատճառով, կոչվում են էրիթրոցիտային դիագնոստիկ: Էրիտրոցիտային դիագնոստիկումի պատրաստման համար առավել հաճախ օգտագործվում են ոչխարի էրիթրոցիտները, որոնք ունեն բարձր կլանող ակտիվություն։
Դիմում. RNGA-ն օգտագործվում է վարակիչ հիվանդությունների ախտորոշման, հղիության հաստատման ժամանակ մեզի մեջ գոնադոտրոպ հորմոնի որոշման, դեղերի, հորմոնների նկատմամբ գերզգայունությունը որոշելու և որոշ այլ դեպքերում:
Մեխանիզմ. Հեմագլյուտինացիայի անուղղակի թեստը (IRHA) ունի զգալիորեն ավելի բարձր զգայունություն և առանձնահատկություն, քան ագլյուտինացիոն թեստը: Այն օգտագործվում է ախտածինը ճանաչելու համար իր հակագենային կառուցվածքով կամ մատնանշելու և նույնականացնելու բակտերիալ արտադրանքները՝ տոքսինները հետազոտվող պաթոլոգիական նյութում: Համապատասխանաբար, օգտագործվում է ստանդարտ (առևտրային) էրիթրոցիտային հակամարմինների ախտորոշում, որը ստացվում է հատուկ հակամարմինների ադսորբցիայի միջոցով դաբաղած (տանինով մշակված) էրիթրոցիտների մակերեսին: Փորձարկման նյութի սերիական նոսրացումները պատրաստվում են պլաստիկ թիթեղների հորերում: Այնուհետև յուրաքանչյուր հորին ավելացվում է հակամարմիններով բեռնված արյան կարմիր բջիջների հավասար ծավալ՝ 3% կասեցում: Անհրաժեշտության դեպքում ռեակցիան իրականացվում է զուգահեռաբար մի քանի շարքերում՝ տարբեր խմբերի առանձնահատկությունների հակամարմիններով բեռնված էրիթրոցիտներով հորեր:
37 °C-ում 2 ժամ ինկուբացիայից հետո արդյունքները հաշվի են առնվում՝ գնահատելով տեսքըէրիթրոցիտների նստվածք (առանց թափահարման). բացասական ռեակցիայի դեպքում ջրհորի հատակին հայտնվում է նստվածք կոմպակտ սկավառակի կամ օղակի տեսքով, դրական ռեակցիայով՝ էրիթրոցիտների բնորոշ ժանյակային նստվածք, անհավասար եզրերով բարակ թաղանթ։ .
Coombs թեստն է կլինիկական վերլուծությունարյան ստուգում, որն արվում է պարզելու, թե արդյոք արյունը պարունակում է որոշակի հակամարմիններ, որոնք կարող են վտանգավոր լինել: Այս հակամարմինները կպչում են կարմիր արյան բջիջներին և կարող են ներխուժել իմմունային համակարգ, ինչպես նաև վնաս պատճառել այլ ձևերով։ Բժշկական տերմինաբանության մեջ այս հետազոտությունը կոչվում է նաև հակագլոբուլինի թեստ (AGT):
Coombs նմուշների տեսակները
Գոյություն ունեն երկու տեսակի Coombs թեստեր՝ ուղղակի և անուղղակի:
Ուղղակի Coombs թեստ, որը նաև հայտնի է որպես ուղիղ (DAT), հայտնաբերում է ավտոմատ հակամարմիններ, որոնք կպչում են կարմիր արյան բջիջների մակերեսին: Այս հակամարմինները երբեմն արտադրվում են մարմնում որոշակի հիվանդությունների պատճառով կամ որոշակի դեղամիջոցներ ընդունելիս, ինչպիսիք են պրոկաինամիդը, մեթիլդոպան կամ քինիդինը:
Այս հակամարմինները վտանգավոր են, քանի որ դրանք երբեմն առաջացնում են անեմիա՝ ոչնչացնելով արյան կարմիր բջիջները:
Այս թեստը երբեմն նշանակվում է դեղնախտի կամ անեմիայի պատճառը ախտորոշելու համար:
Սովորաբար, Coombs ռեակցիան բացասական է:
Դրական համար՝
- հեմոլիտիկ հիվանդություննորածիններ;
- աուտոիմուն հեմոլիզ;
- հեմոլիտիկ փոխներարկման ռեակցիաներ;
- թմրամիջոցների պատճառով առաջացած իմունային հեմոլիտիկ անեմիա:
Անուղղակի նմուշԿումբս, որը նաև հայտնի է որպես , օգտագործվում է արյան շիճուկում հայտնաբերված կարմիր արյան բջիջների դեմ հակամարմինները հայտնաբերելու համար (շիճուկը արյան թափանցիկ դեղին հեղուկն է, որը մնում է կարմիր արյան բջիջների և կոագուլանտի հեռացումից հետո):
Անուղղակի Coombs թեստն օգտագործվում է արյան փոխներարկման ժամանակ՝ պարզելու, թե արդյոք դոնորի արյունը համընկնում է ստացողի արյան հետ: Սա կոչվում է համատեղելիության թեստ և օգնում է կանխել դոնորի արյան ցանկացած անբարենպաստ ռեակցիա: Այս վերլուծությունըխորհուրդ է տրվում նաև հղիներին: Որոշ կանայք ունեն IgG հակամարմիններ, որոնք կարող են պլասենցայի միջով անցնել պտղի արյան մեջ և վնասել նորածինին՝ առաջացնելով հեմոլիտիկ հիվանդություն, որը հայտնի է որպես հեմոլիտիկ անեմիա:
Ընթացակարգը
Արյունը վերցվում է երակից ներարկիչի միջոցով, սովորաբար՝ երակից հետևի կողմըափի կամ արմունկի ծուռի վրա: Մինչ այդ ծակման տեղը մանրակրկիտ ախտահանվում է, իսկ արյան անալիզ վերցնելուց հետո կիրառվում է մաքուր շղարշ կամ բամբակյա բուրդ։
Ստացված արյունը մաքրվում է լաբորատորիայում, և արյան կարմիր բջիջները բաժանվում են: Այնուհետև նմուշը հաջորդաբար փորձարկվում է տարբեր շիճուկի և Coombs ռեակտիվների միջոցով, որոնք հակադրվում են: Եթե չկա ագլյուտինացիա (արյան կարմիր բջիջների կուտակում), դա նշանակում է դրական արդյունք:
Այնուամենայնիվ, եթե թեստը բացասական է, դա նշանակում է, որ արյան մեջ կան հակամարմիններ, որոնք գործում են կարմիր արյան բջիջների դեմ: Սա կարող է ցույց տալ տարբեր հիվանդություններ, ինչպիսին է անեմիան (ինչպես բնական, այնպես էլ դեղամիջոցների ընդունման հետևանքով առաջացած), սիֆիլիսը կամ միկոպլազմայի վարակը։ Արդյունքները ստանալուց հետո ներկա բժիշկը կնշանակի համապատասխան բուժում:
Տեսանյութ
Հակագլոբուլինի սկզբունքը. Էրիտրոցիտների մակերեսին տեղակայված թերի տիպի և կոմպլեմենտի մոլեկուլների (C) հակաէրիտրոցիտային հակամարմինները հայտնաբերվում են՝ ուղղակի թեստ՝ դրանց ագլյուտինացիայի միջոցով՝ մարդու հակագլոբուլինի (հակագլոբուլինի շիճուկ) հակամարմիններ պարունակող կենդանիների շիճուկի հետ շփվելու միջոցով: Անվճար շիճուկում թերի հակամարմիններհայտնաբերվում են՝ անուղղակի թեստ՝ դրանք կցելով 0 խմբի նորմալ էրիթրոցիտների խառնուրդին, որոնց բոլոր անտիգենները պատկանում են հայտնի Rh համակարգին, այնուհետև ագլյուտինացվում են հակագլոբուլինային շիճուկի ազդեցության տակ։
Նյութեր, ռեագենտներ Coombs հակագլոբուլինային թեստի համարփորձանոթներ 10/100 մլ; աստիճանավոր խողովակներ 1, 2 մլ; Pasteur pipettes; եռոտանիներ; չաղացած ապակե սլայդներ; 8,5‰ NaCl լուծույթ; կարմիր արյան բջիջները. Հիվանդի կարմիր արյան բջիջները, ինչպես նաև 0-րդ խմբին պատկանող արյան կարմիր բջիջները կստացվեն թարմ վերցված արյունից՝ օգտագործելով հակամակարդելի միջոց (EDTA լուծույթ):
0 խմբի կարմիր արյան բջիջները պետք է ընտրվեն այնպես, որ դրանք ստացվեն նորմալ անհատներից և պարունակեն բոլորը Rh համակարգի անտիգեններ. Դրանք կարող են պահվել մինչև 7 օր ավտոլոգային պլազմայում +4°C ջերմաստիճանում: 0 խմբի կարմիր արյան բջիջների բացակայության դեպքում կարող է օգտագործվել հայտնի հակագենային խճանկար, 0 խմբի կարմիր արյան բջիջների խառնուրդ, Rh-դրական և Rh-բացասական արյան կարմիր բջիջներ:
Շիճուկհիվանդը պետք է նոր ընտրված լինի.
Հակագլոբուլինի շիճուկարտադրվել է ինստիտուտի կողմից։ Dr. I. Cantacuzino, հասանելի է լիոֆիլացված ձևով 1 մլ ամպուլում: Լուծվելուց հետո շիճուկը պահել -20°C ջերմաստիճանում:
Coombs հակագլոբուլինի փորձարկման տեխնիկա:
Ա) Ուղղակի Coombs թեստ 3 անգամ ողողեք հիվանդի կարմիր արյան բջիջները 8,5‰ NaCl լուծույթով:
Կիրառեք հակագլոբուլինային շիճուկի նոսրացման մեծ կաթիլ մի քանի ապակե սլայդների վրա, իսկ կողքին՝ հիվանդի էրիթրոցիտային նստվածքի մի փոքր կաթիլ; խառնել կաթիլները ապակու անկյունով: Պատրաստված նյութը թողնել սեղանին 5 րոպե, ապա ուսումնասիրել ագլյուտինատների առկայությունը։ Երբ դրական արդյունքորոշել առավելագույն ագլյուտինացիոն տիտրը.
բ) Անուղղակի Coombs թեստ 0 խմբի էրիթրոցիտներ, Rh-դրական և Rh-բացասական, ողողել 3 անգամ 8,5‰ NaCl լուծույթով և ենթարկել հիվանդի շիճուկին՝ 2 կաթիլ էրիթրոցիտների չափով 8-10 կաթիլ շիճուկի համար, ապա ինկուբացնել 60 րոպե ժ. ջերմաստիճանը 37° ՀԵՏ. Դրանից հետո կրկին երեք անգամ լվացեք կարմիր արյան բջիջները և բուժեք դրանք հակագլոբուլինային շիճուկով, ըստ ուղիղ Coombs թեստի հրահանգների:
Երբ այն գալիս է սառը ակտիվ հակամարմինների մասին 60 րոպեի ընթացքում զգայունացնել 0 խմբի կարմիր արյան բջիջները: +4°C ջերմաստիճանում։
Նշում 1) Մի կատարեք ուղիղ Coombs թեստ արյան կարմիր բջիջների վրա, որոնք պահվում են մեկ կամ մի քանի օր + 4°C կամ սենյակային ջերմաստիճանում, քանի որ արդյունքները կարող են կեղծ դրական լինել նորմալ շիճուկում առկա թերի սառը ակտիվ հակամարմինների ամրագրման պատճառով: 2) Ծանր հիպերպրոտեինեմիայի դեպքում 4-5 անգամ լվանալ կարմիր արյան բջիջները և վերջին լվացքի հեղուկում ստուգել շիճուկի սպիտակուցների բացակայությունը սուլֆոսալիսիլիկ թթվի միջոցով։
Էրիտրոցիտների նստվածքում 2 մկգ IgG/ml հնարավոր մնացորդը կարող է չեզոքացնել հակագլոբուլինի շիճուկը. Coombs թեստը կարող է իրականացվել նաև մոնոսպեցիֆիկ հակա-IgG, -IgM, -IgA -C3 և -C4 շիճուկների միջոցով՝ պարզելու համար կարմիր արյան բջիջների մակերեսին տեղակայված բջիջների տեսակը, օրինակ՝ աուտոիմուն հեմոլիտիկ հիվանդությամբ տառապող հիվանդների մոտ: անեմիա.
Օ(I), A(II), B(III) շիճուկի 1 մեծ կաթիլ քսեք ափսեի կամ ապակե սլայդի վրա՝ օգտագործելով պիպետներ (տարբեր!): Ժամանակը նշելուց հետո օգտագործեք մաքուր ապակե ձող կամ ապակե սլայդի մաքուր անկյուն՝ շիճուկի կաթիլները արյան կաթիլների հետ համատեղելու համար: Որոշումը տևում է 5 րոպե՝ թափահարելով ափսեը, ապա կաթիլների յուրաքանչյուր խառնուրդին ավելացնել 1 կաթիլ աղի լուծույթ և գնահատել արդյունքները։ Ավելի լավ է, եթե շիճուկը գա 2 տարբեր սերիայի: Արյան խմբի արդյունքները պետք է համընկնեն շիճուկի երկու խմբաքանակներում:
Իզոհեմագլյուտինացիայի արդյունքների գնահատում.
եթե բոլոր 3 շիճուկները բացասական արձագանք են տվել, այսինքն՝ խառնուրդը միատեսակ վարդագույն է, սա O(I) արյան խումբ է.
Եթե բացասական արձագանքտվել է միայն A(II) խմբի շիճուկը, իսկ O(I) և B(III) շիճուկները դրական արձագանք են տվել, այսինքն՝ հայտնվել են հատիկներ. սա A(II) արյան խումբն է.
B(II) խմբի շիճուկը բացասական ռեակցիա է տվել, իսկ O(I) և A(II) խմբի շիճուկները տվել են դրական ռեակցիա՝ սա B(III) արյան խումբն է:
իզոհեմագլյուտինացիա. Եթե ռեակցիան դրական է, ապա խառնուրդում հայտնվում են արյան կարմիր բջիջների կպչուն կարմիր հատիկներ: Հացահատիկները միաձուլվում են ավելի մեծ հատիկների, իսկ վերջիններս՝ փաթիլների։ Շիճուկը գրեթե գունաթափված է;
եթե ռեակցիան բացասական է, ապա խառնուրդը մնում է միատեսակ գունավոր 5 րոպե վարդագույն գույնև ոչ մի հատիկ չի գտնվել.
O(I), A(II), B(III) խմբերի 3 շիճուկների հետ աշխատելիս հնարավոր է ռեակցիաների 4 համակցություն.
բոլոր 3 շիճուկները տվել են դրական արձագանքներ- AB(IV) խմբի արյան ստուգում: Այս դեպքում կատարվում է հետազոտություն AB(IV) խմբի շիճուկով։
Նշում!Փորձարկվող արյան կաթիլները պետք է լինեն 5-10 անգամ փոքր, քան շիճուկի կաթիլները:
Իզոհեմագլյուտինացիայի սխալներ.
Ագլյուտինացիա չկատարելը այնտեղ, որտեղ այն պետք է լինի, և ագլյուտինացիայի առկայությունը այնտեղ, որտեղ այն չպետք է լինի: Սա կարող է պայմանավորված լինել շիճուկի թույլ տիտրով և արյան կարմիր բջիջների վատ ագլյուտինացիայով:
Ագլյուտինացիայի առկայություն, որտեղ չպետք է լինի- Սա պսեւդոագլյուտինացիա է, երբ կարմիր արյան բջիջների կույտերը կազմում են «մետաղադրամների սյուներ»: Թիթեղը թափահարելը կամ աղի լուծույթ ավելացնելը ոչնչացնում է դրանք:
Պանագլյուտինացիա, երբ շիճուկը կպչում է արյան բոլոր կարմիր բջիջները, ներառյալ արյան սեփական խմբին: 5-րդ րոպեին ագլյուտինացիայի նշաններն անհետանում են։
Գոյություն ունի նաև այսպես կոչված սառը պանագլյուտինացիա, երբ արյան կարմիր բջիջները կպչում են սենյակում օդի ցածր ջերմաստիճանի (15 ° C-ից ցածր) պատճառով:
Այս բոլոր դեպքերում կա՛մ իրականացվում է կրկնվող ռեակցիա, կա՛մ ստանդարտ կարմիր արյան բջիջների օգտագործում։
Rh արյան որոշում
Rh կարգավիճակը որոշելու համար, այսինքն՝ մարդկանց արյան մեջ Rh համակարգի անտիգենների առկայությունը կամ բացակայությունը հայտնաբերելու համար, օգտագործվում են ստանդարտ հակառեզուսային շիճուկներ (ռեակտիվներ), որոնք տարբերվում են իրենց յուրահատկությամբ, այսինքն՝ պարունակում են հակամարմիններ այս համակարգի տարբեր անտիգենների նկատմամբ: Rh 0 (D) հակագենը որոշելու համար հակառեզուսի շիճուկն առավել հաճախ օգտագործվում է 10% ժելատինի լուծույթի ավելացմամբ կամ օգտագործվում է ստանդարտ հակառեզուս ռեագենտ, որը պատրաստված է նախապես 33% պոլիգլյուկինի լուծույթով: Հետազոտության ավելի ճշգրիտ արդյունքներ ստանալու, ինչպես նաև այլ շճաբանական համակարգերի անտիգենները հայտնաբերելու համար օգտագործվում է Coombs թեստը (այն նաև շատ զգայուն է փոխներարկված արյան համատեղելիությունը որոշելու համար): Հետազոտության համար օգտագործվում է բնիկ արյուն կամ ինչ-որ կոնսերվանտով պատրաստված արյուն։ Այս դեպքում արյունը պետք է լվացվի կոնսերվանտից տասնապատիկ ծավալով նատրիումի քլորիդի իզոտոնիկ լուծույթով։ Rh կարգավիճակը որոշելիս- Rh 0 (D) պետք է օգտագործվեն երկու տարբեր սերիայի շիճուկի կամ հակառեզուսի ռեագենտի երկու նմուշ և միևնույն ժամանակ արյան ստանդարտ կարմիր բջիջներ ստացվեն Rh-դրական (Rh +) և Rh-բացասական (Rh-) արյունից: անհատները պետք է օգտագործվեն վերահսկողության համար: Այլ իզոանտիգեններ որոշելիս պետք է համապատասխանաբար օգտագործվեն արյան կարմիր բջիջները, որոնք պարունակում են կամ չունեն հակագեն, որի դեմ ուղղված են ստանդարտ շիճուկի հակամարմինները:
Մասնակի ջերմային ագլյուտինինները հակամարմինների ամենատարածված տեսակն են, որոնք կարող են առաջացնել աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայի զարգացում: Այս հակամարմինները պատկանում են IgG-ին, հազվադեպ՝ IgM-ին, IgA-ին։
COOMBS ԹԵՍՏ
Coombs թեստ. ներածություն. Coombs թեստը լաբորատոր ախտորոշման մեթոդ է, որը հիմնված է հեմագլյուտինացման ռեակցիայի վրա:
Աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայի ախտորոշման հիմնական մեթոդը Կումբսի թեստն է։ Այն հիմնված է իմունոգոլոբուլիններին (հատկապես IgG) կամ կոմպլեմենտ բաղադրիչներին (հատկապես S3) հատուկ հակամարմինների՝ IgG-ով կամ S3-ով պատված էրիթրոցիտները ագլյուտինացնելու ունակության վրա:
IgG-ի և C3b-ի կապը էրիթրոցիտների հետ նկատվում է աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայի և դեղորայքային իմունային հեմոլիտիկ անեմիայի ժամանակ: Ուղղակի Coombs թեստ.Ուղղակի Coombs թեստը օգտագործվում է արյան կարմիր բջիջների մակերեսին ամրացված հակամարմիններ կամ լրացնող բաղադրիչներ հայտնաբերելու համար: Այն իրականացվում է հետևյալ կերպ.
Մարդու իմունոգոլոբուլինների (հակագլոբուլինային շիճուկ) կամ կոմպլեմենտի (հակակոմպլեմենտար շիճուկ) հակամարմիններ ստանալու համար կենդանին իմունացվում է մարդու շիճուկով, իմունոգոլոբուլիններով կամ մարդկային կոմպլեմենտով։ Կենդանուց ստացված շիճուկը մաքրվում է այլ սպիտակուցների հակամարմիններից։
Հիվանդի կարմիր արյան բջիջները լվանում են ֆիզիոլոգիական լուծույթով, որպեսզի ամբողջությամբ հեռացվի շիճուկը, որը չեզոքացնում է իմունոգոլոբուլինների և կոմպլեմենտների նկատմամբ հակամարմինները և կարող է կեղծ բացասական արդյունքի պատճառ դառնալ:
Եթե հակամարմինները կամ կոմպլեմենտի բաղադրիչները ամրագրված են կարմիր արյան բջիջների մակերեսին, ապա հակագլոբուլինի կամ հակակոմպլեմենտի շիճուկի ավելացումը առաջացնում է կարմիր արյան բջիջների ագլյուտինացիա:
Ուղղակի Coombs թեստն օգտագործվում է հետևյալ դեպքերում.
Աուտոիմուն հեմոլիզ.
Նորածինների հեմոլիտիկ հիվանդություն.
Թմրամիջոցների պատճառով առաջացած իմունային հեմոլիտիկ անեմիա:
Հեմոլիտիկ փոխներարկման ռեակցիաներ. Անուղղակի Coombs թեստ.Անուղղակի Coombs թեստը հայտնաբերում է արյան կարմիր բջիջների հակամարմինները շիճուկում: Դրա համար հիվանդի շիճուկը ինկուբացվում է 0 խմբի դոնորների կարմիր արյան բջիջներով, այնուհետև կատարվում է ուղիղ Կումբսի թեստ:
Անուղղակի Coombs թեստն օգտագործվում է հետևյալ դեպքերում.
Դոնորի և ստացողի արյան անհատական համատեղելիության որոշում.
Ալո հակամարմինների հայտնաբերում, ներառյալ հակամարմինները, որոնք առաջացնում են հեմոլիտիկ փոխներարկման ռեակցիաներ:
Մակերեւութային էրիթրոցիտների անտիգենների որոշումը բժշկական գենետիկայի և դատաբժշկական բժշկության մեջ.
Ոսկրածուծի փոխպատվաստման ժամանակ միանման երկվորյակների հաստատում.
Կենսաբանական հետազոտություն անցկացնելու համար արյունը սկսում է հնարավորինս արագ փոխներարկել (ցանկալի է հոսքով): 25 մլ արյան փոխներարկումից հետո համակարգի խողովակը սեղմվում է սեղմակով: Այնուհետև կատարվում է 3 րոպե դադար, որի ընթացքում վերահսկվում է ստացողի վիճակը։ Կենսաբանական հետազոտություն անցկացնելու համար երեք անգամ ներարկվում է 25 մլ արյուն։Թեստի վերջում (առաջին 75 մլ արյան փոխներարկումից հետո 25 մլ կոտորակային չափաբաժիններով 3 րոպե ընդմիջումներով) համակարգը հարմարեցվում է փոխներարկման անհրաժեշտ արագությանը: Հիվանդին մեկից ավելի շիշ արյուն փոխներարկելիս անհրաժեշտ է հեռացնել ասեղը երակից։ Այս դեպքում ասեղը հանվում է սրվակի փորձանոթից, որի մեջ արյունը դուրս է եկել, և տեղադրվում է հաջորդ սրվակի մեջ: Համակարգի խողովակը (ռետինե կամ պլաստիկ) այս պահին սեղմված է սեղմակով: Եթե արյան փոխներարկման ժամանակ անհրաժեշտ է դառնում որևէ այլ դեղամիջոց ներերակային ներարկել ստացողին, դա արվում է համակարգի ռետինե խողովակը ծակելու միջոցով: Պլաստիկ խողովակի ծակերն անընդունելի են, քանի որ դրանք չեն ընկնում: Արյան յուրաքանչյուր փոխներարկումից հետո հիվանդը պետք է մոնիտորինգի ենթարկվի՝ հայտնաբերելու և արագ վերացնելու համար հնարավոր բարդություններ, այդ թվում ալերգիկ ռեակցիաներ. Արյան փոխներարկման ավարտից 2 ժամ հետո պետք է չափել մարմնի ջերմաստիճանը։ Եթե այն մեծանա, հաջորդ 4 ժամվա ընթացքում չափումը պետք է կրկնվի ամեն ժամ: Հավասարապես կարևոր է միզարձակման և մեզի կազմի մոնիտորինգը, ինչը հնարավորություն է տալիս պարզել թունավոր հետտրանսֆուզիոն ռեակցիայի առկայությունը: Արյան փոխներարկումից հետո օլիգուրիայի և անուրիայի առաջացումը, մեզի մեջ արյան բջիջների և սպիտակուցների առկայությունը հետփոխներարկման հեմոլիզի զարգացման ուղղակի ցուցում են:
Ուղղակի Coombs թեստ. Այս թեստն օգտագործվում է երեխայի կարմիր արյան բջիջներում ամրագրված արգելափակող հակամարմինների առկայությունը ապացուցելու համար: Ուղղակի դրական թեստը ցույց է տալիս զգայունությունը և ծառայում է որպես նորածնի հեմոլիտիկ հիվանդության համոզիչ նշան նույնիսկ այլ հիվանդության հայտնվելուց առաջ: կլինիկական նշաններ. Որպես բացառություն և միայն շատ ծանր դեպքերում, ուղղակի Կումբսի թեստը կարող է բացասական լինել՝ արյան զգայուն կարմիր բջիջների արդեն տեղի ունեցող, գրեթե ամբողջական հեմոլիզի պատճառով:
Ուղղակի Coombs թեստը կատարվում է հետևյալ կերպ. երեխայի կրունկից վերցված 5 կաթիլ արյունը դրվում է փորձանոթի մեջ և ավելացվում է 5 մլ աղի լուծույթ։ Լավ խառնեք և ցենտրիֆուգեք 10 րոպե։ Արյան կարմիր բջիջների նստվածքի վերևում գտնվող թափանցիկ հեղուկը առանձնացված է: Այնուհետեւ կրկին ավելացրեք 5 մլ աղի լուծույթ, խառնեք եւ ցենտրիֆուգեք։ Երեք անգամ աղի հետ խառնելուց հետո կարմիր արյան բջիջները լավ լվանում են։ Վերին նյութի վերջին տարանջատումից հետո էրիթրոցիտային նստվածքը 0,1 մլ չափով խառնվում է 0,9 մլ ֆիզիոլոգիական լուծույթի հետ։ Այս խառնուրդից 2-3 կաթիլ քսեք ապակե սլայդի վրա և ավելացրեք մեկ կաթիլ Coombs շիճուկ: Ագլյուտինացիայի առկայությունը ցույց է տալիս, որ ռեակցիան դրական է (դրական ուղղակի Coombs թեստ): Ուսումնասիրությունը պետք է իրականացվի 16°-ից բարձր սենյակային ջերմաստիճանում՝ սառը ագլյուտինինների ազդեցությունից խուսափելու համար:
Անուղղակի Coombs թեստծառայում է որպես մայրական շիճուկում ազատ հակամարմինների առկայության վկայություն և իրականացվում է մայրական շիճուկով:
Հեմոլիտիկ հիվանդությունը նորածնի մոտ Rh անհամատեղելիությամբ սովորաբար դրսևորվում է երկրորդ հղիությունից հետո: Առաջին երեխան ծնվում է առողջ, երկրորդը՝ թեթև անեմիայի նշաններով, և միայն երրորդ հղիությունից հետո են ծնվում երեխաներ. հստակ նշաններհեմոլիտիկ հիվանդություն. Հեմոլիտիկ հիվանդության ախտանիշներով երեխա կարող են ծնել միայն նախապես զգայուն կանայք առաջին հղիության ընթացքում: Որոշ դեպքերում իմունիզացիան առաջացնում է աբորտներ և ծնունդներ մահացած երեխաներ. Հիվանդության առաջացման և ծանրության համար կարևոր է պլասենցայի վիճակը և պտղի վրա մայրական ագլյուտինինների ազդեցության տևողությունը: Երբ ագլյուտինինները հայտնվում են ծնվելուց 10-14 շաբաթ առաջ, երեխան սովորաբար ունենում է ենթկլինիկական ձևեր: Ագլուտինինների վաղ ի հայտ գալը՝ ծնվելուց 15-26 շաբաթ առաջ, առաջացնում է ծանր ձևերհիվանդություններ. Հիվանդության բոլոր ձևերի դեպքում հիմնական գործընթացը հեմոլիզն է: Հակագեն-հակամարմին ռեակցիայի հետևանքն է հեմոլիզը, լյարդի և ուղեղի մազանոթների վնասումը։ Կախված նրանից, թե որ ախտահարումն է գերակշռում, կան նաև տարբեր ձևերհիվանդություններ. Որոշ անաֆիլակտիկ երեւույթներ նույնպես վտանգավոր են։ Դրանք հանգեցնում են հիստամինային նյութերի ձևավորմանը, ինչը լուրջ վնաս է հասցնում լյարդի բջիջներին և հատկապես բազալ գանգլիաների՝ ամոնի եղջյուրի գանգլիոնային բջիջներին, երկարավուն մեդուլլաև նույնիսկ ուղեղի կեղևը: Երբ լյարդի բջիջները վնասվում են, լյարդային դեղնախտը ավելացվում է արտալյարդային դեղնախտին: Երեխաները մահանում են կերնիկտերուսի ծանր ախտանիշների պատճառով: Եթե նրանք գոյատևեն, ապա վնասվածքների ախտանիշները մնում են նյարդային համակարգ(արտաբուրգային համակարգի խանգարումներ խորեոաթետոտիկ շարժումներով, յուրահատուկ պարային քայլվածք, գլխի հարկադիր շարժումներ, երբեմն կոորդինացման խանգարում կամավոր շարժումներհաճախակի անկումներով, ավելացել է տոնուսըմկանները, մտավոր հետամնացություն, այսինքն՝ այսպես կոչված նշաններով։ էնցեֆալոպաթիա հետինֆանտում):
