Կումբսի ռեակցիան ուղղակի և անուղղակի է: Նորածնի հեմոլիտիկ հիվանդության ախտորոշման Coombs թեստը

Coombs թեստը մեթոդ է լաբորատոր հետազոտություն, պատրաստված հեմագլյուտինացիայի վրա ազդելով։ Այն հիմնված է իմունոգոլոբուլինների և ֆերմենտային տարրերի նկատմամբ հակամարմինների ընկալունակության, ինչպես նաև C3 կամ Lg-ով պատված էրիթրոցիտները սոսնձելու նրանց ունակության վրա։

Ուղղակի Coombs ախտորոշում

Օգտագործվում է բջիջների արտաքին մասում տեղադրված հակամարմինները կամ լրացնող բաղադրիչները հայտնաբերելու համար: Ուղղակի Coombs թեստը կատարվում է հետևյալ կերպ.

Նման նմուշի օգտագործումը

Ուղղակի Coombs ախտորոշումը օգտագործվում է որոշակի դեպքերում, ինչպիսիք են.

• փոխներարկման ազդեցություն;
• աուտոիմուն հեմոլիզ;
• բուժիչ հեմոլիտիկ անեմիա.

Անուղղակի Coombs թեստ

Այս ախտորոշումը հնարավորություն է տալիս հայտնաբերել հակամարմիններ բջիջների նկատմամբ շիճուկում, որը, որպես կանոն, ինկուբացվում է 0-րդ տիպի դոնորային կարմիր արյան բջիջներով, այնուհետև կատարվում է ուղիղ թեստ։ Դիմել անուղղակի ախտորոշում Coombs հետեւյալ դեպքերում.

Ինչպես պատրաստվել վերլուծությանը

Քննությանը նախապատրաստվելու որոշ կանոններ կան.

1. Եթե ​​հիվանդը նորածին է, ծնողները պետք է իմանան, որ թեստը կօգնի ախտորոշել նորածնի հեմոլիտիկ հիվանդությունը:
2. Եթե ​​հիվանդը ունի հեմոլիտիկ անեմիայի կասկածներ, ապա նրան պետք է բացատրել, որ անալիզը թույլ կտա պարզել՝ արդյոք դա պայմանավորված է պաշտպանիչ խանգարումներով, դեղորայքով կամ այլ գործոններով։
3. Կումբսի թեստը, ուղղակի և անուղղակի, սննդի կամ սննդակարգի վրա որևէ սահմանափակում չի դնում:
4. Պետք է տեղեկացնել հիվանդին, որ հետազոտության համար անհրաժեշտ է արյուն վերցնել երակից, ինչպես նաև ասել, թե կոնկրետ երբ է կատարվելու երակային վիրահատությունը:
5. Ձեզ նույնպես պետք է զգուշացնել հնարավորության մասին անհանգստությունվիրակապը թեւին քսելու և բուն ընթացակարգի ընթացքում։
6. Դեղամիջոցները, որոնք կարող են ազդել նմուշի արդյունքի վրա, պետք է դադարեցվեն:

Այս դեղերը ներառում են.

• «Ստրեպոմիցին»;
• «Մեթիլդոպա»;
• «Պրոկաինամիդ»;
• սուլֆոնամիդներ;
• «Մելֆալան»;
• «Քվինիդին»;
• «Ռիֆամպին»;
• «Իսոնիազիդ»;
• ցեֆալոսպորիններ;
• «Հիդրալազին»;
• «Քլորպրոմազին»;
• «Լևոդոպա»;
• «Տետրացիկլին»;
• «Դիֆենիլհիդանտոին»;
• «Ethosuximide»;
• «Պենիցիլինի»;
• մեֆենամիկ թթու.

Արյան նմուշառումը կատարվում է առավոտյան դատարկ ստամոքսի վրա։

Ինչպես է անցկացվում միջոցառումը

Coombs թեստն իրականացվում է հետևյալ հաջորդականությամբ.

1. Մեծահասակ հիվանդի մոտ ախտորոշում կատարելիս երակային պունկցիայից հետո արյունը վերցվում է խողովակների մեջ EDTA (էթիլենդիամինետրաացետատ) պարունակությամբ:
2. Նորածնի արյունը պորտալարից վերցվում է EDTA պարունակող բաժակի մեջ:
3. Բամբակյա շվաբրով սեղմեք ծակած հատվածը, մինչև արյունահոսությունը դադարի:
4. Եթե ​​երակային պունկցիայի տեղում կապտուկ է հայտնվում, նշանակվում են տաք կոմպրեսներ։
5. Արյան հավաքումից հետո հիվանդին թույլատրվում է վերադառնալ դեղամիջոցներ ընդունելուն:
6. Անհրաժեշտ է տեղեկացնել նորածնի ծնողներին, որ անեմիայի դինամիկան վերահսկելու համար կարող է պահանջվել երկրորդական անալիզ։

Coombs թեստի առավելությունները

Նման հետազոտությունն ունի որոշ առավելություններ, մասնավորապես.

Վերլուծության թերությունները

Կումբսի դրական թեստը բավականին աշխատատար փորձաքննության մեթոդ է, որը պահանջում է կատարման բնորոշ ճշգրտություն: Այն օգտագործելիս դուք կարող եք հանդիպել որոշակի դժվարությունների, հատկապես թույլ դրական ազդեցությունների մեկնաբանման հետ կապված:

Պարզվել է, որ սխալ բացասական կամ թույլ դրական ռեակցիաները Coombs թեստերի արտադրության ժամանակ կարող են լինել անբավարար ակտիվ բջիջների լվացման, շիճուկի մնացորդներով հակագլոբուլինային ռեագենտի թուլացման, ինչպես նաև ոչ յուղոտ արտաքինի հետ կապերի հետևանք, որի վրա կարող է հակագլոբուլինը: կցել՝ դրանով իսկ կորցնելով իր արդյունավետությունը։

Coombs թեստն ունի ևս մեկ թերություն՝ հակագլոբուլինային ռեագենտի ցածր կայունությունը, որի ձեռքբերումն ու պահպանումը. անհատական ​​հատկանիշներ, ինչը նմանապես դժվարացնում է հակագլոբուլինային շիճուկի ազդեցությունը հեագգլուտինացման վրա թվային գնահատումը:

Հիվանդություններ, որոնք կարող են հայտնաբերվել հետազոտության ընթացքում

Coombs ախտորոշումը հնարավորություն է տալիս հայտնաբերել որոշակի տեսակի հիվանդություններ, ինչպիսիք են.

• նորածնի հեմոլիտիկ անբավարարություն;
• տարբեր փոխներարկման ռեակցիաներ;
• աուտոիմուն հեմոլիզ;
• թմրամիջոցներից առաջացած հեմոլիտիկ անեմիա.

Այսօր Coombs թեստը համարվում է բավականին տարածված արյան ստուգման համակարգ ինչպես մեծահասակների, այնպես էլ նորածինների համար: Այն հնարավորություն է տալիս բացահայտել բազմաթիվ տարբեր հիվանդություններ:

Հակամարմիններ, որը գտնվում է էրիթրոցիտների մակերեսին, կարող է լինել ստատիկ կամ ազատ վիճակում արյան պլազմա. Կախված հակամարմինների վիճակից, կատարվում է ուղղակի կամ անուղղակի Coombs ռեակցիա։ Եթե ​​հիմքեր կան ենթադրելու, որ հակամարմինները ամրագրված են կարմիր արյան բջիջների մակերեսին, ապա կատարվում է ուղիղ Coombs թեստ: Այս դեպքում թեստը տեղի է ունենում մեկ փուլով՝ ավելացնելով հակագլոբուլինի շիճուկ. Եթե ​​կարմիր արյան բջիջների մակերեսին առկա են թերի հակամարմիններ, ագլյուտինացիակարմիր արյան բջիջները

Անուղղակի արձագանք

Անուղղակի Coombs ռեակցիան տեղի է ունենում 2 փուլով. Նախ պետք է արհեստականորեն իրականացնել զգայունացումկարմիր արյան բջիջները Դրա համար արյան կարմիր բջիջները և փորձարկվող արյան շիճուկը ինկուբացվում են, ինչը հանգեցնում է հակամարմինների ամրացմանը կարմիր արյան բջիջների մակերեսին: Որից հետո կատարվում է Coombs թեստի երկրորդ փուլը՝ հակագլոբուլինային շիճուկի ավելացում։

Տեղումների ռեակցիա - RP (լատիներեն praecipilo-ից նստվածք) լուծվող մոլեկուլային անտիգենի համալիրի առաջացումն ու նստեցումն է հակամարմիններով ամպամածության տեսքով, որը կոչվում է. նստվածք. Այն ձևավորվում է, երբ անտիգեններն ու հակամարմինները խառնվում են համարժեք քանակությամբ, դրանցից մեկի ավելցուկը նվազեցնում է իմունային համալիրի ձևավորումը։ Տեղումների ռեակցիան իրականացվում է փորձանոթներում (օղակային տեղումների ռեակցիա), գելերում, սննդարար միջավայրերում և այլն: Տեղումների ռեակցիայի տեսակները կիսահեղուկ ագարի կամ ագարոզայի գելում, կրկնակի իմունոդիֆուզիոն միջոցով: Ouchterlony, ճառագայթային իմունոդիֆուզիոն, իմունոէեկտրոֆորեզև այլն։

Օղակաձեւ տեղումների ռեակցիա. Ռեակցիան իրականացվում է նեղ տեղումների խողովակներով. լուծվող հակագենը շերտավորվում է իմունային շիճուկի վրա: Հակագենի և հակամարմինների օպտիմալ հարաբերակցությամբ, անթափանց նստվածքի օղակ. Եթե ​​ռեակցիայի մեջ որպես անտիգեն օգտագործվում են խաշած և ֆիլտրացված հյուսվածքների քաղվածքները, ապա այս ռեակցիան կոչվում է առաջին ջերմային նստվածքային ռեակցիա (ռեակցիան, որում հայտնաբերվում է սիբիրախտի հապտենը)։
Ouchterlony կրկնակի իմունոդիֆուզիոն ռեակցիա. Ռեակցիան կարգավորելու համար հալված ագարի գելի բարակ շերտը լցնում են ապակե ափսեի վրա և պնդանալուց հետո դրա մեջ հորեր են կտրում։ Անտիգենները և իմունային շիճուկները տեղադրվում են առանձին գելի հորերի մեջ, որոնք ցրվում են դեպի միմյանց: Հանդիպման վայրում, համարժեք համամասնություններով, նրանք ձևավորում են նստվածք՝ սպիտակ շերտի տեսքով։ Բազմաբաղադրիչ համակարգերում անտիգեններով և հակամարմիններով հորերի միջև հայտնվում են նստվածքի մի քանի տողեր. միանման AG-ներում նստվածքի գծերը միաձուլվում են. ոչ միանման AG-ներում դրանք հատվում են։
Ճառագայթային իմունոդիֆուզիոն ռեակցիա.Իմունային շիճուկը հալած ագար գելով հավասարաչափ լցվում է ապակու վրա: Գելի մեջ պնդացումից հետո հորատվում են հորեր, որոնց մեջ հակագենը տեղադրվում է տարբեր նոսրացումներով։ Հակագենը, ցրվելով գելի մեջ, հակամարմիններով հորերի շուրջը ստեղծում է օղակաձև տեղումների գոտիներ։ Տեղումների օղակի տրամագիծը համաչափ է հակագենի համակենտրոնացմանը: Ռեակցիան օգտագործվում է արյան շիճուկում իմունոգլոբուլինները որոշելու համար տարբեր դասեր, կոմպլեմենտի համակարգի բաղադրիչներ և այլն։
Իմունոէլեկտրոֆորեզ- էլեկտրոֆորեզի և իմունային նստվածքի համադրություն. անտիգենների խառնուրդը ներմուծվում է գելի հորերի մեջ և բաժանվում գելի մեջ՝ օգտագործելով էլեկտրոֆորեզ, այնուհետև իմունոսերմը ավելացվում է էլեկտրոֆորեզի գոտիներին զուգահեռ ակոսում, որի հակամարմինները ցրվում են գելի մեջ և ձևավորել տեղումների գծեր անտիգենի հետ «հանդիպման» վայրում:
Ֆլոկուլյացիայի ռեակցիա(ըստ Ռամոնի) (լատիներեն f1oecus - բրդյա փաթիլներ) - թույնի ռեակցիայի ընթացքում թույնի կամ տոքսոիդ - հակատոքսինի մեջ օպալեսցենտային կամ ֆլոկուլենտ զանգվածի առաջացում (իմունոպրեցիպիտացիա): Այն օգտագործվում է հակատոքսիկ շիճուկի կամ տոքսոիդի ակտիվությունը որոշելու համար:

HLA մուտքագրում- Մարդու հիմնական հյուսվածհամատեղելիության համալիրի` HLA համալիրի ուսումնասիրություն: Այս ձևավորումը ներառում է 6-րդ քրոմոսոմի գեների մի շրջան, որոնք կոդավորում են HLA անտիգենները, որոնք ներգրավված են տարբեր իմունային պատասխաններում:

Առաջադրանքներ համար HLA մուտքագրումկարող է շատ տարբեր լինել՝ կենսաբանական նույնականացում (HLA տիպը ժառանգվում է ծնողների գեների հետ միասին), նախատրամադրվածության որոշում տարբեր հիվանդություններ, օրգանների փոխպատվաստման համար դոնորների ընտրություն - սա ներառում է դոնորի և ստացողի հյուսվածքների HLA տիպավորման արդյունքների համեմատություն: Օգտագործելով HLA տիպավորումը, որոշվում է, թե ինչքանով են նման կամ տարբեր ամուսինները հիստհամատեղելիության անտիգենների առումով՝ անպտղության դեպքերը ախտորոշելու համար։

HLA մուտքագրումն առաջարկում է HLA պոլիմորֆիզմի վերլուծությունև իրականացվում է երկու եղանակով՝ սերոլոգիական և մոլեկուլային գենետիկական։ HLA տիպավորման դասական շճաբանական մեթոդը հիմնված է միկրոլիմֆոցիտոտոքսիկ թեստի վրա, իսկ մոլեկուլային մեթոդը օգտագործում է PCR (պոլիմերազային շղթայական ռեակցիա):

Շճաբանական HLA մուտքագրումիրականացվում է մեկուսացված բջիջների պոպուլյացիաների վրա: Հիմնական հիստոհամատեղելիության համալիրի անտիգենները կրում են հիմնականում լիմֆոցիտները: Հետևաբար, T-լիմֆոցիտների կասեցումը օգտագործվում է որպես I դասի անտիգենների հիմնական կրողներ, իսկ B լիմֆոցիտների կասեցում՝ HLA II դասի անտիգենները որոշելու համար: Պահանջվող բջիջների պոպուլյացիաները ամբողջական արյունից մեկուսացնելու համար օգտագործվում է կա՛մ ցենտրիֆուգացիա, կա՛մ իմունոմագնիսական տարանջատում: Ենթադրվում է, որ առաջին մեթոդը կարող է հանգեցնել կեղծ դրական տվյալների, քանի որ դա հանգեցնում է որոշ բջիջների մահվան: Երկրորդ մեթոդը ճանաչվել է ավելի կոնկրետ՝ բջիջների ավելի քան 95%-ը մնում է կենսունակ:

Բայց հիմքը լիմֆոցիտոտոքսիկ թեստ կատարելու համար HLA մուտքագրումհատուկ շիճուկ է, որը պարունակում է հակամարմիններ HLA I և II դասի անտիգենների տարբեր ալելային տարբերակների նկատմամբ: Շճաբանական թեստը կարող է որոշել HLA տիպը՝ ուսումնասիրելով, թե որ շիճուկներն են փոխազդում լիմֆոցիտների հետ և որոնք՝ ոչ:

Եթե ​​բջիջների և շիճուկի միջև տեղի է ունենում ռեակցիա, արդյունքը բջջի մակերեսին հակագեն-հակամարմին համալիրի ձևավորումն է: Կոմպլեմենտ պարունակող լուծույթ ավելացնելուց հետո տեղի է ունենում բջիջների լիզում և մահ: Շճաբանական HLA տիպային թեստը գնահատվում է ֆլյուորեսցենտային մանրադիտակի միջոցով՝ գնահատելու դրական (կարմիր ֆլուորեսցենտ) և բացասական (կանաչ ֆլուորեսցենտ) ռեակցիաները կամ ֆազային կոնտրաստ միկրոսկոպիա՝ մեռած բջիջների միջուկները ներկելու համար: HLA տիպավորման արդյունքը ստացվում է՝ հաշվի առնելով արձագանքվող շիճուկների և հակագենների խաչաձև արձագանքող խմբերի առանձնահատկությունը և ցիտոտոքսիկ ռեակցիայի ինտենսիվությունը:

Սերոլոգիականի թերությունները HLA մուտքագրումխաչաձև ռեակցիաների առկայությունն են, հակամարմինների թույլ մերձեցումը կամ HLA անտիգենների ցածր արտահայտվածությունը, մի շարք HLA գեներում սպիտակուցային արտադրանքի բացակայությունը:

Ավելի ժամանակակից, մոլեկուլային մեթոդներ HLA մուտքագրումնրանք օգտագործում են արդեն ստանդարտացված սինթետիկ նմուշներ, որոնք արձագանքում են ոչ թե լեյկոցիտների մակերևույթի անտիգեններին, այլ ԴՆԹ-ին և ուղղակիորեն ցույց են տալիս, թե որ հակագեններն են առկա նմուշում։ Մոլեկուլային մեթոդները չեն պահանջում կենդանի լեյկոցիտներ մարդկային բջիջկարելի է ուսումնասիրել, և մի քանի միկրոլիտր արյունը բավական է աշխատելու համար, կամ կարող եք սահմանափակվել բերանի լորձաթաղանթից քերելով:

Մոլեկուլային գենետիկ HLA մուտքագրումօգտագործում է PCR մեթոդը, որի առաջին փուլը մաքուր գենոմային ԴՆԹ-ի ստացումն է (ամբողջ արյունից, լեյկոցիտների կախոցից, հյուսվածքներից):

Այնուհետև ԴՆԹ-ի նմուշը պատճենվում է. ուժեղացվում է in vitro՝ օգտագործելով պրայմերներ (կարճ միաշղթա ԴՆԹ) հատուկ HLA տեղանքի համար: Յուրաքանչյուր այբբենարանի զույգի ծայրերը պետք է խստորեն լրացնեն հատուկ ալելին համապատասխանող եզակի հաջորդականությունը, հակառակ դեպքում ուժեղացում չի առաջանա:

ՊՇՌ-ից հետո կրկնօրինակման ժամանակ ստացվում են մեծ քանակությամբ ԴՆԹ-ի բեկորներ, որոնք կարելի է տեսողական գնահատել։ Դա անելու համար ռեակցիայի խառնուրդները ենթարկվում են էլեկտրոլիզի կամ հիբրիդացման, և արդյոք տեղի է ունեցել հատուկ ուժեղացում, որոշվում է ծրագրի կամ աղյուսակի միջոցով: HLA տիպավորման արդյունքը ներկայացված է համապարփակ հաշվետվության տեսքով՝ գենային և ալելային մակարդակներում: Օգտագործված նմուշների ստանդարտացման շնորհիվ, մոլեկուլ HLA մուտքագրումավելի ճիշտ՝ սերոլոգիական։ Բացի այդ, այն տրամադրում է ավելի շատ տեղեկատվություն (ավելի շատ նոր ԴՆԹ ալելներ) և ավելին բարձր մակարդակդրա մանրամասնությունը, քանի որ այն հնարավորություն է տալիս բացահայտել ոչ միայն անտիգենները, այլև հենց ալելները, որոնք որոշում են, թե որ հակագենն է առկա բջջի վրա:

Իմունային լիզի ռեակցիա.Ռեակցիան հիմնված է հատուկ հակամարմինների՝ բջիջների հետ իմունային համալիրներ ձևավորելու ունակության վրա, ներառյալ էրիթրոցիտները և բակտերիաները, ինչը հանգեցնում է կոմպլեմենտի համակարգի ակտիվացմանը դասական ճանապարհի երկայնքով և բջիջների լիզում: Իմունային լիզի ռեակցիաներից առավել հաճախ օգտագործվում է հեմոլիզի ռեակցիան, իսկ բակտերիոլիզի ռեակցիան՝ հազվադեպ (հիմնականում խոլերայի և խոլերանման վիբրիոների տարբերակման ժամանակ)։

Հեմոլիզի ռեակցիա.Կոմպլեմենտի առկայության դեպքում հակամարմինների հետ ռեակցիայի ազդեցության տակ արյան կարմիր բջիջների ամպամած կասեցումը վերածվում է վառ կարմիր թափանցիկ հեղուկի՝ «լաքի արյան»՝ հեմոգլոբինի արտազատման պատճառով: Կոմպլեմենտի ֆիքսման ախտորոշիչ ռեակցիա (FFR) սահմանելիս հեմոլիզի ռեակցիան օգտագործվում է որպես ցուցիչ՝ ստուգելու ազատ կոմպլեմենտի առկայությունը կամ բացակայությունը (ֆիքսումը):

Տեղական հեմոլիզի ռեակցիա գելում(Էռնի ռեակցիա) հեմոլիզի ռեակցիայի տարբերակներից մեկն է։ Այն թույլ է տալիս որոշել հակամարմիններ առաջացնող բջիջների քանակը։ Հակամարմիններ արտազատող բջիջների՝ հեմոլիզինների քանակը որոշվում է հեմոլիզի թիթեղների քանակով, որոնք հայտնվում են էրիթրոցիտներ պարունակող ագարի գելում՝ ուսումնասիրվող և լրացնող լիմֆոիդ հյուսվածքի բջիջների կասեցում:

Իմունֆլյորեսցենտային մեթոդ

(RIF, իմունֆլյորեսցենտային ռեակցիա) հատուկ Ags (Abs) հայտնաբերման մեթոդ է՝ օգտագործելով Abs (Ags) ֆտորոքրոմի հետ կապված: Այն ունի բարձր զգայունություն և առանձնահատկություն: Օգտագործվում է վարակների էքսպրես ախտորոշման համար։ հիվանդություններ (հետազոտության նյութում հարուցիչի նույնականացում), ինչպես նաև լեյկոցիտների (իմունոֆենոտիպավորում) և այլ բջիջների աբ և մակերեսային ընկալիչների և մարկերների որոշման համար։ Ուղղակի I. մ.բաղկացած է հյուսվածքի մի հատվածի կամ քսուքի մշակումից՝ պաթոլոգիական նյութից կամ մանրէաբանական ընդերքից, որը պարունակում է հատուկ Abs՝ կապված ֆտորոքրոմի հետ. պատրաստուկը լվանում են՝ ազատելու այն չկապված որովայնից և հետազոտվում է ֆլուորեսցենտային մանրադիտակի տակ: Դրական դեպքերում օբյեկտի ծայրամասում հայտնվում է փայլուն իմունային համալիր։ Վերահսկողությունը անհրաժեշտ է ոչ սպեցիֆիկ լյումինեսցենցիան բացառելու համար: ժամը անուղղակի. Նրանց.առաջին փուլում հյուսվածքի հատվածը կամ քսուքը մշակվում է ոչ լյումինեսցենտային հատուկ նյութով, երկրորդում՝ լյումինեսցենտային նյութով կենդանու -գլոբուլինների դեմ, որն օգտագործվել է առաջին փուլում: Դրական դեպքում ձևավորվում է լուսավոր կոմպլեքս՝ բաղկացած Ar, At-ից և At-ի դեմ At-ից (սենդվիչ մեթոդ): Բացի լյումինեսցենտային մանրադիտակից, RIF-ը հաշվի է առնվում բջիջների ֆենոտիպավորման ժամանակ: լազերային բջիջների տեսակավորող .

Հոսքի ցիտոմետրիա- բջջի պարամետրերի, նրա օրգանելների և դրանում տեղի ունեցող գործընթացների օպտիկական չափման մեթոդ:

Տեխնիկան ներառում է լազերային ճառագայթից լույսի ցրման հայտնաբերում, երբ բջիջն անցնում է դրա միջով հեղուկի հոսքով, և լույսի ցրման աստիճանը թույլ է տալիս պատկերացում կազմել բջջի չափի և կառուցվածքի մասին: Բացի այդ, անալիզը հաշվի է առնում քիմիական միացությունների ֆլյուորեսցենցիայի մակարդակը, որոնք բջջի մաս են կազմում (ավտոֆլյորեսցենտ), կամ նմուշին ավելացվել են մինչև հոսքային ցիտոմետրիա:

Բջջային կախոցը, որը նախապես պիտակավորված է լյումինեսցենտ մոնոկլոնալ հակամարմիններով կամ լյումինեսցենտային ներկերով, մտնում է հոսքի բջիջով անցնող հեղուկի հոսքը: Պայմաններն ընտրված են այնպես, որ բջիջները մեկը մյուսի հետեւից շարվում են՝ պայմանավորված այսպես կոչված. շիթերի հիդրոդինամիկ կենտրոնացում շիթում: Այն պահին, երբ բջիջը հատում է լազերային ճառագայթը, դետեկտորները գրանցում են.

լույսի ցրում փոքր անկյուններում (1°-ից մինչև 10°) ( այս հատկանիշըօգտագործվում է բջիջների չափը որոշելու համար):

լույսի ցրում 90° անկյան տակ (թույլ է տալիս դատել միջուկ/ցիտոպլազմ հարաբերակցությունը, ինչպես նաև բջիջների տարասեռությունը և հատիկավորությունը):

լյումինեսցենտային ինտենսիվությունը մի քանի լյումինեսցենտային ալիքների միջոցով (2-ից մինչև 18-20) - թույլ է տալիս որոշել բջջային կասեցման ենթաբնակարանային կազմը և այլն:

Coombs թեստ

Ուղղակի Coombs թեստը հակագլոբուլինային թեստ է (ագլյուտինացիա գելում, որը թույլ է տալիս հայտնաբերել ամբողջական երկվալենտ հակամարմիններ), որը հայտնաբերում է IgG դասի հակամարմինները և կոմպլեմենտի C3 բաղադրիչը կարմիր արյան բջիջների մակերեսին: Սովորաբար, ուղղակի Coombs թեստի միջոցով հայտնաբերված հակամարմինները ունեն լայն առանձնահատկություն, որը կապված չէ լավ հաստատված հակագենի հետ: Դրական ուղղակի Coombs թեստը հստակ ցույց է տալիս, որ հիվանդը ունի հեմոլիտիկ անեմիա, չնայած ոչ բոլոր հիվանդներն են, ովքեր դրական ուղղակի հակագլոբուլինի թեստով են տառապում այս հիվանդությամբ: Հիվանդների մոտավորապես 10%-ի մոտ հակամարմինները կամ կոմպլեմենտները կարմիր արյան բջիջների մեմբրանի վրա չեն կարող որոշվել ուղղակի Coombs թեստով (թեստը բացասական է), սակայն, այնուամենայնիվ, նրանք տառապում են աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայից: Նման դեպքերում հակամարմինների սպեցիֆիկությունը պարզելու համար օգտագործվում են թեստեր՝ դրանց էլյույացիայի հետ։ Ուղղակի Coombs թեստը, դրական միայն կոմպլեմենտի համար, սովորաբար վերաբերում է IgM տեսակի սառը հակամարմիններին: Այս դեպքում IgM հակամարմիններառկա չէ կարմիր արյան բջիջների վրա, երբ բազալ ջերմաստիճանըմարմիններ. Այնուամենայնիվ, հաշվի առնելով այն փաստը, որ IgM հակամարմինները ակտիվորեն ամրացնում են կոմպլեմենտը, և կոմպլեմենտը մնում է կարմիր արյան բջիջների վրա, աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայի այս ձևով (սառը ագգուտինինի հիվանդություն), Coombs թեստը դրական կլինի միայն լրացման համար:

Ուղղակի Coombs թեստը դրական է տաք հակամարմինների հետևանքով առաջացած աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայի, դեղորայքի հետևանքով առաջացած աուտոիմուն անեմիայի դեպքում (մեթիլդոպա ընդունելու ժամանակ հիվանդների մինչև 20% դրական արձագանք), հեմոլիտիկ անեմիայի թմրադսորբցիոն տեսակ, հեմոլիտիկ անեմիայի իմունոկոմպլեքս տեսակ (թեստը դրական է միայն C3-ի համար), սառը հակամարմիններով առաջացած աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիայով՝ սառը ագլյուտինինային հիվանդություն (թեստը դրական է միայն C3-ի համար): Պարոքսիզմալ սառը հեմոգլոբինուրիայի դեպքում ուղղակի Coombs թեստը բացասական է:
IN սուր շրջանհիվանդություններ, որոնք պայմանավորված են արյան կարմիր բջիջների քայքայմամբ, որոնց վրա մեծ քանակությամբ հակամարմիններ են գրանցվել, հեմոլիտիկ ճգնաժամի ժամանակ, ինչպես նաև հակամարմինների անբավարար քանակով քրոնիկ ընթացքհիվանդություն, կարող է նկատվել բացասական ուղղակի Coombs թեստ:

:

• Արյան լաբորատոր անալիզների որակի ապահովման կարեւոր պայման է նյութի ընդունումը դատարկ ստամոքսին, առավոտյան (մինչեւ ժամը 12:00-ն):
• Թեստից 12 ժամ առաջ դուք պետք է խուսափեք ալկոհոլ խմելուց, ծխելուց, ուտելուց և ֆիզիկական ակտիվությունը սահմանափակելուց:
• Արյան անալիզի առավոտյան կարող եք ջուր խմել։
• Խուսափեք դեղեր ընդունելուց; Եթե ​​հնարավոր չէ դադարեցնել դեղորայքի ընդունումը, ապա պետք է տեղեկացվի լաբորատորիան:
• Ցանկալի է նյութը վերցնել նախքան որևէ բժշկական ախտորոշիչ ընթացակարգ իրականացնելը։
• Կանանց մոտ հորմոնների մակարդակը գնահատելիս կարևոր է հաշվի առնել օրը դաշտանային ցիկլԵ՞րբ է լավագույն ժամանակը որոշ հորմոններ որոշելու համար: Այս տեղեկատվությունը կարող եք ստանալ ձեր բժշկից:

Ցուցանիշ	Բնութագրական
Անալիզատոր և թեստային համակարգ	Գել քարտեր; DiaMed AG (Շվեյցարիա)
Հղման արժեքներ	Բացասական արդյունք / Դրական արդյունք
Խոչընդոտող գործոններ. Դեղեր
Դրական թեստը հնարավոր է հետևյալ դեղամիջոցներն ընդունելիս՝ ացետամինոֆեն, սալիցիլաթթուամինոպիրին, հակահիստամիններ, կարբրոմ, ցեֆալոսպորիններ, քլորպրոմազին, քլորպրոպամիդ, ցիսպլատին, կլոնիդին, դիպիրոն, էթոսուկսիմիդ, ֆենֆլուրամին, ֆուադին, հիդրալազին, հիդրոքլորոթիազիդ, իբուպրոֆեն, ինսուլին, իզոնիազիդ, լևոդոպաթթիլան, մեֆենադին ֆենսին, պենիցիլամին, մենք, phenacetin, phenylbutazone, probenecid, procainamide, quinidine, quinine, rifampin, streptomycin, sulfonamides, sulfonylurea ածանցյալներ, tetracycline, triamterene, trimellitic anhydride
Օգտագործման ցուցումներ
Իմունային հեմոլիտիկ անեմիայի ախտորոշում, հեմոլիտիկ հիվանդություննորածիններ, դեղորայքային իմունային հեմոլիտիկ անեմիա, հեմոլիտիկ փոխներարկման ռեակցիաներ
Արդյունքների մեկնաբանություն
Սովորաբար, ուղիղ Coombs թեստը բացասական է: Դրական թեստ Coombs at: աուտոիմուն հեմոլիտիկ անեմիա; նորածինների հեմոլիտիկ հիվանդություն; թմրամիջոցների պատճառով առաջացած իմունային հեմոլիտիկ անեմիա; հեմոլիտիկ փոխներարկման ռեակցիաներ

Coombs ռեակցիա - արդյունավետ մեթոդմարդու արյան մեջ էրիթրոցիտային անտիգենների և հակաէրիթրոցիտային հակամարմինների հայտնաբերում անուղղակի արձագանքագլյուտինացիա. Թեստի հիմքը G դասի իմունոգոլոբուլինների (IgG) վրա հիմնված հատուկ մոնոկլոնալ ռեագենտների օգտագործումն է էրիթրոցիտների անտիգենների տիպավորման համար, որին հաջորդում է Coombs հակագլոբուլինային շիճուկի (AGS) օգտագործումը երկրորդ փուլում:

AGS-ն արտադրվում է լաբորատոր կենդանիների արյունից շիճուկ խառնելով, որոնք իմունացված են մարդու իմունոգոլոբուլինների G-ով և մոնոկլոնալ հակամարմիններով՝ բաղադրամասերից մեկին՝ մարդու շիճուկի C3D կոմպլեմենտին: AGS-ն առաջացնում է հատուկ հակամարմիններով զգայուն արյան կարմիր բջիջների ագլյուտինացիա: AGS-ի ազդեցության տակ կարմիր արյան բջիջների վրա հակամարմինների բացակայության դեպքում դրական ռեակցիա չի առաջանում:

Անուղղակի Coombs ռեակցիան թույլ է տալիս որոշել հետևյալի առկայությունը.

• էրիթրոցիտների անտիգեններ, որոնք հայտնաբերվում են IgG ռեակտիվներով («թերի» հակամարմիններ, օրինակ՝ մոնոկլոնալ ռեակտիվներ՝ anti-D, anti-F Y a, anti-F Y b);
• IgG դասի հակաէրիթրոցիտային հակամարմիններ.

Անուղղակի հակագլոբուլինի թեստ. կարմիր արյան բջիջների անտիգենների հայտնաբերում

Ներկայացնում ենք անուղղակի Coombs ռեակցիայի մեթոդը՝ օգտագործելով հակա-D IgG կոլիկոնի օրինակը։

1. Նշեք մաքուր փորձանոթը. նշեք փորձարկվող անձի անունը:
2. Փորձանոթին ավելացրեք 2 կաթիլ (մոտ 0,1 մլ) հակա-D IgG զոլիկլոն:
3. Ավելացրեք 2 կաթիլ վերլուծված էրիթրոցիտների 5%-անոց կախոցը, որը նախապես լվացվել է ֆիզիոլոգիական լուծույթով: Փորձանմուշները խառնեք զոլիկլոնի հետ:
4. Խառնուրդը ինկուբացնում ենք ջրային բաղնիքում կամ 37 °C ջերմաստիճանում թերմոստատում 30 րոպե:
5. Փորձանոթին ավելացրեք 5-10 մլ աղի լուծույթ՝ օգտագործելով Pasteur pipette:
6. Ցենտրիֆուգեք խողովակը 1200 գ կենտրոնախույս արագացմամբ 18 - 25 ° C ջերմաստիճանում մեկ րոպեի ընթացքում:
7. Հեռացրեք աղի լուծույթը:
8. Կրկնեք արյան կարմիր բջիջների լվացման ընթացակարգը ցենտրիֆուգման միջոցով ևս 2-3 անգամ:
9. Արյան բջիջների նստվածքին ավելացրեք 2 կաթիլ հակագլոբուլինային շիճուկ և խառնեք։
10. Խողովակը ցենտրիֆուգեք 1200 գ կենտրոնախույս արագացումով մեկ րոպե 18 - 25 ° C ջերմաստիճանում:
11. Օգտագործելով դիսպենսեր կամ Pasteur pipette, ավելացրեք 3-5 կաթիլ աղի լուծույթ:
12. Կրկին կասեցրեք նստվածքը և տեսողականորեն գնահատեք ագլյուտինացիայի առկայությունը: Արտահայտված ագլյուտինատները փորձանոթի հատակին ֆոնի վրա հստակ լուծումցույց են տալիս էրիթրոցիտային հակագենի հայտնաբերումը: Արյան բջիջների անթափանց կասեցումը ցույց է տալիս հակագենի բացակայությունը:

Coombs թեստ. իզոիմուն հակաէրիթրոցիտային հակամարմինների սքրինինգ

Ուսումնասիրությունն իրականացվում է որպես դոնորի և ստացողի բոլոր կարմիր արյան բջիջների անտիգենների անհատական ​​համատեղելիության թեստի մաս: Եզրակացություն մասին ամբողջական համատեղելիությունԴոնորային էրիթրոցիտներով ստացող շիճուկները արտադրվում են վերլուծության բոլոր փուլերում հեմոլիզի և/կամ ագլյուտինացիայի բացակայության հիման վրա: Հեմոլիզի և/կամ ագլյուտինացիայի նշանները հետազոտության ցանկացած փուլում վկայում են արյան նմուշների անհամատեղելիության մասին:

Համատեղելիության գնահատում AB0 համակարգի միջոցով, «սառը» հակամարմինների հայտնաբերում

1. Պատրաստեք դոնորի արյան նմուշ.
   • ավելացնել 0,2 մլ արյուն փորձանոթի մեջ՝ օգտագործելով ավտոմատ դիսպենսեր;
   • Լվացեք կարմիր արյան բջիջները 5,0 մլ ֆիզիոլոգիական լուծույթով 3 անգամ;
   • Գնդիկը նորից կասեցրեք 3-4 մլ ցածր իոնային ուժի LISS լուծույթի մեջ:
2. Նշեք երկրորդ մաքուր խողովակը. նշեք ստացողի և դոնորի անունը:
3. Օգտագործելով ավտոմատ դիսպենսեր, ավելացրեք 0,1 մլ ստացողի շիճուկ պիտակավորված խողովակի մեջ:
4. LISS լուծույթում ավելացրեք 2 կաթիլ կարմիր արյան բջիջների 5% կասեցում:
5. Անմիջապես ցենտրիֆուգեք խառնուրդը 1200 գ կենտրոնախույս արագացմամբ 18 - 25 ° C ջերմաստիճանում 15 - 20 վայրկյան:
6. Թեթև թափահարելով փորձանոթը, առանձնացրեք նստվածքը հատակից: Գնահատեք ագլյուտինատների առկայությունը: Հեմոլիզի և/կամ ագլյուտինատների առկայությունը նշանակում է.
   • անհամատեղելիություն ըստ AB0 համակարգի;
   • հիվանդի շիճուկում IgM կամ IgA դասի «սառը» հակամարմինների առկայությունը, որոնք հատուկ չեն AB0 անտիգեններին:

«Ջերմ» հակամարմինների հայտնաբերում

1. Եթե ​​հեմոլիզ չկա և/կամ ագլյուտինատներ, ապա խողովակը ինկուբացրեք 10-15 րոպե 37 °C ջերմաստիճանում:
2. Խողովակը ցենտրիֆուգեք 1200 գ-ում 15-20 վայրկյան սենյակային ջերմաստիճանում:
3. Թափահարեք խողովակը և ստուգեք, թե արդյոք կա հեմոլիզ և/կամ ագլյուտինատներ վերին հեղուկում: Դրական արդյունքը ցույց է տալիս հիվանդի շիճուկում դոնորային էրիթրոցիտների անտիգենների դեմ «տաք» IgM հակամարմինների հայտնաբերումը:

IgG հակամարմինների հայտնաբերում Coombs թեստում

1. Եթե ​​հետազոտության նախորդ փուլում արդյունքը բացասական է, ապա փորձանոթի մեջ ավելացրեք 5 մլ 0,9% NaCl լուծույթ՝ օգտագործելով Pasteur pipette:
2. Խողովակը ցենտրիֆուգեք 1200 գ ջերմաստիճանում 15-20 վայրկյան 18-25 °C օդի ջերմաստիճանում: Օգտագործեք Pasteur pipette-ը զգուշորեն վերացնելու համար:
3. Կրկնեք կարմիր արյան բջիջների լվացումը ևս 2-3 անգամ:
4. Փորձանոթին ավելացրեք 1-2 կաթիլ հակագլոբուլինային շիճուկ: Կատարեք մանրակրկիտ խառնում:
5. Ցենտրիֆուգեք խողովակը 1200 գ-ում 15-20 վայրկյան:
6. Զգուշորեն կոտրեք կարմիր արյան բջիջների նստվածքը և տեսողականորեն գնահատեք ռեակցիայի արդյունքը: Ագլյուտինացիայի հայտնաբերումը նշանակում է հիվանդի շիճուկում IgG հակամարմինների առկայություն դոնորի էրիթրոցիտների անտիգենների դեմ:

Հեմոլիտիկ անեմիա, որոնք առաջացել են աուտոիմուն մարմինների կողմից, որոնք ուղղված են իրենց իսկ կարմիր արյան բջիջների դեմ, ճշգրիտ չեն հասկացվում: Այնուամենայնիվ, ենթադրվում է, որ որոշ գործոններ (օրինակ՝ վիրուսը, աննորմալ սպիտակուցը) փոխում են արյան կարմիր բջիջներն այնպես, որ մարմինը դրանք ընկալում է «որպես օտար բան» և պայքարում է դրանց դեմ հակամարմինների օգնությամբ։ Մեկ այլ տեսության համաձայն, արյան կարմիր բջիջների դեմ ուղղված հակամարմինները գրեթե պատահաբար առաջանում են որոշ հիվանդությունների ժամանակ պլազմայի սպիտակուցի աննորմալ մարմինների ձևավորման ժամանակ։ Նման սպիտակուցային մարմինները, ինչպես «պատահական», կարող են տալ ռեակցիաներ, որոնք կարող են օգտագործվել ախտորոշման համար (օրինակ, վիրուսային թոքաբորբը, ինչպես հայտնի է, տալիս է դրական Վասերմանի ռեակցիա, դրական Պոլ-Բունելի ռեակցիա և սառը ագլյուտինացիայի ռեակցիա): .

Կան երկու աուտոհակամարմինների հիմնական տեսակներըհեմոլիտիկ անեմիայի դեպքում, այն է՝ տաք հակամարմիններ (արձագանքում են 37°C ջերմաստիճանում) և սառը հակամարմիններ (որոնց ռեակտիվությունը մեծանում է, երբ ջերմաստիճանը մոտենում է զրոյին)։ Ջերմ հակամարմինները ավելի տարածված են, քան սառը հակամարմինները: Դեյսին պարզել է, որ տաք հեմոլիզինները առաջանում են 2 անգամ ավելի հաճախ, քան սառը: Հեմոլիզինները և ագլյուտինինները սկզբունքորեն տարբեր հակամարմիններ չեն. դրանք տարբերվում են միայն իրենց գործողության բնույթով: Ագլյուտինինները սոսնձում են արյան կարմիր բջիջները, իսկ հեմոլիզինները նրանց ավելի ընկալունակ են դարձնում հեմոլիզի բարդ գործընթացին (կոմպլեմենտ): Ավտոհակամարմինները, ամրանալով էրիթրոցիտների վրա, կազմում են էրիթրոցիտ-գլոբինային համալիր։ Այս համալիրը հայտնաբերվում է Coombs հակագլոբինի թեստի միջոցով:

Coombs թեստիրականացվում է Coombs շիճուկով, որի պատրաստման համար նապաստակը զգայունացվում է մարդու շիճուկով, որի դեմ հակամարմիններ են գոյանում նապաստակի շիճուկում։ Երբ նման զգայուն շիճուկը գործում է մարդու էրիթրոցիտների վրա, դրանք ագլյուտինացվում են, եթե էրիթրոցիտների ընկալիչները զբաղված են արգելափակող հակամարմիններով: Քանի որ այս արգելափակող հակամարմինները ստացվում են մարդու շիճուկից, դրանք սոսնձվում են նապաստակի շիճուկի հետ, որը զգայուն է մարդու պլազմայի նկատմամբ և պարունակում է նստվածք: Այս ռեակցիան կոչվում է Coombs թեստ; աուտոիմուն մարմինների հետևանքով առաջացած հեմոլիտիկ անեմիայի դեպքում (Lo tit) այն գրեթե սպեցիֆիկ է (մանրամասների համար տե՛ս Maier):

Ընդհանուր առմամբ հեմոլիտիկ անեմիայի համարէրիթրոցիտների առաջնային խանգարման դեպքում Կումբսի թեստը բացասական է, իսկ ձեռքբերովի դեպքում՝ դրական։ Այնուամենայնիվ, այս կանոնից կան որոշ բացառություններ. Կումբսի կեղծ դրական թեստը հայտնաբերվել է սահմանադրական հեմոլիտիկ անեմիայի ճգնաժամերի ժամանակ, և թույլ աստիճան- նաև երբեմն փայծաղի հեռացումից հետո, ռևմատիկ արթրիտով, սարկոիդոզով, հաճախակի արյան փոխներարկումներից և համակարգային կարմիր գայլախտով: Բնականաբար, ձեռքբերովի հեմոլիտիկ անեմիայի դեպքում, առանց աուտոիմուն մարմինների ձեւավորման, դա բացասական է:

Հեմոլիտիկ անեմիաԱուտոիմուն մարմինների կողմից առաջացած կարող են բաժանվել.
ա) սուր, ենթասուր և քրոնիկական ձևեր, ինչպես նաև վրա
բ) անհայտ պատճառաբանությամբ իդիոպաթիկ և գ) սիմպտոմատիկ [վիրուսային թոքաբորբ (միայն սառը ագլյուտինիններ), քրոնիկ լիմֆատիկ լեյկոզ, ռետիկուլոսարկոմա, լիմֆոսարկոմա, համակարգային կարմիր գայլախտ (հիմնականում տաք, ավելի քիչ հաճախ՝ սառը ագլյուտինիններ), սիֆիլիս (սառը ագլյուտինիններ), աշխատողների հետ)):
գ) սիմպտոմատիկ [վիրուսային թոքաբորբ (միայն սառը ագլյուտինիններ), քրոնիկ ավշային լեյկոզ, ռետիկուլոսարկոմա, լիմֆոսարկոմա, համակարգային կարմիր գայլախտ (հիմնականում տաք, ավելի քիչ հաճախ սառը ագլյուտինիններ), սիֆիլիս (սառը ագլյուտինիններ), ձվարանների ուռուցքներ (Miescher) և այլն:

Հեմոլիտիկ անեմիայի կլինիկա, որը զարգանում է աուտոիմուն մարմինների ազդեցության տակ, շատ բազմազան է, և, հետևաբար, դժվար թե հնարավոր լինի նկարել դրանց ընդհանուր կլինիկական պատկերը. Բոլոր տարիքի և երկու սեռերի մարդիկ հավասարապես ախտահարված են: Այնուամենայնիվ, իդիոպաթիկ ձևերը, կարծես, ավելի հաճախ են նկատվում կանանց մոտ (Sacks և Workman):

Իդիոպաթիկ ձևի կլինիկական պատկերըտատանվում է կախված հիվանդության ծանրությունից: IN քրոնիկ դեպքերՍկիզբը աստիճանաբար է, հիվանդությունը ձգձգվում է երկար տարիներ՝ հաճախակի սրացումներով։ Անեմիայի ծանրությունը տատանվում է՝ կախված հեմոլիզի աստիճանից։ Մնացած դեպքերում հեմոգլոբինի անկումը նկատվում է մինչև 10%, հեմոգլոբինը երկար ժամանակ մնում է 50-60%; Մաշկի և շիճուկի ռետիկուլոցիտոզի և իկտերիկ գունավորման ինտենսիվությունը համապատասխանում է հեմոլիզի աստիճանին։ Բիլիռուբինը շատ հազվադեպ է հայտնաբերվում մեզի մեջ, քանի որ այն չի անցնում երիկամներով, բայց նկատվում է հեմոգլոբինուրիա: Խրոնիկական դեպքերում փայծաղը հաճախ մեծանում է և նույնիսկ կարող է հասնել շատ զգալի չափի, սակայն մյուս դեպքերում այն ​​դեռ զգացվում է։ Լյարդը հազվադեպ է մեծանում։

Արյան մեջ շատ դեպքերումնկատվում է մակրոցիտոզ, ներս սուր փուլերկան նաև բազմաթիվ միկրոցիտներ, հազվադեպ են բացակայում նորմոբլաստոզը և պոլիքրոմազիան, լեյկոցիտոզը կարող է հասնել 30000-ի, թրոմբոցիտները նորմալ են։ Որոշ դեպքերում, սակայն, կա ծանր թրոմբոցիտոպենիա: Էվանսը բացատրում է այս դեպքերը թրոմբոցիտների դեմ հակամարմինների միաժամանակյա առկայությամբ, այնպես որ կա և՛ հեմոլիտիկ անեմիա, և՛ թրոմբոցիտոպենիա՝ պայմանավորված աուտոիմուն մարմինների գործողությամբ՝ Էվանսի համախտանիշով։ Օսմոտիկ դիմադրությունը փոքր-ինչ նվազում է, բայց ոչ նույն չափով և ոչ այնքան մշտական, որքան սահմանադրական գնդային բջջային անեմիայի դեպքում: Ջերմակայունության թեստը (Hegglin-Maier) 6 ժամ հետո կարող է նաև տալ թեթև հեմոլիզ (սեփական դիտարկում), բայց ավելի փոքր չափով, քան Մարչիաֆավայի անեմիայի դեպքում: Հեմոսիդերինը հայտնաբերվում է նաև մեզի մեջ (սեփական դիտարկում):