Комплемент бэхлэх урвал (CFR) нь тодорхой эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор нь комплементийг өөртөө шингээж (холбодог) дээр суурилдаг.
Энэ урвалыг эсрэгтөрөгчийг тодорхойлох, халдвар, ялангуяа спирохета (Вассерманы урвал), риккетси, вирүсээр үүсгэгдсэн өвчнийг оношлоход өргөн хэрэглэгддэг.
RSC нь ийлдэс судлалын нарийн төвөгтэй урвал юм. Энэ нь нэмэлт ба хоёр эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн системийг агуулдаг. Үндсэндээ эдгээр нь ийлдэс судлалын хоёр урвал юм.
Эхний систем - гол нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемээс бүрддэг (нэг нь мэдэгдэж байгаа, нөгөө нь биш). Түүнд тодорхой хэмжээний нэмэлтийг нэмдэг. Хэрэв энэ системийн эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие таарч байвал тэдгээр нь комплементийг холбож, холбох болно. Үүссэн цогцолбор нь нарийн тархсан бөгөөд харагдахгүй байна.
Энэ цогцолбор үүсэхийг хоёр дахь цус задралын буюу индикаторын системийг ашиглан илрүүлдэг. Үүнд хонины улаан цусны эс (эсрэгтөрөгч) болон харгалзах цус задралын ийлдэс (эсрэгбие), өөрөөр хэлбэл бэлэн дархлааны цогцолбор орно. Энэ системд цусны улаан эсийн задрал нь зөвхөн нэмэлт бодис байгаа тохиолдолд л тохиолддог. Хэрэв комплемент нь эхний системд холбогддог бол (хэрэв эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие нь түүнд тохирч байвал) хоёр дахь системд гемолиз байхгүй болно - чөлөөт нэмэлт байхгүй тул. Цус задралгүй (хоолойны агууламж үүлэрхэг эсвэл доод хэсэгт эритроцитуудын тунадас байгаа) RSC эерэг үр дүн гэж тэмдэглэгдсэн байдаг.
Хэрэв эхний системд эсрэгтөрөгч нь эсрэгбиемтэй таарахгүй бол дархлааны цогцолбор үүсэхгүй бөгөөд нэмэлт нь чөлөөтэй хэвээр байх болно! Чөлөөт хэвээр үлдсэн нэмэлт нь хоёр дахь системд оролцож, цус задрал үүсгэдэг; RSC-ийн үр дүн сөрөг байна (хоолойн агууламж тунгалаг - "лак цус").
Комплемент бэхлэх урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүд:
Антиген - ихэвчлэн лизат, ханд, гаптен; түдгэлзүүлэх нь бага байдаг.
1. Өвчтөний системийн эсрэгбие- ийлдэс
2. Complement - ийлдэс Гвинейн гахай
3. Антиген - хонины цусны улаан эс
4.Эсрэгбие - хонины улаан эсийн гемолизин
5.Изотоник уусмал
RSC-д олон тооны нарийн төвөгтэй бүрэлдэхүүн хэсгүүд оролцдог тул тэдгээрийг эхлээд титрлэж, яг тодорхой хэмжээгээр урвалд оруулах ёстой. тэнцүү эзэлхүүнтэй: 0.5 эсвэл 0.25, бага давтамжтай 0.2 мл. Үүний дагуу туршилтыг бүхэлд нь 2.5, 1.25 эсвэл 1.0 мл эзэлхүүнээр хийдэг (илүү том хэмжээ нь илүү нарийвчлалтай үр дүнг өгдөг). Урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн титрлэлтийг туршилттай ижил хэмжээгээр хийж, дутуу орцуудыг изотоник уусмалаар сольж байна.
Найрлага бэлтгэх
Цус задлагч ийлдэс (гемолизин). Ийлдэс нь титрээс 3 дахин бага шингэлнэ (х. 211-ийг үз). Сийвэнгийн ерөнхий шингэрүүлэлтийг бүх туршилтанд бэлдэх ба эзэлхүүнийг нэг туршилтын хуруу шилэнд (жишээ нь 0.5 мл) сийвэнгийн эзэлхүүнийг туршилтын тооноос бага зэрэг давсан туршилтын хоолойн тоогоор үржүүлэх замаар тодорхойлно.
2. Хонины цусны улаан эс. Угаасан хонины эритроцитоос (х. 211-ийг үз) 3%-ийн суспензийг туршилтын нийт туршилтын хоолойд бэлтгэнэ. Цус задралын системийг бэлтгэхийн тулд туршилтанд нэмэхээс 30 минутын өмнө ижил хэмжээний шингэрүүлсэн гемолизин болон цусны улаан эсийн суспензийг хольж, цусны улаан эсэд ийлдэс нэмж, сайтар хольж, 37 хэмд 30 минутын турш өсгөвөрлөнө.
3.Комплементийг ихэвчлэн 1:10 харьцаагаар шингэлнэ. Туршилт бүрийн өмнө титрлэх шаардлагатай. Комплемент титр нь түүний хамгийн бага хэмжээ бөгөөд цус задралын системд нэмбэл 37˚С-т 1 цагийн дотор бүрэн цус задралд ордог. Комплемент титрлэлтийн схемийг 21-р хүснэгтэд үзүүлэв.
Анхаар! Алга болсон найрлагыг изотоник уусмалаар сольж, гол туршилттай ижил хэмжээгээр магтаалыг титрлэнэ.
Үр дүнгийн нягтлан бодох бүртгэл. Удирдлагад цус задралын ул мөр байх ёсгүй, учир нь тэдгээрийн нэг нь комплемент, нөгөө нь гемолизин агуулаагүй болно. Хяналт нь урвалын бүрэлдэхүүн хэсгүүдэд гемототоксик шинж чанаргүй (цусны улаан эсийг аяндаа задлах чадвар) байгааг харуулж байна.
Өгөгдсөн хүснэгтэд 21 жишээнд 1:10-ийн шингэрүүлэлтийн үед нэмэлт титр 0.15 мл байна. Туршилтын явцад урвалын бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн өвөрмөц бус шингээлтийн улмаас комплементийн идэвхжил буурч болзошгүй тул туршилтын хувьд нэмэлт бодисын хэмжээг нэмэгдүүлнэ: титрээс хойшхи тунг авна. Энэ бол ажлын тун юм. Өгөгдсөн жишээнд 1:10-ийн шингэрүүлэлтэнд 0.2 комплементтэй тэнцүү байна. RSC-д хамаарах бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг тэнцүү хэмжээгээр авах ёстой (бидний жишээнд энэ нь 0:5 мл байна) нэмэлт бодисын ажлын тун (0,2 мл1:10) дээр 0,3 мл изотоник уусмал нэмэх шаардлагатай. Туршилтын хувьд тус бүрийн эзэлхүүн (нэмэлт ба изотоник уусмал.
Туршилтын туршид тэдгээрийн эзэлхүүнийг (комплемент ба изотоник уусмал) RSC-д оролцсон туршилтын хоолойн тоогоор үржүүлнэ. Жишээлбэл, 50 туршилтын хоолойд туршилт хийхийн тулд 10 мл нэмэлт 1:10 (0.2 млx50), 15 мл изотоник уусмал (0.3 млx50) авах шаардлагатай.
4. Антигенийг ихэвчлэн титрийг нь зааж өгсөн бэлэн хэлбэрээр авдаг, i.e. эсрэгтөрөгчийг шингэлсний дараа 1 мл-т агуулагдах ёстой хэмжээ. жишээлбэл, 0.4 титртэй бол 0.96 мл изотоник уусмалаар шингэлнэ. Туршилтын хувьд би титр (0.5 мл) хагастай тэнцэх хэмжээний эсрэгтөрөгчийг авдаг. Энэ бол түүний ажлын тун юм. Туршилтын нийт эсрэгтөрөгчийн шингэрүүлэлтийг 0.5 мл-ийг туршилтын хоолойн тоогоор үржүүлж тооцоолно.
5. Эсрэгбие – өвчтөний ийлдэс. Туршилтын өмнө шинэхэн ийлдсийг идэвхгүйжүүлж, түүнд агуулагдах нэмэлт бодисыг устгадаг. Үүнийг хийхийн тулд усан ваннд эсвэл термостат бүхий идэвхгүйжүүлэгчид 56˚С-т 30 минутын турш халаана. Сүүлчийн арга нь илүү тохиромжтой: энэ нь шар сүүг хэт халах, өөрөөр хэлбэл денатурацийг арилгах боломжийг арилгадаг. Денатуратжуулсан ийлдэс нь шинжилгээнд тохиромжгүй. Өвчтөний ийлдэсийг ихэвчлэн 1:10-аас 1:160 хүртэл шингэрүүлсэн хэлбэрээр хэрэглэдэг.
Хүснэгт №14
| Найрлага, мл | туршилтын хоолой | |||||||||||
| туршлага | хяналт | |||||||||||
| Гемолитик систем | цусны улаан эсүүд | |||||||||||
| Изотоник уусмал | 1,45 | 1,4 | 1,35 | 1,3 | 1,25 | 1,2 | 1,15 | 1,1 | 1,05 | 1,0 | 1,5 | 1,5 |
| Нэмэлт 1:10 | 0,05 | 0,1 | 0,15 | 0,2 | 0,25 | 0,3 | 0,35 | 0,4 | 0,45 | 0,5 | ― | 0,5 |
| Гемолитик систем | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | ― |
| Хонины улаан эсийн 3% суспенз | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | ― | 0,5 |
| Хоолойг сайтар сэгсэрч, 37 хэмд 1 цагийн турш өсгөвөрлөнө. | ||||||||||||
| үр дүн | Цус задралгүй | Гемолиз | Цус задралгүй |
Дархлааны ийлдэс нь ихэвчлэн үйлдвэрлэлийн нөхцөлд бэлтгэгдэж, идэвхгүй байдлаар ялгардаг. Тэдгээрийг 1:50 ба түүнээс дээш хэмжээгээр шингэлнэ.
Бүх найрлагыг бага зэрэг илүүдэл хэмжээгээр бэлтгэдэг.
| Найрлага, мл | Туршилтын хоолой | |||||||
| Туршлагатай хяналт | ||||||||
| ийлдэс | эсрэгтөрөгч | Гемолитик систем | Ажлын тунгаар нэмэлт | |||||
| ½ | ||||||||
| 1-р үе шат изотоник уусмал | ― | 0,5 | 0,5 | 1,5 | 1,25 | 1,0 | 0,5 | |
| Туршилтын ийлдэс 1:10 харьцаагаар шингэлнэ | 0,5 | 0,5 | ― | ― | ― | ― | ― | |
| Ажлын тунгийн эсрэгтөрөгч | 0,5 | 0,5 | ― | ― | ― | ― | ||
| Ажлын тунгаар 1:10 харьцаагаар нэмнэ | 0,5 | 0,5 | 0,5 | ― | 0,25 | 0,5 | 1,0 | |
| Хоолойг сайтар сэгсэрч, 37°С-т 45 минут 1 цаг эсвэл 4°С-т 18 цагийн турш өсгөвөрлөнө. | ||||||||
| 2-р үе шат цус задралын систем | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | |
| Хоолойг сайтар сэгсэрч, 2, 3, 6, 7-р хуруу шилэнд цус задрах хүртэл 37 хэмд өсгөвөрлөнө. | ||||||||
| Үр дүн | Эерэг эсвэл сөрөг | ― | ― | ++++ | (+) | ― | ― | |
Хүснэгт №15
Гол туршилтыг хийж байна
Туршилтыг тохируулахдаа энэ нь туйлын; Бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг нэмэх дараалал нь чухал юм. Туршилтыг хоёр үе шаттайгаар явуулдаг.
I үе шат. Шаардлагатай хэмжээний натрийн хлоридын изотоник уусмалыг туршилтын хоолойд хийнэ, дараа нь шаардлагатай хэмжээний шингэрүүлсэн ийлдэс ба эсрэгтөрөгчийн ажлын тунг ижил хэмжээгээр хийнэ. Туршилт нь түүнд хамаарах бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хяналттай байх ёстой: ийлдэс, эсрэгтөрөгч, цус задралын систем ба нэмэлт.
Хоолойг сайтар сэгсэрч, 370С-т 45 минут-1 цаг буюу 40С-т ("Хүйтэн дэх RSC") 18 цагийн турш өсгөвөрлөнө.Энэ хугацаанд тусгай цогцолбор байгаа тохиолдолд комплементийн холболт үүсдэг. "Хүйтэн үед" урвал явуулах нь түүний мэдрэмж, өвөрмөц байдлыг ихээхэн нэмэгдүүлдэг.
II үе шат. Инкубацийн төгсгөлд бүх туршилтын хоолойд 1 мл цус задралын системийг нэмж, термостатад 30 минутын турш хадгална (мэдрэмжтэй болгосон). Туршилтын хоолойг сэгсэрч, термостат руу буцааж хийнэ.
тухай нягтлан бодох бүртгэлийн үр дүн. Хоолойг 2, 3, 6, 7-р хоолойд бүрэн цус задрах хүртэл термостатад үлдээнэ (ийлдэс, эсрэгтөрөгч ба нэмэлтийг нэг ба хоёр тунгаар хянах). Цус задрал нь эхлээд давхар хэмжээний нэмэлт бодис агуулсан 7-р туршилтын хоолойд явагдана. Энэ хоолойд цус задрал үүсч, түүний агууламж бүрэн ил тод болсны дараа та үлдсэн хяналтыг сайтар хянах хэрэгтэй. 2, 3, 6-р туршилтын хоолой дахь шингэн тунгалаг болмогц та термостатаас туршилтын хоолой бүхий тавиурыг нэн даруй зайлуулах хэрэгтэй. Туршилтыг термостатад шаардлагатай хэмжээнээс удаан байлгаагүй нь 5-р туршилтын хоолойд бага зэрэг булингартай (бүрэн бус цус задрал) байгааг харуулж байна - энэ нь комплементийн ажлын тунгийн тэн хагасыг агуулдаг бөгөөд хэрэв туршилт хийгдээгүй бол бүрэн цус задрал үүсэхгүй. зөв тохируулах.
Цусны сийвэн дэх цус задрал ба эсрэгтөрөгчийн хяналт (хоолой 2 ба 3) нь тэдний тунг зөв сонгосон бөгөөд ийлдэс болон эсрэгтөрөгч өөрөө комплементийг холбодоггүйг харуулж байна.
Цус задралын системийг хянахад (туршилтын хоолой 4) хэрэв энэ нь зөв ажиллаж байвал цус задралын ул мөр ч байх ёсгүй - үүнд нэмэлт бодис байхгүй.
Хяналтыг зөв хийсэн гэдэгт итгэлтэй байгаа бол та туршлагыг анхаарч үзэх боломжтой. Туршилтын хоолойд цус задрал байхгүй байгаа нь урвалын эерэг үр дүн гэж тооцогддог. Энэ нь ийлдэс нь авсан эсрэгтөрөгчийн өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг агуулдаг болохыг харуулж байна. Тэдний үүсгэсэн цогцолбор нь комплементийг холбож, цус задралын урвалд оролцохоос сэргийлдэг. Туршилтын хоолойд цус задрал үүсвэл урвалын үр дүнг сөрөг гэж үнэлнэ. IN энэ тохиолдолдэсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн хооронд ямар ч захидал харилцаа байхгүй, комплемент нь холбоогүй бөгөөд цус задралын урвалд оролцдог.
Өвчтөний ийлдэстэй зэрэгцэн ижил туршилтыг илт эерэг ийлдэс (өөрөөр хэлбэл тухайн эсрэгтөрөгчийн эсрэгбие агуулсан ийлдэс) ба тодорхой эсрэгбие агуулаагүй сөрөг ийлдэстэй ижил туршилт хийдэг. Хэрэв туршилтыг зөв тохируулсан бол эхний тохиолдолд цус задралын саатал үүсэх ёстой бөгөөд хоёр дахь тохиолдолд цус задралд орно.
Урвалын эрчмийг дараах байдлаар илэрхийлнэ.
Цус задралын бүрэн саатал. Цусны улаан эсүүд нь нэгэн төрлийн булингар үүсгэдэг эсвэл ёроолд нь суурьшдаг. Энэ тохиолдолд туршилтын хоолой дахь шингэн өнгөгүй болно;
Цусны улаан эсийн 25 орчим хувь нь задралд ордог. Тунадас багатай, дээрх шингэн нь бага зэрэг ягаан өнгөтэй байна. RSC-ийн үр дүнг мөн маш эерэг гэж үнэлдэг;
Цусны улаан эсийн 50 орчим хувь нь задралд ордог. Тунадас нь жижиг, шингэн нь ягаан өнгөтэй. RSC эерэг үр дүн;
Цусны улаан эсийн 75 орчим хувь нь задралд ордог. Бага зэрэг тунадас, дээр нь эрчимтэй өнгөтэй шингэн байдаг. RSC-ийн эргэлзээтэй үр дүн;
Цусны бүх улаан эсийг задалсан. Шингэн нь эрчимтэй өнгөтэй, бүрэн ил тод байдаг. RSK-ийн сөрөг үр дүн.
Энэ урвал нь бактерийн, вируст, протозойн халдвартай өвчтөнүүдийн цусны ийлдэс дэх эсрэгбиемийг илрүүлэх, түүнчлэн өвчтөнөөс тусгаарлагдсан вирусыг тодорхойлох, төрөлжүүлэхэд ашиглагддаг.
RSC гэдэг нь эсрэгтөрөгч, эсрэгбие, комплементээс гадна цус задралын систем оролцдог серологийн нарийн төвөгтэй урвалуудыг хэлдэг бөгөөд урвалын үр дүнг илчилдэг. RSC нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг: эхнийх нь эсрэгтөрөгчийн эсрэгбиемтэй харилцан үйлчлэлцэх, хоёр дахь нь цус задралын системийг ашиглан комплементийн холболтын түвшинг илрүүлэх явдал юм. Энэ систем нь хонины улаан цусны эсүүд болон лабораторийн амьтдыг цусны улаан эсээр дархлаажуулах замаар олж авсан цус задралын ийлдэсээс бүрдэнэ. Эритроцитыг боловсруулдаг - 30 минутын турш 37 ° C-ийн температурт ийлдэс нэмж мэдрэмтгий болгодог. Мэдрэмжтэй хонины эритроцитын задрал нь зөвхөн цус задралын нэмэлт системд нэгдэх тохиолдолд л тохиолддог. Түүний байхгүй тохиолдолд цусны улаан эс өөрчлөгддөггүй. RSC-ийн үр дүн нь шинжилгээний ийлдэс дэх эсрэгбие байгаа эсэхээс хамаарна. Хэрэв ийлдэс нь урвалд ашигласан эсрэгтөрөгчтэй ижил төстэй эсрэгбие агуулсан бол үүссэн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор нь комплементийг холбож, холбодог. Цус задралын системийг нэмэхэд энэ тохиолдолд цус задрал үүсэхгүй, учир нь бүх нэмэлт нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолборын тодорхой холбоонд зарцуулагддаг.
Цусны улаан эсүүд өөрчлөгдөөгүй хэвээр байгаа тул туршилтын хоолойд цус задралгүй байх нь эерэг эритроцит гэж бүртгэгддэг. Сийвэн дэх эсрэгтөрөгчтэй тохирох эсрэгбие байхгүй тохиолдолд өвөрмөц эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэхгүй бөгөөд нэмэлт нь чөлөөтэй хэвээр байна. Цус задралын систем нэмэгдэхэд нэмэлт бодисууд түүнд наалдаж, цусны улаан эсийн гемолиз үүсгэдэг. Цусны улаан эсийг устгах, тэдгээрийн цус задрал нь сөрөг урвалыг тодорхойлдог.
RSC-ийн үе шатанд өвчтөний ийлдэс, нэмэлт, хонины эритроцит ба цус задралын ийлдэсээс бүрдэх цус задралын систем, түүнчлэн натрийн хлоридын изотоник уусмал шаардлагатай.
Урвалыг ийлдэс судлалын хоолойд явуулдаг. Хонины улаан эсийг дефибринжүүлсэн хонины цуснаас натрийн хлоридын изотоник уусмалаар гурван удаа угааснаар гаргаж авдаг. Цус задлагч ийлдэс нь ампулыг бэлэн хэлбэрээр үйлдвэрлэдэг бөгөөд шошгон дээр түүний титр, өөрөөр хэлбэл цусны сийвэнгийн хамгийн их шингэрүүлэлт байдаг бөгөөд энэ нь цусны улаан эсэд комплемент агуулагдах үед цус задрахад хүргэдэг. Цус задлагч ийлдсийг туулай зэрэг амьтдыг хонины улаан эсийн эсрэг дархлаажуулах замаар гаргаж авдаг. Урвалыг тохируулахдаа ийлдэсийг гурвалсан титрээр хэрэглэнэ. Жишээлбэл, цус задралын сийвэнгийн титр нь 1: 1200, ажлын шингэрүүлэлт нь 1: 400. Гвинейн гахайн шинэ цусны ийлдэс (24-48 цагийн дотор) эсвэл ампул дахь хуурай нэмэлтийг нэмэлт болгон ашигладаг.
RSC хийхээс өмнө комплементийг 1:10 харьцаагаар шингэлж титрийг тогтоохын тулд титрлэнэ - энэ урвалд хэрэглэгддэг цус задралын системтэй хослуулан цусны улаан эсийн гемолизийн үр дүнд үүсдэг хамгийн бага хэмжээний комплемент. Антигенийн эсрэгтөрөгчийн боломжит шинж чанарыг харгалзан урвалд орохдоо комплементийн тогтоосон ажлын титрийг 20-30% нэмэгдүүлдэг.
RSC-ийн эсрэгтөрөгч нь үхсэн бактерийн суспенз, эдгээр суспензээс бэлтгэсэн ханд, микробын бие даасан химийн фракц юм. Антигенд тавигдах гол шаардлага бол комплементийн үйл ажиллагааг дарангуйлахгүй байх явдал юм. Энэ нь нэмэлт нэмэлт шинж чанартай байх ёсгүй. Антигений эдгээр шинж чанарыг тодорхойлохын тулд урвалд ашигласан эсрэгтөрөгчийн дэргэд нэмэлт нэмэлт титрлэнэ. RSC-ийн үе шатыг тогтоох тодорхой схемүүд байдаг. Урвалын үр дүнг цус задралын систем дэх цусны улаан эсийн гемолиз байгаа эсвэл байхгүй байгаа эсэхийг харгалзан үздэг. RSC нь тэмбүү (Вассерманы урвал), заг хүйтэн (Борде-Генгоу урвал), токсоплазмоз, риккетсиал ба өвчний оношлогоонд ашиглагддаг. вируст өвчин.
Комплемент бэхлэх урвал (CFR) нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиемүүд хоорондоо тохирч байх үед тэдгээр нь эсрэгбиеийн Fc фрагментээр дамжуулан нэмэлт (C) хавсардаг дархлааны цогцолбор үүсгэдэг, өөрөөр хэлбэл комплемент нь эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбороор холбогддог. Хэрэв эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэхгүй бол комплемент чөлөөтэй хэвээр байна.
AG ба AT-ийн өвөрмөц харилцан үйлчлэл нь комплементийг шингээх (холбох) дагалддаг. Комплемент бэхлэх үйл явц нь нүдэнд харагдахгүй тул Ж.Бордот, О.Жангу нар цус задралын системийг (хонины улаан эс + цус задралын ийлдэс) индикатор болгон ашиглахыг санал болгосон нь комплемент AG-AT цогцолбороор бэхлэгдсэн эсэхийг харуулдаг. Хэрэв AG ба AT нь бие биентэйгээ тохирч байвал, өөрөөр хэлбэл дархлааны цогцолбор үүссэн бол комплемент нь энэ цогцолбортой холбогдож, гемолиз үүсдэггүй. Хэрэв AT нь AG-тай тохирохгүй бол цогцолбор үүсэхгүй бөгөөд нөхөж, чөлөөтэй үлдэж, хоёр дахь системтэй нэгдэж, цус задрал үүсгэдэг.
Урвалын явц
Урвал нь хоёр системийг хамарсан хоёр үе шатанд явагддаг; бактерийн ба гемолитик. Эхний урвал (өвөрмөц) нь эсрэгтөрөгч 4-+ эсрэгбие + комплемент агуулдаг. Эсрэгбие нь эсрэгтөрөгчтэй таарах үед үүсдэг эерэг урвал нь шингэсэн, эсвэл "холбогдсон" комплемент бүхий тодорхой бактерийн эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэх замаар тодорхойлогддог. Үл үзэгдэгч хэвээр үлдэж, цогцолбор нь үүссэн орчинд ямар ч гадны өөрчлөлтийг үүсгэдэггүй. RSC-ийн сөрөг үр дүн нь эсрэгтөрөгч ба ийлдэсийн эсрэгбиеийн хооронд өвөрмөц хамаарал байхгүй үед тохиолддог бөгөөд чөлөөт идэвхтэй нэмэлтийг хадгалах замаар тодорхойлогддог. RSC-ийн эхний үе шатыг термостатад 37 ° C (1-2 цаг) эсвэл хөргөгчинд 3-4 ° C (18-20 цаг) хийж болно. Хүйтэн үед эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн дархлааны цогцолборыг удаан хугацаагаар бий болгосноор комплемент илүү бүрэн холбогдож, үр дүнд нь урвалын мэдрэмж нэмэгддэг. Харьцуулсан туршилт хийхдээ Зөвлөлтийн дархлаа судлаач академич. В.И.Иоффе болон түүний шавь нар хүйтэнд удаан хугацаагаар комплемент бэхэлсэн нөхцөлд 100-500 дахин бага хэмжээний эсрэгтөрөгчийг барьж авах боломжтойг харуулсан. эерэг үр дүн 1-2 цагийн турш 37 ° C-ийн температурт 1-2 цагийн турш комплемент бэхлэх туршилтаас илүү дархлааны ийлдэс шингэрүүлсэн үед. Хоёр дахь үе шат урвал (заагч) цус задралын системийн урвалжууд (3%-ийн суспензийн холимог) хооронд явагдана. эритроцит ба цус задралын ийлдсийг тэнцүү хэмжээгээр) 37 0С-ийн температурт зөвхөн урвалын эхний үе шатаас (сөрөг урвал) чөлөөтэй үлдсэн нэмэлт бодис байгаа тохиолдолд. Чөлөөт идэвхтэй комплемент байхгүй тохиолдолд тодорхой гемолизинуудын нөлөөн дор цусны улаан эсийн гемолиз үүсдэггүй (урвал эерэг байдаг).
Бүрэлдэхүүн хэсгүүд
Комплемент бэхлэх урвал (CFR) нь ийлдэс судлалын нарийн төвөгтэй урвал юм. Үүнийг хэрэгжүүлэхийн тулд 5 найрлага хэрэгтэй, тухайлбал: AG, AT ба комплемент (эхний систем), хонины эритроцит ба цус задралын ийлдэс (хоёр дахь систем).
RSC-ийн эсрэгтөрөгч нь янз бүрийн үхсэн бичил биетний өсгөвөр, тэдгээрийн лизатууд, бактерийн бүрэлдэхүүн хэсгүүд, эмгэг өөрчлөлтүүд болон хэвийн эрхтнүүд, эдийн липид, вирус, вирус агуулсан материал.
Шинэ эсвэл хатаасан далайн гахайн ийлдсийг нэмэлт болгон ашигладаг.
Урвалын механизм
RSK нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг: 1-р үе шат - гурван бүрэлдэхүүн хэсэг антиген + эсрэгбие + комплемент агуулсан хольцын инкубаци; 2-р үе шат (заагч) - хонины эритроцит, тэдгээрийн эсрэгбие агуулсан цус задралын ийлдэсээс бүрдэх цус задралын системийг нэмж хольц дахь чөлөөт нэмэлтийг илрүүлэх. Урвалын 1-р үе шатанд эсрэгтөрөгч-эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэх үед комплемент холбогдож, дараа нь 2-р үе шатанд эсрэгбиемүүдэд мэдрэмтгий болсон эритроцитуудын гемолиз үүсэхгүй; хариу үйлдэл эерэг байна. Хэрэв эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие нь хоорондоо таарахгүй бол (шинжилгээний дээжинд эсрэгтөрөгч эсвэл эсрэгбие байхгүй) нэмэлт бодис чөлөөтэй хэвээр үлдэж, 2-р үе шатанд эритроцит - эритроцитын эсрэг эсрэгбиеийн цогцолбортой нэгдэж, цус задрал үүсгэдэг; хариу үйлдэл нь сөрөг байна.
Өргөдөл
Комплемент бэхлэх урвалыг дараахь зорилгоор ашиглаж болно.
1) тодорхой шинж чанартай антигентэй харилцан үйлчлэлцсэний үндсэн дээр үл мэдэгдэх ийлдэс дэх өвөрмөц эсрэгбиемүүдийг тодорхойлох;
2) мэдэгдэж буй тусгай ийлдэстэй урвалд орох эсрэгтөрөгчийн шинж чанарыг судлах. RSC-ийн үе шатанд бэлтгэх найрлагыг бэлтгэх.
1. Судалгаанд зориулж авсан цусны ийлдсийг урвалын өмнөхөн усан ваннд 560С-т 30 минут халааж, өөрийн нэмэлт бодисыг идэвхгүй болгоно. Идэвхгүйжүүлсэн ийлдсийг 3-40С температурт 5-6 хоног хадгалж болно. Туршилт хийх өдөр ийлдсийг натрийн хлоридын изотоник уусмалаар 1:5 харьцаагаар шингэлнэ (0.1 мл туршилтын ийлдэс + 0.4 мл изотоник натрийн хлоридын уусмал).
2. CSC үйлдвэрлэх эсрэгтөрөгч нь янз бүрийн микробын өсгөвөр, бактерийн уураг, бичил биетний өсгөвөр, эмгэг өөрчлөлттэй, хэвийн эрхтэн, эд эсээс гаргаж авсан ханд байж болно. Антиген бэлтгэх онцлог нь халдварт үйл явцын шинж чанар, түүний эмгэг төрүүлэгчийн шинж чанараар тодорхойлогддог.
3. Комплемент гэдэг нь 3-5 эрүүл далайн гахайнаас гаргаж авсан ийлдэс, эсвэл ампулаар хийсэн хуурай комплемент юм.
Хэрэглэхийн өмнө нэн даруй далайн гахайн ийлдсийг натрийн хлоридын изотоник уусмалаар 1:10 харьцаагаар шингэлж, нөөцийн уусмал авна.
4. Туршилт хийхээс өмнө цус задралын ийлдсийг 56 0С-ийн температурт 30 минутын турш халааж идэвхгүй болгоно. Үндсэн RSC туршилтыг хийх, түүнчлэн комплемент ба антигенийг титрлэхийн тулд гемолитик ийлдэсийг гурвалсан титрээр ашигладаг. Жишээлбэл, цус задралын ийлдсийн титр 1: 1800 байвал урвалд 1: 600 сийвэнгийн шингэрүүлэлтийг хэрэглэнэ.
5. Эритроцитыг дефибринжүүлсэн хонины цуснаас гаргаж авдаг. Фибрин хальсыг арилгахын тулд цусыг гурван давхаргатай самбай шүүлтүүрээр шүүнэ. Үүссэн шүүгдсийг центрифуг хийж, ийлдсийг соруулж, шавхаж, эритроцитыг натрийн хлоридын изотоник уусмалаар 3-4 удаа центрифугээр угаана. Цусны улаан эсийг сүүлчийн удаа угаах үед шингэний дээд давхарга бүрэн ил тод байх ёстой. Угаасан цусны улаан эсээс натрийн хлоридын изотоник уусмалд 3% суспенз бэлтгэнэ. RSC-д орсон найрлагыг дээр дурдсан аргаар бэлтгэсний дараа цус задралын ийлдэс, комплемент болон антигенийг титрлэнэ.
Сурах бичиг нь долоон хэсгээс бүрдэнэ. Нэгдүгээр хэсэг - "Ерөнхий микробиологи" - бактерийн морфологи, физиологийн талаархи мэдээллийг агуулдаг. Хоёрдугаар хэсэг нь бактерийн генетикэд зориулагдсан болно. Гуравдугаар хэсэг - "Биосферийн микрофлор" - микрофлорыг судалдаг орчин, байгаль дахь бодисын эргэлтэд гүйцэтгэх үүрэг, түүнчлэн хүний микрофлор, түүний ач холбогдол. Дөрөвдүгээр хэсэг - "Халдварын тухай сургаал" нь бичил биетний эмгэг төрүүлэгч шинж чанар, тэдгээрийн гүйцэтгэх үүрэгт зориулагдсан болно. халдварт үйл явц, мөн антибиотик ба тэдгээрийн үйл ажиллагааны механизмын талаархи мэдээллийг агуулдаг. Тавдугаар хэсэг - "Дархлааны тухай сургаал" нь дархлааны талаарх орчин үеийн санаануудыг агуулдаг. “Вирус ба тэдгээрийн үүсгэгч өвчин” гэсэн зургаа дахь хэсэг нь вирусын үндсэн биологийн шинж чанар, тэдгээрийн үүсгэгч өвчний талаар мэдээлэл өгнө. Долоодугаар хэсэг - "Хувийн эмнэлгийн микробиологи" нь олон төрлийн эмгэг төрүүлэгчдийн морфологи, физиологи, эмгэг төрүүлэгч шинж чанаруудын талаархи мэдээллийг агуулдаг. Халдварт өвчин, мөн тухай орчин үеийн аргуудТэдний оношлогоо, тусгай урьдчилан сэргийлэхба эмчилгээ.
Сурах бичиг нь анагаахын дээд сургуулийн оюутнууд, аспирантууд, багш нарт зориулагдсан боловсролын байгууллагууд, их дээд сургууль, бүх мэргэжлийн микробиологич, дадлагажигч эмч нар.
5 дахь хэвлэл, засварлаж, өргөтгөсөн
Ном:
| <<< Назад
|
Урагшаа >>> |
Комплемент бэхлэх урвал
Өөр өөр шинж чанартай антиген + эсрэгбиеийн цогцолборуудтай тусгайлан холбогддог комплементийн өвөрмөц чадварыг олж илрүүлсэн өргөн хэрэглээнэмэлт бэхэлгээний урвалд (CFR). RSC-ийн онцгой давуу тал нь түүнд хамаарах эсрэгтөрөгчийн шинж чанар (корпускуляр эсвэл уусдаг) хамаагүй, учир нь комплемент нь эсрэгбиеийн өвөрмөц байдлаас үл хамааран IgG ба IgM-тэй холбоотой аливаа эсрэгбиеийн Fc фрагменттэй холбогддог. Үүнээс гадна RSA нь маш мэдрэмтгий байдаг: энэ нь жишээлбэл, хур тунадасны урвалаас 10 дахин бага эсрэгбиеийн хэмжээг илрүүлэх боломжийг олгодог. RSC-ийг 1901 онд Ж.Бордот, О.Жанг нар санал болгосон. Энэ нь нэмэлт хоёр шинж чанарт суурилдаг:
1) эсрэгтөрөгч + эсрэгбиеийн цогцолбортой холбогдох чадвар;
2) цус задралын ийлдэс авахад ашигладаг улаан эсийн задрал.
RSK нь хоёр үе шаттайгаар явагддаг бөгөөд үүнд туршилт, оношлогоо, индикатор гэсэн хоёр систем тус тус оролцдог. Оношлогооны систем нь туршилтын (эсвэл оношилгооны) ийлдэсээс бүрдэх ба түүнд агуулагдах комплемент болон антигенийг идэвхгүй болгох урвал явуулахаас өмнө 30 минутын турш 56 ° C-т халаана. Энэ системд стандарт нэмэлтийг нэмсэн. Үүний эх үүсвэр нь шинэхэн эсвэл хатаасан гвиней гахайн шар сүү юм. Хольцыг 37 0С-т нэг цагийн турш өсгөвөрлөнө. Туршилтын ийлдэс нь эсрэгбие агуулсан бол тэдгээр нь нэмсэн эсрэгтөрөгчтэй харилцан үйлчлэлцэх ба үүссэн эсрэгтөрөгч + эсрэгбиеийн цогцолборууд нь нэмэлт нэмэлтийг холбодог. Хэрэв ийлдэс дэх эсрэгбие байхгүй бол эсрэгтөрөгч + эсрэгбиеийн цогцолбор үүсэхгүй бөгөөд нэмэлт нь чөлөөтэй хэвээр үлдэнэ. Урвалын энэ үе шатанд нэмэлт бэхэлгээний харагдахуйц илрэлүүд ихэвчлэн байдаггүй. Тиймээс, комплемент бэхэлсэн эсэх асуудлыг тодруулахын тулд хоёр дахь индикаторын системийг (идэвхгүйжүүлсэн цус задралын ийлдэс + хонины эритроцит) нэмж, RSC-ийн бүх бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн хольцыг 37 ° C-т 30-60 минутын турш дахин өсгөвөрлөнө. урвалын үр дүнг үнэлдэг. Хэрэв комплемент нь эхний шатанд, оношилгооны системд холбогдож байвал, өөрөөр хэлбэл өвчтөний ийлдэс дэх эсрэгбие байгаа бөгөөд комплемент нь эсрэгбие ++ эсрэгтөрөгчийн цогцолбороор холбогддог бол эритроцит задрахгүй - эритроцит эерэг: шингэн нь өнгөгүй, хоолойн ёроолд эритроцитуудын тунадас байдаг. Хэрэв ийлдэс дэх тусгай эсрэгбие байхгүй бөгөөд оношилгооны системд комплемент холболт үүсэхгүй, өөрөөр хэлбэл RSC сөрөг байвал оношилгооны системд зарцуулагдаагүй комплемент нь цусны улаан эсийн цогцолбор + индикаторын системийн эсрэгбие болон цус задралд холбогддог. тохиолддог: туршилтын хоолойд "лакласан цус", цусны улаан эсийн тунадас №. RSC-ийн эрчмийг гемолизийн саатал, цусны улаан эсийн тунадас байгаа эсэхээс хамааран дөрвөн хөндлөн систем ашиглан үнэлдэг. Зарим ийлдэс болон зарим эсрэгтөрөгч нь нэмэлт эсрэг үйлчилгээтэй байдаг тул урвалыг зохих хяналтууд дагалддаг: ийлдсийн хяналт (антигенгүй) ба эсрэгтөрөгчийн хяналт (ийлдэсгүй). RSC хийхээс өмнө туршилтын ийлдэс эсвэл эсрэгтөрөгчөөс бусад бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг сайтар титрлэнэ. Комплементийн тодорхой тунг урвалд оруулах нь нэн чухал бөгөөд учир нь түүний дутагдал эсвэл илүүдэл нь хүргэж болзошгүй юм худал үр дүн. Комплемент титр нь цус задралын ийлдсийн ажлын тун байгаа тохиолдолд цусны улаан эсийг бүрэн уусгах хамгийн бага хэмжээ юм. Үндсэн туршилтыг хийхийн тулд тогтоосон титртэй харьцуулахад 20-25% -иар нэмэгдүүлсэн нэмэлт тунг авна. Цус задлагч ийлдсийн титр нь түүний хамгийн их шингэрүүлэлт бөгөөд 10% -ийн нэмэлт уусмалтай ижил хэмжээтэй холилдоход 37 ° C-ийн температурт 1 цагийн дотор цусны улаан эсийн зохих тунг бүрэн гемолиз болгодог. Гол туршилт нь титрийнхээ 1/3 хүртэл шингэлсэн ийлдсийг авах явдал юм.
Комплемент бэхлэх урвал нь уламжлалт аргуудын нэг юм серологийн урвал, олон вируст өвчнийг оношлоход ашигладаг бөгөөд бусад илрүүлэх аргуудын үндэс суурь болдог вирусын эсрэг эсрэгбие. Хэдийгээр саармагжуулах урвал, гемагглютинацийг дарангуйлах, шууд бус гемагглютинаци, холбоотой иммуносорбент шинжилгээМэдрэмжийн хувьд комплемент бэхлэх урвалаас давуу боловч техникийн энгийн байдал, эсрэгбиемийг эрт илрүүлэх, түүнчлэн гемагглютинжуулах шинж чанаргүй вирусын эсрэгтөрөгчийг илрүүлэх зэрэг нь вирус судлалын судалгаанд өргөн хэрэглэгддэг болохыг тайлбарлаж байна.
Үүнийг үйлдвэрлэхэд бусад олон тооны дархлаа судлалын урвалд зайлшгүй шаардлагатай антигенийн эм нь тийм өндөр концентраци, цэвэршилт шаарддаггүй. Нэмж дурдахад, олон вирусын эсрэгтөрөгчийн эсрэгтөрөгчийн бүлгийн өвөрмөц байдал нь комплемент бэхлэх урвалыг массын оношлогоонд ашиглах боломжийг олгодог: энэ урвал нь омгийн ялгааг илрүүлдэггүй бөгөөд вирусын эсрэгтөрөгчийн хамаарлыг судлахад онцгой ач холбогдолтой юм.
Нэр нь өөрөө хоёр тусдаа урвалаас бүрдэх аргын мөн чанарыг ихээхэн тусгадаг. Эхний шатанд урвал нь эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие (эдгээр бүрэлдэхүүн хэсгүүдийн аль нэгийг нь урьдчилан мэддэг), түүнчлэн титрлэгдсэн хэмжээгээр нөхдөг. Хэрэв эсрэгтөрөгч ба эсрэгбие нь таарч байвал тэдгээрийн нийлмэл комплементийг 2-р шатанд индикаторын систем (хонины улаан эсийн холимог ба эсрэг ийлдэс) ашиглан илрүүлдэг. Хэрэв эсрэгтөрөгч ба эсрэгбиеийн харилцан үйлчлэлийн явцад комплемент холбогддог бол хонины улаан эсийн задрал үүсэхгүй. эерэг хариу үйлдэлнэмэлт бэхэлгээ). Комплемент бэхэлгээний сөрөг урвал гарсан тохиолдолд тогтоогдоогүй комплемент нь гемолизийг дэмждэг бөгөөд энэ нь урвалын үр дүнг дүгнэхэд ашиглагддаг.
Комплемент бэхэлгээний урвалын гол бүрэлдэхүүн хэсгүүд нь эсрэгтөрөгч (мэдэгдэж байгаа эсвэл илрүүлэх боломжтой), эсрэгбие (мэдэгдэж байгаа антисера эсвэл шинжилгээний ийлдэс), комплемент, цус задралын ийлдэс, хонины улаан цусны эсүүд; Натрийн хлоридын изотоник уусмал (рН 7.2-7.4) эсвэл янз бүрийн буферийн уусмалыг шингэлэгч болгон ашигладаг. Антиген ба ийлдэс нь эсрэг нэмэлт байж болно, i.e. гемолизийг удаашруулж, урвалын үр дүнг гажуудуулдаг нэмэлт бодисыг шингээх чадвар.
CSC-ийн эсрэгтөрөгчийг халдвартай малын эд эрхтэн, халдвартай тахианы үр хөврөлийн аллантоик эсвэл амнион шингэн, түүнчлэн эдийн эсийн өсгөвөрт вирус тариалсны дараа өсгөвөрлөх шингэнээс бэлтгэдэг. Антиген бэлдмэлүүд нь үргэлж амьтны эс эсвэл эдийн өсгөвөрөөс олон тооны тогтворжуулагч бодис агуулдаг бөгөөд энэ нь урвалын үр дүнг гажуудуулж болзошгүй юм.
Үүссэн вирусын эсрэгтөрөгчийг идэвхгүйжүүлж, ажлын тунг, түүнчлэн эсрэг нэмэлт, цус задралын шинж чанарыг тодорхойлно. Дараа нь эсрэгтөрөгчийг комплементийн дэргэд титрлэнэ.
Урвалын үе шатыг тодорхойлох хоёр дахь үндсэн бүрэлдэхүүн хэсэг бол комплемент юм. Энэ нэр томъёо гэсэн үг нарийн төвөгтэй системамьтан, хүний цусанд агуулагдах уураг ба хүчин зүйлүүд. Ихэвчлэн Гвиней гахайн цусны ийлдсийг нөхөн сэргээх урвалд ашигладаг. Комлементийн идэвхжил (титр) нь түүний хамгийн бага хэмжээ бөгөөд гемолизин нь хэрэглэсэн цус задралын системийн бүрэн гемолизийг үүсгэдэг.
Вирусын эсрэг комплемент тогтоогч эсрэгбиемүүдийг тодорхойлохын тулд ийлдсийг идэвхгүйжүүлж, 560С-т 30 минутын турш комплементийг устгах шаардлагатай. Дархлаажуулалттай амьтдын ийлдэсийг ихэвчлэн лавлагаа болгон ашигладаг. Түүнээс гадна дархлаажуулалтын хувьд вирусын эсрэгтөрөгчийг эд эсийн бохирдлоос сайтар цэвэрлэдэг тул өөрөөр хэлбэл тодорхой өвөрмөц бус урвал үүсдэг.
Комплемент бэхлэх урвалын зайлшгүй бүрэлдэхүүн хэсэг нь хонины эритроцит, туулайн эритроцитоор хэт дархлаажуулах замаар олж авсан цус задралын ийлдсийг багтаасан цус задралын систем юм.
Комплемент бэхлэх урвалыг гүйцэтгэхийн тулд дараах өөрчлөлтүүдийг ашигладаг: Такачи системийн микротитратор дахь комплемент бэхлэх урвалын микро арга, урт хугацааны комплемент бэхлэх урвал, шууд бус комплемент бэхлэх урвал, гель дэх комплемент бэхлэх урвал, микро дусал комплемент бэхлэх урвал, хатуу үндсэн дээр нэмэлт бэхлэх урвал.
Хэдийгээр комплемент бэхлэх урвалын мэдрэмж бага боловч өвөрмөц чанар өндөртэй байдаг. Үүнтэй холбогдуулан залуу үхрийн вируст уушгины хатгалгааны оношлогоонд өргөн хэрэглэгддэг.
