Mga reaksyon ng passive agglutination. Mga hindi direktang reaksyon ng agglutination. Hindi direkta o passive hemagglutination reaction (IRHA, RPHA). Baliktarin ang RNGA. Passive hemagglutination inhibition reaction (PHA).
Ang mga ito mga reaksyon ay tinatawag hindi direkta (passive), dahil ginagamit nila ang Ag (o AT) na artipisyal na na-sorbed sa ibabaw ng iba't ibang mga corpuscular particle.
Hindi direkta o passive na reaksyon ng hemagglutination (RNGA, RPGA) ay isa sa mga pinaka-sensitibong serological na reaksyon. Ito ay batay sa kakayahan ng AT na makipag-ugnayan sa Ag na naayos sa iba't ibang mga pulang selula ng dugo, na pagkatapos ay aglutinate. Para sa higit na katatagan ng mga diagnosticum, ang mga pulang selula ng dugo ay pormalin.
Baliktarin ang RNGA ginagamit upang makita ang Ag sa suwero ng dugo; Para sa layuning ito, hindi Ag, ngunit AT ay naayos sa mga erythrocytes. Ang mga reaksyon ng ganitong uri ay malawakang ginagamit para sa pag-diagnose ng mga nakakahawang sakit, pagtatatag ng pagbubuntis, pagtuklas hypersensitivity sa mga gamot, atbp.
tugon ng pagpepreno passive hematglutination (RTPGA) - karagdagang pag-unlad RNGA; sa isang kahulugan ay kumokontrol sa pagiging tiyak nito. Unlike RNGA, may kasamang tatlong bahagi; Ang Ag, AT at Ag (AT) ay na-adsorbed sa mga erythrocytes. Sa una, ang Ag ay tumutugon sa AT (karaniwang antiserum), pagkatapos ay ang mga erythrocyte na sensitized na may parehong Ag (o AT) ay idinagdag sa pinaghalong. Kung, sa panahon ng pakikipag-ugnayan ng Ag sa AT, walang libreng AT (o Ag) na nananatili sa system, kung gayon ang agglutination ng erythrocyte diagnosticum ay hindi sinusunod.
Gumagamit ito ng mga pulang selula ng dugo o neutral mga sintetikong materyales(halimbawa, mga latex particle), sa ibabaw kung saan ang mga antigens (bacterial, viral, tissue) o antibodies ay na-sorbed. Ang kanilang aglutinasyon ay nangyayari kapag ang naaangkop na sera o antigens ay idinagdag. Ang mga pulang selula ng dugo na na-sensitize sa mga antigen ay tinatawag na antigenic erythrocyte diagnosticum at ginagamit upang tuklasin at i-titrate ang mga antibodies. Ang mga erythrocyte ay na-sensitized sa mga antibodies. ay tinatawag na immunoglobulin erythrocyte diagnosticums at ginagamit upang makilala ang mga antigen.
Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria ( typhoid fever at paratyphoid fever, dysentery, brucellosis, plague, cholera, atbp.), protozoa (malaria) at mga virus (influenza, mga impeksyon sa adenoviral, viral hepatitis B, tigdas, tick-borne encephalitis, Crimean hemorrhagic fever, atbp.), pati na rin upang matukoy ang ilang mga hormone, kilalanin ang tumaas na sensitivity ng pasyente sa mga gamot at mga hormone tulad ng penicillin at insulin.
Passive hemagglutination reaction (RPHA). Ang passive hemagglutination test ay isang sensitibong pamamaraan serological diagnostics at ginagamit para sa parehong maaga at retrospective na diagnosis, pati na rin upang matukoy ang immunopogic na estado ng mga nabakunahang tao. Sa mga pasyente na may tularemia, ang mga antibodies ay karaniwang nakikita sa pagtatapos ng ika-1 o ika-2 linggo ng sakit pagkatapos ng 1-1.5 na buwan, ang mga titer ng RPHA ay umabot pinakamataas na pagganap(1:100000-1:20000, bihirang mas mataas), pagkatapos ay bumababa sila at nananatili sa antas ng 1:100-1:200 sa loob ng mahabang panahon.
Sa mga nabakunahang tao, ang mga antibodies ay patuloy ding nakikita, gayunpaman, sa mas mababang titer, hindi hihigit sa 1:2000-1:5000 1-1.5 buwan pagkatapos ng pagbabakuna, at nananatili sa loob ng ilang taon sa mababang antas ng 1:20-1:80.
Ang antigen para sa pagtatanghal ng RPHA ay tularemia erythrocyte diagnosticum (antigenic). Ang gamot ay pormalinisadong mga pulang selula ng dugo ng tupa, sensitized na may tularemia antigen, magagamit sa likido at tuyo na anyo. Paghahanda ng likido - isang 10% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo sa isang pormaldehayd na solusyon ng 10% na konsentrasyon. Ang dry lyophilized na paghahanda ay isang vacuum-dried na 10% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo na walang preservative. Bago gamitin, ito ay diluted ayon sa mga direksyon sa label. Upang i-set up ang reaksyon sa mga polystyrene plate, ang parehong mga gamot ay ginagamit sa isang 2.5% na konsentrasyon, at kapag nagse-set up ng reaksyon sa microvolumes - sa isang 0.5% na konsentrasyon.
Teknik para sa pag-set up ng RPGA. Ang test sera ay diluted na may physiological solution 1:5 (1:10) at pinainit sa 56 degrees C sa loob ng 30 minuto. Pagkatapos nito, upang maalis ang mga heterogenous na antibodies sa mga erythrocytes ng tupa, ang sera ay ginagamot ng 50% na pagsususpinde ng mga formalinized na erythrocytes ng tupa. Upang gawin ito, magdagdag ng mga pulang selula ng dugo sa bilis na 2 patak (0.05 ml) bawat 1 ml ng serum at ihalo nang lubusan sa pamamagitan ng pag-alog. Ang suwero ay naiwan hanggang ang mga erythrocyte ay ganap na nanirahan, o na-centrifuge pagkatapos ng isang oras sa temperatura ng silid, pagkatapos nito ay handa na para sa pagsusuri.
Ang dilution na likido ay ibinuhos sa dami ng 0.5 ml sa isang hilera ng mga balon sa isang polystyrene plate. Sa panahon ng paunang pag-aaral ng sera, ipinapayong subukan ang mga ito sa pamamagitan ng pag-set up ng reaksyon sa isang maikling hilera ng plato (6-wells). Kung ang mga antibodies ay nakita sa isang maikling serye, ang sera ay muling susuriin sa isang mahabang serye ng mga dilution (12 balon). Pagkatapos matapon ang dilution liquid, magdagdag ng 0.5 ml ng test sera sa isang 1:5 dilution sa unang balon ng bawat hilera (maikli o mahaba). Pagkatapos ang parehong mga volume ng suwero ay titrated na may dalawang beses dilutions. Kaya, ang mga serum dilution ay nakuha sa maikling serye mula 1:10 hanggang 1:320, at sa mahabang serye mula 1:10 hanggang 1:20480. Pagkatapos ng titration ng sera, isang patak (0.05 ml) ng gumaganang 2.5% na suspensyon ng sensitized erythrocytes ay idinagdag sa bawat balon. Ang mga nilalaman ng mga plato ay lubusang inalog hanggang sa makuha ang isang homogenous na suspensyon. Ang mga plato ay iniiwan sa temperatura ng silid sa isang nakatigil na ibabaw ng mesa. Ang paunang pag-record ng reaksyon ay isinasagawa pagkatapos ng 2-3 oras, ang pangwakas na pagpapasiya ng titer ay ginawa pagkatapos ng kumpletong sedimentation ng mga pulang selula ng dugo sa mga balon. Ang mga sumusunod na kontrol ay ibinibigay para sa reaksyon: 1) test serum diluted 1:10 sa dami ng 0.5 ml + 1 drop ng 2.5% suspension ng unsensitized erythrocytes; 2) dilution liquid sa dami ng 0.5 ml + 1 drop ng 2.5% suspension ng unsensitized erythrocytes; 3) dilution liquid sa dami ng 0.5 ml + 1 drop ng 2.5% suspension ng sensitized erythrocytes. Ang lahat ng mga kontrol ay dapat magbigay ng malinaw na negatibong reaksyon.
Accounting at pagtatasa ng RPGA. Ang reaksyon ay tinasa ng sumusunod na diagram:
1) nang husto positibong reaksyon(++++) - ang mga pulang selula ng dugo ay nahuhulog sa ilalim ng butas sa isang pantay na layer sa anyo ng isang "payong", na kadalasang may mga scalloped na gilid;
2) positibong reaksyon (+++) - ang mga pulang selula ng dugo ay sumasakop ng hindi bababa sa 2/3 ng ilalim ng balon;
3) mahinang positibong reaksyon (++) - maliit ang aglutinate at matatagpuan sa pinakagitna ng balon;
4) kaduda-dudang reaksyon (+) - sa paligid ng sediment ng mga erythrocytes sa pinakasentro ng balon ay may mga indibidwal na butil ng agglutinate;
5) negatibo (-) - sa ilalim ng butas, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa anyo ng isang "button" o isang maliit na singsing na may makinis, malinaw na tinukoy na mga gilid.
Ang serum titer ay isinasaalang-alang batay sa huling pagbabanto ng suwero, na nagbigay ng napakalinaw na reaksyon (hindi bababa sa tatlong plus). Ang pagbabanto ng 1:100 o mas mataas ay itinuturing na isang diagnostic titer, gayunpaman, tulad ng sa kaso ng RA, kinakailangan na subaybayan ang pagtaas nito.
Ang RPGA para sa tularemia ay medyo tiyak at nakakakita ng ilan cross reactions lamang sa brucellosis serums. Differential diagnosis posible sa taas ng mga titer sa RPGA, na mas mataas sa homologous antigen.
Pamamaraan para sa pag-set up ng RPHA sa mga microvolume. Ang RPGA ay maaaring isagawa sa microvolumes gamit ang Takachi-type microtitrator (o round-bottomed microplates na may micropipettes), na nagpapahintulot sa titration ng materyal sa mga volume na 25 μl at 50 μl. Ang pamamaraan ng reaksyon at ang pagkakasunud-sunod ng lahat ng mga operasyon ay kapareho ng kapag nag-aaral sa mga polystyrene plate. Gayunpaman, dapat itong tandaan na ang sensitivity ng micromethod ay karaniwang isang dilution (ibig sabihin, 2 beses) na mas mababa kaysa sa macromethod.
Upang i-set up ang reaksyon sa isang microtitrator, isang dilution na likido sa dami ng 50 μl ay idinagdag sa bawat balon gamit ang isang dropper pipette. Pagkatapos, gamit ang mga titrator na may 50 μl na ulo, ang test serum ay kinokolekta sa pamamagitan ng paglubog ng ulo dito. Tiyaking napuno ng likido ang ulo ng titrator. Ang titrator na may suwero ay inilipat sa unang balon at, pinipigilan ito patayong posisyon, gumawa ng ilan mga paikot-ikot na paggalaw Papunta at pabalik. Pagkatapos ang titrator ay inilipat sa susunod na balon at ang pagmamanipula ay paulit-ulit. Maaaring isagawa ang titration nang sabay-sabay sa ilang mga hilera. Matapos i-titrate ang buong serye, ang titrator ay hinuhugasan ng distilled water (pagbabago ng 2 bahagi) sa pamamagitan ng pag-ikot ng mga paggalaw, ang tubig ay tinanggal mula sa ulo gamit ang isang pamunas at sinunog sa apoy ng burner.
Pagkatapos ng titration, magdagdag ng 25 μl ng erythrocyte diagnostic fluid sa mga balon. Ang konsentrasyon ng diagnosticum para sa RPHA sa mga microvolum ay dapat na 0.5% (ibig sabihin, ang isang 2.5% na pagsususpinde ng mga pulang selula ng dugo ay karagdagang natunaw ng 5 beses). Pagkatapos magdagdag ng mga pulang selula ng dugo, ang mga plato ay dapat na bahagyang inalog hanggang sa makuha ang isang homogenous na suspensyon. Ang mga resulta ay maaaring maitala sa loob ng 1-1.5 na oras, na isang makabuluhang bentahe ng RPGA sa isang microtiter. Bilang karagdagan, ang pamamaraan na ito ay nangangailangan ng maliit na dami ng lahat ng mga sangkap ng reaksyon at pagsubok ng sera.
Ang reaksyon ay isinasaalang-alang ayon sa sumusunod na pamamaraan:
1) "+" - kumpletong hemagglutination, kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay nahulog sa ilalim ng balon sa isang pantay na layer sa anyo ng isang "payong", na sumasakop ng hindi bababa sa 2/3 ng ilalim;
2) "+-" - bahagyang hemagglutination, kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay nahuhulog sa ilalim sa anyo ng isang maluwag na singsing na maliit ang sukat;
3) “-“ – kawalan ng hemagglutination, kapag ang mga pulang selula ng dugo ay bumagsak sa ilalim sa anyo ng isang maliit na butones o singsing na may makinis na gilid.
Ang pagiging tiyak ng isang positibong resulta na nakuha sa RPHA ay maaaring masuri gamit ang isang tatlong bahagi na reaksyon - ang passive hemagglutination inhibition reaction (PHA).
Pamamaraan para sa pag-set up ng RTPGA. Ang reaksyong ito ay ginagamit upang kumpirmahin ang pagiging tiyak ng isang positibong resulta ng RPGA kapag ito ay may pagdududa o partikular na interes sa epidemiological. Ang mekanismo ng reaksyon ay binubuo ng tiyak na pagsugpo ng hemagglutination kapag ang isang suspensyon ng pinatay na tularemia bacteria ay idinagdag sa test serum. Tatlong sangkap ang nakikipag-ugnayan sa reaksyon: test serum, partikular na tularemia antigen at antigenic erythrocyte diagnosticum RTPHA ay karaniwang inilalagay sa isang hilera ng 7-8 na balon. Maipapayo na mag-install ng paulit-ulit na RPGA na kahanay sa RTPGA. Ang 0.25 ml ng dilution na likido ay ibinuhos sa dalawang hanay ng mga balon, pagkatapos ay ang pagsubok na serum sa dami ng 0.25 ml ay idinagdag sa mga unang balon ng parehong mga hilera at ang titration ay isinasagawa ng dalawang magkaparehong hanay ng serum dilutions. Magdagdag ng 0.25 ml ng dilution liquid sa lahat ng mga balon ng ikalawang hanay, at 0.25 ml ng isang suspensyon ng tularemia bacteria sa mga balon ng unang hilera. Ginagamit ang Tularemia diagnosticum (naglalaman ng 25 bilyong tularemia bacteria sa 1 ml), na dati nang natunaw ng 50 beses. Ang pagsususpinde na ito ay naglalaman ng 500 milyong bakterya sa 1 ml o 125 milyon sa dami ng 0.25 ml. Matapos idagdag ang antigen, ang plato ay naiwan sa loob ng 1 oras sa temperatura ng silid, pagkatapos kung saan ang isang patak (0.05 ml) ng erythrocyte diagnosticum ay idinagdag sa lahat ng mga balon ng parehong mga hilera, ang plato ay inalog at iniwan sa isang patag na ibabaw ng mesa. Ang accounting ay isinasagawa pagkatapos ng 2-3 oras.
Accounting at pagtatasa ng RTPGA. Kung ang test serum ay naglalaman ng mga partikular na tularemia antibodies, ang mga ito ay neutralisado ng idinagdag na antigen at ang hemagglutination ay hindi magaganap sa unang hilera ng mga balon, o, na may mataas na serum titer, ang hemagglutination ay makikita sa mas maliit (2-4) na bilang ng balon kaysa sa hanay na may RPHA. Sa kasong ito, ang pagtitiyak ng mga resulta ay nakumpirma. Kung ang hemagglutination ay nabanggit sa parehong mga hilera, i.e. Kung ang mga resulta ng RTPGA at RPGA ay nag-tutugma, ito ay nagpapahiwatig ng kawalan ng tularemia antibodies sa test serum. Sa kasong ito, ang pangunahing resulta ng RPGA ay itinuturing na hindi tiyak.
Pamamaraan para sa pagtatanghal ng RTHG sa mga microvolume. Ang RTPGA, tulad ng RPGA, ay maaaring isagawa sa mga microvolume gamit ang isang Takachi-type microtiter. Upang gawin ito, magdagdag ng 0.25 μl ng diluting liquid sa mga balon ng microplate sa dalawang hanay ng 7-8 na balon bawat isa. Pagkatapos, gamit ang isang titrator, 0.25 μl ng test serum ay idinagdag at titrated sa parehong mga hanay. Pagkatapos nito, 25 μl ng tularemia antigen (ang konsentrasyon nito ay 500 milyong tularemia bacteria sa 1 ml) ay idinagdag sa bawat balon sa unang hilera, at 25 μl ng dilution na likido ay idinagdag sa pangalawang hilera. Ang mga plato ay naiwan sa loob ng 1 oras sa temperatura ng silid, pagkatapos kung saan 25 μl ng antigenic zritrocytic diagnosticum (0.5% na konsentrasyon) ay idinagdag sa lahat ng mga balon ng parehong mga hilera. Ang accounting at pagsusuri ng mga resulta ay isinasagawa katulad ng mga reaksyon sa macrovolumes.
Passive hemagglutination reaction) isang paraan para sa pag-detect at pagtukoy ng mga antigen o antibodies, batay sa hindi pangkaraniwang bagay ng agglutination ng mga pulang selula ng dugo na nangyayari sa kanilang presensya, sa ibabaw kung saan ang kaukulang mga tiyak o antigens ay dating na-adsorbed.
1. Maliit na medical encyclopedia. - M.: Ensiklopedya sa medisina. 1991-96 2. Una Pangangalaga sa kalusugan. - M.: Great Russian Encyclopedia. 1994 3. Encyclopedic Dictionary mga terminong medikal. - M.: Ensiklopedya ng Sobyet. - 1982-1984.
Tingnan kung ano ang "Indirect hemagglutination reaction" sa iba pang mga diksyunaryo:
hindi direktang reaksyon ng hemagglutination- RNGA Pagsusulit sa laboratoryo gamit ang erythrocyte diagnostics. [English-Russian glossary ng mga pangunahing termino sa bakuna at pagbabakuna. World Health Organization, 2009] Mga Paksa pagbabakuna, pagbabakuna Mga kasingkahulugan RNGA EN... ... Gabay ng Teknikal na Tagasalin
- (RNHA; kasingkahulugan para sa passive hemagglutination reaction) isang paraan para sa pagtuklas at pagkakakilanlan ng mga antigen o antibodies, batay sa hindi pangkaraniwang bagay ng agglutination ng mga erythrocytes na nangyayari sa kanilang presensya, sa ibabaw kung saan sila ay dating na-adsorbed... .. . Malaking medikal na diksyunaryo
- (RPHA) tingnan ang Indirect hemagglutination reaction... Malaking medikal na diksyunaryo
Ang pahinang ito ay isang glossary. # A... Wikipedia
Mga pangunahing abbreviation na pinagtibay sa Veterinary Encyclopedic Dictionary- a., aa, artena, arteriae aa ana (pantay) USSR Academy of Medical Sciences USSR Academy of Medical Sciences USSR Academy of Sciences USSR Academy of Sciences Bac. Bacillus Bact. Bacterium BSSR Byelorussian SSR siglo, siglo. siglo, siglo v., vv. vena, venae VASKHNIL All-Union Order of Lenin at... ...
Ang terminong ito ay may ibang kahulugan, tingnan ang Salot. Distemper ng mga carnivore (sakit ng Kare) talamak o subacute na nakakahawa sakit na viral, ipinakikita ng lagnat, pamamaga ng catarrhal ng mauhog lamad, mga sugat sa balat, gitnang ... ... Wikipedia
- (renes) isang ipinares na excretory at endocrine organ na kumokontrol sa kemikal na homeostasis ng katawan sa pamamagitan ng paggana ng pagbuo ng ihi. ANATOMICAL PHYSIOLOGICAL SKETCH Ang mga bato ay matatagpuan sa retroperitoneal space (Retroperitoneal space) sa... ... Ensiklopedya sa medisina
I (trichinellosis; kasingkahulugan: trichinosis, "puffy") helminthiasis mula sa pangkat ng mga nematodes, na nailalarawan sa lagnat, myalgia, pamamaga ng mukha, mga pantal sa balat, eosinophilia ng dugo, at sa malalang kaso, mga sugat lamang loob at sentral...... Ensiklopedya sa medisina
- (nematodoses) helminthiasis sanhi ng roundworm nematodes klase ng Nematoda. Sa iba pang helminthiases, ang N. ay mayroon pinakamataas na halaga sa patolohiya ng tao, karamihan sa kanila ay geohelminthiasis (tingnan ang Helminthiasis); pag-unlad ng kanilang mga itlog o larvae... ... Ensiklopedya sa medisina
nakakahawang epididymitis- Bigas. 1. Paglaki ng kaliwang testis sa isang tupa na may nakakahawang epididymitis. kanin. 1. Paglaki ng kaliwang testis sa isang tupa na may nakakahawang epididymitis. nakakahawang epididymitis ng tupa (Epididymitis infectiosa arietum), talamak na nakakahawa... ... Veterinary encyclopedic dictionary
Tingnan ang Indirect hemagglutination reaction... Malaking medikal na diksyunaryo
Ang reaksyon ay ibinigay:
1) para sa pagtuklas ng mga polysaccharides, protina, bacterial extract at iba pang mga highly dispersed substance, rickettsia at mga virus, ang mga complex na may mga agglutinin ay hindi makikita sa mga conventional RAs,
2) upang makita ang mga antibodies sa sera ng mga pasyente sa mga mataas na dispersed na sangkap at maliliit na microorganism na ito.
Ang hindi direkta, o passive, agglutination ay nauunawaan bilang isang reaksyon kung saan ang mga antibodies ay nakikipag-ugnayan sa mga antigen na na-pre-adsorbed sa mga inert na particle (latex, cellulose, polystyrene, barium oxide, atbp. o sheep red blood cells, I (0) - pangkat ng dugo ng tao)
Sa passive hemagglutination reaction (RPHA), pulang selula ng dugo. Ang mga pulang selula ng dugo na puno ng antigen ay magkakadikit sa pagkakaroon ng mga partikular na antibodies sa antigen na ito at namuo. Ang antigen-sensitized erythrocytes ay ginagamit sa RPGA bilang isang erythrocyte diagnosticum para sa pagtuklas ng mga antibodies (serodiagnosis). Kung ang mga pulang selula ng dugo ay puno ng mga antibodies (erythrocyte antibody diagnosticum), maaari itong magamit upang makita ang mga antigen.
kanin. 3. RPGA scheme: ang mga pulang selula ng dugo (1), na puno ng antigen (3), ay nakagapos ng mga tiyak na antibodies (4).
pagtatanghal. Ang isang serye ng mga serial dilution ng serum ay inihanda sa mga balon ng polystyrene plates. Magdagdag ng 0.5 ml ng malinaw na positibong serum sa penultimate na balon at 0.5 ml ng physiological solution (mga kontrol) sa huling balon. Pagkatapos 0.1 ml ng diluted erythrocyte diagnosticum ay idinagdag sa lahat ng mga balon, inalog at inilagay sa isang termostat sa loob ng 2 oras.
Accounting. SA positibong kaso Ang mga erythrocytes ay tumira sa ilalim ng butas sa anyo ng isang pantay na layer ng mga cell na may nakatiklop o tulis-tulis na gilid (baligtad na payong), sa negatibo - sila ay tumira sa anyo ng isang pindutan o singsing.
Fig.4. Accounting para sa RNGA (RPGA).
Accounting para sa mga resulta ng isang x-ray test na ginawa upang makita ang botulinum toxin.
Ang causative agent ng botulism - Clostridium botulinum ay gumagawa ng mga lason ng pitong serovar (A, B, C, D, E, F, G), ngunit ang mga serovar A, B, E ay pinakakaraniwan Ang lahat ng mga lason ay naiiba sa mga katangian ng antigenic at maaaring iba-iba sa mga reaksyon gamit ang sera na partikular sa uri . Para sa layuning ito, ang isang passive (hindi direktang) hemagglutination reaksyon ay maaaring isagawa sa suwero ng pasyente, kung saan ang pagkakaroon ng lason ay ipinapalagay, at ang mga pulang selula ng dugo na puno ng mga antibodies ng antitoxic anti-botulinum serum ng mga uri A, B, E. Normal. ang serum ay nagsisilbing kontrol.
kanin. 3. Pahayag at resulta ng RNGA.
Accounting. Sa isang positibong kaso, ang mga pulang selula ng dugo ay tumira sa ilalim ng butas sa anyo ng isang pantay na layer ng mga cell na may nakatiklop o tulis-tulis na gilid (sa isang negatibong kaso, sila ay tumira sa anyo ng isang pindutan o singsing); .
Konklusyon: Ang botulinum toxin type E ay nakita sa suwero ng pasyente.
Hemagglutination inhibition reaction (HRT).
kanin. 8. Hemagglutination inhibition reaction (HAI) (scheme).
Ang prinsipyo ng reaksyon ay batay sa kakayahan ng AT na magbigkis ng iba't ibang mga virus at neutralisahin ang mga ito, na ginagawang imposibleng pagsamahin ang mga pulang selula ng dugo. Biswal, ang epekto na ito ay ipinakita sa "pagpigil" ng hemagglutination. Ginagamit ang RTGA sa pagsusuri ng mga impeksyon sa viral upang matukoy ang mga partikular na antihemagglutinin at tukuyin ang iba't ibang mga virus sa pamamagitan ng kanilang mga hemagglutinin, na nagpapakita ng mga katangian ng Ag.
Ang pag-type ng virus ay isinasagawa sa isang RTGA na reaksyon na may isang set ng sera na partikular sa uri. Ang mga resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng kawalan ng hemagglutination. Ang mga subtype ng Type A na virus na may mga antigen na H0N1, H1N1, H2N2, H3N2 at iba pa ay maaaring maiiba sa RTGA na may isang hanay ng homologous type-specific na sera
kanin. 9. Mga resulta ng RTGA para sa pag-type ng influenza virus
Alamat: - pagsugpo ng hemagglutination (button); - hemagglutination (payong).
Mga konklusyon: Ang materyal na pinag-aaralan ay naglalaman ng influenza virus type A na may H3N2 antigen
Ang indirect (passive) hemagglutination reaction (IRHA) ay batay sa katotohanan na ang mga pulang selula ng dugo, kung ang isang natutunaw na antigen ay na-adsorbed sa kanilang ibabaw, ay nakakakuha ng kakayahang mag-aglutinate kapag nakikipag-ugnayan sa mga antibodies sa adsorbed antigen. Ang diagram ng RNGA ay ipinapakita sa Fig. 34. Ang RNGA ay malawakang ginagamit sa pagsusuri ng ilang mga impeksiyon.
kanin. 34. Scheme ng passive hemagglutination reaction (RPHA). A - pagkuha ng erythrocyte diagnosticum: B - RPGA: 1 - erythrocyte: 2 - antigen na pinag-aaralan; 3 - erythrocyte diagnosticum; 4 - antibody sa antigen na pinag-aaralan: 5 - agglutinate
Pag-set up ng isang reaksyon. Ang test serum ay pinainit sa loob ng 30 minuto sa 56° C, diluted na sunud-sunod sa isang ratio na 1:10 - 1:1280 at ibinuhos sa 0.25 ml sa mga test tube o balon, kung saan 2 patak ng erythrocyte diagnosticum (erythrocytes na may antigen adsorbed sa kanila. ) ay pagkatapos ay idinagdag.
Mga kontrol: isang suspensyon ng erythrocyte diagnosticum na may kilalang immune serum; suspensyon ng diagnosticum na may normal na suwero; isang suspensyon ng mga normal na pulang selula ng dugo na may test serum. Sa unang kontrol, dapat mangyari ang agglutination, sa pangalawa at pangatlo hindi ito dapat mangyari.
Gamit ang RIGA, maaari mong makita ang isang hindi kilalang antigen kung ang mga kilalang antibodies ay na-adsorbed sa mga pulang selula ng dugo.
Ang reaksyon ng hemagglutination ay maaaring isagawa sa dami ng 0.025 ml (micromethod) gamit ang Takachi microtitrator.
1. Ano ang ipinahihiwatig nito? positibong resulta RGA sa pagitan ng mga pulang selula ng dugo at ang materyal na sinusuri para sa pagkakaroon ng virus?
2. Magaganap ba ang agglutination ng mga pulang selula ng dugo kung ang isang virus at ang kaukulang serum nito ay idinagdag sa kanila? Ano ang pangalan ng reaksyon na nagpapakita ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?
Mag-ehersisyo
Isaalang-alang at irehistro ang resulta ng RIGA.
Reaksyon ng ulan
Sa reaksyon ng precipitation, ang isang tiyak na immune complex ay namuo, na binubuo ng isang natutunaw na antigen (lysate, extract, hapten) at isang tiyak na antibody sa pagkakaroon ng mga electrolytes.
Ang maulap na singsing o precipitate na nabuo bilang resulta ng reaksyong ito ay tinatawag na precipitate. Ang reaksyong ito ay higit na naiiba sa reaksyon ng aglutinasyon sa laki ng mga partikulo ng antigen.
Ang reaksyon ng pag-ulan ay karaniwang ginagamit upang matukoy ang antigen sa pagsusuri ng isang bilang ng mga impeksiyon ( anthrax, meningitis, atbp.); sa forensic medicine - upang matukoy ang mga species ng dugo, tamud, atbp.; sa sanitary at hygienic na pag-aaral - kapag nagtatatag ng palsipikasyon ng mga produkto; sa tulong nito, natutukoy ang phylogenetic na relasyon ng mga hayop at halaman. Para sa reaksyon na kailangan mo:
1. Antibodies (precipitins) - immune serum na may mataas na titer antibodies (hindi mas mababa sa 1:100000). Ang titer ng precipitating serum ay tinutukoy ng pinakamataas na pagbabanto ng antigen kung saan ito tumutugon. Ang serum ay kadalasang ginagamit na undiluted o sa isang dilution na 1:5 - 1:10.
2. Antigen - dissolved substances ng protina o lipoid polysaccharide nature (full antigens at haptens).
3. Isotonic solution.
Ang mga pangunahing pamamaraan para sa pagsasagawa ng reaksyon ng pag-ulan ay: reaksyon ng pag-ulan ng singsing at reaksyon ng pag-ulan sa agar (gel).
Pansin! Ang lahat ng mga sangkap na kasangkot sa reaksyon ng pag-ulan ay dapat na ganap na transparent.
Reaksyon ng pag-ulan ng singsing. Gamit ang isang Pasteur pipette, magdagdag ng 0.2-0.3 ml (5-6 patak) ng serum sa precipitation tube (hindi dapat makuha ang serum sa mga dingding ng tubo). Ang antigen sa parehong dami ay maingat na inilalagay sa serum, na ibinubuhos ito ng manipis na Pasteur pipette sa dingding ng test tube. Ang test tube ay pinananatili sa isang hilig na posisyon. Kapag maayos na naka-layer, dapat mayroong malinaw na hangganan sa pagitan ng serum at ng antigen. Maingat, upang hindi paghaluin ang likido, ilagay ang test tube sa isang stand. Kung ang reaksyon ay positibo, ang isang maulap na "singsing" ay nabuo sa interface ng antigen at antibody - isang precipitate (tingnan ang Fig. 48).
Ang reaksyon ay sinamahan ng isang bilang ng mga kontrol (Talahanayan 18). Ang pagkakasunud-sunod ng pagdaragdag ng mga sangkap ng reaksyon sa test tube ay napakahalaga. Hindi mo maaaring i-layer ang serum sa antigen (sa kontrol - sa isang isotonic solution), dahil mas malaki ang relatibong density ng serum, lulubog ito sa ilalim ng test tube, at ang hangganan sa pagitan ng mga likido ay hindi mabubunyag.
Talahanayan 18. Scheme para sa pag-set up ng ring precipitation reaction
Tandaan. + pagkakaroon ng isang "singsing"; - kawalan ng "singsing".
Ang mga resulta ay naitala pagkatapos ng 5-30 minuto, sa ilang mga kaso pagkatapos ng isang oras, gaya ng nakasanayan na nagsisimula sa mga kontrol. Ang "singsing" sa 2nd test tube ay nagpapahiwatig ng kakayahan ng immune serum na pumasok tiyak na reaksyon na may kaukulang antigen. Dapat ay walang "singsing" sa 3-5 test tubes - walang mga antibodies at antigens na naaayon sa bawat isa. Ang isang "singsing" sa 1st tube - isang positibong resulta ng reaksyon - ay nagpapahiwatig na ang test antigen ay tumutugma sa kinuha na immune serum, ang kawalan ng isang "singsing" (isang "singsing" lamang sa 2nd tube) ay nagpapahiwatig ng kanilang hindi pagkakapare-pareho - isang negatibo resulta ng reaksyon.
Reaksyon ng pag-ulan sa agar (gel). Ang kakaiba ng reaksyon ay ang pakikipag-ugnayan ng antigen at antibody ay nangyayari sa isang siksik na daluyan, ibig sabihin, sa isang gel. Ang nagreresultang precipitate ay nagbibigay ng malabo na guhit sa kapal ng daluyan. Ang kawalan ng banda ay nagpapahiwatig ng pagkakaiba sa pagitan ng mga bahagi ng reaksyon. Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit sa biomedical na pananaliksik, lalo na sa pag-aaral ng pagbuo ng lason sa causative agent ng dipterya.
Kontrolin ang mga tanong
1. Ano ang pangunahing pagkakaiba sa pagitan ng agglutination at precipitation reactions?
2. Bakit hindi maaaring gamitin ang maulap na sangkap sa reaksyon ng pag-ulan?
Mag-ehersisyo
1. I-set up ang ring precipitation reaction at i-sketch ang resulta.
2. Pag-aralan ang likas na katangian ng pakikipag-ugnayan ng antigen sa antibody sa reaksyon ng precipitation sa agar, i-sketch ang resulta (kumuha ng isang tasa mula sa iyong guro).
Reaksyon ng Lysis (immune cytolysis)
Ang immune lysis ay ang paglusaw ng mga selula sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies kapag ipinag-uutos na paglahok pandagdag. Para sa reaksyon na kailangan mo:
1. Antigen - microbes, pulang selula ng dugo o iba pang mga selula.
2. Antibody (lysine) - immune serum, mas madalas na pasyente serum. Ang bacteriaolytic serum ay naglalaman ng mga antibodies na kasangkot sa lysis ng bakterya; hemolytic - mga hemolysin na nagtataguyod ng lysis ng mga pulang selula ng dugo; para sa lysis ng spirochetes, spirochetolysins ay kinakailangan, mga cell - itolysins, atbp.
3. Komplemento. Karamihan sa mga pandagdag sa serum mga guinea pig. Ang serum na ito (isang halo mula sa ilang mga hayop) ay kadalasang ginagamit bilang pandagdag. Ang sariwang (katutubong) complement ay hindi matatag at madaling masira sa pamamagitan ng pag-init, pag-alog, o pag-iimbak, kaya maaari itong magamit nang hindi hihigit sa dalawang araw pagkatapos matanggap. Upang mapanatili ang pandagdag, 2% ang idinagdag dito boric acid at 3% sodium sulfate. Ang pandagdag na ito ay maaaring maimbak sa 4°C nang hanggang dalawang linggo. Ang dry complement ay kadalasang ginagamit. Bago gamitin, ito ay natunaw sa isang isotonic na solusyon sa orihinal na dami (ipinahiwatig sa label).
4. Isotonic solution.
Reaksyon ng hemolysis(Talahanayan 19). Para sa reaksyon na kailangan mo:
1. Antigen - 3% na suspensyon ng mga hugasan na erythrocytes ng tupa sa rate na 0.3 ml ng erythrocyte sediment at 9.7 ml ng isotonic solution.
2. Antibody - hemolytic serum (hemolysin) laban sa mga erythrocytes ng tupa; karaniwang inihanda sa produksyon, lyophilized at ang titer na ipinahiwatig sa label.
Ang Hemolysin titer ay ang pinakamataas na dilution ng serum kung saan ang kumpletong hemolysis ng isang 3% na suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ay nangyayari sa pagkakaroon ng complement. Para sa reaksyon ng hemolysis, ang hemolysin ay kinuha sa triple titer, i.e. diluted 3 beses na mas mababa kaysa bago ang titer. Halimbawa, na may serum titer na 1:1200, ang serum ay natunaw ng 1:400 (0.1 ml ng serum * at 39.9 ml ng isotonic solution). Ang labis na hemolysin ay kinakailangan, dahil ang ilan sa mga ito ay maaaring ma-adsorbed ng iba pang mga bahagi ng reaksyon.
* (Hindi ka dapat kumuha ng mas mababa sa 0.1 ml ng suwero - ang katumpakan ng pagsukat ay magdurusa.)
3. Ang komplemento ay diluted 1:10 (0.2 ml ng complement at 1.8 ml ng isotonic solution).
4. Isotonic solution.
Talahanayan 19. Hemolysis reaction scheme
Accounting para sa mga resulta. Kung ang reaksyon ay natupad nang tama, ang hemolysis ay magaganap sa 1st test tube - ang mga nilalaman nito ay magiging transparent. Sa mga kontrol, ang likido ay nananatiling maulap: sa ika-2 tubo ay walang sapat na pandagdag para sa hemolysis, sa ika-3 tubo ay walang hemolysin, sa ika-4 na tubo ay walang hemolysin o pandagdag, sa ika-5 na tubo ang antigen ay gumagawa hindi tumutugma sa antibody,
Kung kinakailangan, ang hemolytic serum ay titrated ayon sa sumusunod na pamamaraan (Talahanayan 20).
Bago ang titration, maghanda ng paunang serum dilution na 1:100 (0.1 ml ng serum at 9.9 ml ng isotonic solution), kung saan mga kinakailangang pagbabanto, Halimbawa:
Mula sa mga dilution na ito, magdagdag ng 0.5 ml ng serum sa titration test tubes, tulad ng ipinapakita sa Table. 20.
Talahanayan 20. Titration scheme para sa hemolytic serum (hemolysin)
Sa halimbawang ibinigay sa talahanayan. 20, ang titer ng hemolytic serum ay 1:1200.
Kapag gumagamit ng sariwang hemolytic serum, dapat itong hindi aktibo upang sirain ang pandagdag na nasa loob nito. Upang gawin ito, pinainit ito ng 30 minuto sa 56 ° C sa isang paliguan ng tubig o sa isang inactivator na may termostat. Ang huling paraan ay mas mahusay: inaalis nito ang posibilidad ng sobrang pag-init ng whey, ibig sabihin, ang denaturation nito. Ang denatured sera ay hindi angkop para sa pagsubok.
Reaksyon ng Bacteriolysis. Sa reaksyong ito, umakma sa lyses bacteria sa pagkakaroon ng naaangkop (homologous) serum. Ang scheme ng reaksyon sa panimula ay katulad ng scheme ng reaksyon ng hemolysis. Ang pagkakaiba ay pagkatapos ng dalawang oras na pagpapapisa ng itlog, ang lahat ng mga test tube ay ibinhi sa mga Petri dish na may medium na paborable para sa microorganism na dinala sa eksperimento upang malaman kung ito ay lysed. Kung ang eksperimento ay natupad nang tama, ang mga kultura mula sa 2-5 test tubes (mga kontrol) ay dapat magpakita ng masaganang paglaki. Ang kakulangan ng paglaki o mahinang paglaki sa inoculation mula sa 1st test tube (eksperimento) ay nagpapahiwatig ng pagkamatay ng mga mikrobyo, ibig sabihin, na sila ay homologous sa antibody.
Pansin! Ang reaksyon ng bacteriolysis ay dapat isagawa sa ilalim ng mga kondisyong aseptiko.
Kontrolin ang mga tanong
1. Ano ang mangyayari sa mga pulang selula ng dugo kung distilled water ang gagamitin sa halip na isotonic sodium chloride solution? Ano ang batayan ng hindi pangkaraniwang bagay na ito?
2. Anong reaksyon ang magaganap kapag ang mga erythrocytes ay nakikipag-ugnayan sa homologous immune serum sa kawalan ng complement?
Mag-ehersisyo
I-set up ang reaksyon ng hemolysis. Itala at i-sketch ang resulta.
Kaugnay na impormasyon.
