Reaksyon ng aglutinasyon (mula sa lat. agglutinatio- gluing) - gluing ng corpuscles (bakterya, pulang selula ng dugo, atbp.) sa pamamagitan ng antibodies sa pagkakaroon ng electrolytes.
Reaksyon ng aglutinasyon nagpapakita ng sarili sa anyo ng mga natuklap o sediment na binubuo ng mga corpuscles (halimbawa, bakterya) na "nakadikit" ng mga antibodies (Larawan 7.37). Ang reaksyon ng agglutination ay ginagamit upang: matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente; pagpapasiya ng mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente; pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo.
kanin. 7.37 a, b. Agglutination reaksyon saIgM-antibodies (a) atIgG-antibodies (b)
1. Pagpapasiya ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente Tinatayang reaksyon agglutination sa salamin (Larawan 7.38). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa isang patak ng agglutinating serum (1:20 dilution). Isang flocculent precipitate forms.
kanin. 7.38.
Isang malawak na reaksyon ng agglutination na may pathogen na nakahiwalay sa isang pasyente (Fig. 7.39). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa mga dilution ng agglutinating serum.
kanin. 52
2. Pagpapasiya ng antibodies sa serum ng dugo ng pasyente
Detalyadong reaksyon ng agglutination sa serum ng dugo ng pasyente (Larawan 7.39). Ang Diagnosticum ay idinagdag sa mga dilution ng serum ng pasyente.
- Ang aglutinasyon sa O-diagnosticum (bacteria na pinatay ng init, nananatili ang O-antigen) ay nangyayari sa anyo ng pinong butil na agglutination.
- Ang aglutinasyon sa H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formaldehyde, pinapanatili ang flagellar H-antigen) ay malaki at nangyayari nang mas mabilis.
3. Agglutination reaction para sa pagtukoy ng mga grupo ng dugo Ang reaksyon ng agglutination upang matukoy ang mga pangkat ng dugo ay ginagamit upang maitatag ang sistema ng ABO (Talahanayan b) gamit ang pagsasama-sama ng mga erythrocytes na may immune serum antibodies laban sa mga antigen ng pangkat ng dugo na A (I), B (III). Ang kontrol ay: serum na hindi naglalaman ng mga antibodies, i.e. serum AB (IV) pangkat ng dugo; antigens na nakapaloob sa mga pulang selula ng dugo ng mga pangkat A (II), B (III). Ang negatibong kontrol ay hindi naglalaman ng mga antigen, ibig sabihin, ang pangkat O (I) erythrocytes ay ginagamit.
Talahanayan 7.6. Pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo ng ABO
| Resulta ng reaksyon |
Grupo |
|
|
pag-aari |
||
|
sinaliksik |
||
|
pulang selula ng dugo na may |
suwero (plasma) |
|
|
pamantayan |
na may pamantayan |
|
|
mga serum | ||
Detalyadong reaksyon ng agglutination (RA). Upang matukoy ang AT sa serum ng dugo ng pasyente, a malawak na agglutination reaction (RA). Upang gawin ito, ang isang diagnosticum ay idinagdag sa isang serye ng mga dilutions ng serum ng dugo - isang suspensyon ng mga pinatay na microorganism o mga particle na may sorbed Ag. Ang maximum na pagbibigay ng pagbabanto aglutinasyon Ag ay tinatawag na serum titer.
Mga uri ng reaksyon ng agglutination (RA) para matukoy ang AT - isang blood-drop test para sa tularemia (na may diagnosticum na inilapat sa isang patak ng dugo at ang hitsura ng mga nakikitang mapuputing agglutinate) at ang Huddleson test para sa brucellosis (na may diagnosticum na nabahiran ng gentian violet na inilapat sa isang patak ng dugo suwero).
Tinatayang agglutination reaction (RA)
Upang matukoy ang mga nakahiwalay na microorganism, isang tinatayang RA ang inilalagay sa mga glass slide. Upang gawin ito, ang isang pathogen culture ay idinagdag sa isang patak ng karaniwang diagnostic antiserum (diluted 1:10, 1:20). Sa positibong resulta magsagawa ng isang detalyadong reaksyon sa pagtaas ng mga dilution ng antiserum.
Reaksyon itinuturing na positibo kung ang agglutination ay sinusunod sa mga dilution na malapit sa titer ng diagnostic serum.
OAS. Somatic O-Ags ay heat stable at kayang kumulo sa loob ng 2 oras. Kapag nakikipag-ugnayan sa AT, bumubuo sila ng pinong butil na mga pinagsama-samang.
N-Ag. N-Ag (flagellates) ay thermolabile at mabilis na bumababa sa 100 °C, pati na rin sa ilalim ng impluwensya ng ethanol. Sa mga reaksyon sa H-antiserum, pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng itlog, ang mga maluwag na malalaking natuklap ay nabuo (nabuo ng bakterya na dumidikit sa flagella).
Vi-Ar Ang bakterya ng typhoid ay medyo hindi matatag sa init (nakatiis sa temperatura na 60-62 °C sa loob ng 2 oras); Kapag incubated na may Vi antiserum, isang fine-grained agglutinate ay nabuo.
Direktang reaksyon ng hematglutination
Ang pinakasimple sa mga ito mga reaksyon - aglutinasyon pulang selula ng dugo, o hemagglutination, na ginagamit upang matukoy ang mga pangkat ng dugo sa ABO system. Para sa pagtukoy aglutinasyon(o kakulangan nito) gumamit ng karaniwang antisera na may mga anti-A at anti-B na agglutinin. Ang reaksyon ay tinatawag na direkta, dahil ang Ags na pinag-aaralan ay mga natural na bahagi ng mga pulang selula ng dugo.
Karaniwan sa direktang hemagglutination Ang viral hemagglutination ay may mga mekanismo. Maraming mga virus ang may kakayahang kusang pagsama-samahin ang mga erythrocyte ng mga ibon at mammal; ang kanilang pagdaragdag sa isang suspensyon ng mga erythrocytes ay nagiging sanhi ng pagbuo ng mga pinagsama-samang mula sa kanila.
Reaksyon ng aglutinasyon Reaksyon ng aglutinasyon
(RA) - isang paraan ng pagkilala at quantification Ag at At, batay sa kanilang kakayahang bumuo ng mga agglomerates na nakikita ng mata. Sa departamento ng mga nakakahawang sakit. Ang mga sakit o para sa iba pang mga layunin ay ginagamit upang makilala ang mga hindi kilalang mikrobyo at mga selula, upang matukoy ang presensya at dami ng Ab sa dugo at iba pang mga likido. Ang prinsipyo ng pagpapasiya ay batay sa pagtitiyak ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng Ag at Ab at binubuo sa paghahanap ng kilala mula sa hindi alam. Mayroong maraming mga opsyon para sa RA: quantitative at qualitative, test tube at glass, volumetric at droplet, conventional, accelerated at express na mga pamamaraan. Upang i-stage RA kailangan mo: 1) s-ka dugo. Sa variant sa pagtukoy ng uri (var) ng bakterya, ginagamit ang mga pang-industriyang agglutinating na pagsubok, na ginawa ng mga kuneho na nagpapabakuna. Sa variant na may pagpapasiya ng uri ng Ab, isang sample ng dugo ang kinuha mula sa pagsubok. tao o hayop. Ang solusyon ay dapat na sterile at walang nasuspinde na mga particle. Ihanda ang pangunahing pagbabanto sa solusyon ng asin. Ito ay dapat na 2-4 beses na mas mababa kaysa sa diagnostic titer para sa sakit na ito; 2) Ag. Sa bersyon ng reaksyon na may pagpapasiya ng uri ng Ab, ginagamit ang mga pang-industriyang diagnostic kit; sa variant na may pagpapasiya ng Ag, ang mga diagnosticum ay inihanda sa kanilang sarili sa anyo ng isang 1-3 bilyong suspensyon sa isang solusyon sa asin ng 18-20-oras na agar (mas madalas na sabaw) na pagsubok. microbe inactivated sa pamamagitan ng pag-init sa isang paliguan ng tubig sa 70°C para sa 1 oras o sa pamamagitan ng 24-oras na incubation sa 37°C na may formaldehyde (panghuling konsentrasyon 0.2%); 3) electrolyte sa anyo ng saline solution. Teknik ng pagtatanghal volumetric serial tube RA upang matukoy ang Ab titer sa s-ki: ilang hanay ng mga gumaganang dilution ang inihanda mula sa pangunahing pagbabanto ng s-ki. Ang bilang ng mga hilera ay nakasalalay sa bilang ng mga diagnosticum na kinuha sa eksperimento; ang bilang at mga salik ng pagbabanto ay tinutukoy ng diagnostic titer ng pinaghihinalaang sakit. Ang serye ay dapat man lang maglaman ng dilution na tumutugma sa diagnostic Ab titer, dalawang dilution sa ibaba at dalawang dilution sa itaas nito. halimbawa, kung ang diagnostic titer ay 1:100, pagkatapos ay sa volumetric na paraan ng pagtatanghal ng RA ang mga sumusunod na dilution ay dapat ihanda: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; kasama ang drip paraan, ang unang pagbabanto (1:25) ay hindi kailangan, ngunit kailangan ng isa pang mas mataas na pagbabanto - 1:800. siyentipikong pananaliksik s-ku ay titrated sa negatibong reaksyon. Ito ay diluted tulad ng sumusunod: 0.25 ml ng saline solution ay ibinuhos sa lahat ng test tubes, maliban sa una, kapag ang reaksyon ay isinasagawa sa dami ng 0.5 ml, at 0.5 ml kapag ang reaksyon ay isinasagawa sa dami ng 1. ml. Ibuhos ang 0.25 (0.5) ml ng pangunahing dilution sa 1st at 2nd test tubes, mula sa 2nd test tube, papunta sa cut volume at pag-aanak s-k at tumaas ng 2 beses, 0.25 (0.5) ml ay inilipat sa ika-3, mula sa ika-3 hanggang ika-4, atbp. hanggang sa huli, mula sa hiwa 0.25 (0.5) ml ay ibinubuhos sa lahat upang balansehin ang mga volume. Ang bawat pagbabanto ay isinasagawa gamit ang isang hiwalay na pipette. Kung ang ilang mga diagnosticum ay kinuha sa eksperimento, kung gayon para sa bawat isa sa kanila ang sarili nitong serye ng mga dilution ay inihanda sa parehong paraan. Ang Diagnosticum ay idinagdag sa bawat pagbabanto ng test tube sa isang volume na katumbas ng volume ng test tube, bilang isang resulta kung saan ang dilution sa bawat test tube ay nadoble. Ang eksperimento ay tumutugma sa s-ki control (0.25 - 0.5 ml ng pangunahing dilution ng s-ki at ang parehong halaga ng saline solution) at ang Ag control (0.25 - 0.5 ml ng diagnosticum at ang parehong halaga ng saline solution). Kung maraming diagnosticum ang ginagamit sa eksperimento, ang bawat isa ay may sariling antigen control. Ang rack na may mga test tube ay inalog ng mabuti at inilagay sa isang thermostat sa 37°C sa loob ng 4 na oras, at pagkatapos ay iniiwan sa temperatura ng silid hanggang sa susunod na araw, pagkatapos nito ay naitala ang PA batay sa dami ng sediment at antas ng pag-alis ng ang likido. Ang pagpapasiya ng mga tagapagpahiwatig na ito, depende sa likas na katangian ng mga agglutinates, ay isinasagawa gamit ang hubad na mata sa isang madilim na background, sa isang agglutinoscope o sa ibabaw ng malukong ibabaw ng salamin ng mikroskopyo. Ang accounting ay nagsisimula sa mga kontrol: ang control C ay dapat na transparent, Ag ay dapat na pantay na maulap (pagkatapos ng pag-alog ng tubo). Kung ang mga kontrol ay mabuti, itatag ang presensya at antas ng agglutination sa lahat ng mga test tube, na itinalaga ng mga plus: malaking sediment at kumpletong pag-clear ng likido - 4 na plus; malaking sediment at hindi kumpletong paglilinis ng likido - 3 plus; kapansin-pansing sediment at kapansin-pansing pag-clear ng likido ay 2 plus. Pagkatapos nito, ang titer ay natutukoy: ang pinakamataas na pagbabanto na may agglutination intensity ng hindi bababa sa 2 plus. Pananaliksik sa pamagat Ang s-ki ay inihambing sa diagnostic titer para sa sakit na ito. Kung susuriin ang titer. s-ki ay 2 beses na mas mababa kaysa sa diagnostic na halaga, ang reaksyon ay tinasa bilang nagdududa; kung pantay ang titer diagnostic - paano mahinang positibo; kung ito ay 2-4 na beses na mas mataas, ito ay itinuturing na positibo; kung ito ay 8 o higit pang beses na mas mataas, ito ay itinuturing na positibo. Sa malawakang pamamahagi ng Ab malusog na tao Upang masuri ang RA, ginagamit ang pagtaas ng Ab titer. Upang matukoy ang uri ng Ar sa serial RA, ang bilang ng mga hilera ay dapat tumugma sa bilang na kinuha para sa pagkakakilanlan mga pagsusuri sa diagnostic. Mula sa pangunahing dilution ng diagnostic test, isang serye ng sunud-sunod na dalawang-tiklop na dilution ay inihanda sa parehong paraan tulad ng sa RA upang matukoy ang Ab titer. Ang mga kadahilanan ng dilution ay nakasalalay sa titer ng agglutinating test. Sa eksperimento, ang pagkakaroon ng dilution na katumbas ng titer ng pagsubok ay kinakailangan, pati na rin ang 2, 4, 6, 8 beses na mas mababa kaysa dito. Halimbawa, kung ang titer ng diagnostic test ay 1 3200, pagkatapos ay dapat mong gamitin ang mga dilution 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 Ang parehong dami ng nasubok na Ag ay idinagdag sa mga dilution ng pagsubok, bilang isang resulta, ang pagbabanto ng ang pagsubok ay tumaas ng 2 beses. 2 kontrol ng pagsubok at Ag ay idinagdag sa eksperimento. Kung sa eksperimento maraming s-k ang kasangkot, kung gayon ang bawat isa sa kanila ay nangangailangan ng sarili nitong kontrol. Sa pagkumpleto ng reaksyon, ang stand ay inalog ng malakas at inilagay sa isang termostat sa 37 ° C. Ang mga resulta ay isinasaalang-alang tulad ng inilarawan sa itaas. Ang pagsusuri ng reaksyon ay may mga tampok. Upang makagawa ng konklusyon tungkol sa pagsunod sa pag-aaral. Ag kinuha sa eksperimento, ang titer ng reaksyon ay dapat na tumutugma sa hindi bababa sa kalahati ng titer ng karaniwang diagnostic test. Ang mga titer ng 1 4 at mas mababa ay itinuturing bilang reaksyon ng grupo Tumulo ang md Ang staging ng RA ay naiiba sa volumetric dahil ang s-ku ay natunaw sa dami ng 1 ml, Ag ay ginagamit sa isang mas mataas na konsentrasyon (10 bilyon/ml) at ito ay idinagdag 1 - 2 bumaba sa isang test tube Ang dilution ng gamot pagkatapos idagdag ang Ag ay itinuturing na hindi nagbabago. Kung hindi, ang paraan ng pagtatakda, pagtatala at pagsusuri ay katulad ng volumetric na paraan
(Pinagmulan: Dictionary of Microbiology Terms)
IMMUNOMICROBIOLOGICAL STUDIES
Ang mga immunological na pamamaraan ay ginagamit upang malutas ang maraming mga problema:
1. Pagtatasa ng kondisyon immune system tao ( katayuan ng immune) sa pamamagitan ng kahulugan ng quantitative at functional na mga katangian mga selula ng immune system at ang kanilang mga produkto.
2. Pagpapasiya ng komposisyon at katangian ng mga tisyu ng tao: mga pangkat ng dugo, Rh factor, mga antigen ng paglipat.
3. Diagnosis ng mga nakakahawang sakit at paglaban sa mga ito sa pamamagitan ng pagtukoy at pagtatatag ng mga titer ng antibody (serodiagnosis), pagtukoy ng mga pathogen antigen sa katawan, at pagtukoy ng mga cellular reaction sa mga antigen na ito.
4. Pagkilala sa seroid ng mga kultura ng bakterya at mga virus na nakahiwalay sa katawan ng mga tao at hayop.
5. Detection sa katawan ng tao at sa loob panlabas na kapaligiran anumang mga sangkap na may mga katangian ng antigenic o hapten (mga hormone, enzyme, lason, gamot, gamot, atbp.).
6. Pagkilala sa mga kondisyon ng immunopathological, allergy, paglipat at mga reaksyon ng antitumor.
Ang proseso ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng antigen at antibody serological reaksyon nangyayari sa dalawang yugto:
1) tiyak- ang yugto ng pakikipag-ugnayan kung saan nangyayari ang isang komplementaryong kumbinasyon ng mga aktibong sentro ng antibodies (paratopes) at antigen epitopes. Karaniwan ang bahaging ito ay tumatagal ng ilang segundo o minuto;
2) hindi tiyak- yugto ng paghahayag, nailalarawan panlabas na mga palatandaan pagbuo ng mga immune complex. Ang yugtong ito ay maaaring umunlad mula sa ilang minuto hanggang ilang oras.
Ang pinakamainam na partikular na pakikipag-ugnayan ng mga antibodies sa antigen ay nangyayari sa isang isotonic solution na may pH na malapit sa neutral. Ang reaksyon ng antigen-antibody sa isang in vitro system ay maaaring sinamahan ng paglitaw ng ilang mga phenomena
· aglutinasyon,
· pag-ulan,
· lysis.
Panlabas na pagpapakita ang mga reaksyon ay nakasalalay sa mga katangian ng physicochemical ng antigen (laki ng butil, pisikal na estado), klase at uri ng antibodies (kumpleto at hindi kumpleto), pati na rin ang mga pang-eksperimentong kondisyon (katamtamang pagkakapare-pareho, konsentrasyon ng asin, pH, temperatura).
Tinitiyak ng polyvalency ng antigens at antibodies ang pagbuo ng mga pinagsama-samang nakikita ng mata. Nangyayari ito alinsunod sa teorya ng pagbuo ng network, ayon sa kung saan ang iba pang mga molekula ng antibody at antigen ay sunud-sunod na nakakabit sa nagreresultang antigen-antibody complex. Bilang resulta, nabuo ang mga istruktura ng network, na nagiging mga pinagsama-samang namuo. Ang kalikasan at kalubhaan ng reaksyon ay nakasalalay sa dami ng ratio ng mga antigen at antibodies. Ang pinakamatinding reaksyon ay nangyayari kapag ang mga reagents ay nasa katumbas na sukat.
Prerequisite pagbuo ng sala-sala (mga network) - ang pagkakaroon ng higit sa tatlong antigenic determinants para sa bawat molekula ng antigen at dalawang aktibong sentro para sa bawat molekula ng antibody. Ang mga molekula ng antigen ay mga lattice node, at ang mga molekula ng antibody ay mga link na nagkokonekta. Ang rehiyon ng pinakamainam na ratios (equivalence zone) ng antigen at antibody concentrations, kapag walang mga libreng antigen o libreng antibodies ang nakita sa supernatant pagkatapos ng pagbuo ng sediment.
Nabubuo ang mga aggregate na maaaring mag-precipitate kapag ang mga antigen ay pinagsama sa buong antibodies. Hindi kumpletong antibodies(monovalent) ay hindi nagiging sanhi ng pagbuo ng mga istruktura ng network at malalaking pinagsama-sama. Upang makita ang gayong mga antibodies, gamitin mga espesyal na pamamaraan batay sa paggamit ng mga antiglobulin (reaksyon ng Coombs).
Ang mga serological na reaksyon, dahil sa kanilang mataas na pagtitiyak at pagiging sensitibo, ay ginagamit para sa pagtuklas at pag-quantification ng mga antigen at antibodies. Ang dami ng immunoreagents sa mga reaksyon ay ipinahayag ng titer - ang pinakamataas na pagbabanto ng serum o antigen kung saan ang isang reaksyon ay sinusunod pa rin.
Ang mga serological na reaksyon sa microbiological at immunological laboratories ay ginagamit para sa dalawang layunin:
1) para sa seroidentification ng mga microorganism, toxins, antigens sa pangkalahatan gamit ang isang kilalang antibody (immune diagnostic serum),
2) para sa serodiagnosis - pagtukoy sa likas na katangian ng antibody sa serum ng dugo ng pasyente para sa bacterial, viral, at mas madalas na iba pang mga nakakahawang sakit gamit ang isang kilalang antigen (diagnosticum).
Upang matukoy ang generic, species at uri ng antigen, kinakailangan ang mga kilalang immune test. diagnostic sera. Nakukuha ang mga ito sa pamamagitan ng paulit-ulit na pangangasiwa sa mga hayop (karaniwan ay mga kuneho) sa pagtaas ng dosis ng mga napatay o nabubuhay na mikroorganismo, ang kanilang mga produkto ng pagkabulok, neutralisado o katutubong mga lason. Pagkatapos ng isang tiyak na siklo ng pagbabakuna ng mga hayop, isinasagawa ang malawakang pagdurugo o kabuuang pagdurugo ng hayop. Ang dugo na nakolekta sa isang sterile na lalagyan ay unang inilagay sa isang thermostat sa temperatura na 37°C sa loob ng 4 - 6 na oras upang mapabilis ang pamumuo, pagkatapos ay sa isang icebox sa loob ng isang araw. Ang nagresultang transparent na serum ay sinipsip sa isang sterile na lalagyan, idinagdag ang mga preservative, tinutukoy ang titer ng antibody, sinuri para sa sterility at ibinuhos sa mga ampoules.
Ay ginamit hindi na-adsorbed At na-adsorbed diagnostic sera. Ang mga hindi sinadyang serum ay mayroon mataas na titers antibodies, ngunit may kakayahang magbigay ng mga reaksyon ng grupo (cross).
Ang adsorbed sera ay nailalarawan sa pamamagitan ng mahigpit na pagtitiyak ng pagkilos (sila ay tumutugon lamang sa isang homologous antigen). Sera na naglalaman ng mga antibodies sa isang partikular na antigen lamang ang tinatawag monoreceptor.
Gumagawa din sila ng mga serum na may label na fluorochromes, enzymes, at radioisotopes, na ginagawang posible na makita ang kahit na mga bakas ng antigen na may mataas na antas ng katumpakan.
Ang mga pagsususpinde ng mga nabubuhay o napatay na bakterya, ang kanilang mga produkto ng pagkasira, lason, at mga virus ay ginagamit bilang mga antigen (diagnosticum) sa mga serological na reaksyon. Sa ilang mga kaso, ginagamit ang mga extract o mga antigen na nakahiwalay sa kemikal mula sa mga microorganism at tissue ng hayop.
Ang lahat ng immunomicrobiological na pamamaraan ay maaaring nahahati sa 3 grupo:
1) batay sa direktang pakikipag-ugnayan ng antigen sa antibody(phenomena ng agglutination, precipitation, hemagglutination, immobilization, atbp.);
2) batay sa mediated interaction ng antigen sa antibody(mga reaksyon hindi direktang hematglutination, coagglutination, latex agglutination, carbon agglomeration, bentonite agglutination, complement fixation, atbp.);
3) gamit may label na antibodies o antigens(fluorescent antibody method, enzyme-linked immunosorbent at radioimmunoassays at iba pang mga pamamaraan).
MGA REAKSIYON NG AGLUTINASYON
Ang mga reaksyong ito ay nagsasangkot ng mga antigen sa anyo ng mga particle (microbial cells, red blood cell at iba pang corpuscular antigens), na pinagdikit ng mga antibodies at namuo.
Upang magsagawa ng reaksyon ng agglutination(RA) tatlong sangkap ang kailangan: 1) antigen (agglutinogen);
2) antibody (aglutinin)
3) electrolyte (isotonic sodium chloride solution).
Tinatayang agglutination reaction (RA)
Ang isang indicative, o plato, RA ay inilalagay sa isang glass slide sa temperatura ng silid. Upang gawin ito, gumamit ng Pasteur pipette para maglagay ng isang patak ng serum sa isang dilution na 1:10 hanggang 1:20 at isang control drop ng isotonic sodium chloride solution nang hiwalay sa baso. Ang mga kolonya o isang pang-araw-araw na kultura ng bakterya (isang patak ng diagnosticum) ay ipinakilala sa parehong mga bacteriological loop at pinaghalo nang lubusan. Isinasaalang-alang ang mga reaksyon pagkatapos ng ilang minuto, minsan ay gumagamit ng magnifying glass (x5). Sa positibong RA, ang hitsura ng malaki at maliit na mga natuklap sa serum drop ay nabanggit; na may negatibong RA, ang serum ay nananatiling pantay na maulap.
Detalyadong reaksyon ng agglutination upang matukoy ang titer ng mga tiyak na antibodies sa isang pasyente.
Ang full-blown RA para sa serodiagnosis ay ginawa sa serum ng mga pasyente. Diluted din ito sa isang isotonic sodium chloride solution mula 1:50 - 1:100 hanggang 1:800 o 1:1600. Dahil ang mas mababang serum titer ay maaaring maglaman ng mga normal na agglutinin na matatagpuan sa mga malulusog na tao o mga pasyente na may ibang diagnosis (diagnostic titer). Bilang isang antigen sa reaksyong ito, ginagamit ang mga diagnosticum - mga kilalang suspensyon, kadalasan ng mga napatay na bakterya.
Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay unang ibinuhos sa mga agglutination tubes. Ang 1 ml ng serum na diluted 1:100 ay idinagdag sa una sa kanila, at pagkatapos ng paghahalo nito, 1 ml ay inilipat sa pangalawa, mula sa pangalawa hanggang sa pangatlo, atbp. 1-2 patak ng bacterial suspension na naglalaman ng 3 bilyong microbial body sa 1 ml ay idinagdag sa nagreresultang dalawang beses na dilution ng sera (mula 1:100 hanggang 1:1600 o higit pa). Ang mga tubo ay inalog at inilagay sa isang termostat sa 37°C sa loob ng 2 oras, pagkatapos ay pinananatili sa temperatura ng silid sa loob ng 24 na oras.
Ang detalyadong reaksyon ng agglutination ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng pagsusuri sa bawat test tube nang sunud-sunod, simula sa mga control, na may banayad na pag-alog. Dapat ay walang agglutination sa control tubes. Ang intensity ng reaksyon ng agglutination ay minarkahan ng mga sumusunod na palatandaan: ++++ - kumpletong agglutination (agglutinate flakes sa isang ganap na transparent na likido); +++ - hindi kumpletong agglutination (mga natuklap sa isang bahagyang opalescent na likido); ++ - bahagyang agglutination (ang mga natuklap ay malinaw na nakikita, ang likido ay bahagyang maulap); + - mahina, kaduda-dudang agglutination - ang likido ay masyadong maulap, ang mga natuklap sa loob nito ay mahirap makilala; - - kawalan ng agglutination (ang likido ay pantay na maulap).
Ang titer ng serum ay itinuturing na huling pagbabanto nito, kung saan ang intensity ng agglutination ay tinasa bilang hindi bababa sa dalawang plus (++)
Lektura Blg. 16
Diksyunaryo
DIREKTA – sunod sunod na walang anuman, nang walang kasunod na mga link.
DI DIREKTA– sa pamamagitan ng ibang mga cell, hindi direkta.
BUMABA ≠ PAGTAAS (cell activity).
TANGGIHAN - hindi tanggapin, tanggihan. Tinatanggihan ng katawan ang inilipat na organ.
Mga reaksyon ng immune.
Ang mga reaksyon ng immune ay mga reaksyon ng partikular na pakikipag-ugnayan (pagbubuklod) ng isang antigen at isang antibody o isang antigen at isang sensitized na T-lymphocyte.
Ang mga reaksyong ito ay nangyayari sa vitro (sa isang test tube) at sa vivo (sa isang buhay na organismo).
Ang mga reaksyong ito ay kinabibilangan ng serum (serum), kaya naman tinawag ang mga ito serological.
Sanay na ang mga immune response diagnosis ng mga nakakahawang sakit. Sa kasong ito, ang hindi kilalang bahagi ay tinutukoy ng kilalang sangkap, na batay sa pagtitiyak ng pakikipag-ugnayan ng antigen sa antibody. Kung kilalang antibody, pagkatapos ay maaari mong kilalanin (tuklasin) ang isang hindi kilalang antigen. Kung kilalang antigen, pagkatapos ay magagamit mo ito tuklasin ang hindi kilalang antibodies.
Kaya, ginagamit ang mga tugon sa immune:
1) para sa serological diagnostics(serodiagnosis) ng mga sakit - pagtuklas sa serum ng dugo ng mga taong may sakit ng mga antibodies sa isang tiyak na ahente ng sanhi ng isang nakakahawang sakit (kilalang antigen); kung ang mga antibodies sa anumang pathogen ay naroroon sa serum ng dugo ng isang taong may sakit, kung gayon ang pathogen na ito ang sanhi nito impeksyon;
2) para sa serological identification (seroidentification) ng microbes - upang matukoy ang uri ng pathogen gamit ang immune diagnostic sera (kilalang antibodies); kung ang mga antibodies ay nagbubuklod sa isang pathogen na nakahiwalay sa isang taong may sakit, kung gayon ang mikrobyo na ito ay kapareho ng isa kung saan ang hayop ay nabakunahan. tumatanggap immune diagnostic serum .
Ang mga reaksyon ng immune ay nangyayari sa 2 yugto:
1) tiyak na yugto- koneksyon ng aktibong sentro ng antibody sa determinant group ng antigen na may pagbuo ng mga antigen-antibody complex; mabilis na nagpapatuloy ang yugtong ito, ngunit walang nakikitang epekto;
2) hindi tiyak na yugto– hitsura nakikitang epekto pakikipag-ugnayan ng antigen at antibody - pagkawala burador(agglutination) o maulap(pag-ulan), na nagpapahintulot tingnan mo edukasyon mga kumplikadong antigen-antibody at gumawa ng konklusyon tungkol sa pagsunod antigen at antibody sa bawat isa.
Kasama sa mga immune reaction agglutination reaction (RA), precipitation reaction (RP), complement fixation reaction (CFR).
Reaksyon ng aglutinasyon- ito ay ang gluing at precipitation ng microbial o iba pang mga cell (erythrocytes) sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies sa pagkakaroon ng isang electrolyte. Ang nakikitang epekto ng reaksyon (agglutination phenomenon) ay ang pagbuo ng isang precipitate na tinatawag agglutinate.
Ang reaksyong ito ay ginagamit para sa serodiagnosis At seroidentification. Ginagamit ang RA para sa serodiagnosis (pagtuklas ng mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente) typhoid fever at paratyphoid(Reaksyon ni Vidal), brucellosis(Reaksyon ni Wright) tularemia at leptospirosis. Ginagamit ang RA para sa seroidentification (pagtukoy sa uri ng pathogen na nakahiwalay sa isang pasyente) kung kailan mga impeksyon sa bituka, whooping cough, kolera at iba pa.
Mga bahagimga reaksyon:
1. A ntigen (agglutinogen) – ang mga ito ay buo (hindi nawasak) microbial o iba pang mga cell ( corpuscular, hindi matutunaw na antigen). Mga aglutinogen- ito ay isang suspensyon buhay o pinatay microbial cells o anumang iba pang mga cell. Ang mga antigen ay maaaring hindi kilala o kilala. Ang hindi kilalang agglutinogen ay isang microbial culture na nakahiwalay sa katawan ng pasyente na kailangang matukoy. Kilalang antigen - diagnosticum- diagnostic na gamot - pagsususpinde sa mga patay mikrobyo kilalang species sa solusyon ng asin. Itong suspension maulap (malabo), dahil Ang mga microbial cell ay hindi natutunaw, ngunit nananatiling buo. Ang isang kilalang agglutinogen ay gagamitin upang makita ang hindi kilalang mga antibodies sa serum ng dugo ng mga pasyente.
2. Antibody (aglutinin)- matatagpuan sa serum ng dugo. Ang mga antibodies ay maaari ding hindi kilala o kilala. Ang mga hindi kilalang antibodies na matutukoy ay nasa serum ng dugo maysakit na tao. Ang mga kilalang antibodies ay matatagpuan sa immune diagnostic sera na tinatawag na agglutinating sera. Ginagamit ang mga ito para sa sero-identification, i.e. upang matukoy ang hindi kilalang antigen - isang uri ng microbial culture.
3. Electrolyte– 0.9% solusyon ng sodium chloride.
Pagkuha ng diagnostic test.
Ang isang purong kultura ng isang pathogen ng isang kilalang species na lumago sa slanted agar (halimbawa, ang causative agent ng typhoid fever) ay hugasan ng 3-4 ml ng isotonic solution, inilagay sa isang sterile tube, ang mga microbes ay pinapatay sa ilang paraan (halimbawa, sa pamamagitan ng pagkulo at tinutukoy ang density (dapat mayroong 3 bilyong microbial cell sa 1 ml). Kung ang mga microbial cell ay napatay mataas na temperatura, pagkatapos ay makakakuha sila ng O-diagnosticum (O-antigen), ngunit kung ito ay ginagamot ng formaldehyde, pagkatapos ay makakakuha sila ng H-diagnosticum (H-antigen).
Mga halimbawa ng diagnostic: salmonella diagnosticum, brucellosis diagnosticum, tularemia diagnosticum.
Paghahanda ng agglutinating sera.
Ang mga hayop (karaniwan ay mga kuneho) ay tinuturok nang parenteral ng microbial diagnosticum sa pagtaas ng dosis ng 5-7 beses sa pagitan ( magsagawa ng hyperimmunization), at pagkatapos ay kinuha ang kanilang serum ng dugo, na naglalaman ng mga antibodies sa mga mikrobyo kung saan inihanda ang diagnosticum. Kung ang pagbabakuna ay isinasagawa gamit ang O-diagnosticum, ang O-agglutinating sera (naglalaman ng O-antibodies) ay nakuha, kung may H-diagnosticum, ang H-agglutinating sera ay nakuha.
Agglutinating sera ay maaaring hindi sinisipsip o katutubong at na-adsorbed.
Mga hindi na-adsorbed na serum naglalaman ng mga pangkat na antibodies sa ilang malapit na nauugnay na species ng microbes.
Mga adsorbed na serum naglalaman ng mga antibodies sa isa o higit pang mga antigen ng isang uri ng mikrobyo. Kung ang sera ay naglalaman ng mga antibodies sa isang antigen lamang, ang mga ito ay tinatawag monoreceptor o monovalent, kung sa ilang antigens - pangkat adsorbed serums .
Mga halimbawa ng agglutinating sera:Salmonella monoreceptor H-agglutinating serum, Salmonella group adsorbed O-agglutinating serum, anticholera O-agglutinating serum, atbp..
Titer agglutinating serum - ang pinakamataas na dilution ng serum kung saan ang isang agglutination reaction na may antigen ay nakita pa rin (ang titer ay depende sa dami ng antibodies sa dugo: mas maraming antibodies, mas mataas ang serum titer).
Mga pamamaraan para sa pagtatanghal ng RA.
1. Tinatayang (lamellar) RA– isinasagawa sa salamin. Maglagay ng 2 patak ng serum at 1 patak ng isotonic solution sa isang glass slide. Ang isang microbial culture ay ipinakilala sa isa sa mga patak ng serum at sa isang patak ng isotonic solution sa isang loop at halo-halong. Isang patak ng isotonic solution may mikrobyo – kontrol ng antigen, isang patak mga serum na walang mikrobyo – kontrol ng antibody, isang patak mga serum na may mikrobyo – karanasan. Kung ang serum ay naglalaman ng mga antibodies na tumutugma sa mga microbial antigens na humahalo dito, ang mga antibodies at antigens ay partikular na magbubuklod sa isa't isa at pagkatapos ng 1-3 minuto ay lilitaw ang mga agglutinate flakes sa test drop. Ang antigen control ay dapat na maulap at ang antibody control ay dapat na malinaw. Ang mga resulta ng reaksyon ay naitala batay sa hitsura ng agglutinate flakes . Kung ang mga natuklap ay nahuhulog, ang reaksyon ay positibo, i.e. Ang isang antigen ay tumutugma sa isang antibody at ang antigen ay maaaring gamitin upang matukoy ang antibody o vice versa. Kung mananatili ang ulap, negatibo ang reaksyon.
2. Detalyadong reaksyon ng agglutination - isinasagawa sa mga test tube. Una, maghanda ng 2-tiklop na pagbabanto ng serum ng dugo ng isang taong may sakit mula 1:50 hanggang 1:1600. Ang 1 ml ng isotonic sodium chloride solution ay ibinuhos sa 6 na tubo. 1 ml ng serum ng dugo ng pasyente sa isang pagbabanto ng 1:50 ay idinagdag sa unang test tube, halo-halong at isang pagbabanto ng 1:100 ay nakuha, pagkatapos ay 1 ml ng isang pagbabanto ng 1:100 ay inilipat sa pangalawang test tube at ang pagbabanto ng 1:200 ay nakuha, atbp. Dalawang tubo ang itinatago para sa antigen at serum control. Sa serum control idagdag lamang ang serum sa isang dilution na 1:50, sa antigen control - ang antigen lamang. Magdagdag ng 0.1 ml ng antigen - diagnosticum (O- o H-) sa lahat ng iba pang test tube at ilagay ang lahat ng test tube sa thermostat sa 37°C sa loob ng 18-20 oras. Ang mga resulta ng reaksyon ay naitala ayon sa likas na katangian, dami ng namuo (agglutinate) na nabuo at ang antas ng labo. Ang accounting ay isinasagawa lamang sa mga sumusunod na resulta sa mga kontrol: serum control - transparent, antigen control - maulap. Ang mga O-antibodies ay nagbibigay ng pinong butil na precipitate. H-antibodies - magaspang na butil. Batay sa huling test tube kung saan nakikita pa rin ang agglutination reaction, ito ay itinatag diagnostic titer.
Sa panahon ng serodiagnosis sakit, ito ay mahalaga hindi lamang upang makita ang mga tiyak na antibodies sa isang partikular na pathogen, ngunit din upang makilala ang kanilang dami, i.e. magtatag ng naturang titer ng antibody sa Kailan natin mapag-uusapan ang pagkakaroon ng isang sakit na dulot ng pathogen na ito? . Ang titer na ito ay tinatawag na diagnostic titer. Halimbawa, upang masuri ang typhoid fever, kailangan mong tukuyin ang titer ng antibody na 1:400, ngunit hindi bababa. Nagbibigay ng mas tumpak na mga resulta pagtuklas ng pagtaas ng mga antibodies sa ipinares na sera. Ang serum ng pasyente ay kinokolekta sa simula ng sakit at pagkatapos ng 3 hanggang 5 o higit pang mga araw. Kung ang titer ng antibody ay tumaas ng hindi bababa sa 4 na beses, samakatuwid, maaari nating pag-usapan kasalukuyang sakit.
Kung ang isang detalyadong reaksyon ng agglutination ay ginanap para sa seroidentification, pagkatapos ay ginagamit ang agglutinating diagnostic sera, diluted sa titer o sa kalahati ng kanilang titer. Ang RA ay itinuturing na positibo kung ang agglutination ay nakita sa isang pagbabanto na malapit sa titer ng diagnostic serum.
