Uy Pulpit Diagnostik aglutinatsiya reaktsiyasi. Agglyutinatsiya reaktsiyasi

Pulpit

Diagnostik aglutinatsiya reaktsiyasi. Agglyutinatsiya reaktsiyasi

Agglyutinatsiya reaktsiyasi antikorlarning (aglyutininlarning) butun mikrob yoki boshqa hujayralar bilan o'ziga xos o'zaro ta'siriga asoslanadi. Ushbu o'zaro ta'sir natijasida cho'kma (aglyutinatsiya) qiluvchi aglomerat zarralari hosil bo'ladi. Agglyutinatsiya reaksiyasida bakteriyalar, oddiyginalar, qo'ziqorinlar, xamirturushlar, rikketsiyalar, eritrotsitlar va boshqa tirik va o'lik hujayralar ishtirok etishi mumkin. Reaktsiya ikki bosqichda sodir bo'ladi: birinchisi - antigen va antikorning o'ziga xos birikmasi, ikkinchisi - o'ziga xos bo'lmagan, ya'ni ko'rinadigan aglutinat hosil bo'lishi. Agglyutinatning cho'kishi natriy xlorid kabi elektrolitlar ishtirokida sodir bo'ladi. Agglyutinatdagi mikroorganizmlar tirik qoladi, lekin harakatchanligini yo'qotadi.

Agglyutinatsiya reaksiyasi yuqumli kasalliklarning serologik diagnostikasi va ajratilgan mikroblarning antigen tuzilishini aniqlash uchun keng qo'llaniladi. Bemor yoki tashuvchining tanasidan ajratilgan patogenning antigenik tuzilishini aniqlash uchun hayvonlarni (quyon, eshak, qo'y) ma'lum mikroorganizmlar bilan immunizatsiya qilish orqali olingan o'ziga xos immun zardobidan foydalaniladi. Mikrobni identifikatsiyalash adsorblangan yoki monoretseptor zardoblari bo'lgan shishada yoki o'ziga xos agglyutinatsiya qiluvchi zardoblari bo'lgan probirkalarda aglyutinatsiya reaksiyasida amalga oshiriladi. Adsorbsiyalangan qon zardobida faqat ma'lum mikrobga xos antigenlarga, monoretseptor zardobida esa patogenning faqat bitta o'ziga xos antijeniga antitelalar mavjud.

Turlarning sarumlarida ma'lum bir mikrobning barcha antijenlariga antikorlar mavjud.

Izolyatsiya qilingan mikroorganizm madaniyati tegishli yoki yo'qligini bu tur sarum ampulasining yorlig'ida ko'rsatilgan antikor titriga ma'lum sarum bilan aglyutinatsiya yo'li bilan aniqlanadi. Sarumning antikor titri uning oxirgi suyultirilishi hisoblanadi, bunda hayvonni immunizatsiya qilish uchun ishlatiladigan mikroblar madaniyatining aglyutinatsiyasi hali ham kuzatiladi. Adsorbsiyalangan va monoretseptor sarumlari odatda shisha aglutinatsiya reaksiyasida suyultirilmagan holda ishlatiladi.

Bemorning qon zardobida antikorlar mavjudligini aniqlashda u natriy xloridning izotonik eritmasi bilan 1: 50 dan 1: 800 yoki undan ko'proq suyultirishdan boshlab suyultiriladi. Har bir suyultirishga tirik yoki o'ldirilgan mikroblarning suspenziyasi qo'shiladi. Issiqlik yoki formaldegid ta'sirida nobud bo'lgan mikroblarni o'z ichiga olgan preparatlar diagnostik deb ataladi. Mikroorganizm madaniyatini isitish orqali olingan diagnostika faqat somatik antijenlarni o'z ichiga oladi. Faqat formaldegiddan foydalanganda mikroblar o'zlarining flagellar antijenlarini saqlab qoladilar.

Bemorning qonida antikorlar mavjud bo'lganda, reaktsiyada olingan diagnostik test bir-biriga yopishadi va ikkita probirkada cho'kma (aglutinat) hosil bo'ladi. Bunday holda, aglutinatsiya reaktsiyasining natijalari ijobiy deb hisoblanadi. Natriy xloridning izotonik eritmasi va diagnostik qo'shilgan nazorat naychasida mikroblarning suspenziyasi bir hil bo'lishi kerak (salbiy aglutinatsiya reaktsiyasi).

Ba'zi kasalliklarda, masalan, leptospirozda aglutinatsiya reaktsiyasi natijalari faqat mikroskopning qorong'i ko'rish maydonida (mikroaglyutinatsiya) mikroskopik tarzda hisobga olinadi. Kasallikning serologik tashxisini qo'yish uchun hisobga oling diagnostik kasallik. Odatda sarumning 1:100 yoki 1:200 suyultirilishiga to'g'ri keladi.

Bemorning qon zardobidagi antikorlarni aglutinatsiya reaktsiyasi yordamida tif isitmasi va paratif isitmasi (Vidal reaktsiyasi), brutselloz (Rayt reaktsiyasi), tulyaremiya va boshqalarda aniqlash mumkin.
Kastellanining reaktsiyasi. Ba'zilar uchun yuqumli kasalliklar yoki guruh antijenlarini o'z ichiga olgan mikroorganizmlar bilan immunizatsiya, qon zardobida, ma'lum bir turga xos antikorlardan tashqari, guruh antikorlari ham paydo bo'ladi. Bunday holda, tegishli bakteriya turlari hosil bo'lgan sarum tomonidan aglyutinatsiyalanadi.

Kastellani immun zardoblardan guruh antikorlarini adsorbsiyalash usulini taklif qildi, bu esa ularni guruh antijenlariga ega bo'lgan, lekin o'ziga xos bo'lmagan turlarning mikroorganizmlari yordamida olib tashlashga asoslangan. Qon zardobiga qo'shilgan bunday mikroorganizmlarning kulturasi o'ziga xos bo'lmagan guruh antikorlarini adsorbsiyalaydi va antigen-antikor kompleksini sentrifugalash yo'li bilan olib tashlangandan so'ng qon zardobida faqat o'ziga xos immunoglobulinlar qoladi. Kastellani usuli bo'yicha qayta ishlangan sarumlar aglutinatsiya reaktsiyasida yuqori o'ziga xoslik sifatida ishlatilishi mumkin.

Agglyutinatsiya - bakteriyalarning o'ziga xos AT larning ular bilan o'zaro ta'siri natijasida yopishtirilishi. RA ni amalga oshirish uchun uchta komponent talab qilinadi: 1) AG (aglutinogen); 2) AT (aglutinin); 3) elektrolit eritmasi (natriy xloridning izotonik eritmasi). Agglyutinatsiya reaksiyasida faqat korpuskulyar antijenler (bakteriyalar, qizil qon tanachalari, antigen yuklangan lateks zarralari) ishtirok etadi.

Shisha ustidagi aglutinatsiya reaktsiyasi. Pipetka yordamida moysiz shisha slaydga bir tomchi tomizing. diagnostik sarum(zardobni suyultirish 1:10 - 1:20). Bakteriologik halqa yordamida qiya agar sirtidan o'rganilayotgan mikroorganizmning sof kulturasi olinadi, bir tomchi zardobga o'tkaziladi va aralashtiriladi. Reaktsiya natijasi 3-5 daqiqadan so'ng yalang'och ko'z bilan hisobga olinadi. Agar reaktsiya ijobiy bo'lsa, slaydni silkitganda qorong'i fonda aniq ko'rinadigan zardob tomchisida yoriqlar paydo bo'lishi (katta yoki kichik) qayd etiladi. Salbiy reaktsiya bo'lsa, suyuqlik bir xil bulutli bo'lib qoladi.

Probirkalardagi aglyutinatsiya reaksiyasi. Bir qator probirkaga 1 ml fiziologik eritma qo'shiladi. Birinchi probirkaga tekshirilayotgan qon zardobining teng miqdori qo'shiladi. Sarumning ketma-ket ikki marta suyultirilishi tayyorlanadi (zardob titrlash), shundan so'ng har bir probirkaga 2 tomchi faollashtirilgan bakteriyalar suspenziyasidan (diagnostik) qo'shiladi. Naychalar 2 soat davomida 37 ° C haroratda termostatga joylashtiriladi. Reaktsiya yalang'och ko'zga ko'rinmaydigan mayda yoriqlar hosil bo'lishi bilan davom etadi, shuning uchun natijalar maxsus qurilma - aglutinoskopda biroz kattalashtirish ostida qayd etiladi. Agglyutinatsiyaning intensivligi "to'rt plyus" tizimi bo'yicha hisobga olinadi: to'liq aglutinatsiya - 4+, qisman aglutinatsiya - 3+ yoki 2+, shubhali natija - +. Sinov zardobidagi antikor titri sifatida 2+ agglyutinatsiya kuzatiladigan oxirgi suyultirish olinadi.

Tifo va paratif isitmasi (Vidal reaktsiyasi), brutsellyoz (Rayt reaktsiyasi), tif (Veygl reaktsiyasi) qo'zg'atuvchilariga antikorlarning titrini aniqlash uchun probirkalarda aglutinatsiya reaktsiyasi (keng aglutinatsiya reaktsiyasi) amalga oshiriladi.

Agglyutinatsiya (lotincha agglutinatio — yelimlash) — antigen saqlovchi korpuskulyar zarrachalarni (butun hujayralar, lateks zarrachalari va boshqalar) elektrolitlar ishtirokida oʻziga xos antitellar molekulalari bilan yopishtirish (biriktirish) boʻlib, u yoriqlar yoki choʻkma hosil boʻlishi bilan yakunlanadi. (aglyutinat) yalang'och ko'zga ko'rinadigan. Cho‘kmaning tabiati antigenning tabiatiga bog‘liq: bayroqsimon bakteriyalar dag‘al flokulyant cho‘kma hosil qiladi, bayroqsimon va kapsulali bo‘lmagan bakteriyalar mayda donali cho‘kma hosil qiladi, kapsulali bakteriyalar esa ipsimon cho‘kindi hosil qiladi. To'g'ridan-to'g'ri aglutinatsiya o'rtasida farqlanadi, bunda bakterial yoki boshqa har qanday hujayraning o'z antijeni, masalan, eritrotsitlar, o'ziga xos antikorlar bilan o'zaro ta'sir qilishda bevosita ishtirok etadi; va bilvosita yoki passiv, bunda bakterial hujayralar yoki eritrotsitlar yoki lateks zarralari o'zlarining emas, balki ularga xos bo'lgan antikorlarni (yoki antijenlarni) aniqlash uchun ularda sorbsiyalangan begona antigenlarning (yoki antitellarning) tashuvchisi hisoblanadi. Agglyutinatsiya reaktsiyasi asosan IgG va IgM sinflariga tegishli antikorlarni o'z ichiga oladi. Bu ikki bosqichda sodir bo'ladi: birinchidan, antikorlarning faol markazining antigen determinanti bilan o'ziga xos o'zaro ta'siri yuzaga keladi, bu bosqich elektrolitlar yo'qligida sodir bo'lishi mumkin va unga hamroh bo'lmaydi ko'rinadigan o'zgarishlar reaksiya tizimi. Ikkinchi bosqich uchun - aglutinat hosil bo'lishi - elektrolitlar mavjudligi zarur, bu esa kamaytiradi elektr zaryadi antigen + antikor komplekslarini hosil qiladi va ularni yopishtirish jarayonini tezlashtiradi. Bu faza aglutinat hosil bo'lishi bilan tugaydi.

Agglyutinatsiya reaktsiyalari shisha yoki silliq karton plitalarda yoki steril aglutinatsiya naychalarida amalga oshiriladi. Shisha ustidagi aglutinatsiya reaktsiyalari (to'g'ridan-to'g'ri va passiv) odatda sifatida ishlatiladi tezlashtirilgan usul bemorning zardobida o'ziga xos antikorlarni aniqlash (masalan, brutsellyoz bilan) yoki patogenni serologik aniqlash uchun. Oxirgi holatda, odatda, faqat monoretseptor antikorlarini yoki ularning to'plamini turli antigenlarga o'z ichiga olgan yaxshi tozalangan (adsorbsiyalangan) diagnostik sarumlar qo'llaniladi. Shishadagi aglutinatsiya reaktsiyasining shubhasiz afzalligi - uni amalga oshirishning soddaligi va bir necha daqiqa yoki hatto soniya davom etishi, chunki ikkala komponent ham konsentrlangan shaklda qo'llaniladi. Biroq, u faqat sifatli qiymatga ega va sinov naychasidan kamroq sezgir. Probirkalarda keng qamrovli aglutinatsiya reaktsiyasi aniqroq natijalar beradi, chunki u qon zardobidagi antikorlarning miqdoriy tarkibini aniqlash (uning titrini aniqlash) va kerak bo'lganda diagnostik ahamiyatga ega bo'lgan antikor titrining ko'payishi faktini qayd etish imkonini beradi. . Reaksiyani o'rnatish uchun 0,85% NaCl eritmasi bilan ma'lum bir tarzda suyultirilgan sarum va 1 ml ga 1 mlrd bakteriyani o'z ichiga olgan standart diagnostikum (yoki sinov madaniyati) suspenziyasidan teng hajmdagi (odatda 0,5 ml) qo'shiladi. aglutinatsiya quvurlari. Agglyutinatsiya reaktsiyasi natijalari birinchi navbatda quvurlarni 37 ° C da 2 soat inkubatsiyadan so'ng va nihoyat 20-24 soatdan keyin ikkita mezonga ko'ra qayd etiladi: cho'kmaning mavjudligi va hajmi va supernatant suyuqlikning shaffoflik darajasi. Baholash to'rtta o'zaro faoliyat tizim bo'yicha amalga oshiriladi. Reaktsiya, albatta, sarum va antigen nazorati bilan birga keladi. Qo'zg'atuvchini serologik aniqlash uchun probirkada batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi o'tkazilgan hollarda diagnostik sarum titrining kamida yarmigacha suyultirilganda reaktsiya ijobiy deb baholansa, u diagnostik ahamiyatga ega.

Shuni hisobga olish kerakki, gomologik antijenler va antikorlarning eritmalarini aralashtirishda aglutinatsiya reaktsiyasining ko'rinadigan ko'rinishlari har doim ham kuzatilmaydi. Cho'kma faqat ikkala reaksiya komponentining ma'lum optimal nisbatlarida hosil bo'ladi. Ushbu chegaralardan tashqarida, antigen yoki antikorlarning sezilarli darajada ko'pligi bilan hech qanday reaktsiya kuzatilmaydi. Ushbu hodisa "prozon fenomeni" deb ataladi. Agglyutinatsiya reaksiyasida ham, cho`kma reaksiyasida ham kuzatiladi. Prozonning immun reaktsiyalarda paydo bo'lishi, ularda ishtirok etuvchi antijenler, qoida tariqasida, polideterminant va molekulalar bilan izohlanadi. IgG antikorlari ikkita faol markazga ega. Antikorlarning ko'pligi bilan har bir antigen zarrasining yuzasi antikor molekulalari bilan qoplanadi, shuning uchun erkin determinant guruhlari qolmaydi, shuning uchun antikorlarning ikkinchi, bog'lanmagan faol markazi boshqa antigen zarrasi bilan o'zaro ta'sir qila olmaydi va ularni bir-biriga bog'lay olmaydi. Ko'zga ko'rinadigan aglutinat yoki cho'kma hosil bo'lishi, antigen ko'p bo'lganda, antikorlarning birorta ham erkin faol markazi qolmaganida bostiriladi va shuning uchun antigen + antikor + antigen komplekslari endi kattalasha olmaydi.

Tezlashtirilgan agglyutinatsiya reaksiyalari variantlari. Reaktsiya passiv gemagglyutinatsiya va uning variantlari

Klassik aglutinatsiya reaktsiyasi korpuskulyar antijenlardan foydalanishni o'z ichiga oladi. Shu bilan birga, eruvchan antijenler ham ishtirok etishi mumkin. Buni amalga oshirish uchun bunday antijenler immunologik inert zarrachalarga adsorbsiyalanadi. Lateks yoki bentonit zarralari tashuvchi sifatida ishlatilishi mumkin, ammo hozirgi vaqtda hayvonlar yoki inson eritrotsitlari ko'pincha ishlatiladi, ular tanin, formalin yoki benzidin eritmalari bilan ishlov berish orqali adsorbsion xususiyatlarini yaxshilaydi. Antigenni o'ziga adsorbsiya qilgan qizil qon tanachalari bu antigen tomonidan sensibilizatsiyalangan deb ataladi va immun reaktsiyasi ular ishtirok etadigan bilvosita yoki passiv gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (IRHA yoki RPHA), chunki qizil qon hujayralari unda passiv ishtirok etadi.

RPGA pastki yarim sharsimon teshiklari bo'lgan maxsus polistirol plitalarga joylashtiriladi. Buning uchun foydalanilganda serologik diagnostika Bu quduqlarda fiziologik eritmada tekshiriluvchi zardobning ikki marta suyultirilishi tayyorlanadi, so'ngra unga diagnostik vosita sifatida sensibilizatsiyalangan eritrotsitlar suspenziyasi qo'shiladi. Natijalar 2 soatlik inkubatsiyadan keyin 37 °C da to'rt o'zaro faoliyat tizim yordamida qayd etiladi. Ijobiy reaktsiya bilan, aglutinatsiyalangan qizil qon tanachalari teshikning tubiga joylashadi va uni teskari soyabon shaklida teng ravishda qoplaydi. Da salbiy reaktsiya qizil qon hujayralari ham joylashadi, suyuqlik shaffof bo'ladi, cho'kma teshikning markazida kichik "disk" ga o'xshaydi. RPHAdagi sarum titri uning so'nggi suyultirilishi hisoblanadi, bu hali ham "disk" mavjudligining sezilarli belgilarisiz aniq gemagglyutinatsiyani beradi.

RPGA test materialida noma'lum bakteriyalar, viruslar, toksinlar, masalan, o'lat patogenlari, stafilokokk enterotoksinlari va boshqalarni to'g'ridan-to'g'ri aniqlash uchun bakteriologik diagnostikaning tezlashtirilgan usuli sifatida ham qo'llanilishi mumkin. o'ziga xoslik reaktsiya antikorlarining ma'lum komponenti sifatida ishlatiladi - antikor eritrotsit diagnostikum. Agar test materialida ma'lum antijen etarli miqdorda bo'lsa, RPGA ijobiy bo'ladi.

RPHA dan foydalanish variantlari quyidagilardir: antigen neytrallash reaktsiyasi (RNAg), antikor neytrallash reaktsiyasi (RNAb), passiv gemagglyutinatsiyani inhibe qilish reaktsiyasi (PHA). Ushbu reaktsiyalar uchun antigen va antikor eritrotsit diagnostikasi qo'llaniladi. Bir vaqtning o'zida ikkita o'zaro boshqariladigan bir tomonlama reaktsiyalardan foydalanish mumkin, masalan, antigen diagnostikum bilan RPHA va antikor eritrotsit diagnostikasi bilan RNK.

Antikorlarni zararsizlantirish reaktsiyasi (RNAb) kerakli antijeni o'z ichiga olgan suspenziyani ma'lum antikorlarni o'z ichiga olgan o'ziga xos immun zardobi bilan tegishli hajmlarda aralashtirish va 37 ° C da ikki soat davomida inkubatsiya qilishdan iborat. Shundan so'ng, antijenik eritrotsit diagnostikum qo'shiladi. Aralash chayqatiladi va xona haroratida qoldiriladi. Natijalar 3-4 soatdan keyin va nihoyat 18-24 soatdan keyin hisobga olinadi, agar sinov materialida antigen bo'lsa, u antikorlarni bog'laydi (ularni neytrallashtiradi), shuning uchun gemagglyutinatsiya sodir bo'lmaydi.

Antigen neytrallash reaktsiyasi (RNAg) xuddi shu printsip yordamida amalga oshiriladi. Faqat bu holatda test materialida antikorlar aniqlanadi. Bunday tekshiriladigan materialga qo'shilgan o'ziga xos antigen uning tarkibidagi antikorlar bilan bog'lanadi, ya'ni antikorlar bilan antigenni neytrallash sodir bo'ladi va shuning uchun antikor eritrotsit diagnostikumini qo'shganda gemagglyutinatsiya sodir bo'lmaydi.

Koagglyutinatsiya reaktsiyasi. Bu antikor tashuvchi hujayralar vositasida shisha ustida passiv, ya'ni tezlashtirilgan aglutinatsiya reaktsiyasining variantlaridan biridir. Bu reaktsiya noyob xususiyatga asoslangan Staphylococcus aureus, hujayra devorida A proteinini o'z ichiga oladi, IgG va IgM ning Fc bo'laklari bilan bog'lanadi. Bunday holda, antikorlarning faol markazlari erkin bo'lib qoladi va antijenlarning o'ziga xos determinantlari bilan o'zaro ta'sir qilishi mumkin. Tegishli antikorlar bilan sensibilizatsiyalangan stafilokokklarning 2% suspenziyasidan bir tomchi shisha slaydga surtiladi va o'rganilayotgan bakteriyalarning bir tomchi suspenziyasi qo'shiladi. Agar antijen antikorlarga to'g'ri kelsa, 30-60 soniya ichida antikorlar bilan yuklangan stafilokokklarning aniq aglutinatsiyasi sodir bo'ladi.

Lateks aglutinatsiya reaktsiyasi (LAR). Ushbu diagnostika tizimidagi antikorlarning tashuvchisi kichik standart lateks zarralaridir. Reaksiya mikrometod yordamida shisha ustidagi quduqlarda amalga oshiriladi. PAH ning muvaffaqiyatli bosqichining asosiy sharti tizim tarkibiy qismlarining miqdoriy nisbatlariga qat'iy rioya qilishdir: 50 mkl sinov materialiga antikorlar bilan sezgirlangan 10 mkl lateks preparati qo'shiladi. PAH ning o'ziga xosligi tijorat test tizimlarida mavjud bo'lgan uchta nazorat testi yordamida nazorat qilinadi: ma'lum ijobiy reaktsiya, Shubhasiz salbiy reaktsiya va sinov materiali bilan PAH-sensibilizatsiyalanmagan (antikorlarni o'tkazmaydigan) lateks suspenziyasining sifatini nazorat qilish. Mamlakatimizda o'ziga xos antikorlarning tashuvchisi sifatida turli zarracha diametrli (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 mkm) polistirol monodispers latekslari qo'llaniladi. LAG test materialida mikroorganizmlarni yoki ularning antijenlarini tezkor aniqlash uchun ishlatiladi.

Antigenlarni immunomagnit aniqlash. Shishada tezlashtirilgan aglutinatsiya reaktsiyasining variantlaridan biri o'ziga xos antikorlar bilan qoplangan supermagnit polimer zarralarini ishlatish bilan bog'liq. Bunday zarralardan biri mikroorganizmlarning 107-108 hujayragacha bog'laydi, buning natijasida sezgirlik. bu usul 5 CFU/ml ga etadi. Mikroorganizmlarni immunomagnit aniqlash CPR bilan birgalikda ishlatilishi mumkin.

Agregat gemagglyutinatsiya reaktsiyasi (AHA). Bemorlarning qonida erkin aylanayotgan antigenlarni (antigenemiya) va antikorlar bilan bog'liq antijenlarni - aylanma immun komplekslarini (CIC) tezda aniqlash imkonini beradi. RAHA uchun tegishli antikorlar bilan sezgir bo'lgan qizil qon hujayralari qo'llaniladi. Antikorlar mahkamlangan sensibilizatsiyalangan eritrotsitlarga antigenlarni o'z ichiga olgan bemorning qon zardobining qo'shilishi eritrotsitlar va immun komplekslarning yopishishiga (aglyutinatsiyasiga) olib keladi.

Antiglobulin Coombs testi (R. Coombs reaktsiyasi). To'liq (ikki valentli) antikorlar to'g'ridan-to'g'ri va passiv aglutinatsiya reaktsiyalari yordamida aniqlanadi. To'liq bo'lmagan (monovalent, blokirovka qiluvchi) antikorlar bu usullar bilan aniqlanmaydi, chunki ular antigen bilan birlashganda uni bloklaydilar, lekin antigenning katta konglomeratlarga to'planishiga olib kelishi mumkin emas. To'liq bo'lmagan (blokirovka qiluvchi) antikorlar - bu faqat bitta faol markaz ishlaydiganlar; ikkinchi faol markaz noma'lum sababga ko'ra ishlamaydi. To'liq bo'lmagan antikorlarni aniqlash uchun maxsus Kumbs reaktsiyasi qo'llaniladi (72-rasm). Reaktsiya quyidagilarni o'z ichiga oladi: to'liq bo'lmagan antikorlar aniqlanadigan bemorning zardobi, korpuskulyar antigen-diagnostik, inson globuliniga antikorlarni o'z ichiga olgan antiglobulin zardobi. Reaktsiya ikki bosqichda sodir bo'ladi:

Antigenning to'liq bo'lmagan antikorlar bilan o'zaro ta'siri. Ko'rinadigan namoyonlar yo'q. Birinchi bosqich bemorning qolgan sarumidan antigenni yuvish bilan yakunlanadi.

Hayvonni inson globulini bilan antigenga adsorbsiyalangan to'liq bo'lmagan antikorlar bilan immunizatsiya qilish natijasida olingan antiglobulin sarumining o'zaro ta'siri. Antiglobulin antikorlari ikki valentli bo'lganligi sababli, ular alohida AG + komplekslarining ikkita monovalent antikorlarini bog'laydi. to'liq bo'lmagan antikor, bu ularning yopishtirilishi va ko'rinadigan cho'kindi paydo bo'lishiga olib keladi.

Agglyutinatsiya - elektrolit (natriy xloridning izotonik eritmasi) ishtirokida antikorlar ta'sirida mikroblar yoki boshqa hujayralarni yopishtirish va cho'ktirish. Yelimlangan bakteriyalar (hujayralar) guruhlari aglyutinat deb ataladi. Agglyutinatsiya reaktsiyasi uchun quyidagi komponentlar talab qilinadi:

1. Kasal yoki immunitetli hayvonning qon zardobida topiladigan antitelalar (aglyutininlar).

2. Antigen - tirik yoki o'ldirilgan mikroblar, qizil qon tanachalari yoki boshqa hujayralar suspenziyasi.

3. Izotonik (0,9%) natriy xlorid eritmasi.

Serodiagnoz uchun aglutinatsiya testi qo'llaniladi tif isitmasi va paratif isitmasi (Vidal reaktsiyasi), brutsellyoz (Rayt va Heddleson reaktsiyasi), tulyaremiya va boshqalar. Antikor bemorning zardobi, antigen esa ma'lum mikrobdir. Mikroblar yoki boshqa hujayralarni aniqlashda antigen sifatida ularning suspenziyasi, antikor sifatida esa ma'lum immun zardobidan foydalaniladi. Ushbu reaktsiya diagnostika uchun keng qo'llaniladi ichak infektsiyalari, ko'k yo'tal va boshqalar.

RA ni aniqlash usullari

Shisha ustidagi taxminiy RA

Joylashtirilgan RA

(tovush usuli)

Koagglyutinatsiya reaktsiyasi

Shishada ochilgan RA (seroidifikatsiya)

Shisha ustidagi aglutinatsiya reaktsiyasi. Yog'siz shisha slaydga ikki tomchi maxsus (adsorbsiyalangan) sarum va bir tomchi natriy xloridning izotonik eritmasi qo'llaniladi. Adsorbsiyalanmagan sarumlar 1:5 - 1:100 nisbatda oldindan suyultiriladi. Tomchilar stakanga qo'llanilishi kerak, shunda ular orasidagi masofa bo'ladi. Kultura halqa yoki pipetka yordamida shisha ustida yaxshilab maydalanadi, so‘ngra bir tomchi natriy xloridning izotonik eritmasiga va zardob tomchilaridan biriga qo‘shiladi, har birida bir hil suspenziya hosil bo‘lguncha aralashtiriladi. Madaniyatsiz bir tomchi sarum sarum nazorati hisoblanadi.

Diqqat! Madaniyatni sarumdan antigen nazorati sifatida xizmat qiluvchi izotonik natriy xlorid eritmasining tomchisiga o'tkaza olmaysiz. Reaksiya xona haroratida 1-3 minut davom etadi. Agar zardob nazorati shaffof bo'lib qolsa, antigen nazoratida bir xil loyqalik kuzatilsa, kultura zardob bilan tiniq suyuqlik fonida aralashgan tomchida aglyutinat parchalari paydo bo'lsa, reaksiya natijasi ijobiy hisoblanadi.

Diagnostik fiziologik

sarum + madaniyat eritmasi + madaniyat

Batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi (hajm usuli). Sarumning ketma-ket, ko'pincha ikki marta suyultirilishi tayyorlanadi. Usul volumetrik deb ataladi. Qon zardobidagi antikor titrini aniqlash uchun 6 ta naycha oling. Birinchi probirkaga 1 ml asl zardob suyultirilgan 1:50 dan quyiladi va gradusli pipetka yordamida barcha 6 probirkaga 1 ml fiziologik eritma solinadi. Birinchi probirkada 2 ml hajmda 1:100 nisbatda zardob suyultiriladi. Birinchi probirkadan ikkinchi probirkaga 1 ml o'tkazing, u erda suyultirish 1:200 ga teng bo'ladi. Shunday qilib, dastlabki 5 ta probirkada (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600) sarumning ketma-ket suyultirilishini qiling. Beshinchi probirkadan dezinfektsiyalovchi eritmaga 1 ml soling. Barcha 6 probirkaga 2 tomchi diagnostik qo'shing. Oltinchi kolba kultura nazorati hisoblanadi, chunki unda faqat fiziologik eritma va diagnostik mavjud.

Bunday nazorat madaniyatning o'z-o'zidan aglutinatsiyasini istisno qilish uchun kerak. Naychalar chayqatiladi va 2 soat davomida 37 ° C haroratda termostatga joylashtiriladi, so'ngra xona haroratida bir kunga qoldiriladi, shundan so'ng aglutinatsiya reaktsiyasi natijalari qayd etiladi. Hayotning birinchi oylarida bolalarning zardoblari bilan aglutinatsiya reaktsiyasini o'tkazishda, antikor hosil bo'lishining funktsional pastligi tufayli, sarumni suyultirishda hisobga olinadigan past antikor titrlarini aniqlash kerak. Sarumning dastlabki suyultirilishi 1:25 ni tashkil qiladi. Birinchi probirkada 1:50, keyin 1:100 va hokazo suyultirish olinadi.

Da ijobiy natija probirkalardagi reaktsiyalar, tiniq suyuqlik fonida don yoki bo'lakchalar ko'rinishidagi yopishqoq hujayralar ko'rinadi. Agglyutinat asta-sekin "soyabon" shaklida pastga cho'kadi va cho'kindi ustidagi suyuqlik tiniq bo'ladi. Antigen nazorati bir xilda loyqa.

Cho'kindining tabiatiga ko'ra, mayda va qo'pol donali (qo'pol) aglyutinatsiya farqlanadi. O-seralar bilan ishlaganda nozik taneli aglyutinatsiya olinadi. Dag'al donali - harakatchan mikroblar flagellar H-zardoblari bilan o'zaro ta'sirlashganda. U nozik taneli bo'lgandan ko'ra tezroq sodir bo'ladi va natijada paydo bo'lgan cho'kindi juda bo'sh va osonlik bilan buziladi.

Reaksiyaning intensivligi quyidagicha ifodalanadi:

Barcha hujayralar joylashdi, probirkadagi suyuqlik butunlay shaffof. Reaktsiya natijasi keskin ijobiydir;

Cho'kma kamroq bo'ladi, suyuqlik to'liq tozalanmaydi. Reaktsiya natijasi ijobiy;

Bundan ham kamroq cho'kma bor, suyuqlik bulutli. Reaktsiya natijasi shubhali;

Probirkaning pastki qismida ozgina cho'kma bor, suyuqlik bulutli. Shubhali reaktsiya natijasi;

Cho'kma yo'q, suyuqlik antigen nazoratidagi kabi bir xil bulutli. Salbiy reaktsiya natijasi

Agglyutinatsiya reaktsiyasi Agglyutinatsiya reaktsiyasi

(RA) - aniqlash usuli va miqdoriy aniqlash Ag va At, yalang'och ko'z bilan ko'rinadigan aglomeratlar hosil qilish qobiliyatiga asoslangan. Yuqumli kasalliklar bo'limida. kasalliklar yoki boshqa maqsadlarda noma'lum mikroblar va hujayralarni aniqlash, qon va boshqa suyuqliklarda Ab ning mavjudligi va miqdorini aniqlash uchun ishlatiladi. Aniqlash printsipi Ag va Ab o'rtasidagi o'zaro ta'sirning o'ziga xosligiga asoslanadi va noma'lumdan ma'lumni topishdan iborat. RA uchun ko'plab variantlar mavjud: miqdoriy va sifat, probirka va shisha, volumetrik va tomchi, an'anaviy, tezlashtirilgan va ekspress usullar. RA bosqichiga o'tish uchun sizga kerak: 1) s-ka qon. Bakteriyalarning turini (var) aniqlash variantida quyonlarni immunizatsiya qilish orqali ishlab chiqarilgan sanoat aglyutinatsiya testlari qo'llaniladi. Ab turini aniqlaydigan variantda testdan qon namunasi olinadi. odamlar yoki hayvonlar. Eritma steril bo'lishi va to'xtatilgan zarralardan xoli bo'lishi kerak. Tuzli eritmada asosiy suyultirishni tayyorlang. Ushbu kasallik uchun diagnostik titrdan 2-4 barobar past bo'lishi kerak; 2) Ag. Ab tipini aniqlash bilan reaktsiyaning versiyasida sanoat diagnostika to'plamlari qo'llaniladi; Ag ni aniqlaydigan variantda diagnostiklar o'zlari 18-20 soatlik agar (kamroq bulyon) testining sho'r eritmasida 1-3 milliard suspenziya shaklida tayyorlanadi. suv hammomida 70 ° C haroratda 1 soat isitish yoki formaldegid bilan 37 ° C da 24 soat inkubatsiya qilish (yakuniy konsentratsiya 0,2%) mikrobni faolsizlantirish; 3) sho'r eritma shaklida elektrolitlar. Sahnalashtirish texnikasi volumetrik seriyali quvur s-kidagi Ab titrini aniqlash uchun RA: s-ki asosiy suyultirishdan bir necha qator ishchi suyultirishlar tayyorlanadi. Qatorlar soni eksperimentga kiritilgan diagnostika soniga bog'liq va suyultirish omillari shubhali kasallikning diagnostik titri bilan belgilanadi. Seriya hech bo'lmaganda diagnostik Ab titriga mos keladigan suyultirishni, pastda ikkita suyultirishni va undan yuqori bo'lgan ikkita suyultirishni o'z ichiga olishi kerak. Masalan, agar diagnostik titr 1:100 bo'lsa, u holda RAni bosqichma-bosqich aniqlashning volumetrik usuli bilan quyidagi suyultirishlarni tayyorlash kerak: 1:25, 1:50, 1:100, 1:200, 1"400; tomchilatib yuborish bilan usuli bo'lsa, birinchi suyultirish (1:25) shart emas, lekin yana bir yuqori suyultirish kerak - 1:800 B. ilmiy tadqiqot s-ku manfiy reaksiyaga titrlanadi. U quyidagicha suyultiriladi: reaksiya 0,5 ml hajmda olib borilganda 1-chi probirkadan tashqari barcha probirkalarga 0,25 ml, reaksiya 1 hajmda olib borilganda 0,5 ml dan quyiladi. ml. 1-va 2-probirkalarga 0,25 (0,5) ml asosiy suyultirish, 2-probirkadan kesilgan hajmga va naslchilik s-k va 2 marta ko'paydi, 0,25 (0,5) ml 3-ga, 3-dan 4-ga va boshqalarga o'tkaziladi. oxirigacha, kesilganidan 0,25 (0,5) ml hajmlarni muvozanatlash uchun hamma narsaga quyiladi. Har bir suyultirish alohida pipetka yordamida amalga oshiriladi. Agar bir nechta diagnostika tajribaga olinsa, ularning har biri uchun xuddi shu tarzda o'ziga xos suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Probirkaning har bir suyultirilishiga probirka hajmiga teng hajmda diagnosticum qo‘shiladi, buning natijasida har bir probirkadagi suyultirish ikki barobar ortadi. Tajriba s-ki nazoratiga (0,25 - 0,5 ml s-ki asosiy suyultirilishi va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) va Ag nazoratiga (0,25 - 0,5 ml diagnostik va bir xil miqdordagi fiziologik eritma) mos keladi. Agar eksperimentda bir nechta diagnostika qo'llanilsa, unda har birining o'z antigen nazorati mavjud. Probirkalar solingan stend yaxshilab chayqatiladi va 37°C da 4 soat davomida termostatga joylashtiriladi, so‘ngra xona haroratida keyingi kungacha qoldiriladi, shundan so‘ng cho‘kma miqdori va tozalanish darajasiga qarab PA qayd etiladi. suyuqlik. Bu ko'rsatkichlarni aniqlash, aglutinatlarning tabiatiga qarab, qorong'u fonda, aglyutinoskopda yoki mikroskop oynasining botiq yuzasida yalang'och ko'z bilan amalga oshiriladi. Buxgalteriya hisobi nazoratdan boshlanadi: nazorat C shaffof bo'lishi kerak, Ag bir xil bulutli bo'lishi kerak (naychani silkitgandan keyin). Agar nazorat yaxshi bo'lsa, barcha probirkalarda aglutinatsiya mavjudligi va darajasini belgilang, ular plyuslar bilan belgilanadi: katta cho'kindi va suyuqlikni to'liq tozalash - 4 ta plyus; katta cho'kindi va suyuqlikning to'liq tozalanmaganligi - 3 ta ortiqcha; sezilarli cho'kindi va suyuqlikning sezilarli tozalanishi 2 ta ortiqcha. Shundan so'ng, titr aniqlanadi: aglutinatsiya intensivligi kamida 2 plyus bo'lgan eng yuqori suyultirish. Titr tadqiqoti s-ki ushbu kasallikning diagnostik titri bilan taqqoslanadi. Agar titri o'rganilsa. s-ki diagnostik qiymatdan 2 barobar past, reaktsiya shubhali deb baholanadi; titri teng bo'lsa diagnostika - qanday qilib zaif ijobiy; 2-4 marta yuqori bo'lsa, 8 va undan ko'p bo'lsa, u keskin ijobiy hisoblanadi; Ab ning keng tarqalishi bilan sog'lom odamlar RAni baholash uchun Ab titrining ortishi qo'llaniladi. Seriyali RAda Ar turini aniqlash uchun qatorlar soni identifikatsiya uchun olingan raqamga mos kelishi kerak. diagnostik testlar. Diagnostik testning asosiy suyultirilishidan Ab titrini aniqlash uchun RA dagi kabi ketma-ket ikki marta suyultirishlar seriyasi tayyorlanadi. Suyultirish omillari agglyutinlash testining titriga bog'liq bo'lib, tajribada test titriga teng bo'lgan suyultirish kerak, shuningdek, undan 2, 4, 6, 8 marta past bo'lsa diagnostik testning titri 1 3200 bo'lsa, unda siz 1 3200, 1 1600, 1 800, 1 400, 1 200 suyultirishlardan foydalanishingiz kerak. Sinovning suyultirilishiga bir xil hajmdagi sinovdan o'tgan Ag qo'shiladi, natijada suyultiriladi. test 2 marta ko'payadi va tajribaga Ag qo'shiladi, agar tajribada bir nechta s-k ishtirok etsa, unda ularning har biri o'z nazoratiga muhtoj bo'lib, reaksiya tugagach, stend kuchli silkitiladi 37 ° C da termostatda. Natijalar yuqorida tavsiflanganidek hisobga olinadi. Eksperimentda olingan Ag, reaksiya titri standart diagnostik testning kamida yarmiga to'g'ri kelishi kerak 1 4 va undan past titrlar guruh reaktsiyasi sifatida qabul qilinadi Drip md RA ning bosqichlari volumetrikdan farq qiladi, chunki s-ku 1 ml hajmda suyultiriladi, Ag yuqori konsentratsiyada (10 mlrd/ml) ishlatiladi va unga 1 qo'shiladi. - 2 probirkaga tushadi Ag qo'shilgandan so'ng preparatni suyultirish o'zgarmagan deb hisoblanadi Aks holda, shakllantirish, ro'yxatga olish va baholash usuli volumetrik usulga o'xshaydi

(Manba: Mikrobiologiya atamalari lug'ati)

Agglyutinatsiya reaktsiyasi (latdan. aglutinatsiya- yopishtirish) - elektrolitlar ishtirokida tanachalarni (bakteriyalar, qizil qon tanachalari va boshqalar) antikorlar bilan yopishtirish.

Agglyutinatsiya reaktsiyasi antikorlar bilan "yopishgan" tanachalardan (masalan, bakteriyalardan) iborat bo'lak yoki cho'kindi shaklida o'zini namoyon qiladi (7.37-rasm). Agglyutinatsiya reaksiyasidan: bemordan ajratilgan patogenni aniqlash; bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash; qon guruhlarini aniqlash.

Guruch. 7.37 a, b. bilan aglutinatsiya reaksiyasiIgM-antikorlar (a) vaIgG- antikorlar (b)

1. Bemordan ajratilgan patogenni aniqlash Taxminiy reaktsiya shisha ustida aglutinatsiya (7.38-rasm). Bemordan ajratilgan bakteriyalar suspenziyasi bir tomchi aglutinatsiya qiluvchi sarumga qo'shiladi (1:20 suyultirish). Flokkulyant cho'kma hosil bo'ladi.

Guruch. 7.38.

Bemordan ajratilgan patogen bilan keng aglutinatsiya reaktsiyasi (7.39-rasm). Bemordan ajratilgan bakteriyalar suspenziyasi aglutinatsiya qiluvchi sarumning suyultirilishiga qo'shiladi.

Guruch. 52

2. Bemorning qon zardobida antikorlarni aniqlash
Bemorning qon zardobi bilan batafsil aglutinatsiya reaktsiyasi (7.39-rasm). Diagnosticum bemorning sarumini suyultirishga qo'shiladi.
- O-diagnosticum bilan aglyutinatsiya (issiqlik ta'sirida nobud bo'lgan, O-antigenini saqlaydigan bakteriyalar) mayda donador aglyutinatsiya shaklida sodir bo'ladi.
- H-diagnosticum bilan aglutinatsiya (formaldegid tomonidan o'ldirilgan, flagellar H-antigenini ushlab turadigan bakteriyalar) katta va tezroq sodir bo'ladi.
3. Qon guruhlarini aniqlash uchun aglyutinatsiya reaksiyasi Qon guruhlarini aniqlash uchun aglutinatsiya reaktsiyasi A (I), B (III) qon guruhi antigenlariga qarshi immun zardob antikorlari bilan eritrotsitlarning aglutinatsiyasidan foydalangan holda ABO tizimini (b jadvali) o'rnatish uchun ishlatiladi. Nazorat: antikorlarni o'z ichiga olmaydigan sarum, ya'ni. sarum AB (IV) qon guruhi; A (II), B (III) guruhlari qizil qon hujayralarida mavjud bo'lgan antijenler. Salbiy nazoratda antijenler mavjud emas, ya'ni O (I) guruhi eritrotsitlari ishlatiladi.

7.6-jadval. ABO qon guruhlarini aniqlash